CN114127305A - 经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送 - Google Patents

经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送 Download PDF

Info

Publication number
CN114127305A
CN114127305A CN202080051915.9A CN202080051915A CN114127305A CN 114127305 A CN114127305 A CN 114127305A CN 202080051915 A CN202080051915 A CN 202080051915A CN 114127305 A CN114127305 A CN 114127305A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gly
ala
thr
cys
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080051915.9A
Other languages
English (en)
Inventor
M·伯恩鲍姆
C·道博森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Massachusetts Institute of Technology
Original Assignee
Massachusetts Institute of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Massachusetts Institute of Technology filed Critical Massachusetts Institute of Technology
Publication of CN114127305A publication Critical patent/CN114127305A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5437—IL-13
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B30/00—Methods of screening libraries
    • C40B30/04—Methods of screening libraries by measuring the ability to specifically bind a target molecule, e.g. antibody-antigen binding, receptor-ligand binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/60—Fusion polypeptide containing spectroscopic/fluorescent detection, e.g. green fluorescent protein [GFP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15045—Special targeting system for viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/16045—Special targeting system for viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
    • C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
    • C12N2810/80—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates
    • C12N2810/85—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
    • C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
    • C12N2810/80—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates
    • C12N2810/85—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian
    • C12N2810/852—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian from cytokines; from lymphokines; from interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
    • C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
    • C12N2810/80—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates
    • C12N2810/85—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian
    • C12N2810/855—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian from receptors; from cell surface antigens; from cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
    • C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
    • C12N2810/80—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates
    • C12N2810/85—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian
    • C12N2810/859—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from vertebrates mammalian from immunoglobulins

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本文公开了逆转录病毒的组合物及其用于基因递送的方法，其中逆转录病毒包含：包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白。

Description

经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送
相关申请
本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2019年5月23日提交的美国临时申请序列号62/851,889，题目为“LIGAND DISCOVERY AND GENE DELIVERY VIA RETROVIRAL SURFACEDISPLAY”的申请日的优先权，其全部内容通过引用并入本申请。
背景
众所周知，逆转录病毒(例如，慢病毒)可以经由对病毒进行假型化来表达不同病毒的包膜蛋白，从而将其自然趋向性重定向到目标靶标。这最通常是经由使用VSV糖蛋白进行假型化来实现的，VSV糖蛋白靶向LDL受体并因此使病毒能够进入多种细胞。最近，多个小组已经表明，如果慢病毒是由来自副粘病毒例如麻疹病毒或尼帕病毒的包膜蛋白假型化的，并且如果产生了消除天然趋向性的突变，与这些病毒的C末端融合允许受体介导的进入所选的靶细胞。
概述
在本文中，发明人已令人惊讶地证明，消除天然功能(例如，趋向性)的突变和第二膜蛋白的过度表达的组合允许该第二蛋白作为病毒进入的基础发挥作用。如本文所述，这些发现使新的和创新的方法得以实现，例如，筛选对筛选特异性抗原和功能具有显著挑战性的细胞(例如，T细胞)，并以靶向特定的方式向靶细胞递送核酸。
本公开的一些方面提供了逆转录病毒(例如，慢病毒)的组合物，其包含(i)包含非病毒膜结合蛋白的核酸，其包含结构：S-ETD-MBD-IRES-R，其中S编码信号序列，ETD编码细胞外靶向结构域；MBD编码膜结合结构域，IRES编码内部核糖体进入位点，并且R编码报告子；和(ii)包含削弱其天然功能的至少一个突变的突变病毒包膜蛋白。
本公开的一些方面提供了逆转录病毒(例如，慢病毒)的组合物，其包含(i)CD80蛋白结构域；和(ii)包含削弱其天然功能的至少一个突变的突变病毒包膜蛋白。CD80蛋白结构域可以是细胞外结构域。在一些实施方案中，CD80细胞外结构域结合靶细胞上的受体。
本公开的一些方面提供了筛选细胞群体的方法，该方法包括(i)提供逆转录病毒(例如慢病毒)，其包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜-结合蛋白，以及编码报告子的核酸；(ii)将逆转录病毒与细胞群体组合；和(iii)根据报告子的存在或不存在对细胞群体进行分选。在一些实施方案中，逆转录病毒(例如，慢病毒)包含包含非病毒膜结合蛋白的核酸，其包含结构：S-ETD-MBD-IRES-R，其中S编码信号序列，ETD编码细胞外目标结构域；MBD编码膜结合结构域，IRES编码内部核糖体进入位点，并且R编码报告子。
在一些实施方案中，细胞是体细胞(例如抗原特异性细胞，例如T细胞或B细胞)。在一些实施方案中，细胞是从受试者(例如，人类受试者)分离的。在一些实施方案中，细胞是从受试者的血液或肿瘤中分离的。在一些实施方案中，细胞在与逆转录病毒组合之前保持在液体培养物中。
在一些实施方案中，病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒(cocal virus)G蛋白。VSV-G包膜蛋白可以在H8、K47、Y209和/或R354中的任何一个的一个或多个处发生突变。麻疹病毒包膜蛋白可以在Y481、R533、S548和/或F549中的任何一个的一个或多个处发生突变。尼帕病毒包膜蛋白可以在E501、W504、Q530和/或E533中的任何一个的一个或多个处发生突变。可卡耳病毒G蛋白可以在K64和/或R371处发生突变。
在一些实施方案中，非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是蛋白质(例如，白介素-13)、肽或抗体(例如，抗CD19抗体、抗TCR抗体或抗CD3抗体)。在一些实施方案中，报告子是荧光蛋白(例如，绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白)或抗生素抗性标志物。在一些实施方案中，接头位于膜结合结构域和细胞外靶向结构域之间。接头可以是刚性接头(例如，PDGFR柄或CD8α柄)、柔性接头(例如，包含包含GAPGAS(SEQ ID NO:5)或GGGGS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列)或寡聚化的接头(例如，IgG4铰链或可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，逆转录病毒与细胞群体在(ii)中在4℃至42℃范围内的温度下结合1分钟至72小时。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体在(ii)中在(a)细胞培养基，可选RPMI或DMEM细胞培养基；(b)缓冲盐水溶液，可选磷酸盐缓冲盐水或HEPES缓冲盐水；和/或(c)逆转录病毒转导增强剂，可选硫酸肝素、聚凝胺、硫酸鱼精蛋白和/或葡聚糖的存在下组合。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域能够结合存在于细胞群体的子集的细胞表面上的同源蛋白(例如，蛋白受体)。在一些实施方案中，在(ii)和(iii)之间洗涤细胞群体(例如，使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)，例如，以从细胞群体中去除逆转录病毒)。在一些实施方案中，使用荧光激活细胞分选、单细胞下一代测序或抗生素选择来分选细胞群体。
在一些实施方案中，该方法进一步包括第二逆转录病毒，其中与第一逆转录病毒相比，第二逆转录病毒包含不同的细胞外靶向结构域和/或不同的报告子。
本公开的其他方面提供了将核酸(例如目标基因，例如，编码蛋白质的基因)递送至细胞的方法，该方法包括(i)提供逆转录病毒，其包含该核酸、包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白和包含能够结合细胞的同源配体的细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白；和(ii)使逆转录病毒与细胞接触，从而将核酸递送至细胞。在一些实施方案中，逆转录病毒在(ii)期间进入或感染细胞。
本公开的一些方面提供将核酸递送至细胞的方法，该方法包括(i)提供逆转录病毒，其包含该核酸、包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白和CD80蛋白结构域；和(ii)使逆转录病毒与细胞接触，从而将核酸递送至细胞。
本公开的其他方面提供了检测逆转录病毒和细胞之间相互作用的方法，该方法包括：(i)使包含逆转录病毒和细胞的样品与抗体接触，其中逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白、包含细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，并且其中抗体与逆转录病毒的细胞外靶向结构域结合；(ii)任选地从样品中去除未结合的抗体；和(iii)对样品进行成像以检测抗体-逆转录病毒复合物是否与细胞结合。
在一些实施方案中，抗体进一步包含荧光标记，任选地其中抗体共价连接至荧光标记。在一些实施方案中，在(iii)中使用共聚焦或荧光显微镜对样品进行成像。
本公开的一些方面提供了逆转录病毒文库，其包含多种独特的逆转录病毒，其中每种独特的逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白结构域(例如，包含至少5、至少10、至少15、至少20或至少50个氨基酸)，以及编码报告子的核酸，并且其中每种独特的逆转录病毒包含不同且独特的细胞外靶向结构域。
在一些实施方案中，文库能够针对抗原特异性细胞群体进行筛选，任选地其中抗原特异性细胞是B细胞或T细胞。文库可包含至少102、至少103、至少104、至少105、至少106、至少107、至少108、至少109或至少1010种独特的逆转录病毒。在一些实施方案中，通过定点诱变生成每个不同且独特的细胞外靶向结构域。
本公开的一些方面提供细胞群体，其中细胞群体的子集含有逆转录病毒，其包含：包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜-结合结构域和细胞外靶向结构域的非-病毒膜-结合蛋白，以及编码报告子的核酸。在一些实施方案中，细胞群体(例如抗原特异性细胞，例如B细胞或T细胞)的子集包含如本文所述的逆转录病毒。在一些实施方案中，细胞群体的子集在子集的每个细胞内含有逆转录病毒。可以将含有逆转录病毒的群体的子集从不含有逆转录病毒的细胞群体中分离和/或分选出来。
附图的简要说明
图1描绘了本发明的逆转录病毒与靶细胞的同源配体相互作用的示例性示意图。
图2描绘了包含信号序列(SP)、细胞外靶向结构域(肽)、膜结合结构域(MHC)、内部核糖体进入位点(IRES)和报告子(GFP)的蛋白质；以及包含所述蛋白质的逆转录病毒与靶细胞相互作用的能力的示例性示意图。
图3A-3B描绘了显示逆转录病毒进入靶细胞的图。图3A证明逆转录病毒中存在的细胞外靶向结构域与靶细胞的同源配体的结合相互作用导致逆转录病毒的进入和报告子(GFP)的随后表达。图3B证明逆转录病毒与非靶细胞接触不会导致逆转录病毒的进入。
图4描绘了显示逆转录病毒以细胞外靶向结构域与其同源配体之间的可变亲和力进入靶细胞的能力的图。
图5A-5B描绘了显示T细胞信号传导在逆转录病毒进入或感染期间活跃的图。图5A证明逆转录病毒中存在的细胞外靶向结构域与靶细胞的同源配体的结合相互作用导致逆转录病毒的进入和T细胞信号传导激活。图5B证明逆转录病毒与非靶细胞接触不会导致逆转录病毒的进入或T细胞信号传导激活。
图6描绘了pMHC逆转录病毒文库筛选方法的示例性示意图。
图7A-7B描绘了显示逆转录病毒进入靶细胞的图。图7A证明逆转录病毒中存在的白介素13(IL-13)蛋白结构域与靶细胞的IL-13蛋白受体的结合相互作用导致逆转录病毒的进入和报告子(GFP)的随后表达。图7B证明将包含IL-13蛋白结构域的逆转录病毒与不表达IL-13蛋白受体的非靶细胞接触不会导致逆转录病毒的进入。
图8描绘了三种示例性逆转录病毒，每种都包含不同的病毒包膜蛋白。
图9描绘了包含尼帕病毒包膜蛋白和抗CD19 scFv抗体的逆转录病毒感染和进入CD19+Raji细胞的能力。
图10描绘了包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白和抗CD19 scFv抗体的逆转录病毒感染和进入CD19+Raji细胞而不感染CD19-Jurkat细胞的能力。包含野生型VSV-G病毒包膜蛋白和抗CD19 scFv抗体的逆转录病毒感染CD19+Raji细胞和CD19-Jurkat细胞两者。
图11描绘了用于核酸和蛋白质(包含膜结合和细胞外靶向结构域)的示例性接头。
图12描绘的图显示了短蛋白质接头(PDGFR；GAPGAS(SEQ ID NO：5)；CAR ECD；顶部，从左到右)和长蛋白质接头(CD8α；铰链结构域；四聚体卷曲螺旋；底部，从左到右)对逆转录病毒进入的影响。
图13描绘的图显示了包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白的逆转录病毒激活T细胞信号传导(右图)并且包含野生型VSV-G病毒包膜蛋白的逆转录病毒不激活T细胞信号传导(左图)，如通过CD69的表达确定的。
图14描绘的图显示了在其细胞外靶向结构域和T细胞同源配体之间具有可变亲和力的逆转录病毒能够激活T细胞信号传导。
图15描绘的图显示了逆转录病毒以可变亲和力进入靶细胞的能力，从皮摩尔到微摩尔结合亲和力，在细胞外靶向结构域与其同源配体之间。
图16A-16B描绘的图证明了逆转录病毒在不同病毒浓度下进入靶细胞的能力。图16A显示了展示NYESO-1的慢病毒转导表达IG4的T细胞的能力。展示SL-1的慢病毒不转导表达IG4的T细胞。图16B显示了由展示NYESO-1的慢病毒和表达IG4的T细胞之间的相互作用提供的平均荧光。
图17描绘了证明蛋白质接头寡聚化对逆转录病毒转导的影响的图。
图18A-18B描绘了使用结合逆转录病毒的荧光标记抗体检测包含抗CD19 scFv抗体的逆转录病毒与包含CD19的靶细胞之间的结合相互作用的能力。图18A描绘了示例性结合示意图。图18B描绘的图显示了逆转录病毒构建体与靶细胞相互作用的能力。
图19描绘了展示SL9肽的慢病毒转导表达868TCR的T细胞(‘868’)的能力和展示CMV NLV肽的慢病毒转导表达C7 TCR的T细胞(‘CMV C7’)的能力。
图20描绘了展示NYESO-1的慢病毒相对于不表达IG4 TCR的细胞(脱靶)，选择性转导表达IG4 T细胞受体(TCR)变体(NYESO-1的～26pM或～32μM的结合亲和力)的T细胞(靶细胞)的能力，脱靶细胞与靶细胞的比例高达100,000:1。
图21描绘了展示不同靶向肽(CMV NLV；EBV；SL9；GL9；NYESO-1)的慢病毒相对于不表达靶向肽特异性TCR的T细胞(脱靶)，选择性转导表达靶向肽特异性TCR的T细胞(靶向)的能力。
图22A-22B描绘了不同慢病毒(GL9肽靶向；NYESO-1肽靶向；野生型VSV)转导表达GL9特异性TCR的原代T细胞和表达IG4TCR变体的T细胞的能力。图22A描绘了每种慢病毒的转导率。图22B描绘了显示GL9病毒和NYESO-1病毒的FACS数据的图。
图23描绘的图显示了原代NYESO-1反应性细胞被特异性感染。
图24描绘的图显示了NYESO-1靶向病毒特异性感染扩增的原代细胞。
图25描绘的图显示了包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白和CD80结构域的逆转录病毒相对于B细胞系，特异性感染Jurkat T细胞的能力。
图26描绘了包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白和抗TCRα-β抗体(H57)或抗CD3抗体(C11)的逆转录病毒感染TCR转导的58-/-小鼠细胞系的能力。
图27描绘了包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白或突变的可卡耳病毒包膜蛋白；和抗CD19单链抗体的逆转录病毒，感染并进入CD19+Raji细胞，而不感染CD19-Jurkat细胞的能力。包含野生型VSV-G病毒包膜蛋白和抗CD19单链抗体的逆转录病毒感染CD19+Raji细胞和CD19-Jurkat细胞两者。
发明详述
本文提供了新的和创新的方法，例如，用于筛选对筛选特异性抗原和功能具有显著挑战性的细胞(例如，T细胞)，并以靶向特异性方式向靶细胞递送核酸。在一些实施方案中，本文所述的***能够例如对T细胞受体(TCR)-肽-主要组织相容性复合体(pMHC)特异性进行全谱分析，这是先前难以解决的瓶颈，正如先前所述的方法需要相当大的努力来确定单个T细胞克隆可以识别什么(例如，在典型的免疫应答中)。在一些实施方案中，本文所述的是基于逆转录病毒的***，其重新利用病毒趋向性作为选择分子相互作用的方法并用目标蛋白质变体的结合功能替换野生型病毒表面蛋白质的结合功能，例如，通过在相应的转移质粒(用于制造病毒)上编码这些蛋白质变体，从而确保所得病毒在其表面展示蛋白变体并包装相应的基因序列。因此，当病毒进入靶细胞时(例如，携带与蛋白变体的展示细胞外靶向结构域结合的受体)，细胞进入导致所展示的蛋白质的遗传序列整合到靶标细胞的基因组中。
以前研究T细胞特异性的方法需要组合生成的T细胞系、T细胞受体的重组表达和/或经由基于候选抗原的方法对T细胞结合或活性进行个体验证。这些元件中的每一个都对所筛选的T细胞或抗原的通量提供了固有的限制。例如，基于酵母展示的T细胞受体去孤儿化(deorphanize)方法缓解了所检测抗原数量的瓶颈(具有筛选>108个配体的能力)，但仍然受到重组表达TCR需求的严重限制。本文描述的本发明的当前策略代表了T细胞特异性研究和T细胞筛选方面的巨大进步，允许筛选>108个配体并且不需要重组TCR表达。
逆转录病毒
本文描述的是逆转录病毒，其包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及编码报告子的核酸。在一些实施方案中，逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白和包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白。
本文公开的逆转录病毒包含一种或多种源自合适物种的逆转录病毒基因组(天然存在的或修饰的)的元件。逆转录病毒包括7个科：α逆转录病毒(禽白血病病毒)、β逆转录病毒(小鼠乳腺肿瘤病毒)、γ逆转录病毒(鼠白血病病毒)、δ逆转录病毒(牛白血病病毒)、ε逆转录病毒(角膜白斑皮肤肉瘤病毒(Walleye dermal sarcoma virus))、慢病毒(人类免疫缺陷病毒)和泡沫病毒(人类泡沫病毒)。美国专利号7,901,671中提供了六个另外的逆转录病毒实例。
在一些实施方案中，逆转录病毒是慢病毒。慢病毒是逆转录病毒的一个属，由于它们能够整合到宿主基因组中，因此通常会引起缓慢发展的疾病。修饰的慢病毒基因组可用作将核酸递送至宿主细胞的病毒载体。宿主细胞可以用慢病毒载体和可选的用于表达慢病毒包装蛋白(例如，VSV-G、Rev和Gag/Pol)的其他载体转染，以在培养基中产生慢病毒颗粒。
逆转录病毒和慢病毒构建体是本领域公知的，并且任何合适的逆转录病毒可用于构建本文所述的逆转录病毒(或多个逆转录病毒或逆转录病毒文库)。逆转录病毒构建体的非限制性实例包括慢病毒载体、人类免疫缺陷病毒(HIV)载体、禽白血病病毒(ALV)载体、鼠白血病病毒(MLV)载体、鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)载体、鼠干细胞病毒和人T细胞白血病病毒(HTLV)载体。这些逆转录病毒构建体包含来自相应逆转录病毒的前病毒序列。
本文所述的逆转录病毒可包含病毒元件，例如来自一种或多种合适的逆转录病毒的本文所述的那些，所述逆转录病毒是具有单链正链RNA分子的RNA病毒。逆转录病毒包含逆转录酶和整合酶。进入靶细胞后，逆转录病毒利用其逆转录酶将其RNA分子转录为DNA分子。随后，整合酶用于将DNA分子整合到宿主细胞基因组中。在整合到宿主细胞基因组中后，来自逆转录病毒的序列被称为原病毒(例如原病毒序列或原病毒序列)。本文所述的逆转录病毒载体还可包含本领域已知的另外功能元件以解决安全问题和/或改善载体功能，例如包装效率和/或病毒滴度。另外的信息可以在US20150316511和WO2015/117027中找到，出于本文引用的目的和主题，每个的相关公开内容通过引用并入本文。慢病毒的其他信息可在例如WO2019/056015中找到，其相关公开内容出于此特定目的通过引用并入本文。
在一些实施方案中，慢病毒能够经由pMHC-TCR相互作用或任何其他蛋白质-蛋白质细胞对细胞相互作用而靶向靶特异性细胞。在一些实施方案中，具有已知和相关特异性的T细胞可以得到增强(在癌症或感染的情况下)或得到消融(在自身免疫的情况下)而不影响其他T细胞，显著限制了脱靶效应的风险。在一些实施方案中，慢病毒可以编码细胞外结构域以靶向靶细胞上的任何其他表面表达的分子。
病毒包膜蛋白
本文所述的逆转录病毒包含包含削弱其天然功能(例如，非突变病毒包膜蛋白的野生型功能)的至少一个突变的病毒包膜蛋白。在一些实施方案中，病毒包膜蛋白是任何逆转录病毒(例如，慢病毒)的任何病毒包膜蛋白。病毒包膜蛋白可以是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。在一些实施方案中，被病毒包膜蛋白的突变削弱的天然功能是病毒趋向性(例如，感染细胞、结合细胞等的能力)。
在一些实施方案中，包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白是突变的VSV-G包膜蛋白。在一些实施方案中，包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白是突变的麻疹病毒包膜蛋白。在一些实施方案中，包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白是突变的尼帕病毒包膜蛋白。在一些实施方案中，包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白是突变的可卡耳病毒G蛋白。
在一些实施方案中，突变的VSV-G包膜蛋白包含在H8、K47、Y209和/或R354处的突变。在一些实施方案中，突变的VSV-G包膜蛋白包含H8A、K47A、K47Q、Y209A、R354A和/或R354Q突变。在一些实施方案中，突变的VSV-G包膜蛋白如Nikolic等人，“Structura basisfor the recognition of LDL-receptor family members by VSV glycoprotein.”Nature Comm.,2018,9:1029中所述，出于此特定目的，其相关公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，突变的麻疹病毒包膜蛋白包含在Y481、R533、S548和/或F549处的突变。在一些实施方案中，突变的麻疹病毒包膜蛋白包含Y481A、R533A、S548L和/或F549S突变。
在一些实施方案中，突变的尼帕病毒包膜蛋白包含在E501、W504、Q530和/或E533处的突变。在一些实施方案中，突变的麻疹病毒包膜蛋白包含E501A、W504A、Q530A和/或E533A突变。
在一些实施方案中，突变的可卡耳病毒G蛋白包含在K64和/或R371处的突变。在一些实施方案中，突变的可卡耳病毒G蛋白包含在K64Q和/或R371A处的突变。
在一些实施方案中，突变的包膜蛋白源自任何其他包膜病毒，包括但不限于杆状病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、巨细胞病毒(CMV)、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、痘苗病毒、甲型、乙型或丙型肝炎病毒、痘苗病毒、甲病毒、登革热病毒、黄热病病毒、寨卡病毒、流感病毒、汉坦病毒、埃博拉病毒、狂犬病病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、冠状病毒以及弹状病毒科的其他成员。
在一些实施方案中，包含至少一个突变的病毒包膜蛋白包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个突变。在一些实施方案中，包含至少一个突变的病毒包膜蛋白包含与野生型病毒包膜蛋白至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或97％相同的核苷酸序列和/或氨基酸序列。在一些实施方案中，包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白保留少于95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％的野生型病毒包膜蛋白功能。在一些实施方案中，包含至少一个突变的病毒包膜蛋白缺乏其所有天然功能。在一些实施方案中，包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白的逆转录病毒包含少于95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％的包含野生型病毒包膜蛋白的逆转录病毒的细胞传染性。
非病毒膜结合蛋白
本文所述的逆转录病毒包含非病毒膜结合蛋白。非病毒膜结合蛋白可以包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域。在一些实施方案中，非病毒膜结合蛋白是包含来自至少两种不同蛋白质的序列的嵌合蛋白。在一些实施方案中，非病毒膜结合蛋白是包含来自单个蛋白质的序列的全长或截短的蛋白质。
膜结合结构域是具有使蛋白质或肽完全或部分嵌入逆转录病毒的膜(例如，包膜)或与逆转录病毒的膜(例如，包膜)相关的氨基酸序列的蛋白质或肽。在一些实施方案中，膜结合结构域能够将细胞外靶向结构域呈现和递送到细胞外环境。在一些实施方案中，膜结合结构域包含细胞内结构域、跨膜结构域和/或细胞外结构域。在一些实施方案中，膜结合结构域包含细胞内结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，膜结合结构域包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白质或其片段。MHC蛋白质可以是I类或II类MHC蛋白质。
在一些实施方案中，膜结合结构域包含10-50、10-100、25-100、50-200、50-150、100-500、100-250、250-500个或任何合理数量的总氨基酸。
在一些实施方案中，逆转录病毒文库中存在的逆转录病毒包含与文库中的一些或所有其他逆转录病毒相同的膜结合结构域。在一些实施方案中，逆转录病毒文库中存在的每个逆转录病毒包含相对于文库中的一些或所有其他逆转录病毒的不同膜结合结构域。
在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是具有氨基酸序列并且是细胞表面上的靶标分子或配体(例如同源蛋白质)的结合伙伴的任何蛋白质或肽。当存在于逆转录病毒内部以外的细胞外环境中时，细胞外靶向结构域能够与靶细胞结合。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域结合或靶向存在于细胞或细胞群体的子集的细胞表面上的同源蛋白质或配体(例如，存在于靶细胞上的蛋白质受体)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域结合存在于单个T细胞或T细胞群体子集的细胞表面上的同源蛋白质或配体。在一些实施方案中，逆转录病毒的细胞外靶向结构域与细胞的同源蛋白质或配体之间的结合相互作用使逆转录病毒能够进入细胞(例如抗原特异性细胞，例如T细胞)。
在一些实施方案中，细胞外靶向结构域包含10-50、10-100、25-100、50-200、50-150、100-500、100-250、250-500或任何合理数量的总氨基酸。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域包含至少5个、至少10个、至少15个、至少20个或至少50个氨基酸。
在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是蛋白质、抗体或肽。在一些实施方案中，抗体是全长抗体、抗体片段、纳米体或单链抗体(scFv)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是与靶细胞的同源蛋白质结合的抗体。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是结合B细胞或T细胞抗原的抗体。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是抗CD19抗体(例如，结合CD19的抗体)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是结合任何细胞表面分子的抗体。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是结合谱系标志物(例如，CD3、CD20、整合素或其他受体)、表型标志物(PD-1、CD25、CD45或其他)的抗体。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是结合受体(例如，存在于靶细胞表面上的受体)的蛋白质或肽。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是结合细胞因子受体(例如，白细胞介素-13(IL-13)受体)的蛋白质或肽。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是细胞因子(例如，IL-2、IL-6、IL-12、IL-13)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是趋化因子配体(例如CXCL9、CXCL10、CXCL11等)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是细胞受体，包括细胞因子受体(例如，IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-2受体、公共γ链)、GPCR(包括趋化因子受体，例如CSCR3、CXCR4等)和整合素。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域是由MHC蛋白质展示的肽。在一些实施方案中，非病毒膜结合蛋白包含包含MHC蛋白或片段的膜结合结构域和包含由MHC蛋白展示的肽的细胞外靶向结构域。在一些实施方案中，细胞外结构域结合T细胞受体和/或B细胞受体。T细胞受体在自然界中以α/β和γ/δ异二聚体整合膜蛋白在T细胞表面上表达，每个亚单位包括短的细胞内片段、单个跨膜α螺旋和两个球状细胞外Ig超家族结构域。B细胞受体是位于B细胞外表面上的跨膜受体蛋白。
在一些实施方案中，细胞外靶向结构域以10-9至10-8M、10-8至10-7M、10-7至10-6M、10-6至10-5M、10-5至10-4M、10-4至10-3M或10-3至10-2M的结合亲和力结合靶细胞或细胞表面分子。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域以10-9至10-8M、10-8至10-7M、10-7至10-6M、10-6至10-5M、10-5至10-4M、10-4至10-3M或10-3至10-2M的结合亲和力结合靶细胞的同源蛋白质或配体。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域与同源蛋白质或配体之间的结合亲和力在皮摩尔至纳摩尔范围内(例如，在约10-12和约10-9M之间)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域与同源蛋白质或配体之间的结合亲和力在纳摩尔至微摩尔范围内(例如，在约10-9和约10- 6M之间)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域与同源蛋白质或配体之间的结合亲和力在微摩尔至毫摩尔范围内(例如，在约10-6和约10-3M之间)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域与同源蛋白质或配体之间的结合亲和力在皮摩尔至微摩尔范围内(例如，在约10-12和约10-6M之间)。在一些实施方案中，细胞外靶向结构域与同源蛋白质或配体之间的结合亲和力在纳摩尔至毫摩尔范围内(例如，在约10-9和约10-3M之间)。
如本文所用，术语抗体通常指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域或免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质。例如，抗体可以包括重(H)链可变区(本文缩写为VH)和/或轻(L)链可变区(本文缩写为VL)。在另一实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和/或两个轻(L)链可变区。抗体可具有IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(及其亚型)的结构特征。VH和VL区可进一步细分为高变异性区域，称为“互补性决定区”(“CDR”)，中间间隔着更保守的区域，称为“框架区”(“FR”)。每个VH和/或VL通常由三个CDR和四个FR组成，按以下顺序从氨基端到羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗体的VH或VL链可进一步包括重链或轻链恒定区，从而分别形成重链或轻链免疫球蛋白链。在一些实施方案中，抗体是两条重免疫球蛋白链和两条轻免疫球蛋白链的四聚体，其中重和轻免疫球蛋白链通过例如二硫键相互连接。在IgG中，重链恒定区包括三个免疫球蛋白结构域：CH1、CH2和CH3。
在一些实施方案中，逆转录病毒文库中存在的逆转录病毒包含与库中的一些或所有其他逆转录病毒相同的细胞外靶向结构域。在一些实施方案中，存在于逆转录病毒文库中的每个逆转录病毒相对于文库中的一些或所有其他逆转录病毒包含不同的细胞外靶向结构域。
在一些实施方案中，非病毒膜结合蛋白进一步包含信号序列(也称为定位序列的信号肽)。在一些实施方案中，信号序列位于非病毒膜结合蛋白的N-或C-末端。信号序列的功能是将非病毒膜结合蛋白转移到逆转录病毒的膜(或包膜)。在一些实施方案中，信号序列为5-10、5-15、10-20、15-20、15-30、20-30或25-30个氨基酸。在一些实施方案中，信号序列是Ig Kappa前导序列(例如，包含METDTLLLWVLLLWVPGSTG(SEQ ID NO:1))的小鼠IgKappa前导序列)或B2M信号肽序列(例如，包含MSRSVALAVLALLSLSGLEA(SEQ ID NO:2)的B2M信号肽序列)。在一些实施方案中，逆转录病毒文库中存在的逆转录病毒包含与文库中的一些或所有其他逆转录病毒相同的信号序列。在一些实施方案中，逆转录病毒文库中存在的每个逆转录病毒包含相对于文库中的一些或所有其他逆转录病毒的不同信号序列。
在一些实施方案中，编码非病毒膜结合蛋白的核酸进一步包含内部核糖体进入位点(IRES)。IRES是一种RNA序列，允许在蛋白质合成过程中启动翻译。在一些实施方案中，IRES位于C末端或其附近。在一些实施方案中，IRES位于相对于膜结合结构域和细胞外靶向结构域的C端。在一些实施方案中，IRES是病毒IRES。在一些实施方案中，IRES是对逆转录病毒天然的IRES。在一些实施方案中，IRES是源自脑心肌炎病毒(EMCV)的序列。在一些实施方案中，逆转录病毒文库中存在的逆转录病毒包含与文库中的一些或所有其他逆转录病毒相同的IRES。在一些实施方案中，存在于逆转录病毒文库中的每个逆转录病毒相对于文库中的一些或所有其他逆转录病毒包含不同的IRES。
在一些实施方案中，非病毒膜结合蛋白进一步包含位于膜结合结构域和细胞外靶向结构域之间的接头。接头是氨基酸接头，可以是刚性接头、柔性接头或寡聚化的接头。刚性接头是缺乏柔性的氨基酸序列(例如，可包含至少一个脯氨酸)。在一些实施方案中，刚性接头包含血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)柄或CD8α柄。在一些实施方案中，PDGFR柄包含包含AVGQDTQEVIVVPHSLPFK(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列。在一些实施方案中，PDGFR柄包含包含ASAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEAARPAAGGAVHTRGL DFAK(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列。柔性接头是具有许多自由度的氨基酸序列(例如，可包含具有小侧链的多个氨基酸，例如甘氨酸或丙氨酸)。在一些实施方案中，柔性接头包含包含GAPGAS(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列。在一些实施方案中，柔性接头包含由GAPGSGGGGSGGGGSAS(SEQ ID NO:6)组成的氨基酸序列。在一些实施方案中，柔性接头包含包含GGGGS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列。在一些实施方案中，柔性接头包含包含(GAPGAS)N(SEQ ID NO:29)或(G4S)N(SEQ ID NO:30)的氨基酸序列，其中N为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多。寡聚化的接头是一种可以寡聚化的到另一相关氨基酸的氨基酸。在一些实施方案中，寡聚化的接头是可形成二聚体、三聚体或四聚体的氨基酸序列。在一些实施方案中，寡聚化的接头包含IgG4铰链结构域(例如，ASESKYGPPCPPCPAVGQDTQEVIVVPHSLPFK(SEQ ID NO:8))。在一些实施方案中，寡聚化的接头包含可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列(例如ASGGGGSGELAAIKQELAAIKKELAAIKWELAAIKQGAG(SEQ ID NO:9))。在一些实施方案中，寡聚化的接头包含可形成二聚体卷曲螺旋的氨基酸序列(例如，ASESKYGPPCPPCP(SEQ ID NO:10))。
报告子
在一些实施方案中，本文所述的逆转录病毒可包含报告子(例如报告蛋白)。在一些实施方案中，本文所述的逆转录病毒包含编码报告子(例如，报告蛋白)的核酸。如本文所用，报告子通常是在逆转录病毒和/或靶细胞中表达时可被检测到的蛋白质或基因。在一些实施方案中，在靶细胞或靶细胞的子集(在细胞群体中)中存在或不存在报告子允许分选细胞的能力(例如，使用流式细胞术和/或荧光激活细胞分选)。
在一些实施方案中，报告子是荧光蛋白。荧光蛋白可以是绿色荧光蛋白(GFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(RFP)。荧光蛋白可以如题为“Fluorescent proteinsensors for detection of analytes”的美国专利号7,060,869中所述。
在一些实施方案中，报告子是抗生素抗性标志物。在一些实施方案中，抗生素抗性标志物是赋予包含该标志物的靶细胞以竞争优势的蛋白质或基因。在一些实施方案中，抗生素抗性标志物包括潮霉素抗性蛋白或基因、卡那霉素抗性蛋白或基因、氨苄青霉素抗性蛋白或基因、链霉素抗性蛋白或基因或者新霉素抗性蛋白或基因。
细胞
如本文所述的细胞可以是任何细菌、哺乳动物或酵母细胞。在一些实施方案中，细胞是人、小鼠、大鼠或非人灵长类动物细胞。在一些实施方案中，细胞是体细胞或生殖细胞。在一些实施方案中，细胞是上皮细胞、神经细胞、激素分泌细胞、免疫细胞、分泌细胞、血细胞、***或生殖细胞。在一些实施方案中，细胞是抗原特异性细胞(例如，结合特定抗原的细胞)。在一些实施方案中，抗原特异性细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，抗原特异性细胞是B细胞或T细胞。在一些实施方案中，细胞是靶细胞(例如，其包含能够被本文所述的逆转录病毒靶向的同源蛋白或配体)。
如本文所述的细胞群体可以是任何细菌、哺乳动物或酵母细胞群体。在一些实施方案中，细胞群体是人、小鼠、大鼠或非人灵长类动物细胞群体。在一些实施方案中，细胞群体是体细胞群体或生殖细胞群体。在一些实施方案中，细胞群体包括上皮细胞、神经细胞、激素分泌细胞、免疫细胞、分泌细胞、血细胞、***和/或生殖细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含抗原特异性细胞(例如，结合特定抗原的细胞)。在一些实施方案中，抗原特异性细胞群体包括免疫细胞。在一些实施方案中，抗原特异性细胞群体包括B细胞和/或T细胞。在一些实施方案中，细胞群体包括同质细胞群体。在一些实施方案中，细胞群体包括异质细胞群体。
在一些实施方案中，细胞群体是从受试者分离的细胞群体。受试者可以是人类受试者(例如，患有疾病的人类受试者)、小鼠受试者、大鼠受试者或非人类灵长类受试者。在一些实施方案中，从受试者的血液或肿瘤中分离细胞群体。
在一些实施方案中，细胞群体先前已被冷冻和解冻(例如，1、2、3、4、5或更多次冷冻/解冻循环)。在一些实施方案中，细胞群体维持在液体培养基中。在一些实施方案中，使用任何已知方法已经将细胞群体传代1、2、3、4、5或更多次。在一些实施方案中，在与逆转录病毒或多种逆转录病毒组合之前，将细胞群体维持在液体培养基中。在一些实施方案中，在与逆转录病毒或多种逆转录病毒组合后，将细胞群体维持在液体培养基中。在一些实施方案中，在与逆转录病毒或多种逆转录病毒组合之前同时，将细胞群体维持在液体培养基中。
在一些实施方案中，细胞群体包含本文所述的任何逆转录病毒。在一些实施方案中，细胞群体的子集含有本文所述的任何逆转录病毒。在一些实施方案中，细胞群体的子集在该子集的每个细胞内(例如，在该子集的每个细胞的细胞核内)含有逆转录病毒。在一些实施方案中，细胞群体或其子集表达报告子(例如，荧光蛋白或抗生素抗性标志物)。在一些实施方案中，基于报告子的存在或不存在来分离和/或分选细胞群体或其子集(例如，含有逆转录病毒)。在一些实施方案中，基于报告子的存在或不存在而将含有本文所述的逆转录病毒的细胞群体的子集与不含逆转录病毒的细胞群体分离和/或分选。在一些实施方案中，细胞分选前至少50％、60％、70％、80％、90％或95％的细胞群体含有逆转录病毒。在一些实施方案中，在基于报告子的存在或不存在进行分离和/或分选之后，至少70％、80％、90％、95％或100％的细胞群体含有逆转录病毒。
筛选方法
本文描述了筛选细胞群体的方法，包括：(i)提供逆转录病毒，其包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及编码报告子的核酸；(ii)将逆转录病毒与细胞群体组合；和(iii)根据报告子的存在或不存在对细胞群体进行分选。在一些实施方案中，(i)的逆转录病毒包含包含以下结构的核酸：S-ETD-MBD-IRES-R，其中S编码信号序列，ETD编码细胞外靶向结构域；MBD编码膜结合结构域，IRES编码内部核糖体进入位点，并且R编码报告子；以及包含削弱其天然功能的至少一个突变的突变病毒包膜蛋白。
如本文所用，术语“组合”(在一些实施方案中，与术语“提供”和“接触”同义)通常是指使逆转录病毒与细胞群体密切物理接触的行为，例如逆转录病毒的细胞外靶向结构域能够结合存在于细胞群体的子集上的同源配体。在一些实施方案中，当包含逆转录病毒的溶液和包含细胞群体的溶液混合时，发生逆转录病毒和细胞群体的组合。在一些实施方案中，当冻干的逆转录病毒和包含细胞群体的溶液混合时，发生逆转录病毒和细胞群体的组合。在一些实施方案中，当冻干的逆转录病毒和冻干的细胞群体混合并用溶液重构时，发生逆转录病毒和细胞群体的组合。在一些实施方案中，细胞群体维持在细胞培养基中、单层细胞中，和/或附着于组织培养板或皮氏培养皿。
通常，逆转录病毒和细胞群体组合(例如，物理组合或接触)确定的时间段。在一些实施方案中，时间段以秒、分钟、小时或天为单位测量。在一些实施方案中，时间段是0-30秒、15-45秒、30-60秒、45-90秒、60-90秒或60-120秒。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体组合并接触0-30秒、15-45秒、30-60秒、45-90秒、60-90秒或60-120秒。在一些实施方案中，时间段是1-2分钟、1-5分钟、1-10分钟、2-10分钟、5-10分钟、5-20分钟、10-20分钟、25-30分钟、25-60分钟、30-45分钟、30-40分钟、40-60分钟、50-70分钟或60-120分钟。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体组合并接触1-2分钟、1-5分钟、1-10分钟、2-10分钟、5-10分钟、5-20分钟、10-20分钟、25-30分钟、25-60分钟、30-45分钟、30-40分钟、40-60分钟、50-70分钟或60-120分钟。在一些实施方案中，时间段是1-2小时、1-5小时、1-3小时、2-5小时、3-6小时、3-12小时、6-12小时、12-18小时、12-24小时、15-30小时、18-24小时、24-48小时、24-36小时或36-50小时。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体组合并接触1-2小时、1-5小时、1-3小时、2-5小时、3-6小时、3-12小时、6-12小时、12-18小时、12-24小时、15-30小时、18-24小时、24-48小时、24-36小时或36-50小时。在一些实施方案中，时间段是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或5-15天。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体组合并接触1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或5-15天。
在一些实施方案中，基于报告子的存在或不存在对细胞群体进行分选。在一些实施方案中，将含有报告子(例如，表达报告子)的细胞群体的子集从不包含报告子的细胞群体的剩余子集中分选出来。在一些实施方案中，使用流式细胞术(例如，荧光激活细胞分选)、下一代基因组测序(例如，单细胞下一代测序)或抗生素选择进行细胞群体的分选。
在一些实施方案中，允许逆转录病毒与细胞群体的子集进行细胞间相互作用的步骤(ii)的条件包括在确定的溶液、组合物存在下和在特定温度下将逆转录病毒与细胞群体组合。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体在细胞培养基(例如，RPMI或DMEM细胞培养基)的存在下组合。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体在缓冲盐水溶液的存在下组合。在一些实施方案中，缓冲盐水溶液是磷酸盐缓冲盐水或HEPES缓冲盐水。在一些实施方案中，缓冲盐水溶液包含牛血清白蛋白和/或EDTA。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体在逆转录病毒转导增强剂(例如硫酸肝素、聚凝胺、硫酸鱼精蛋白或葡聚糖)的存在下组合。在一些实施方案中，逆转录病毒和细胞群体在4℃至42℃、4℃至8℃、4℃至10℃、8℃至15℃、10℃至20℃、18℃至23℃、20℃至30℃、25℃至35℃、30℃至40℃或37℃至42℃范围的温度下在(ii)中组合。
