CN114097829B - 一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用 - Google Patents

一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114097829B
CN114097829B CN202111435231.1A CN202111435231A CN114097829B CN 114097829 B CN114097829 B CN 114097829B CN 202111435231 A CN202111435231 A CN 202111435231A CN 114097829 B CN114097829 B CN 114097829B
Authority
CN
China
Prior art keywords
metabolite
penicillium
dry powder
islandicum
citrinum
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111435231.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114097829A (zh
Inventor
牟宗敏
陈穗云
赵大克
李倩倩
陈亭颖
李映佳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan University YNU
Original Assignee
Yunnan University YNU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan University YNU filed Critical Yunnan University YNU
Priority to CN202111435231.1A priority Critical patent/CN114097829B/zh
Publication of CN114097829A publication Critical patent/CN114097829A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114097829B publication Critical patent/CN114097829B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/36—Penicillium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于肥料制备技术领域，具体涉及一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用。本发明提供了一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉，本发明通过将桔青霉、岛青霉和红色青霉或将桔青霉、岛青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的代谢产物干粉复配可以显著促进植物的分蘖，增加作物株高、茎围及地上部鲜重，进而达到促进植物生长的作用。同时，将真菌代谢产物干粉经甲醇、水、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后的活性成分可进一步提高真菌代谢产物的促生长效果，增加作物产量，提高经济效益。

Description

一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性 物质、制备方法及其应用
技术领域
本发明属于肥料制备技术领域，具体涉及一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用。
背景技术
分蘖是禾本科植物植株构型的一个重要组成部分，是决定植物地上部密度以及生物产量的关键因素。分蘖的过程一般包括两个发育阶段。首先，叶腋或冠原基中的腋生分生组织发育为初始休眠的腋芽；随后，腋芽被激活生长，产生新的分蘖。分蘖与植物体内激素的含量密切相关，细胞***素促进禾本科植物分蘖，生长素和独脚金内酯则抑制分蘖。此外，分蘖对植物密度、生物产量和适应环境胁迫具有重要的农艺意义。
肥料是保证农业丰收的重要条件之一。然而人们为了追求作物高产，大量使用化学肥料，造成了土壤、水体和大气的污染。化肥施用到土壤中，植物不可能全部吸收和利用，导致化学肥料残留在土壤内部，引起土壤板结；并且，化学肥料的长期使用会使土壤肥力下降，土壤物理性趋于恶化。植物吸收不了的化学肥料流失到水域中，会导致水域富营养化，藻类大量繁殖，水生动物生长受阻，容易变成臭水、死水，并向沼泽化发展；由于我国大部分农村以饮用地下水源为主，若化学肥料中的氮素流入地下水中，会造成水源污染，水中硝酸盐含量超过45ppm，危害人体健康；若通过微生物作用形成亚硝酸化合物，则具有致癌的风险；同时，还会污染大气，造成大气中氮氧化物含量增加。
微生物肥料是一种新型肥料，是通过细菌、真菌等微生物的作用，改良土壤的物理、化学以及生物性质，从而改善土壤环境。而在微生物的活动中会产生多种代谢产物，通过促进植物细胞***，增强吸收水分、养分的能力，以及增加植物中内源激素的含量等作用，直接或间接的促进植物的生长。然而，不同真菌所产生的代谢物并不相同，不同代谢物组合在一起所具备的作用并不明确，甚至会因为不同代谢产物之间的拮抗作用而使微生物肥料的肥效降低。因而，为了能够解决上述技术问题，更好地促进植物生长，制备一种有效促进植物生长的微生物肥料对于本领域来讲是非常必要的。
发明内容
基于上述技术问题，本发明的目的在于提供一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用。本发明提供的真菌代谢产物干粉可显著促进植物分蘖和生长，增加作物产量。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉，所述真菌代谢产物干粉包括桔青霉(Penicillium citrinum)代谢产物干粉、岛青霉(Penicillium islandicum)代谢产物干粉和红色青霉(Penicillium rubrum)代谢产物干粉
或包括草酸青霉(Penicillium oxalicum)代谢产物干粉、桔青霉(Penicilliumcitrinum)代谢产物干粉、岛青霉(Penicillium islandicum)代谢产物干粉和玫烟色拟青霉(Penicillium fumosoroseus)代谢产物干粉。
优选的，所述真菌代谢产物干粉包括以下质量份数的组分：桔青霉代谢产物干粉10～30份，岛青霉代谢产物干粉20～50份和红色青霉产物干粉10～40份。
优选的，所述真菌代谢产物干粉包括以下质量份数的组分：草酸青霉代谢产物干粉20～50份，桔青霉代谢产物干粉10～40份，岛青霉代谢产物干粉10～40份和玫烟色拟青霉代谢产物干粉10～40份。
本发明还提供了一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉的制备方法，包括：将所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和红色青霉代谢产物干粉混合，或将所述草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉混合，得到所述真菌代谢产物干粉。
优选的，所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的制备方法包括：分别将桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的活化菌接种到液体培养基中，经振荡培养、灭活、干燥和研磨，得到所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉；
所述振荡培养的振荡速率为120r/min；所述培养的时间为3～7d。
优选的，当制备所述桔青霉代谢产物干粉时，所述液体培养基为察氏培养基，所述察氏培养基的pH为7.0～7.2，所述振荡培养温度为28℃；
当制备所述岛青霉代谢产物干粉时，所述液体培养基为麦芽膏培养基，所述振荡培养温度为25℃；
当制备所述红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉时，所述液体培养基为PDA培养基，所述振荡培养温度为25℃。
优选的，所述灭活的温度为140℃，灭活时间为3h。
本发明还提供了一种真菌代谢产物活性成分，包括上述技术方案中所述真菌代谢产物干粉的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物或水相提取物。
本发明还提供了上述技术方案制备得到的真菌代谢产物活性成分在促进植物生长中的应用。
优选的，所述促进植物生长包括促进禾本科植物的分蘖。
优选的，所述植物包括小麦、水稻、黑麦草、白车轴草和烟草中的一种或多种。
有益效果：
本发明提供了一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉，所述真菌代谢产物干粉包括桔青霉(Penicillium citrinum)代谢产物干粉、岛青霉(Penicillium islandicum)代谢产物干粉和红色青霉(Penicillium rubrum)代谢产物干粉，或包括草酸青霉(Penicilliumoxalicum)代谢产物干粉、桔青霉(Penicillium citrinum)代谢产物干粉、岛青霉(Penicillium islandicum)代谢产物干粉和玫烟色拟青霉(Penicillium fumosoroseus)代谢产物干粉。
本发明通过将桔青霉、岛青霉和红色青霉或将桔青霉、岛青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的代谢产物干粉复配可以显著促进植物的分蘖，增加作物株高、茎围及地上部鲜重，进而达到促进植物生长的作用。
同时，将真菌代谢产物干粉经甲醇、水、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后的活性成分可进一步提高真菌代谢产物的促生长效果，增加作物产量，提高经济效益。
其次，与化学肥料和有机肥料相比，本发明制备的微生物代谢产物干粉更加绿色、安全和环保。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1实施例4中真菌代谢产物活性成分提取流程。
具体实施方式
本发明提供了一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉，所述真菌代谢产物干粉包括桔青霉(Penicillium citrinum)代谢产物干粉、岛青霉(Penicillium islandicum)代谢产物干粉和红色青霉(Penicillium rubrum)代谢产物干粉或包括草酸青霉(Penicilliumoxalicum)代谢产物干粉、桔青霉(Penicillium citrinum)代谢产物干粉、岛青霉(Penicillium islandicum)代谢产物干粉和玫烟色拟青霉(Penicillium fumosoroseus)代谢产物干粉。
在本发明中，所述真菌代谢产物干粉优选包括桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和红色青霉产物干粉；或优选包括草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉。
在本发明中，当所述真菌代谢产物干粉包括桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和红色青霉产物干粉时，以质量份计，所述微生物代谢菌剂优选包括10～30份桔青霉代谢产物的干粉，更优选包括13～25份，进一步优选为15份。
以所述桔青霉代谢产物干粉的质量份为基准，所述微生物代谢菌剂优选包括20～50份的岛青霉代谢产物干粉，更优选包括25～45份，进一步优选为30～42份，最优选为30份。
以所述桔青霉代谢产物干粉的质量份为基准，所述微生物代谢菌剂优选包括10～40份的红色青霉产物干粉，更优选包括13～36份，进一步优选为20～30份，最优选为30份。
在本发明中，当所述真菌代谢产物干粉包括草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉时，以质量份计，所述微生物代谢菌剂优选包括20～50份的草酸青霉代谢产物干粉，更优选包括27～45份，进一步优选为33～40份，最优选为36份。
以所述草酸青霉代谢产物干粉的质量份为基准，所述微生物代谢菌剂优选包括10～40份桔青霉代谢产物干粉，更优选包括更优选包括13～36份，进一步优选为17～28份，最优选为18份。
以所述草酸青霉代谢产物干粉的质量份为基准，所述微生物代谢菌剂优选包括10～40份的岛青霉代谢产物干粉，更优选为18～37份，进一步优选为36份。
以所述草酸青霉代谢产物干粉的质量份为基准，所述微生物代谢菌剂优选包括10～40份的玫烟色拟青霉代谢产物干粉，更优选为13～36份，进一步优选为17～30份，最优选为18份。
在本发明中，所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉均购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心，所述桔青霉在中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC 4008，所述岛青霉的保藏编号为CICC 40637，所述红色青霉的保藏编号为CICC 4035，所述草酸青霉的保藏编号为CICC 2612，所述玫烟色拟青霉的保藏编号为CICC14005。
本发明还提供了一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉的制备方法，包括：将所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和红色青霉代谢产物干粉混合，或将所述草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉混合，得到所述真菌代谢产物干粉。
