CN113993517A

CN113993517A - 使用***素的抗菌剂量方案

Info

Publication number: CN113993517A
Application number: CN202080044366.2A
Authority: CN
Inventors: M.卡拉汉; M.图尔恩
Original assignee: Botanix Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Botanix Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2019-06-18
Filing date: 2020-06-17
Publication date: 2022-01-28
Also published as: EP3986395A1; BR112021025364A2; WO2020252522A1; CA3143338A1; AU2020297660A1; JP2022538994A; EP3986395A4; IL289020A; US20220296535A1

Abstract

本发明提供用于治疗局部细菌感染的方法、组合物和用途，包括施用***素。特别地，本发明提供用于治疗细菌感染的方法、用途和组合物，所述组合物包含***二酚或其他***素，剂量范围为约25mg至约500mg***素化合物。

Description

使用***素的抗菌剂量方案

技术领域

用于治疗或预防细菌感染的剂量方案，包括使用***素。

背景技术

由于细菌引起的感染率增加，导致严重或致命的疾病，具有抗微生物特性的化合物近年来引起了极大的关注。此外，广谱抗生素的定期使用导致对一些抗微生物组合物有抗性的细菌菌株如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(MSRA)的发生率增加。

新型抗微生物化合物和新组合物具有高度有效针对这些类型的抗生素抗性细菌的潜力。先前未暴露于抗微生物组合物的病原体可能对治疗几乎没有乃至没有抗性。

没有迹象表明细菌对抗生素的抗性会停止，为此需要新的抗生素和新的治疗选项在人类和非人类受试者中实现期望的治疗结果。

许多微生物形成了被称为生物膜的高度组织化结构，其中它们经由几种机制免于免疫细胞和抗生素杀伤。这些机制包括减少的抗生素渗透、低代谢活性、生理适应性、抗生素降解酶，以及遗传抗性变体的选择(Stewart&CostertonLancet.2001 358(9276):135-138)。

需要提供新的给予方案来治疗细菌，特别是对目前可用的抗生素化合物有抗性的细菌所致的感染。本发明寻求提供这样的替代给予方案。

背景技术的先前讨论仅旨在有利于理解本发明。该讨论不是确认或承认所提及的任何材料是或属于本申请优先权日时的公知常识的一部分。

发明内容

根据本发明的一个方面，提供了一种用于在受试者中治疗或预防细菌所致的感染的局部给药方案，所述方案包括以下步骤：

向受试者给药25mg至500mg的***素。

优选地，局部给药方案是施用于皮肤和粘膜表面(例如，口腔膜、***膜、直肠膜)、眼表面或鼻表面的给予方案。

优选地，局部给药方案导致了皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面的细菌去定殖化。

优选地，给予方案递送凝胶组合物或软膏组合物形式的组合物。软膏组合物优选包含一种或多种聚(取代或未取代的亚烷基)二醇或其衍生物。凝胶组合物优选地包含溶解***素的挥发性溶剂(例如，硅氧烷和/或低分子量醇)和增加粘度的粘度调节剂。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防受试者中的细菌所致的局部感染的施用于皮肤和粘膜表面的局部给药方案，所述方案包括以下步骤：

向受试者给药含25mg至500mg***素的局部组合物。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防受试者中的细菌所致的眼部感染的眼部给予方案，所述方案包括以下步骤：

向眼部感染部位给药含25mg至500mg***素的局部组合物。

根据本发明，还提供了一种用于在受试者中治疗或预防细菌所致的感染的局部鼻用或吸入给予方案，所述方案包括以下步骤：

通过鼻部递送或吸入向受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明的另一方面，提供了一种用于在需要此类治疗的受试者中治疗或预防细菌所致的局部感染的方法，所述方法包括以下步骤：

向受试者局部给药包含25mg至500mg***素的组合物。

优选地，治疗或预防局部细菌感染的方法是施用于皮肤和粘膜表面(例如，口腔膜、***膜、直肠膜)、眼表面或鼻表面的局部给药方案。

优选地，治疗或预防细菌感染的方法导致了皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面的细菌去定殖化。

根据本发明，还提供了一种用于在需要此类治疗的受试者中治疗或预防细菌所致的局部感染的方法，所述方法包括以下步骤：

向受试者的皮肤和粘膜表面给药包含25mg至500mg***素的局部组合物。

根据本发明，还提供了一种用于在需要此类治疗的受试者中治疗或预防细菌所致的眼部感染的方法，所述方法包括以下步骤：

向受试者给药包含25mg至500mg***素的局部眼用组合物。

通过注射向受试者给药包含25mg至500mg***素的局部鼻用或吸入组合物。

根据本发明的另一方面，提供了包含25mg至500mg***素的局部组合物用于在需要此类治疗或预防的受试者中治疗或预防局部细菌感染的用途。

优选地，用途是施用于皮肤和粘膜表面(例如，口腔膜、***膜、直肠膜)、眼表面或鼻表面的给予方案。

根据本发明，还提供了包含25mg至500mg***素的局部组合物用于给药于皮肤和粘膜表面以在需要此类治疗或预防的受试者中治疗或预防局部细菌感染的用途。

根据本发明，还提供了包含25mg至500mg***素的局部眼用组合物用于在需要此类治疗或预防的受试者中治疗或预防眼部细菌感染的用途。

根据本发明，还提供了包含25mg至500mg***素的局部鼻用或吸入组合物用于在需要此类治疗或预防的受试者中治疗或预防细菌感染的用途。

根据本发明的另一方面，提供了***素用于制造治疗或预防局部细菌感染的局部组合物的用途，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了***素用于制造给药于皮肤和粘膜表面以治疗或预防局部细菌感染的局部组合物的用途，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了***素用于制造治疗或预防眼部细菌感染的局部眼用组合物的用途，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了***素用于制造治疗或预防细菌感染的局部鼻用或吸入组合物的用途，其中通过鼻腔或吸入给予方案向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明的另一方面，提供了用于治疗或预防局部细菌感染的包含***素的局部组合物的制造，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了用于治疗或预防局部细菌感染的给药于皮肤和粘膜表面的包含***素的局部组合物的制造，其中向需要此类治疗或预防的受试者局部给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了用于治疗或预防眼部细菌感染的包含***素的局部眼用组合物的制造，其中向需要此类治疗或预防的受试者的眼部感染部位给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了用于治疗或预防细菌感染的包含***素的局部鼻用或吸入组合物的制造，其中通过鼻腔或吸入给予方案向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明的另一方面，提供了一种用于治疗或预防局部细菌感染的包含***素的局部组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者局部给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防局部细菌感染的给药于皮肤和粘膜表面的包含***素的局部组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者的皮肤和粘膜表面局部给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防眼部细菌感染的包含***素的局部眼用组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者的眼部感染部位给药25mg至2000mg的***素。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防细菌感染的包含***素的局部鼻用或吸入组合物，其中通过鼻腔或吸入给予方案向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

在本发明的优选形式中，细菌是革兰氏阳性菌。

在本发明的优选形式中，细菌是选自以下列表的属的菌种：链球菌属(Streptococcus spp.)、消化链球菌属(Peptostreptococcus spp.)、梭菌属(Clostridiumspp.)、李斯特氏菌属(Listeria spp.)、芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)、丙酸杆菌属(Propionibacterium spp.)、考克氏菌属(Kocuriaspp.)和棒状杆菌属(Corynebacterium spp.)，以及它们的组合。

在本发明的优选形式中，细菌是生物膜形成菌。

在本发明的优选形式中，细菌对至少一种抗生素有抗性。

优选地，***素是***二酚。

优选地，本发明的组合物为凝胶组合物或软膏组合物的形式。软膏组合物优选包含一种或多种聚(取代或未取代的亚烷基)二醇或其衍生物。凝胶组合物优选地包含溶解***素的挥发性溶剂(例如，硅氧烷和/或低分子量醇)和增加粘度的粘度调节剂。

发明内容

治疗方案

向受试者给药25mg至500mg的***素。

向受试者局部给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防受试者中的细菌所致的眼部感染的局部眼部给予方案，所述方案包括以下步骤：

向眼部感染部位给药25mg至500mg的***素。

通过鼻部递送或吸入向受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明的一个方面，提供了一种用于在受试者中对皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面进行细菌去定殖化的局部给药方案，所述方案包括以下步骤：

向受试者给药25mg至500mg的***素。

优选地，细菌是生物膜形成菌。优选地，细菌是抗生素抗性细菌。细菌可以是生物膜形成和抗生素抗性的。

在本发明的优选形式中，细菌是革兰氏阳性菌，优选地选自以下列表的属的菌种：链球菌属、消化链球菌属、梭菌属、李斯特氏菌属、芽孢杆菌属、葡萄球菌属、丙酸杆菌属、考克氏菌属和棒状杆菌属，以及它们的组合。

优选地，***素选自包括以下的列表：***二酚、***酚、***萜酚、***环萜酚和Δ⁹-四氢***酚。最优选地，***素是***二酚。

组合物可含有多于一种的***素。例如，本发明的组合物可含有两种、三种或更多种***素的组合。

治疗方法

向受试者局部给药包含25mg至500mg***素的组合物。

向受试者给药包含25mg至500mg***素的局部眼用组合物。

通过注射向受试者给药包含25mg至500mg***素的鼻用或吸入组合物。

根据本发明的另一方面，提供了一种用于对需要此类治疗的受试者的皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面进行局部细菌去定殖化的方法，所述方法包括以下步骤：

向受试者局部给药包含25mg至500mg***素的组合物。

优选地，用于治疗或预防细菌所致的局部感染的方法是施用于皮肤和粘膜表面(例如，口腔膜、***膜、直肠膜)、眼表面或鼻表面的给予方案。

优选地，治疗或预防局部细菌感染的方法导致了皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面的细菌去定殖化。

用于本发明的方法的组合物可含有多于一种的***素。例如，本发明的组合物可含有两种、三种或更多种***素的组合。

用途

优选地，用途导致了皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面的细菌去定殖化。

优选地，组合物的用途导致了皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面的细菌去定殖化。

组合物

根据本发明的另一方面，提供了一种用于治疗或预防局部细菌感染的包含***素的局部组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防局部细菌感染的给药于皮肤和粘膜表面的包含***素的局部组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者局部给药25mg至500mg的***素。

根据本发明，还提供了一种用于治疗或预防眼部细菌感染的包含***素的局部眼用组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者的眼部感染部位给药25mg至500mg的***素。

***酚

术语***素包括与***素受体相互作用的化合物以及各种***素模拟物，如某些四氢吡喃类似物(例如，Δ⁹-四氢***酚、Δ⁸-四氢-***酚、6,6,9-三甲基-3-戊基-6H-二苯并[b,d]吡喃-1-醇、3-(1,1-二甲基庚基)-6,6a,7,8,10,10a-六氢-1-羟基-6,6-二甲基-9H-二苯并[b,d]吡喃-9-酮、(-)-(3S,4S)-7-羟基-Δ6-四氢***酚-1,1-二甲基庚基、(+)-(3S,4S)-7-羟基-Δ6-四氢***酚-1,1-二甲基庚基、11-羟基-Δ⁹-四氢***酚和Δ8-四氢***酚-11-酸)；某些哌啶类似物(例如，(-)-(6S,6aR,9R,10aR)-5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氢-6-甲基-3-[(R)-1-甲基-4-苯基丁氧基]-1,9-菲啶二醇-1-乙酸酯)；某些氨基烷基吲哚类似物(例如，(R)-(+)-[2,3-二氢-5-甲基-3-(-4-吗啉基甲基)-吡咯并[1,2,3-de]-1,4-苯并噁嗪-6-基]-1-萘基-甲酮)；和某些吡喃开环类似物(例如，2-[3-甲基-6-(1-甲基乙烯基)-2-环己烯-1-基]-5-戊基-1,3-苯二酚和4-(1,1-二甲基庚基)-2,3'-二羟基-6'α-(3-羟丙基)-1',2',3',4',5',6'-六氢联苯)。

如本文所用，***二酚是指2-[3-甲基-6-(1-甲基乙烯基)-2-环己烯-1-基]-5-戊基-1,3-苯二酚。***二酚的合成描述于例如Petilka等人,Helv.Chim.Acta,52:1102(1969)和Mechoulam等人,J.Am.Chem.Soc.,87:3273(1965)，其据此以引用方式并入。

优选地，本发明的组合物含有以下浓度的***素：15mg/mL至0.1mg/mL、10mg/mL至1mg/mL、8mg/mL至2mg/mL、或3mg/mL至6mg/mL。

优选地，本发明的组合物含有以下浓度的***素：0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL、4.0mg/mL、4.5mg/mL、5.0mg/mL、5.5mg/mL、6.0mg/mL、6.5mg/mL、7.0mg/mL、7.5mg/mL、8.0mg/mL、8.5mg/mL、9.0mg/mL、9.5mg/mL、10.0mg/mL、10.5mg/mL、11.0mg/mL、11.5mg/mL、12.0mg/mL、12.5mg/mL、13.0mg/mL、13.5mg/mL,14.0mg/mL、14.5mg/mL、或15.0mg/mL。

优选地，本发明的组合物含有以下浓度的***素：2mg/mL至0.1mg/mL、1.8mg/mL至0.1mg/mL、1.5mg/mL至0.1mg/mL、或1mg/mL至0.1mg/mL。

优选地，本发明的组合物含有以下浓度的***素：2mg/mL至1mg/mL、1.8mg/mL至1mg/mL、或1.5mg/mL至1mg/mL。

优选地，本发明的组合物含有以下浓度的***素：0.5％至35％w/w、1％至30％w/w、2％至25％w/w、0.5％至20％w/w、5％至20％w/w、5％至15％w/w、5％至10％w/w、10％至20％w/w。

优选地，本发明的组合物含有以下浓度的***素：0.5％w/w、1％w/w、2.5％w/w、5％w/w、10％w/w、15％w/w或20％w/w。

赋形剂

本发明的组合物可含有赋形剂以助于递送***素。

本发明的组合物可优选地为软膏媒介物或凝胶媒介物的形式。

软膏媒介物

本发明的软膏媒介物优选地含有可同时充当***素的粘度调节剂和溶剂的组分的混合物。优选地，至少一种组分是液体，并且至少一种组分是固体或半固体。液体组分溶解***素并且降低软膏的粘度。固体或半固体组分增加了软膏的粘度并且可有助于溶解***素。通过平衡各组分的量，可以实现期望的粘度。

优选的软膏组合物包含1-35％w/w，优选地5-30％w/w，更优选地10-25％w/w，更优选地15-20％w/w浓度的***二酚。

在本发明的软膏组合物中，活性成分可以溶解或分散于包含二醇如聚乙二醇(PEG)的软膏基质中。本发明的组合物可以包含至少1重量％的聚(取代或未取代的亚烷基)二醇或其衍生物。

如本文所用，术语“聚(取代或未取代的亚烷基)二醇”是指具有以下重复单元的聚合物：

-(CH₂)_n0-

其中n是整数，优选地2或3，并且是指这样的聚合物：其中每个重复单元的一个或多个亚甲基被取代。合适的取代基包括烷氧基，如聚甲氧基丙二醇中的甲氧基。这样的聚合物已知有多个名称，例如，当n＝2时为聚乙二醇(polyethylene glycol)、聚氧乙烯、聚氧乙烯二醇和聚乙二醇(macrogol)，当n＝3时为聚丙二醇、聚氧丙烯和聚氧丙烯二醇。所有这些可本发明中用作这些聚合物的衍生物。

合适的衍生物包括聚(取代或未取代的亚烷基)二醇的醚和酯，如聚乙二醇醚和酯，例如，西土马哥、glycofurol、“Tweens”和嵌段共聚物，包括聚(取代或未取代的亚烷基)二醇，如泊洛沙姆(即聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物)，例如“Pluronics”，以及交联聚乙二醇。“Tween”和“Pluronic”是这些类型的聚合物的商品名。

可以单独使用聚(取代或未取代的亚烷基)二醇及其衍生物，或者可以组合使用各种等级和类型，以实现组合物的期望物理特性。

优选地，组合物包含聚乙二醇(PEG)或其衍生物。

PEG基质可包含单一分子量等级的PEG、或者一种或多种分子量等级的混合物。代表性的PEG分子量等级包括PEG 200、PEG 300、PEG 400、PEG 540、PEG 600、PEG 800、PEG900、PEG 1000、PEG 1450、PEG 1600、PEG 3000、PEG 3350、PEG 4000、PEG 4500、PEG 6000、PEG 8000和PEG20000。本发明的实施方案中使用的PEG优选地包含至少一种较低分子量的聚乙二醇，使得组合物在环境温度和体温下具有良好的铺展特性。通常，PEG200–PEG600在200℃下呈液体，且MW>600的PEG在200℃下呈半固体至固体。

本发明的其他实施方案包括溶解或分散于丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇(PPG)或它们的混合物的软膏基质中的活性成分。代表性的PPG分子量等级包括PPG 200、PPG 400、PPG425、PPG 750、PPG 1200、PPG 2000、PPG 3000和PPG 4000。优选的组合物包含分子量2000或更高的PPG。其他实施方案包括溶解或分散于丁二醇或己二醇中的活性成分。

本发明的其他实施方案包括任何前述聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇、二丙二醇、丁二醇和己二醇的混合物。例如，可优选的使用MW在200-600之间的PEG与MW在大于1000的PEG的混合物。通过改变液体和固体PEG组分的比率，可以针对不同的情况和施用部位生成具有期望粘度的组合物。

合适的组分的实例包括作为媒介物的液体组分的聚乙二醇400以及作为媒介物的固体或半固体组分的聚乙二醇4000。

聚乙二醇

液体	半固体	硬质固体
			PEG 200	PEG1000	PEG 4000
PEG 300	PEG1540	PEG 6000
			PEG 400

聚乙二醇衍生物

优选地，软膏媒介物的液体和半固体或固体组分具有类似于PEG 400和/或PEG4000的亲脂性。需注意，引入矿脂(petrolatum)无法提供递送***素的有效软膏。这可能是由于矿脂的高亲脂性质，其致使***素优先分配于组合物中而不移动到皮肤或粘膜表面、眼表面或鼻腔表面中。希望在软膏媒介物中包括允许***素优先分配到皮肤中的组分。

凝胶媒介物

本发明的凝胶媒介物优选地含有溶解***素的挥发性溶剂和增加粘度的粘度调节剂。

通过使用挥发性溶剂，可以实现更高的非晶态(即，处于溶解状态)***素浓度。***素可以溶解于更高浓度的挥发性溶剂中，然后一旦施用于皮肤并且挥发性溶剂蒸发，***素就以高浓度保留在皮肤上。挥发性溶剂可例如为C_2-6低分子量醇，如甲醇、异丙醇、丙醇、2-丁醇、正丁醇或乙醇。另选地，挥发性溶剂可为硅氧烷。其他合适的挥发性溶剂对于技术人员将是清楚的。

在本发明的优选形式中，组合物包含C_2-6低分子量醇和硅氧烷的组合。

有利地，在一些实施方案中，挥发性溶剂在环境温度下呈液体。优选地，挥发性溶剂在约30℃或更低，或约25℃下呈液体。优选地，挥发性溶剂的挥发性水平与异丙醇大致相同。优选地，挥发性溶剂的沸点在大气压下为约70℃至110℃。优选地，挥发性溶剂的沸点在大气压下为约80℃至105℃。优选地，挥发性溶剂的沸点在大气压下为约85℃至105℃。

优选的凝胶组合物包含1-35％w/w，优选地5-30％w/w，更优选地10-25％w/w，更优选地15-20％w/w浓度的***二酚。

在本发明的凝胶组合物中，活性成分溶解或分散于包含挥发性硅酮(silicone)液体，优选地非聚合硅氧烷的凝胶基质中。优选的硅酮液体具有约0.5cSt至约5cSt范围内的粘度。优选的硅酮是粘度为大约0.65cSt的六甲基二硅氧烷(HDS)。其他优选的硅氧烷包括三甲基硅氧烷、环四硅氧烷、环戊硅氧烷、环己硅氧烷以及粘度≤10cSt的较低分子量聚二甲基硅氧烷。本发明的组合物还可包含挥发性硅酮的混合物。优选的挥发性硅酮在25℃下的蒸发热<500kJ/kg，更优选地<400kJ/kg，更优选地<300kJ/kg，并且更优选地<200kJ/kg。

在本发明的优选形式中，硅氧烷每分子含有一至八个硅原子。在本发明的优选形式中，硅氧烷每分子含有二至五个硅原子。在一个实施方案中，硅氧烷含有两个或三个硅原子。

硅氧烷可具有一至八个甲基。在一个实施方案中，硅氧烷选自：六甲基二硅氧烷、八甲基三硅氧烷以及它们的组合。这些是最具挥发性的硅氧烷，并因此是最有利的。优选地，硅氧烷的挥发性水平与异丙醇大致相同。

在另一个实施方案中，硅氧烷含有4或5个硅原子，并且为例如十甲基四硅氧烷或十二甲基五硅氧烷。在另一个实施方案中，硅氧烷是环状4或5个硅原子的化合物，如八甲基环四硅氧烷(CAS#556-67-2)或十甲基环戊硅氧烷(CAS#541-02-6)。

在本发明的一种形式中，挥发性溶剂是与挥发性较小的聚甲基硅氧烷组合的己基甲基二硅氧烷。

有利地，在一些实施方案中，挥发性溶剂选自：C_2-6醇以及它们的组合。有利地，在一些实施方案中，挥发性溶剂选自：C_2-4醇以及它们的组合。在具体的实施方案中，挥发性溶剂选自：乙基醇(或乙醇)、正丙醇、异丙醇、丁醇以及它们的组合。其他挥发性溶剂对于技术人员将是清楚的。

在本发明的优选形式中，组合物包含C_2-6低分子量醇和非聚合硅氧烷的组合。

凝胶组合物优选地还包含在室温或体温下不具有显著挥发性的共溶剂。优选的共溶剂包括二醇及其衍生物。代表性的共溶剂包括二甘醇单***

聚丙二醇硬脂基醚(Arlamol^TM PS11E)、丙二醇二乙酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇单月桂酸酯、丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯、丙二醇单硬脂酸酯，以及它们的混合物。

优选地，共溶剂具有160℃至500℃的沸点@760.00mm Hg。例如，共溶剂优选地具有至少160℃、至少165℃、至少170℃、至少175℃、至少180℃、至少185℃、或至少190℃的最低沸点@760.00mm Hg。共溶剂优选地具有至多500℃、至多495℃、至多490℃、至多485℃、至多480℃、至多475℃、至多470℃、或至多465℃的最大沸点@760.00mm Hg。

凝胶组合物还可包含增加组合物粘度和/或导致改善的皮肤感觉的非挥发性成分；即润肤剂。本发明的凝胶组合物中的粘度调节剂用于增加凝胶的粘度。由于挥发性溶剂通常呈液体，需要增稠剂使凝胶在皮肤、粘膜表面等上保持期望的时间长度。代表性的成分包括粘度在约100cSt至约12,500cSt范围内的较高分子量聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇/聚丙二醇聚二甲基硅氧烷如PEG/PPG–19/19聚二甲基硅氧烷(DOWSIL^TM BY 11-030)、PEG/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、聚二甲基硅氧烷醇/三甲基甲硅烷氧基硅酸酯交联聚合物，以及它们的衍生物。

本发明的组合物可含有水(水性)或者可为非水性的。

本发明的制剂可例如以软膏剂、霜膏剂或洗剂、眼用软膏剂和滴眼剂或滴耳剂、浸渍敷料呈现，并且可含有适当的常规添加剂，如防腐剂、有助于药物渗透的溶剂以及软膏剂和霜膏剂中的润肤剂。制剂也可含有相容的常规载体，如霜膏或软膏基质以及用于洗剂的乙醇或油醇。这样的载体能够以制剂的约1％多至约98％存在。更通常地，它们将构成制剂的多至约80％。

本发明的组合物还可包括微量的常规添加剂，如粘度调节剂，例如黄原胶，以及防腐剂，如苯氧乙醇或苄醇，包括它们的混合物。对于一些治疗剂，可能需要引入缓冲剂以维持合适的pH。

适用于这样的组合物或药物的防腐剂包括例如苯氧乙醇，以及常规用于药物制剂，尤其是霜膏剂中的其他防腐剂。合适的防腐剂包括甲基羟苯酸酯、氯甲酚、山梨酸和苯甲酸。

本发明的组合物可通过常规制药技术来制备。因此，软膏剂和霜膏剂通过在升高的温度(优选地60-70℃)下将构成媒介物的组分混合在一起直至形成乳液来方便地制备。然后，可使混合物冷却至室温，并在添加***素后与任何其他成分一起搅拌以确保充分分散。

液体制剂(如滴耳剂和滴眼剂)通过将治疗剂溶解于构成媒介物的组分中，然后添加其他成分来制备。将所得的溶液或悬浮液分配到玻璃或塑料瓶中或单剂量包装如软明胶胶囊中，然后热密封。

本发明的组合物旨在用于药物或兽医用途。

本发明涵盖以上组合物的变化，因为相应化合物的量可以变化±5％、±7.5％、±10％、±15％、±17.5％、或±20％。

本发明涵盖组合物，其中活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些不同。在本发明的一种形式中，活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至50％。在本发明的一种形式中，活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至40％。在本发明的一种形式中，活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至30％。在本发明的一种形式中，活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至20％。在本发明的一种形式中，相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至10％。在本发明的一种形式中，活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至5％。在本发明的一种形式中，相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至10％。在本发明的一种形式中，活性成分和/或每种赋形剂的相对比例独立地与以上所指定的那些相差多至2％。

如本领域的技术人员所理解，赋形剂和活性物质的百分比之和不能超过100，并且上述变化受此限制。如本领的域技术人员所理解，赋形剂和活性物质的百分比之和可以小于100，因为本发明的形式包括除所指定的那些之外的组分。

上述变化是相对比例的百分比变化。以举例的方式，指定为1％的组分(赋形剂或活性物质)的相对比例的20％变化意指该组分的相对比例可为0.8-1.2％。

治疗

如本文所用，术语“感染”意指微生物的定殖，和/或微生物，特别是细菌，更特别是生物膜形成菌的增殖。感染可以是隐性的，或者导致局部细胞损伤。感染可以是局部的、亚临床的和暂时的，或另选地可以通过蔓延而传播成为急性或慢性临床感染。感染还可以是潜伏性感染，其中微生物存在于受试者体内，然而，受试者没有表现出与生物体相关联的疾病的症状。

优选地，本发明的组合物向受试者递送25mg至500mg的***素。

如本文所用，短语“治疗有效量”是指足以抑制与细菌携带或细菌感染相关联的细菌生长的***素的量。也就是说，所提及到的根据本发明的方法或组合物给药治疗有效量的***素是指治疗效应，其中显著的杀菌或抑菌活性引起相关细菌携带或细菌感染的显著抑制。如本文所用，术语“治疗有效量”是指无毒但足以提供期望的生物学、治疗和/或预防结果的组合物的量。期望的结果包括细菌定殖的消除，或疾病的体征、症状、或病因的减少和/或缓解，或生物***的任何其他期望的改变。在任何个别情况下，有效量可由本领域的普通技术人员使用常规实验来确定。关于药物组合物，有效量可为在调节疾病状态或其体征或症状时推荐的剂量。有效量根据使用的药物组合物和采用的给药途径而不同。考虑到特定受试者的各种因素，如年龄、体重、性别等以及受疾病或致病微生物影响的区域，常规地最优化有效量。

如本文所用，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指抑制疾病或病症，即，阻止或减少其发展或者其至少一种临床或亚临床症状，例如减少或消除细菌感染。“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”还指缓解疾病或病症，即，使得疾病或病症或者其临床或亚临床症状中的至少一种消退。被治疗的受试者的受益是统计学显著的，或者至少是受试者和/或医师可察觉的。在治疗细菌感染的语境中，术语治疗包括减少或消除细菌的定殖和/或细菌的增殖，包括减少生物膜形成或破坏现有的生物膜。

去定殖化或细菌去定殖化是减少或消除受试者体内的细菌如抗微生物剂抗性病原体(例如，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA))的存在。通过在如外科手术的事件之前抢先治疗定殖有例如抗微生物剂抗性生物体的受试者，降低了受试者继续发展危及生命的保健相关联的感染的可能性。细菌定殖的常见部位包括鼻腔通道、皮肤(包括腹股沟皮肤)和口腔。

在本发明的一种形式中，减少或消除细菌的定殖意指如由杀伤的细菌％所测量的减少或消除细菌的定殖。例如，杀伤的细菌％可为50％、60％、70％、80％、90％、95％或97％。

在本发明的一种形式中，减少或消除细菌的定殖意指如由细菌数量的log₁₀减少所测量的减少或消除细菌的定殖。例如，细菌的log₁₀减少可为一个log₁₀减少、两个log₁₀减少、三个log₁₀减少、四个log₁₀减少、五个log₁₀减少、六个log₁₀减少、七个log₁₀减少或更多。

如本文所用，术语“预防有效量”意指当根据期望的剂量方案给药时足以至少部分地预防或延迟微生物感染发作的组合物的量。

局部感染

在一个方面，用于治疗方案的组合物是用于治疗真皮或粘膜表面感染的局部药物组合物。

在本发明的一种形式中，感染与以下病症中的一种或多种相关：痤疮、皮疹、水疱、烧伤、瘙痒、蜂窝织炎、毛囊炎、指甲感染、疖、毛发感染、头皮感染、脓疱病、痔疮、口腔溃疡、齿龈炎、牙周炎、***炎、鼻损伤、肿胀、割伤、手术切口、晒伤、皮肤裂伤以及它们的组合。

在本发明的一种形式中，感染是急性细菌性皮肤和皮肤组织感染(ABSSSI)，其中感染与以下病症中的一种或多种相关：蜂窝织炎/丹毒、创伤感染，以及最小损伤表面积为大约75cm²的严重皮肤脓肿。