在一些实施方案中，本文所述的筛选方法进一步包括在步骤(ii)和(iii)之间用洗涤溶液洗涤细胞群体。在一些实施方案中，洗涤溶液是允许维持健康细胞的任何液体溶液(例如，包含中性pH、低至中等离子强度水平的溶液)。在一些实施方案中，洗涤细胞群体从细胞群体中去除过量和/或剩余的逆转录病毒。在一些实施方案中，使用细胞培养基(例如，RPMI或DMEM细胞培养基)洗涤细胞群体。在一些实施方案中，使用缓冲盐水溶液洗涤细胞群体。在一些实施方案中，缓冲盐水溶液是磷酸盐缓冲盐水或HEPES缓冲盐水。在一些实施方案中，缓冲盐水溶液包含牛血清白蛋白和/或EDTA。在一些实施方案中，在4℃至42℃、4℃至8℃、4℃至10℃、8℃至15℃、10℃至20℃、18℃至23℃、20℃至30℃、25℃至35℃、30℃至40℃或37℃至42℃范围的温度下清洗细胞群体。
在一些实施方案中，细胞群体在与逆转录病毒组合之前维持在液体培养中。在一些实施方案中，细胞群体在与逆转录病毒组合后维持在液体培养中。在一些实施方案中，在与逆转录病毒组合步骤期间，细胞群体维持在液体培养中。在一些实施方案中，将细胞群体附着到细胞培养板或皮氏培养皿。在一些实施方案中，细胞群体维持在单层、胚状体或任何细胞聚集体中。
在一些实施方案中，筛选方法包括使用多种逆转录病毒。在某些实施方案中，多种逆转录病毒包含至少102、103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、或1012种独特的逆转录病毒。在一些实施方案中，存在于多种逆转录病毒中的每种独特逆转录病毒的至少102、103、104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个拷贝。
在一些实施方案中，筛选方法包括筛选具有至少两种不同的、独特的逆转录病毒的细胞群体。在一些实施方案中，不同的、独特的逆转录病毒包含不同的细胞外靶向结构域和/或不同的报告子。在一些实施方案中，筛选方法包括第一逆转录病毒和第二逆转录病毒，其中第一和第二逆转录病毒包含不同的细胞外靶向结构域和/或不同的报告子。在一些实施方案中，筛选方法包括筛选具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、50、100或更多种不同逆转录病毒的细胞群体。在一些实施方案中，筛选方法包括使用逆转录病毒文库筛选细胞群体。在一些实施方案中，逆转录病毒文库包括至少102、至少103、至少104、至少105、至少106、至少107、至少108、至少109或至少1010种独特的逆转录病毒。
逆转录病毒文库
本文描述的是逆转录病毒文库，其中文库包括多种独特的逆转录病毒，其中每种独特的逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包括膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及编码报告子的核酸，其中每种独特的逆转录病毒包含不同且独特的细胞外靶向结构域。本文还描述了包括逆转录病毒的细胞库，其中文库包括多种独特的细胞，其中每种独特的细胞包含独特的逆转录病毒。
在一些实施方案中，文库包括用于筛选T细胞群体的pMHC编码的(肽/MHC编码的)逆转录病毒(例如慢病毒)文库。在这些文库中，展示在病毒表面上的pMHC将使得能够以TCR特异性方式进行T细胞感染。可收集受感染的T细胞并进行测序，从而识别可感染目标T细胞群体的子集的pMHC配体，并能够同时跟踪TCR序列和反应性pMHC配体。在一些实施方案中，pMHC逆转录病毒文库最少包括随机化的转移载体，其含有随机化的pMHC靶向元件。在一些实施方案中，使用简并寡核苷酸引物生成随机衍生的文库。在一些实施方案中，生成特异性针对一组独特抗原(例如，针对特定目标靶标的所有可能的病毒或细菌抗原——人类免疫缺陷病毒、结核病等；或针对特定对象的所有可能的新抗原)的靶向文库。
在一些实施方案中，文库能够针对抗原特异性细胞群体(例如，B细胞或T细胞)进行筛选。在一些实施方案中，文库包括至少102、至少103、至少104、至少105、至少106、至少107、至少108、至少109或至少1010种独特的逆转录病毒。在一些实施方案中，包括独特逆转录病毒的文库包括长度为至少5、至少10、至少15、至少20或至少50个氨基酸的细胞外靶向结构域。在一些实施方案中，通过定点诱变生成每个不同且独特的细胞外靶向结构域。
逆转录病毒或细胞文库的大小可以从数百到数十万、数百万或更多独特的逆转录病毒或独特的细胞不等。在一些实施方案中，本公开的文库包括至少500,000种独特的逆转录病毒或独特的细胞。本发明的文库包括逆转录病毒文库和细胞文库。文库是具有共同元件和至少一个不同元件的成员的合成(即，分离的、合成产生的、不含天然一起存在于细胞中的组分、在放入文库之前被纯化)的集合。文库包括千或更多(例如，至少：1,000；2,000；3,000；4,000；5,000；10,000；50,000；100,000；500,000；600,000；700,000；800,000；900,000；1,000,000；2,000,000；3,000,000；4,000,000或更多)成员。文库大小的上限由提供成员之间的独特性或多样性的结构域或模块的组合定义。例如，上限可以是4,000,000成员。因此，在一些实施方案中，文库高度多样化，并且包括至少500,000不同的成员。高度多样化的文库可具有106或更多的多样性。在一些实施方案中，使用本文所述的核酸的定点诱变生成逆转录病毒的文库。在一些实施方案中，定点诱变涉及使用引物和低保真RNA聚合酶以允许如本文所述的常见核酸的随机诱变。
将核酸递送至细胞的方法
本文描述的是将核酸递送至细胞的方法，包括(i)提供如本文所述的逆转录病毒，所述逆转录病毒包含所述核酸、包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，以及包含能够与细胞的同源配体结合的细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白；和(ii)使逆转录病毒与细胞接触，从而使逆转录病毒进入或感染细胞。在一些实施方案中，核酸编码mRNA分子，任选地其中mRNA是目标基因。在一些实施方案中，核酸编码双链RNA、反义RNA、微小RNA或任何其他RNA分子。在一些实施方案中，目标基因编码蛋白质。在一些实施方案中，目标基因编码治疗性蛋白质(例如，补偿受试者疾病状况的蛋白质)。
在一些实施方案中，当逆转录病毒在步骤(ii)期间进入或感染细胞时，核酸被递送至细胞。在一些实施方案中，递送本文所述的核酸的方法不需要转染剂(例如亲脂性转染剂，例如Lipofectin)。
检测方法
本文描述了检测逆转录病毒和细胞之间相互作用的方法，包括：(i)使包含逆转录病毒和细胞的样品与抗体接触，其中逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，并且其中抗体结合逆转录病毒的细胞外靶向结构域；(ii)任选地从样品中去除未结合的抗体；和(iii)对样品进行成像以检测抗体-逆转录病毒复合物是否与细胞结合。
在一些实施方案中，抗体进一步包含至少一种荧光标记。在一些实施方案中，荧光标志物是呫吨衍生物(例如，荧光素、若丹明、俄勒冈绿、曙红和德克萨斯红)、花青衍生物(例如，花青、吲哚羰花青、氧杂碳花青、硫杂碳花青和部花青)、萘衍生物(例如丹磺酰基和普罗丹衍生物)、香豆素衍生物、噁二唑衍生物(例如吡啶基噁唑、硝基苯并噁二唑和苯并噁二唑)、芘衍生物(例如级联蓝)、噁嗪衍生物(例如尼罗红、尼罗蓝、甲酚紫和噁嗪170)、吖啶衍生物(例如原黄素、吖啶橙和吖啶黄)、芳基次甲基(arylmethine)衍生物(例如金胺、结晶紫和孔雀石绿)或四吡咯衍生物(例如卟啉、酞菁和胆红素)。荧光标记可以与抗体非共价结合或与抗体共价连接。
在一些实施方案中，在步骤(iii)中使用共聚焦或荧光显微镜对样品成像。在一些实施方案中，可使用标准显微镜设置(例如，共聚焦或荧光显微镜)实现检测方法。在一些实施方案中，在使用标准共聚焦或epi荧光显微镜成像时以超多路复用格式检测样品。
核酸
如本文所用，术语“核酸”通常指多连接的核苷酸(即，包含糖(例如，核糖或脱氧核糖)的分子)，其与可交换有机碱连接，该可交换有机碱是嘧啶(例如，胞嘧啶(C)、胸苷(T)或尿嘧啶(U))或者嘌呤(例如，腺嘌呤(A)或鸟嘌呤(G))。核酸包括DNA，如D型DNA、L型DNA和RNA，以及其各种修饰。修饰包括碱基修饰、糖修饰和骨架修饰。
应当理解，用于本发明的逆转录病毒和方法中的核酸在性质上可以是同质的或异质的。例如，它们可自然完全是DNA，或者可由DNA和非DNA(例如LNA)单体或序列组成。因此，可以使用核酸元件的任何组合。修饰可使核酸在某些条件下更稳定和/或更不易降解。例如，在某些情况下，核酸是抗核酸酶的。本领域还已知用于合成核酸的方法，包括自动核酸合成。
核酸可包含其碱基的修饰。修饰的碱基包括修饰的胞嘧啶(例如，5-取代的胞嘧啶(例如，5-甲基-胞嘧啶、5-氟-胞嘧啶、5-氯-胞嘧啶、5-溴-胞嘧啶、5-碘-胞嘧啶、5-羟基-胞嘧啶、5-羟甲基-胞嘧啶、5-二氟甲基-胞嘧啶和未取代或取代的5-炔基-胞嘧啶)，6-取代的胞嘧啶，N4-取代的胞嘧啶(例如，N4-乙基-胞嘧啶)，5-氮杂-胞嘧啶，2-巯基-胞嘧啶，异胞嘧啶，伪异胞嘧啶，具有稠环***的胞嘧啶类似物(例如，N,N'-丙烯胞嘧啶或吩噁嗪)，以及尿嘧啶及其衍生物(例如，5-氟-尿嘧啶、5-溴-尿嘧啶、5-溴乙烯基-尿嘧啶、4-硫-尿嘧啶、5-羟基-尿嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶)，修饰的鸟嘌呤例如7脱杂胍、7脱杂7-取代鸟嘌呤(例如7脱杂-7(C2-C6)炔基鸟嘌呤)，7脱杂8取代的鸟嘌呤，次黄嘌呤，N2-取代的鸟嘌呤(例如N2-甲基-鸟嘌呤)，5-氨基-3-甲基-3H,6H-噻唑基[4,5-d]嘧啶-2,7-二酮，2,6-二氨基嘌呤，2氨基嘌呤，嘌呤，吲哚，腺嘌呤，取代的腺嘌呤(例如N6-甲基-腺嘌呤，8-氧代-腺嘌呤)8取代的鸟嘌呤(例如8羟基鸟嘌呤和8溴鸟嘌呤)，以及6硫代鸟嘌呤。核酸可以包含通用碱(例如3-硝基吡咯、P-碱、4-甲基-吲哚、5-硝基-吲哚和K-碱)和/或芳环***(例如氟苯、二氟苯、苯并咪唑或二氯苯并咪唑、1-甲基-1H-[1,2,4]***-3-羧酸酰胺)。可并入本发明寡核苷酸中的特定碱基对是由Yang等人NAR，2006，34(21)：6095-6101报告的dZ和dP非标准碱基对。嘧啶类似物dZ是6-氨基-5-硝基-3-(1'-β-D-2'-脱氧核糖呋喃酰基)-2(1H)-吡啶酮，其沃森-克里克补体嘌呤类似物dP是2-氨基-8-(1'-β-D-1'-脱氧核糖呋喃酰基)-咪唑[1,2-a]-1,3,5-三嗪-4(8H)-酮。
氨基酸取代
在一些实施方案中，氨基酸残基变化是保守的氨基酸残基取代。如本文所用，“保守氨基酸取代”是指不改变其中进行氨基酸取代的蛋白质的相对电荷或大小特征的氨基酸取代。变体可根据本领域普通技术人员已知的改变多肽序列的方法来制备，如在汇编此类方法的参考文献中找到的方法，例如Molecular Cloning:A Laboratory Manual,J.Sambrook,等人,eds.,Second Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,New York,1989，或Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel,等人,eds.,John Wiley&Sons,Inc.,New York。氨基酸的保守取代包括以下组内氨基酸之间的取代：(a)M、I、L、V；(b)F、Y、W；(c)K、R、H；(d)A、G；(e)S、T；(f)Q、N；及(g)E、D。
使用Karlin和Altschul Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-68,1990的算法，按照Karlin和Altschul Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-77,1993中修改的来确定两个氨基酸序列的“百分比一致性”。这种算法被纳入Altschul,等人，J.Mol.Biol.215:403-10,1990的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)中。BLAST蛋白质搜索可使用XBLAST程序执行，分数＝50，字长＝3，以获得与目标蛋白质分子同源的氨基酸序列。在两个序列之间存在空位的情况下，如Altschul等人,Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402,1997所述，可以利用空位BLAST。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用相应程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。
实施例
实施例1.生成靶向抗原特异性T细胞的逆转录病毒
所靶向的慢病毒是通过用以下质粒的聚乙烯亚胺(PEI)转染HEK293T细胞而生成的：编码包含K47Q和R354A突变的突变的VSV-G包膜蛋白的包膜质粒、至少一个辅助质粒(pRRE、pRev或psPAX2.1)和转移质粒(图1)。所使用的转移质粒编码包含以下结构的核酸：S-ETD-MBD-IRES-R，其中S编码B2M信号序列(如SEQ ID NO:2提供的)，ETD编码可变的细胞外靶向结构域(例如，癌-睾丸抗原NYESO-1)；MBD编码膜结合结构域(例如，MHC HLA-A2结构域)，IRES编码源自脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点，以及R编码绿色荧光蛋白GFP报告子(图2)。
在与表达T细胞受体(TCR)的T细胞系(例如Jurkat T细胞)混合(使用移液管混合)之前，通过标准离心技术收获和纯化所得病毒，所述T细胞受体(TCR)在溴化己二甲胺存在下对已知pMHC具有特异性。
将展示HLA-A2-NYESO-1pMHC的病毒与表达IG4 T细胞受体(TCR)变体(SEQ ID NO:27)的Jurkat T细胞混合，该变体以～26pM的结合亲和力识别展示的NYESO-1，观察到有效的感染，混合后有41.9％的T细胞表达GFP报告子(图3A)。该结果表明该细胞群体中41.9％的T细胞被病毒感染。相反，将展示HLA-A2-NYESO-1pMHC的病毒与不表达IG4 TCR的细胞混合，观察到最小的感染，混合后只有1.1％的T细胞表达GFP报告子(图3B)。
将展示HLA-A2-NYESO-1pMHC的病毒与表达不同版本IG4TCR的T细胞混合(其中与包含SEQ ID NO:27的IG4 TCR变体相比，不同版本的IG4 TCR表现出与NYESO-1抗原的结合降低)证明即使NYESO-1抗原和IG4 TCR之间的结合亲和力降至32μM，病毒也能够感染T细胞(图4)。NYESO-1抗原和IG4 TCR变体(SEQ ID NO:24)之间的32μM结合亲和力提供了3.6％的转导；NYESO-1抗原和IG4 TCR变体(SEQ ID NO:25)之间的84nM结合亲和力提供了17.6％的转导；以及NYESO-1抗原与IG4 TCR变体(SEQ ID NO:26)之间的5nM结合亲和力提供了18.1％的转导；测量GFP表达时。
当用展示HLA-A2-NYESO-1的病毒转导/感染时，表达1G4的T细胞表现出T细胞活化，如CD69的上调所证明的(图5A)。相反，展示HLA-A2-SL9的病毒既不转导/感染也不激活表达1G4的T细胞(图5B)。
实施例2.生成靶向IL-13受体的逆转录病毒
如实施例1中所述，产生了包含白介素-13(IL-13)细胞外靶向结构域的慢病毒。IL-13细胞外靶向结构域由连接至IgG4铰链接头蛋白接头的全长IL-13蛋白和包含截短的细胞质尾巴的PDGFR跨膜结构域(PDGFR跨膜结构域：VVVISAILALVVLTIISLIILIMLWQKKPR(SEQ ID NO:28))组成。当所得病毒与表达IL-13Rα1受体的Jurkat细胞混合时，观察到有效的转导，混合后85.2％的细胞表达GFP报告子(图7A)。当相同的病毒与不表达任何IL-13受体的细胞混合时，观察到最小的感染(图7B)。
另外的表达IL-13的慢病毒是用替代蛋白质接头产生的，以将IL-13细胞外靶向结构域连接到PDGFR跨膜结构域。等量体积的所有测试慢病毒与带有IL13Rα1受体的Jurkat细胞混合，并通过GFP报告子评估转导率(图12)。
测试了短和长蛋白质接头允许细胞外靶向结构域(IL-13)和同源配体(IL13Rα1受体)之间的细胞间相互作用的能力。包含短接头的慢病毒勉强能够感染Jurkat细胞，PDGFR接头(AVGQDTQEVIVVPHSLPFK(SEQ ID NO:3))能够感染6.1％的细胞；GAPGAS接头(GAPGAS(SEQ ID NO:5))能够感染1.0％的细胞；和CAR ECD接头(ASESKYGPPCPPCP(SEQ ID NO:10))能够感染1.6％的细胞。包含长接头的慢病毒在感染Jurkat细胞方面非常成功，CD8a柄接头(ASAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEAARPAAGGAVHTRGLDFAK(SEQ ID NO:4))能够感染88.5％的细胞；IgG4铰链接头(ASESKYGPPCPPCPAVGQDTQEVIVVPHSLPFK(SEQ ID NO:8))能够感染85.2％的细胞；和包含可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列的寡聚化的接头(例如，ASGGGGGSGELAAIKQELAAIKKELAAIKWELAAIKQGAG(SEQ ID NO:9))能够感染38.5％的细胞。
实施例3.生成靶向CD19的逆转录病毒
用与抗CD19 scFv融合的尼帕病毒F蛋白和尼帕病毒G蛋白进行假型化的慢病毒能够转导CD19+Raji B细胞(表达CD19的细胞)，混合后14.5％的细胞表达GFP报告子(图9)。
用VSV-mut(突变的VSV-G)和与IgG铰链结构域、截短的PDGFR柄和PDGFR跨膜结构域融合的抗CD19 scFv进行假型化的慢病毒能够转导CD19+Raji B细胞。将1μL的VSV-mut慢病毒(200倍浓缩)应用于CD19+Raji B细胞提供了10.0％感染的细胞(基于GFP报告子的表达)；10μL VSV-mut提供了10.7％感染的细胞。(图10)。相同的VSV-mut慢病毒构建体不转导/感染CD19-Jurkat细胞(不表达CD19的细胞)，表明慢病毒对表达其细胞外靶向结构域(抗CD19 scFv)的同源配体的细胞具有特异性。
用VSV-wt(野生型VSV-G)和与IgG铰链结构域、截短的PDGFR柄和PDGFR跨膜结构域融合的抗CD19 scFv进行假型化的慢病毒能够转导CD19+Raji B细胞和CD19-Jurkat细胞。该比较结果表明，包含突变的VSV-G(其中突变削弱VSV-G蛋白的天然功能)的慢病毒对表达由慢病毒的细胞外靶向结构域靶向的同源配体的细胞进行转导/感染具有选择性。
实施例4.靶向慢病毒诱导T细胞信号传导的能力
评估病毒以确定经由TCR靶向的感染是否产生TCR信号传导的证据。虽然非靶向的VSV-wt病毒有效地感染了T细胞，但与对照相比，它们没有激活T细胞，如通过CD69表达水平所评估的(图13，左图板)。然而，当使用展示HLA-A2-NYESO-1的病毒来靶向表达高亲和力野生型1G4 TCR的Jurkat T细胞时，在转导的细胞中观察到CD69的上调，表明TCR信号传导发生在感染期间(图13，右图板)。当将展示HLA-A2-NYESO-1的病毒与表达低亲和力突变体G4TCR构建体的T细胞混合(实施方案1中描述)时，这些结果得到重现(图14)。
实施例5.在生理亲和力下通过TCR进行慢病毒转导
在与展示HLA-A2-NYESO-1的病毒接触之前，基于IG4 TCR的表达纯化Jurkat T细胞群体。基于GFP报告子的表达，病毒有效地转导纯化的Jurkat T细胞群体，其表达1G4 TCR的每个亲和变体(图15)。NYESO-1抗原和IG4 TCR变体之间的32μM结合亲和力提供了51.3％的转导；NYESO-1抗原和IG4 TCR变体之间的84nM结合亲和力提供了84.8％的转导；NYESO-1抗原和IG4 TCR变体之间的5nM结合亲和力提供了82.3％的转导；和NYESO-1抗原与IG4 TCR变体之间的26nM结合亲和力提供了73.2％的转导。
通过孵育不同数量(0.5-10μL病毒)的展示HLA-A2-NYESO-1的病毒与细胞进行剂量应答，进一步研究了不同IG4 TCR亲和力变体之间的差异。展示NYESO-1的慢病毒转导表达IG4的T细胞，即使在高病毒载量下(图16A)。相反，展示SL-1的慢病毒(阴性对照)不转导表达IG4的T细胞(SL-1和IG4 TCR不是同源结合伙伴)。
改变了膜结合NYESO-1靶向蛋白的蛋白质结构，以测试寡聚化NYESO-1展示构建体转导T细胞的能力。NYESO-1展示表达慢病毒是用替代的蛋白质接头产生的，以将NYESO-1细胞外靶向结构域连接到跨膜结构域(包含IgG4铰链(二聚体)的蛋白质接头；以及包含可形成四聚体卷曲螺旋(四聚体)的氨基酸序列的寡聚化的接头)。如图17所示，表达这些替代结构的慢病毒能够转导表达26pM和32μM IG4 TCR变体的T细胞。
实施例6.病毒结合试验
用以下对病毒进行假型化：(1)野生型VSV-G(VSV-G)；(2)与抗CD19 scFv和FLAG标签融合的麻疹病毒F蛋白和受体盲化的H蛋白(MV-αCD19)；(3)与抗CD19 scFv和FLAG标签融合的尼帕病毒F蛋白和受体盲化G蛋白(NiV-αCD19)；或(4)带有FLAG标签但没有scFv的尼帕病毒F和受体盲化G蛋白(NiV-死)。这些病毒中的每一种都与CD19+Raji B细胞混合，随后暴露于针对FLAG标签的荧光标记的抗体。如图18A-18B所示，表达抗CD19 scFv的病毒(MV-αCD19和NiV-αCD19)与Raji B细胞结合。不表达抗CD19scFv的病毒(VSV-G和NiV-死)不与Raji B细胞结合。
实施例7.针对T细胞群体筛选逆转录病毒的文库
逆转录病毒的文库(107-1010种独特的逆转录病毒)包含突变的VSV-G包膜蛋白、包含MHC膜结合结构域的非病毒膜结合蛋白，可变IL-13细胞外靶向结构域和GFP报告子。
首先，使用PCR引物制备编码独特非病毒膜结合蛋白的核酸文库，所述独特非病毒膜结合蛋白包含MHC膜结合结构域和可变IL-13细胞外靶向结构域，所述引物在已知与IL-13相互作用的位置包括简并密码子并诱导IL-13细胞外靶向结构域中的随机诱变。所得核酸构建体通过标准分子克隆技术组装成带有荧光报告子的病毒转移质粒。这些质粒(“转移质粒”)连同辅助质粒和编码突变的VSV-G包膜蛋白(或等效假型)的包膜质粒被转染到逆转录病毒中以生成逆转录病毒文库。将病毒纯化并与表达目标IL-13受体的细胞群体(例如T细胞系、HEK293细胞系)混合。病毒与细胞群体在适当的温度(例如，37℃)下孵育适当的时间段(例如，1-48小时)。在标准细胞培养基中与溴化己二甲胺混合。24-48小时后，根据GFP报告子的表达对细胞进行分选。保留高表达细胞并根据需要重复分选过程。在通过分选进行这些轮的选择后，裂解保留的细胞，并分离细胞RNA和DNA用于使用下一代测序方法进行分析，以确定哪些IL-13变体能够介导病毒进入。
实施例8.产生靶向抗原特异性T细胞的另外的逆转录病毒使用实施例1中描述的方案生成了另外的靶向慢病毒。
如图19所示，混合(i)包含突变的VSV-G包膜蛋白的慢病毒和展示SL9肽的pMHC与(ii)表达868-TCR的T细胞表明，即使添加少量的病毒，病毒也能够转导和感染T细胞(在1μL病毒情况下约70％的转导)。相反，将这些病毒与脱靶Jurkat细胞混合导致转导水平低(多至添加10μL病毒不到5％)。类似的实验。
也如图19所示，混合(i)包含突变的VSV-G包膜蛋白的慢病毒和展示巨细胞病毒(CMV)NLV肽的pMHC与(ii)表达C7 TCR的T细胞证明病毒能够转导和感染T细胞(在10μL病毒情况下约25％的转导)。相反，将这些病毒与脱靶Jurkat细胞混合导致转导水平低(多至添加10μL病毒不到5％)。
实施例9.生成包含由二硫化物稳定的靶向的pMHC的逆转录病毒
使用实施方案1中描述的方案生成另外的靶向慢病毒。这些另外的慢病毒进一步包含位于pMHC内的二硫化物，以稳定pMHC的结构。
如图21所示，混合(i)包含突变的VSV-G包膜蛋白和展示靶向肽的二硫化物稳定的pMHC的慢病毒与(ii)表达同源受体的靶细胞证明被靶向的病毒能够转导和感染靶细胞。相反，这些靶向的病毒与脱靶细胞的混合不会导致转导或导致非常有限(0.1％)的转导。
具体而言，包含二硫化物稳定的CMV NLV pMHC的慢病毒以21.8％的转导率转导所靶向的表达表达C7 TCR的T细胞；包含二硫化物稳定的EBV-pMHC的慢病毒以4.8％的转导率转导所靶向的AS01细胞；包含二硫化物稳定的SL9 pMHC的慢病毒以22.1％的转导率转导所靶向的表达868-TCR的T细胞；和包含二硫化物稳定的NYESO-1pMHC的慢病毒以19.0％的转导率转导所靶向的表达IG4TCR的T细胞。
实施例10.靶向的病毒转导原代细胞
GL9特异性的原代T细胞系(由HLA-A2呈现)被具有突变的VSV-G包膜蛋白并展示GL9的病毒特异且有效地转导(图22A-22B)。大约50％的原代T细胞被这些GL9靶向病毒转导。相反，这些GL9靶向病毒仅转导0.3％的表达IG4 TCR的T细胞。表达IG4 TCR的T细胞被具有突变的VSV-G包膜蛋白并展示NYESO-1的病毒特异且有效地转导(55.9％转导)。此外，靶向的病毒比野生型VSV-G病毒更有效地感染原代细胞。这些结果表明，靶向的病毒甚至可以感染未受刺激的原代细胞。
类似地，NYESO特异性的原代T细胞系(由HLA-A2呈现)被具有突变VSV-G包膜蛋白并展示NYESO-1的病毒特异且有效地转导(图23-24)。相反，GL9靶向病毒不能有效地转导NYESO特异性的原代T细胞系。总的来说，这些数据表明，原代NYESO-1反应性细胞，包括扩增的原代细胞，可以被NYESO靶向的病毒特异性感染。
实施例11.生成包含CD80结构域的逆转录病毒
使用实施例1中描述的方案生成用突变的VSV-G包膜蛋白进行假型化且包含CD80细胞外结构域的病毒。相对于B细胞(0.0％转导)，该病毒能够特异且有效地感染Jurkat T细胞(25.5％转导)(图25)。
类似地，使用实施例1中描述的方案生成用突变的VSV-G包膜蛋白进行假型化且包含NYESO-1pMHC和CD80细胞外结构域的病毒。相对于B细胞(0.2％转导)，该病毒能够特异且有效地感染Jurkat T细胞(13.5％转导)(图25)。CD80结构域的存在使该病毒能够转导到Jurkat T细胞中，这一点可以通过用突变的VSV-G包膜蛋白进行假型化且仅包含NYESO-1pMHC的病毒不能感染这些Jurkat T细胞(0.9％转导)来证明。
总的来说，这些数据表明病毒表面上CD80的存在介导了T细胞的特异性感染，并证明CD80一般地可用于将病毒靶向T细胞。
实施例12.小鼠抗CD3抗体介导TCR转导的58-/-细胞感染
在病毒表面上展示对鼠TCR恒定区特异性的抗体(H57抗体)或对鼠CD3特异性的抗体(2C11抗体)使病毒能够感染小鼠T细胞系。包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白和抗TCR抗体的病毒提供对58α-β-小鼠T杂交瘤细胞的11.0％转导；并且包含突变的VSV-G病毒包膜蛋白和抗CD3抗体的病毒提供对58α-β-小鼠T杂交瘤细胞的12.8％转导。
实施例13.生成包含死可卡耳病毒G蛋白的病毒
用包含突变以降低其传染性的可卡耳病毒G蛋白(可卡耳-死；包含SEQ ID NO：53的氨基酸)对慢病毒进行假型化。这些在可卡耳病毒G蛋白的K64Q和R371A处的突变类似于在实施方案1中描述的VSV-死变体中使用的那些突变。可卡耳-死病毒进一步包含展示的抗CD19 scFv抗体。
这种可卡耳-死病毒能够转导CD19+Raji B细胞(8.6％转导)，如图27所示，以与包含VSV-死蛋白和展示的抗CD19 scFv抗体的慢病毒类似的方式。
这些数据表明，病毒靶向策略是高度稳健的，并且可以有效地使用任何可以突变以降低其传染性的病毒包膜蛋白(例如，突变的VSV-G、突变的尼帕包膜、突变的麻疹包膜、突变的可卡耳病毒包膜)。
其他实施方案
本说明书中公开的所有特征可以以任何组合进行组合。本说明书中公开的每个特征可以被用于相同、等效或类似目的的替代特征替换。因此，除非另有明确说明，所公开的每个特征仅是等效或相似特征的通用系列的示例。
由以上描述，本领域技术人员可以很容易地确定本发明的本质特征，并且在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种变化和修改以适应各种用途和条件。因此，其他实施方案也在权利要求内。
等价物
虽然本文已经描述和说明了几个发明实施方案，但本领域的普通技术人员将很容易设想用于如本文所述的执行功能和/或获得结果和/或一个或多个优点的各种其他手段和/或结构，并且这些变化和/或修改中的每一个被认为在本文描述的发明实施方案的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易理解，本文描述的所有参数、尺寸、材料和配置都是示例性的，并且实际参数、尺寸、材料，和/或配置将取决于使用本发明教导的特定应用。本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文所描述的特定发明实施方案的许多等效物。因此，应当理解，前述实施方案仅以示例的方式呈现，并且在所附权利要求书及其等效物的范围内，可以实施发明实施方案，而不是如具体描述和权利要求所述。本公开的发明实施方案针对本文所述的每个单独特征、***、物品、材料、试剂盒和/或方法。此外，如果这样的特征、***、物品、材料、试剂盒和/或方法没有相互不一致，则这两个或更多个这样的特征、***、物品、材料、试剂盒和/或方法的任何组合都包括在本发明的发明范围内。
如本文所定义和使用的所有定义应理解为优于字典定义、通过引用并入的文件中的定义和/或所定义术语的普通含义。
本文中公开的所有参考文献、专利和专利申请均通过引用的方式并入每一引用的主题中，在某些情况下，这些主题可能包含本文件的全部内容。
除非明确指出相反，否则本说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一个/种”和“一个/种”应理解为“至少一个/种”。
在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为表示如此结合的元件中的“一个或两者”，即在某些情况下结合存在而在其他情况下分离存在的元件。用“和/或”列出的多个元件应以相同方式解释，即“一个或多个”元件如此集合。除了由“和/或”子句具体标识的元件之外，可以可选地存在其他元件，无论与那些具体标识的元件相关或不相关。因此，作为非限制性示例，当与诸如“包括”之类的开放式语言结合使用时，对“A和/或B”的引用可以在一个实施方案中仅指A(可选地包括除B之外的元件)；在另一个实施方案中，仅指B(可选地包括除A之外的元件)；在又一个实施方案中，指A和B两者(可选地包括其他元件)；等。
如本文在说明书和权利要求书中所使用，“或”应理解为与上文定义的“和/或”具有相同的含义。例如，当分隔列表中的项目时，“或”或者“和/或”应解释为包含在内，即包括许多元件或元件列表的至少一个但也包括多于一个，以及可选地其他未列出的项目。只有明确指出相反的术语，例如“仅一个”或“恰好一个”，或当在权利要求中使用时，“由……组成”是指包括许多元件或元件列表中的恰好一个元件。一般而言，本文中使用的术语“或”仅应解释为在前面加上排他性术语(例如“两者之一”、“其中一个”、“仅一个”或“恰好一个”)时表示排他性备选方案(即“一个或另一个，但不是两者”)。当在权利要求中使用时，“基本上由……组成”，应具有专利法领域中使用的一般含义。
如本文在说明书和权利要求书中所使用的，关于一个或多个元件的列表，短语“至少一个”应理解为指从元件列表中的任何一个或多个元件中选择的至少一个元件，但不一定包括元件列表中具体列出的每个元件中的至少一个，也不排除元件列表中的任何元件组合。该定义还允许元件可以选择性地存在，而不是在短语“至少一个”所指的元件列表中明确标识的元件，无论这些元件与那些明确标识的元件相关还是不相关。因此，作为非限制性示例，“A和B中的至少一个”(或者，等效地，“A或B中的至少一个”，或者等效地“A和/或B中的至少一个”)可以在一个实施方案中指至少一个，可选地包括多于一个，A，而不存在B(并且可选地包括除B以外的元件)；在另一个实施方案中，至少一个，可选地包括多于一个，B，不存在A(并且可选地包括除A以外的元件)；在又一实施方案中，至少一个(可选地包括多于一个)，A和至少一个(可选地包括多于一个)，B(可选地包括其他元件)；等。
还应理解，除非明确指出相反的情况，否则在本文中要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，该方法的步骤或动作的顺序不一定限于叙述该方法的步骤或动作的顺序。
序列
>Kappa先导序列，氨基酸(SEQ ID NO:1):METDTLLLWVLLLWVPGSTG
>B2M信号肽序列，氨基酸(SEQ ID NO:2):MSRSVALAVLALLSLSGLEA
>PDGFR短柄，氨基酸(SEQ ID NO:3):AVGQDTQEVIVVPHSLPFK
>PDGFR长柄，氨基酸(SEQ ID NO:4):
ASAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEAARPAAGGAVHTRGLDFAK
>短柔性接头，氨基酸(SEQ ID NO:5):GAPGAS
>长柔性接头，氨基酸(SEQ ID NO:6):GAPGSGGGGSGGGGSAS
>短柔性接头，氨基酸(SEQ ID NO:7):GGGGS
>IgG4铰链结构域，氨基酸(SEQ ID NO:8):
ASESKYGPPCPPCPAVGQDTQEVIVVPHSLPFK
>四聚体卷曲螺旋，氨基酸(SEQ ID NO:9):
ASGGGGSGELAAIKQELAAIKKELAAIKWELAAIKQGAG
>二聚卷曲螺旋，氨基酸(SEQ ID NO:10):ASESKYGPPCPPCP
>野生型VSV-G包膜蛋白(具有前导序列),DNA序列(SEQ ID NO:11):
atgaagtgccttttgtacttagcctttttattcattggggtgaattgcaagttcaccatagtttttccacacaaccaaaaaggaaactggaaaaatgttccttctaattaccattattgcccgtcaagctcagatttaaattggcataatgacttaataggcacagccatacaagtcaaaatgcccaagagtcacaaggctattcaagcagacggttggatgtgtcatgcttccaaatgggtcactacttgtgatttccgctggtatggaccgaagtatataacacagtccatccgatccttcactccatctgtagaacaatgcaaggaaagcattgaacaaacgaaacaaggaacttggctgaatccaggcttccctcctcaaagttgtggatatgcaactgtgacggatgccgaagcagtgattgtccaggtgactcctcaccatgtgctggttgatgaatacacaggagaatgggttgattcacagttcatcaacggaaaatgcagcaattacatatgccccactgtccataactctacaacctggcattctgactataaggtcaaagggctatgtgattctaacctcatttccatggacatcaccttcttctcagaggacggagagctatcatccctgggaaaggagggcacagggttcagaagtaactactttgcttatgaaactggaggcaaggcctgcaaaatgcaatactgcaagcattggggagtcagactcccatcaggtgtctggttcgagatggctgataaggatctctttgctgcagccagattccctgaatgcccagaagggtcaagtatctctgctccatctcagacctcagtggatgtaagtctaattcaggacgttgagaggatcttggattattccctctgccaagaaacctggagcaaaatcagagcgggtcttccaatctctccagtggatctcagctatcttgctcctaaaaacccaggaaccggtcctgctttcaccataatcaatggtaccctaaaatactttgagaccagatacatcagagtcgatattgctgctccaatcctctcaagaatggtcggaatgatcagtggaactaccacagaaagggaactgtgggatgactgggcaccatatgaagacgtggaaattggacccaatggagttctgaggaccagttcaggatataagtttcctttatacatgattggacatggtatgttggactccgatcttcatcttagctcaaaggctcaggtgttcgaacatcctcacattcaagacgctgcttcgcaacttcctgatgatgagagtttattttttggtgatactgggctatccaaaaatccaatcgagcttgtagaaggttggttcagtagttggaaaagctctattgcctcttttttctttatcatagggttaatcattggactattcttggttctccgagttggtatccatctttgcattaaattaaagcacaccaagaaaagacagatttatacagacatagagatgaaccgacttggaaagtaa
>野生型VSV-G包膜蛋白(具有前导序列)，氨基酸序列(SEQ ID NO:12):
MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTAIQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITQSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK
>野生型VSV-G包膜蛋白，氨基酸序列(SEQ ID NO:13):
KFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTAIQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITQSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK
>VSV-G包膜蛋白(具有前导序列)，DNA序列(SEQ ID NO:14):
atgaagtgccttttgtacttagcctttttattcattggggtgaattgcaagttcaccatagtttttccacacaaccaaaaaggaaactggaaaaatgttccttctaattaccattattgcccgtcaagctcagatttaaattggcataatgacttaataggcacagccttacaagtcaaaatgccccagagtcacaaggctattcaagcagacggttggatgtgtcatgcttccaaatgggtcactacttgtgatttccgctggtatggaccgaagtatataacacagtccatccgatccttcactccatctgtagaacaatgcaaggaaagcattgaacaaacgaaacaaggaacttggctgaatccaggcttccctcctcaaagttgtggatatgcaactgtgacggatgccgaagcagtgattgtccaggtgactcctcaccatgtgctggttgatgaatacacaggagaatgggttgattcacagttcatcaacggaaaatgcagcaattacatatgccccactgtccataactctacaacctggcattctgactataaggtcaaagggctatgtgattctaacctcatttccatggacatcaccttcttctcagaggacggagagctatcatccctgggaaaggagggcacagggttcagaagtaactactttgcttatgaaactggaggcaaggcctgcaaaatgcaatactgcaagcattggggagtcagactcccatcaggtgtctggttcgagatggctgataaggatctctttgctgcagccagattccctgaatgcccagaagggtcaagtatctctgctccatctcagacctcagtggatgtaagtctaattcaggacgttgagaggatcttggattattccctctgccaagaaacctggagcaaaatcagagcgggtcttccaatctctccagtggatctcagctatcttgctcctaaaaacccaggaaccggtcctgctttcaccataatcaatggtaccctaaaatactttgagaccagatacatcagagtcgatattgctgctccaatcctctcaagaatggtcggaatgatcagtggaactaccacagaagccgaactgtgggatgactgggcaccatatgaagacgtggaaattggacccaatggagttctgaggaccagttcaggatataagtttcctttatacatgattggacatggtatgttggactccgatcttcatcttagctcaaaggctcaggtgttcgaacatcctcacattcaagacgctgcttcgcaacttcctgatgatgagagtttattttttggtgatactgggctatccaaaaatccaatcgagcttgtagaaggttggttcagtagttggaaaagctctattgcctcttttttctttatcatagggttaatcattggactattcttggttctccgagttggtatccatctttgcattaaattaaagcacaccaagaaaagacagatttatacagacatagagatgaaccgacttggaaagtaa
>VSV-G包膜蛋白(具有前导序列)，氨基酸序列(SEQ ID NO:15):
MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPQSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITQSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTEAELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK
>I41L/K47Q/R354A VSV-G包膜蛋白，氨基酸序列(SEQ ID NO:16):
KFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTALQVKMPQSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITQSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTEAELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK
>K47Q/R354A VSV-G包膜蛋白，氨基酸序列(SEQ ID NO:17):
KFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTAIQVKMPQSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITQSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTEAELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK
>示例性野生型麻疹包膜蛋白(具有前导序列)，DNA序列(SEQ ID NO:18):
ATGGGCAGCCGGATCGTGATCAACCGGGAGCACCTGATGATCGACCGGCCCTACGTGCTGCTGGCCGTGCTGTTCGTGATGTTCCTGAGCCTGATCGGCTTGCTAGCCATTGCTGGAATCCGGCTGCACAGAGCCGCCATCTACACCGCCGAGATCCACAAGAGCCTGAGCACCAACCTGGACGTGACCAACAGCATCGAGCATCAGGTCAAGGACGTGCTGACCCCCCTGTTTAAGATCATCGGCGACGAAGTGGGCCTGCGGACCCCCCAGAGATTCACCGACCTGGTCAAGTTCATCAGCGACAAGATCAAGTTCCTGAACCCCGACCGGGAGTACGACTTCCGGGACCTGACCTGGTGCATCAACCCCCCCGAGCGGATCAAGCTGGACTACGACCAGTACTGCGCCGATGTGGCCGCCGAGGAACTGATGAATGCATTGGTGAACTCAACTCTACTGGAGACCAGAACAACCAATCAGTTCCTAGCTGTCTCAAAGGGAAACTGCTCAGGGCCCACTACAATCAGAGGTCAATTCTCAAACATGTCGCTGTCCCTGTTAGACTTGTATTTAGGTCGAGGTTACAATGTGTCATCTATAGTCACTATGACATCCCAGGGAATGTATGGGGGAACTTACCTAGTGGAAAAGCCTAATCTGAGCAGCAAAAGGTCAGAGTTGTCACAACTGAGCATGTACCGAGTGTTTGAAGTAGGTGTTATCAGAAATCCGGGTTTGGGGGCTCCGGTGTTCCATATGACAAACTATCTTGAGCAACCAGTCAGTAATGATCTCAGCAACTGTATGGTGGCTTTGGGGGAGCTCAAACTCGCAGCCCTTTGTCACGGGGAAGATTCTATCACAATTCCCTATCAGGGATCAGGGAAAGGTGTCAGCTTCCAGCTCGTCAAGCTAGGTGTCTGGAAATCCCCAACCGACATGCAATCCTGGGTCCCCTTATCAACGGATGATCCAGTGATAGACAGGCTTTACCTCTCATCTCACAGAGGTGTTATCGCTGACAACCAAGCAAAATGGGCTGTCCCGACAACACGAACAGATGACAAGTTGCGAATGGAGACATGCTTCCAACAGGCGTGTAAGGGTAAAATCCAAGCACTCTGCGAGAATCCCGAGTGGGCACCATTGAAGGATAACAGGATTCCTTCATACGGGGTCTTGTCTGTTGATCTGAGTCTGACAGTTGAGCTTAAAATCAAAATTGCTTCGGGATTCGGGCCATTGATCACACACGGTTCAGGGATGGACCTATACAAATCCAACCACAACAATGTGTATTGGCTGACTATCCCGCCAATGAAGAACCTAGCCTTAGGTGTAATCAACACATTGGAGTGGATACCGAGATTCAAGGTTAGTCCCtatCTCTTCAcaGTCCCAATTAAGGAAGCAGGCGGAGACTGCCATGCCCCAACATACCTACCTGCGGAGGTGGATGGTGATGTCAAACTCAGTTCCAATCTGGTGATTCTACCTGGTCAAGATCTCCAATATGTTTTGGCAACCTACGATACTTCCcgGGTTGAACATGCTGTGGTTTATTACGTTTACAGCCCAAGCCGCTCATTTTCTTACTTTTATCCTTTTAGGTTGCCTATAAAGGGGGTCCCCATCGAATTACAAGTGGAATGCTTCACATGGGACCAAAAACTCTGGTGCCGTCACTTCTGTGTGCTTGCGGACTCAGAATCTGGTGGACATATCACTCACTCTGGGATGGTGGGCATGGGAGTCAGCTGCACAGTCACCCGGGAAGATGGAACCAATGACTACAAAGACGATGACGACAAGTGA
>示例性野生型麻疹包膜蛋白，氨基酸序列(SEQ ID NO:19):
MGSRIVINREHLMIDRPYVLLAVLFVMFLSLIGLLAIAGIRLHRAAIYTAEIHKSLSTNLDVTNSIEHQVKDVLTPLFKIIGDEVGLRTPQRFTDLVKFISDKIKFLNPDREYDFRDLTWCINPPERIKLDYDQYCADVAAEELMNALVNSTLLETRTTNQFLAVSKGNCSGPTTIRGQFSNMSLSLLDLYLGRGYNVSSIVTMTSQGMYGGTYLVEKPNLSSKRSELSQLSMYRVFEVGVIRNPGLGAPVFHMTNYLEQPVSNDLSNCMVALGELKLAALCHGEDSITIPYQGSGKGVSFQLVKLGVWKSPTDMQSWVPLSTDDPVIDRLYLSSHRGVIADNQAKWAVPTTRTDDKLRMETCFQQACKGKIQALCENPEWAPLKDNRIPSYGVLSVDLSLTVELKIKIASGFGPLITHGSGMDLYKSNHNNVYWLTIPPMKNLALGVINTLEWIPRFKVSPYLFTVPIKEAGGDCHAPTYLPAEVDGDVKLSSNLVILPGQDLQYVLATYDTSRVEHAVVYYVYSPSRSFSYFYPFRLPIKGVPIELQVECFTWDQKLWCRHFCVLADSESGGHITHSGMVGMGVSCTVTREDGTNDYKDDDDK
>示例性突变麻疹包膜蛋白，DNA序列(SEQ ID NO:20):
ATGGGCAGCCGGATCGTGATCAACCGGGAGCACCTGATGATCGACCGGCCCTACGTGCTGCTGGCCGTGCTGTTCGTGATGTTCCTGAGCCTGATCGGCTTGCTAGCCATTGCTGGAATCCGGCTGCACAGAGCCGCCATCTACACCGCCGAGATCCACAAGAGCCTGAGCACCAACCTGGACGTGACCAACAGCATCGAGCATCAGGTCAAGGACGTGCTGACCCCCCTGTTTAAGATCATCGGCGACGAAGTGGGCCTGCGGACCCCCCAGAGATTCACCGACCTGGTCAAGTTCATCAGCGACAAGATCAAGTTCCTGAACCCCGACCGGGAGTACGACTTCCGGGACCTGACCTGGTGCATCAACCCCCCCGAGCGGATCAAGCTGGACTACGACCAGTACTGCGCCGATGTGGCCGCCGAGGAACTGATGAATGCATTGGTGAACTCAACTCTACTGGAGACCAGAACAACCAATCAGTTCCTAGCTGTCTCAAAGGGAAACTGCTCAGGGCCCACTACAATCAGAGGTCAATTCTCAAACATGTCGCTGTCCCTGTTAGACTTGTATTTAGGTCGAGGTTACAATGTGTCATCTATAGTCACTATGACATCCCAGGGAATGTATGGGGGAACTTACCTAGTGGAAAAGCCTAATCTGAGCAGCAAAAGGTCAGAGTTGTCACAACTGAGCATGTACCGAGTGTTTGAAGTAGGTGTTATCAGAAATCCGGGTTTGGGGGCTCCGGTGTTCCATATGACAAACTATCTTGAGCAACCAGTCAGTAATGATCTCAGCAACTGTATGGTGGCTTTGGGGGAGCTCAAACTCGCAGCCCTTTGTCACGGGGAAGATTCTATCACAATTCCCTATCAGGGATCAGGGAAAGGTGTCAGCTTCCAGCTCGTCAAGCTAGGTGTCTGGAAATCCCCAACCGACATGCAATCCTGGGTCCCCTTATCAACGGATGATCCAGTGATAGACAGGCTTTACCTCTCATCTCACAGAGGTGTTATCGCTGACAACCAAGCAAAATGGGCTGTCCCGACAACACGAACAGATGACAAGTTGCGAATGGAGACATGCTTCCAACAGGCGTGTAAGGGTAAAATCCAAGCACTCTGCGAGAATCCCGAGTGGGCACCATTGAAGGATAACAGGATTCCTTCATACGGGGTCTTGTCTGTTGATCTGAGTCTGACAGTTGAGCTTAAAATCAAAATTGCTTCGGGATTCGGGCCATTGATCACACACGGTTCAGGGATGGACCTATACAAATCCAACCACAACAATGTGTATTGGCTGACTATCCCGCCAATGAAGAACCTAGCCTTAGGTGTAATCAACACATTGGAGTGGATACCGAGATTCAAGGTTAGTCCCGCGCTCTTCAATGTCCCAATTAAGGAAGCAGGCGGAGACTGCCATGCCCCAACATACCTACCTGCGGAGGTGGATGGTGATGTCAAACTCAGTTCCAATCTGGTGATTCTACCTGGTCAAGATCTCCAATATGTTTTGGCAACCTACGATACTTCCGCGGTTGAACATGCTGTGGTTTATTACGTTTACAGCCCAAGCCGCTCATTTTCTTACTTTTATCCTTTTAGGTTGCCTATAAAGGGGGTCCCCATCGAATTACAAGTGGAATGCTTCACATGGGACCAAAAACTCTGGTGCCGTCACTTCTGTGTGCTTGCGGACTCAGAATCTGGTGGACATATCACTCACTCTGGGATGGTGGGCATGGGAGTCAGCTGCACAGTCACCCGGGAAGATGGAACCAATGACTACAAAGACGATGACGACAAGTGA