本发明优选分别将活化的桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉接种到液体培养基中，振荡培养，分别对应得到桔青霉代谢菌液、岛青霉代谢菌液、红色青霉代谢菌液、草酸青霉代谢菌液和玫烟色拟青霉代谢菌液。在本发明中，所述活化的桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的接种量均优选为所述液体培养基体积的3％。
在本发明中，所述振荡培养的速率优选为120～160r/min，进一步优选为120～150r/min，更优选为120～135r/min，最优选为120r/min。在本发明中，所述振荡培养的时间优选为3～7d，更优选为5d。在本发明的实施例中，所述振荡培养在摇床中进行。
本发明将所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉接种到液体培养基前，优选对所述液体培养基进行高温灭菌。在本发明中，所述灭菌的温度优选为110～130℃，更优选为121℃；所述灭菌的时间优选为20～30min，更优选为20min。本发明优选在高压灭菌锅中进行所述灭菌，本发明对所述高压灭菌锅的来源和型号没有特殊限定，采用本领域常规高压灭菌锅即可。
在本发明中，所述桔青霉的培养基优选为察氏培养基；所述察氏培养基的配方优选为每1.0L蒸馏水中包括蔗糖30.0g，NaNO33.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O0.01g和K2HPO41.0g。在本发明中，所述察氏培养基的pH优选为7.0～7.2，更优选为7.0。在本发明中，所述振荡培养的温度优选为25～28℃，进一步优选为27～28℃，更优选为28℃。
在本发明中，所述岛青霉的培养基优选为麦芽膏培养基；所述麦芽膏培养基的配方优选为每自来水1.0L中包括麦芽膏20.0g。本发明对所述麦芽膏培养基的pH值没有特殊限定，采用自然pH即可。在本发明中，培养所述岛青霉的振荡培养的温度优选为25～28℃，进一步优选为25～26℃，更优选为25℃。
在本发明中，所述红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的培养基优选为PDA培养基；所述PDA培养基的配方优选为每1L去离子水中包括土豆200g和葡萄糖20g。本发明对所述PDA培养基的pH值没有特殊限定，采用自然pH即可。在本发明中，所述红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的振荡培养温度优选为25～28℃，进一步优选为25～26.5℃，更优选为25℃。
在本发明中，所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的活化方式优选包括分别取上述各青霉的菌落于无菌水中振荡培养，计数，分别得到桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的无菌水活化孢子悬浮菌液。本发明将所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的无菌水活化孢子悬浮菌液接种液体培养基中，振荡培养至培养基中的孢子悬浮液浓度达到108cfu/mL且培养基中布满球菌，分别得到所述活化的桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉。
在本发明中，所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉振荡培养在无菌水中的振荡培养时间优选为30min；在上述振荡时间内可使上述各青霉的孢子团充分散开。在本发明中，所述计数优选包括采用移液枪吸取振荡培养后的孢子悬浮液置于血球计数板进行计数。在本发明中，所述无菌水活化孢子悬浮菌液的浓度优选为108cfu/mL。
在本发明中，所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的无菌水活化孢子悬浮菌液的接种量均优选为所述液体培养基体积的3％。
在本发明中，所述桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉活化过程中的振荡培养温度、转速和液体培养基均与制备桔青霉代谢菌液、岛青霉代谢菌液、红色青霉代谢菌液、草酸青霉代谢菌液和玫烟色拟青霉代谢菌液的振荡培养温度、转速和液体培养基相同，在此不再赘述。
得到桔青霉代谢菌液、岛青霉代谢菌液、红色青霉代谢菌液、草酸青霉代谢菌液和玫烟色拟青霉代谢菌液，本发明优选将上述菌液分别进行灭活，得到灭活后的桔青霉代谢菌液、岛青霉代谢菌液、红色青霉代谢菌液、草酸青霉代谢菌液和玫烟色拟青霉代谢菌液。在本发明中，所述灭活温度优选为130～140℃，更优选为140℃；所述灭活时间优选为2～4h，进一步优选为2.5～3.5h，更优选为3h。本发明通过高温使上述各真菌失去活性，防止活菌的代谢作用对代谢产物的含量和种类造成影响，同时也避免活菌对后续微生物代谢产物菌剂施用过程中对植物和环境的影响。
得到所述灭活后的桔青霉代谢菌液、岛青霉代谢菌液、红色青霉代谢菌液、草酸青霉代谢菌液和玫烟色拟青霉代谢菌液后，本发明优选对上述灭活后的菌液进行干燥和研磨，得到桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉。在本发明中，所述干燥的温度优选为55～65℃，进一步优选为55～57℃，更优选为55℃；所述干燥的时间优选为48～72h，进一步优选为48～56h，更优选为48h。在本发明中，所述干燥的方式优选为烘干；本发明优选在烘箱中进行干燥。本发明对所述烘箱的来源和型号没有特殊限定，采用本领域常规烘箱即可。本发明在进行所述研磨后，优选还包括过筛。在本发明中，所述过筛用筛孔优选为100～500目，进一步优选为180～400目，更优选为200目。本发明得到的所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的粒径均优选≤200目。
本发明还提供了一种真菌代谢产物活性成分，包括上述技术方案中所述真菌代谢产物干粉的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物或水相提取物中的任意一种。
在本发明中，所述石油醚提取物的制备方法，优选包括，将草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉混合后的真菌代谢产物干粉依次经甲醇、水和石油醚萃取后，得到所述石油醚提取物。
本发明优选将所述真菌代谢产物干粉与甲醇混合萃取，得到甲醇提取物。在本发明中，所述甲醇优选为无水甲醇；所述真菌代谢产物干粉与所述甲醇的质量体积比优选为10～12kg：50L，更优选为10kg：50L。在本发明中，所述萃取的时间优选为24～36h，更优选为24h；所述萃取的温度优选为常温。本发明在所述甲醇萃取后，优选还包括减压浓缩，所述减压浓缩的压力优选为-0.07Mpa。本发明优选萃取3次，萃取后得到所述甲醇提取物。
得到所述甲醇提取物后，本发明优选将所述甲醇提取物与水混合萃取，得到水相萃取液A。在本发明中，所述水优选为蒸馏水；所述甲醇提取物与所述水的质量体积比优选为5.30kg：20L。在本发明中，所述萃取温度优选为25℃；所述萃取时间优选为12～24h，更优选为12h。本发明优选萃取3次，萃取后得到所述水相萃取液A。
得到所述水相萃取液A后，本发明优选以石油醚萃取所述水相萃取液A，得到石油醚提取物和水相萃取液B。本发明对所述水相萃取液A和石油醚的体积比没有特殊限定，只要能够萃取得到石油醚提取物和水相萃取液即可。本发明在所述石油醚萃取后，优选还包括层析和减压浓缩。在本发明中，所述层析的时间优选为4h。本发明对所述层析柱没有特殊限定，采用本领域常规层析柱即可。在本发明中，所述减压浓缩所使用设备优选为旋转蒸发仪；所述减压浓缩的温度优选为35℃；所述减压浓缩的转速优选为20～22rpm，更优选为22rpm；所述减压浓缩的压力优选为-0.07Mpa。本发明优选采用石油醚萃取3次，萃取后得到所述石油醚提取物和水相萃取液B。
在本发明中，所述乙酸乙酯提取物的制备方法优选包括将制备上述石油醚提取物得到的所述水相萃取液B，经乙酸乙酯萃取后，得到所述乙酸乙酯提取物。
本发明优选以乙酸乙酯萃取所述水相萃取液B，得到乙酸乙酯提取物和水相萃取液C。本发明对所述乙酸乙酯和所述水相萃取液B的体积比没有特殊限定，只要能够萃取得到乙酸乙酯提取物和水相萃取液C即可。
本发明在所述乙酸乙酯萃取后，优选还包括层析和减压浓缩。在本发明中，所述层析的时间优选为12h。本发明对所述层析柱没有特殊限定，采用本领域常规层析柱即可。在本发明中，所述减压浓缩的方法除减压浓缩温度优选为40℃以外，其他与上述石油醚相的减压浓缩方法相同，在此不再赘述。本发明优选采用乙酸乙酯萃取3次，萃取后得到所述乙酸乙酯萃取物和水相萃取液C。
在本发明中，所述正丁醇提取物的制备方法优选包括将制备上述乙酸乙酯提取物得到的所述水相萃取液C，经正丁醇萃取后，得到所述正丁醇提取物。
本发明优选以正丁醇萃取所述水相萃取液C，得到正丁醇提取物和水相萃取液D。本发明对所述正丁醇和所述水相萃取液C的体积比没有特殊限定，只要能够萃取得到正丁醇提取物和水相萃取液D即可。
本发明在所述正丁醇萃取后，优选还包括层析和减压浓缩。在本发明中，所述层析的时间优选为12h；所述层析温度优选为65℃。本发明对所述层析柱没有特殊限定，采用本领域常规层析柱即可。在本发明中，所述减压浓缩的方法与上述石油醚相的减压浓缩方法相同，在此不再赘述。本发明优选采用正丁醇萃取3次，萃取后得到所述正丁醇萃取物和水相萃取液C。
在本发明中，所述水相提取物的制备方法优选包括对制备上述正丁醇提取物得到的所述水箱萃取液D进行减压浓缩，得到所述水相提取物。
在本发明中，所述减压浓缩的方法与上述石油醚相的减压浓缩方法相同，在此不再赘述。
本发明还提供了上述技术方案制备得到的真菌代谢产物活性成分在促进植物生长中的应用。在本发明中，所述促进植物生长优选包括促进禾本科植物的分蘖。
在本发明中，所述植物优选包括小麦、水稻、黑麦草、白车轴草和烟草中的一种或多种。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
配制培养基：
察氏培养基：蔗糖30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O0.01g，K2HPO4 1.0g，蒸馏水1.0L，pH 7.0～7.2；
麦芽膏培养基：麦芽膏20.0g，自来水1.0L，自然pH。
PDA培养基：土豆200g，葡萄糖20g，用去离子水定容至1000mL。
将上述培养基在高压灭菌锅中121℃，灭菌20min。
将红色青霉、岛青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉在25℃下活化5d，将桔青霉在28℃下活化3d。
待培养基冷却后，分别刮取桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的菌落到盛有100mL无菌水的250mL三角瓶中，120r/min的条件下，振荡30min使孢子团充分散开，其中桔青霉的培养温度为28℃，红色青霉、岛青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的培养温度为25℃。用移液枪吸取孢子悬浮液置于血球计数板进行计数，分别得到最终得到浓度均为108cfu/mL的桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的孢子悬浮液。分别吸取桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的孢子悬浮液以3％的接种量接种到盛有100mL液体培养基(与下述培养基相同)的250mL三角瓶中，以同样的条件振荡培养，直到液体培养基中的孢子悬浮液浓度达到108cfu/mL。
将活化的桔青霉接种到含有100mL察氏培养基的三角瓶中，将岛青霉接种到含有100mL麦芽膏培养基的三角瓶中，将红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉接种到含有100mLPDA培养基的三角瓶中，接种量为分别为培养基的3％，放入120r/min的摇床中，培养3天，其中桔青霉的培养温度为28℃，红色青霉、岛青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的培养温度为25℃。
将培养后的桔青霉菌液、红色青霉菌液、岛青霉青霉菌液、草酸青霉菌液和玫烟色拟青霉菌液分别经过140℃高温灭活3h，放入55℃烘箱中烘48h，研磨后，过200目筛，分别制备得到桔青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、岛青霉青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉。
实施例2
取实施例1中制备的桔青霉代谢产物干粉15g、岛青霉代谢产物干粉30g和红色青霉代谢产物干粉30g，混合(桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和红色青霉代谢产物干粉的质量比为1：2：2)，制备得到真菌代谢产物干粉。
实施例3
取实施例1中制备的草酸青霉代谢产物干粉36g、桔青霉代谢产物干粉18g、岛青霉代谢产物干粉36g和玫烟色拟青霉代谢产物干粉18g，混合(草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的质量比为2：1：2：1)，制备得到真菌代谢产物干粉。
实施例4
将实施例3中的真菌代谢产物干粉用50L无水甲醇常温浸提24h，充分搅拌，过滤除渣萃取3次，减压浓缩，压力为-0.07Mpa，获得甲醇提取物。
在5.30kg甲醇提取物中加入20L蒸馏水溶液，25℃浸提12h以上，除渣过滤3次，获得水相萃取液A。
将获得的水相萃取液A与石油醚充分混匀，置于层析柱中常温静置4h。溶液分层后，分离水相与石油醚相。将分离的石油醚相装入旋蒸瓶，放入35℃水浴锅中，开启热回流装置与旋蒸仪，设置转速为22rpm，压力为-0.07Mpa。于旋转蒸发仪上减压浓缩石油醚相并回收溶剂。将回收溶剂重新添加石油醚，与上述分离到的水相充分混匀，同上述条件，将石油醚相进行减压浓缩。提取操作重复3次。第一水相萃取液经石油醚溶剂三次提取，得到石油醚提取物和水相萃取液B。
将获得的水相萃取液B与乙酸乙酯充分混匀，置于层析柱中静置12h。溶液分层后，分离乙酸乙酯层、乳化层与水层。弃乳化层，得乙酸乙酯相和水相。水浴锅温度40℃，减压浓缩方法同石油醚提取。水相萃取液B经乙酸乙酯溶剂三次提取，得到乙酸乙酯提取物和水相萃取液C。
将获得的水相萃取液C与正丁醇充分混匀，置于层析柱中静置8h，水浴锅温度65℃，减压浓缩处理方法同石油醚提取。水相萃取液C经正丁醇三次萃取后，得到正丁醇提取物与水相萃取液D。
将水相萃取液D减压浓缩，减压浓缩处理方法同石油醚提取，获得水相提取物。
对比例1
取实施例1中制备的草酸青霉代谢产物干粉10g、桔青霉代谢产物干粉50g、岛青霉代谢产物干粉50g和玫烟色拟青霉代谢产物干粉50g，混合(草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的质量比为1：5：5：5)，制备得到真菌代谢产物干粉。
对比例2
取实施例1中制备的草酸青霉代谢产物干粉10g、桔青霉代谢产物干粉50g、岛青霉代谢产物干粉60g和玫烟色拟青霉代谢产物干粉50g，混合(草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的质量比为1：5：6：5)，制备得到真菌代谢产物干粉。
对比例3
取实施例1中制备的草酸青霉代谢产物干粉60g、桔青霉代谢产物干粉50g、岛青霉代谢产物干粉50g和玫烟色拟青霉代谢产物干粉50g，混合(草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的质量比为6：5：5：5)，制备得到真菌代谢产物干粉。
对比例4
取实施例1中制备的草酸青霉代谢产物干粉60g、桔青霉代谢产物干粉50g、岛青霉代谢产物干粉60g和玫烟色拟青霉代谢产物干粉50g，混合(草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的质量比为6：5：6：5)，制备得到真菌代谢产物干粉。
对比例5
取实施例1中制备的草酸青霉代谢产物干粉70g、桔青霉代谢产物干粉60g、岛青霉代谢产物干粉60g和玫烟色拟青霉代谢产物干粉50g，混合(草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的质量比为7：6：6：5)，制备得到真菌代谢产物干粉。
应用例1
筛选实施例2中真菌代谢产物干粉在小麦生产中的最适浓度
分别将2.00g/盆、4.00g/盆、6.00g/盆和8.00g/盆的真菌代谢产物干粉分别加入1.5L常规营养土基质中，作为真菌代谢产物干粉处理组，同时以不添加真菌代谢产物干粉作为对照组；
首先将小麦的种子进行催芽处理，后分别均匀播在塑料盆钵中，每盆15粒，并置于温室中进行培养；待小麦幼苗长出2片叶时，进行间苗，留下10棵长势一致、无病害且无损伤的小麦幼苗作试供材料。每个处理三次重复，每个重复10棵苗。在小麦的返青期采样，测定相关各项指标，检测真菌代谢产物灭活干粉处理对小麦幼苗生长的影响，筛选促进小麦幼苗生长的最适浓度，结果如表1所示。具体测量指标与方法如下：
株高：用直尺测量植株茎基部到茎尖端的长度。
地上部分鲜重：用天平称量植株地上部分的鲜重。
分蘖数：采用计数法测定分蘖数。
分蘖时间：观察对照组与真菌代谢产物灭活干粉处理组小麦开始分蘖的时间。
表1实施例2中真菌代谢产物干粉拌土处理小麦的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000121
由表1可以看出，与对照组相比，本发明实施例2中的真菌代谢产物干粉能够促进小麦分蘖缩短分蘖时间，显著增加小麦的株高以及地上部鲜重，尤其在4.00g/盆的浓度下，对小麦的生长具有显著的促进作用。
应用例2
筛选实施例2中真菌代谢产物干粉在小麦生产中的最佳施用方式
拌土施用：分别将2.00g/盆、4.00g/盆、6.00g/盆和8.00g/盆的实施例2中的真菌代谢产物干粉以拌入1.5L常规营养土基质的方式施用，作为真菌代谢产物干粉处理组，同时以不添加真菌代谢产物干粉作为对照组。首先将小麦的种子进行催芽处理，后分别均匀播在塑料盆钵中，每盆15粒，并置于温室中进行培养。待小麦幼苗长出2片叶时，进行间苗，留下10棵长势一致、无病害且无损伤的小麦幼苗作试供材料。每个处理三个重复，每个重复10棵苗；
灌根施用：首先将小麦的种子均匀播在育苗盘中，所用基质为常规营养土基质，置于温室中进行培养。然后选取长势一致、无病害且无损伤、具有2片叶的小麦幼苗移栽到塑料盆钵内，每个塑料盆钵10棵。分别用2.00g/盆、4.00g/盆、6.00g/盆和8.00g/盆的实施例2中真菌代谢产物干粉分别与15mL水混合后的溶液对小麦幼苗进行灌根处理，以相同体积的清水作为对照。每个处理三个重复，每个重复10棵苗，每7d灌根1次，灌根量为每个塑料盆钵15mL。
测定拌土施用和灌根施用方式下小麦幼苗生长指标，检测两种施用方式对小麦幼苗生长的效果，确定促进小麦生长的最佳施用方式，结果如表2所示。
表2实施例2真菌代谢产物干粉灌根处理小麦的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000131
结果表明，采用本发明实施例2中提供的真菌代谢产物灌根处理小麦，能够促进小麦的生长，显著增加小麦的株高、分蘖数等指标，但容易在基质表面滋生真菌等微生物，同时气味较大，容易吸引苍蝇等昆虫，对小麦的生长环境造成不利影响。
结合应用例1和应用例2可知本发明真菌代谢产物干粉处理小麦的最佳施用浓度为4.00g/盆；真菌代谢产物干粉处理小麦最佳的施用方式是将真菌代谢产物干粉拌入基质中施用。
应用例3
筛选实施例2中真菌代谢产物干粉在水稻生产中的最适浓度：具体方法同应用例1，不同处为水稻的采样时间为在水稻出苗后30d采样，结果如表3所示。
表3实施例2中真菌代谢产物灭活拌土处理水稻的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000141
有表3可知，与对照组相比，本发明实施例2中真菌代谢产物干粉能够促进水稻分蘖，缩短分蘖时间，显著增加水稻的株高以及地上部鲜重。尤其4.00g/盆的真菌代谢产物干粉的施用量对水稻的促生作用最好。
应用例4
筛选真菌代谢产物灭活干粉在水稻生产中的最佳施用方式
具体方法同应用例2，不同处为水稻的采样时间为在水稻出苗后30d采样，结果如表4所示。
表4实施例2中真菌代谢产物干粉灌根处理水稻的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000142
Figure BDA0003381548980000151
由表4可以看出，采用本发明实施例2中提供的真菌代谢产物干粉灌根处理水稻，能够促进水稻的生长，显著增加水稻的株高、分蘖数等指标，但容易在基质表面滋生真菌等微生物，同时气味较大，容易吸引苍蝇等昆虫，对水稻的生长环境造成不利影响。
结合应用例3和应用例4可知，采用本发明提供的真菌代谢产物干粉处理水稻的最佳施用浓度为4.00g/盆；真菌代谢产物干粉处理水稻的最佳的施用方式是将真菌代谢产物灭活干粉拌入基质中施用。
应用例5
筛选实施例2中真菌代谢产物干粉在黑麦草生产中的最适浓度：
分别将2.00g/盆、4.00g/盆、6.00g/盆和8.00g/盆的实施例2中的真菌代谢产物干粉分别加入1.5L常规腐殖土中，作为真菌代谢产物干粉处理组，同时以不添加真菌代谢产物干粉作为对照组；将黑麦草的种子均匀播在13×12cm的营养袋中，每盆8粒，并置于温室中进行培养；待黑麦草幼苗长出2片叶时，进行间苗，留下5棵长势一致、无病害且无损伤的黑麦草幼苗作试供材料。每个处理三次重复，每个重复10棵苗。待黑麦草种子萌发后60d采样，测定相关各项指标，检测真菌代谢产物干粉处理对黑麦草生长的影响，筛选促进黑麦草生长的最适浓度，结果如表5所示。
表5实施例2中真菌代谢产物干粉拌土处理黑麦草的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000152
Figure BDA0003381548980000161
由表3可以看出，施用本发明实施例2提供的真菌代谢产物干粉对黑麦草的促生作用较好，尤其当浓度为2.00g/盆时，能够显著促进黑麦草植株提前分蘖，且分蘖数、株高、地上部鲜重显著增加。
应用例6
筛选实施例2中真菌代谢产物干粉在黑麦草生产中的最佳施用方式
拌土施用：分别将2.00g/盆、4.00g/盆、6.00g/盆和8.00g/盆的实施例2中的真菌代谢产物干粉以拌入1.5L腐殖土的方式施用，作为真菌代谢产物干粉处理组，同时以不添加真菌代谢产物干粉作为对照组。将黑麦草的种子均匀播在13×12cm的营养袋中，每盆8粒，并置于温室中进行培养。待黑麦草幼苗长出2片叶时，进行间苗，留下5棵长势一致、无病害且无损伤的黑麦草幼苗作试供材料。每个处理三个重复，每个重复10棵苗；
灌根施用：所用基质为腐殖土。首先将黑麦草的种子均匀播在育苗盘中，并置于温室中进行培养。然后选取长势一致、无病害且无损伤、具有2片叶的黑麦草幼苗移栽到10×10cm的营养袋内，每个营养袋5棵。分别用2.00g/盆、4.00g/盆、6.00g/盆和8.00g/盆的真菌代谢产物干粉与15mL的水混合后的溶液对黑麦草进行灌根处理，以相同体积的清水作为对照。每个处理三个重复，每7d灌根1次，灌根量为每个营养袋15mL。
测定拌土施用和灌根施用方式下黑麦草幼苗生长指标，检测两种施用方式对黑麦草生长的效果，确定促进黑麦草生长的最佳施用方式，结果如表6所示。
表6实施例2真菌代谢产物干粉灌根处理黑麦草的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000162
Figure BDA0003381548980000171
由表6所示，采用本发明提供的真菌代谢产物干粉灌根处理黑麦草，能够促进黑麦草的生长，显著增加黑麦草的株高、分蘖数等指标，但容易在基质表面滋生真菌等微生物，同时气味较大，容易吸引苍蝇等昆虫，对黑麦草的生长环境造
由应用例5和应用例6可知，采用本发明提供的真菌代谢产物干粉处理黑麦草的最佳施用浓度为2.00g/盆；真菌代谢产物干粉处理黑麦草最佳的施用方式是将真菌代谢产物灭活干粉拌入基质中施用。
应用例7
将烟草的种子均匀洒于基质中，并置于温室中进行培养。待烟草长出5片真叶时，选取长势一致、无病无损的烟草幼苗，移栽到分别具有1.50g、3.00g、4.50g、6.00g真菌代谢产物的塑料盆钵(1中加仑，容土量：1.5L)中，以清水拌土作为对照。每个处理3个重复，每个重复10棵烟草幼苗。适时浇水但不施肥，待烟草幼苗移栽后30d，对烟草植株进行生长相关指标的测量，结果如表7所示。具体测量指标及方法如下：
株高：施用卷尺测量烟草幼苗的株高。
茎直径：使用游标卡尺测定茎基部的茎直径。
地上部分鲜重：用天平称量植株地上部分的鲜重。
表7实施例3中真菌代谢产物处理烟草的各项指标检测结果
Figure BDA0003381548980000172
由表7所示，3.00g/盆的真菌代谢产物干粉能够促进烟草幼苗的生长，显著增加烟草的株高、茎直径以及地上部分鲜重。
应用例8
将黑麦草的种子均匀播在13×12cm的营养袋中，每盆8粒，并置于温室中进行培养；待黑麦草幼苗长出2片叶时，进行间苗，留下5棵长势一致、无病害且无损伤的黑麦草幼苗作试供材料，后用一定浓度(具体浓度见表8)的实施例4中石油醚提取物、正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物以及对比例6中提取得到的水相提取物采用灌根的方式处理黑麦草，以相同体积的清水灌根作为对照。每个处理三次重复，每个重复10棵苗；四种提取物分别处理黑麦草60d后采样，测定相关各项指标，检测真菌代谢产物提取物处理对黑麦草生长的影响，结果如表9所示。测量指标及具体测量方法如下：
株高：用直尺测量植株茎基部到茎尖端的长度。
地上部分鲜重：用天平称量植株地上部分的鲜重。
表8实施例4中真菌代谢产物干粉活性成分在黑麦草、白车轴草以及烟草中的施用浓度。
Figure BDA0003381548980000181
表9为实施例4中真菌代谢产物的四种活性成分处理黑麦草的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000182
Figure BDA0003381548980000191
由表9可以看出，与对照组相比，施用本发明提供的的石油醚提取物、正丁醇提取物、水相提取物均能够促进黑麦草的生长，尤其20μg/mL真菌代谢产物乙酸乙酯提取物对黑麦草的促生作用最大，能够显著增加黑麦草的株高和地上部鲜重。
应用例9
将白车轴草的种子均匀播在13×12cm的营养袋中，每盆8粒，并置于温室中进行培养；待白车轴草幼苗长出1片真叶时，进行间苗，留下5棵长势一致、无病害且无损伤的白车轴草幼苗作试供材料，后用一定浓度(具体浓度见表8)的实施例4中石油醚提取物、正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物以及对比例6中提取得到的水相提取物采用灌根的方式处理白轴车草，以相同体积的清水灌根作为对照。每个处理三次重复，每个重复10棵苗；四种提取物分别处理白车轴草60d后采样，测定相关各项指标，检测真菌代谢产物提取物处理对白车轴草生长的影响，结果如表10所示。测量指标及具体测量方法如下：
株高：用直尺测量植株茎基部到茎尖端的长度。
地上部分鲜重：用天平称量植株地上部分的鲜重。
叶片数：采用计数法测定白车轴草的叶片数。
表10为实施例4中真菌代谢产物的四种活性成分处理白轴车草的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000201
Figure BDA0003381548980000211
由表10可以看出，与对照组相比，施用本发明提供的真菌代谢产物的石油醚提取物、正丁醇提取物、水相提取物均能够促进白车轴草的生长，尤其20μg/mL乙酸乙酯提取物对白车轴草的促生作用最好，能够显著增加白车轴草的株高、叶片数以及地上部鲜重。
应用例10
将烟草的种子均匀洒于基质中，并置于温室中进行培养。待烟草长出5片真叶时，选取长势一致、无病无损的烟草幼苗移栽到13×12cm的营养袋中，后用一定浓度(具体浓度见表8)的实施例4中石油醚提取物、正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物以及对比例6中提取得到的水相提取物对烟草幼苗进行灌根处理，灌根量为5mL/株。以相同体积的清水灌根作为对照。每个处理3个重复，每个重复10棵烟草幼苗。每周灌根处理一次，适时浇水但不施肥，距第一次处理25d，处理4次后，对烟草植株进行生长相关指标的测量，检测真菌代谢产物提取物处理对烟草生长的影响，结果如表11所示。测量指标及具体测量方法如下：
株高：用直尺测量植株茎基部到茎尖端的长度。
叶片数：采用计数法测定幼苗的叶片数。
茎直径：使用游标卡尺测定茎基部的茎直径。
地上部分鲜重：用天平称量植株地上部分的鲜重。
表11为实施例4和对比例6中真菌代谢产物的四种活性处理烟草的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000221
由表11可知，施用本发明提供的真菌代谢产物的石油醚提取物、正丁醇提取物、水相提取物均能够促进烟草的生长，尤其10μg/mL的乙酸乙酯提取物对烟草的促生作用最好，能够显著增加烟草的株高、茎直径和地上部鲜重。
应用例11
将烟草的种子均匀洒于基质中，并置于温室中进行培养。待烟草长出5片真叶时，选取长势一致、无病无损的烟草幼苗，移栽到分别具有真菌代谢产物干粉的塑料盆钵(1中加仑，容土量：1.5L)中，以清水拌土作为对照。每个处理3个重复，每个重复10棵烟草幼苗。适时浇水但不施肥，待烟草幼苗移栽后30d，对烟草植株的株高、茎围和地上部鲜重进行生长相关指标的测量。
株高：用直尺测量植株茎基部到茎尖端的长度。
茎直径：使用游标卡尺测定茎基部的茎直径。
地上部分鲜重：用天平称量植株地上部分的鲜重
将对比例1～5中的真菌代谢产物干粉施用在烟草上，与对照组相比，无显著差异，甚至会抑制烟草生长，结果如表12所示。
表12为对比例1～5中真菌代谢产物的四种活性处理烟草的各项指标测量结果
Figure BDA0003381548980000231
由以上实施例可知，本发明提供的真菌代谢产物干粉可以显著促进植物的分蘖，增加作物株高、茎围及地上部鲜重。同时，将真菌代谢产物干粉经甲醇、水、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取后的活性成分可进一步提高真菌代谢产物的促生长效果，增加作物产量。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (3)

1.一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉，其特征在于，所述真菌代谢产物干粉包括桔青霉（Penicillium citrinum）代谢产物干粉、岛青霉（Penicillium islandicum）代谢产物干粉和红色青霉（Penicillium rubrum）代谢产物干粉
或包括草酸青霉（Penicillium oxalicum）代谢产物干粉、桔青霉（Penicillium citrinum）代谢产物干粉、岛青霉（Penicillium islandicum）代谢产物干粉和玫烟色拟青霉（Paecilomyces fumosoroseus）代谢产物干粉；
所述真菌代谢产物干粉包括以下质量份数的组分：桔青霉代谢产物干粉10~30份，岛青霉代谢产物干粉20~50份和红色青霉产物干粉10~40份；
或所述真菌代谢产物干粉包括以下质量份数的组分：草酸青霉代谢产物干粉36份，桔青霉代谢产物干粉18份，岛青霉代谢产物干粉36份和玫烟色拟青霉代谢产物干粉18份；
所述桔青霉在中国工业微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CICC 4008，所述岛青霉的保藏编号为CICC 40637，所述红色青霉的保藏编号为CICC 4035，所述草酸青霉的保藏编号为CICC 2612，所述玫烟色拟青霉的保藏编号为CICC 14005；
所述促进植物生长的真菌代谢产物干粉的制备方法，包括：将桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和红色青霉代谢产物干粉混合，或将所述草酸青霉代谢产物干粉、桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉混合，得到所述真菌代谢产物干粉；
所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉的制备方法包括：分别将桔青霉、岛青霉、红色青霉、草酸青霉和玫烟色拟青霉的活化菌接种到液体培养基中，经振荡培养、灭活、干燥和研磨，得到所述桔青霉代谢产物干粉、岛青霉代谢产物干粉、红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉；
所述振荡培养的振荡速率为120r/min；所述培养的时间为3~7d；
当制备所述桔青霉代谢产物干粉时，所述液体培养基为察氏培养基，所述察氏培养基的pH为7.0~7.2，所述振荡培养温度为25~28℃；
当制备所述岛青霉代谢产物干粉时，所述液体培养基为麦芽膏培养基，所述振荡培养温度为25~28℃；
当制备所述红色青霉代谢产物干粉、草酸青霉代谢产物干粉和玫烟色拟青霉代谢产物干粉时，所述液体培养基为PDA培养基，所述振荡培养温度为25~28℃；
所述灭活的温度为130~140℃，灭活时间为2~4h。
2.一种真菌代谢产物活性成分，其特征在于，包括权利要求1所述的真菌代谢产物干粉的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物或水相提取物。
3.权利要求1所述的真菌代谢产物干粉或权利要求2所述的真菌代谢产物活性成分在促进植物生长中的应用；
所述植物包括小麦、水稻、黑麦草、白车轴草和烟草中的一种或多种。
CN202111435231.1A 2021-11-29 2021-11-29 一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用 Active CN114097829B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111435231.1A CN114097829B (zh) 2021-11-29 2021-11-29 一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111435231.1A CN114097829B (zh) 2021-11-29 2021-11-29 一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114097829A CN114097829A (zh) 2022-03-01
CN114097829B true CN114097829B (zh) 2022-05-31

Family

ID=80371431

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111435231.1A Active CN114097829B (zh) 2021-11-29 2021-11-29 一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114097829B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114032183B (zh) * 2021-11-29 2023-09-05 云南大学 一种促进植物生长的微生物代谢产物菌剂、制备方法及其应用
CN114231420B (zh) * 2021-11-29 2023-07-04 云南大学 一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用
CN115521944B (zh) * 2022-08-29 2024-04-19 云南大学 一种青霉菌发酵物乙酸乙酯提取物的制备方法及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4818530A (en) * 1983-06-22 1989-04-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparation of pellets containing fungi for control of soilborne diseases
CN101643704A (zh) * 2008-08-07 2010-02-10 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种溶磷草酸青霉菌p8
KR20110065221A (ko) * 2009-12-09 2011-06-15 경북대학교 산학협력단 페니실리움 시트리눔을 배양한 배양액, 및 이를 포함하는 식물 생장 촉진제
CN102174412A (zh) * 2010-12-15 2011-09-07 云南大学 一种解磷真菌及其在制备生物菌肥中的应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2275433B1 (es) * 2005-11-17 2008-01-01 Instituto Nacional De Investigacion Y Tecnologia Agraria Y Alimentaria-Inia Metodo para la promocion de crecimiento de plantas de tomate.
US20110280839A1 (en) * 2008-10-14 2011-11-17 PWC Tower Entomopathogenic Fungi and Uses Thereof
CN102630710A (zh) * 2012-04-10 2012-08-15 江苏省农业科学院 一种利用植物源提取物提高玫烟色拟青霉对烟粉虱侵染力的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4818530A (en) * 1983-06-22 1989-04-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparation of pellets containing fungi for control of soilborne diseases
CN101643704A (zh) * 2008-08-07 2010-02-10 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种溶磷草酸青霉菌p8
KR20110065221A (ko) * 2009-12-09 2011-06-15 경북대학교 산학협력단 페니실리움 시트리눔을 배양한 배양액, 및 이를 포함하는 식물 생장 촉진제
CN102174412A (zh) * 2010-12-15 2011-09-07 云南大学 一种解磷真菌及其在制备生物菌肥中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Effects of Endophytic Fungal Secondary Metabolites on the Growth and Physiological Response of Carex kobomugi Ohwi;Hwang Jeong-Sook，et al.;《JOURNAL OF COASTAL RESEARCH》;20110531;第27卷(第3期);545-546 *
一株溶磷菌的分离鉴定及溶磷促生作用;薛应钰; 叶巍; 杨树; 李培; 徐秉良;《干旱地区农业研究》;20190710;第37卷(第4期);全文 *
草酸青霉菌HB1溶磷能力及作用机制;何迪;耿丽平;郭佳;陆秀君;刘文菊;《农业工程学报》;20200123;第36卷(第2期);全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114097829A (zh) 2022-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114097829B (zh) 一种促进植物生长的真菌代谢产物干粉、真菌代谢产物活性物质、制备方法及其应用
CN115340968B (zh) 微刺假单胞菌的新用途及其方法、微刺假单胞菌21 4.1 9.2-14及其产品
CN109355205B (zh) 菌核青霉在制备植物生长调节剂或诱导剂中的应用
CN108112298A (zh) 一种马尾松菌根化苗木的培育方法
CN114032183B (zh) 一种促进植物生长的微生物代谢产物菌剂、制备方法及其应用
CN111670769B (zh) 一种提高水稻抗逆性的方法
CN107371724B (zh) 一种菠菜栽培基质及栽培方法
CN112679280A (zh) 一种高效生防促生人参复合微生物菌肥制备方法
CN110892805B (zh) 一种提高玉米种子萌发耐盐性生物刺激素的应用
CN113249224A (zh) 一种便捷式丛枝菌根真菌施用方法
CN114231420A (zh) 一种促进植物生长的青霉组合物、菌剂及其应用
CN115536446A (zh) 一种促进植物生长的肥料及其应用
CN105340708A (zh) 一种三七工厂化育苗方法
CN105961441B (zh) 芽孢杆菌jc65及其挥发性物质在植物促生中的应用
CN105815002B (zh) 一种齿瓣石斛种子和共生真菌混合播种的育苗方法
CN116814496A (zh) 一种高效溶磷且促进植物生长的细菌及其应用
CN114145314B (zh) 一种具有低温保护作用的青霉组合物、低温保护剂及其应用和提高漂浮育苗成活率的方法
CN114350559B (zh) 一株耐盐促生的辽宁慢生根瘤菌ry6菌株及其应用
CN114375640A (zh) 一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法
CN108934768B (zh) 黑孢松露接种菌剂及其处理方法和菌根的培育方法
JP2014143931A (ja) 植物の生育を促進する新規軽量人工土壌
CN109836190A (zh) 一种利用生防细菌制备生防菌肥及消除甜瓜连茬障碍的方法
CN107006520B (zh) 鸡粪沼液用于防治棉花枯萎病的应用及防治方法
CN109362735B (zh) pencolide在制备植物生长调节剂或诱导剂中的应用
CN116458357B (zh) 一种根际土壤微生物促进果树生长的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant