CN114073713B - 一种钯银纳米颗粒以及其应用和制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种钯银纳米颗粒,为空心六面体结构的钯银合金材料。本发明在钯金属中掺入了较高比例的银,制备的钯银纳米颗粒人工氧化酶是空心结构,改变了钯原子与钯原子之间的距离,提高了人工氧化酶的抗菌性能、并降低了成本。上述钯银纳米颗粒作为抗菌剂安全高效,无需额外添加辅助条件(如光,热等)、也无需额外添加辅助物质(如过氧化氢等),即可催化分子氧产生活性氧物质,安全无毒,对哺乳细胞无明显毒副作用,并显著降低了细菌产生抗药性的可能。并且在催化氧气产生活性氧实现抗菌功能的过程中,既不释放钯也不释放银(包括银离子),不存在损耗,抗菌效果更加稳定持久。
Description
技术领域
本发明涉及抗菌技术领域,尤其涉及一种钯银纳米颗粒及其制备方法和应用。
背景技术
细菌抗药性的出现及快速传播严重威胁着全球公共卫生安全。目前,每年全球因细菌的抗药性死亡的人数达到了70万;据世界卫生组织估计,到2050年,这个数字将会达到1000万。与日趋严峻的细菌抗药性相比,传统的以抗生素为基础的抗菌手段,其研发速度严重滞后,获批上市的新的抗生素无论药物类型还是药物数量方面都呈逐年下降的趋势。因此研究和发展新型的抗菌方法有着极其重要的意义。
目前,有文献报道了多种抗菌试剂,如:金属(铜,银,铁等)、金属氧化物(氧化铜,氧化银等),碳材料(石墨烯,碳管等),阳离子聚合物以及抗菌肽。但是它们本身有着很大的局限性,比如,合成价格昂贵,抗菌效率不高,有一定的生物毒性和会诱导细菌产生抗药性等。
其中,银纳米颗粒是目前使用比较广泛的抗菌剂,银纳米颗粒能够作为反应物,通过参与类分顿反应生成活性氧物质,同时释放出银离子;或者通过进入细菌细胞的内部并与DNA和蛋白发生作用来发挥抗菌作用。但是反复使用细菌会产生抗药性,同时,银纳米颗粒抗菌过程中由于参与反应,存在一定损耗,工作一定时间后会面临失效的风险。
无机纳米材料作为人工纳米酶可以原位催化产生活性氧用于抗菌。与传统的抗生素相比,活性氧可以靶向细菌细胞的多个位点,包括核酸、蛋白和磷脂,从而不仅具有很好的抗菌能力、同时还能降低细菌产生抗药性的可能。随着纳米技术的快速发展,纳米材料抗菌正在成为研究的热点。
目前,现有的人工纳米酶的抗菌研究主要采用无机纳米材料模拟天然过氧化酶(即人工过氧化酶),通过催化过氧化氢以产生活性氧来实现高效杀菌。如:以介孔硅为衬底表面进行金纳米颗粒的修饰,催化过氧化氢产生活性氧用于抗菌;以石墨烯为基础的量子点催化过氧化氢产生活性氧用于表皮伤口抗菌。
由于该催化过程以过氧化氢为底物,因此人工过氧化酶的抗菌效果必须要有过氧化氢的参与才能体现。但是,生理学环境中内源过氧化氢的含量往往非常低。因此,为了达到高效的抗菌效果,这些人工过氧化酶需要外加过氧化氢才能发挥作用。众所周知,较高浓度的过氧化氢本身具有细胞毒性,额外添加的过氧化氢很可能会导致生物毒性。此外,如果人工过氧化酶的目标应用场景是在生物体皮下位置,那么就将无法外加过氧化氢。综上所述,需要额外添加过氧化氢这一要求限制了人工过氧化酶在抗菌领域的潜在应用场景和作用效率。
发明内容
有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供一种基于钯银纳米颗粒的抗菌应用及其制备方法,制备的钯银纳米颗粒具有高效的抗菌活性,无需额外的辅助条件或辅助物质,且细菌不易产生耐药性。
为解决以上技术问题,本发明提供了一种钯银纳米颗粒,为空心六面体结构的钯银合金材料。
上述钯银纳米颗粒也可称为钯银纳米笼。
所述钯银纳米颗粒的粒径优选为40~200nm。
所述钯银纳米颗粒中,钯的摩尔含量优选为10%~60%。
本发明优选的,所述钯银纳米颗粒通过六面体结构的银纳米颗粒和含钯化合物进行水热反应制备得到。
所述六面体结构的银纳米颗粒的粒径优选为40~200nm。
本发明可以通过调节银纳米颗粒的尺寸,调整钯银纳米颗粒的尺寸。
本发明在钯中掺入了较高比例的银,制备的钯银纳米颗粒人工氧化酶是空心结构,并且由于Ag的掺杂,改变了钯原子与钯原子之间的距离,提高了人工氧化酶的抗菌性能。
同时,钯是一种贵金属,本发明提供的钯银纳米颗粒人工氧化酶通过较高比例的银的掺入,相比于纯钯成本更低,降低了人工氧化酶的成本。
本发明提供了上述一种钯银纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤:
银纳米颗粒和含钯化合物在表面活性剂水溶液中,加热进行反应,得到钯银纳米颗粒。
本发明优选的,所述银纳米颗粒为六面体结构;
本发明优选的,所述银纳米颗粒的粒径为40~200nm。
本发明优选的,所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮;
本发明优选的,所述含钯化合物为氯亚钯酸钾。
本发明优选的,所述银纳米颗粒和含钯化合物的质量比为3.57~0.18。
本发明优选的,所述加热的温度为50~100℃,加热的时间为10~30min。
本发明优选的,所述银纳米颗粒按照以下方法制备:
将含硫化合物、含银化合物和表面活性剂在溶剂中混合,反应得到银纳米颗粒。
本发明优选的,所述含硫化合物为硫氢化钠或硫化钠;
本发明优选的,所述含银化合物为三氟乙酸银或硝酸银;
本发明优选的,所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮;
本发明优选的,所述溶剂为乙二醇或一缩二乙二醇。
本发明优选的,上述反应体系中还包括酸性化合物,所述酸性化合物优选为氯化氢溶液。
本发明提供的上述钯银纳米颗粒在水相溶液中具有良好的可分散性和胶体稳定性。
本发明提供的上述钯银纳米颗粒可以模仿天然氧化酶原位催化分子氧产生活性氧物质,从而作为一种人工氧化酶实现广谱高效的抗菌效果。
基于此,本发明提供了上述钯银纳米颗粒或上述制备方法制备的钯银纳米颗粒作为人工氧化酶抗菌的应用。
具体的,本发明提供了上述钯银纳米颗粒作为人工氧化酶在制备抗菌剂中的应用。
本发明优选的,所述抗菌剂适用于革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌。
本发明提供了一种抗菌剂,包括上述钯银纳米颗粒或上述制备方法制备的钯银纳米颗粒。
本发明优选的,所述抗菌剂还包括载体。
即将所述抗菌剂涂覆于载体表面。
本发明对所述载体的材质并无特殊限定,可以为本领域技术人员熟知的一般材质。本发明优选为无纺布,硅树脂,聚乙烯塑料等本领域技术人员熟知的适用载体。
本发明提供了一种基于钯银纳米颗粒人工氧化酶的抗菌方法,以上述钯银纳米颗粒作为抗菌剂,无需辅助条件或辅助物质。
具体的,本发明提供了一种抗菌方法,给予上述抗菌剂。
本发明中,上述抗菌方法为非诊断或治疗目的的抗菌方法。
本发明优选的,所述给予为:
将上述抗菌剂添加到受细菌感染的人体表皮部位和/或皮下组织进行高效除菌;
或者添加到受细菌感染的动物表皮部位和/或皮下组织,进行高效除菌。
本发明优选的,所述给予为:
将上述抗菌剂涂覆于材料表面进行高效除菌。
本发明优选的,所述给予为:
将上述抗菌剂涂覆于材料表面并添加到受细菌感染的人体表皮部位和/或皮下组织进行高效除菌,也可用于受细菌感染的动物表皮部位和/或皮下组织进行高效除菌。
本发明提供的上述钯银纳米颗粒作为抗菌剂安全高效,无需额外添加辅助条件(如光,热等)、也无需额外添加辅助物质(如过氧化氢等),即可催化分子氧产生活性氧物质,安全无毒,对哺乳细胞无明显毒副作用,并显著降低了细菌产生抗药性的可能。
并且本发明提供的钯银纳米颗粒人工氧化酶在催化氧气产生活性氧物质实现抗菌功能的过程中,既不释放银以及银离子,也不释放钯,不存在损耗,抗菌效果更加稳定持久。
与现有技术相比,本发明提供了一种钯银纳米颗粒,为空心六面体结构的钯银合金材料。
本发明提供的钯银纳米颗粒具有以下有益效果:
1、具有高效的抗菌活性;
2、降低了细菌产生耐药性的可能性;
3、抗菌过程中不存在损耗,抗菌效果稳定持久;
4、成本较低;
5、无需额外添加辅助条件或辅助物质,
6、对哺乳细胞无明显毒副作用、对宿主安全高效。
附图说明
图1为本实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶的微结构图;
图2为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用动态光散射测试的胶体稳定性图;
图3为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用抗坏血酸(AA)作为活性氧产生能力的表征;
图4为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用细菌平板计数法得到的抗菌效果图;
图5为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶与纯钯的抗菌试验结果比较;
图6为细菌对本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶与纳米银颗粒的抗药性试验结果比较;
图7为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用CCK-8细胞增殖-毒性检测法得到的对正常细胞的毒性图;
图8为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用细菌平板计数法得到的降低感染部位细菌含量的效果图。
具体实施方式
为了进一步说明本发明,下面结合实施例对本发明提供的供一种钯银纳米颗粒及其制备方法和应用进行详细描述。
实施例1
1.将氯化氢溶液和100mg聚乙烯吡咯烷酮加入到硫氢化钠(0.04mg)乙二醇溶液中(10mL),混合均匀,加入三氟乙酸银99.67mg,得到银纳米颗粒。银纳米颗粒为六面体结构。银纳米颗粒的尺寸为50纳米左右。
2.将银纳米颗粒0.50mg混合于聚乙烯吡咯烷酮水溶液中,加热(50℃)混匀(10分钟),加入氯亚钯酸钾0.14~2.82mg,得到钯银纳米笼。
图1为本实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶的微结构图。
可以看出,钯银纳米笼的尺寸为70纳米左右。
通过ICP-MS检测钯银纳米笼中钯的摩尔含量为10%~60%。
实施例2
1.将氯化氢溶液和300mg聚乙烯吡咯烷酮加入到硫氢化钠(0.04mg)乙二醇溶液中(30mL),混合均匀,加入三氟乙酸银99.67mg,得到银纳米颗粒。银纳米颗粒为六面体结构。银纳米颗粒的尺寸为60纳米左右。
2.将银纳米颗粒0.50mg混合于聚乙烯吡咯烷酮水溶液中,加热(100℃)混匀(30分钟),加入氯亚钯酸钾0.14~2.82mg,得到钯银纳米笼。
经检测,钯银纳米笼的尺寸为70纳米左右。钯银纳米笼中钯的摩尔含量为10%-60%。
实施例3
1.将氯化氢溶液和200mg聚乙烯吡咯烷酮加入到硫化钠(0.04mg)的一缩二乙二醇溶液中(10mL),混合均匀,加入硝酸银99.67mg,得到银纳米颗粒。银纳米颗粒为六面体结构。银纳米颗粒的尺寸为60纳米左右。
2.将银纳米颗粒0.50mg混合于聚乙烯吡咯烷酮水溶液中,加热(80℃)混匀(20分钟),加入氯亚钯酸钾0.14~2.82mg,得到钯银纳米笼。
经检测,钯银纳米笼的尺寸为70纳米左右。钯银纳米笼中钯的摩尔含量为10%~60%。
实施例4
一、钯银纳米笼人工氧化酶在水相环境中的胶体稳定性检测:
将上述制备的钯银纳米笼人工氧化酶分散在磷酸盐缓冲液中,在不同的时间点(0,12,24,48,72小时)用动态光散射测试仪测试钯银纳米笼人工氧化酶的水的动力学直径,进行比较。
图2为本发明实施例1制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用动态光散射测试的胶体稳定性图。实验结果表明本发明制备的钯银纳米笼人工氧化酶在水相环境中具有很好的胶体稳定性。
二、钯银纳米笼人工氧化酶产生活性氧的能力:
将上述制备的钯银纳米笼人工氧化酶与活性氧探针抗坏血酸(ascorbic acid,以下简称AA)混合均匀,在缓冲液中培养3h,离心去除人工氧化酶对活性氧探针吸光度的影响,用紫外可见吸收光谱仪探测AA吸光度的改变。实验结果表明钯银纳米笼人工氧化酶具有很强的产生活性氧的能力。
图3为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用抗坏血酸(AA)作为活性氧产生能力的表征。
三、抗菌实验:
将上述制备的钯银纳米笼人工氧化酶与5×105CFU/mL的革兰氏阳性菌或者革兰氏阴性菌在缓冲液中培养3小时,稀释100倍后将细菌涂板观察抗菌效果。将此实验结果与之前报道的纯钯的抗菌实验结果(Nature Communi cation,2018,9,129)进行比较。
图4为本发明实施例1制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用细菌平板计数法得到的抗菌效果图。
实验结果表明钯银纳米笼人工氧化酶能够高效的杀死革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
图5是本发明实施例1制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用细菌平板计数法得到的抗菌结果与文献中(Nature Communication,2018,9,129)报道的抗菌结果(每毫升1015个表面钯原子相当于每毫升0.176微克的钯)的比较。
实验结果表明与纯钯相比,钯银纳米笼人工氧化酶的抗菌能力更加优异。
四、抗药性实验:
1.将不同浓度的钯银纳米笼人工氧化酶和细菌混合培养,18小时后测试细菌的生长密度,定义最小抑菌浓度(MIC)为抑制细菌90%时的人工氧化酶浓度,计数MIC1;
2.将不同浓度的钯银纳米笼人工氧化酶和步骤1的1/2×MIC处的细菌混合培养,18小时后测试细菌的生长密度,计数MIC2,依次类推,总共12个循环,比较MIC的值。
3.以临床使用的抗生素庆大霉素和左氧氟沙星、以及银纳米颗粒作为对照实验,重复1,2的步骤,统计抗生素的MIC的变化。
图6为细菌对本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶与纳米银颗粒的抗药性试验结果比较。
实验结果表明细菌不会对钯银纳米笼人工氧化酶产生抗药性。
本发明制备的钯银纳米笼人工氧化酶在对同一种菌株连续重复使用10次共计250小时的抗菌实验周期内未见抗药性产生、而同样实验条件下银纳米颗粒连续使用4次共计100小时的抗菌实验周期中便有抗药性出现。
五、生物安全性实验:
将不同浓度的钯银纳米笼人工氧化酶(最大浓度0.1mg/mL)与小鼠的巨噬细胞,成纤维细胞一起混合培养4小时,利用细胞毒性测试试剂盒测细胞的存活。
图7为本发明实施例1制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用CCK-8细胞增殖-毒性检测法得到的对正常细胞的毒性图。
实验结果表明钯银纳米笼人工氧化酶安全无毒。
六、动物表皮伤口模型:
小鼠破损的皮肤进行绿脓杆菌的感染,48小时后添加钯银纳米笼人工氧化酶,连续多天观察伤口愈合的速度,取出伤口组织,加入缓冲液匀浆,将含有细菌的缓冲液涂板对比抗菌效果。
小鼠破损的皮肤进行金黄色葡萄球菌的感染,48小时后添加钯银纳米笼人工氧化酶涂覆的聚二甲基硅氧烷导管,连续多天观察伤口愈合的速度,取出伤口组织,加入缓冲液匀浆,将含有细菌的缓冲液涂板对比抗菌效果。
图8为本发明实施例制备的钯银纳米笼人工氧化酶利用细菌平板计数法得到的降低感染部位细菌含量的效果图。
实验结果表明钯银纳米笼人工氧化酶能够在无需额外添加辅助条件下明显降低细菌感染部位细菌的含量,加速伤口的愈合。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (9)
1.一种钯银纳米颗粒,为空心六面体结构的钯银合金材料;
所述钯银纳米颗粒按照以下方法制备:
银纳米颗粒和含钯化合物在表面活性剂水溶液中,进行水热反应,得到钯银纳米颗粒;
所述银纳米颗粒为六面体结构;
所述银纳米颗粒按照以下方法制备:
将含硫化合物、含银化合物和表面活性剂在溶剂中混合,反应得到银纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的钯银纳米颗粒,其特征在于,所述钯银纳米颗粒的粒径为40~200nm;
所述钯银纳米颗粒中,钯的摩尔含量为10%~60%。
3.权利要求1~2任一项所述的钯银纳米颗粒作为人工氧化酶在制备抗菌剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述抗菌剂适用于革兰氏阳性菌和/或革兰氏阴性菌。
5.一种抗菌剂,包括权利要求1~2任一项所述的钯银纳米颗粒。
6.根据权利要求5所述的抗菌剂,其特征在于,还包括载体。
7.一种钯银纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤:
银纳米颗粒和含钯化合物在表面活性剂水溶液中,进行水热反应,得到钯银纳米颗粒;
所述银纳米颗粒为六面体结构;
所述银纳米颗粒按照以下方法制备:
将含硫化合物、含银化合物和表面活性剂在溶剂中混合,反应得到银纳米颗粒。
8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述含硫化合物为硫氢化钠或硫化钠;
所述含银化合物为三氟乙酸银或硝酸银;
所述表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮;
所述溶剂为乙二醇或一缩二乙二醇。
9.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,
所述银纳米颗粒的粒径为40~200nm;
所述含钯化合物为氯亚钯酸钾、硝酸钯、氯化钯、乙酸钯和硫酸钯中的一种或多种。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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