>示例性突变麻疹包膜蛋白，氨基酸序列(SEQ ID NO:21):
MGSRIVINREHLMIDRPYVLLAVLFVMFLSLIGLLAIAGIRLHRAAIYTAEIHKSLSTNLDVTNSIEHQVKDVLTPLFKIIGDEVGLRTPQRFTDLVKFISDKIKFLNPDREYDFRDLTWCINPPERIKLDYDQYCADVAAEELMNALVNSTLLETRTTNQFLAVSKGNCSGPTTIRGQFSNMSLSLLDLYLGRGYNVSSIVTMTSQGMYGGTYLVEKPNLSSKRSELSQLSMYRVFEVGVIRNPGLGAPVFHMTNYLEQPVSNDLSNCMVALGELKLAALCHGEDSITIPYQGSGKGVSFQLVKLGVWKSPTDMQSWVPLSTDDPVIDRLYLSSHRGVIADNQAKWAVPTTRTDDKLRMETCFQQACKGKIQALCENPEWAPLKDNRIPSYGVLSVDLSLTVELKIKIASGFGPLITHGSGMDLYKSNHNNVYWLTIPPMKNLALGVINTLEWIPRFKVSPALFNVPIKEAGGDCHAPTYLPAEVDGDVKLSSNLVILPGQDLQYVLATYDTSAVEHAVVYYVYSPSRSFSYFYPFRLPIKGVPIELQVECFTWDQKLWCRHFCVLADSESGGHITHSGMVGMGVSCTVTREDGTNDYKDDDDK
>示例性突变尼帕包膜蛋白，DNA序列(SEQ ID NO:22):
ATGAAGAAGATCAACGAGGGCCTGCTGGACAGCAAGATCCTGAGCGCCTTCAACACCGTGATTGCCCTGCTGGGCTCTATCGTGATCATCGTGATGAACATCATGATCATCCAGAACTACACCCGGTCCACCGACAACCAGGCCGTGATTAAGGATGCTCTGCAGGGAATCCAGCAGCAGATCAAAGGCCTGGCCGACAAGATCGGCACAGAGATCGGCCCTAAGGTGTCCCTGATCGACACCAGCAGCACCATCACAATCCCCGCCAATATCGGACTGCTGGGAAGCAAGATCAGCCAGAGCACCGCCAGCATCAACGAGAACGTGAACGAGAAGTGCAAGTTCACCCTGCCTCCACTGAAGATCCACGAGTGCAACATCAGCTGCCCCAATCCTCTGCCATTCAGAGAGTACAGACCCCAGACAGAGGGCGTGTCCAATCTCGTGGGCCTGCCTAACAACATCTGCCTGCAGAAAACCAGCAACCAGATCCTGAAGCCTAAGCTGATCTCCTACACACTGCCCGTCGTGGGCCAGAGCGGCACCTGTATTACAGATCCTCTGCTGGCCATGGACGAGGGCTACTTTGCCTACAGCCACCTGGAAAGAATCGGCAGCTGTAGCCGGGGAGTGTCCAAGCAGAGAATCATCGGCGTGGGCGAAGTGCTGGATAGAGGCGACGAAGTGCCCAGCCTGTTCATGACCAATGTGTGGACCCCTCCTAATCCTAACACCGTGTACCACTGCAGCGCCGTGTACAACAACGAGTTCTACTACGTGCTGTGCGCCGTGTCCACAGTGGGCGACCCTATCCTGAACAGCACCTATTGGAGCGGCAGCCTGATGATGACCAGACTGGCCGTGAAGCCCAAGAGCAATGGCGGCGGATACAACCAGCATCAGCTGGCCCTGCGGTCCATCGAGAAGGGCAGATACGACAAAGTGATGCCTTACGGCCCCAGCGGCATCAAGCAAGGCGATACCCTGTACTTTCCCGCCGTGGGATTTCTCGTGCGGACCGAGTTCAAGTACAACGACAGCAACTGCCCCATCACCAAGTGCCAGTACAGCAAGCCCGAGAACTGCAGACTGAGCATGGGCATCAGACCCAACAGCCACTACATCCTGAGAAGCGGCCTGCTGAAGTACAACCTGAGCGACGGCGAGAACCCCAAGGTGGTGTTCATCGAGATCAGCGACCAGCGGCTGTCTATCGGCAGCCCCTCCAAGATCTACGACTCTCTGGGCCAGCCAGTGTTCTACCAGGCCAGCTTTAGCTGGGACACCATGATCAAGTTCGGCGACGTGCTGACCGTGAATCCCCTGGTGGTCAACTGGCGGAACAATACCGTGATCAGCCGGCCTGGCCAGTCTCAGTGCCCCAGATTCAATACCTGTCCTGCCATTTGCGCCGAAGGCGTGTACAATGACGCCTTCCTGATCGATCGGATCAACTGGATCTCTGCCGGCGTGTTCCTGGACTCTAATGCCACAGCCGCCAATCCTGTGTTCACCGTGTTCAAGGACAATGAGATCCTGTATCGGGCCCAGCTGGCCTCCGAGGACACAAATGCCCAGAAAACAATCACCAACTGCTTTCTGCTCAAGAACAAGATCTGGTGCATCAGCCTGGTGGAAATCTACGACACCGGCGACAACGTGATCAGGCCCAAGCTGTTCGCCGTGAAGATCCCTGAGCAGTGTACAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGCGGAGGCGGTGGATCTGCTAGCGATTACAAGGATGACGACGATAAGTGA
>示例性突变尼帕包膜蛋白，氨基酸序列(SEQ ID NO:23):
MKKINEGLLDSKILSAFNTVIALLGSIVIIVMNIMIIQNYTRSTDNQAVIKDALQGIQQQIKGLADKIGTEIGPKVSLIDTSSTITIPANIGLLGSKISQSTASINENVNEKCKFTLPPLKIHECNISCPNPLPFREYRPQTEGVSNLVGLPNNICLQKTSNQILKPKLISYTLPVVGQSGTCITDPLLAMDEGYFAYSHLERIGSCSRGVSKQRIIGVGEVLDRGDEVPSLFMTNVWTPPNPNTVYHCSAVYNNEFYYVLCAVSTVGDPILNSTYWSGSLMMTRLAVKPKSNGGGYNQHQLALRSIEKGRYDKVMPYGPSGIKQGDTLYFPAVGFLVRTEFKYNDSNCPITKCQYSKPENCRLSMGIRPNSHYILRSGLLKYNLSDGENPKVVFIEISDQRLSIGSPSKIYDSLGQPVFYQASFSWDTMIKFGDVLTVNPLVVNWRNNTVISRPGQSQCPRFNTCPAICAEGVYNDAFLIDRINWISAGVFLDSNATAANPVFTVFKDNEILYRAQLASEDTNAQKTITNCFLLKNKIWCISLVEIYDTGDNVIRPKLFAVKIPEQCTGGGGSGGGGSGGGGSASDYKDDDDK
>IG4 TCR(以32μM结合亲和力结合NYESO-1抗原的变体)，氨基酸序列(SEQ ID NO:24):
MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGYNVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSYVGNTGELFFGEGSRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMETLLGLLILWLQLQWVSSKQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQSSQREQTSGRLNASLDKSSGSSTLYIAASQPGDSATYLCAVRPTSGGSYIPTFGRGTSLIVHPYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSAAA
>IG4 TCR(以84nM结合亲和力结合NYESO-1抗原的变体)，氨基酸序列(SEQ ID NO:25):
MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAQTTDQGEVPNGYNVSRSTIEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSYLGNTGELFFGEGSRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMETLLGLLILWLQLQWVSSKQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQSSQREQTSGRLNASLDKSSGSSTLYIAASQPGDSATYLCAVRPMIGGTYIPTFGRGTSLIVHPYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSAAA
>IG4 TCR(以5nM结合亲和力结合NYESO-1抗原的变体)，氨基酸序列(SEQ ID NO:26):
MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAGTTDRGEVPNGYNVSRSTIEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSYVGDTGELFFGEGSRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMETLLGLLILWLQLQWVSSKQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQSSQREQTSGRLNASLDKSSGSSTLYIAASQPGDSATYLCAVRPLLDGTYIPTFGRGTSLIVHPYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSAAA
>IG4 TCR(以26pM结合亲和力结合NYESO-1抗原的变体)，氨基酸序列(SEQ ID NO:27):
MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVAIQTTDQGEVPNGYNVSRSTIEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSYLGNTGELFFGEGSRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMETLLGLLILWLQLQWVSSKQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLITPWQREQTSGRLNASLDKSSGSSTLYIAASQPGDSATYLCAVRPLLDGTYIPTFGRGTSLIVHPYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSAAA
>868TCR(β链-P2A-α链),氨基酸序列(SEQ ID NO:31):
MSIGLLCCAALSLLWAGPVNADAGVTQSPTHLIKTRGQQVTLRCSPKQGHDTVSWYQQALGQGPQFIFQYYEEEERQRGNFPDRFSGHQFPNYSSELNVNALLLGDSALYLCASSDTVSYEQYFGPGTRLTVTEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQDPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMETLLGLLILWLQLQWVSSKEVEQNSGPLSVPEGAIASLNCTYSDRGSQSFFWYRQYSGKSPELIMFIYSNGDKEDGRFTAQLNKASQYISLLIRDSKLSDSATYLCAVRTNSGYALNFGKGTSLLVTPHIQKPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS
>CMV C7 TCR，氨基酸序列(SEQ ID NO:33)：
MGTRLLFWVAFCLLGADHTGAGVSQSPSNKVTEKGKDVELRCDPISGHTALYWYRQRLGQGLEFLIYFQGNSAPDKSGLPSDRFSAERTGESVSTLTIQRTQQEDSAVYLCASSQTQLWETQYFGPGTRLLVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRGGSATNFSLLKQAGDVEENPGPMEKNPLAAPLLILWFHLDCVSSILNVEQSPQSLHVQEGDSTNFTCSFPSSNFYALHWYRWETAKSPEALFVMTLNGDEKKKGRISATLNTKEGYSYLYIKGSQPEDSATYLCAFITGNQFYFGTGTSLTVIPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSAAA
>SL9 pMHC(SL9肽部分加粗)，氨基酸序列(SEQ ID NO:35)：
MSRSVALAVLALLSLSGLEASLYNTVATLGGGASGGGGSGGGGSIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDMGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGAYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQPTIPIVGIIAGLVLFGAVITGAVVAAVMWRRKSS
>CMV pMHC(CMV NLV肽部分加粗)，氨基酸序列(SEQ ID NO:37)：
MSRSVALAVLALLSLSGLEANLVPMVATVGASGGSGGGSGGGGSIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDMGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGAYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQPTIPIVGIIAGLVLFGAVITGAVVAAVMWRRKSS
>二硫化物网(trap)MHC包含Y84C突变(加粗)和接头的位置2为C(加粗)；显示了HGH信号肽(下划线)和GL9肽(斜体)，氨基酸序列(SEQ ID NO:39)：
Figure BDA0003474685180000531
Figure BDA0003474685180000541
>GL9 pMHC(GL9肽部分加粗)，氨基酸序列(SEQ ID NO:41)：
MSRSVALAVLALLSLSGLEAGILGFVFTLGGGASGGGGSGGGGSIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDMGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGAYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQPTIPIVGIIAGLVLFGAVITGAVVAAVMWRRKSS
>CD80,氨基酸序列(SEQ ID NO:43)：
MGHTRRQGTSPSKCPYLNFFQLLVLAGLSHFCSGVIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDNLLPSWAITLISVNGIFVICCLTYCFAPRCRE
>CD86,氨基酸序列(SEQ ID NO:45)：
MDPQCTMGLSNILFVMAFLLSGAAPLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMGRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGVMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIPWITAVLPTVIICVMVFCLILWKWKKKKR
>小鼠抗TCRβ克隆H57-597 Fab抗体(轻链-P2A-重链，PDGFR跨膜结构域)，氨基酸序列：(SEQ ID NO：47)：
METDTLLLWVLLLWVPGSTGADYKDDDDKDIQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPGTKLEIKRADAKPTVSIFPPSSEQLGTGSATLVCFVNNFYPKDINVKWKVDGSEKRDGVLQSVTDQDSKDSTYSLSSTLSLTKADYERHNLYTCEVTHKTSTAAIVKTLNRNECGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMVPCTLLLLLAAALAPTQTRAEVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSSAKTTAPSVYPLAPACDSTTSTTNTVTLGCLVKGYFPEPVTVIWNSGALTSGVHTFPSVLHSGLYSLSSSVTVPSSTWPSQTVTCNVAHPASSTTVDLKIEAVGQDTQEVIVVPHSLPFKVVVISAILALVVLTIISLIILIMLWQKKPR
>小鼠抗CD3ζ克隆145-2C11 Fab抗体(轻链-P2A-重链，PDGFR跨膜结构域)，氨基酸序列(SEQ ID NO:49)：
METDTLLLWVLLLWVPGSTGADYKDDDDKYELIQPSSASVTVGETVKITCSGDQLPKNFAYWFQQKSDKNILLLIYMDNKRPSGIPERFSGSTSGTTATLTISGAQPEDEAAYYCLSSYGDNNDLVFGSGTQLTVLRGPKSSPKVTVFPPSPEELRTNKATLVCLVNDFYPGSATVTWKANGATINDGVKTTKPSKQGQNYMTSSYLSLTADQWKSHNRVSCQVTHEGETVEKSLSPAECLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMVPCTLLLLLAAALAPTQTRAEVYLVESGGDLVQPGSSLKVSCAASGFTFSDFWMYWVRQAPGKGLEWVGRIKNIPNNYATEYADSVRGRFTISRDDSRNSIYLQMNRLRVDDTAIYYCTRAGRFDHFDYWGQGTMVTVSSATTTAPSVYPLAPACDSTTSTTDTVTLGCLVKGYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPSVLHSGLYSLSSSVTVPSSTWPKQPITCNVAHPASSTKVDKKIEPRAVGQDTQEVIVVPHSLPFKVVVISAILALVVLTIISLIILIMLWQKKPR*
>可卡耳病毒糖蛋白，氨基酸序列：(SEQ ID NO：51)：MNFLLLTFIVLPLCSHAKFSIVFPQSQKGNWKNVPSSYHYCPSSSDQNWHNDLLGITMKVKMPKTHKAIQADGWMCHAAKWITTCDFRWYGPKYITHSIHSIQPTSEQCKESIKQTKQGTWMSPGFPPQNCGYATVTDSVAVVVQATPHHVLVDEYTGEWIDSQFPNGKCETEECETVHNSTVWYSDYKVTGLCDATLVDTEITFFSEDGKKESIGKPNTGYRSNYFAYEKGDKVCKMNYCKHAGVRLPSGVWFEFVDQDVYAAAKLPECPVGATISAPTQTSVDVSLILDVERILDYSLCQETWSKIRSKQPVSPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRIDIDNPIISKMVGKISGSQTERELWTEWFPYEGVEIGPNGILKTPTGYKFPLFMIGHGMLDSDLHKTSQAEVFEHPHLAEAPKQLPEEETLFFGDTGISKNPVELIEGWFSSWKSTVVTFFFAIGVFILLYVVARIVIAVRYRYQGSNNKRIYNDIEMSRFRK*
>可卡耳病毒糖蛋白,DNA序列:(SEQ ID NO:52)：
ATGAACTTTCTGCTGCTCACGTTTATCGTACTCCCGTTGTGCTCTCATGCGAAATTTTCAATAGTCTTTCCTCAGTCCCAGAAAGGGAATTGGAAAAATGTTCCCTCCAGTTACCACTATTGTCCCTCCTCCTCTGACCAAAACTGGCACAATGACTTGCTCGGGATTACAATGAAAGTAAAGATGCCGAAAACCCATAAAGCCATACAGGCGGATGGGTGGATGTGTCACGCTGCGAAGTGGATCACTACATGCGATTTCCGGTGGTATGGCCCTAAGTACATTACACACTCTATCCATAGCATACAGCCGACATCAGAGCAATGCAAAGAGAGTATTAAACAGACCAAACAAGGGACATGGATGAGCCCTGGCTTTCCACCTCAGAATTGTGGGTACGCGACCGTCACGGATAGTGTCGCTGTTGTGGTGCAGGCCACGCCACATCACGTACTCGTAGATGAATATACTGGTGAATGGATCGACTCCCAATTCCCGAATGGGAAATGTGAGACGGAAGAGTGCGAAACAGTGCATAACTCAACCGTTTGGTATTCCGATTACAAGGTTACTGGTCTTTGCGACGCCACCCTCGTGGATACCGAGATCACGTTTTTTAGTGAGGATGGCAAGAAAGAGTCAATAGGCAAACCTAATACTGGCTACCGGAGTAACTATTTCGCTTACGAGAAGGGTGACAAGGTATGTAAAATGAACTATTGCAAGCATGCGGGAGTGCGACTCCCCAGTGGGGTATGGTTCGAATTTGTTGACCAAGACGTATACGCCGCTGCGAAGTTGCCAGAATGCCCCGTAGGCGCGACCATTTCAGCACCTACCCAAACGTCCGTTGACGTCTCCTTGATACTGGATGTAGAGCGAATCCTGGACTACAGTCTCTGCCAGGAAACGTGGTCAAAAATAAGAAGTAAGCAGCCAGTTTCACCCGTGGATCTGTCTTATCTGGCGCCAAAAAACCCGGGCACGGGCCCTGCTTTTACCATAATTAACGGAACGCTTAAATACTTCGAAACCCGCTACATTAGAATCGATATAGACAATCCTATTATCAGCAAGATGGTAGGGAAGATATCTGGGTCTCAAACGGAGCGAGAATTGTGGACGGAGTGGTTCCCTTATGAGGGAGTGGAAATTGGGCCCAACGGGATCCTCAAGACCCCAACGGGTTACAAGTTCCCTCTGTTTATGATCGGCCATGGCATGTTGGACAGTGACTTGCACAAAACATCTCAGGCAGAGGTTTTCGAACATCCACATTTGGCGGAGGCGCCCAAGCAACTTCCAGAAGAAGAAACTCTCTTCTTTGGAGATACAGGCATTTCAAAAAATCCTGTAGAACTGATAGAAGGGTGGTTCTCTTCCTGGAAATCAACGGTTGTCACGTTTTTCTTTGCAATAGGCGTATTTATACTCCTGTACGTCGTAGCCCGCATTGTGATCGCAGTACGATACAGATACCAGGGCAGTAACAATAAACGCATATATAATGACATCGAAATGTCAAGGTTCCGAAAGtga
>可卡耳-死(用于消除天然趋向性的突变在蛋白质序列中加粗；这些是K64Q和R371A，从起始密码子开始计数)，氨基酸序列：(SEQ ID NO：53)：
MNFLLLTFIVLPLCSHAKFSIVFPQSQKGNWKNVPSSYHYCPSSSDQNWHNDLLGITMKVKMPQTHKAIQADGWMCHAAKWITTCDFRWYGPKYITHSIHSIQPTSEQCKESIKQTKQGTWMSPGFPPQNCGYATVTDSVAVVVQATPHHVLVDEYTGEWIDSQFPNGKCETEECETVHNSTVWYSDYKVTGLCDATLVDTEITFFSEDGKKESIGKPNTGYRSNYFAYEKGDKVCKMNYCKHAGVRLPSGVWFEFVDQDVYAAAKLPECPVGATISAPTQTSVDVSLILDVERILDYSLCQETWSKIRSKQPVSPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRIDIDNPIISKMVGKISGSQTEAELWTEWFPYEGVEIGPNGILKTPTGYKFPLFMIGHGMLDSDLHKTSQAEVFEHPHLAEAPKQLPEEETLFFGDTGISKNPVELIEGWFSSWKSTVVTFFFAIGVFILLYVVARIVIAVRYRYQGSNNKRIYNDIEMSRFRK
>可卡耳-死(消除天然趋向性的突变)，DNA序列：(SEQ ID NO：54)：
ATGAACTTTCTGCTGCTCACGTTTATCGTACTCCCGTTGTGCTCTCATGCGAAATTTTCAATAGTCTTTCCTCAGTCCCAGAAAGGGAATTGGAAAAATGTTCCCTCCAGTTACCACTATTGTCCCTCCTCCTCTGACCAAAACTGGCACAATGACTTGCTCGGGATTACAATGAAAGTAAAGATGCCGcagACCCATAAAGCCATACAGGCGGATGGGTGGATGTGTCACGCTGCGAAGTGGATCACTACATGCGATTTCCGGTGGTATGGCCCTAAGTACATTACACACTCTATCCATAGCATACAGCCGACATCAGAGCAATGCAAAGAGAGTATTAAACAGACCAAACAAGGGACATGGATGAGCCCTGGCTTTCCACCTCAGAATTGTGGGTACGCGACCGTCACGGATAGTGTCGCTGTTGTGGTGCAGGCCACGCCACATCACGTACTCGTAGATGAATATACTGGTGAATGGATCGACTCCCAATTCCCGAATGGGAAATGTGAGACGGAAGAGTGCGAAACAGTGCATAACTCAACCGTTTGGTATTCCGATTACAAGGTTACTGGTCTTTGCGACGCCACCCTCGTGGATACCGAGATCACGTTTTTTAGTGAGGATGGCAAGAAAGAGTCAATAGGCAAACCTAATACTGGCTACCGGAGTAACTATTTCGCTTACGAGAAGGGTGACAAGGTATGTAAAATGAACTATTGCAAGCATGCGGGAGTGCGACTCCCCAGTGGGGTATGGTTCGAATTTGTTGACCAAGACGTATACGCCGCTGCGAAGTTGCCAGAATGCCCCGTAGGCGCGACCATTTCAGCACCTACCCAAACGTCCGTTGACGTCTCCTTGATACTGGATGTAGAGCGAATCCTGGACTACAGTCTCTGCCAGGAAACGTGGTCAAAAATAAGAAGTAAGCAGCCAGTTTCACCCGTGGATCTGTCTTATCTGGCGCCAAAAAACCCGGGCACGGGCCCTGCTTTTACCATAATTAACGGAACGCTTAAATACTTCGAAACCCGCTACATTAGAATCGATATAGACAATCCTATTATCAGCAAGATGGTAGGGAAGATATCTGGGTCTCAAACGGAGgccGAATTGTGGACGGAGTGGTTCCCTTATGAGGGAGTGGAAATTGGGCCCAACGGGATCCTCAAGACCCCAACGGGTTACAAGTTCCCTCTGTTTATGATCGGCCATGGCATGTTGGACAGTGACTTGCACAAAACATCTCAGGCAGAGGTTTTCGAACATCCACATTTGGCGGAGGCGCCCAAGCAACTTCCAGAAGAAGAAACTCTCTTCTTTGGAGATACAGGCATTTCAAAAAATCCTGTAGAACTGATAGAAGGGTGGTTCTCTTCCTGGAAATCAACGGTTGTCACGTTTTTCTTTGCAATAGGCGTATTTATACTCCTGTACGTCGTAGCCCGCATTGTGATCGCAGTACGATACAGATACCAGGGCAGTAACAATAAACGCATATATAATGACATCGAAATGTCAAGGTTCCGAAAGtga。
序列表
<110> Massachusetts Institute of Technology
<120> 经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送
<130> M0656.70463WO00
<140> Not Yet Assigned
<141> Concurrently Herewith
<150> US 62/851,889
<151> 2019-05-23
<160> 54
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 2
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala
20
<210> 3
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 3
Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
1 5 10 15
Pro Phe Lys
<210> 4
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 4
Ala Ser Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro
1 5 10 15
Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Ala
20 25 30
Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala
35 40 45
Lys
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 5
Gly Ala Pro Gly Ala Ser
1 5
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 6
Gly Ala Pro Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ser
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 7
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 8
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 8
Ala Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Val
1 5 10 15
Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe
20 25 30
Lys
<210> 9
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 9
Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Glu Leu Ala Ala Ile Lys Gln Glu
1 5 10 15
Leu Ala Ala Ile Lys Lys Glu Leu Ala Ala Ile Lys Trp Glu Leu Ala
20 25 30
Ala Ile Lys Gln Gly Ala Gly
35
<210> 10
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 10
Ala Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 11
<211> 1536
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 11
atgaagtgcc ttttgtactt agccttttta ttcattgggg tgaattgcaa gttcaccata 60
gtttttccac acaaccaaaa aggaaactgg aaaaatgttc cttctaatta ccattattgc 120
ccgtcaagct cagatttaaa ttggcataat gacttaatag gcacagccat acaagtcaaa 180
atgcccaaga gtcacaaggc tattcaagca gacggttgga tgtgtcatgc ttccaaatgg 240
gtcactactt gtgatttccg ctggtatgga ccgaagtata taacacagtc catccgatcc 300
ttcactccat ctgtagaaca atgcaaggaa agcattgaac aaacgaaaca aggaacttgg 360
ctgaatccag gcttccctcc tcaaagttgt ggatatgcaa ctgtgacgga tgccgaagca 420
gtgattgtcc aggtgactcc tcaccatgtg ctggttgatg aatacacagg agaatgggtt 480
gattcacagt tcatcaacgg aaaatgcagc aattacatat gccccactgt ccataactct 540
acaacctggc attctgacta taaggtcaaa gggctatgtg attctaacct catttccatg 600
gacatcacct tcttctcaga ggacggagag ctatcatccc tgggaaagga gggcacaggg 660
ttcagaagta actactttgc ttatgaaact ggaggcaagg cctgcaaaat gcaatactgc 720
aagcattggg gagtcagact cccatcaggt gtctggttcg agatggctga taaggatctc 780
tttgctgcag ccagattccc tgaatgccca gaagggtcaa gtatctctgc tccatctcag 840
acctcagtgg atgtaagtct aattcaggac gttgagagga tcttggatta ttccctctgc 900
caagaaacct ggagcaaaat cagagcgggt cttccaatct ctccagtgga tctcagctat 960
cttgctccta aaaacccagg aaccggtcct gctttcacca taatcaatgg taccctaaaa 1020
tactttgaga ccagatacat cagagtcgat attgctgctc caatcctctc aagaatggtc 1080
ggaatgatca gtggaactac cacagaaagg gaactgtggg atgactgggc accatatgaa 1140
gacgtggaaa ttggacccaa tggagttctg aggaccagtt caggatataa gtttccttta 1200
tacatgattg gacatggtat gttggactcc gatcttcatc ttagctcaaa ggctcaggtg 1260
ttcgaacatc ctcacattca agacgctgct tcgcaacttc ctgatgatga gagtttattt 1320
tttggtgata ctgggctatc caaaaatcca atcgagcttg tagaaggttg gttcagtagt 1380
tggaaaagct ctattgcctc ttttttcttt atcatagggt taatcattgg actattcttg 1440
gttctccgag ttggtatcca tctttgcatt aaattaaagc acaccaagaa aagacagatt 1500
tatacagaca tagagatgaa ccgacttgga aagtaa 1536
<210> 12
<211> 511
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 12
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Gly Leu
180 185 190
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
195 200 205
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
210 215 220
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
225 230 235 240
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
245 250 255
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
260 265 270
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
275 280 285
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
290 295 300
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
325 330 335
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
340 345 350
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
355 360 365
Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
370 375 380
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
385 390 395 400
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
405 410 415
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
435 440 445
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
450 455 460
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
465 470 475 480
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
485 490 495
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
500 505 510
<210> 13
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 13
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
1 5 10 15
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
20 25 30
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
35 40 45
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
50 55 60
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
65 70 75 80
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
85 90 95
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
100 105 110
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
115 120 125
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
130 135 140
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
145 150 155 160
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Gly Leu
165 170 175
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
180 185 190
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
195 200 205
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
210 215 220
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
225 230 235 240
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
245 250 255
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
260 265 270
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
275 280 285
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
290 295 300
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
305 310 315 320
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
325 330 335
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
340 345 350
Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
355 360 365
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
370 375 380
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
385 390 395 400
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
405 410 415
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
420 425 430
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
435 440 445
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
450 455 460
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
465 470 475 480
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
485 490 495
<210> 14
<211> 1536
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 14
atgaagtgcc ttttgtactt agccttttta ttcattgggg tgaattgcaa gttcaccata 60
gtttttccac acaaccaaaa aggaaactgg aaaaatgttc cttctaatta ccattattgc 120
ccgtcaagct cagatttaaa ttggcataat gacttaatag gcacagcctt acaagtcaaa 180
atgccccaga gtcacaaggc tattcaagca gacggttgga tgtgtcatgc ttccaaatgg 240
gtcactactt gtgatttccg ctggtatgga ccgaagtata taacacagtc catccgatcc 300
ttcactccat ctgtagaaca atgcaaggaa agcattgaac aaacgaaaca aggaacttgg 360
ctgaatccag gcttccctcc tcaaagttgt ggatatgcaa ctgtgacgga tgccgaagca 420
gtgattgtcc aggtgactcc tcaccatgtg ctggttgatg aatacacagg agaatgggtt 480
gattcacagt tcatcaacgg aaaatgcagc aattacatat gccccactgt ccataactct 540
acaacctggc attctgacta taaggtcaaa gggctatgtg attctaacct catttccatg 600
gacatcacct tcttctcaga ggacggagag ctatcatccc tgggaaagga gggcacaggg 660
ttcagaagta actactttgc ttatgaaact ggaggcaagg cctgcaaaat gcaatactgc 720
aagcattggg gagtcagact cccatcaggt gtctggttcg agatggctga taaggatctc 780
tttgctgcag ccagattccc tgaatgccca gaagggtcaa gtatctctgc tccatctcag 840
acctcagtgg atgtaagtct aattcaggac gttgagagga tcttggatta ttccctctgc 900
caagaaacct ggagcaaaat cagagcgggt cttccaatct ctccagtgga tctcagctat 960
cttgctccta aaaacccagg aaccggtcct gctttcacca taatcaatgg taccctaaaa 1020
tactttgaga ccagatacat cagagtcgat attgctgctc caatcctctc aagaatggtc 1080
ggaatgatca gtggaactac cacagaagcc gaactgtggg atgactgggc accatatgaa 1140
gacgtggaaa ttggacccaa tggagttctg aggaccagtt caggatataa gtttccttta 1200
tacatgattg gacatggtat gttggactcc gatcttcatc ttagctcaaa ggctcaggtg 1260
ttcgaacatc ctcacattca agacgctgct tcgcaacttc ctgatgatga gagtttattt 1320
tttggtgata ctgggctatc caaaaatcca atcgagcttg tagaaggttg gttcagtagt 1380
tggaaaagct ctattgcctc ttttttcttt atcatagggt taatcattgg actattcttg 1440
gttctccgag ttggtatcca tctttgcatt aaattaaagc acaccaagaa aagacagatt 1500
tatacagaca tagagatgaa ccgacttgga aagtaa 1536
<210> 15
<211> 511
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 15
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Leu Gln Val Lys Met Pro Gln Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Gly Leu
180 185 190
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
195 200 205
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
210 215 220
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
225 230 235 240
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
245 250 255
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
260 265 270
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
275 280 285
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
290 295 300
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
325 330 335
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
340 345 350
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
355 360 365
Glu Ala Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
370 375 380
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
385 390 395 400
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
405 410 415
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
435 440 445
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
450 455 460
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
465 470 475 480
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
485 490 495
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
500 505 510
<210> 16
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 16
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
1 5 10 15
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
20 25 30
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Leu Gln Val Lys Met Pro Gln Ser
35 40 45
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
50 55 60
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
65 70 75 80
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
85 90 95
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
100 105 110
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
115 120 125
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
130 135 140
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
145 150 155 160
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Gly Leu
165 170 175
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
180 185 190
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
195 200 205
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
210 215 220
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
225 230 235 240
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
245 250 255
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
260 265 270
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
275 280 285
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
290 295 300
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
305 310 315 320
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
325 330 335
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
340 345 350
Glu Ala Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
355 360 365
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
370 375 380
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
385 390 395 400
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
405 410 415
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
420 425 430
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
435 440 445
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
450 455 460
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
465 470 475 480
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
485 490 495
<210> 17
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 17
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
1 5 10 15
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
20 25 30
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Gln Ser
35 40 45
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
50 55 60
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
65 70 75 80
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
85 90 95
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
100 105 110
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
115 120 125
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
130 135 140
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
145 150 155 160
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Gly Leu
165 170 175
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
180 185 190
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
195 200 205
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
210 215 220
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
225 230 235 240
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
245 250 255
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
260 265 270
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
275 280 285
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
290 295 300
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
305 310 315 320
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
325 330 335
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
340 345 350
Glu Ala Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
355 360 365
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
370 375 380
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
385 390 395 400
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
405 410 415
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
420 425 430
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
435 440 445
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
450 455 460
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
465 470 475 480
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
485 490 495
<210> 18
<211> 1818
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 18
Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ala Thr Cys Gly
1 5 10 15
Thr Gly Ala Thr Cys Ala Ala Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly Cys Ala
20 25 30
Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Cys Gly Ala Cys Cys Gly Gly
35 40 45
Cys Cys Cys Thr Ala Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly
50 55 60
Cys Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Thr Thr Cys Gly Thr Gly Ala Thr
65 70 75 80
Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys
85 90 95
Gly Gly Cys Thr Thr Gly Cys Thr Ala Gly Cys Cys Ala Thr Thr Gly
100 105 110
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly Cys Thr Gly Cys Ala
115 120 125
Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys
130 135 140
Ala Cys Cys Gly Cys Cys Gly Ala Gly Ala Thr Cys Cys Ala Cys Ala
145 150 155 160
Ala Gly Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala
165 170 175
Cys Cys Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Cys
180 185 190
Ala Gly Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Cys Ala Thr Cys Ala Gly Gly
195 200 205
Thr Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Cys Cys Cys Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Ala Ala Gly Ala Thr Cys
225 230 235 240
Ala Thr Cys Gly Gly Cys Gly Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr Gly Gly
245 250 255
Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala
260 265 270
Gly Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Gly Ala Cys Cys Thr Gly
275 280 285
Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly
290 295 300
Ala Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Cys Thr
305 310 315 320
Gly Ala Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly
325 330 335
Thr Ala Cys Gly Ala Cys Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Ala Cys Cys
340 345 350
Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala
355 360 365
Cys Cys Cys Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Cys Gly Gly Ala Thr Cys
370 375 380
Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Cys Cys
385 390 395 400
Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly Cys Gly Cys Cys Gly Ala Thr Gly Thr
405 410 415
Gly Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly
420 425 430
Ala Thr Gly Ala Ala Thr Gly Cys Ala Thr Thr Gly Gly Thr Gly Ala
435 440 445
Ala Cys Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Ala
450 455 460
Gly Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Ala Thr
465 470 475 480
Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Thr Ala Gly Cys Thr Gly Thr Cys Thr
485 490 495
Cys Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Cys
500 505 510
Ala Gly Gly Gly Cys Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Thr Cys
515 520 525
Ala Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Ala Thr Thr Cys Thr Cys Ala Ala
530 535 540
Ala Cys Ala Thr Gly Thr Cys Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Cys Thr
545 550 555 560
Gly Thr Thr Ala Gly Ala Cys Thr Thr Gly Thr Ala Thr Thr Thr Ala
565 570 575
Gly Gly Thr Cys Gly Ala Gly Gly Thr Thr Ala Cys Ala Ala Thr Gly
580 585 590
Thr Gly Thr Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr Ala Gly Thr Cys Ala Cys
595 600 605
Thr Ala Thr Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala
610 615 620
Ala Thr Gly Thr Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Cys Thr Thr
625 630 635 640
Ala Cys Cys Thr Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Cys
645 650 655
Thr Ala Ala Thr Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala
660 665 670
Ala Gly Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly Thr Thr Gly Thr Cys Ala Cys
675 680 685
Ala Ala Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Thr Gly Thr Ala Cys Cys Gly
690 695 700
Ala Gly Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Ala Gly Thr Ala Gly Gly Thr
705 710 715 720
Gly Thr Thr Ala Thr Cys Ala Gly Ala Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly
725 730 735
Gly Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr
740 745 750
Gly Thr Thr Cys Cys Ala Thr Ala Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala Cys
755 760 765
Thr Ala Thr Cys Thr Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Gly
770 775 780
Thr Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys Ala Gly
785 790 795 800
Cys Ala Ala Cys Thr Gly Thr Ala Thr Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr
805 810 815
Thr Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Cys Ala Ala Ala Cys
820 825 830
Thr Cys Gly Cys Ala Gly Cys Cys Cys Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala
835 840 845
Cys Gly Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Cys Thr Ala Thr Cys
850 855 860
Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys Cys Cys Thr Ala Thr Cys Ala Gly Gly
865 870 875 880
Gly Ala Thr Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Thr Gly Thr
885 890 895
Cys Ala Gly Cys Thr Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Cys Gly Thr Cys
900 905 910
Ala Ala Gly Cys Thr Ala Gly Gly Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala
915 920 925
Ala Ala Thr Cys Cys Cys Cys Ala Ala Cys Cys Gly Ala Cys Ala Thr
930 935 940
Gly Cys Ala Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Cys
945 950 955 960
Thr Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys Gly Gly Ala Thr Gly Ala Thr Cys
965 970 975
Cys Ala Gly Thr Gly Ala Thr Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Cys Thr
980 985 990
Thr Thr Ala Cys Cys Thr Cys Thr Cys Ala Thr Cys Thr Cys Ala Cys
995 1000 1005
Ala Gly Ala Gly Gly Thr Gly Thr Thr Ala Thr Cys Gly Cys Thr
1010 1015 1020
Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Ala Ala Ala Ala
1025 1030 1035
Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Cys Gly Ala Cys Ala
1040 1045 1050
Ala Cys Ala Cys Gly Ala Ala Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Cys
1055 1060 1065
Ala Ala Gly Thr Thr Gly Cys Gly Ala Ala Thr Gly Gly Ala Gly
1070 1075 1080
Ala Cys Ala Thr Gly Cys Thr Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Gly
1085 1090 1095
Gly Cys Gly Thr Gly Thr Ala Ala Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala
1100 1105 1110
Ala Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Cys
1115 1120 1125
Gly Ala Gly Ala Ala Thr Cys Cys Cys Gly Ala Gly Thr Gly Gly
1130 1135 1140
Gly Cys Ala Cys Cys Ala Thr Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Thr
1145 1150 1155
Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Thr Thr Cys Cys Thr Thr Cys Ala
1160 1165 1170
Thr Ala Cys Gly Gly Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr
1175 1180 1185
Gly Thr Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly
1190 1195 1200
Ala Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Gly Cys Thr Thr Ala Ala Ala
1205 1210 1215
Ala Thr Cys Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Cys Thr Thr Cys Gly
1220 1225 1230
Gly Gly Ala Thr Thr Cys Gly Gly Gly Cys Cys Ala Thr Thr Gly
1235 1240 1245
Ala Thr Cys Ala Cys Ala Cys Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Ala
1250 1255 1260
Gly Gly Gly Ala Thr Gly Gly Ala Cys Cys Thr Ala Thr Ala Cys
1265 1270 1275
Ala Ala Ala Thr Cys Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala Cys
1280 1285 1290
Ala Ala Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Gly Cys Thr Gly
1295 1300 1305
Ala Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Ala Thr Gly
1310 1315 1320
Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Thr Ala Gly Cys Cys Thr Thr Ala
1325 1330 1335
Gly Gly Thr Gly Thr Ala Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Cys Ala
1340 1345 1350
Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ala Cys Cys Gly
1355 1360 1365
Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Ala Gly Thr
1370 1375 1380
Cys Cys Cys Thr Ala Thr Cys Thr Cys Thr Thr Cys Ala Cys Ala
1385 1390 1395
Gly Thr Cys Cys Cys Ala Ala Thr Thr Ala Ala Gly Gly Ala Ala
1400 1405 1410
Gly Cys Ala Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Ala Cys Thr Gly Cys
1415 1420 1425
Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Cys Ala Ala Cys Ala Thr Ala Cys
1430 1435 1440
Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly
1445 1450 1455
Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala Thr Gly Thr Cys Ala Ala Ala
1460 1465 1470
Cys Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Thr Gly
1475 1480 1485
Gly Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr
1490 1495 1500
Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Thr Ala Thr
1505 1510 1515
Gly Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Ala Ala Cys Cys Thr Ala Cys
1520 1525 1530
Gly Ala Thr Ala Cys Thr Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Thr Thr
1535 1540 1545
Gly Ala Ala Cys Ala Thr Gly Cys Thr Gly Thr Gly Gly Thr Thr
1550 1555 1560
Thr Ala Thr Thr Ala Cys Gly Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Cys
1565 1570 1575
Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Cys Thr Cys Ala Thr Thr Thr
1580 1585 1590
Thr Cys Thr Thr Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala Thr Cys Cys Thr
1595 1600 1605
Thr Thr Thr Ala Gly Gly Thr Thr Gly Cys Cys Thr Ala Thr Ala
1610 1615 1620
Ala Ala Gly Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys
1625 1630 1635
Gly Ala Ala Thr Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala
1640 1645 1650
Thr Gly Cys Thr Thr Cys Ala Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ala Cys
1655 1660 1665
Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys
1670 1675 1680
Cys Gly Thr Cys Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly Thr Gly
1685 1690 1695
Cys Thr Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala
1700 1705 1710
Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr Ala Thr Cys
1715 1720 1725
Ala Cys Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Thr Gly
1730 1735 1740
Gly Thr Gly Gly Gly Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ala Gly Thr Cys
1745 1750 1755
Ala Gly Cys Thr Gly Cys Ala Cys Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys
1760 1765 1770
Cys Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys
1775 1780 1785
Ala Ala Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys
1790 1795 1800
Gly Ala Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Ala
1805 1810 1815
<210> 19
<211> 605
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 19
Met Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile Asp Arg
1 5 10 15
Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser Leu Ile
20 25 30
Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala Ile Tyr
35 40 45
Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val Thr Asn
50 55 60
Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe Lys Ile
65 70 75 80
Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr Asp Leu
85 90 95
Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu Arg Ile
115 120 125
Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu Glu Leu
130 135 140
Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr Thr Asn
145 150 155 160
Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr Thr Ile
165 170 175
Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Leu
180 185 190
Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser Gln Gly
195 200 205
Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser Ser Lys
210 215 220
Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu Val Gly
225 230 235 240
Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met Thr Asn
245 250 255
Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met Val Ala
260 265 270
Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp Ser Ile
275 280 285
Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln Leu Val
290 295 300
Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp Val Pro
305 310 315 320
Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser Ser His
325 330 335
Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro Thr Thr
340 345 350
Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln Ala Cys
355 360 365
Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala Pro Leu
370 375 380
Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp Leu Ser
385 390 395 400
Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly Pro Leu
405 410 415
Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His Asn Asn
420 425 430
Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu Gly Val
435 440 445
Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro Tyr Leu
450 455 460
Phe Thr Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala Pro Thr
465 470 475 480
Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser Asn Leu
485 490 495
Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr Tyr Asp
500 505 510
Thr Ser Arg Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser Pro Ser
515 520 525
Arg Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys Gly Val
530 535 540
Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys Leu Trp
545 550 555 560
Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly His Ile
565 570 575
Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val Thr Arg
580 585 590
Glu Asp Gly Thr Asn Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
595 600 605
<210> 20
<211> 1818
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 20
Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ala Thr Cys Gly
1 5 10 15
Thr Gly Ala Thr Cys Ala Ala Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly Cys Ala
20 25 30
Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr Cys Gly Ala Cys Cys Gly Gly
35 40 45
Cys Cys Cys Thr Ala Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly
50 55 60
Cys Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Thr Thr Cys Gly Thr Gly Ala Thr
65 70 75 80
Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys
85 90 95
Gly Gly Cys Thr Thr Gly Cys Thr Ala Gly Cys Cys Ala Thr Thr Gly
100 105 110
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly Cys Thr Gly Cys Ala
115 120 125
Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys
130 135 140
Ala Cys Cys Gly Cys Cys Gly Ala Gly Ala Thr Cys Cys Ala Cys Ala
145 150 155 160
Ala Gly Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala
165 170 175
Cys Cys Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Cys
180 185 190
Ala Gly Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Cys Ala Thr Cys Ala Gly Gly
195 200 205
Thr Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Cys Cys Cys Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Ala Ala Gly Ala Thr Cys
225 230 235 240
Ala Thr Cys Gly Gly Cys Gly Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr Gly Gly
245 250 255
Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala
260 265 270
Gly Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Gly Ala Cys Cys Thr Gly
275 280 285
Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly
290 295 300
Ala Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Cys Thr
305 310 315 320
Gly Ala Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly
325 330 335
Thr Ala Cys Gly Ala Cys Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Ala Cys Cys
340 345 350
Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala
355 360 365
Cys Cys Cys Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Cys Gly Gly Ala Thr Cys
370 375 380
Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Cys Cys
385 390 395 400
Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly Cys Gly Cys Cys Gly Ala Thr Gly Thr
405 410 415
Gly Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly
420 425 430
Ala Thr Gly Ala Ala Thr Gly Cys Ala Thr Thr Gly Gly Thr Gly Ala
435 440 445
Ala Cys Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly Ala
450 455 460
Gly Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Ala Thr
465 470 475 480
Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Thr Ala Gly Cys Thr Gly Thr Cys Thr
485 490 495
Cys Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Cys
500 505 510
Ala Gly Gly Gly Cys Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Thr Cys
515 520 525
Ala Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Ala Thr Thr Cys Thr Cys Ala Ala
530 535 540
Ala Cys Ala Thr Gly Thr Cys Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Cys Thr
545 550 555 560
Gly Thr Thr Ala Gly Ala Cys Thr Thr Gly Thr Ala Thr Thr Thr Ala
565 570 575
Gly Gly Thr Cys Gly Ala Gly Gly Thr Thr Ala Cys Ala Ala Thr Gly
580 585 590
Thr Gly Thr Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr Ala Gly Thr Cys Ala Cys
595 600 605
Thr Ala Thr Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala
610 615 620
Ala Thr Gly Thr Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Cys Thr Thr
625 630 635 640
Ala Cys Cys Thr Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Cys
645 650 655
Thr Ala Ala Thr Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala
660 665 670
Ala Gly Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly Thr Thr Gly Thr Cys Ala Cys
675 680 685
Ala Ala Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Thr Gly Thr Ala Cys Cys Gly
690 695 700
Ala Gly Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Ala Gly Thr Ala Gly Gly Thr
705 710 715 720
Gly Thr Thr Ala Thr Cys Ala Gly Ala Ala Ala Thr Cys Cys Gly Gly
725 730 735
Gly Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr
740 745 750
Gly Thr Thr Cys Cys Ala Thr Ala Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala Cys
755 760 765
Thr Ala Thr Cys Thr Thr Gly Ala Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Gly
770 775 780
Thr Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys Ala Gly
785 790 795 800
Cys Ala Ala Cys Thr Gly Thr Ala Thr Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr
805 810 815
Thr Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Cys Ala Ala Ala Cys
820 825 830
Thr Cys Gly Cys Ala Gly Cys Cys Cys Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala
835 840 845
Cys Gly Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Cys Thr Ala Thr Cys
850 855 860
Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys Cys Cys Thr Ala Thr Cys Ala Gly Gly
865 870 875 880
Gly Ala Thr Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly Thr Gly Thr
885 890 895
Cys Ala Gly Cys Thr Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Cys Gly Thr Cys
900 905 910
Ala Ala Gly Cys Thr Ala Gly Gly Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala
915 920 925
Ala Ala Thr Cys Cys Cys Cys Ala Ala Cys Cys Gly Ala Cys Ala Thr
930 935 940
Gly Cys Ala Ala Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Cys
945 950 955 960
Thr Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys Gly Gly Ala Thr Gly Ala Thr Cys
965 970 975
Cys Ala Gly Thr Gly Ala Thr Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Cys Thr
980 985 990
Thr Thr Ala Cys Cys Thr Cys Thr Cys Ala Thr Cys Thr Cys Ala Cys
995 1000 1005
Ala Gly Ala Gly Gly Thr Gly Thr Thr Ala Thr Cys Gly Cys Thr
1010 1015 1020
Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Ala Ala Ala Ala
1025 1030 1035
Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Cys Gly Ala Cys Ala
1040 1045 1050
Ala Cys Ala Cys Gly Ala Ala Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Cys
1055 1060 1065
Ala Ala Gly Thr Thr Gly Cys Gly Ala Ala Thr Gly Gly Ala Gly
1070 1075 1080
Ala Cys Ala Thr Gly Cys Thr Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Gly
1085 1090 1095
Gly Cys Gly Thr Gly Thr Ala Ala Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala
1100 1105 1110
Ala Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Cys
1115 1120 1125
Gly Ala Gly Ala Ala Thr Cys Cys Cys Gly Ala Gly Thr Gly Gly
1130 1135 1140
Gly Cys Ala Cys Cys Ala Thr Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Thr
1145 1150 1155
Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Thr Thr Cys Cys Thr Thr Cys Ala
1160 1165 1170
Thr Ala Cys Gly Gly Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr
1175 1180 1185
Gly Thr Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly
1190 1195 1200
Ala Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Gly Cys Thr Thr Ala Ala Ala
1205 1210 1215
Ala Thr Cys Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Cys Thr Thr Cys Gly
1220 1225 1230
Gly Gly Ala Thr Thr Cys Gly Gly Gly Cys Cys Ala Thr Thr Gly
1235 1240 1245
Ala Thr Cys Ala Cys Ala Cys Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Ala
1250 1255 1260
Gly Gly Gly Ala Thr Gly Gly Ala Cys Cys Thr Ala Thr Ala Cys
1265 1270 1275
Ala Ala Ala Thr Cys Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala Cys
1280 1285 1290
Ala Ala Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Gly Cys Thr Gly
1295 1300 1305
Ala Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Ala Thr Gly
1310 1315 1320
Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Thr Ala Gly Cys Cys Thr Thr Ala
1325 1330 1335
Gly Gly Thr Gly Thr Ala Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Cys Ala
1340 1345 1350
Thr Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ala Cys Cys Gly
1355 1360 1365
Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Ala Gly Gly Thr Thr Ala Gly Thr
1370 1375 1380
Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Thr Cys Thr Thr Cys Ala Ala Thr
1385 1390 1395
Gly Thr Cys Cys Cys Ala Ala Thr Thr Ala Ala Gly Gly Ala Ala
1400 1405 1410
Gly Cys Ala Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Ala Cys Thr Gly Cys
1415 1420 1425
Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Cys Ala Ala Cys Ala Thr Ala Cys
1430 1435 1440
Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly
1445 1450 1455
Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala Thr Gly Thr Cys Ala Ala Ala
1460 1465 1470
Cys Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Thr Gly
1475 1480 1485
Gly Thr Gly Ala Thr Thr Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr
1490 1495 1500
Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Thr Ala Thr
1505 1510 1515
Gly Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Ala Ala Cys Cys Thr Ala Cys
1520 1525 1530
Gly Ala Thr Ala Cys Thr Thr Cys Cys Gly Cys Gly Gly Thr Thr
1535 1540 1545
Gly Ala Ala Cys Ala Thr Gly Cys Thr Gly Thr Gly Gly Thr Thr
1550 1555 1560
Thr Ala Thr Thr Ala Cys Gly Thr Thr Thr Ala Cys Ala Gly Cys
1565 1570 1575
Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Cys Thr Cys Ala Thr Thr Thr
1580 1585 1590
Thr Cys Thr Thr Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala Thr Cys Cys Thr
1595 1600 1605
Thr Thr Thr Ala Gly Gly Thr Thr Gly Cys Cys Thr Ala Thr Ala
1610 1615 1620
Ala Ala Gly Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys
1625 1630 1635
Gly Ala Ala Thr Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala
1640 1645 1650
Thr Gly Cys Thr Thr Cys Ala Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ala Cys
1655 1660 1665
Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys
1670 1675 1680
Cys Gly Thr Cys Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly Thr Gly
1685 1690 1695
Cys Thr Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala
1700 1705 1710
Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Thr Ala Thr Cys
1715 1720 1725
Ala Cys Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Thr Gly
1730 1735 1740
Gly Thr Gly Gly Gly Cys Ala Thr Gly Gly Gly Ala Gly Thr Cys
1745 1750 1755
Ala Gly Cys Thr Gly Cys Ala Cys Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys
1760 1765 1770
Cys Gly Gly Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys
1775 1780 1785
Ala Ala Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys
1790 1795 1800
Gly Ala Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Ala
1805 1810 1815
<210> 21
<211> 605
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 21
Met Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile Asp Arg
1 5 10 15
Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser Leu Ile
20 25 30
Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala Ile Tyr
35 40 45
Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val Thr Asn
50 55 60
Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe Lys Ile
65 70 75 80
Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr Asp Leu
85 90 95
Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu Arg Ile
115 120 125
Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu Glu Leu
130 135 140
Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr Thr Asn
145 150 155 160
Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr Thr Ile
165 170 175
Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Leu
180 185 190
Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser Gln Gly
195 200 205
Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser Ser Lys
210 215 220
Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu Val Gly
225 230 235 240
Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met Thr Asn
245 250 255
Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met Val Ala
260 265 270
Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp Ser Ile
275 280 285
Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln Leu Val
290 295 300
Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp Val Pro
305 310 315 320
Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser Ser His
325 330 335
Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro Thr Thr
340 345 350
Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln Ala Cys
355 360 365
Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala Pro Leu
370 375 380
Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp Leu Ser
385 390 395 400
Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly Pro Leu
405 410 415
Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His Asn Asn
420 425 430
Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu Gly Val
435 440 445
Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro Ala Leu
450 455 460
Phe Asn Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala Pro Thr
465 470 475 480
Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser Asn Leu
485 490 495
Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr Tyr Asp
500 505 510
Thr Ser Ala Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser Pro Ser
515 520 525
Arg Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys Gly Val
530 535 540
Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys Leu Trp
545 550 555 560
Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly His Ile
565 570 575
Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val Thr Arg
580 585 590
Glu Asp Gly Thr Asn Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
595 600 605
<210> 22
<211> 1785
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 22
Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Cys Gly
1 5 10 15
Ala Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly
20 25 30
Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Gly Cys Cys
35 40 45
Thr Thr Cys Ala Ala Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Ala Thr Thr Gly
50 55 60
Cys Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Gly Cys Thr Cys Thr Ala Thr
65 70 75 80
Cys Gly Thr Gly Ala Thr Cys Ala Thr Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly
85 90 95
Ala Ala Cys Ala Thr Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys
100 105 110
Ala Gly Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Cys Cys Cys Gly Gly Thr Cys
115 120 125
Cys Ala Cys Cys Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly Cys Cys
130 135 140
Gly Thr Gly Ala Thr Thr Ala Ala Gly Gly Ala Thr Gly Cys Thr Cys
145 150 155 160
Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala
165 170 175
Gly Cys Ala Gly Ala Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys Cys Thr Gly
180 185 190
Gly Cys Cys Gly Ala Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Gly Gly Cys Ala
195 200 205
Cys Ala Gly Ala Gly Ala Thr Cys Gly Gly Cys Cys Cys Thr Ala Ala
210 215 220
Gly Gly Thr Gly Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Gly Ala Cys
225 230 235 240
Ala Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala
245 250 255
Cys Ala Ala Thr Cys Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Ala Thr Ala Thr
260 265 270
Cys Gly Gly Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala Ala Gly Cys
275 280 285
Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Gly Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala
290 295 300
Cys Cys Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys Gly Ala
305 310 315 320
Gly Ala Ala Cys Gly Thr Gly Ala Ala Cys Gly Ala Gly Ala Ala Gly
325 330 335
Thr Gly Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys
340 345 350
Cys Thr Cys Cys Ala Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Ala
355 360 365
Cys Gly Ala Gly Thr Gly Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys
370 375 380
Thr Gly Cys Cys Cys Cys Ala Ala Thr Cys Cys Thr Cys Thr Gly Cys
385 390 395 400
Cys Ala Thr Thr Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Thr Ala Cys Ala Gly
405 410 415
Ala Cys Cys Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Ala Gly Gly Gly Cys
420 425 430
Gly Thr Gly Thr Cys Cys Ala Ala Thr Cys Thr Cys Gly Thr Gly Gly
435 440 445
Gly Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Thr
450 455 460
Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys
465 470 475 480
Ala Gly Cys Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala
485 490 495
Ala Gly Cys Cys Thr Ala Ala Gly Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys
500 505 510
Cys Thr Ala Cys Ala Cys Ala Cys Thr Gly Cys Cys Cys Gly Thr Cys
515 520 525
Gly Thr Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala
530 535 540
Cys Cys Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys
545 550 555 560
Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Thr Gly Gly Ala Cys
565 570 575
Gly Ala Gly Gly Gly Cys Thr Ala Cys Thr Thr Thr Gly Cys Cys Thr
580 585 590
Ala Cys Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly
595 600 605
Ala Ala Thr Cys Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Ala Gly Cys
610 615 620
Cys Gly Gly Gly Gly Ala Gly Thr Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys
625 630 635 640
Ala Gly Ala Gly Ala Ala Thr Cys Ala Thr Cys Gly Gly Cys Gly Thr
645 650 655
Gly Gly Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr
660 665 670
Ala Gly Ala Gly Gly Cys Gly Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr Gly Cys
675 680 685
Cys Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Thr Thr Cys Ala Thr Gly Ala Cys
690 695 700
Cys Ala Ala Thr Gly Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr
705 710 715 720
Cys Cys Thr Ala Ala Thr Cys Cys Thr Ala Ala Cys Ala Cys Cys Gly
725 730 735
Thr Gly Thr Ala Cys Cys Ala Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Gly Cys
740 745 750
Cys Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Ala Ala Cys Gly Ala Gly
755 760 765
Thr Thr Cys Thr Ala Cys Thr Ala Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Thr
770 775 780
Gly Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly Thr
785 790 795 800
Gly Gly Gly Cys Gly Ala Cys Cys Cys Thr Ala Thr Cys Cys Thr Gly
805 810 815
Ala Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Ala Thr Thr Gly Gly Ala
820 825 830
Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Thr
835 840 845
Gly Ala Cys Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly
850 855 860
Ala Ala Gly Cys Cys Cys Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Ala Thr Gly
865 870 875 880
Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala Thr Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala
885 890 895
Gly Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly
900 905 910
Cys Gly Gly Thr Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly
915 920 925
Gly Cys Ala Gly Ala Thr Ala Cys Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr
930 935 940
Gly Ala Thr Gly Cys Cys Thr Thr Ala Cys Gly Gly Cys Cys Cys Cys
945 950 955 960
Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala Gly Cys Ala Ala Gly
965 970 975
Gly Cys Gly Ala Thr Ala Cys Cys Cys Thr Gly Thr Ala Cys Thr Thr
980 985 990
Thr Cys Cys Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly Gly Ala Thr Thr Thr
995 1000 1005
Cys Thr Cys Gly Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Cys Gly Ala Gly
1010 1015 1020
Thr Thr Cys Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Gly Ala Cys
1025 1030 1035
Ala Gly Cys Ala Ala Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys
1040 1045 1050
Ala Cys Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Cys Ala Gly Thr Ala Cys
1055 1060 1065
Ala Gly Cys Ala Ala Gly Cys Cys Cys Gly Ala Gly Ala Ala Cys
1070 1075 1080
Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Thr Gly
1085 1090 1095
Gly Gly Cys Ala Thr Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Ala Ala Cys
1100 1105 1110
Ala Gly Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly
1115 1120 1125
Ala Gly Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly
1130 1135 1140
Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys
1145 1150 1155
Gly Ala Cys Gly Gly Cys Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys Cys Cys
1160 1165 1170
Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Thr Thr Cys Ala Thr Cys
1175 1180 1185
Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Cys Ala Gly
1190 1195 1200
Cys Gly Gly Cys Thr Gly Thr Cys Thr Ala Thr Cys Gly Gly Cys
1205 1210 1215
Ala Gly Cys Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys
1220 1225 1230
Thr Ala Cys Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Thr Gly Gly Gly Cys
1235 1240 1245
Cys Ala Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Thr Cys Thr Ala Cys
1250 1255 1260
Cys Ala Gly Gly Cys Cys Ala Gly Cys Thr Thr Thr Ala Gly Cys
1265 1270 1275
Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys
1280 1285 1290
Ala Ala Gly Thr Thr Cys Gly Gly Cys Gly Ala Cys Gly Thr Gly
1295 1300 1305
Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Gly Ala Ala Thr Cys Cys Cys
1310 1315 1320
Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly
1325 1330 1335
Cys Gly Gly Ala Ala Cys Ala Ala Thr Ala Cys Cys Gly Thr Gly
1340 1345 1350
Ala Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys
1355 1360 1365
Cys Ala Gly Thr Cys Thr Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys
1370 1375 1380
Ala Gly Ala Thr Thr Cys Ala Ala Thr Ala Cys Cys Thr Gly Thr
1385 1390 1395
Cys Cys Thr Gly Cys Cys Ala Thr Thr Thr Gly Cys Gly Cys Cys
1400 1405 1410
Gly Ala Ala Gly Gly Cys Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Ala Thr
1415 1420 1425
Gly Ala Cys Gly Cys Cys Thr Thr Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys
1430 1435 1440
Gly Ala Thr Cys Gly Gly Ala Thr Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly
1445 1450 1455
Ala Thr Cys Thr Cys Thr Gly Cys Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly
1460 1465 1470
Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala Thr
1475 1480 1485
Gly Cys Cys Ala Cys Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Ala Thr
1490 1495 1500
Cys Cys Thr Gly Thr Gly Thr Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly
1505 1510 1515
Thr Thr Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Ala Thr Gly Ala Gly
1520 1525 1530
Ala Thr Cys Cys Thr Gly Thr Ala Thr Cys Gly Gly Gly Cys Cys
1535 1540 1545
Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Thr Cys Cys Gly Ala Gly
1550 1555 1560
Gly Ala Cys Ala Cys Ala Ala Ala Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly
1565 1570 1575
Ala Ala Ala Ala Cys Ala Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys
1580 1585 1590
Thr Gly Cys Thr Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Cys Ala Ala Gly
1595 1600 1605
Ala Ala Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys
1610 1615 1620
Ala Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Ala
1625 1630 1635
Ala Thr Cys Thr Ala Cys Gly Ala Cys Ala Cys Cys Gly Gly Cys
1640 1645 1650
Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Thr Gly Ala Thr Cys Ala Gly Gly
1655 1660 1665
Cys Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Thr Thr Cys Gly Cys Cys
1670 1675 1680
Gly Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly
1685 1690 1695
Cys Ala Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys
1700 1705 1710
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Gly Gly Ala
1715 1720 1725
Gly Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Cys
1730 1735 1740
Gly Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Cys Thr Ala Gly Cys
1745 1750 1755
Gly Ala Thr Thr Ala Cys Ala Ala Gly Gly Ala Thr Gly Ala Cys
1760 1765 1770
Gly Ala Cys Gly Ala Thr Ala Ala Gly Thr Gly Ala
1775 1780 1785
<210> 23
<211> 594
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 23
Met Lys Lys Ile Asn Glu Gly Leu Leu Asp Ser Lys Ile Leu Ser Ala
1 5 10 15
Phe Asn Thr Val Ile Ala Leu Leu Gly Ser Ile Val Ile Ile Val Met
20 25 30
Asn Ile Met Ile Ile Gln Asn Tyr Thr Arg Ser Thr Asp Asn Gln Ala
35 40 45
Val Ile Lys Asp Ala Leu Gln Gly Ile Gln Gln Gln Ile Lys Gly Leu
50 55 60
Ala Asp Lys Ile Gly Thr Glu Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ile Asp
65 70 75 80
Thr Ser Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ala Asn Ile Gly Leu Leu Gly Ser
85 90 95
Lys Ile Ser Gln Ser Thr Ala Ser Ile Asn Glu Asn Val Asn Glu Lys
100 105 110
Cys Lys Phe Thr Leu Pro Pro Leu Lys Ile His Glu Cys Asn Ile Ser
115 120 125
Cys Pro Asn Pro Leu Pro Phe Arg Glu Tyr Arg Pro Gln Thr Glu Gly
130 135 140
Val Ser Asn Leu Val Gly Leu Pro Asn Asn Ile Cys Leu Gln Lys Thr
145 150 155 160
Ser Asn Gln Ile Leu Lys Pro Lys Leu Ile Ser Tyr Thr Leu Pro Val
165 170 175
Val Gly Gln Ser Gly Thr Cys Ile Thr Asp Pro Leu Leu Ala Met Asp
180 185 190
Glu Gly Tyr Phe Ala Tyr Ser His Leu Glu Arg Ile Gly Ser Cys Ser
195 200 205
Arg Gly Val Ser Lys Gln Arg Ile Ile Gly Val Gly Glu Val Leu Asp
210 215 220
Arg Gly Asp Glu Val Pro Ser Leu Phe Met Thr Asn Val Trp Thr Pro
225 230 235 240
Pro Asn Pro Asn Thr Val Tyr His Cys Ser Ala Val Tyr Asn Asn Glu
245 250 255
Phe Tyr Tyr Val Leu Cys Ala Val Ser Thr Val Gly Asp Pro Ile Leu
260 265 270
Asn Ser Thr Tyr Trp Ser Gly Ser Leu Met Met Thr Arg Leu Ala Val
275 280 285
Lys Pro Lys Ser Asn Gly Gly Gly Tyr Asn Gln His Gln Leu Ala Leu
290 295 300
Arg Ser Ile Glu Lys Gly Arg Tyr Asp Lys Val Met Pro Tyr Gly Pro
305 310 315 320
Ser Gly Ile Lys Gln Gly Asp Thr Leu Tyr Phe Pro Ala Val Gly Phe
325 330 335
Leu Val Arg Thr Glu Phe Lys Tyr Asn Asp Ser Asn Cys Pro Ile Thr
340 345 350
Lys Cys Gln Tyr Ser Lys Pro Glu Asn Cys Arg Leu Ser Met Gly Ile
355 360 365
Arg Pro Asn Ser His Tyr Ile Leu Arg Ser Gly Leu Leu Lys Tyr Asn
370 375 380
Leu Ser Asp Gly Glu Asn Pro Lys Val Val Phe Ile Glu Ile Ser Asp
385 390 395 400
Gln Arg Leu Ser Ile Gly Ser Pro Ser Lys Ile Tyr Asp Ser Leu Gly
405 410 415
Gln Pro Val Phe Tyr Gln Ala Ser Phe Ser Trp Asp Thr Met Ile Lys
420 425 430
Phe Gly Asp Val Leu Thr Val Asn Pro Leu Val Val Asn Trp Arg Asn
435 440 445
Asn Thr Val Ile Ser Arg Pro Gly Gln Ser Gln Cys Pro Arg Phe Asn
450 455 460
Thr Cys Pro Ala Ile Cys Ala Glu Gly Val Tyr Asn Asp Ala Phe Leu
465 470 475 480
Ile Asp Arg Ile Asn Trp Ile Ser Ala Gly Val Phe Leu Asp Ser Asn
485 490 495
Ala Thr Ala Ala Asn Pro Val Phe Thr Val Phe Lys Asp Asn Glu Ile
500 505 510
Leu Tyr Arg Ala Gln Leu Ala Ser Glu Asp Thr Asn Ala Gln Lys Thr
515 520 525
Ile Thr Asn Cys Phe Leu Leu Lys Asn Lys Ile Trp Cys Ile Ser Leu
530 535 540
Val Glu Ile Tyr Asp Thr Gly Asp Asn Val Ile Arg Pro Lys Leu Phe
545 550 555 560
Ala Val Lys Ile Pro Glu Gln Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
565 570 575
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp
580 585 590
Asp Lys
<210> 24
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 24
Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Gln Val Leu
20 25 30
Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His
35 40 45
Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu
50 55 60
Ile His Tyr Ser Val Gly Ala Gly Ile Thr Asp Gln Gly Glu Val Pro
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Thr Glu Asp Phe Pro Leu Arg
85 90 95
Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Tyr Val Gly Asn Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Glu Gly Ser Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
305 310 315 320
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Thr Leu
325 330 335
Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp Val Ser Ser Lys
340 345 350
Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val Pro Glu Gly Glu
355 360 365
Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala Ile Tyr Asn Leu
370 375 380
Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Leu
385 390 395 400
Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg Leu Asn Ala Ser
405 410 415
Leu Asp Lys Ser Ser Gly Ser Ser Thr Leu Tyr Ile Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Pro Thr Ser Gly
435 440 445
Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His
450 455 460
Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser
465 470 475 480
Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln
485 490 495
Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys
500 505 510
Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val
515 520 525
Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn
530 535 540
Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys
545 550 555 560
Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn
565 570 575
Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val
580 585 590
Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser Ala Ala
595 600 605
Ala
<210> 25
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 25
Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Gln Val Leu
20 25 30
Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His
35 40 45
Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu
50 55 60
Ile His Tyr Ser Val Gly Ala Gln Thr Thr Asp Gln Gly Glu Val Pro