在本发明的一种形式中，感染是复杂的皮肤和皮肤组织感染(cSSSI)，其中感染涉及深层皮下组织或者除了抗微生物疗法之外还需要外科手术。

在本发明的一种形式中，感染是非复杂的或社区获得性皮肤或皮肤组织感染。

局部治疗方案可包括将25mg至500mg的***素直接给药于受试者的真皮或粘膜表面。优选地，将***素局部施用于受试者的皮肤或粘膜(口腔、***、直肠)。用途可包括向受试者的皮肤或粘膜(口服、***、直肠)给药25mg至500mg的***素。

眼部感染

在一个方面，用于治疗方案的组合物是用于治疗眼部感染的感染的眼用药物组合物。

眼部感染可分为(i)影响角膜和结膜的感染；(ii)眼睛周围软组织(眼附属器和眼眶)中的感染，其可间接地涉及眼睛并且可从眼眶扩散到脑中；以及(iii)眼内感染(眼内炎)，通常在穿透性眼外伤之后或者眼内手术之后。所有以上感染可通过本发明的***素递送方案来治疗。

眼部治疗方案可包括将25mg至500mg的***素直接给药于受试者的眼表面。优选地，将***素局部施用于受试者的眼睛。然而，***素给予方案可包括经由眼内注射、巩膜注射、缓释植入物或其他递送方法给药***素。用途可包括向受试者的眼睛施用25mg至500mg的***素。

通过鼻或肺部给药治疗的感染

在一个方面，用于治疗方案的组合物是用于治疗感染的鼻用或肺用药物组合物。可以使用鼻或肺部递送的治疗方案来治疗受试者中细菌所致的任何感染。

优选地，使用鼻或肺部治疗方案来治疗鼻腔、鼻窦、呼吸道和肺部的感染。例如，本发明的治疗方案可用于治疗：肺炎；鼻窦感染；与囊性纤维化相关联的感染；与哮喘相关联的感染；与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)相关联的感染；与尘肺病相关联的感染；与间质性肺病(ILD)相关联的感染。鼻或肺部治疗方案可包括向受试者的鼻或肺部***给药25mg至500mg的***素。***素可经由在鼻或肺部***中吸收而进入血流，并且可全身地用于受试者。然而，***素给予方案可另选地包括将***素给药于鼻或肺部***用于局部化的局部效应。用途可包括向受试者经鼻或肺部给药25mg至500mg的***素。

生物膜破坏

据信本发明的治疗方案可破坏或防止生物膜的形成。细菌感染可导致在受试者中，例如肺中、皮肤上或胃肠道中形成生物膜。这样的生物膜相关联的感染通常难以治疗。

不受任何理论的束缚，据信***素能够干扰生物膜形成菌的生物膜形成活性，从而使其对***素的抗菌活性更敏感。

如本文所用，术语“生物膜形成菌”意指形成生物膜的细菌，其中生物膜是微生物的聚集体，其中细胞包埋在彼此粘附或粘附到表面的胞外聚合物的自产基体中；和/或微生物来源的固着群落，其特征在于细胞附着于基质、界面或彼此附着，并且包埋在它们产生的胞外聚合物(EPS)的基体中。

本发明生物膜的组合物可以破坏已经存在的生物膜，或者可以减少或防止生物膜的形成。

当现有的生物膜被破坏时，生物膜中的细菌可能经受以下效应中的一种或多种：

-生物膜内细菌的杀伤；

-生物膜内细菌生长的减少；

-细菌对其上形成生物膜的表面的粘附性的降低；

-胞外聚合物(EPS)基体形成率的降低；

-EPS基体的粘度的降低。

当生物膜形成的抑制发生时，生物膜中的细菌可能经受以下效应中的一种或多种：

-在生物膜形成之前或期间形成生物膜的细菌的杀伤；

-在生物膜形成之前或期间形成生物膜的细菌的生长的减少；

-细菌对其上形成生物膜的表面的粘附性的降低；

-生物膜形成期间胞外聚合物(EPS)基体形成率的降低；

-生物膜形成期间EPS基体的粘度的降低。

优选地，本发明的治疗方案引起生物膜生长的抑制，其中与生长对照相比，OD590展示≥70％的生长抑制。在本说明书的实施例中提供了该测量的实例。

细菌

优选地，本发明的任何方面的细菌是革兰氏阳性菌。

在本发明的优选形式中，细菌是选自以下列表的属的菌种：链球菌属、消化链球菌属、梭菌属、李斯特氏菌属、芽孢杆菌属、葡萄球菌属、丙酸杆菌属、考克氏菌属和棒状杆菌属，以及它们的组合。

在本发明的优选形式中，细菌是选自以下属的属的菌种：葡萄球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、考克氏菌属和肠球菌属(Enterococcus spp.)。

在本发明的优选形式中，细菌选自以下物种：金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(包括MRSA)、沃氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)、路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、酿脓葡萄球菌(Staphylococcus pyogenes)、头状葡萄球菌(Staphylococcus capitis)、肺炎双球菌(Streptococcus pneumoniae)、产脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、杰氏棒杆菌(Corynebacterium jeikeium)、玫瑰色库克菌(Kocuria rosea)和痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)。

在本发明的优选形式中，细菌选自以下物种：金黄色葡萄球菌(包括MRSA)、沃氏葡萄球菌、头状葡萄球菌(Staphylococcus capitis)、表皮葡萄球菌、肺炎双球菌、产脓链球菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌、玫瑰色库克菌和粪肠球菌。

更优选地，细菌为金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌以外的细菌。

在本发明的一种形式中，细菌为MSRA。

在本发明的一种形式中，感染是待在非人类受试者中治疗的疾病，并且可以选自猪痢疾；牛、猪、马和狗中的钩端螺旋体病；皮肤感染；狗脓皮病；外耳炎；牛、绵羊和山羊中的乳腺炎；链球菌乳腺炎；马、猪和其他动物物种中的链球菌感染；小牛和其他动物物种中的肺炎球菌感染；马鼻疽；结膜炎；肠炎；肺炎；牛、绵羊和猪中的布鲁氏菌病；猪萎缩性鼻炎；败血症；子宫炎-***炎-无乳(MA)综合征；克雷伯菌(Klebsiella)感染；假结核病；传染性胸膜肺炎；原发性巴氏杆菌病；关节病；牛和家畜中的坏死杆菌病；钩端螺旋体病；猪和其他动物物种中的丹毒、李氏杆菌病；炭疽、clostridioses；破伤风感染、肉毒中毒；化脓棒状杆菌(Corynebacteriumpyogenes)感染；牛、绵羊和其他动物物种中的结核病；反刍动物的副结核病；诺卡菌病；Q热病；鹦鹉病；脑脊髓炎；牛和其他动物中的支原体病；猪地方性肺炎。

局部给药可包括将治疗有效量的***素直接给药于受试者的真皮或粘膜表面。优选地，将***素局部施用于受试者的皮肤、粘膜(口腔、鼻腔、***、直肠)或眼睛。用途可包括向受试者的皮肤、粘膜(口腔、鼻腔、***、直肠)或眼睛给药治疗有效量的***素。

额外的抗微生物剂

还可将其他活性剂引入本发明的组合物中。例如，可以引入额外的抗微生物剂如抗菌剂、抗真菌剂等。

例如，组合物还可包含过氧化苯甲酰、红霉素、克林霉素、强力霉素或甲氯环素。

可使用的额外抗微生物剂包括但不限于银化合物(例如，氯化银、硝酸银、氧化银)、银离子、银粒子、碘、聚维酮/碘、氯己定、2-对磺胺酰基苯胺乙醇(2-p-sulfanilyanilinoethanol)、4,4'-亚磺酰二苯胺、4-磺胺基水杨酸、醋地砜、乙酰砜、阿米卡星、阿莫西林、两性霉素B、氨苄青霉素、阿帕西林、阿哌环素、安普霉素、阿贝卡星、阿扑西林、叠氮氯霉素、阿奇霉素、氨曲南、杆菌肽、班贝霉素、比阿培南、溴莫普林、丁苷菌素、卷曲霉素、羧苄青霉素、卡波霉素、卡芦莫南、头孢羟氨苄、头孢孟多、头孢曲嗪、头孢拉宗、头孢克定、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢他美、头孢克肟、头孢甲肟、头孢米诺、头孢地嗪、头孢尼西、头孢哌酮、头孢雷特、头孢噻肟、头孢替坦、头孢替胺、头孢唑兰、头孢咪唑、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢丙烯、头孢沙定、头孢他啶、头孢特仑、头孢布烯、头孢曲松钠、头孢唑南、头孢氨苄、头孢来星、头孢菌素C、头孢拉定、氯霉素、金霉素、环丙沙星、克拉霉素、克林沙星、克林霉素、氯莫环素、粘杆菌素、环己西林、氨苯砜、地美环素、地百里砜、地贝卡星、双氢链霉素、地红霉素、多西环素、依诺沙星、恩维霉素、依匹西林、红霉素、氟氧头孢、健霉素、庆大霉素、葡氨苯砜、苯丙砜、短杆菌肽S、短杆菌肽、格雷沙星、胍甲环素、海他西林、亚胺培南、异帕米、交沙霉素、卡那霉素、柱晶白霉素、林可霉素、洛美沙星、光明霉素、赖甲环素、甲氯环素、美罗培南、甲烯土霉素、小诺米星、美迪加霉素、米诺环素、拉氧头孢、莫匹罗星、那氟沙星、纳他霉素、新霉素、奈替米星、诺氟沙星、竹桃霉素、土霉素、对磺胺酰基苄胺、帕尼培南、巴龙霉素、帕珠沙星、青霉素N、匹哌环素、吡哌酸、多粘菌素、普利霉素、喹那西林、核糖霉素、利福米特、利福平、利福霉素SV、利福喷丁、利福昔明、瑞斯西丁素、利替培南、罗他霉素、罗利环素、蔷薇霉素、罗红霉素、柳氮磺嘧啶、山环素、西索米星、司帕沙星、大观霉素、螺旋霉素、链霉素、琥珀氨苯砜、磺胺柯定、磺胺洛西酸、磺胺米柯定、磺胺酸、阿地砜、替考拉宁、替马沙星、替莫西林、四环素、四氧普林、甲砜霉素、噻唑砜、硫链丝菌肽、替卡西林、替吉莫南、妥布霉素、妥布霉素、甲氧苄啶、丙大观霉素、曲伐沙星、结核放线菌素、万古霉素、重氮乙酰丝氨酸、杀假丝菌素、氯苯甘醚、制皮菌素、菲律宾菌素、制霉色基素、美帕曲星、制霉菌素、寡霉素、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、罗索沙星、氨氟沙星、氟罗沙星、替马沙星、洛美沙星、真菌霉素A或杀结核菌素等。

受试者

受试者可为能够被细菌感染的任何受试者。受试者可为哺乳动物或鸟类。优选地，受试者选自人、犬、鸟、猪、牛、绵羊、马和猫。最优选地，受试者选自人、牛、猪、马、猫和犬。最优选地，受试者是人类。

给药

优选地，通过本发明的局部给药方案给药的总日剂量为25mg至500mg的***素。

优选地，通过本发明的给予方案给药的总日剂量为：

·当局部递送时25mg至500mg的***素；

·当经由眼部递送来递送时25mg至500mg的***素；

·当经由鼻或肺部递送来递送时25mg至500mg的***素。

在某些实施方案中，通过本发明的给予方案给药的***素的总日剂量具有选自以下的下限：25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、320mg、350mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1500mg至1900mg；以及选自以下的上限：30mg、50mg、70mg、100mg、150mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、320mg、350mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1500mg至2000mg。优选地，通过本发明的给予方案给药的***素的总日剂量为25mg至500mg、50mg至400mg、100mg至250mg。

在本发明的一个实施方案中，使用选自以下的给予方案向受试者给药***素：每天三次；每天两次；每天；每两天、每三天、每周一次；每两周一次和每月一次。

例如，如果***素出于局部鼻部去定殖化的目的而给药，则每天以两剂给药约200mg，每剂约100mg(每次给药每只鼻孔50mg)。

根据某些实施方案，定期给药组合物直至获得治疗。在一个优选的实施方案中，使用选自以下的给予方案向需要此类治疗的受试者给药组合物：每小时、每2小时、每3小时、每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次、每周一次、每周两次、每两周一次和每月一次。然而，根据本发明，可以利用其他施用计划表。优选地，治疗方案的组合物以每天1至5次，更优选地每天一次或两次给药于受试者。

本发明的局部治疗方案中使用的组合物可以制备用于口服、吸入(肺部)、鼻腔、眼部、或任何其他给药形式。优选地，组合物例如经眼、经颊、经直肠、经***、经鼻内或通过气溶胶给药进行给药。

给药模式优选地适用于组合物制成的形式。最有效反应的给药模式可凭经验确定，并且以下所述的给药方式作为实例给出，并不以任何方式限制本发明的组合物的递送方法。所有以上组合物通常用于制药工业，并且为适当合格的从业者所熟知。

本发明的组合物可任选地包括药学上可接受的无毒赋形剂和载体。如本文所用，“药用载体”是用于将化合物递送至受试者的药学上可接受的溶剂、悬浮剂、赋形剂或媒介物。载体可为液体或固体，并根据所考虑的计划给药方式进行选择。

本发明的组合物可以选自：立即释放组合物、延缓释放组合物、控制释放组合物和快速释放组合物。

本发明的组合物还可包含抗炎剂(如皮质类固醇)。如果组合物是局部组合物，则还可添加抗粉刺剂(anticomedolyic agent)(如维甲酸)和/或类视黄醇或其衍生物。

本文所述的组合物可通过使此类剂型包括在水包油乳液或油包水乳液中来配制。在这样的组合物中，立即释放剂型处于连续相中，并且延缓释放剂型处于非连续相中。还可将组合物以递送如上文所述的三种剂型的方式制备。例如，可以提供油包水包油乳液，其中油是含有立即释放组分的连续相，分散在油中的水含有第一延缓释放剂型，并且分散在水中的油含有第三延缓释放剂型。

本文所述的组合物可以是液体组合物的形式。液体组合物可包含溶液，该溶液包括溶解在溶剂中的治疗剂。通常，可使用具有期望效应的任何溶剂，在其中溶解有治疗剂，并且其可被给药于受试者。通常，可使用具有期望效应的任何浓度的治疗剂。在一些变型中，组合物是溶液，其是不饱和的、饱和的或过饱和的溶液。溶剂可为纯溶剂，或者可为液体溶剂组分的混合物。在一些变型中，所形成的溶液是原位胶凝组合物。可使用的溶剂和溶液类型对于精通这样的药物递送技术的那些是公知的。

组合物可以或者不可含有水。优选地，组合物不含有水，即，其是非水性的。在另一个优选的实施方案中，组合物不包含防腐剂。

根据本发明的方法和组合物的***素的给药可以通过任何合适的方式进行，所述方式导致足以治疗微生物感染或者减少感染部位的微生物生长的量。

***素可以以任何适当的量包含和包含在任何合适的载体物质内，并且通常以按组合物的总重量计1-95重量％的量存在。

药物或兽医组合物可以根据常规的药物或兽医实践进行配制(参见例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,2000；A.R.Gennaro编辑,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia，以及Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology；J.Swarbrick和J.C.Boylan编辑,1988-1999,Marcel Dekker,New York；Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,Mack Publishing Company,Easton,Pennsylvania,USA)。

通常，合适的载体、赋形剂和稀释剂的实例包括但不限于水、盐水、乙醇、右旋糖、甘油、乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、***树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、聚山梨醇酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油或它们的组合。组合物可额外包括润滑剂、pH缓冲剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂、甜味剂或调味剂。

组合物可为控制释放组合物的形式，并且可包括可降解或不可降解的聚合物、水凝胶、有机凝胶、或其他改变***素释放的物理结构。应当理解，这样的组合物可包括添加的额外非活性成分，其提供期望的颜色、稳定性、缓冲能力、分散性、或其他已知的期望特征。这样的组合物还可包括脂质体，如乳剂、泡沫、胶束、不溶性单层、液晶、磷脂分散体、片状层等。用于本发明的脂质体可由标准囊泡形成脂质形成，通常包括中性和带负电荷的磷脂和甾醇，如胆固醇。

局部组合物

本发明的组合物可以局部给药。因此，本文考虑使用适于直接施用于皮肤的组合物。优选地，局部组合物包含25mg至500mg的***素。

组合物可为选自混悬剂、乳剂、液体、霜膏剂、油、洗剂、软膏剂、凝胶、水凝胶、糊剂、硬膏剂、滚涂液、皮肤贴剂、喷雾剂、玻璃珠敷料、合成聚合物敷料和固体的形式。例如，可将本发明的组合物以水基组合物或基于有机溶剂如油的软膏剂的形式提供。另选地，本发明的组合物可以通过液体喷雾剂施用，该液体喷雾剂包含成膜组分以及至少一种***素分散或溶解于其中的溶剂。

可将本发明的组合物以选自但不限于柔顺剂、洗发剂、洗剂、凝胶、免洗型制剂、洗去型制剂和软膏剂的形式提供。

取决于优选的治疗方案，各种局部递送体系可适于给药本发明的组合物。可通过将本发明的***素溶解或组合在水性或非水性载体中来制备局部组合物。通常，不与可引入组合物中的化合物或任何其他活性成分明显反应且无刺激性的任何液体、霜膏剂或凝胶或类似物质是合适的。还可采用适当的不可喷雾的粘性、半固体或固体形式，其包括与局部施用相容的载体，并具有优选地大于水的动态粘度。

合适的组合物是本领域的技术人员公知的，并且包括但不限于溶液、混悬剂、乳剂、霜膏剂、凝胶、软膏剂、粉末、搽剂、药膏、气雾剂、透皮贴剂等，其根据需要灭菌或与辅剂例如防腐剂、稳定剂、乳化剂、润湿剂、芳香剂、着色剂、气味控制剂、增稠剂如天然树胶等混合。特别优选的局部组合物包括软膏剂、霜膏剂或凝胶。

软膏剂通常使用(1)油性基质，即，由固定油或烃组成的油性基质，如白矿脂、矿物油，或(2)吸收性基质，即，由无水物质或可吸收水的物质组成的吸收性基质，如无水羊毛脂来制备。通常，在形成基质(无论是油性还是吸收性)后，将***素以提供期望浓度的量添加。

霜膏剂是油/水乳剂。它们由油相(内相)和水相(连续相)组成，该油相通常包含固定油、烃等、蜡、原油、矿物油等，该水相包含水和任何水溶性物质，如添加的盐。两相通过使用乳化剂，例如表面活性剂，如月桂基亚硫酸钠；亲水胶体，如***胶胶质粘土、铝硅酸镁盐等稳定化。在形成乳液时，可以以实现期望浓度的量添加***素。

凝胶包含选自油性基质、水、或乳化-悬浮基质的基质。向基质中添加在基质中形成基体的胶凝剂，从而使其粘度增加。胶凝剂的实例是羟丙基纤维素、丙烯酸聚合物等。通常，***素以期望的浓度在添加胶凝剂之前的点添加到组合物中。

引入局部组合物中的抗生素化合物的量不是关键的；浓度应当在足以允许组合物的即时施用的范围之内，使得递送有效量的***素。

眼用组合物

本发明的组合物可以经由局部眼部递送来给药。优选地，眼用组合物包含100mg至500mg的***素。

眼部递送涵盖递送至巩膜、视网膜、眼内填充液、眼球周围的组织。例如，递送可为局部递送(霜膏剂、凝胶、软膏剂、喷雾剂、滴眼剂)、眼内植入或其他方式。

人工泪液媒介物可用于眼部***素递送。更具粘性的人工泪液使用高浓度的增粘剂，如

高粘度羧甲基纤维素(CMC)和Refresh

即0.35％高粘度CMC和0.65％低粘度CMC的共混物。

胶凝剂可用于***素递送。这样的试剂可作为液体滴注，然后几乎立即触发为凝胶相。这样的试剂的实例为Timoptic gel(结冷胶)、

(聚卡波非，泊洛沙姆)和

(聚卡波非，泊洛沙姆)、0.3％藻酸盐

另一种胶凝剂是聚卡波非-泊洛沙姆凝胶(例如

)。

眼部递送还可包括将***素注射到巩膜、眼内空间或眼后区域中。适用于眼部注射的组合物任选地包括无菌水溶液(在水溶性情况下)或分散体，以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。另选地，本发明的化合物在某些方面被包封在脂质体中并且以可注射溶液递送以助于它们跨细胞膜转运。另选地或除此之外，这样的制剂含有自组装孔结构的成分以利于跨细胞膜的转运。在各种方面，载体为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、它们的合适的混合物和植物油的溶剂或分散介质。适当的流动性例如但不限于通过使用如卵磷脂的包衣，通过在分散体的情况下维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来维持。在某些方面，通过在组合物中使用延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来实现可注射组合物的延长吸收。

鼻用或肺用组合物

本发明的组合物可以经由局部鼻或肺部递送来给药。优选地，鼻用或肺用组合物包含25mg至500mg的***素。

存在着宽泛的设计用于肺部递送治疗产品的机械装置的范围，包括但不限于喷雾器、定量吸入器和粉末吸入器，所有这些都是本领域的技术人员所熟悉的。适用于实践本发明的市售装置的一些具体实例是由Mallinckrodt,Inc.,St.Louis,Missouri制造的Ultravent喷雾器；由Marquest Medical Products,Englewood,Colorado制造的Acorn II喷雾器；由Glaxo Inc.,Research Triangle Park,North Carolina制造的Ventolin定量吸入器；以及由Fisons Corp.,Bedford,Massachusetts制造的Spinhaler粉末吸入器。

所有这样的装置均需要使用适用于分配***素的组合物。通常，每种组合物对于所采用的装置的类型是特定的，并且除了在疗法中可用的常见稀释剂、佐剂和/或载体之外，还可涉及使用适当的推进剂材料。同样，考虑使用脂质体、微胶囊或微球、包合复合物、或其他类型的载体。

适用于喷射或超声喷雾器的组合物将通常包含悬浮于水或非水性溶剂中的***素。组合物还可包括缓冲剂和简单糖(例如，用于稳定化和调节渗透压)。喷雾器组合物还可含有表面活性剂，以减少或防止在形成气溶胶时由溶液雾化引起的表面诱导的***素聚集。

用于定量吸入器装置的组合物通常包含细粒粉末，该细粒粉末含有借助于表面活性剂悬浮在推进剂中的***素。推进剂可为用于该目的的任何常规材料，如氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1,1,1,2四氟乙烷，或它们的组合。合适的表面活性剂包括脱水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂。油酸也可用作表面活性剂。

用于由粉末吸入器装置分配的组合物将包含含有***素的细粒干粉，并且还可包括增量剂，如乳糖、山梨糖醇、蔗糖、或甘露糖醇，该增量剂的量有利于粉末从装置中分散，例如，按组合物的重量计50至90％。***素应当最有利地以平均粒度小于10微米，最优选地0.5至5微米的颗粒形式制备，以最有效地递送至远端肺。

还考虑在本发明的治疗方案中鼻部递送***素。鼻部递送允许在将治疗产品给药于鼻之后***素直接通过血流，而无需***素沉积在肺中。用于鼻部递送的组合物包括具有葡聚糖或环糊精的那些。

一般原则

本领域的技术人员将理解，除了具体描述的那些之外，本文描述的本发明易于变型和修改。应当理解，本发明包括所有这样的变型和修改。本发明还包括说明书中单独或共同提及或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及任何和所有组合或任何两个或更多个步骤或特征。

本发明的范围不受本文所述的具体的实施方案的限制，这些实施方案仅旨在用于举例说明的目的。功能等同的产品、组合物和方法明显处于如本文所述的本发明的范围之内。

本文引用的所有出版物(包括专利、专利申请、期刊文章、实验室手册、书籍或其他文献)的全部公开内容据此以引用方式并入，这意味着其应当由读者作为该文本的一部分来阅读和考虑。仅仅出于简明的原因，该文本中引用的文献、参考文献、专利申请或专利在该文本中不再重复。不承认任何参考文献构成现有技术或者是在本发明所涉及领域中工作的那些的公知常识的一部分。

在整个说明书中，除非上下文另有要求，术语抗微生物剂应理解为包括具有抗菌特性的化合物。

在整个说明书中，除非上下文另有要求，词语“包含(comprise)”或变型如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”将理解为暗示包括所陈述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。

合适的“药学上可接受的盐”包括常规使用的无毒盐，例如，与无机碱所成的盐，如碱金属盐(如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(如钙盐和镁盐)、铵盐；或与有机碱所成的盐，例如胺盐(如甲胺盐、二甲胺盐、环己胺盐、苄胺盐、哌啶盐、乙二胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、三(羟甲基氨基)乙烷盐、单甲基-单乙醇胺盐、普鲁卡因盐和咖啡因盐)、碱性氨基酸盐(如精氨酸盐和赖氨酸盐)、四烷基铵盐等，或能够使肺动脉高血压降低剂在液体介质中保持可溶，或在液体介质，优选地水性介质中制备和/或有效给药的其他盐形式。可通过常规方法例如由相应的酸和碱或者通过盐交换来制备以上盐。

合适的药学上可接受的盐的实例包括无机酸加成盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐和硝酸盐；有机酸加成盐，如乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和抗坏血酸盐；与酸性氨基酸所成的盐，如天冬氨酸盐和谷氨酸盐；碱金属盐，如钠盐和钾盐；碱土金属盐，如镁盐和钙盐；铵盐；有机碱性盐，如三甲胺盐、三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、二环己基胺盐和N,N'-二苄基乙二胺盐；以及与碱性氨基酸所成的盐，如赖氨酸盐和精氨酸盐。在一些情况下，盐可为水合物或乙醇溶剂化物。

本文使用的所选术语的其他定义可见于具体实施方式内并贯穿全文应用。除非另有定义，本文使用的所有其他科学术语和技术术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。

附图说明

在本发明的几个非限制性实施方案的以下描述中更充分地描述本发明的其他特征。该描述仅仅用于举例说明本发明的目的而包括在内。其不应理解为对上述本发明的概括、公开或描述的限制。将参考附图进行描述，其中：

图1绘制了24天内CBD对金黄色葡萄球菌(S.aureus)的时间杀伤；

图2绘制了24天内CBD对金黄色葡萄球菌的时间杀伤实验的每日可变性；

图3绘制了24天内金黄色葡萄球菌对CBD的抗性的发展；

图4绘制了24天内金黄色葡萄球菌对达托霉素的抗性的发展；

图5绘制了在用万古霉素、达托霉素、莫匹罗星、克林霉素和***二酚处理后金黄色葡萄球菌菌株的MIC分布；

图6绘制了在用万古霉素、达托霉素、莫匹罗星、克林霉素和***二酚处理后金黄色葡萄球菌MRSA菌株的MIC分布；以及

图7绘制了在用万古霉素、达托霉素、莫匹罗星、克林霉素和***二酚处理后金黄色葡萄球菌MSSA菌株的MIC分布。

图8(a，b)是离体猪皮肤模型的结果图。接种金黄色葡萄球菌MRSA ATCC43300的活检猪皮肤外植体上剩余的菌落形成单位(CFU)。在感染后2小时施用含有CBD或莫匹罗星的组合物(纯色)和不含CBD的组合物(条纹柱)。在1小时(a)或24小时(b)后移除组织并测定剩余CFU(n＝2–3，误差线显示SEM；*表示与生长对照有统计学显著偏差(p<0.05)。

图9是离体猪皮肤模型的结果图。接种金黄色葡萄球菌MRSA ATCC43300的活检猪皮肤外植体上剩余的菌落形成单位(CFU)。在感染后2小时施用含有CBD或莫匹罗星的组合物(纯色)和不含CBD的组合物(条纹柱)。在1小时(a)或24小时(b)后移除组织并测定剩余CFU(n＝2–3，误差线显示SEM；*表示与生长对照有统计学显著偏差(p<0.05)。

图10是离体猪皮肤模型的结果图。接种金黄色葡萄球菌MRSA329的活检猪皮肤外植体上剩余的菌落形成单位(CFU)。在感染后2小时施用含有CBD或莫匹罗星的组合物(纯色)和不含CBD的组合物(条纹柱)。在1小时(a)或24小时(b)后移除组织并测定剩余CFU(n＝2–3，误差线显示SEM；*表示与生长对照有统计学显著偏差(p<0.05)。

图11是离体猪皮肤模型的结果图。接种金黄色葡萄球菌MRSA993的活检猪皮肤外植体上剩余的菌落形成单位(CFU)。在感染后2小时施用含有CBD或莫匹罗星的组合物(纯色)和不含CBD的组合物(条纹柱)。在1小时(a)或24小时(b)后移除组织并测定剩余CFU(n＝2–3，误差线显示SEM；*表示与生长对照有统计学显著偏差(p<0.05)。

图12是离体猪皮肤模型的结果图。接种金黄色葡萄球菌MRSA815的活检猪皮肤外植体上剩余的菌落形成单位(CFU)。在感染后2小时施用含有CBD或莫匹罗星的组合物(纯色)和不含CBD的组合物(条纹柱)。在1小时(a)或24小时(b)后移除组织并测定剩余CFU(n＝2–3，误差线显示SEM；*表示与生长对照有统计学显著偏差(p<0.05)。

图13是含CBD的组合物或相关媒介物即PBS、含10％Tween-20的蒸馏水或含1％Triton的蒸馏水的刺激效应图。

图14是离体猪皮肤模型测试5％、10％、15％或20％CBD组合物针对接种金黄色葡萄球菌MRSA ATCC43300的活检猪皮肤外植体的结果图。

图15是离体猪皮肤模型测试5％、10％、15％或20％CBD组合物针对接种金黄色葡萄球菌MRSA ATCC43300的活检猪皮肤外植体的结果图。

实施例

实施例1

进行该实验以评价***二酚(CBD)破坏金黄色葡萄球菌MRSA ATCC43300生物膜形成的能力。CBD由Dr Michael Thurn of Botanix Pharmaceuticals Ltd供应。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液(11.2mg于1.12mL的DMSO中)。测定中测试的最高浓度为128μg/mL，且2％DMSO作为最终浓度，使用1/20稀释以实现这些浓度。

生物膜形成

将细菌(金黄色葡萄球菌，ATCC 43300；MRSA)在胰酶大豆肉汤(TSB，BD，目录号211825)上于37℃培养过夜，然后用补充有5％葡萄糖的新鲜TSB以1:100稀释。将100μL添加在96孔聚苯乙烯(PS)(Corning；目录号3370)平板上，留下H行作为培养基对照。使平板在37℃下孵育48小时以生成生物膜。平板一式两份制备。

生物膜最小抑制浓度(生物膜MIC)

在聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号3370)的孔中，将抗生素对照和CBD用具有5％葡萄糖的TSB连续稀释两倍，一式两份铺板。所有平板均具有平底孔且用低蒸发性盖覆盖。

在孵育后48小时，使用手动移液管，将细菌平板小心地用200μL/孔的盐水溶液(0.9％NaCl，Baxter Healthcare；目录号AHF7124)小心地洗涤三次，以移除浮游细胞，但留下附着于平板孔的生物膜。然后，将100μL的稀释对照和CBD转移到含有生物膜的经洗涤平板中。然后，将这些平板在37℃下孵育24小时。

次日，将平板用盐水溶液洗涤三次，然后用100μL/孔的99％甲醇固定15分钟。一旦生物膜被固定，就添加100μL/孔的0.1％结晶紫染色剂(Sigma；目录号C0775-25G)保持20分钟，并且用作生物膜形成的指示剂，然后洗涤三次并充分干燥。为了溶解结晶紫，添加150μL/孔的甲醇以允许生物膜MIC分析。

生物膜MIC检测和分析

通过在590nm下读取的光密度(OD590)来测定生物膜形成。比较培养基对照(H行)相对平板的其余部分的平均值、标准偏差和置信度百分比，评价生物膜形成的百分比。

生物膜生长的抑制测定为OD590展示出与生长对照相比≥70％生长抑制时的最低浓度。使用Microsoft Excel执行分析。

表1：测试化合物

表2：对照化合物

结果

结果显示两个生物性平行测定和技术性平行测定(总计n＝4)。

表3：肉汤MIC值

*需注意克林霉素相对于该MRSA菌株而言无活性

表4：生物膜MIC值

在2和4μg/mL下，CBD能够对48小时生物膜形成抑制多至75％。***二酚生物膜MIC为其针对相同MRSA菌株的标准营养细胞MIC(0.5-1μg/mL)的大约四倍(1-2μg/mL)。

实施例3

抗菌时间杀伤测定金黄色葡萄球菌MRSA

当与单一终点肉汤微量稀释(MIC)测定相比时，时间杀伤测定指定了更好的细胞杀伤(在特定时间)的描述性评估。该测定确定了特定时间段内抗菌活性率和程度，并且还可提供关于所研究抗菌剂的可能体内活性的信息。进行该实验以估计***二酚(CBD)显示抗金黄色葡萄球菌MRSA ATCC43300的抗微生物活性需要多长时间。CBD由Dr MichaelThurn of Botanix Pharmaceuticals Ltd供应。

时间杀伤方法基于CLSI指南M26-A(NCCLS，1999)。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液(11.2mg于1.12mL的DMSO中)。测定中测试的最高浓度为64μg/mL，且2％DMSO作为最终浓度，使用1/20稀释以实现这些浓度。

平板测定制备

时间杀伤平板：将CBD在所有行中铺板，并且在聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号3370)的孔中，用阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CaMHB；BD，目录号212322)连续稀释两倍，一式两份铺板。每行视为时间点，其中A行，0小时；B行，1小时；C行，2小时；D行，3小时；E行，4小时；F行，6小时和G行，24小时。

而且，制备对照平板。将CBD和标准抗生素在聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号3370)的孔中，用阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CaMHB；BD，目录号212322)连续稀释两倍，一式两份铺板。

时间杀伤

测试的细菌为金黄色葡萄球菌ATCC 43300MRSA(ID GP_020:02)。

炭平板PS 96孔板：将50μL的无菌活性炭悬浮液(25mg/ml)添加到A行中。将90μL的0.9％无菌盐水添加到后续行中。

将细菌(表2.6)在CaMHB中于37℃培养过夜，然后稀释40倍并于37℃再孵育2-3小时。将所得的对数中期培养物用CaMHB稀释并添加到对照和时间杀伤96孔板的各孔中，以给出5×10⁵CFU/mL的最终细胞密度和0.03–64μg/mL的最终化合物浓度范围。将平板覆盖并在37℃下孵育24小时。

在所选择的时间点(0、1、2、3、4、6和24小时)，将每孔50μL培养物从时间杀伤平板转移到炭平板的第一行(含有炭悬浮液)中以中和化合物。在充分混合后，将10μL从A行转移到B行以给出1:10稀释液，重复该步骤直至1:10’000(E行)。将各稀释液的等分试样一式两份点样到胰酶大豆琼脂(TSA；BD，目录号236950)上，并在37℃下孵育过夜。

MIC检测和分析

在24小时孵育时视觉上确定MIC和时间杀伤结果。MIC定义为孵育后没有可见生长的最低浓度。时间杀伤定义为每个斑点中菌落的生长/无生长。

表5：测试化合物

表6：对照化合物

结果

在高于和低于先前MIC数据(1-2μg/mL)的两个浓度下测试CBD时间杀伤。当天的CBD对照MIC为2μg/mL。超过或等于MIC值的测试浓度显示在处理3小时后具杀菌性(图1)。

实施例4

金黄色葡萄球菌MRSA抗性的强制进化

进行该实验以评估在亚抑制浓度的***二酚(CBD)和达托霉素(用作阳性对照)存在下金黄色葡萄球菌(ATCC 43300)生长超过20天的抗性发展，以八个平行测定平行进行。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液。

生存力测试

测试的细菌为金黄色葡萄球菌ATCC 43300MRSA(ID GP_020:02)。

将对数中期金黄色葡萄球菌(ATCC 43300)生长培养物连续稀释，并一式两份地铺板在固体胰酶大豆琼脂(TSA)平板上，并在37℃下孵育过夜以测定活菌落计数。

将CBD 320μg/mL储备液用阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CaMHB；BD，目录No.212322)稀释至5、4、3、2、1.5、1、0.75、0.5、0.375和0.25μg/mL，将100μL在聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录No.3370)的孔中从孔1到孔10进行铺板。将金黄色葡萄球菌(ATCC43300)在CaMHB中于37℃培养过夜，然后稀释40倍并于37℃再孵育2-3小时。将所得的对数中期培养物用CaMHB稀释并将100μL添加到含有化合物的96孔板的各孔中，以给出5×10⁵CFU/mL的最终细胞密度。将平板覆盖并在37℃下孵育20小时。

注释：CBD将具有8个平行测定。

在24小时孵育时视觉上确定MIC，并且MIC定义为孵育后没有可见生长的最低浓度。

细菌制备：

然后，稀释具有允许生长的最高药物浓度的平板孔。尽管由眼睛读取平板，但使用Epoch微孔板分光光度计上OD600处的读数来调节各孔的生长密度(其为大约1:1000)。然后，将100μL稀释的细菌添加到新MIC平板中。OD600用于计算细胞达到10⁶CFU/mL密度的稀释度。将细菌用CaMHB稀释并将100μL添加到下一平行测定传代的各孔中。最终孔体积为200μL，细胞密度为5×10⁵CFU/mL。将每个平行测定(行)评估为不同菌株，为此对每个平行测定进行稀释。

一旦制备，就将平板覆盖并在37℃下孵育过夜。从第2天至第20天重复平板读取、化合物制备和细菌制备。

化合物制备：

取决于前一天的MIC，建立CBD测试浓度。

取决于前一天的MIC，基于先前的MIC结果，建立CBD和达托霉素测试浓度以至少确保高于MIC的三个浓度和低于MIC的三个浓度。在Protein LoBind Eppendorf 1.5mLsafelock管中制备化合物，用CaMHB稀释DMSO中的320μg/mL储备液以实现两倍的期望测试浓度。将100μL的所选择浓度添加到各孔中(参见图1)。一旦平板含有100μL细菌和100μL化合物，将其在37℃下孵育过夜。次日重复相同的程序。

无药物传代

在CBD和达托霉素存在下传代20天后，将每个平行测定在无药物培养基中传代4天以评估任何诱导的抗性的稳定性。

读取第20天的平板并遵循相同的细菌制备方法。在第20天用于CBD的相同浓度用于4天无药物传代。将达托霉素320μg/mL储备液稀释至16、8、5、4、2.5、2、1.25、1、0.75和0.5。这些浓度用于4天无药物传代。11列用作无药物传代孔，并且12列用作阴性生长对照，各孔中具有200μL未接种培养基。将稀释的细菌添加到平板中，每行一个平行测定，每孔100μL。最终孔体积为200μL，1-11列的细胞密度为5×10⁵CFU/mL，1-10列的CBD浓度范围为16-0.03μg/mL(图2)。

以相同的方式制备后续的无药物传代平板，不同之处在于各平行测定的细菌从11列(无药物生长对照孔)传代。

表7：测试化合物

表8：对照化合物

无药物传代对照&QC平板

与测试平板一起，将金黄色葡萄球菌的培养物在没有CBD的情况下传代24天，以建立所述生长条件中非选择性突变的基线。

在PS 96孔板中，将对照化合物(参见对照化合物)在1-12列的各行中用CaMHB连续稀释两倍，以给出50μL的2X期望测试浓度的最终体积。将六个孔用作阳性生长对照，并且六个用作未接种培养基的阴性生长对照。

在第一天，将对数中期金黄色葡萄球菌用CaMHB稀释至10⁶CFU/mL，并且向各孔添加50μL(阴性生长对照孔除外)，以给出100μL的最终体积和5×10⁵CFU/mL的浓度。

从孔H7接种后续传代。将H7中的细菌生长通过移液重新悬浮，然后通过分光光度计(Biotek Epoch)读取600nm处的光密度(OD600)。OD600用于计算细胞达到10⁶CFU/mL密度的稀释度。将细菌用CaMHB稀释并将50μL添加到下一传代的各孔中。最终孔体积为100μL，细胞密度为5×10⁵CFU/mL。

结果

通过20天的测定，CBD通常在大多数平行测定中在2至4μg/mL之间显示出恒定活性(图3和4)。然而，平行测定1的活性在第13天从3.5μg/mL急剧增加至>7μg/mL(该天测试的最高浓度)，并且到第18天，MIC超过后续天测试的最高浓度(多至>128μg/mL)(图2)。该平行测定目前处于16S和纯度研究之下，以证实其不是污染物。第7天后该平行测定的结果已从图3和4中排除。在实验过程中，第17天的技术困难意指将测定平板在4℃下储存24小时，然后继续测定而不中断。所有平行测定中在第9天测量的MIC也一致降至1μg/mL而没有明显的解释。

20天诱导后，将8个平行测定再次培养额外5天，以测试任何诱导抗性的稳定性。最终MIC通常在样品的可变性范围内，然而，平行测定2和8在第20天和第21天一致地显示升高的MIC(6-16μg/mL)。

实施例5

在50％人血清存在下的最小抑制浓度

进行该实验以评估在50％人血清存在下针对金黄色葡萄球菌的三种菌株的***二酚(CBD)的抗微生物活性。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液。测定中测试的最高浓度为1.28mg/mL，且2％DMSO作为最终浓度，使用1/20稀释以实现这些浓度。

最小抑制浓度(MIC)微量肉汤稀释测定

将化合物在聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号3370)的孔中，用50％人血清(Sigma；目录号H3667-100ML)连同50％阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CaMHB；BD，目录号212322)的混合物连续稀释两倍，一式两份铺板。所有平板均具有平底孔且用低蒸发性盖覆盖。

将金黄色葡萄球菌菌株在CaMHB中于37℃培养过夜，然后稀释40倍并在37℃下再孵育2-3小时。将所得的对数中期培养物用CaMHB稀释并添加到含有化合物的96孔板的各孔中，以给出5×10⁵CFU/mL的最终细胞密度和0.03–64μg/mL的最终化合物浓度范围。将平板覆盖并在37℃下孵育20小时。

MIC检测和分析

MIC定义为孵育后没有可见生长的最低浓度。仅通过目视检查确定MIC。

表9：测试化合物

表10：对照化合物

表11：测试细菌

结果

对于细菌，两个技术性重复测定。

表12：结果汇总

所有对照抗生素给出预期范围内的抑制值。当将人血清添加到测定培养基中时，CBD对所有测试菌株无活性，这与高水平的蛋白结合一致(例如，>97％，假设3％游离物负责活性)。

以下是每种化合物的最小抑制浓度(MIC)范围的汇总。用两个技术性重复测定(n＝2)执行实验。在重复测定读数相同的情况下，显示单一值。在重复测定不同的情况下，显示两个值。

表13：结果汇总

*来自报告99962_002

实施例6

最小抑制浓度测定MIC90 vs金黄色葡萄球菌

进行该实验以评估***二酚(CBD)针对132种金黄色葡萄球菌菌株(106种MRSA和26种MSSA菌株)的抗微生物活性。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液。测定中测试的最高浓度为32μg/mL。5％DMSO为最终浓度，使用1/10稀释以实现这些浓度。

细菌最小抑制浓度(MIC)微量肉汤稀释测定

将化合物在聚丙烯(PP)96深孔板(Fisher Biotec；目录号AX-P-DW-20-C-S)中用无菌水连续稀释两倍，将10μL冲压(stamped)到聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号No.3370)中。

将金黄色葡萄球菌在阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CaMHB；BD，目录号212322)中于37℃培养过夜，然后稀释40倍并于37℃再孵育2-3小时。将所得的对数中期培养物用CaMHB稀释并添加到含有化合物的96孔板的各孔中，以给出5×10⁵CFU/mL的最终细胞密度和0.03–64μg/mL的最终化合物浓度范围。将平板覆盖并在37℃下孵育20小时。

细菌MIC检测和分析

使用Tecan M1000 Pro分光光度计在600nm下读取光密度(OD600)。MIC确定为观察到≥95％生长抑制时的最低浓度。Dr Johannes Zuegg编写了脚本算法，使用PipelinePilot自动分析数据集。

测定的质量控制(QC)通过Z’-因子测定，由阴性(仅培养基)和阳性对照(不含抑制剂的细菌)以及标准品计算。Z’-因子≥0.25的平板以及在最高浓度下有活性且在最低浓度下无活性的标准品被接受用于进一步的数据分析。

MIC 90和50分析使用Microsoft Excel执行。

表14：测试化合物

表15：对照化合物

表16：测试的金黄色葡萄球菌菌株

结果

在132个菌株中，37个对克林霉素有抗性，导致0.125μg/mL的MIC50，变为64μg/mL的MIC90。其他对照抗生素给出预期范围内的抑制值。虽然几种VISA/VRSA菌株对万古霉素有抗性或高度抗性，但没有足够的菌株显著改变MIC90。CBD在测试的132个菌株中在2至4μg/mL之间显示出稳定的MIC。在不同的两天一式两份执行测定(总计n＝4)。参见图5-7。

表17：结果汇总

表18：金黄色葡萄球菌属MIC分布(μg/mL)

表19：金黄色葡萄球菌MRSA MIC分布

表20：金黄色葡萄球菌MRSA MIC分布

实施例7

厌氧革兰氏阳性菌最小抑制浓度测定

为了评估***二酚(CBD)在厌氧条件下针对常见皮肤细菌的抗微生物活性的潜力。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液。测定中测试的最高浓度为128μg/mL，且2％DMSO作为最终浓度，使用1/20稀释以实现这些浓度。

最小抑制浓度(MIC)微量肉汤稀释测定

所有步骤在COY B型厌氧室中执行，其中厌氧气氛通过引入在N2CoA气体混合物中的10％CO₂/5％H₂、催化剂Stak-Pak和O₂-H₂气体分析仪来控制，H₂水平在测定持续时间内保持在约2％。进一步促进厌氧环境的具有1％半胱氨酸的脑心浸液肉汤(BHI；OXOIDCM1135B)培养基用于该测定，并将该肉汤在用于氧减少之前在厌氧室中孵育24小时。

将CBD和对照抗生素在96孔聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号No.3370)中用BHI连续稀释两倍。对各菌株一式两份设置平板。

将所有细菌菌株(表2.5)在胰酶大豆琼脂(TSA，BD，目录号236950)上于37℃培养72小时。从琼脂平板取出一些菌落并溶解于BHI肉汤中。然后，将溶液调节至OD₆₀₀ 0.5-0.7并稀释至5×10⁵CFU/mL的最终细胞密度，将100μL添加到测试平板中，以给出0.06–128μg/mL的最终CBD浓度范围。将所有平板覆盖并在37℃下孵育48小时。

MIC检测和分析

表21：测试化合物

表22：对照化合物

表23：测试生物体

结果

对于细菌，两个生物性平行测定和技术性平行测定(总计n＝4)。所有对照抗生素给出预期范围内的抑制值。***二酚(CBD)针对所有测试菌株具有活性。

以下是在无氧室中不存在氧气时测定的各化合物的最小抑制浓度(MIC)范围的汇总。用技术性重复测定的两个生物平行测定(n＝4)执行实验。在重复测定读数相同的情况下，显示单一值。在重复测定不同的情况下，显示两个值。

表24：结果汇总

实施例8

扩展组：细菌最小抑制浓度测定

为了评估***二酚(CBD)针对一组革兰氏阳性菌的抗微生物活性的潜力。

方法

化合物制备

合作者以干燥材料供应样品。Angela Kavanagh在纯DMSO中制备10mg/mL的储备溶液。在测定中测试的最高浓度对于细菌为64μg/mL，且对于真菌为128μg/mL。2％DMSO为最终浓度，使用1/20稀释以实现这些浓度。

细菌最小抑制浓度(MIC)微量肉汤稀释测定

将化合物在聚苯乙烯(PS)96孔板(Corning；目录号3370)的孔中，用阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CaMHB；BD，目录号212322)连续稀释两倍，一式两份铺板。所有平板均具有平底孔且用低蒸发性盖覆盖。

将细菌在CaMHB中于37℃培养过夜，然后稀释40倍并于37℃再孵育2-3小时。将所得的对数中期培养物用CaMHB稀释并添加到含有化合物的96孔板的各孔中，以给出5×10⁵CFU/mL的最终细胞密度和0.03–64μg/mL的最终化合物浓度范围。将平板覆盖并在37℃下孵育20小时。

细菌MIC检测和分析

在视觉上确定细菌生长的抑制，其中MIC记录为没有可见生长的最低化合物浓度。

表25：测试化合物

表26：对照化合物

表27：测试生物体

表28：结果汇总

结果

CBD在0.5至4μg/mL范围内针对所有的革兰氏阳性菌株具有活性，除了表皮葡萄球菌NDR 60(GP_033)之外，其在4至8μg/mL下对CBD敏感。

表28是CBD的最小抑制浓度(MIC)范围的汇总。对细菌一式两份执行实验两次(n＝4)。当在平行测定之间各个值不同时显示各个值。

实施例8

初始功效研究致力于在离体猪金黄色葡萄球菌皮肤感染模型中筛选抗菌活性。评价从液体到凝胶到软膏范围内的多种不同CBD组合物在施用后1小时和24小时两者杀伤MRSA的能力(表29)。对于大多数制剂(组合物#4-12)，组分包括不同的硅酮基质，其中在组合物#1中测试矿脂(矿物油凝胶，即矿脂油)，在组合物#2中测试Transcutol(二甘醇单***)，并且在组合物#3中测试聚乙二醇(PEG 400/400)。CBD浓度的范围为5至20％(表29)。

离体猪皮肤测定

在宰杀后2–5小时接受在冰上运输的猪组织。

外植体制备：在含有2％(v/v)青霉素/链霉素的RPMI培养基中，使用5mm活检穿孔器切割组织外植体，并用无菌解剖刀片移除剩余的肌肉组织。对组织进行抗生素处理(用于菌群净化)0.5±0.25小时。用10±0.5mL RPMI(无抗生素，无FBS)冲洗外植体三次。然后将外植体用新鲜RPMI(无抗生素，无FBS)覆盖，并在4±2℃下放置12±4小时(抗生素清除)。然后移除过夜RPMI，并在感染前15±5分钟更换为10±0.5mL新鲜RPMI。

细菌接种：在实验的3周内从冷冻储备液直接划线新鲜平板。在实验前一天近傍晚，用单个菌落接种含有Todd Hewitt肉汤的培养管，并置于振荡培养箱(在37±2℃，150±10rpm)中。在实验的早晨，将200±50μL的过夜培养物转移到2±0.5mL新鲜Todd Hewitt肉汤中并在37℃下振荡3±1小时。然后将接种物洗涤至5×10⁸CFU mL^-1的最终浓度。

模型设置：在6孔板的各孔中设置2±0.2mL RPMI(无抗生素，无FBS)和0.4μmTrans-well***物。将组织外植体转移到孔中，粘膜侧达至***物。

感染和处理：用2±0.5μL制备的接种物(大约1×10⁶CFU/外植体或5×10⁸CFU mL^-1)感染外植体。将外植体在37±2℃下孵育2±0.5小时，然后一式三份给药处理物(12种含CBD的组合物和相关媒介物)，并在37±2℃下孵育1±0.25小时。

洗涤：处理后，将1.0±0.05mL无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)+2％(w/v)粘蛋白添加到用于适当组织的各***物，并轻轻涡旋5秒。然后抽吸液体悬浮液，并用RPMI(2±0.2mLRPMI[无抗生素，无FBS])补充孔。将外植体放回37℃培养箱中所指定的处理后时间点：1.0±0.25小时，24±4小时。

样品收集：洗涤后(1.0±0.25小时，24±4小时)，从transwells移除组织并置于500±0.03μL的中和剂(30mg/mL牛血清白蛋白)中。对样品进行超声处理和涡旋(30±5秒涡旋，120±6秒超声处理，30±5秒涡旋)。然后将样品以纯形式或用无菌PBS稀释的形式铺板。将50±2μL的样品用螺旋接种仪铺板在甘露醇盐琼脂上，并将平板在37±2℃下孵育24-48小时。次日，用自动平板计数器对菌落进行计数，并将CFU计数转化为Log₁₀(CFU/外植体)。

表29：局部组合物

功效极其依赖于组合物，并且一些组合物媒介物自身具有适度至良好的抗微生物活性(例如组合物2，具有高含量的transcutol和3.4％异丙醇)。结果提供于图8中。

一些组合物中缺乏活性是由于CBD没有从组合物中充分释放。

关于组合物#3和#12而非其相应媒介物，一致地观察到良好的活性(1小时后菌落形成单位[CFU]减少2-至3-log，24小时减少>5log)。组合物#3是基于PEG的组合物，其与用于含有20％CBD的Bactroban^TM(莫匹罗星)软膏的相匹配。组合物#12具有与胶凝剂(DowCorning BY 11-030)和少量水，而且与20％CBD组合的硅酮液(聚二甲基硅氧烷液体)和transcutol的混合物。

表30：BTX 1801活性物质的组合物和媒介物对照组合物(w/w)

实施例9

一般微生物测定方案

测试组合物由Botanix/Formulytica提供，并且以形式F###-#-##/L###-#-##的编号指定，其中“F”编号是指特定组合物并且“L”编号是指制造批次。日期在2019年12月5日之前的所有实验使用具有“L”编号形式L144-2-##的组合物执行；日期在2019年12月5日之后的所有实验使用具有“L”编号形式L144-3-##的组合物执行。

每个实验具有两个时间点：对于各菌株/处理/时间点组合的3个外植体，1±0.25小时，24±2小时。

细菌物种和菌株：金黄色葡萄球菌MRSA ATCC 43300，高水平莫匹罗星抗性MRSA菌株329和993，低水平莫匹罗星抗性MRSA菌株815。在现有文献中表征的莫匹罗星抗性菌株：Antimicrob.Agents Chemother.59,2765–2773(2015)。

使用的组织类型是猪皮肤组织(PST)。

中和剂：500μL或1mL 30mg/mLBSA用于所有含有CBD的媒介物；1mL PBS中的500μgAmberlite Beads(XAD-40)用于中和莫匹罗星。

皮肤和外植体制备

将来自到达实验室前2–5小时收获肉的猪的猪皮组织(PST)在冰上运送到实验室。清洁约8cm×8cm的一个或多个皮肤切片，以移除总污染并剃毛。使用5mm活检穿孔器切割组织外植体，并用无菌解剖刀片移除剩余的肌肉组织。

在4±2℃下，将外植体浸泡到RPMI+2％(v/v)青霉素/链霉素中24–48小时，以减少正常菌群的存在。用新鲜RPMI(无抗生素)冲洗外植体两次，并在4±2℃下浸泡14±3小时以移除抗生素。在临用于测定之前，再次洗涤外植体，并在37±2℃下浸泡到RPMI(无抗生素)中30±10分钟。

将外植体置入6孔细胞培养平板中的0.4μm trans-well***物顶上，***物下方为2±0.5mLRPMI。

细菌制备

在实验日的三周内，将平板划线以直接从冷冻储备液分离到血琼脂平板(BAP)上。在实验前一天近傍晚，将包含含有亚致死量莫匹罗星的Todd Hewitt肉汤(THB)的培养管用来自BAP的单菌落接种，并置于振荡培养箱(37±2℃，200±10rpm)中。通过用THB以1:100稀释2％莫匹罗星软膏来制备该肉汤。

实验当天，将200±50μL过夜培养物转移到2±0.5mL新鲜THB中，并在37℃下振荡3±1小时。将RPMI中大约5×10⁸CFU/mL的接种物通过以约20,000x g离心洗涤，随后移除上清液并重悬浮沉淀。通过将传代培养物在RPMI培养基中稀释至约5×10⁸CFU/mL的浓度来生成接种物。这通常是1:4稀释，对应于600nm下约0.6的光密度。该洗涤步骤完全完成两次，第三次重悬液用作接种物。

通过制备1:10,000稀释液(2×1:100连续稀释)并将50μL该稀释液铺板在MSA上来定量测量最终接种物。

感染

将2μL的约5×10⁸CFU/mL接种物吸移到各外植体上(约1×10⁶CFU/伤口床)。在37±2℃下孵育2±0.25小时。

处理和洗涤

用100μL的适当组合物处理外植体，其中没有组合物施用于生长对照(GC)外植体。将外植体在37±2℃下孵育1±0.25小时。

使用1.0±0.05mL无菌PBS+2％(w/v)粘蛋白洗涤外植体至各***物中。将粘蛋白直接引入孔中的各外植体上。轻轻涡旋5±2秒。吸出粘蛋白和残余处理物，并根据需要机械移除。

移除trans-wells下方的培养基(不含抗生素的RPMI)，并更换新鲜的2±0.5mL。将外植体返回至37±2℃，持续1±0.25小时或24±2小时。

样品收集

在适当时间，移除外植体并置入中和剂(如上所述)中。

用涡旋/超声处理/涡旋系列处理外植体以释放细菌(30±5秒涡旋，120±6秒超声处理，30±5秒涡旋)。使用螺旋接种仪，将50±2μL各样品铺板在甘露醇盐琼脂平板上(纯的，以1:100稀释，或以1:10,000稀释)。将平板在37℃下孵育24–48小时，使用自动平板计数器计数，并转化为Log10(CFU/外植体)。

数据和统计分析

将平板计数输入Prism(Graphpad)中，并将数据绘制为平均值与平均值的标准误差(SEM)。通常，通过使用单因素方差分析与Holm-Sidak后校正的“多重比较”分离两个时间点，使用Prism来分析每周数据。

通过将所有数据存储在Microsoft Excel工作簿中来生成组合数据集。通过将每个实验平均值乘以该实验中样品的数量，对每个实验的该值求和，并除以样品的总数量来计算总平均值(加权平均值)。

通过应用总方差定律来计算组合数据集的标准偏差。每个实验数据集的方差通过以下计算：将标准偏差(如由Excel所计算)的平方加上该实验平均值与总加权平均值之差的平方；该组合值乘以每个实验的样品数量。通过取这些方差之和除以样品总数量的平方根来计算全数据集的标准偏差。通过将标准偏差除以样品总数量的平方根来计算平均值的标准误差。通过将数据导入Prism(Graphpad)并使用2因素方差分析与Dunnett后校正的“多重比较”来确定统计学显著性。

中和方案

中和方案背景

外植体和细菌制备与以上“一般抗微生物测定方案”中描述的相同。最终接种物以5×10⁴CFU/mL在PBS中的悬浮液制备。

攻击制剂

含有1mL的PBS(对于阴性对照)、1mL PBS中的500μg Amberlite Beads(XAD-40)(对于莫匹罗星)、或PBS pH＝7.4中的1mL的30mg/mL BSA(对于所有含有CBD的组合物及其媒介物)的Eppendorf管(1.7mL)掺加有主要用于本项目(20μL的5×10⁴CFU/mL接种物)的约1×10³(3log)CFU的金黄色葡萄球菌ATCC 43300细菌。

如上“皮肤和外植体制备”中所述制备外植体，并如上“处理和洗涤”以及“样品收集”所述进行处理。

样品收集和定量

将外植体置入含有约1×10³的制备的1.7mL Eppendorf管中，并经受与以上“样品收集”中所概述的相同中和以及铺板方案。在约36小时后对平板计数。自生长对照的log减少小于或等于0.2的任何处理组均认为合格(根据ASTM E1054)。

最小抑制浓度(MIC)微量滴定肉汤稀释方案

MIC细菌制备

所用菌株：ATCC 29213(标准对照)、ATCC 43300、低水平莫匹罗星抗性分离物815、高水平莫匹罗星抗性分离物329、高水平莫匹罗星抗性分离物993。

如上“细菌制备”部分所述制备的所有菌株具有以下差异：在Müller-Hinton肉汤(MHB)而非RPMI中制备接种物，并在洗涤后以1:10,000稀释至约5×10⁴CFU/mL的接种物浓度。

平板制备

使用多通道移液管，将100μL的MHB添加到96孔板(圆底/U形底)的各孔中。将抗生素的储备溶液以2X最高测定浓度制备(4096μg/mL的莫匹罗星和100μg/mL的CBD)。将100μL的该肉汤添加到平板的1列中的每个含有肉汤的孔中，并通过吸取全部体积6-7次进行混合，最终浓度为2048μg/mL莫匹罗星或50μg/mL CBD。将100μL的来自1列的肉汤添加到2列并通过吸取100μL 6-7次进行混合。这重复直到11列(2μg/mL莫匹罗星或0.049μg/mL CBD)。12列没有抗微生物剂。

实验设置

将5μL的各接种物添加到适当的孔中(留下多个孔没有接种并用于校正含有CBD的孔的吸光度并作为阴性对照)。将平板在37℃下孵育18–24小时。通过读平板器在600nm处读取平板。

数据分析

测定在第一孔中发生抑制，与具有相同浓度抗微生物剂的未感染孔的OD600相差<0.05，只要抑制生长持续到所有较高浓度。对各抗微生物剂执行两次实验，并且数据报告为获得的两个值的范围。

刺激(MTT)方案

MTT组织制备

如上“皮肤和外植体制备”中所述制备外植体，并如上“处理和洗涤”以及“样品收集”所述进行处理。将外植体置于6孔板中的RPMI+2％(v/v)青霉素-链霉素中浸泡的无菌纱布上，而非trans-wells。

处理和实验设计

将10μL的组合物或对照添加到外植体的顶部，并孵育24±2小时。“处理”是含有CBD的组合物或相关媒介物之一。对照是PBS(pH＝7.4)作为非刺激性对照，含10％Tween-20的蒸馏水作为非刺激性洗涤剂，含1％Triton的蒸馏水作为轻度刺激性洗涤剂，并且含5％SDS的蒸馏水作为高度刺激性洗涤剂。所有对照均用于所有测定。

MTT测定

处理孵育后，将外植体添加到100μL MTT试剂中，并在37±2℃下孵育1.5±0.5小时。用MTT试剂孵育后，将外植体添加到100μL脱染剂(0.1MHCl于2-丙醇中)中，并在4±2℃下孵育20±4小时。

数据收集和分析

从孔移除外植体，并且通过570nm和600nm处的吸光度读取剩余的脱染剂。570nm吸光度对应于MTT信号，并且600nm信号显示光的任何非特异性阻断(如通过剩余组织)。将数据归一化为非刺激性对照(PBS和/或10％Tween-20)。

结果

在原始12种中，确定最佳组合物为F79-16-3(液体)、F144-2-11(软膏)和F144-2-4(凝胶)。在1小时，F79-16-3(2.9log减少)和F144-2-4(1.8log减少)针对金黄色葡萄球菌ATCC 43300最有效(图8，图9)。

在24小时，所有三种组合物都是高度有效的，分别具有4.3、3.9和4.7log减少。F79-16-3的媒介物针对ATCC 43300的功效相当(图8，图9)。

所有组合物针对莫匹罗星抗性MRSA菌株都是相似地有效的(图10-12)。

所有含有CDC的组合物对离体猪皮肤无刺激性(图13)。

在所分析的12种中，如由抗微生物测定所测量，最佳组合物是F79-16-3(液体)、F144-2-11(软膏)和F144-2-4(凝胶)。与莫匹罗星相比，所有三种组合物均针对高度莫匹罗星抗性(MIC 256至2048ug/mL)MRSA菌株(329和993)更有效。与莫匹罗星相比，组合物F79-16-3和F144-2-4似乎针对编号为815的低水平抗性菌株更有效。

实施例10

一般微生物测定方案

测试组合物由Botanix/Formulytica提供，并且以形式F###-#-##/L###-#-##的编号指定，其中“F”编号是指特定组合物并且“L”编号是指制造批次。

每个实验具有两个时间点：对于各菌株/处理/时间点组合的3个外植体，1±0.25小时，24±2小时。细菌物种和菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 43300。

皮肤和外植体制备

用15±5mL的RPMI+2％(v/v)青霉素/链霉素+0.5mg/L两性霉素B(RPMI+ABXF)冲洗外植体两次。在37±2℃下，将外植体浸泡到新鲜15±5mL RPMI+ABXF中1±0.25小时，以减少正常菌群的存在。用新鲜RPMI(无抗生素)冲洗外植体两次。在37±2℃下，将外植体浸泡到新鲜RPMI中1±0.25小时以移除抗生素。

在临用于测定之前，将外植体用15±5mL的RPMI再洗涤两次。将外植体置入6孔细胞培养平板中的0.4μm trans-well***物顶上，***物下方为2±0.5mL RPMI。

细菌制备

在实验的三周内，将平板划线以直接从冷冻储备液分离到血琼脂平板(BAP)或甘露醇盐琼脂(MSA)平板上。在实验前一天近傍晚，将包含Todd Hewitt肉汤(THB)的培养管用来自BAP的单菌落接种，并置于振荡培养箱(37±2℃，200±10rpm)中。

通过制备1:10,000稀释液(2x 1:100连续稀释)，将50μL该稀释液铺板在MSA上并计数菌落来定量测量最终接种物。

感染

将接种物(2±0.5μL的约5×10⁸CFU/mL金黄色葡萄球菌)吸移到各外植体(约1×10⁶CFU/外植体)上。在37±2℃下孵育2±0.25小时。

处理

使用1.0±0.05mL无菌PBS+2％(w/v)粘蛋白将外植体洗涤至各孔中。将粘蛋白直接引入孔中的各外植体上并轻轻涡旋5±2秒。吸出粘蛋白和残余处理物，并根据需要机械移除。

样品收集

在适当时间，移除外植体并置入中和剂(如上所述)中。用涡旋/超声处理/涡旋系列处理外植体以释放细菌(30±5秒涡旋，120±6秒超声处理，30±5秒涡旋)。

使用螺旋接种仪，将50±2μL各样品铺板在甘露醇盐琼脂平板上(纯的，以1:100稀释，或以1:10,000稀释)。将平板在37℃下孵育24–48小时，使用自动平板计数器计数，并转化为Log10(CFU/外植体)。

数据和统计分析

表31：处理

名称	标识编号
		5％软膏	F/L 144-5-1
5％软膏(媒介物)	F/L 144-5-2
		10％软膏	F/L 144-5-3
10％软膏(媒介物)	F/L 144-5-4
		15％软膏	F/L 144-5-5
15％软膏(媒介物)	F/L 144-5-6
		3(20％软膏)	F 144-2-11(B)144-3-05
3V(20％软膏媒介物)	F144-2-24(B)144-3-06
		5％凝胶	F/L144-5-7
5％凝胶(媒介物)	F/L 144-5-8
		10％凝胶	F/L 144-5-9
10％凝胶(媒介物)	F/L 144-5-10
		15％凝胶	F/L 144-5-11
15％凝胶(媒介物)	F/L 144-5-12
		12(20％凝胶)	F144-2-04(B)144-3-07
12C(20％凝胶媒介物)	F144-2-16(B)144-3-08

结果

在1小时和24小时两者，所有含有CBD的处理物导致自生长对照的统计学上显著的(p<0.05p)减少。无论在1小时还是在24小时，没有媒介物导致自生长对照的统计学上显著的减少。媒介物处理的最大总减少为20％软膏媒介物，其导致约1.4Log减少(图14，图15)。

20％CBD组合物在1小时明显是最有效的浓度(约3.4Log减少)，其他处理物在(对于5％、10％和15％组合物分别为约1.8、约1.5和约1.7Log减少)时不形成曲线；20％CBD软膏与5％、10％和15％组合物显著不同(p<0.05)。在24小时，组合物有效性与CBD百分比大致相关(以升序5％至20％：约4.6、约5.9、约6.5、约6.4Log减少)；没有非媒介物处理与其他处理显著不同。

在1小时，凝胶组合物的有效性与CBD百分比大致相关(以升序：约1.2、约1.2、约2、约3.3Log减少)，并且5％至20％之间的差异是统计学显著的；20％CBD凝胶与5％、10％和15％组合物显著不同(p<0.05)。在24小时，存在更多变化(升序：约4.3、约7.0、约5.7、约6.8)，尽管基于浓度似乎有增加的功效；5％至10％凝胶组合物之间的差异存在统计学显著性(p＝0.0335)。

数据指示了这样的总体趋势，即在处理后1小时和24小时的时间点，对于两种组合物，更高的CBD浓度导致更高的抗微生物有效性。

实施例11

随机双盲媒介物对照研究，以评价每天2次持续5天施用于经鼻腔接种有金黄色葡萄球菌的健康成人的前鼻孔的两种剂型的BTX 1801的安全性、耐受性和功效

随机双盲媒介物对照研究将评价BID施用至经鼻腔接种有SA的健康成人的前鼻孔5天的两种剂型的BTX 1801与其相应的媒介物相比的安全性、耐受性和功效。将大约60名参与者以2:2:1:1随机化(20名参与者接受BTX1801 20％(w/w)软膏，20名参与者接受BTX1801 20％(w/w)凝胶，10名参与者接受BTX 1801媒介物软膏，并且10名参与者接受BTX1801媒介物凝胶)。

参与者将参加2次筛选访视，以在筛选访视1(第-28至-14天)和筛选访视2(第-11至-4天)经由前鼻孔拭子的培养物确定SA鼻腔定殖。依据基线鼻腔培养物结果(访视3；第1天)，参与者将被鉴定为持续性或间歇性携带者。

表32：间歇性与持续性定殖状态的鉴定

¹不符合筛选访视2条件

²不符合基线访视3条件

³间歇性和持续性携带者符合随机化条件

符合条件的参与者将在第1天现场接受其研究药物的首次施用，并将在家中自行施用他们的其他剂量。参与者将治疗连续5天(访视3-7)，并在第8、12和28天返回进行随访(访视8-10)。

在整个研究中，安全性将通过TEAE、局部耐受性(TNSS和肉眼鼻检查)、临床实验室评估、身体检查和生命体征来监测。在整个研究中记录伴随用药。

在给药前(第1天(基线))、第2天和第5天(治疗期间)收集血样以测定CBD血浆浓度。参与者的研究药物施用的细节(包括日期、时间和量)将记录在研究药物施用日志中。还在所有随访时(第8、12和28天；访视8-10)收集前鼻孔拭子以测量SA鼻定殖。

主要终点

针对以下参数评估BTX 1801相对于基线的安全性和耐受性：

治疗时出现的不良事件(TEAE)

鼻症状总评分(TNSS)

肉眼鼻检查

临床实验室评估

并且第12天评估具有阴性鼻腔SA培养物的持续性SA携带者的百分比

次要终点

为了如下评价与研究药物施用相关联的鼻腔SA定殖的变化：

第8天和第28天具有阴性鼻腔SA培养物的持续性SA携带者％

在研究第8、12和28天具有阴性鼻腔MRSA培养物的参与者％

在第8天阴性鼻腔培养物之后，研究第12天和/或28天具有鼻腔SA重定殖的参与者％

并且为了评估基线给药前以及第2和5天服用的研究药物的血浆水平。

入选标准

为了包括在研究中，参与者必须满足以下入选标准。

·参与者为任一性别，年龄≥18–65岁。

·如研究者所确定的，参与者一般健康状况良好，没有临床上显著的呼吸、胃肠、肾、肝、血液、淋巴、神经、心血管、精神、肌肉骨骼、泌尿生殖、免疫、皮肤病、恶性疾病、或***疾病或障碍。

·确认为鼻腔SA携带者，定义为在筛选期间具有2个单独的来自前鼻孔拭子的SA阳性培养物。

排除标准

如果参与者满足以下任何排除标准，则其不可参与研究。

·在筛选前6个月尝试甲氧西林敏感和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌去定殖化。

·筛选访视1前3个月内鼻手术。

·筛选访视1或2或基线访视时活动性鼻炎、窦炎或上呼吸道感染的证据。

·参与者具有任何显著的活动性感染。

·参与者在基线的4周内使用了局部或全身抗生素。

·筛选访视1或2.19时阴性鼻腔SA培养物。在研究期间计划使用任何鼻腔施用的药物(研究药物除外)。

参与者入组

参与者将以2:2:1:1随机化以接受BTX 1801 20％(w/w)软膏、BTX 180120％(w/w)凝胶、BTX 1801媒介物软膏、BTX 1801媒介物凝胶。

研究药物

研究药物将由Mulgrave,Victoria,Australia的Formulytica Pty Ltd提供给研究地点。在第一名参与者入组之前，将首批装运物供应给研究地点。基于参与者入组，根据需要获得额外供应品。

BTX 1801组合物

Botanix Pharmaceuticals的BTX 1801含有活性药物成分CBD。

BTX 1801的两种组合物和它们相应的媒介物对照组合物以具有15g填充量的20g铝层压管提供给研究地点。赋形剂包括六甲基二硅氧烷、六甲基二硅氧烷(Dow 9180)、Transcutol P(二甘醇单***)、环戊硅氧烷+聚乙二醇(PEG)/聚丙二醇(PPG)-10/19聚二甲基硅氧烷共混物(Dow BY 11-030)、PEG 400、PEG 4000和水，它们已广泛用于其他局部产品中。活性BTX1801研究产品是具有20％(w/w)CBD浓度的澄清至浅粉色溶液。BTX 1801组合物的组成及其相应的媒介物对照示于下表中。

表31：BTX 1801活性物&媒介物对照组合物的组成

每克BTX 1801可含有多至200mg的CBD。在将0.25g每种BTX 1801组合物向每只鼻孔BID施用后，最大日暴露为约200mg的CBD。

研究药物将由与评价者不同的研究工作人员施用，以便对临床评估设盲。

给予和给药

将两个20g研究药物管分配给每名参与者。在第1天将一个管分配给每名参与者，并且对于5天施用阶段的供应足够。第二管将根据需要作为备用品留在研究地点。将研究药物BID施用，每天在非盲研究地点工作人员的监督下施用一个剂量(第1-5天)，并且参与者在家中自行施用另一剂量的研究药物。指导参与者每天将其研究药物带到研究地点。

指导参与者不在临床地点时如何施用研究药物。研究药物的每次施用大约在早晨的同一时间发生，第二次施用大约在12小时后。

所有参与者的剂量为每只前鼻孔BID施用0.25g研究药物(每天每只鼻孔0.5g)。参与者将通过将一系列研究药物从其食指尖挤出到第一横纹来分配研究药物的指尖单位(FTU)，并被指导通过在鼻孔的内表面上轻轻地滚动指尖来施用到前鼻孔之一。在施用于每只鼻孔后，指导参与者间歇地轻轻捏住鼻子大约1分钟，以确保研究药物在前鼻孔内分布。

不发生剂量递增。参与者将接受BID施用的研究药物，总共10个剂量。

筛选时间线

访视1：第-28至-14天(筛选)

在第一次筛选访视(访视1)时，参与者将审查并签署筛选前ICF，以收集前鼻孔拭子来测试SA定殖，并证明他们知道如果鼻腔拭子呈SA阴性，他/她将不会被邀请进行筛选访视2。以下研究特定程序将在筛选访视1时发生：

筛选前知情同意

用于SA培养物的前鼻孔拭子

在确定参与者是否符合筛选访视2条件之前，需要确认前鼻孔拭子的SA阳性培养物。

访视2：第-11至-4天(筛选)

在第二次筛选访视(访视2)时，将进行以下程序/评估：

主要研究的知情同意

入选/排除标准审查

人口统计信息收集

病史&服药史收集

身体检查，包括身体测量(体重和身高)

用于SA培养物的前鼻孔拭子

在确定参与者是否有符合基线访视条件之前，需要确认该访视时收集的前鼻孔拭子的SA阳性培养物。

访视3：第1天(基线；治疗开始)

在第1天(开始使用研究药物)，在研究药物摄入前进行以下程序/评估：

随机化至研究药物组

随机化后，将执行以下项

TNSS

肉眼鼻检查

用于SA培养物的前鼻孔拭子(待保留拭子)

研究药物施用前研究药物水平的血液收集

称重并分配第一管研究药物。向每名参与者分配一管研究药物；同一管将被带回家并每天返回研究地点，以在现场进行顺应性监测和给予

训练参与者正确施用研究药物

监督非盲研究人员施用研究药物，确保遵循正确程序

施用研究药物后30分钟内监测参与者

访视4：第2天(治疗期)

在第2天，将进行以下程序/评估：

TNSS

肉眼鼻检查

研究药物施用前研究药物水平的血液收集

现场的研究药物施用(由临床参与者在非盲研究人员的监督下施用一个剂量)

访视5：第3天(治疗期)

在第3天，将进行以下程序/评估：

TNSS

肉眼鼻检查

访视6：第4天(治疗期)

在第4天，将进行以下程序/评估：

TNSS

肉眼鼻检查

访视7：第5天(治疗期)

在第5天(+1天)，将进行以下程序/评估：

TNSS

肉眼鼻检查

研究药物施用前研究药物水平的血液收集

现场的研究药物施用(由临床参与者在研究人员的监督下施用一个剂量给药)

访视8：第8天(随访)

在第8天(±1天)，将进行以下程序/评估：

身体检查(包括身体测量，不包括身高)

TNSS

肉眼鼻检查

用于SA培养物的前鼻孔拭子(待保留拭子)

访视9：第12天(随访)

在第12天(±1天)，将进行以下程序/评估：

肉眼鼻检查

用于SA培养物的前鼻孔拭子(待保留拭子)

访视10：第28天(随访)

在第28天(±1天)，将进行以下程序/评估：

肉眼鼻检查

用于SA培养物的前鼻孔拭子(待保留拭子)

人口统计

筛选时获得的人口统计学信息将包括如由参与者描述的出生日期、性别、种族和人种。

不良事件

参与者的医疗状况中的任何不幸医疗事件将作为AE记录在原始资料和电子病例报告表(eCRF)中，并适当的随访。研究期间发生的所有AE(从同意之日起至随访结束[第28天])，无论是否归因于研究药物(研究者观察或参与者报告)，将记录在原始资料和eCRF中。

治疗评分

鼻症状总评分

在基线(第1天给药前)和每次研究访视时测量TNSS，直至治疗结束。TNSS是主观量度，并且是以下症状中的每者的5名个体参与者评估的症状评分的总和：打喷嚏、流涕、鼻痒、鼻痛和鼻塞，使用具有以下分级的顺序量表：

打喷嚏、流涕、鼻痒和鼻痛：

0＝无，1＝轻度，2＝中度，3＝重度，4＝极重度

鼻塞：

0＝通过鼻子自由和容易地呼吸。1＝轻微困难，2＝中度困难，3＝严重困难，4＝通过鼻子呼吸非常困难/不可能

对任何评估的症状具有3级或4级鼻耐受性评估的任何参与者应当由ENT医师进行额外评价。

肉眼鼻检查

在从基线(至最后一次随访(第28天))的每次研究访视时进行肉眼鼻检查。将由研究者通过前鼻腔的目视检查执行鼻检查。研究者相对于治疗分配设盲。

检查前鼻孔的粘膜红斑、水肿或刺激，并且检查周围鼻孔的结痂、分泌物或刺激。

粘膜红斑或水肿：

0＝无，1＝几乎察觉不到，2＝明确，3＝明显。

鼻腔结痂、分泌物或刺激：

0＝无，1＝轻度，2＝中度，3＝重度。

对红斑、水肿、鼻腔结痂、分泌物、或刺激具有2级或3级的任何参与者应当由ENT医师进行额外评价。

功效评估

仅在被归类为SA持续性携带者的参与者中评价功效。在筛选访视1和2时(如果适用)收集SA培养物的前鼻孔拭子，并评估SA的存在以确定合格性。收集基线(第1天)和随访(第8、12和28天)前鼻孔拭子，以确定SA定殖状态从基线到第12天(主要终点)、第8天和第28天(次要终点)的变化，并确定在第8天(第一次随访)、第12天和第28天(后续随访)报告阴性SA培养物的参与者中的重新定殖。在原始资料和eCRF中记录定殖状态。所有前鼻孔拭子将被保留直至研究完成。

用于研究药物水平的血样

所有参与者将在第1天、第2天和第5天给予前收集血样以测量CBD的血浆水平。使用有效的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法来分析血样。检测限为0.2ng/mL。红细胞溶解血浆对数据准确性具有影响，并且应当在样品收集过程中避免。血浆样品可在-20℃下储存多至30天。然而，根据Tetra-Q实验室手册中概述的时间线，将血浆样品运送到中心实验室以用于研究药物水平。关于获得和制备用于CBD水平的样品的方法的细节提供于Tetra-Q实验室手册中。

前鼻孔培养物

临床研究地点将通过每名参与者的前鼻孔的拭子收集鼻腔样本。将样本转移到培养基中培养并鉴定SA。在样本转移到培养基中培养之后，丢弃所有的筛选访视(访视1)拭子。对于每次后续访视，必须保留所有拭子。收集和处理拭子样本以及储存细菌分离物的程序见于实验室手册中。参与者必须具有在筛选访视1时呈SA阳性的前鼻孔培养物，以符合筛选访视2和基线访视的条件。

SA分离物的细菌基因分型和表型分型

对研究的筛选、治疗和随访阶段期间收集的所有SA分离物进行体外测试，以确定CBD和其他化合物的最小抑制浓度。对于随机化参与者，还将进行脉冲场凝胶电泳以确定筛选/基线SA分离物与治疗期间或治疗后回收的分离物之间的菌株相关性。还可根据需要对选择的SA分离物进行额外的遗传表征。

统计考虑

统计和分析计划

除非另行指出，否则所有统计处理将使用

版本9.4或后续版本执行。P值仅提供用于探索性目的。

描述所有统计分析的统计分析计划(SAP)将作为单独文档提供。SAP将在研究治疗揭盲之前完成。

统计假设

该研究的目的是展示在SA持续性携带者的个体的前鼻孔中，以2种不同剂型呈现的BTX 1801在第12天根除SA携带的有效性。所选择终点的P值将被呈现，以助于评价研究结果。未能实现统计学显著结果并不暗示研究失败；该研究的结果将用于告知注册研究的统计方法。

主要功效点是作为持续携带者的参与者的第12天阴性SA前鼻孔培养物。无效假设是，在第12天，每天两次持续5天施用至作为鼻腔SA携带者的健康成人的前鼻孔的活性BTX1801组合物与组合媒介物组合物之间的阴性SA前鼻孔培养物的百分比不存在差异。

该研究的替代假设是，在第12天，每天两次持续5天施用的活性BTX1801组合物与组合媒介物组合物之间的阴性SA前鼻孔培养物的百分比存在差异。

H0:Ptrt2＝Pveh相对H1:Ptrt2≠Pveh

其中Ptrt2和Pveh分别代表活性BTX 1801给予组和组合媒介物组在第12天的阴性SA前鼻孔培养物的百分比。

应当进行任何事后统计分析以呈现研究结果，可在最终临床研究报告中描述分析方法。

研究药物浓度群体

研究药物浓度群体将包括研究期间经历研究药物采血的所有参与者。研究药物浓度群体将用于所有个体和浓度-时间数据的汇总报告

功效群体

完成5天给予和随访并提供可评价培养物的参与者将包括在功效群体中。功效群体将用于评价两种不同剂型的BTX 1801用于鼻腔SA根除的有效性。

统计方法的描述

除非另行指出，否则所有统计处理将使用

版本9.4或后续版本执行。

针对以下项拟定汇总统计：

第8、12和第28天具有阴性鼻腔SA培养物的持续性携带者的百分比。

在第8天阴性鼻腔培养物之后，在第12和28天具有鼻腔SA重定殖的参与者百分比。

Fisher的精确测试将用于前鼻孔中SA根除百分比的治疗比较。

将使用描述性汇总统计按治疗组汇总连续数据；即：参与者数量(n)、平均值、中值、标准偏差(SD)、最小值(min)、最大值(max)和95％置信区间(CI)。除非另有说明，否则平均值将被报告为比所报告数据的精度水平高1个小数位，并且SD将被报告为比所报告数据的精度水平高2个小数位，最大为4个小数位。

每次访视时的汇总将使用参加该访视的参与者总数量(n)进行计算。当汇总自基线的变化时，要求参与者在待汇总的给定访视时同时具有非缺失基线和非缺失值。

使用频率和百分比来汇总分类和定性数据分析。除非另外指明，否则百分比将呈现为1个小数点。分母将是每个测试组中参与者的数量且用于总体N值。

计算在第8、12和28天具有阴性鼻腔SA培养物的持续性携带者百分比的平均值、标准偏差(SD)、中值和范围，以及在第8天阴性鼻培养物之后第12天和/或第28天鼻腔SA重定殖的参与者的百分比。Fisher的精确测试将用于前鼻孔中SA根除百分比的治疗比较。

实验室参数从基线到第8天的变化将通过访视并使用移动表来汇总，以评价趋势。列出临床显著的异常实验室结果。

汇总每次访视的TNSS和肉眼鼻检查评分。此外，汇总每次访视的平均评分中自基线的变化。

伴随用药将使用世界卫生组织(World Health Organization)(WHO药物)词典映射到ATC 2级。汇总报告各药物的参与者的数量和百分比。列出每名参与者服用的药物。

研究药物血浆水平分析

汇总基线和第2和5天的研究药物的血液水平。呈现平均值、SD、中值、范围、平均变异系数、几何平均数和几何平均数的变异系数。

基线描述性统计

总体地并按治疗组汇总人口统计学和基线特征，包括年龄、性别、人种、种族、身高和体重。汇总病史和伴随用药。

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Claims

1.一种用于在受试者中治疗或预防细菌所致的感染的局部给药方案，所述方案包括以下步骤：

向所述受试者给药25mg至500mg的***素。

2.根据权利要求1所述的局部给药方案，其中：

i)所述感染是局部感染，并且所述局部给药方案包括向所述受试者的皮肤和粘膜表面局部给药25mg至500mg的***素；

ii)所述感染是眼部感染，并且所述局部给药方案包括向所述受试者的眼部感染部位给药25mg至500mg的***素；

iii)所述局部给药方案包括通过鼻部递送或吸入向所述受试者给药25mg至500mg的***素。

3.一种用于在需要此类治疗的受试者中治疗或预防细菌所致的局部感染的方法，所述方法包括以下步骤：

向所述受试者给药包含25mg至500mg***素的局部组合物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中

i)所述感染是局部感染，并且所述方法包括向所述受试者的皮肤和粘膜表面局部给药包含25mg至500mg***素的局部组合物；

ii)所述感染是眼部感染，并且所述方法包括向所述受试者的眼部感染部位给药包含25mg至500mg***素的局部眼用组合物；

iii)所述方法包括向所述受试者给药包含25mg至500mg***素的局部鼻用或吸入组合物。

5.包含25mg至500mg***素的局部组合物用于在需要此类治疗或预防的受试者中治疗或预防局部细菌感染的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其中：

i)所述感染是局部感染，并且所述用途包括向所述受试者的皮肤和粘膜表面局部给药包含25mg至500mg***素的组合物；

ii)所述感染是眼部感染，并且所述用途包括向所述受试者的眼部感染部位局部给药包含25mg至500mg***素的组合物；

iii)所述用途包括通过鼻部递送或吸入向所述受试者给药包含25mg至500mg***素的组合物。

7.***素用于制造治疗或预防局部细菌感染的组合物的用途，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

8.根据权利要求7所述的用途，其中：

9.用于治疗或预防细菌感染的包含***素的局部组合物的制备，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至500mg的***素。

10.根据权利要求9所述的制备，其中：

i)所述感染是局部感染，并且所述用途包括向所述受试者的皮肤和粘膜表面给药包含25mg至500mg***素的局部组合物；

ii)所述感染是眼部感染，并且所述用途包括向所述受试者的眼部感染部位给药包含25mg至500mg***素的局部组合物；

iii)所述用途包括通过鼻部递送或吸入向所述受试者给药25mg至500mg的***素。

11.一种用于治疗或预防细菌感染的包含***素的组合物，其中向需要此类治疗或预防的受试者给药25mg至2000mg的***素。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中：

13.根据权利要求1所述的给药方案，其中所述细菌是***。

14.根据权利要求13所述的给药方案，其中所述***是选自以下列表的属的细菌物种：链球菌属(Streptococcus spp.)、消化链球菌属(Peptostreptococcusspp.)、梭菌属(Clostridium spp.)、李斯特氏菌属(Listeria spp.)、芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)、丙酸杆菌属(Propionibacteriumspp.)、考克氏菌属(Kocuria spp.)和棒状杆菌属(Corynebacterium spp.)，以及它们的组合。

15.根据权利要求1、13或14中任一项所述的给药方案，其中所述细菌是生物膜形成细菌。

16.根据权利要求1或13-15中任一项所述的给药方案，其中所述细菌对至少一种抗生素有抗性。

17.根据权利要求1所述的给药方案，其中所述***素是***二酚。

18.一种用于对需要此类治疗的受试者的皮肤和粘膜表面、眼表面或鼻表面进行局部细菌去定殖化的方法，所述方法包括以下步骤：

向所述受试者局部给药包含25mg至500mg***素的组合物。

19.根据权利要求1所述的局部给药方案，其中所述给药方案递送凝胶组合物或软膏组合物形式的组合物。

20.根据权利要求19所述的局部给药方案，其中所述组合物是包含一种或多种聚(取代或未取代的亚烷基)二醇或其衍生物的软膏组合物。

21.根据权利要求19所述的局部给药方案，其中所述组合物是凝胶组合物，其优选地包含溶解***素的挥发性溶剂(例如，硅氧烷和/或低分子量醇)和增加粘度的粘度调节剂。