CN114107137A - 一种丁酸梭菌及其应用和产品 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种丁酸梭菌CC02001及其应用和产品，属于微生物技术领域。本发明所述的丁酸梭菌CC02001的保藏号为：CGMCC No.20170。本发明的丁酸梭菌CC02001、其发酵液及产品，具有较强的肠道定植能力，能迅速改善宿主肠道内的微生物平衡，可应用于食品或食品添加剂中，及饲料或饲料添加剂中，且制备方法简单，适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种丁酸梭菌及其应用和产品。
背景技术
丁酸梭菌(Clostridium butyricum)属于芽孢杆菌科，梭菌属，革兰氏阳性，有芽孢，孢子卵圆，偏心或次端生。其直径为(0.6-1.2)×(3.0-7.0)μm，两端钝圆，中间部分轻度膨胀，细菌呈直杆状或稍有弯曲，单个或成对，短链，偶见有丝状菌体，周身鞭毛，能运动。孢子卵圆，偏心或次端生。革兰氏染色初培养的菌为阳性，菌稍长可变为阴性。在琼脂平板上形成白色或奶油色的不规则圆形菌落，稍突，直径为1-3mm。不水解明胶，不消化血清蛋白，能够发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖等碳水化合物产酸，一个显著的特征是产生淀粉酶，水解淀粉但不水解纤维素。水解淀粉和糖类的最终代谢产物为丁酸、醋酸和乳酸，还发现有少量的丙酸、甲酸，硝酸盐还原实验均为阴性。
丁酸梭菌不受胃酸、胆汁酸等影响，特点为在肠道内可促进益菌群的增殖和发育，抑制肠道内有害菌和腐败菌的生长，减少肠毒素的发生。并且产生B族维生素、维生素K、淀粉酶等物质。另外丁酸梭菌的主要代谢产物丁酸是肠道上皮组织细胞的再生和修复主要营养物质，对于各种原因引起的肠道上皮组织损伤有明显的修复作用。因此，丁酸梭菌对于无抗生饲料的普及有着重要的意义。
例如，专利CN201910610687.3公开了一种丁酸梭菌KMBGI 02(保藏编号CGMCCNo.17176)，该丁酸梭菌可有效抑制α葡萄糖苷酶的活性，可应用于调节肠道功能和血糖血脂，包含该丁酸梭菌或其代谢产物的组合物，可以用作降血糖、降血脂和减肥类的食品或药品。专利CN201910510790.0公开了一种丁酸梭菌SCUT620(保藏编号为GDMCC NO:60623)，该菌株可直接利用廉价淀粉基质如玉米淀粉、木薯淀粉发酵生产丁酸，具有较高的丁酸转化率；该菌株在利用淀粉发酵生产丁酸的同时还能制备丁酸梭菌活菌制剂，该方法可通过一次发酵同时生产丁酸和丁酸梭菌活菌制剂，具有工艺简单、生产成本低的优点，具有广阔的应用前景。
目前已公开的获得纯培养保藏且具备实际应用价值的丁酸梭菌种类较少，对于本领域而言，充足的微生物资源储备毫无疑问对其产业化应用有重要的实际意义。因此，开发一种用途更广泛，制备方法更适于工业化的丁酸梭菌，为生产动物饲料，提高动物机体免疫力等提供良好的技术支持。
发明内容
针对上述不足，本发明提供了一种丁酸梭菌及其应用和产品，所述的丁酸梭菌可促进益生菌的定植和增长，能迅速改善宿主肠道内的微生物平衡，可应用于食品或食品添加剂中，及饲料或饲料添加剂中，提高家畜机体免疫力与抗病能力，达到预防和降低家畜生病率的目的。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种丁酸梭菌(Clostridium butyricum)CC02001，所述的丁酸梭菌CC02001由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.20170。
具体地，本发明所述的枯草芽孢杆菌丁酸梭菌(Clostridium butyricum)CC02001于2020年07月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCCNo.20170。
另一方面，本发明提供了一种丁酸梭菌CC02001发酵液，所述的发酵液由丁酸梭菌CC02001接种于培养基中培养得到。
另一方面，本发明提供了一种丁酸梭菌CC02001的发酵工艺，所述的发酵工艺包括以下步骤：
(1)菌种活化；
(2)一级种子液制备；
(3)二级种子液制备；
(4)发酵液制备。
具体地，所述的发酵工艺包括以下步骤：
(1)将丁酸梭菌接种于斜面培养基上，于30-40℃下培养12-24小时；
(2)将斜面培养的丁酸梭菌菌落接种于种子培养基中，装液量为50-150mL/500mL，在30-40℃、120-180转/分的条件下培养12-24小时；
(3)将丁酸梭菌种子液以0.1-0.5％重量比接种于种子罐中，装液量为50-150L/500L，在30-40℃、120-180转/分的条件下培养12-24小时；
(4)将种子罐培养液以0.1-0.5％重量比接种于发酵罐中，罐压为0.01-0.05MPa，搅拌转速为120-180转/分，以体积比计，通风比为0.5-1：0.1-0.5，发酵时间为12-24小时。
具体地，所述步骤(1)的斜面培养基包括：牛肉浸膏、大豆蛋白胨、酵母膏、氯化钠、葡萄糖、琼脂。
进一步具体地，所述步骤(1)的斜面培养基包括：牛肉浸膏1.0-5.0g，大豆蛋白胨5.0-15.0g，酵母膏1.0-5.0g，氯化钠1.0-5.0g，葡萄糖1.0-10.0g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH为7.0。
具体地，所述的步骤(2)种子培养基包括：蛋白胨、牛肉膏、氯化钠。
进一步具体地，所述的步骤(2)种子培养基包括：蛋白胨5-15g，牛肉膏0.1-2g，氯化钠0.1-3g，蒸馏水1000mL，pH为7.4。
具体地，所述的步骤(3)种子罐培养基包括：玉米粉、葡萄糖、豆饼粉、鱼粉、碳酸钙、硫酸铵、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锰。
进一步具体地，所述的步骤(3)种子罐培养基包括：玉米粉0.1-0.5％，葡萄糖0.1-1.0％，豆饼粉0.1-3％，鱼粉0.01-0.1％，碳酸钙0.1-2％，硫酸铵0.01-0.05％，磷酸氢二钾0.001-0.01％，硫酸镁0.001-0.01％和硫酸锰0.001-0.01％。
具体地，所述的步骤(4)发酵培养基包括：酵母粉、0.1-3％的豆粕水解液、葡萄糖、玉米淀粉、碳酸钙。
进一步具体地，所述的步骤(4)发酵培养基包括：酵母粉0.1-3％、0.1-3％的豆粕水解液0.1-3％、葡萄糖0.1-1％、玉米淀粉0.1-1.5％、碳酸钙0.1-0.5％，pH为7.0-7.5。
再一方面，本发明还提供了丁酸梭菌CC02001或其发酵液在制备食品或食品添加剂中的应用。
具体地，所述的应用包括但不限于将丁酸梭菌CC02001的发酵液作为必要原料制备食品或食品添加剂。
进一步具体地，所述的应用包括但不限于将丁酸梭菌CC02001的发酵液制备成丁酸梭菌CC02001菌粉，用于制备食品或食品添加剂。
再一方面，本发明还提供了丁酸梭菌CC02001在制备饲料或饲料添加剂中的应用。
具体地，所述应用包括但不限于将丁酸梭菌CC02001的发酵液作为必要原料制备饲料或饲料添加剂。
进一步具体地，所述的应用包括但不限于将丁酸梭菌CC02001的发酵液制备成丁酸梭菌CC02001菌粉，用于制备饲料或饲料添加剂。
再一方面，本发明提供了一种复合生物制剂，所述的复合生物制剂包括丁酸梭菌CC02001。
具体地，所述的丁酸梭菌CC02001的活菌数为108-1010CFU/g。
具体地，所述的复合生物制剂还包括树舌灵芝多糖。
进一步具体地，所述的树舌灵芝多糖含量为0.05-0.1mg/g。
进一步具体地，所述的树舌灵芝多糖以树舌灵芝孢子粉计量，所述的树舌灵芝与丁酸梭菌经两次预混后制备得到，其中，第一次预混合比例为树舌灵芝：丁酸梭菌＝1:10，第二次预混合比例为一次预混：丁酸梭菌＝2:100。
优选地，所述的树舌灵芝孢子粉水分≤8％。
再一方面，本发明提供了一种产品，所述的产品包括上述丁酸梭菌CC02001或上述复合生物制剂，所述的产品为食品、食品添加剂、饲料或饲料添加剂。
具体地，所述的复合生物制剂按照0.05-0.1％的添加量加入到产品中。
与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：
(1)本发明提供了一种丁酸梭菌CC02001，所述的丁酸梭菌具有较强的肠道定植能力，能迅速改善宿主肠道内的微生物平衡，可应用于食品或食品添加剂中，及饲料或饲料添加剂中。
(2)本发明还提供了一种包括树舌灵芝多糖的复合生物制剂，所述的树舌灵芝多糖可加快复合生物制剂中丁酸梭菌的菌体定植，可维持动物肠道健康，提高动物机体免疫力，同时，在不添加抗生素药物的情况下，所述的复合生物制剂可有效抑制致病菌的增长，为食品产品提供保证。
保藏说明
菌种名称：丁酸梭菌Clostridium butyricum
参椐的生物材料(株)：CC02001
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.20170
保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所保藏日期：2020年07月01日
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1.丁酸梭菌CC02001的保藏与培养
1.丁酸梭菌CC02001的保藏信息为：
丁酸梭菌(Clostridium butyricum)CC02001于2020年07月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.20170。
2.丁酸梭菌CC02001的发酵培养：
(1)菌种活化：将丁酸梭菌CC02001接种于斜面培养基上，于30-40℃下培养12-24小时；
斜面培养基包括：牛肉浸膏1.0-5.0g，大豆蛋白胨5.0-15.0g，酵母膏1.0-5.0g，氯化钠1.0-5.0g，葡萄糖1.0-10.0g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH为7.0。
(2)一级种子液制备：将斜面培养的丁酸梭菌菌落接种于种子培养基中，装液量为50-150mL/500mL，在30-40℃、120-180转/分的条件下培养12-24小时；
种子培养基包括：蛋白胨5-15g，牛肉膏0.1-2g，氯化钠0.1-3g，蒸馏水1000mL，pH为7.4。
(3)二级种子液制备：将丁酸梭菌种子液以0.1-0.5％重量比接种于种子罐中，装液量为50-150L/500L，在30-40℃、120-180转/分的条件下培养12-24小时；
种子罐培养基包括：玉米粉0.1-0.5％，葡萄糖0.1-1.0％，豆饼粉0.1-3％，鱼粉0.01-0.1％，碳酸钙0.1-2％，硫酸铵0.01-0.05％，磷酸氢二钾0.001-0.01％，硫酸镁0.001-0.01％和硫酸锰0.001-0.01％。
(4)发酵液制备：将种子罐培养液以0.1-0.5％重量比接种于发酵罐中，罐压为0.01-0.05MPa，搅拌转速为120-180转/分，以体积比计，通风比为0.5-1：0.1-0.5，发酵时间为12-24小时；
发酵培养基包括：酵母粉0.1-3％、0.1-3％的豆粕水解液0.1-3％、葡萄糖0.1-1％、玉米淀粉0.1-1.5％、碳酸钙0.1-0.5％，pH为7.0-7.5。
制备得到的丁酸梭菌CC02001发酵液OD600值为30-40，有效活菌数为2-5×109CFU/mL。
3.干粉制备：将上述发酵液用干燥塔进行烘干，干燥塔进风温度为155-165℃，出风温度控制在80-85℃，输送泵的频率控制在3.0-3.5MPa。
实施例2.树舌灵芝多糖的制备
1)树舌多糖以树舌灵芝孢子粉计量，树舌灵芝中树舌多糖含量为3.6％；
2)树舌灵芝孢子粉需要两次预混步骤；
步骤1)树舌灵芝孢子粉水分≤8％。
步骤2)第一次预混合比例为树舌灵芝：枯草芽孢杆菌＝1:10，第二次预混合比例为一次预混：枯草芽孢杆菌＝2:100。
实施例3.一种复合生物制剂
本实施例所述的复合生物制剂包括：
(1)实施例1制备的丁酸梭菌CC02001，所述的丁酸梭菌CC02001的活菌数为1×109CFU/g。
实施例4.一种复合生物制剂
本实施例所述的复合生物制剂包括：
(1)实施例1制备的丁酸梭菌CC02001，所述的丁酸梭菌CC02001的活菌数为1×109CFU/g。
(2)实施例2制备的树舌灵芝多糖：含量为0.1mg/g。
实验例1.丁酸梭菌CC02001稳定性检测
检测方法：将实施例1制备得到的丁酸梭菌CC02001制备成干粉，在25±5℃温度下保存12个月，每月进行一次菌数检测评估其存活率。
存活率检测方法具体为：
(1)检测依据：DB41/T 1728-2018
(2)检测材料：
TSC培养基：称取TSC成品培养基4.7g于250mL锥形瓶内，用量筒准确称取100mL蒸馏水倒入三角瓶内，混匀。放入高压灭菌锅121℃高压灭菌30min。
海藻酸钠培养基：称取1.8g海藻酸钠试剂、3g TSC试剂于250mL三角瓶内，用量筒准确称取100mL蒸馏水倒入锥形瓶内，混匀。放入高压灭菌锅121℃高压灭菌30min。
吐温水：取700mL蒸馏水于1000mL锥形瓶中用移液枪加入0.7mL吐温-80配制成体积比千分之一的吐温水，放入高压灭菌锅121℃高压灭菌30min。
无菌水：取300mL蒸馏水于500mL三角瓶中，放入高压灭菌锅121℃高压灭菌30min。
(3)检测步骤
1)称样：根据样品预估菌数准确的称量待测样品(偏差±0.0003g)，放入装有玻璃珠的500mL无菌玻璃珠的锥形瓶中，在无菌瓶内加入相应体积的吐温水，220rpm震荡30min，使样品中的菌体充分分散，制成10倍稀释液。
2)分装无菌水：移取9.00mL无菌水至灭菌试管内(超净台内完成)。
3)化培养基：提前一天融化TSC培养基，倒平皿备用。化海藻酸钠培养基，融化后的培养基放入60℃烘箱内。
4)倍系列稀释：用1mL的无菌移液管准确吸取10倍稀释液，移入装有9mL无菌水的试管中，震荡15s，让菌液混合均匀，即成100倍稀释液，移液管转移液体时需注意控制液体的流动速度以免出现挂壁现象。以此类推，连续稀释，制成适宜稀释梯度的待测菌液。
5)耐温：将稀释好的菌液试管放入80℃水浴锅，计时10min，作耐温处理。
6)涂布：将凝固的TSC培养基平板编号，用无菌移液管按严格无菌操作准确吸取100mL适宜稀释度的菌液接种到四个平板中。将涂布棒在酒精灯的外焰灼烧灭菌，在平板内盖上冷却后，将菌液在平板上涂抹均匀。然后将海藻酸钠培养基取出倾注于TSC平板上，倾注体积在40-50mL之间，铺满平皿。倾注体积过少菌落不会变黑，影响计数结果。或将涂布好的TSC平板倒置放入厌氧箱、放有厌氧袋的厌氧盒内。
7)培养：将平板倒置放入37℃培养箱或厌氧培养箱中，培养48h。
8)计数：用肉眼观察，记录稀释倍数和相应菌落的数量，菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units，CFU)表示。典型丁酸梭菌呈黑色圆形表面光滑平坦的菌落形态或黄色中央凸起边缘整齐的菌落形态。
9)计算：每克样品的菌数＝同一稀释度几次重复的菌落平均数×10×稀释倍数。
检测结果如下表1所示。
表1
| 保存时间 | 菌数(亿CFU/g) | 存留率(％) |
| 0个月(初始) | 179 | - |
| 1个月 | 167 | 93.30 |
| 2个月 | 159 | 88.83 |
| 3个月 | 143 | 79.89 |
| 4个月 | 140 | 78.21 |
| 5个月 | 134 | 74.86 |
| 6个月 | 130 | 72.63 |
| 7个月 | 128 | 71.51 |
| 8个月 | 126 | 70.39 |
| 9个月 | 123 | 68.72 |
| 10个月 | 121 | 67.60 |
| 11个月 | 120 | 67.04 |
| 12个月 | 111 | 62.01 |
实验例2.丁酸梭菌CC02001耐酸性检测
为了检测丁酸梭菌在低pH下的生长状态，用1mol/L盐酸调节MRS液体培养基为不同pH梯度，分别为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.4。实施例1制备的丁酸梭菌培养液按1％(V/V)分别接种于不同pH的TSC液体培养基中，37℃培养24h，测定OD600nm。
检测结果如表2所示。
表2
| pH | OD<sub>600</sub>值 | 菌数(亿CFU/g) |
| 初始 | 0.224 | 0.02 |
| 2.0 | 0.809 | 0.77 |
| 3.0 | 1.340 | 0.98 |
| 4.0 | 1.970 | 1.13 |
| 5.0 | 2.110 | 1.26 |
| 6.0 | 2.140 | 1.37 |
| 6.4 | 2.180 | 1.40 |
实验例3.丁酸梭菌CC02001耐胆碱检测
在TSC液体培养基中加入猪胆盐，使其浓度分别为0％(对照)、0.15％、0.30％和0.60％。将实施例1制备的丁酸梭菌培养液接种于上述不同浓度的MRS液体培养基中，37℃培养24h，通过平板计数法计算活菌数。试验数据均为3个平行的平均值，数据利用SPSS17.0软件进行统计分析，结果以平均数±标准差表示。
胆盐耐受实验结果发现(表3)丁酸梭菌在胆盐浓度为0.15％、0.30％下生长状况很好，与对照组差异不显著(P>0.05)；在浓度为0.60％胆盐中生长时，活菌数显著下降(P<0.05)。由此可以看出，丁酸梭菌能够耐受0.3％浓度的胆盐。
表3丁酸梭菌在不同浓度胆盐中培养48h的活菌数
注：同行数据肩标不同大写字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
实验例4.丁酸梭菌CC02001抗人工胃肠液的耐受性
人工胃液的配制：9.5-10.5％的盐酸16.4mL，加水稀释，使pH达3.0。每100mL溶液中加入1.0g胃蛋白酶，混匀，用0.2μm无菌滤膜过滤。
人工肠液的配制：称取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL溶解，用0.4％的氢氧化钠溶液调pH至6.8，加水稀释至l000mL，每100mL液体中加入1.0g胰蛋白酶，混匀，用0.2μm无菌滤膜过滤。
将丁酸梭菌培养液分别接种于人工胃液或人工肠液中，37℃、140r/min摇床培养，分别在0、30、180min进行活菌平板计数。试验数据均为3个平行的平均值，数据利用SPSS17.0软件进行统计分析，结果以平均数±标准差表示。检测结果如表4所示。
表4丁酸梭菌在人工胃肠液中的活菌数
注：同行数据肩标不同大写字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
从表2可以看出，丁酸梭菌在人工胃液中生长0.5h时，活菌数不受影响(P>0.05)，生长3h时活菌数降低大约1log值(P<0.05)；丁酸梭菌在人工肠液中生长3h，活菌数没有显著变化(P>0.05)，能够抵抗人工肠液的影响。
实验例5.丁酸梭菌CC02001作为添加剂喂养家畜的应用
1.喂养家畜：
(1)选择体况健康、大小相近的25天断奶长白猪仔(体重平均为6.5-7.5公斤)，随机分组，试验组共90头(每组45头)，对照组45头；
2.饲喂食料：
(1)进行30天预饲期饲喂试验：
对照组：玉米70.49％、豆粕20％、鱼粉5％、酵母粉3％、骨粉1％、食盐0.5％、复合维生素0.01％。预饲期对每头每日进行称重并记录体重；
试验组：玉米70.39％、豆粕20％、鱼粉5％、酵母粉3％、骨粉1％、食盐0.5％、复合维生素0.01％、实施例3-4制备的复合生物制剂0.1％。
预饲期对每头每日进行称重并记录体重；
(2)进行30天正饲期饲喂试验：
对照组：玉米76.49％、豆粕17％、鱼粉3％、酵母粉2％、骨粉1％、食盐0.5％、复合维生素0.01％。预饲期对每头每日进行称重并记录体重；
试验组：玉米76.39％、豆粕17％、鱼粉3％、酵母粉2％、骨粉1％、食盐0.5％、复合维生素0.01％、实施例3-4制备的复合生物制剂0.1％。
正饲期对每头每日进行称重并记录体重；
(3)进行60天育肥期饲喂试验：
对照组：玉米82.09％、豆粕13.4％、鱼粉2％、酵母粉1％、骨粉1％、食盐0.5％、复合维生素0.01％。预饲期对每头每日进行称重并记录体重；
试验组：玉米76.39％、豆粕17％、鱼粉3％、酵母粉2％、骨粉1％、食盐0.5％、复合维生素0.01％、实施例3-4制备的复合生物制剂0.1％。
育肥饲期对每头每日进行称重并记录体重；
3.饲喂方式
(1)饲喂方式用自由采食(包括水和饲料)，每天3次确认采食器食料，分别在7:00、13:00、19:00进行。
(2)试验采用全舍饲，2.5平方米/每头隔间，自然通风，环境温度20-30℃，由同一人管理，及时清扫粪便，保持圈舍干燥、清洁和卫生；
(3)每日检测所有猪的体温，采用红外线温度检测枪。随时观察是否出现体温异常，37-39℃为正常。
(4)随时观察饲育猪的体温以外所有异常情况并做好记录。
4.发病判断标准
(1)日常观察“望，闻，问”原则。
望：皮肤颜色、耳背颜色、四肢内侧颜色、粪便颜色；
闻：粪便气味；
问：问喂养员其他异常，包括呼吸、咳嗽、打喷嚏、睡眠、排便量、活动量、叫声等。
(2)检测体温是否异常。
(3)观察采食量是否异常。
(4)发现异常后送检化验。
检测结果详见下表5。
表5
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种丁酸梭菌，其特征在于，所述的丁酸梭菌的保藏编号为：CGMCC No.20170。
2.一种丁酸梭菌发酵液，其特征在于，所述的发酵液由权利要求1所述的丁酸梭菌接种于培养基中培养得到。
3.一种丁酸梭菌发酵工艺，其特征在于，所述的发酵工艺包括以下步骤：
(1)菌种活化；
(2)一级种子液制备；
(3)二级种子液制备；
(4)发酵液制备。
4.根据权利要求3所述的发酵工艺，其特征在于，所述的发酵工艺包括以下步骤：
(1)将丁酸梭菌接种于斜面培养基上，于30-40℃下培养12-24小时；
(2)将斜面培养的丁酸梭菌菌落接种于种子培养基中，装液量为50-150mL/500mL，在30-40℃、120-180转/分的条件下培养12-24小时；
(3)将丁酸梭菌种子液以0.1-0.5％重量比接种于种子罐中，装液量为50-150L/500L，在30-40℃、120-180转/分的条件下培养12-24小时；
(4)将种子罐培养液以0.1-0.5％重量比接种于发酵罐中，罐压为0.01-0.05MPa，搅拌转速为120-180转/分，以体积比计，通风比为0.5-1：0.1-0.5，发酵时间为12-24小时。
5.根据权利要求4所述的发酵工艺，其特征在于，
所述步骤(1)的斜面培养基包括：牛肉浸膏、大豆蛋白胨、酵母膏、氯化钠、葡萄糖、琼脂；
所述的步骤(2)种子培养基包括：蛋白胨、牛肉膏、氯化钠；
所述的步骤(3)种子罐培养基包括：玉米粉、葡萄糖、豆饼粉、鱼粉、碳酸钙、硫酸铵、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锰；
所述的步骤(4)发酵培养基包括：酵母粉、0.1-3％的豆粕水解液、葡萄糖、玉米淀粉、碳酸钙。
6.权利要求1所述的丁酸梭菌或权利要求2所述的发酵液在制备食品或食品添加剂、饲料或饲料添加剂中的应用。
7.一种复合生物制剂，其特征在于，所述的复合生物制剂包括权利要求1所述的丁酸梭菌。
8.根据权利要求7所述的复合生物制剂，其特征在于，所述的复合生物制剂还包括树舌灵芝多糖。
9.根据权利要求8所述的复合生物制剂，其特征在于，
所述的丁酸梭菌CC02001活菌数为108-1010CFU/g；
所述的树舌灵芝多糖含量为0.05-0.1mg/g。
10.一种产品，其特征在于，所述的产品包括权利要求1所述的丁酸梭菌或权利要求7-8任一项所述的复合生物制剂，所述的产品为食品、食品添加剂、饲料或饲料添加剂。
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