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Ile Glu Asp Phe Pro Leu Arg
85 90 95
Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Tyr Leu Gly Asn Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Glu Gly Ser Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
305 310 315 320
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Thr Leu
325 330 335
Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp Val Ser Ser Lys
340 345 350
Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val Pro Glu Gly Glu
355 360 365
Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala Ile Tyr Asn Leu
370 375 380
Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Leu
385 390 395 400
Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg Leu Asn Ala Ser
405 410 415
Leu Asp Lys Ser Ser Gly Ser Ser Thr Leu Tyr Ile Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Pro Met Ile Gly
435 440 445
Gly Thr Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His
450 455 460
Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser
465 470 475 480
Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln
485 490 495
Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys
500 505 510
Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val
515 520 525
Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn
530 535 540
Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys
545 550 555 560
Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn
565 570 575
Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val
580 585 590
Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser Ala Ala
595 600 605
Ala
<210> 26
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 26
Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Gln Val Leu
20 25 30
Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His
35 40 45
Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu
50 55 60
Ile His Tyr Ser Val Gly Ala Gly Thr Thr Asp Arg Gly Glu Val Pro
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Ile Glu Asp Phe Pro Leu Arg
85 90 95
Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Tyr Val Gly Asp Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Glu Gly Ser Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
305 310 315 320
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Thr Leu
325 330 335
Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp Val Ser Ser Lys
340 345 350
Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val Pro Glu Gly Glu
355 360 365
Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala Ile Tyr Asn Leu
370 375 380
Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Leu
385 390 395 400
Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg Leu Asn Ala Ser
405 410 415
Leu Asp Lys Ser Ser Gly Ser Ser Thr Leu Tyr Ile Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Pro Leu Leu Asp
435 440 445
Gly Thr Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His
450 455 460
Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser
465 470 475 480
Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln
485 490 495
Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys
500 505 510
Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val
515 520 525
Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn
530 535 540
Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys
545 550 555 560
Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn
565 570 575
Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val
580 585 590
Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser Ala Ala
595 600 605
Ala
<210> 27
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 27
Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Gln Val Leu
20 25 30
Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His
35 40 45
Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu
50 55 60
Ile His Tyr Ser Val Ala Ile Gln Thr Thr Asp Gln Gly Glu Val Pro
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Ile Glu Asp Phe Pro Leu Arg
85 90 95
Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Tyr Leu Gly Asn Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Glu Gly Ser Arg
115 120 125
Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
305 310 315 320
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Thr Leu
325 330 335
Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp Val Ser Ser Lys
340 345 350
Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val Pro Glu Gly Glu
355 360 365
Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala Ile Tyr Asn Leu
370 375 380
Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu Leu
385 390 395 400
Ile Thr Pro Trp Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg Leu Asn Ala Ser
405 410 415
Leu Asp Lys Ser Ser Gly Ser Ser Thr Leu Tyr Ile Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Pro Leu Leu Asp
435 440 445
Gly Thr Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His
450 455 460
Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser
465 470 475 480
Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln
485 490 495
Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys
500 505 510
Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val
515 520 525
Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn
530 535 540
Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys
545 550 555 560
Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn
565 570 575
Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val
580 585 590
Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser Ala Ala
595 600 605
Ala
<210> 28
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 28
Val Val Val Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile
1 5 10 15
Ser Leu Ile Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg
20 25 30
<210> 29
<211> 60
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(60)
<223> 可缺失
<400> 29
Gly Ala Pro Gly Ala Ser Gly Ala Pro Gly Ala Ser Gly Ala Pro Gly
1 5 10 15
Ala Ser Gly Ala Pro Gly Ala Ser Gly Ala Pro Gly Ala Ser Gly Ala
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Gly Ala Pro Gly Ala Ser Gly Ala Pro Gly Ala Ser
35 40 45
Gly Ala Pro Gly Ala Ser Gly Ala Pro Gly Ala Ser
50 55 60
<210> 30
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(50)
<223> 可缺失
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser
50
<210> 31
<211> 603
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 31
Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala
1 5 10 15
Gly Pro Val Asn Ala Asp Ala Gly Val Thr Gln Ser Pro Thr His Leu
20 25 30
Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Lys Gln
35 40 45
Gly His Asp Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro
50 55 60
Gln Phe Ile Phe Gln Tyr Tyr Glu Glu Glu Glu Arg Gln Arg Gly Asn
65 70 75 80
Phe Pro Asp Arg Phe Ser Gly His Gln Phe Pro Asn Tyr Ser Ser Glu
85 90 95
Leu Asn Val Asn Ala Leu Leu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys
100 105 110
Ala Ser Ser Asp Thr Val Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Thr Val Thr Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val
130 135 140
Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala
145 150 155 160
Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu
165 170 175
Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp
180 185 190
Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys
195 200 205
Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asp Pro Arg
210 215 220
Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp
225 230 235 240
Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala
245 250 255
Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln
260 265 270
Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys
275 280 285
Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met
290 295 300
Val Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Thr
325 330 335
Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp Val Ser Ser
340 345 350
Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly Ala
355 360 365
Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Gly Ser Gln Ser Phe
370 375 380
Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met Phe
385 390 395 400
Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln Leu
405 410 415
Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Lys Leu
420 425 430
Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg Thr Asn Ser Gly Tyr
435 440 445
Ala Leu Asn Phe Gly Lys Gly Thr Ser Leu Leu Val Thr Pro His Ile
450 455 460
Gln Lys Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser
465 470 475 480
Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val
485 490 495
Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu
500 505 510
Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser
515 520 525
Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile
530 535 540
Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys
545 550 555 560
Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn
565 570 575
Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe
580 585 590
Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600
<210> 32
<211> 1812
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 32
atgtctatcg ggctgctgtg ttgcgccgct ctgtccctgc tgtgggccgg acctgtcaat 60
gctgatgctg gcgtaacgca gagcccgaca catctgataa aaacaagagg ccaacaagtt 120
actctgaggt gcagtccaaa gcaagggcac gatactgtgt cttggtacca acaggctctt 180
gggcaagggc cacaattcat ctttcaatac tacgaggaag aagagcgcca acgaggaaac 240
tttcctgatc gcttcagcgg tcaccaattt cctaattaca gttccgaatt gaatgtaaat 300
gctctcctgc tcggcgatag cgctctgtac ctttgtgcct cctccgacac cgtaagctat 360
gaacaatact ttggtcctgg cactcgcctc accgtaaccg aagatctgaa gaacgttttt 420
ccgccagagg tcgccgtttt tgaaccaagc gaagcggaaa tcagtcacac acagaaggca 480
acactcgttt gtctggccac tggcttctac cccgatcacg tcgaactttc atggtgggtc 540
aatggaaagg aagttcacag cggtgtaagt actgatccac agcctctcaa agagcagccc 600
gccttgaatg acagcagata ttgtttgagt tcacggttga gagtaagcgc taccttctgg 660
caagatcctc gcaatcactt ccgatgtcag gtgcagtttt atggactgtc agaaaatgat 720
gaatggacac aagatagggc taaacccgtg acccaaatcg tgagcgctga ggcatggggt 780
cgagcagact gcggcttcac aagtgaatca taccagcagg gggtgctgag cgccactatc 840
ctgtacgaga ttctgctggg aaaggctacc ctgtatgcag tgctggtctc cgccctggtg 900
ctgatggcta tggtcaagcg aaaagacagc cggggcgggt ccgcaacaaa cttttccctg 960
ctgaaacagg ccggcgatgt ggaggaaaat cctgggccaa tggagactct gctgggactg 1020
ctgatcctgt ggctgcagct gcagtgggtg tcaagcaaag aagtagaaca aaactcaggc 1080
cccctgtccg taccagaggg agctatagcg tctctcaatt gtacgtacag cgaccggggc 1140
tcccaatcat tcttctggta tcggcagtac agcgggaaaa gtccggaatt gattatgttc 1200
atatattcta acggcgacaa agaggacggg cgatttacgg cacaactgaa caaagcgagc 1260
caatacatca gtcttcttat tcgagatagc aaattgtctg actccgctac atacctctgt 1320
gcagtccgga ctaactccgg ttacgccttg aactttggga aagggacgtc attgttggtc 1380
acgccgcaca tacagaagcc cgatcctgca gtttaccaac tccgggactc aaagtcttcc 1440
gataagagtg tctgtctttt caccgacttc gatagtcaaa cgaatgttag ccagtctaag 1500
gacagcgatg tttatatcac cgacaaaacc gtcctcgaca tgaggtctat ggacttcaag 1560
agcaacagcg cggtagcgtg gtcaaataag agcgactttg cttgcgcgaa cgctttcaat 1620
aattcaatca tacccgagga tactttcttc ccaagtccgg aatctagttg tgacgtgaag 1680
ctggtcgaga aaagtttcga aacagatact aacctgaatt ttcagaacct gtcagtgatc 1740
ggcttccgga ttctgctgct gaaggtcgcc gggttcaatc tgctgatgac cctgagactg 1800
tggtcaagct ga 1812
<210> 33
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 33
Met Gly Thr Arg Leu Leu Phe Trp Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Ser Asn Lys Val Thr
20 25 30
Glu Lys Gly Lys Asp Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Thr Ala Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Arg Leu Gly Gln Gly Leu Glu Phe
50 55 60
Leu Ile Tyr Phe Gln Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Thr Gly Glu Ser Val Ser Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Gln Thr Gln Leu Trp Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Leu Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val
130 135 140
Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala
145 150 155 160
Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu
165 170 175
Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp
180 185 190
Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys
195 200 205
Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg
210 215 220
Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp
225 230 235 240
Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala
245 250 255
Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln
260 265 270
Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys
275 280 285
Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met
290 295 300
Val Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Lys
325 330 335
Asn Pro Leu Ala Ala Pro Leu Leu Ile Leu Trp Phe His Leu Asp Cys
340 345 350
Val Ser Ser Ile Leu Asn Val Glu Gln Ser Pro Gln Ser Leu His Val
355 360 365
Gln Glu Gly Asp Ser Thr Asn Phe Thr Cys Ser Phe Pro Ser Ser Asn
370 375 380
Phe Tyr Ala Leu His Trp Tyr Arg Trp Glu Thr Ala Lys Ser Pro Glu
385 390 395 400
Ala Leu Phe Val Met Thr Leu Asn Gly Asp Glu Lys Lys Lys Gly Arg
405 410 415
Ile Ser Ala Thr Leu Asn Thr Lys Glu Gly Tyr Ser Tyr Leu Tyr Ile
420 425 430
Lys Gly Ser Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Phe Ile
435 440 445
Thr Gly Asn Gln Phe Tyr Phe Gly Thr Gly Thr Ser Leu Thr Val Ile
450 455 460
Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser
465 470 475 480
Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln
485 490 495
Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys
500 505 510
Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val
515 520 525
Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn
530 535 540
Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys
545 550 555 560
Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn
565 570 575
Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val
580 585 590
Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser Ala Ala
595 600 605
Ala
<210> 34
<211> 1830
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 34
atgggcacac ggttgctgtt ttgggttgct ttctgcctgc tcggcgcaga tcacacggga 60
gcgggggtta gtcagtcccc tagcaataaa gtgacggaaa aagggaaaga tgtcgagctg 120
aggtgtgatc caatttctgg acacactgcc ctctactggt atagacaacg ccttggtcag 180
gggctggagt tccttatcta tttccagggc aactccgcgc ccgacaaaag tggtctcccg 240
agcgaccggt tttcagcgga gcgcacgggt gaaagtgtta gcacactgac aatccaacgg 300
acgcagcagg aggatagtgc tgtttatctg tgtgcctcta gtcagactca actttgggaa 360
actcaatact tcggccctgg tacgcgcctg ctcgttcttg aagacctgaa gaatgtcttc 420
ccccctgagg tggccgtctt tgaaccttca gaggctgaaa ttagccacac tcagaaagct 480
accctggtgt gtctggcaac tggcttctat ccagatcacg tggagctgag ctggtgggtc 540
aacgggaagg aagtgcattc cggagtctct acagacccac agcccctgaa agagcagccc 600
gccctgaatg attcccggta ttgcctgtct agtcggctga gagtgtctgc taccttttgg 660
cagaacccta ggaatcattt ccgctgtcag gtgcagtttt acggcctgtc tgagaatgac 720
gaatggaccc aggatcgagc taagcctgtg acacagatcg tcagtgcaga ggcttgggga 780
cgagcagact gcggcttcac aagtgaatca taccagcagg gggtgctgag cgccactatc 840
ctgtacgaga ttctgctggg aaaggctacc ctgtatgcag tgctggtctc cgccctggtg 900
ctgatggcta tggtcaagcg aaaagacagc cggggcgggt ccgcaacaaa cttttccctg 960
ctgaaacagg ccggcgatgt ggaggaaaat cctgggccaa tggaaaagaa tccattggct 1020
gcacccttgc ttatactctg gtttcacttg gactgcgtat cctcaatttt gaatgttgaa 1080
caatcacccc agagtctcca cgtccaagaa ggggactcaa caaactttac ctgtagtttc 1140
ccctcaagta acttctacgc tctccactgg tatcggtggg agactgccaa gagccccgaa 1200
gctctcttcg taatgaccct taatggagac gaaaaaaaga aggggagaat aagtgccact 1260
ctgaatacca aagagggcta ttcctatctc tacataaaag gaagtcaacc tgaggattcc 1320
gccacttacc tgtgcgcgtt catcactgga aaccagttct atttcgggac cggaacatct 1380
ctgactgtaa tcccaaatat tcagaacccc gatcctgccg tctatcagct gagggacagc 1440
aagagctccg ataaatccgt gtgtctgttc acagactttg attctcagac taatgtgagc 1500
cagtccaagg acagtgatgt gtacatcacc gacaaaacag tcctggatat gcgcagcatg 1560
gacttcaagt ctaacagtgc agtggcctgg agtaacaagt cagacttcgc ttgcgcaaac 1620
gcctttaaca attcaatcat tcccgaggat accttctttc caagccccga atctagttgt 1680
gacgtgaagc tggtcgagaa aagtttcgaa acagatacta acctgaattt tcagaacctg 1740
tcagtgatcg gcttccggat tctgctgctg aaggtcgccg ggttcaatct gctgatgacc 1800
ctgagactgt ggtcaagcgc ggccgcctga 1830
<210> 35
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 35
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr
35 40 45
Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser
50 55 60
Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr
100 105 110
Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His
115 120 125
Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gly Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Phe Thr Ser Val Ser Arg Pro
165 170 175
Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr
180 185 190
Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ser Gln Arg Met Glu Pro
195 200 205
Arg Ala Pro Trp Ile Glu Gln Glu Gly Pro Glu Tyr Trp Asp Gly Glu
210 215 220
Thr Arg Lys Val Lys Ala His Ser Gln Thr His Arg Val Asp Leu Gly
225 230 235 240
Thr Leu Arg Gly Ala Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Val
245 250 255
Gln Arg Met Tyr Gly Cys Asp Val Gly Ser Asp Trp Arg Phe Leu Arg
260 265 270
Gly Tyr His Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Lys
275 280 285
Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Met Ala Ala Gln Thr Thr
290 295 300
Lys His Lys Trp Glu Ala Ala His Val Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr
305 310 315 320
Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Thr Leu Gln Arg Thr Asp Ala Pro Lys Thr His Met Thr His
340 345 350
His Ala Val Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Ser
355 360 365
Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp
370 375 380
Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly
385 390 395 400
Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Gln Glu Gln
405 410 415
Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Lys Pro Leu Thr
420 425 430
Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile Val Gly Ile
435 440 445
Ile Ala Gly Leu Val Leu Phe Gly Ala Val Ile Thr Gly Ala Val Val
450 455 460
Ala Ala Val Met Trp Arg Arg Lys Ser Ser
465 470
<210> 36
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 36
atgagccgca gcgtggcgct ggcggtgctg gcgctgctga gcctgagcgg cctggaagcg 60
agcctttaca acacggtcgc gacactgggt ggaggagcta gcggaggtgg tggtagtggt 120
ggtggtggtt ccatacaaag aactccaaag atccaagttt acagtagaca tcctgctgaa 180
aacggtaaat ctaatttctt gaactgttac gtctccggtt tccacccaag tgatatagaa 240
gttgacttgt tgaaaaatgg tgaaagaatc gaaaaggttg aacattcaga tttgtctttt 300
tctaaggact ggtccttcta tttgttgtac tacacagagt tcactccaac tgaaaaggat 360
gaatacgctt gcagagttaa tcatgtaacc ttgtctcaac ctaaaatcgt taagtgggat 420
agagacatgg gtggtggcgg cagtggtggc gggggcagcg gtggtggggg cagcggtggt 480
ggtggttccc atagtatgag atatttcttt acttctgttt caagaccagg tagaggtgaa 540
cctagattca tcgcagtcgg ttacgttgat gacacacaat ttgtaagatt cgattccgac 600
gctgcaagtc aaagaatgga accaagagca ccttggattg aacaagaagg tccagaatat 660
tgggatggtg aaactagaaa agttaaggcc cattctcaaa ctcacagagt agatttgggt 720
acattaagag gtgcttataa tcaatctgaa gcaggttcac atacagtaca aagaatgtac 780
ggttgtgatg tcggttcaga ctggagattt ttgagaggtt atcaccaata tgcttacgat 840
ggtaaagact acattgcatt gaaggaagat ttgagatcct ggaccgccgc tgacatggca 900
gcccaaacta caaaacataa gtgggaagct gcacacgtag cagaacaatt gagagcctat 960
ttggaaggta catgtgtcga atggttgaga agatacttag aaaacggtaa agaaacattg 1020
caaagaaccg atgctccaaa gactcatatg acacatcacg ccgttagtga tcacgaagct 1080
actttgagat gctgggcatt atctttttac cctgccgaaa tcacattgac ctggcaaaga 1140
gatggtgaag accaaaccca agatactgaa ttagttgaaa ccagaccagc aggtgacggt 1200
actttccaaa aatgggccgc tgttgtagtc ccttcaggtc aagaacaaag atacacatgc 1260
catgtccaac acgaaggttt accaaagcca ttgacattga gatgggaacc atcctctcag 1320
cctacaatac caatagtcgg cataatcgct ggactggtcc tgttcggggc ggtaatcacg 1380
ggagctgtag tcgctgcggt gatgtggcgc agaaaaagct cctga 1425
<210> 37
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 37
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala Asn Leu Val Pro Met Val Ala Thr Val Gly Ala Ser
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr
35 40 45
Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser
50 55 60
Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr
100 105 110
Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His
115 120 125
Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gly Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Phe Thr Ser Val Ser Arg Pro
165 170 175
Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr
180 185 190
Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ser Gln Arg Met Glu Pro
195 200 205
Arg Ala Pro Trp Ile Glu Gln Glu Gly Pro Glu Tyr Trp Asp Gly Glu
210 215 220
Thr Arg Lys Val Lys Ala His Ser Gln Thr His Arg Val Asp Leu Gly
225 230 235 240
Thr Leu Arg Gly Ala Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Val
245 250 255
Gln Arg Met Tyr Gly Cys Asp Val Gly Ser Asp Trp Arg Phe Leu Arg
260 265 270
Gly Tyr His Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Lys
275 280 285
Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Met Ala Ala Gln Thr Thr
290 295 300
Lys His Lys Trp Glu Ala Ala His Val Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr
305 310 315 320
Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Thr Leu Gln Arg Thr Asp Ala Pro Lys Thr His Met Thr His
340 345 350
His Ala Val Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Ser
355 360 365
Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp
370 375 380
Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly
385 390 395 400
Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Gln Glu Gln
405 410 415
Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Lys Pro Leu Thr
420 425 430
Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile Val Gly Ile
435 440 445
Ile Ala Gly Leu Val Leu Phe Gly Ala Val Ile Thr Gly Ala Val Val
450 455 460
Ala Ala Val Met Trp Arg Arg Lys Ser Ser
465 470
<210> 38
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 38
atgagccgca gcgtggcgct ggcggtgctg gcgctgctga gcctgagcgg cctggaagcg 60
aacttggttc cgatggtggc aaccgtaggt gctagcggag ggtccggcgg gggtagcggt 120
ggtggaggaa gcatacaaag aactccaaag atccaagttt acagtagaca tcctgctgaa 180
aacggtaaat ctaatttctt gaactgttac gtctccggtt tccacccaag tgatatagaa 240
gttgacttgt tgaaaaatgg tgaaagaatc gaaaaggttg aacattcaga tttgtctttt 300
tctaaggact ggtccttcta tttgttgtac tacacagagt tcactccaac tgaaaaggat 360
gaatacgctt gcagagttaa tcatgtaacc ttgtctcaac ctaaaatcgt taagtgggat 420
agagacatgg gtggtggcgg cagtggtggc gggggcagcg gtggtggggg cagcggtggt 480
ggtggttccc atagtatgag atatttcttt acttctgttt caagaccagg tagaggtgaa 540
cctagattca tcgcagtcgg ttacgttgat gacacacaat ttgtaagatt cgattccgac 600
gctgcaagtc aaagaatgga accaagagca ccttggattg aacaagaagg tccagaatat 660
tgggatggtg aaactagaaa agttaaggcc cattctcaaa ctcacagagt agatttgggt 720
acattaagag gtgcttataa tcaatctgaa gcaggttcac atacagtaca aagaatgtac 780
ggttgtgatg tcggttcaga ctggagattt ttgagaggtt atcaccaata tgcttacgat 840
ggtaaagact acattgcatt gaaggaagat ttgagatcct ggaccgccgc tgacatggca 900
gcccaaacta caaaacataa gtgggaagct gcacacgtag cagaacaatt gagagcctat 960
ttggaaggta catgtgtcga atggttgaga agatacttag aaaacggtaa agaaacattg 1020
caaagaaccg atgctccaaa gactcatatg acacatcacg ccgttagtga tcacgaagct 1080
actttgagat gctgggcatt atctttttac cctgccgaaa tcacattgac ctggcaaaga 1140
gatggtgaag accaaaccca agatactgaa ttagttgaaa ccagaccagc aggtgacggt 1200
actttccaaa aatgggccgc tgttgtagtc ccttcaggtc aagaacaaag atacacatgc 1260
catgtccaac acgaaggttt accaaagcca ttgacattga gatgggaacc atcctctcag 1320
cctacaatac caatagtcgg cataatcgct ggactggtcc tgttcggggc ggtaatcacg 1380
ggagctgtag tcgctgcggt gatgtggcgc agaaaaagct cctga 1425
<210> 39
<211> 482
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 39
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
1 5 10 15
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Gly Ile Leu Gly Phe Val
20 25 30
Phe Thr Leu Gly Cys Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Ile Gln Arg Thr Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro
50 55 60
Ala Glu Asn Gly Lys Ser Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe
65 70 75 80
His Pro Ser Asp Ile Glu Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile
85 90 95
Glu Lys Val Glu His Ser Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe
100 105 110
Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr
115 120 125
Ala Cys Arg Val Asn His Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys
130 135 140
Trp Asp Arg Asp Met Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser His Ser Met Arg Tyr
165 170 175
Phe Phe Thr Ser Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile
180 185 190
Ala Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp
195 200 205
Ala Ala Ser Gln Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Ile Glu Gln Glu
210 215 220
Gly Pro Glu Tyr Trp Asp Gly Glu Thr Arg Lys Val Lys Ala His Ser
225 230 235 240
Gln Thr His Arg Val Asp Leu Gly Thr Leu Arg Gly Cys Tyr Asn Gln
245 250 255
Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Val Gln Arg Met Tyr Gly Cys Asp Val
260 265 270
Gly Ser Asp Trp Arg Phe Leu Arg Gly Tyr His Gln Tyr Ala Tyr Asp
275 280 285
Gly Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Lys Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala
290 295 300
Ala Asp Met Ala Ala Gln Thr Thr Lys His Lys Trp Glu Ala Ala His
305 310 315 320
Val Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp
325 330 335
Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Thr Asp
340 345 350
Ala Pro Lys Thr His Met Thr His His Ala Val Ser Asp His Glu Ala
355 360 365
Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Ser Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu
370 375 380
Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val
385 390 395 400
Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val
405 410 415
Val Val Pro Ser Gly Gln Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His
420 425 430
Glu Gly Leu Pro Lys Pro Leu Thr Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser Gln
435 440 445
Pro Thr Ile Pro Ile Val Gly Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Phe Gly
450 455 460
Ala Val Ile Thr Gly Ala Val Val Ala Ala Val Met Trp Arg Arg Lys
465 470 475 480
Ser Ser
<210> 40
<211> 1449
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 40
atggcgacgg gttcaagaac ttccctactt cttgcatttg gcctgctttg tttgccgtgg 60
ttacaggagg gatccgcagg tatcctcgga tttgtgttta cacttggatg cagcggaggg 120
tccggcgggg gtagcggtgg tggaggaagc atacaaagaa ctccaaagat ccaagtttac 180
agtagacatc ctgctgaaaa cggtaaatct aatttcttga actgttacgt ctccggtttc 240
cacccaagtg atatagaagt tgacttgttg aaaaatggtg aaagaatcga aaaggttgaa 300
cattcagatt tgtctttttc taaggactgg tccttctatt tgttgtacta cacagagttc 360
actccaactg aaaaggatga atacgcttgc agagttaatc atgtaacctt gtctcaacct 420
aaaatcgtta agtgggatag agacatggga ggcggcggct ctggtggcag cggctctgga 480
ggttctggaa gtggaggcgg ctctggaggc tcccatagta tgagatattt ctttacttct 540
gtttcaagac caggtagagg tgaacctaga ttcatcgcag tcggttacgt tgatgacaca 600
caatttgtaa gattcgattc cgacgctgca agtcaaagaa tggaaccaag agcaccttgg 660
attgaacaag aaggtccaga atattgggat ggtgaaacta gaaaagttaa ggcccattct 720
caaactcaca gagtagattt gggtacatta agaggttgtt ataatcaatc tgaagcaggt 780
tcacatacag tacaaagaat gtacggttgt gatgtcggtt cagactggag atttttgaga 840
ggttatcacc aatatgctta cgatggtaaa gactacattg cattgaagga agatttgaga 900
tcctggaccg ccgctgacat ggcagcccaa actacaaaac ataagtggga agctgcacac 960
gtagcagaac aattgagagc ctatttggaa ggtacatgtg tcgaatggtt gagaagatac 1020
ttagaaaacg gtaaagaaac attgcaaaga accgatgctc caaagactca tatgacacat 1080
cacgccgtta gtgatcacga agctactttg agatgctggg cattatcttt ttaccctgcc 1140
gaaatcacat tgacctggca aagagatggt gaagaccaaa cccaagatac tgaattagtt 1200
gaaaccagac cagcaggtga cggtactttc caaaaatggg ccgctgttgt agtcccttca 1260
ggtcaagaac aaagatacac atgccatgtc caacacgaag gtttaccaaa gccattgaca 1320
ttgagatggg aaccatcctc tcagcctaca ataccaatag tcggcataat cgctggactg 1380
gtcctgttcg gggcggtaat cacgggagct gtagtcgctg cggtgatgtg gcgcagaaaa 1440
agctcctga 1449
<210> 41
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 41
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1 5 10 15
Gly Leu Glu Ala Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu Gly Gly Gly
20 25 30
Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Gln Arg Thr
35 40 45
Pro Lys Ile Gln Val Tyr Ser Arg His Pro Ala Glu Asn Gly Lys Ser
50 55 60
Asn Phe Leu Asn Cys Tyr Val Ser Gly Phe His Pro Ser Asp Ile Glu
65 70 75 80
Val Asp Leu Leu Lys Asn Gly Glu Arg Ile Glu Lys Val Glu His Ser
85 90 95
Asp Leu Ser Phe Ser Lys Asp Trp Ser Phe Tyr Leu Leu Tyr Tyr Thr
100 105 110
Glu Phe Thr Pro Thr Glu Lys Asp Glu Tyr Ala Cys Arg Val Asn His
115 120 125
Val Thr Leu Ser Gln Pro Lys Ile Val Lys Trp Asp Arg Asp Met Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
145 150 155 160
Gly Gly Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Phe Thr Ser Val Ser Arg Pro
165 170 175
Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr
180 185 190
Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ser Gln Arg Met Glu Pro
195 200 205
Arg Ala Pro Trp Ile Glu Gln Glu Gly Pro Glu Tyr Trp Asp Gly Glu
210 215 220
Thr Arg Lys Val Lys Ala His Ser Gln Thr His Arg Val Asp Leu Gly
225 230 235 240
Thr Leu Arg Gly Ala Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly Ser His Thr Val
245 250 255
Gln Arg Met Tyr Gly Cys Asp Val Gly Ser Asp Trp Arg Phe Leu Arg
260 265 270
Gly Tyr His Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Lys
275 280 285
Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Met Ala Ala Gln Thr Thr
290 295 300
Lys His Lys Trp Glu Ala Ala His Val Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr
305 310 315 320
Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Thr Leu Gln Arg Thr Asp Ala Pro Lys Thr His Met Thr His
340 345 350
His Ala Val Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Ser
355 360 365
Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp
370 375 380
Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly
385 390 395 400
Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser Gly Gln Glu Gln
405 410 415
Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro Lys Pro Leu Thr
420 425 430
Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser Gln Pro Thr Ile Pro Ile Val Gly Ile
435 440 445
Ile Ala Gly Leu Val Leu Phe Gly Ala Val Ile Thr Gly Ala Val Val
450 455 460
Ala Ala Val Met Trp Arg Arg Lys Ser Ser
465 470
<210> 42
<211> 1425
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 42
atgagccgca gcgtggcgct ggcggtgctg gcgctgctga gcctgagcgg cctggaagcg 60
ggtatcctcg gatttgtgtt tacacttggt ggaggagcta gcggaggtgg tggtagtggt 120
ggtggtggtt ccatacaaag aactccaaag atccaagttt acagtagaca tcctgctgaa 180
aacggtaaat ctaatttctt gaactgttac gtctccggtt tccacccaag tgatatagaa 240
gttgacttgt tgaaaaatgg tgaaagaatc gaaaaggttg aacattcaga tttgtctttt 300
tctaaggact ggtccttcta tttgttgtac tacacagagt tcactccaac tgaaaaggat 360
gaatacgctt gcagagttaa tcatgtaacc ttgtctcaac ctaaaatcgt taagtgggat 420
agagacatgg gtggtggcgg cagtggtggc gggggcagcg gtggtggggg cagcggtggt 480
ggtggttccc atagtatgag atatttcttt acttctgttt caagaccagg tagaggtgaa 540
cctagattca tcgcagtcgg ttacgttgat gacacacaat ttgtaagatt cgattccgac 600
gctgcaagtc aaagaatgga accaagagca ccttggattg aacaagaagg tccagaatat 660
tgggatggtg aaactagaaa agttaaggcc cattctcaaa ctcacagagt agatttgggt 720
acattaagag gtgcttataa tcaatctgaa gcaggttcac atacagtaca aagaatgtac 780
ggttgtgatg tcggttcaga ctggagattt ttgagaggtt atcaccaata tgcttacgat 840
ggtaaagact acattgcatt gaaggaagat ttgagatcct ggaccgccgc tgacatggca 900
gcccaaacta caaaacataa gtgggaagct gcacacgtag cagaacaatt gagagcctat 960
ttggaaggta catgtgtcga atggttgaga agatacttag aaaacggtaa agaaacattg 1020
caaagaaccg atgctccaaa gactcatatg acacatcacg ccgttagtga tcacgaagct 1080
actttgagat gctgggcatt atctttttac cctgccgaaa tcacattgac ctggcaaaga 1140
gatggtgaag accaaaccca agatactgaa ttagttgaaa ccagaccagc aggtgacggt 1200
actttccaaa aatgggccgc tgttgtagtc ccttcaggtc aagaacaaag atacacatgc 1260
catgtccaac acgaaggttt accaaagcca ttgacattga gatgggaacc atcctctcag 1320
cctacaatac caatagtcgg cataatcgct ggactggtcc tgttcggggc ggtaatcacg 1380
ggagctgtag tcgctgcggt gatgtggcgc agaaaaagct cctga 1425
<210> 43
<211> 273
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 43
Met Gly His Thr Arg Arg Gln Gly Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro Tyr
1 5 10 15
Leu Asn Phe Phe Gln Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Ser His Phe Cys
20 25 30
Ser Gly Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu
35 40 45
Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile
50 55 60
Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp
65 70 75 80
Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr
85 90 95
Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly
100 105 110
Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg
115 120 125
Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr
130 135 140
Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile
145 150 155 160
Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu
165 170 175
Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp
180 185 190
Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met
195 200 205
Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg
210 215 220
Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro
225 230 235 240
Asp Asn Leu Leu Pro Ser Trp Ala Ile Thr Leu Ile Ser Val Asn Gly
245 250 255
Ile Phe Val Ile Cys Cys Leu Thr Tyr Cys Phe Ala Pro Arg Cys Arg
260 265 270
Glu
<210> 44
<211> 822
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 44
atgggtcata cacgccgcca aggaacctca ccatctaagt gcccatatct gaatttcttt 60
caacttctcg tgctggcggg gctcagtcat ttctgcagtg gggtcattca cgttactaaa 120
gaggtcaagg aggtcgcaac attgagttgt ggccataacg tatcagttga agaactcgcg 180
cagacacgga tttactggca aaaggaaaag aagatggtgt tgacaatgat gagcggtgac 240
atgaacattt ggccagagta caaaaatcga acgatattcg atataaccaa taacttgtcc 300
atagtaatac ttgccttgcg accttctgac gagggaacgt atgaatgtgt agtgcttaag 360
tatgaaaaag atgcctttaa gcgggaacac ttggctgagg ttacactctc cgttaaggcg 420
gactttccta cgccgtctat atccgacttc gagataccca cttctaacat tcgacgcatc 480
atttgctcaa cctcaggtgg tttcccagag cctcacttga gctggctgga gaatggcgaa 540
gaacttaacg caatcaatac cacggtgtcc caagacccgg agacagagct gtacgccgtg 600
tcatccaaac tggattttaa catgacgaca aatcatagtt tcatgtgtct gatcaaatat 660
gggcatctca gggtgaatca gacttttaat tggaacacta ccaaacaaga gcacttccca 720
gataatctgt tgccaagctg ggcgataact cttatctccg tcaacggtat cttcgtaatt 780
tgctgcctca cctattgttt cgcgcctcga tgccgagaat ga 822
<210> 45
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 45
Met Asp Pro Gln Cys Thr Met Gly Leu Ser Asn Ile Leu Phe Val Met
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ser Gly Ala Ala Pro Leu Lys Ile Gln Ala Tyr Phe
20 25 30
Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln Asn Gln
35 40 45
Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn Leu Val
50 55 60
Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser Val His Ser
65 70 75 80
Lys Tyr Met Gly Arg Thr Ser Phe Asp Ser Asp Ser Trp Thr Leu Arg
85 90 95
Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln Cys Ile Ile
100 105 110
His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln Met Asn Ser
115 120 125
Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile Val Pro Ile
130 135 140
Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys Ser Ser Ile
145 150 155 160
His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu Arg Thr Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Val Met Gln Lys Ser Gln Asp Asn
180 185 190
Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val Ser Phe Pro
195 200 205
Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu Thr Asp Lys
210 215 220
Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu Asp Pro Gln
225 230 235 240
Pro Pro Pro Asp His Ile Pro Trp Ile Thr Ala Val Leu Pro Thr Val
245 250 255
Ile Ile Cys Val Met Val Phe Cys Leu Ile Leu Trp Lys Trp Lys Lys
260 265 270
Lys Lys Arg
275
<210> 46
<211> 828
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 46
atggatccgc aatgcacaat ggggcttagc aacattctct ttgtaatggc ttttctcctg 60
tccggtgcag cgcccctcaa gattcaggca tattttaacg aaaccgcgga cctcccttgt 120
cagttcgcaa atagtcagaa tcaaagtctc agtgagttgg tcgtattttg gcaggatcaa 180
gagaatctcg tcctgaacga ggtttacctg ggcaaagaga agtttgattc cgtgcatagt 240
aagtacatgg gtcgcacgtc ctttgactcc gacagctgga cacttaggct gcacaacctc 300
cagatcaaag ataagggtct ttaccagtgc attatacacc ataaaaaacc tactgggatg 360
atcaggattc accagatgaa cagcgagttg tcagtgttgg caaatttctc acaaccagaa 420
atagtaccta tctcaaacat caccgaaaac gtatatatta acctcacctg ttctagtatc 480
catggttatc cagagccaaa gaaaatgtcc gtgttgctga gaacaaagaa ctctacaata 540
gagtacgacg gagtgatgca aaaatcccag gacaacgtaa cagaactgta cgatgttagc 600
atctctcttt ctgtgagctt tcctgatgtg acatccaaca tgaccatttt ttgcatactc 660
gaaacagaca aaacgcgact tttgtcctcc cccttttcaa tcgagttgga ggatccccaa 720
cctccccccg accatatccc gtggatcacc gctgttcttc ctaccgtaat catctgtgtc 780
atggtattct gccttattct ctggaaatgg aagaaaaaga agcgatga 828
<210> 47
<211> 551
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 47
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Ile Gln
20 25 30
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val
35 40 45
Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp
50 55 60
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr
65 70 75 80
Asn Lys Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
85 90 95
Gly Arg Asp Ser Ser Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu Asp Ile
100 105 110
Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly
115 120 125
Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Lys Pro Thr Val
130 135 140
Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Gly Thr Gly Ser Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Phe Val Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys
165 170 175
Trp Lys Val Asp Gly Ser Glu Lys Arg Asp Gly Val Leu Gln Ser Val
180 185 190
Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
195 200 205
Ser Leu Thr Lys Ala Asp Tyr Glu Arg His Asn Leu Tyr Thr Cys Glu
210 215 220
Val Thr His Lys Thr Ser Thr Ala Ala Ile Val Lys Thr Leu Asn Arg
225 230 235 240
Asn Glu Cys Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
245 250 255
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Pro Cys Thr Leu Leu
260 265 270
Leu Leu Leu Ala Ala Ala Leu Ala Pro Thr Gln Thr Arg Ala Glu Val
275 280 285
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Lys Ser Leu
290 295 300
Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Gly Met
305 310 315 320
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Ser Val Ala Tyr
325 330 335
Ile Thr Ser Ser Ser Ile Asn Ile Lys Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
340 345 350
Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Leu Leu Phe Leu Gln
355 360 365
Met Asn Ile Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
370 375 380
Phe Asp Trp Asp Lys Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val
385 390 395 400
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Ala
405 410 415
Cys Asp Ser Thr Thr Ser Thr Thr Asn Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu
420 425 430
Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ile Trp Asn Ser Gly
435 440 445
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu His Ser Gly
450 455 460
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro
465 470 475 480
Ser Gln Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr
485 490 495
Val Asp Leu Lys Ile Glu Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile
500 505 510
Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val Val Ile Ser Ala Ile
515 520 525
Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu Ile Ile Leu Ile Met
530 535 540
Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg
545 550
<210> 48
<211> 1656
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 48
atggaaaccg acaccttgct cctgtgggtt ctcctgttgt gggtgccggg atcaacggga 60
gctgattaca aggatgacga cgataaggac attcaaatga cccagtctcc ttccagcctg 120
ccagcgagcc tgggggacag agtgaccatt aactgtcagg cttcacagga tattagcaat 180
tacctcaact ggtatcaaca gaagccaggc aaggccccca aactgctcat ttattacacg 240
aacaaactgg cggacggtgt tccttccaga tttagcggct ccggttccgg gcgggacagt 300
agctttacta taagcagttt ggaatccgag gacataggtt cctattactg ccagcagtat 360
tacaattacc cttggacatt tggtccgggt actaagctcg agataaagcg ggccgatgcc 420
aagcccaccg tatcaatctt cccgccatcc agtgagcagc tcggtacagg aagcgcgact 480
ctggtttgtt tcgttaacaa tttttatcct aaggacataa acgttaagtg gaaggtagac 540
ggaagcgaga aacgagatgg tgtattgcag agtgtcacag accaggattc caaagactcc 600
acatactccc tctcctcaac tcttagtctt acgaaggctg attacgaaag gcacaacctg 660
tatacgtgtg aggtcactca taaaaccagt actgcggcga ttgtaaaaac gctgaacagg 720
aacgaatgtg gaagtggtgc tacgaacttc tcactgctta agcaagctgg agatgttgag 780
gaaaaccctg gaccaatggt gccgtgcacc ctccttttgc ttttggccgc tgcgttggct 840
ccaacccaga ctagggcaga agtacagctt gtggaaagcg gcggagggct tgtgcagcct 900
ggcaaatccc tcaaactcag ttgtgaggct agtggcttca catttagcgg gtacggtatg 960
cactgggtcc gacaggcacc tgggcgcgga ttggaaagcg tcgcatacat tacaagctca 1020
agcataaata taaaatatgc ggatgctgtc aaggggagat tcaccgtttc tagggataac 1080
gcgaagaacc ttttgttcct gcaaatgaac attctcaaga gcgaggacac ggctatgtac 1140
tattgtgcta ggttcgactg ggacaagaat tattggggac aaggtactat ggttacagta 1200
agtagtgcta aaactactgc tccgtcagta tatcccctcg caccagcctg cgattctact 1260
accagcacta ctaatacagt aacactcggg tgcctcgtga aggggtattt ccctgaacca 1320
gttacggtca tctggaatag tggggccttg actagtggtg tacatacgtt cccatccgtc 1380
cttcactcag gactctacag cctcagctca agtgttaccg taccctcttc aacatggccg 1440
tctcagacag ttacgtgcaa cgtcgctcat cctgcaagtt ccacgactgt ggaccttaaa 1500
attgaagccg tcggccagga cacccaggag gtaattgttg tcccacattc acttccattc 1560
aaggtggtcg tgatctctgc gatcctcgcg ctcgtcgttt tgacgatcat tagcctcatc 1620
atcctcatca tgttgtggca gaaaaagccc cggtaa 1656
<210> 49
<211> 555
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 49
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Tyr Glu Leu
20 25 30
Ile Gln Pro Ser Ser Ala Ser Val Thr Val Gly Glu Thr Val Lys Ile
35 40 45
Thr Cys Ser Gly Asp Gln Leu Pro Lys Asn Phe Ala Tyr Trp Phe Gln
50 55 60
Gln Lys Ser Asp Lys Asn Ile Leu Leu Leu Ile Tyr Met Asp Asn Lys
65 70 75 80
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr
85 90 95
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ala
100 105 110
Tyr Tyr Cys Leu Ser Ser Tyr Gly Asp Asn Asn Asp Leu Val Phe Gly
115 120 125
Ser Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu Arg Gly Pro Lys Ser Ser Pro Lys
130 135 140
Val Thr Val Phe Pro Pro Ser Pro Glu Glu Leu Arg Thr Asn Lys Ala
145 150 155 160
Thr Leu Val Cys Leu Val Asn Asp Phe Tyr Pro Gly Ser Ala Thr Val
165 170 175
Thr Trp Lys Ala Asn Gly Ala Thr Ile Asn Asp Gly Val Lys Thr Thr
180 185 190
Lys Pro Ser Lys Gln Gly Gln Asn Tyr Met Thr Ser Ser Tyr Leu Ser
195 200 205
Leu Thr Ala Asp Gln Trp Lys Ser His Asn Arg Val Ser Cys Gln Val
210 215 220
Thr His Glu Gly Glu Thr Val Glu Lys Ser Leu Ser Pro Ala Glu Cys
225 230 235 240
Leu Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp
245 250 255
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Pro Cys Thr Leu Leu Leu Leu
260 265 270
Leu Ala Ala Ala Leu Ala Pro Thr Gln Thr Arg Ala Glu Val Tyr Leu
275 280 285
Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Ser Ser Leu Lys Val
290 295 300
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Trp Met Tyr Trp
305 310 315 320
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys
325 330 335
Asn Ile Pro Asn Asn Tyr Ala Thr Glu Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly
340 345 350
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Arg Asn Ser Ile Tyr Leu Gln
355 360 365
Met Asn Arg Leu Arg Val Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg
370 375 380
Ala Gly Arg Phe Asp His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val
385 390 395 400
Thr Val Ser Ser Ala Thr Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala
405 410 415
Pro Ala Cys Asp Ser Thr Thr Ser Thr Thr Asp Thr Val Thr Leu Gly
420 425 430
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
435 440 445
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu His
450 455 460
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr
465 470 475 480
Trp Pro Lys Gln Pro Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
485 490 495
Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Ala Val Gly Gln Asp Thr
500 505 510
Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu Pro Phe Lys Val Val Val
515 520 525
Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu Thr Ile Ile Ser Leu Ile
530 535 540
Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro Arg
545 550 555
<210> 50
<211> 1668
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 50
atggaaaccg acaccttgct cctgtgggtt ctcctgttgt gggtgccggg atcaacggga 60
gctgattaca aggatgacga cgataagtat gaattgatcc aaccctccag tgcgagtgtc 120
actgtcggtg agaccgttaa aataacttgt agcggcgacc aacttccgaa gaactttgct 180
tactggtttc aacaaaagtc agacaagaat atattgcttt tgatatatat ggacaataag 240
agacccagtg ggattccaga gagattttcc ggctcaacct ctggaacaac agccacactt 300
acgatatcag gggcccagcc tgaagacgag gcagcgtact actgcctttc ctcctacgga 360
gataataacg atcttgtgtt cggctccgga acacagctta ccgttctgcg gggaccaaag 420
agcagtccca aagtaaccgt ctttccccca agccccgagg agcttaggac taataaagcg 480
acgctggtct gtcttgtcaa tgacttttac cctggctcag ccacagtgac atggaaggca 540
aatggggcca ctattaacga cggtgtcaag actacgaagc caagcaaaca ggggcaaaac 600
tacatgacaa gcagctactt gagtttgact gcggaccagt ggaagtctca caatagagtt 660
agctgtcaag tcacacatga aggcgagact gttgaaaaat cactctcccc tgcggaatgc 720
ttgggaagtg gtgctacgaa cttctcactg cttaagcaag ctggagatgt tgaggaaaac 780
cctggaccaa tggtgccgtg caccctcctt ttgcttttgg ccgctgcgtt ggctccaacc 840
cagactaggg cagaggttta tcttgttgag tccggaggtg acttggtgca gcctggctct 900
tcccttaagg tctcatgcgc cgcatccggc tttacattct ctgatttttg gatgtattgg 960
gttcgccagg ctcctggtaa agggctggaa tgggtgggca gaatcaagaa catccccaat 1020
aactacgcta cagaatatgc cgactcagtg agggggcgct tcactatatc acgagacgat 1080
tcacggaact ctatttatct gcagatgaac cggttgaggg ttgatgacac cgcgatatat 1140
tattgcacca gagctggcag gtttgaccac tttgactact ggggacaggg tacgatggtg 1200
actgtgagta gcgcaacgac aaccgcacct tcagtgtacc cactcgctcc tgcttgcgac 1260
tccaccacta gcacgacaga caccgtcact ctcggatgtt tggtaaaagg atattttcca 1320
gaacctgtca ccgtttcttg gaatagtggc gcattgactt caggtgtcca tacgttccct 1380
tccgtcttgc acagtggact gtactcattg tcatctagtg ttacagtacc gtcctccaca 1440
tggccgaagc agccgataac ttgtaatgtc gcccatccag cctcctccac taaggtggac 1500
aagaaaatag agcctagagc cgtcggccag gacacccagg aggtaattgt tgtcccacat 1560
tcacttccat tcaaggtggt cgtgatctct gcgatcctcg cgctcgtcgt tttgacgatc 1620
attagcctca tcatcctcat catgttgtgg cagaaaaagc cccggtaa 1668
<210> 51
<211> 512
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 51
Met Asn Phe Leu Leu Leu Thr Phe Ile Val Leu Pro Leu Cys Ser His
1 5 10 15
Ala Lys Phe Ser Ile Val Phe Pro Gln Ser Gln Lys Gly Asn Trp Lys
20 25 30
Asn Val Pro Ser Ser Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Gln Asn
35 40 45
Trp His Asn Asp Leu Leu Gly Ile Thr Met Lys Val Lys Met Pro Lys
50 55 60
Thr His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ala Lys
65 70 75 80
Trp Ile Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr
85 90 95
His Ser Ile His Ser Ile Gln Pro Thr Ser Glu Gln Cys Lys Glu Ser
100 105 110
Ile Lys Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Met Ser Pro Gly Phe Pro Pro
115 120 125
Gln Asn Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ser Val Ala Val Val Val
130 135 140
Gln Ala Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp
145 150 155 160
Ile Asp Ser Gln Phe Pro Asn Gly Lys Cys Glu Thr Glu Glu Cys Glu
165 170 175
Thr Val His Asn Ser Thr Val Trp Tyr Ser Asp Tyr Lys Val Thr Gly
180 185 190
Leu Cys Asp Ala Thr Leu Val Asp Thr Glu Ile Thr Phe Phe Ser Glu
195 200 205
Asp Gly Lys Lys Glu Ser Ile Gly Lys Pro Asn Thr Gly Tyr Arg Ser
210 215 220
Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Lys Gly Asp Lys Val Cys Lys Met Asn Tyr
225 230 235 240
Cys Lys His Ala Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Phe
245 250 255
Val Asp Gln Asp Val Tyr Ala Ala Ala Lys Leu Pro Glu Cys Pro Val
260 265 270
Gly Ala Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu
275 280 285
Ile Leu Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr
290 295 300
Trp Ser Lys Ile Arg Ser Lys Gln Pro Val Ser Pro Val Asp Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile
325 330 335
Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Ile Asp Ile
340 345 350
Asp Asn Pro Ile Ile Ser Lys Met Val Gly Lys Ile Ser Gly Ser Gln
355 360 365
Thr Glu Arg Glu Leu Trp Thr Glu Trp Phe Pro Tyr Glu Gly Val Glu
370 375 380
Ile Gly Pro Asn Gly Ile Leu Lys Thr Pro Thr Gly Tyr Lys Phe Pro
385 390 395 400
Leu Phe Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Lys Thr
405 410 415
Ser Gln Ala Glu Val Phe Glu His Pro His Leu Ala Glu Ala Pro Lys
420 425 430
Gln Leu Pro Glu Glu Glu Thr Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Ile Ser
435 440 445
Lys Asn Pro Val Glu Leu Ile Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser
450 455 460
Thr Val Val Thr Phe Phe Phe Ala Ile Gly Val Phe Ile Leu Leu Tyr
465 470 475 480
Val Val Ala Arg Ile Val Ile Ala Val Arg Tyr Arg Tyr Gln Gly Ser
485 490 495
Asn Asn Lys Arg Ile Tyr Asn Asp Ile Glu Met Ser Arg Phe Arg Lys
500 505 510
<210> 52
<211> 1539
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 52
atgaactttc tgctgctcac gtttatcgta ctcccgttgt gctctcatgc gaaattttca 60
atagtctttc ctcagtccca gaaagggaat tggaaaaatg ttccctccag ttaccactat 120
tgtccctcct cctctgacca aaactggcac aatgacttgc tcgggattac aatgaaagta 180
aagatgccga aaacccataa agccatacag gcggatgggt ggatgtgtca cgctgcgaag 240
tggatcacta catgcgattt ccggtggtat ggccctaagt acattacaca ctctatccat 300
agcatacagc cgacatcaga gcaatgcaaa gagagtatta aacagaccaa acaagggaca 360
tggatgagcc ctggctttcc acctcagaat tgtgggtacg cgaccgtcac ggatagtgtc 420
gctgttgtgg tgcaggccac gccacatcac gtactcgtag atgaatatac tggtgaatgg 480
atcgactccc aattcccgaa tgggaaatgt gagacggaag agtgcgaaac agtgcataac 540
tcaaccgttt ggtattccga ttacaaggtt actggtcttt gcgacgccac cctcgtggat 600
accgagatca cgttttttag tgaggatggc aagaaagagt caataggcaa acctaatact 660
ggctaccgga gtaactattt cgcttacgag aagggtgaca aggtatgtaa aatgaactat 720
tgcaagcatg cgggagtgcg actccccagt ggggtatggt tcgaatttgt tgaccaagac 780
gtatacgccg ctgcgaagtt gccagaatgc cccgtaggcg cgaccatttc agcacctacc 840
caaacgtccg ttgacgtctc cttgatactg gatgtagagc gaatcctgga ctacagtctc 900
tgccaggaaa cgtggtcaaa aataagaagt aagcagccag tttcacccgt ggatctgtct 960
tatctggcgc caaaaaaccc gggcacgggc cctgctttta ccataattaa cggaacgctt 1020
aaatacttcg aaacccgcta cattagaatc gatatagaca atcctattat cagcaagatg 1080
gtagggaaga tatctgggtc tcaaacggag cgagaattgt ggacggagtg gttcccttat 1140
gagggagtgg aaattgggcc caacgggatc ctcaagaccc caacgggtta caagttccct 1200
ctgtttatga tcggccatgg catgttggac agtgacttgc acaaaacatc tcaggcagag 1260
gttttcgaac atccacattt ggcggaggcg cccaagcaac ttccagaaga agaaactctc 1320
ttctttggag atacaggcat ttcaaaaaat cctgtagaac tgatagaagg gtggttctct 1380
tcctggaaat caacggttgt cacgtttttc tttgcaatag gcgtatttat actcctgtac 1440
gtcgtagccc gcattgtgat cgcagtacga tacagatacc agggcagtaa caataaacgc 1500
atatataatg acatcgaaat gtcaaggttc cgaaagtga 1539
<210> 53
<211> 512
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 53
Met Asn Phe Leu Leu Leu Thr Phe Ile Val Leu Pro Leu Cys Ser His
1 5 10 15
Ala Lys Phe Ser Ile Val Phe Pro Gln Ser Gln Lys Gly Asn Trp Lys
20 25 30
Asn Val Pro Ser Ser Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Gln Asn
35 40 45
Trp His Asn Asp Leu Leu Gly Ile Thr Met Lys Val Lys Met Pro Gln
50 55 60
Thr His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ala Lys
65 70 75 80
Trp Ile Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr
85 90 95
His Ser Ile His Ser Ile Gln Pro Thr Ser Glu Gln Cys Lys Glu Ser
100 105 110
Ile Lys Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Met Ser Pro Gly Phe Pro Pro
115 120 125
Gln Asn Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ser Val Ala Val Val Val
130 135 140
Gln Ala Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp
145 150 155 160
Ile Asp Ser Gln Phe Pro Asn Gly Lys Cys Glu Thr Glu Glu Cys Glu
165 170 175
Thr Val His Asn Ser Thr Val Trp Tyr Ser Asp Tyr Lys Val Thr Gly
180 185 190
Leu Cys Asp Ala Thr Leu Val Asp Thr Glu Ile Thr Phe Phe Ser Glu
195 200 205
Asp Gly Lys Lys Glu Ser Ile Gly Lys Pro Asn Thr Gly Tyr Arg Ser
210 215 220
Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Lys Gly Asp Lys Val Cys Lys Met Asn Tyr
225 230 235 240
Cys Lys His Ala Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Phe
245 250 255
Val Asp Gln Asp Val Tyr Ala Ala Ala Lys Leu Pro Glu Cys Pro Val
260 265 270
Gly Ala Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu
275 280 285
Ile Leu Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr
290 295 300
Trp Ser Lys Ile Arg Ser Lys Gln Pro Val Ser Pro Val Asp Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile
325 330 335
Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Ile Asp Ile
340 345 350
Asp Asn Pro Ile Ile Ser Lys Met Val Gly Lys Ile Ser Gly Ser Gln
355 360 365
Thr Glu Ala Glu Leu Trp Thr Glu Trp Phe Pro Tyr Glu Gly Val Glu
370 375 380
Ile Gly Pro Asn Gly Ile Leu Lys Thr Pro Thr Gly Tyr Lys Phe Pro
385 390 395 400
Leu Phe Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Lys Thr
405 410 415
Ser Gln Ala Glu Val Phe Glu His Pro His Leu Ala Glu Ala Pro Lys
420 425 430
Gln Leu Pro Glu Glu Glu Thr Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Ile Ser
435 440 445
Lys Asn Pro Val Glu Leu Ile Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser
450 455 460
Thr Val Val Thr Phe Phe Phe Ala Ile Gly Val Phe Ile Leu Leu Tyr
465 470 475 480
Val Val Ala Arg Ile Val Ile Ala Val Arg Tyr Arg Tyr Gln Gly Ser
485 490 495
Asn Asn Lys Arg Ile Tyr Asn Asp Ile Glu Met Ser Arg Phe Arg Lys
500 505 510
<210> 54
<211> 1539
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多核苷酸
<400> 54
atgaactttc tgctgctcac gtttatcgta ctcccgttgt gctctcatgc gaaattttca 60
atagtctttc ctcagtccca gaaagggaat tggaaaaatg ttccctccag ttaccactat 120
tgtccctcct cctctgacca aaactggcac aatgacttgc tcgggattac aatgaaagta 180
aagatgccgc agacccataa agccatacag gcggatgggt ggatgtgtca cgctgcgaag 240
tggatcacta catgcgattt ccggtggtat ggccctaagt acattacaca ctctatccat 300
agcatacagc cgacatcaga gcaatgcaaa gagagtatta aacagaccaa acaagggaca 360
tggatgagcc ctggctttcc acctcagaat tgtgggtacg cgaccgtcac ggatagtgtc 420
gctgttgtgg tgcaggccac gccacatcac gtactcgtag atgaatatac tggtgaatgg 480
atcgactccc aattcccgaa tgggaaatgt gagacggaag agtgcgaaac agtgcataac 540
tcaaccgttt ggtattccga ttacaaggtt actggtcttt gcgacgccac cctcgtggat 600
accgagatca cgttttttag tgaggatggc aagaaagagt caataggcaa acctaatact 660
ggctaccgga gtaactattt cgcttacgag aagggtgaca aggtatgtaa aatgaactat 720
tgcaagcatg cgggagtgcg actccccagt ggggtatggt tcgaatttgt tgaccaagac 780
gtatacgccg ctgcgaagtt gccagaatgc cccgtaggcg cgaccatttc agcacctacc 840
caaacgtccg ttgacgtctc cttgatactg gatgtagagc gaatcctgga ctacagtctc 900
tgccaggaaa cgtggtcaaa aataagaagt aagcagccag tttcacccgt ggatctgtct 960
tatctggcgc caaaaaaccc gggcacgggc cctgctttta ccataattaa cggaacgctt 1020
aaatacttcg aaacccgcta cattagaatc gatatagaca atcctattat cagcaagatg 1080
gtagggaaga tatctgggtc tcaaacggag gccgaattgt ggacggagtg gttcccttat 1140
gagggagtgg aaattgggcc caacgggatc ctcaagaccc caacgggtta caagttccct 1200
ctgtttatga tcggccatgg catgttggac agtgacttgc acaaaacatc tcaggcagag 1260
gttttcgaac atccacattt ggcggaggcg cccaagcaac ttccagaaga agaaactctc 1320
ttctttggag atacaggcat ttcaaaaaat cctgtagaac tgatagaagg gtggttctct 1380
tcctggaaat caacggttgt cacgtttttc tttgcaatag gcgtatttat actcctgtac 1440
gtcgtagccc gcattgtgat cgcagtacga tacagatacc agggcagtaa caataaacgc 1500
atatataatg acatcgaaat gtcaaggttc cgaaagtga 1539

Claims (125)

1.一种筛选细胞群体的方法，该方法包括：
(i)提供逆转录病毒，其包含：包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及编码报告子的核酸；
(ii)将逆转录病毒与细胞群体组合；和
(iii)根据报告子的存在或不存在对细胞群体进行分选。
2.一种筛选细胞群体的方法，该方法包括：
(i)提供逆转录病毒，其包含
包含非病毒膜结合蛋白的核酸，所述核酸包含结构：S-ETD-MBD-IRES-R，其中S编码信号序列，ETD编码细胞外靶向结构域；MBD编码膜结合结构域，IRES编码内部核糖体进入位点，并且R编码报告子；和
包含削弱其天然功能的至少一个突变的突变病毒包膜蛋白；
(ii)将逆转录病毒与细胞群体组合；和
(iii)根据报告子的存在或不存在对细胞群体进行分选。
3.权利要求1或2中任一项的方法，其中细胞是体细胞，可选地是抗原特异性细胞。
4.权利要求3的方法，其中抗原特异性细胞是T细胞或B细胞。
5.权利要求1至3中任一项的方法，其中逆转录病毒是慢病毒。
6.权利要求1至5中任一项的方法，其中病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。
7.权利要求6的方法，其中VSV-G包膜蛋白的至少一个突变是选自由H8、K47、Y209和R354组成的组的突变。
8.权利要求6的方法，其中麻疹病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由Y481、R533、S548和F549组成的组的突变。
9.权利要求6的方法，其中尼帕病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由E501、W504、Q530和E533组成的组的突变。
10.权利要求6的方法，其中可卡耳病毒G蛋白的至少一个突变是选自由K64和R371组成的组的突变。
11.权利要求1至10中任一项的方法，其中非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。
12.权利要求1至11中任一项的方法，其中细胞外靶向结构域是蛋白质、肽或抗体。
13.权利要求12的方法，其中蛋白质是白细胞介素13或CD80蛋白质结构域。
14.权利要求12的方法，其中抗体是抗CD19抗体、抗TCR抗体或抗CD3抗体。
15.权利要求1至14中任一项的方法，其中报告子是荧光蛋白(例如，绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白)或抗生素抗性标志物。
16.权利要求1至15中任一项的方法，其中接头位于膜结合结构域和细胞外靶向结构域之间。
17.权利要求16的方法，其中接头是刚性接头，可选地包括PDGFR柄或CD8α柄。
18.权利要求16的方法，其中接头是柔性接头，可选地包括包含GAPGAS(SEQ ID NO:5)或GGGGS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列。
19.权利要求16的方法，其中接头是寡聚化的接头，可选地包含IgG4铰链或可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列。
20.权利要求1至19中任一项的方法，其中逆转录病毒在(ii)中与细胞群体组合1分钟至72小时。
21.权利要求1至20中任一项的方法，其中逆转录病毒和细胞群体在(ii)中在存在以下的情况下组合：
a)细胞培养基，可选RPMI或DMEM细胞培养基；
b)缓冲盐水溶液，可选磷酸盐缓冲盐水或HEPES缓冲盐水；和/或
c)逆转录病毒转导的增强剂，可选硫酸肝素、聚凝胺、硫酸鱼精蛋白和/或葡聚糖。
22.权利要求1至21中任一项的方法，其中逆转录病毒和细胞群体在(ii)中在4℃至42℃范围内的温度下组合。
23.权利要求1至22中任一项的方法，其中细胞外靶向结构域能够结合存在于细胞群体的子集的细胞表面上的同源蛋白。
24.权利要求23的方法，其中同源蛋白质是蛋白质受体。
25.权利要求23或24中任一项的方法，其中单个逆转录病毒的细胞外靶向结构域在(ii)期间与存在于单个T细胞的细胞表面上的同源蛋白质结合，导致逆转录病毒进入T细胞。
26.权利要求1至25中任一项的方法，进一步包括在(ii)和(iii)之间洗涤细胞群体，可选地使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)，可选从细胞群体中移除逆转录病毒。
27.权利要求1至26中任一项的方法，其中使用荧光活化细胞分选、单细胞下一代测序或抗生素选择来对细胞群体进行分选。
28.权利要求1至27中任一项的方法，其中细胞群体是从受试者分离的细胞群体，可选地其中受试者是人类。
29.权利要求28的方法，其中细胞群体是从受试者的血液或肿瘤中分离的。
30.权利要求1至29中任一项的方法，其中在与逆转录病毒组合之前将细胞群体维持在液体培养中。
31.权利要求1至30中任一项的方法，还包括第二逆转录病毒，其中与所述第一逆转录病毒相比，第二逆转录病毒包含不同的细胞外靶向结构域和/或不同的报告子。
32.权利要求2至31中任一项的方法，其中：
a)信号序列包含SEQ ID NO:1(METDTLLLWVLLLWVPGSTG)或SEQ ID NO:2(MSRSVALAVLALLSLSGLEA)；和/或
b)IRES编码源自脑心肌炎病毒(EMCV)的序列。
33.一种逆转录病毒，包括
i)包含非病毒膜结合蛋白的核酸，所述核酸包含结构：S-ETD-MBD-IRES-R，其中S编码信号序列，ETD编码细胞外靶向结构域；MBD编码膜结合结构域，IRES编码内部核糖体进入位点，并且R编码报告子；和
ii)包含削弱其天然功能的至少一个突变的突变病毒包膜蛋白。
34.权利要求33的逆转录病毒，其中逆转录病毒是慢病毒。
35.权利要求33或34中任一项的逆转录病毒，其中病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。
36.权利要求35的逆转录病毒，其中VSV-G包膜蛋白的至少一个突变是选自由H8、K47、Y209和R354组成的组的突变。
37.权利要求36的逆转录病毒，其中麻疹病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由Y481、R533、S548和F549组成的组的突变。
38.权利要求36的逆转录病毒，其中尼帕病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由E501、W504、Q530和E533组成的组的突变。
39.权利要求36的逆转录病毒，其中可卡耳病毒G蛋白的至少一个突变是选自由K64和R371组成的组的突变。
40.权利要求33至39中任一项的逆转录病毒，其中非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。
41.权利要求33至40中任一项的逆转录病毒，其中细胞外靶向结构域是蛋白质、肽或抗体。
42.权利要求41的逆转录病毒，其中蛋白质是白细胞介素13或CD80蛋白质结构域。
43.权利要求41的逆转录病毒，其中抗体是抗CD19抗体、抗TCR抗体或抗CD3抗体。
44.权利要求33至43中任一项的逆转录病毒，其中报告子是荧光蛋白(例如，绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白)或抗生素抗性标志物。
45.权利要求33至44中任一项的逆转录病毒，其中接头位于膜结合结构域和细胞外靶向结构域之间。
46.权利要求45的逆转录病毒，其中接头是刚性接头，可选地包含PDGFR柄或CD8α柄。
47.权利要求45的逆转录病毒，其中接头是柔性接头，可选地包括包含GAPGAS(SEQ IDNO:5)或GGGGS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列。
48.权利要求45的逆转录病毒，其中接头是寡聚化的接头，可选地包含IgG4铰链或可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列。
49.权利要求33至48中任一项的逆转录病毒，其中细胞外靶向结构域能够结合存在于细胞的细胞表面上的同源蛋白，可选地其中细胞是抗原特异性细胞(例如，T细胞或B细胞)。
50.权利要求33至49中任一项的逆转录病毒，其中信号序列包含SEQ ID NO:1(METDTLLLWVLLLWVPGSTG)或SEQ ID NO:2(MSRSVALAVLALLSLSGLEA)。
51.权利要求33至50中任一项的逆转录病毒，其中IRES编码源自脑心肌炎病毒(EMCV)的序列。
52.一种将核酸递送至细胞的方法，该方法包括：
(i)提供逆转录病毒，其包含核酸、包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白和包含能够结合细胞的同源配体的细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白；和
(ii)使逆转录病毒与细胞接触，
从而将核酸递送至细胞。
53.权利要求51的方法，其中核酸编码目标基因，可选地其中目标基因编码蛋白质。
54.权利要求52或53中任一项的方法，其中同源配体是蛋白质，可选地是蛋白质受体。
55.权利要求52至54中任一项的方法，其中逆转录病毒在(ii)期间进入或感染细胞。
56.权利要求52至55中任一项的方法，其中细胞是体细胞，可选地是抗原特异性细胞。
57.权利要求56的方法，其中抗原特异性细胞是T细胞或B细胞。
58.权利要求52至57中任一项的方法，其中逆转录病毒是慢病毒。
59.权利要求52至58中任一项的方法，其中病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。
60.权利要求59的方法，其中VSV-G包膜蛋白的至少一个突变是选自由H8、K47、Y209和R354组成的组的突变。
61.权利要求59的方法，其中麻疹病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由Y481、R533、S548和F549组成的组的突变。
62.权利要求59的方法，其中尼帕病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由E501、W504、Q530和E533组成的组的突变。
63.权利要求59的方法，其中可卡耳病毒G蛋白的至少一个突变是选自由K64和R371组成的组的突变。
64.权利要求52至63中任一项的方法，其中非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。
65.权利要求52至64中任一项的方法，其中细胞外靶向结构域是蛋白质、肽或抗体。
66.权利要求65的方法，其中蛋白质是白细胞介素13或CD80蛋白质结构域。
67.权利要求65的方法，其中抗体是抗CD19抗体、抗TCR抗体或抗CD3抗体。
68.权利要求52至67中任一项的方法，其中接头位于膜结合结构域和细胞外靶向结构域之间。
69.权利要求68的方法，其中接头是刚性接头，可选地包含PDGFR柄或CD8α柄。
70.权利要求68的方法，其中接头是柔性接头，可选地包括包含GAPGAS(SEQ ID NO:5)或GGGGS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列。
71.权利要求68的方法，其中接头是寡聚化的接头，可选地包含IgG4铰链或可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列。
72.权利要求52至71中任一项的方法，其中细胞外靶向结构域能够结合存在于T细胞的细胞表面上的同源蛋白。
73.一种检测逆转录病毒与细胞之间相互作用的方法，该方法包括：
(i)将包含逆转录病毒和细胞的样品与抗体接触，其中逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及其中抗体与逆转录病毒的细胞外靶向结构域结合；
(ii)可选地从样品中去除未结合的抗体；和
(iii)对样品进行成像以检测抗体-逆转录病毒复合物是否与细胞结合。
74.权利要求73的方法，其中抗体还包含荧光标记，可选地其中抗体与荧光标记共价连接。
75.权利要求73或74中任一项的方法，其中在(iii)中使用共聚焦或荧光显微镜对样品进行成像。
76.权利要求73至75中任一项的方法，其中细胞是体细胞，可选地是抗原特异性细胞。
77.权利要求76的方法，其中抗原特异性细胞是T细胞或B细胞。
78.权利要求73至77中任一项的方法，其中逆转录病毒是慢病毒。
79.权利要求73至78中任一项的方法，其中病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。
80.权利要求79的方法，其中VSV-G包膜蛋白的至少一个突变是选自由H8、K47、Y209和R354组成的组的突变。
81.权利要求79的方法，其中麻疹病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由Y481、R533、S548和F549组成的组的突变。
82.权利要求79的方法，其中尼帕病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由E501、W504、Q530和E533组成的组的突变。
83.权利要求79的方法，其中可卡耳病毒G蛋白的至少一个突变是选自由K64和R371组成的组的突变。
84.权利要求73至83中任一项的方法，其中非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。
85.权利要求73至84中任一项的方法，其中细胞外靶向结构域是蛋白质或肽。
86.权利要求85的方法，其中蛋白质是白细胞介素13或CD80蛋白质结构域。
87.权利要求73至86中任一项的方法，其中接头位于膜结合结构域和细胞外靶向结构域之间。
88.权利要求87的方法，其中接头是刚性接头，可选地包含PDGFR柄或CD8α柄。
89.权利要求87的方法，其中接头是柔性接头，可选地包括包含GAPGAS(SEQ ID NO:5)或GGGGS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列。
90.权利要求87的方法，其中接头是寡聚化的接头，可选地包含IgG4铰链或可形成四聚体卷曲螺旋的氨基酸序列。
91.一种逆转录病毒文库，包含多种独特的逆转录病毒，
其中每种独特的逆转录病毒包含包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及编码报告子的核酸，和
其中每种独特的逆转录病毒包含不同且独特的细胞外靶向结构域。
92.权利要求91的文库，其中文库能够针对抗原特异性细胞群体进行筛选，可选地其中抗原特异性细胞是B细胞或T细胞。
93.权利要求91或92的文库，其中文库包括至少102、至少103、至少104、至少105、至少106、至少107、至少108、至少109或至少1010种独特的逆转录病毒。
94.权利要求91至93中任一项的文库，其中每个细胞外靶向结构域包含至少5、至少10、至少15、至少20或至少50个氨基酸。
95.权利要求91至94中任一项的文库，其中非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。
96.权利要求91至95中任一项的文库，其中每个不同且独特的细胞外靶向结构域是通过定点诱变生成的。
97.一种细胞群体，其中细胞群体的子集含有逆转录病毒，所述逆转录病毒包含：包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白，包含膜结合结构域和细胞外靶向结构域的非病毒膜结合蛋白，以及编码报告子的核酸。
98.一种细胞群体，其中细胞群体的子集包含权利要求33至51中任一项的逆转录病毒。
99.权利要求97或98的群体，其中细胞是抗原特异性细胞，可选地是B细胞或T细胞。
100.权利要求97或98中任一项的群体，其中细胞群体的子集在子集的每个细胞内，可选在子集的每个细胞的细胞核内含有逆转录病毒。
101.权利要求97至100中任一项的群体，其中群体的子集表达报告子，可选地其中报告子是荧光蛋白。
102.权利要求97至101中任一项的群体，其中将含有逆转录病毒的群体的子集从不含有逆转录病毒的细胞群体中分离和/或分选出来。
103.一种逆转录病毒，其包含
i)CD80蛋白结构域；和
ii)包含削弱其天然功能的至少一个突变的突变病毒包膜蛋白。
104.权利要求103的逆转录病毒，其中逆转录病毒是慢病毒。
105.权利要求103或104中任一项的逆转录病毒，其中病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。
106.权利要求105的逆转录病毒，其中VSV-G包膜蛋白的至少一个突变是选自由H8、K47、Y209和R354组成的组的突变。
107.权利要求105的逆转录病毒，其中麻疹病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由Y481、R533、S548和F549组成的组的突变。
108.权利要求105的逆转录病毒，其中尼帕病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由E501、W504、Q530和E533组成的组的突变。
109.权利要求105的逆转录病毒，其中可卡耳病毒G蛋白的至少一个突变是选自由K64和R371组成的组的突变。
110.权利要求103至109中任一项的逆转录病毒，其中CD80蛋白结构域是细胞外结构域，可选地其中细胞外结构域结合靶细胞上的受体。
111.权利要求103至110中任一项的逆转录病毒，还包含非病毒膜结合蛋白，所述非病毒膜结合蛋白包含能够结合细胞的同源配体的细胞外靶向结构域。
112.权利要求111的逆转录病毒，其中非病毒膜结合蛋白包含主要组织相容性复合体(MHC)蛋白。
113.权利要求111或112的逆转录病毒，其中细胞外靶向结构域是蛋白质、肽或抗体。
114.一种将核酸递送至细胞的方法，该方法包括：
(i)提供逆转录病毒，其包含核酸、包含削弱其天然功能的至少一个突变的病毒包膜蛋白和CD80蛋白结构域；和
(ii)使逆转录病毒与细胞接触，
从而将核酸递送至细胞。
115.权利要求114的方法，其中核酸编码目标基因，可选地其中目标基因编码蛋白质。
116.权利要求114或115任一项的方法，其中逆转录病毒在(ii)期间进入或感染细胞。
117.权利要求114至116中任一项的方法，其中细胞是体细胞，可选地是抗原特异性细胞。
118.权利要求117的方法，其中抗原特异性细胞是T细胞或B细胞。
119.权利要求114至118中任一项的方法，其中逆转录病毒是慢病毒。
120.权利要求114至119中任一项的方法，其中病毒包膜蛋白是VSV-G包膜蛋白、麻疹病毒包膜蛋白、尼帕病毒包膜蛋白或可卡耳病毒G蛋白。
121.权利要求120的方法，其中VSV-G包膜蛋白的至少一个突变是选自由H8、K47、Y209和R354组成的组的突变。
122.权利要求120的方法，其中麻疹病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由Y481、R533、S548和F549组成的组的突变。
123.权利要求120的方法，其中尼帕病毒包膜蛋白的至少一个突变是选自由E501、W504、Q530和E533组成的组的突变。
124.权利要求120的方法，其中可卡耳病毒G蛋白的至少一个突变是选自由K64和R371组成的组的突变。
125.权利要求114至124中任一项的方法，其中CD80蛋白结构域是细胞外结构域，可选地其中细胞外结构域结合细胞上的受体。
CN202080051915.9A 2019-05-23 2020-03-23 经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送 Pending CN114127305A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962851889P 2019-05-23 2019-05-23
US62/851,889 2019-05-23
PCT/US2020/024175 WO2020236263A1 (en) 2019-05-23 2020-03-23 Ligand discovery and gene delivery via retroviral surface display

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114127305A true CN114127305A (zh) 2022-03-01

Family

ID=70416479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080051915.9A Pending CN114127305A (zh) 2019-05-23 2020-03-23 经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20200371088A1 (zh)
EP (1) EP3973065A1 (zh)
JP (1) JP2022534085A (zh)
KR (1) KR20220012291A (zh)
CN (1) CN114127305A (zh)
AU (1) AU2020278470A1 (zh)
BR (1) BR112021023353A2 (zh)
CA (1) CA3140115A1 (zh)
IL (1) IL287903A (zh)
MX (1) MX2021014304A (zh)
SG (1) SG11202112344VA (zh)
WO (1) WO2020236263A1 (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112023017213A2 (pt) * 2021-02-26 2023-11-21 Kelonia Therapeutics Inc Vetores lentivirais direcionados a linfócitos
JP2024513973A (ja) * 2021-04-16 2024-03-27 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 造血幹細胞のウイルスによる標的化
WO2023287803A2 (en) * 2021-07-15 2023-01-19 Vcreate, Inc. Compositions and methods for making novel t-cell receptors
TW202334405A (zh) 2021-12-15 2023-09-01 美商英特瑞斯生物療法公司 假型分型之病毒顆粒、包含其之組合物及其用途
WO2023240124A1 (en) * 2022-06-07 2023-12-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pseudotyped viral particles for targeting tcr-expressing cells
GB202211935D0 (en) * 2022-08-16 2022-09-28 Oxford Biomedica Ltd envelope proteins
WO2024050450A1 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Gigamune, Inc. Engineered enveloped vectors and methods of use thereof
US20240067958A1 (en) * 2022-08-31 2024-02-29 Gigamune, Inc. Engineered enveloped vectors and methods of use thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6197928B1 (en) 1997-03-14 2001-03-06 The Regents Of The University Of California Fluorescent protein sensors for detection of analytes
DE60333487D1 (de) 2002-12-13 2010-09-02 Genetix Pharmaceuticals Inc Therapeutische retrovirus-vektoren für gentherapie
EP1975239A1 (en) * 2006-09-27 2008-10-01 Bundesrepublik Deutschland, letztvertreten durch den Präsidenten des Paul-Ehrlich-Instituts Prof. Dr. Johannes Löwer Pseudotyping of retroviral vectors, methods for production and use thereof for targeted gene transfer and high-throughput screening
ES2761638T3 (es) * 2014-01-10 2020-05-20 Sirion Biotech Gmbh Vectores lentivirales pseudotipados
US20170176435A1 (en) * 2014-01-21 2017-06-22 Albert Einstein College Of Medicine, Inc. Cellular platform for rapid and comprehensive t-cell immunomonitoring
US10072067B2 (en) 2014-01-30 2018-09-11 Children's Hospital Medical Center Fetal hemoglobin for genetic correction of sickle cell disease
US9759689B2 (en) 2014-05-02 2017-09-12 The Regents Of The University Of Michigan Real-time detection and imaging of terahertz pulse radiation by using photoacoustic conversion
US11111505B2 (en) * 2016-03-19 2021-09-07 Exuma Biotech, Corp. Methods and compositions for transducing lymphocytes and regulating the activity thereof
US11970707B2 (en) 2017-09-18 2024-04-30 Children's Hospital Medical Center Strong insulator and uses thereof in gene delivery
US20200216502A1 (en) * 2017-09-22 2020-07-09 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Mutated Glycoprotein of Vesicular Stomatitis Virus

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020278470A1 (en) 2021-12-02
EP3973065A1 (en) 2022-03-30
WO2020236263A8 (en) 2020-12-24
WO2020236263A1 (en) 2020-11-26
US20200371088A1 (en) 2020-11-26
MX2021014304A (es) 2022-02-21
JP2022534085A (ja) 2022-07-27
US20240044873A1 (en) 2024-02-08
IL287903A (en) 2022-01-01
BR112021023353A2 (pt) 2022-02-01
KR20220012291A (ko) 2022-02-03
SG11202112344VA (en) 2021-12-30
CA3140115A1 (en) 2020-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114127305A (zh) 经由逆转录病毒表面展示的配体发现和基因递送
US11814641B2 (en) Retroviral and lentiviral vectors
EP3735460A1 (en) Methods and compositions for genetically modifying and expanding lymphocytes and regulating the activity thereof
EP3589733A1 (en) Methods and compositions for transducing and expanding lymphocytes and regulating the activity thereof
CN108728459B (zh) 靶向cd19的嵌合抗原受体并联合表达il-15的方法和用途
CN114230658B (zh) 新型冠状病毒特异性t细胞受体和其用途
Yu et al. Engineered cell entry links receptor biology with single-cell genomics
US20200397821A1 (en) Methods and compositions for transducing and expanding lymphocytes and regulating the activity thereof
CN116745427A (zh) 用于递送多种多核苷酸的载体***及其用途
CA3238531A1 (en) Methods and compositions for discovery of receptor-ligand specificity by engineered cell entry
CN114630909B (zh) 环状rna、包含环状rna的疫苗及用于检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒
US20180371057A1 (en) Compositions and methods for improving immunotherapy
US20220340876A1 (en) Viral targeting of hematopoietic stem cells
US20240067958A1 (en) Engineered enveloped vectors and methods of use thereof
US20230392139A1 (en) Methods and compositions for transducing and expanding lymphocytes and regulating the activity thereof
CN115124627A (zh) 一种自分泌IL2Rβγ激动剂的MSLN-CAR-NK细胞及其应用
WO2024050450A1 (en) Engineered enveloped vectors and methods of use thereof
Herrera Development of Antigen-Selective Immunotherapeutic Approaches and Discovery of Novel Immune Pathways

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination