CN113970643B - 检测抗uch-l1表位的自身抗体的试剂在制备sle血清诊断相关产品中的应用 - Google Patents

检测抗uch-l1表位的自身抗体的试剂在制备sle血清诊断相关产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了检测抗UCH‑L1表位的自身抗体的试剂在制备SLE血清诊断相关产品中的应用，涉及疾病诊断和早筛技术领域。本发明筛选了3个UCH‑L1蛋白的表位，所述表位的自身抗体具有区分NPSLE与无神经精神症状的SLE患者的能力最高，在NPSLE患者血清中抗UCH58～69水平显著升高，与疾病严重程度相关；疾病缓解后，同一患者抗UCH58～69水平显著下降。抗UCH58～69与NPSLE神经精神症状和SLE疾病活动显著相关，提示其可能在诱发神经***损伤中发挥作用。

Description

检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备SLE血清诊断相 关产品中的应用
技术领域
本发明属于疾病诊断和早筛技术领域，具体涉及检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备SLE血清诊断相关产品中的应用。
背景技术
神经精神性狼疮(NPSLE)是***性红斑狼疮(SLE)的一种严重的神经***并发症，发病率为21％～95％，其特征为脑血管病、癫痫、无菌性脑膜炎、颅神经病变和其他精神症状，这些症状与生活质量降低、卫生保健利用增加、残疾和不可逆的器官损害有关。此外，SLE患者神经精神损害的临床异质性导致预后不良。
NPSLE的及时诊断受到缺乏特异性生物标志物的限制。以往的研究已经证实，许多自身抗体与NPSLE相关的精神症状之间存在显著的相关性。如抗磷脂抗体与脑血管疾病和认知障碍相关，抗NR2水平与抑郁相关。其他NPSLE相关的生物标志物包括IL-6、Tweak、anti-r-RNP和抗神经元抗体。然而，在临床实践中，它们都没有被广泛接受为诊断NPSLE的特异性生物标志物。在NPSLE诊断中，仍需要寻找特异性和敏感性较高的生物标志物。
UCH-L1是一种去泛素酶，主要表达于神经元和神经内分泌细胞，也表达于睾丸和卵巢。它是大脑裂解物中含量最丰富的蛋白(1％-2％)，其突变和功能异常与许多神经***疾病有关。目前UCH-L1被认为是重型创伤性脑损伤(TBI)的血清生物标志物。神经退行性疾病也与UCH-L1基因功能障碍有关。
前期研究发现脑脊液(CSF)中抗UCH-L1的自身抗体对NPSLE有诊断价值。而血清UCH-L1自身抗体无诊断意义(图1)。由于脑脊液采集过程需要有创操作，部分患者难以接受，因此需要一种更方便、快速的血清检测来筛查和早期诊断NPSLE。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备SLE血清诊断相关产品中的应用，以抗UCH-L1自身抗体作为一种新的无创诊断NPSLE的血清标志物，适用于NPSLE的早期筛查和诊断。同时，该试剂制备的产品还可用于指示***性红斑狼疮的疾病活动度和严重程度。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备***性红斑狼疮血清诊断相关产品中的应用，所述UCH-L1表位包括UCH58～69、UCH119～130和UCH203～214；
所述UCH58～69为UCH-L1氨基酸序列的58～69位，所述UCH119～130为UCH-L1氨基酸序列的119～130位，所述UCH203～214为UCH-L1氨基酸序列的203～214位。
优选的，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述UCH119～130的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述UCH203～214的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供了抗UCH58～69自身抗体在作为***性红斑狼疮血清标志物的应用，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了抗UCH58～69自身抗体在作为诊断神经精神性狼疮血清标志物中的应用，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种早期筛查和/或诊断***性红斑狼疮的试剂，所述试剂包括检测血清中抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的试剂，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
本发明还提供了一种早期筛查和/或诊断神经精神性狼疮的试剂，所述试剂中包括检测血清中抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的试剂，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。
有益效果：本发明筛选了3个UCH-L1蛋白表位，UCH58～69抗体在区分NPSLE与无神经精神症状的SLE患者诊断能力最高(p＝0.0038)。ROC分析显示，抗UCH58～69特异性和敏感性分别为92.3％和37.5％。此外，血清抗UCH58～69水平升高与SLE患者SLEDAI、CSF微蛋白、CSF白细胞计数、ESR、AnuA、抗dsDNA、IgG、IgM升高有关，但与C3降低有关。与无神经精神症状的SLE患者相比，在NPSLE患者血清中抗UCH58～69水平显著升高，且与疾病严重程度相关。疾病缓解后，同一患者抗UCH58～69水平显著下降，提示本发明所述抗UCH58～69自身抗体可用于疾病疗效的评估。本发明实施例证实，抗UCH58～69自身抗体可能成为NPSLE无创诊断的新型血清标志物，适用于NPSLE的早期筛查、诊断和疗效评估。抗UCH58～69与NPSLE神经精神症状和SLE疾病活动显著相关，提示其可能在诱发神经损伤中发挥作用。
附图说明
图1针对UCH-L1完整蛋白的血清抗体无法区分NPSLE和非NPSLE狼疮患者；
图2为UCH-L1表位肽预测结果，评估不同抗原特征的肽，如α-两亲区(红色)、β-两亲区(绿色)、亲水性(紫色)、柔韧区(蓝色)、抗原性(粉色)和表面可及性(黄色)；
图3为抗UCH58～69(a)、抗UCH119～130(b)、抗UCH203～214(c)自身抗体在NPSLE、非NPSLE狼疮患者及健康对照组血清水平(d)抗UCH58～69与SLEDAI之间的相关性；
图4为UCH-L1表位多肽用于鉴别SLE与NPSLE的ROC曲线；(a)该图绘制了定义抗UCH58～69阳性的不同截止值的敏感性与(一种特异性)之间的关系，显示曲线下面积(AUC)为0.785(95％置信区间1/40.681–0.889)；(b)该图绘制了定义抗UCH119～130阳性的不同截止值的敏感性与(一种特异性)之间的关系，显示曲线下面积(AUC)为0.682(95％置信区间1/40.559–0.806)；(c)该图绘制了定义抗UCH203～214阳性的不同截止值的敏感性与(一种特异性)之间的关系，显示曲线下面积(AUC)为0.597(95％置信区间1/40.464–0.729)；
图5为SLE患者血清抗UCH58～69水平与实验室参数的Pearson相关性研究，其中a：抗UCH58～69AU值与ESR的相关性；b：抗UCH58～69AU值与AnuA的相关性；c：抗UCH58～69AU值与dsDNA的相关性；d：UCH58～69AU值与IgG的相关性；e：抗UCH58～69AU值与IgM的Pearson相关性；f：抗UCH58～69AU值与C3的Pearson相关性；g：抗UCH58～69AU值与CSF微蛋白的Pearson相关性；h：抗UCH58～69AU值与CSF白细胞计数的Pearson相关性；
图6为9例NPSLE患者治疗前后的血清抗UCH58～69水平比较。
具体实施方式
本发明提供了检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备神经精神性狼疮血清诊断相关产品中的应用，所述UCH-L1表位包括UCH58～69、UCH119～130和UCH203～214；
所述UCH58～69为UCH-L1氨基酸序列的58～69位，所述UCH119～130为UCH-L1氨基酸序列的119～130位，所述UCH203～214为UCH-L1氨基酸序列的203～214位。
本发明以抗UCH-L1表位的自身抗体作为神经精神性狼疮血清诊断标志物，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：QHENFRKKQIEE，所述UCH119～130的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：SETEKMSPEDRA，所述UCH203～214的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：EFTEREQGEVRF。本发明优选根据DNAStar软件中氨基酸的统计趋势预测UCH-L1蛋白的表位，更优选包括利用DNAStar软件对UCH-L1蛋白序列进行分析，包括主要参考序列的抗原指数、抗原表位在原蛋白表面的表面可及性和抗原序列的亲水性图，然后通过评价α-两亲区(红色)、β-两亲区、亲水性、柔韧区、抗原性和表面可及性来选择潜在抗原表位，最终筛选得到UCH58～69、UCH119～130和UCH203～214，它们位于α两亲区而非跨膜区，亲水性高，抗原性峰值高，表面可及性高。
在本发明实施例中，血清中抗UCH58～69可以区分NPSLE患者和无神经精神症状的SLE患者(非NPSLE患者)或健康对照组。抗UCH119～130和抗UCH203～214也较健康对照组明显升高，但两者区分NPSLE患者与非NPSLE患者的效率不及抗UCH58～69；同时，在10.66的临界值下，抗UCH58～69的ROC分析对NPSLE患者与非NPSLE患者的区分敏感性为37.5％，特异性为92.3％，曲线下面积(AUC)为0.785，95％可信区间(CI)为0.681～0.889(图4中a)；而抗UCH119～130的ROC分析显示敏感性为59.4％，特异性为64.1％(图4中b)，抗UCH203～214的敏感性为59.4％，特异性为53.8％(图4中c)。血清抗UCH58～69的增加与***性红斑狼疮的严重性和中枢神经***的损伤有关；抗UCH58～69可能还参与了严重神经精神症状的发展，是严重NPSLE的指标，可以作为sNPSLE(表现为两种或两种以上神经精神表现重叠)的标志物；抗UCH58～69升高的SLE患者疾病活动度更高，抗UCH58～69可作为SLE疾病活动度的指标。
本发明还提供了抗UCH58～69自身抗体在作为***性红斑狼疮血清标志物的应用，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了抗UCH58～69自身抗体在作为无创诊断神经精神性狼疮血清标志物中的应用，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
在本发明实施例中，与无神经精神症状的SLE患者相比，在NPSLE患者血清中抗UCH58～69水平显著升高，且与疾病严重程度相关。抗UCH58～69自身抗体可能成为一种新的无创诊断NPSLE的血清标志物，可能适用于NPSLE的早期筛查和诊断。
本发明还提供了一种早期筛查和/或诊断***性红斑狼疮的试剂，所述试剂包括检测血清中抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的试剂，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。本发明对所述抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的检测方法并没有特殊限定，优选包括ELISA检测、WB检测或其他。
本发明还提供了一种早期筛查和/或诊断神经精神性狼疮的试剂，所述试剂包括检测血清中抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的试剂，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
本发明对所述抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的检测方法并没有特殊限定，优选包括ELISA检测、WB检测或其他。
下面结合实施例对本发明提供的检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备SLE血清诊断相关产品中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
方法和数据处理
1、患者：2019年3月至2021年7月，收集北京大学人民医院风湿科72例SLE患者的血液样本。所有SLE患者均符合1997年ACR标准的SLE，计算***性红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)来评估SLE的严重程度。其中32例经风湿病医师、神经科医师及精神病医师会诊诊断为NPSLE，符合1999年NPSLE ACR命名及病例定义。NPSLE患者分为严重NPSLE(符合2001年Ainiala修订标准的患者)和轻度NPSLE(仅伴有头痛或轻度抑郁的患者，在2001年标准中排除，但符合1999年标准的患者)。从同一医院健康检查中心招募21名年龄、性别匹配的健康对照(HC)。同时对9例经治疗后神经精神症状消失的患者进行了血清测定。该研究得到了北京大学人民医院伦理委员会的批准。本研究的所有参与者均提供了参与本研究的知情同意。
2、UCH-L1蛋白潜在表位的筛选：根据DNAStar软件中氨基酸的统计趋势预测UCH-L1蛋白的表位。利用DNAStar软件对UCH-L1蛋白序列进行分析，包括主要参考序列的抗原指数、抗原表位在原蛋白表面的表面可及性和抗原序列的亲水性图。最后，通过评价α-两亲区、β-两亲区、亲水性、柔韧区、抗原性和表面可及性来选择潜在抗原表位。
3、临床和实验室评估：记录SLE患者的临床及实验室资料，包括年龄、性别、临床症状、尿液分析、白细胞(WBC)计数、红细胞(RBC)计数、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)计数、血沉率(ESR)、c反应蛋白(CRP)、抗核抗体(ANA)、抗Sm抗体(Sm)、血沉率(ESR)。抗核糖体P蛋白抗体、抗SSA抗体(SSA)、抗SSA抗体(SSB)、抗核小体抗体(AnuA)、抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)、抗心磷脂抗体(aCL)、抗β2-糖蛋白I(β2-GPI)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、补体成分3(C3)和补体成分4(C4)。使用SLE疾病活动性指数(SLEdisease activity Index,SLEDAI)对SLE疾病活动性进行评分。记录NPSLE患者的临床表现和实验室检查，包括中枢和周围神经***表现，脑脊液检查结果，以及脑磁共振成像(MRI)和/或计算机断层扫描(CT)的CNS影像学资料。
4、白细胞和血小板分别小于4×106/L和10×109/L为白细胞减少和血小板减少。ELISA检测血清IgA、IgG、IgM、C3、C4、抗dsDNA抗体、抗SM抗体、抗心磷脂抗体、抗AnuA。补体C3<0.79g/L和C4<0.16g/L分别被认为是C3和C4减少。AnuA和抗dsDNA抗体分别大于20RU/ml和25IU/ml为阳性。24小时尿排出量大于或等于0.5g/天被定义为蛋白尿。除***外，尿白细胞和红细胞超过14/μl和24/μl则分别视为脓尿和血红蛋白尿。尿样检查包括Hb/RBC圆柱形或颗粒管型，确定为管型尿。用分离凝胶凝血管(BD,NJ,USA)收集血清样本。所有血清样本保存在-80℃直至使用。
5、抗UCH-L1表位自身抗体的测定。合成的3个UCH-L1表位肽购自中国武汉华美生物工程有限公司。采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中针对这些表位的自身抗体水平。简单地说，2μg/mL UCH-L1多肽混合在碳酸盐缓冲液中加入到96孔板(Nunc，丹麦)中，4℃过夜。96孔板在室温下被PBST洗4次磷酸盐含。然后用5％牛血清白蛋白(BSA)在37℃下封闭3小时。PBST清洗4次后，用含有1％BSA的PBST以1：100比例稀释血清样本，然后加入到96孔板中。37℃孵育1小时后，用PBST冲洗4次。然后，将100μL与过氧化物酶结合的山羊种属的抗人IgG(Solarbio，北京，中国)，按1:10000稀释，加入到每一个孔中，37℃孵育40分钟。PBST洗涤4次后，加入四甲基联苯胺(Solarbio，北京，中国)作为底物溶液，5分钟后，加入50μl2M硫酸终止显色反应。BioTek在450nm光密度(OD450)的吸光度波长下读取荧光值。将OD值转换为任意单位(AU)，计算如下：
AU＝100×(OD肽-OD空白)待测血清/(OD肽-OD空白)阳性对照血清。
6、统计分析。采用SPSS21.0和GraphPad Prism8进行数据分析。数值数据的分布用ShapiroWilk检验表示。正态分布和非正态分布的数值数据分别用均值标准差和中位数(差)表示。采用非参数Mann-Whitney检验、t检验、χ2检验评价两组间差异有统计学意义。采用Pearson相关系数进行相关性计算。P值小于0.05被认为有统计学意义。采用ROC曲线分析UCH-L1表位自身抗体水平的临界值。
结果分析
1、UCH-L1表位的筛选：利用DNAStar软件对UCH-L1蛋白序列进行分析，筛选出具有以下特征的潜在抗原表位:α-两亲区(红色)、β-两亲区(绿色)、亲水性(紫色)、柔韧区(蓝色)、抗原性(粉色)和表面可及性(黄色)(图2)。得到3个最合适的肽段。它们位于α两亲区而非跨膜区，亲水性高，抗原性峰值高，表面可及性高。
三个UCH-L1表位肽序列如下：
①58～69(UCH58～69)：QHENFRKKQIEE
②119～130(UCH119～130)：SETEKMSPEDRA
③203～214(UCH203～214)：EFTEREQGEVRF
2、NPSLE患者血清抗UCH58-69升高。测定72例SLE患者和21例性别和年龄匹配的健康对照者血清中针对上述3种UCH-L1表位肽的自身抗体水平。然后进一步比较32例NPSLE患者与40例无神经精神症状的SLE患者(以下简称非NPSLE患者)之间是否存在差异。患者的人口学特征及神经精神病学表现见表1。
在1999年NPSLE标准定义的19种神经精神表现中，12种表现出现在NPSLE患者中，81.3％(26/32)的患者有两种或两种以上重叠的神经精神表现。除4例轻度抑郁外，所有mNPSLE患者均仅表现为狼疮头痛。与其他两个肽的结果相比，抗氨基酸58～69的自身抗体UCH-L1水平(抗UCH58～69)在NPSLE患者中显著高于非NPSLE患者和健康对照组(图3中a)。这些结果提示血清中抗UCH58～69可以区分NPSLE患者和非NPSLE患者或健康对照组。虽然抗UCH119～130和抗UCH203～214也较健康对照组明显升高，但两者均不能有效区分NPSLE患者与非NPSLE患者。(图3中b和c)。
表1 32例NPSLE患者的人口学特征及神经精神病学表现
Figure BDA0003368815450000081
Figure BDA0003368815450000091
Figure BDA0003368815450000101
3、抗UCH58～69对NPSLE的诊断能力。为了进一步评价抗UCH58-69对NPSLE的诊断能力，以健康对照血清AU均值加2倍标准差作为临界值，从整个SLE队列中识别出NPSLE患者。临界值为10.66(图3中a)。在此临界值下，抗UCH58～69的ROC分析对NPSLE患者与非NPSLE患者的区分敏感性为37.5％，特异性为92.3％。曲线下面积(AUC)为0.785，95％可信区间(CI)为0.681-0.889(图4)。
4、血清抗UCH58～69水平与SLE疾病严重程度增加相关。如表2所示，SLE患者血清抗UCH58～69升高与SLEDAI升高相关(r＝0.279，p＝0.018，图3中d和表2)。值得注意的是，NPSLE患者血清中抗UCH58～69水平的升高与脑脊液微量蛋白和脑脊液白细胞计数的升高相关(r＝0.454，p＝0.039；r＝0.452，p＝0.040；图5中g和h，表2)。同时，SLE患者抗UCH58～69升高与ESR、AnuA、抗dsDNA、IgG、IgM升高及C3降低均有显著相关性(ESR：r＝0.451，p<0.0001，AnuA:r＝0.385，p＝0.0012，抗dsDNA：r＝0.438，p＝0.0002，IgG：r＝0.507，p<0.0001，IgM：r＝0.331，p＝0.005和C3：r＝-0.350，p＝0.003，图5中a至图5中f，表2)。这些结果表明，血清抗UCH58～69的增加与***性红斑狼疮的严重性和中枢神经***的损伤有关。
表2血清抗UCH58～69与SLE患者临床及实验室特征的相关性研究
Figure BDA0003368815450000102
Figure BDA0003368815450000111
5、抗UCH58～69可以作为sNPSLE的标志物。根据临界值将NPSLE患者分为抗UCH58～69阳性组(AU值10.66，n＝12)和抗UCH58～69阴性组(AU<10.66，n＝20)。在抗UCH58～69阳性组中，83.3％(10/12)NPSLE患者为sNPSLE，表现为两种或两种以上神经精神表现重叠，证明抗UCH58～69可能参与了严重神经精神症状的发展，可能是严重NPSLE的指标。
值得注意的是，抗UCH58～69阳性组患者的颅内压明显高于抗UCH58～69阴性组(174.00±37.98vs112.42±67.05，p＝0.027)，提示抗UCH58～69可能在NPSLE的发病机制中发挥重要作用。
进一步统计分析(表3)显示，抗UCH58～69阳性组的ESR、AnuA、抗dsDNA、IgG、IgM值均显著高于抗UCH58～69阴性组(ESR：56.00±37.77vs22.30±22.07，p＝0.003；AnuA：152.97±173.42vs22.45±44.55，p＝0.044；抗dsDNA：114.53±88.32vs53.63±66.80，p＝0.025；IgG：21.29±6.61vs12.48±5.24，p＝0.001；IgM：1.70±1.07vs0.90±0.46，p＝0.036)。相反，红细胞和C3值显著低于抗UCH58-69阴性组(RBC：3.40±0.94vs4.11±0.63，p＝0.037；C3：0.46±0.23vs0.69±0.21，p＝0.004)。这些结果提示抗UCH58～69升高的SLE患者疾病活动度更高，抗UCH58～69可作为SLE疾病活动度的指标。
表3 NPSLE患者血清抗UCH58～69升高与正常对照的临床和实验室特点
Figure BDA0003368815450000121
Figure BDA0003368815450000131
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Figure BDA0003368815450000141
6、抗UCH58～69可以作为评估NPSLE疗效的标志物。进一步比较9例NPSLE患者治疗前后的血清抗UCH58～69水平显示，经诱导治疗疾病缓解后，同一患者的抗UCH58～69显著下降(如图6)，提示抗UCH58～69可作为评估NPSLE疗效的标志物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京大学人民医院
<120> 检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备SLE血清诊断相关产品中的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gln His Glu Asn Phe Arg Lys Lys Gln Ile Glu Glu
1 5 10
<210> 2
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ser Glu Thr Glu Lys Met Ser Pro Glu Asp Arg Ala
1 5 10
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Glu Phe Thr Glu Arg Glu Gln Gly Glu Val Arg Phe
1 5 10

Claims (3)

1.检测抗UCH-L1表位的自身抗体的试剂在制备***性红斑狼疮血清诊断相关产品中的应用，所述UCH-L1表位包括UCH58～69、UCH119～130和UCH203～214；
所述UCH58～69为UCH-L1氨基酸序列的58～69位，所述UCH119～130为UCH-L1氨基酸序列的119～130位，所述UCH203～214为UCH-L1氨基酸序列的203～214位；
所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述UCH119～130的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述UCH203～214的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种早期筛查和/或诊断***性红斑狼疮的试剂，其特征在于，所述试剂包括检测血清中抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的试剂，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种早期筛查和/或诊断神经精神性狼疮的试剂，其特征在于，所述试剂包括检测血清中抗UCH58～69自身抗体存在和/或含量的试剂，所述UCH58～69的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2023157920A1 (ja) * 2022-02-17 2023-08-24 国立大学法人 長崎大学 頭部ｍｒｉによる神経精神ループスの診断支援

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050142616A1 (en) * 2003-09-30 2005-06-30 Veneta Hanson Diagnostic test for neuropsychiatric systemic lupus erythematosus
ES2482142T3 (es) * 2004-04-15 2014-08-01 University Of Florida Research Foundation, Inc. Proteínas neurales como biomarcadores para lesiones del sistema nervioso y otros trastornos neurales
KR100732298B1 (ko) * 2005-11-24 2007-06-25 이화여자대학교 산학협력단 유비키틴 ｃ-말단 가수분해제-ｌ1을 이용한 암전이 진단용조성물
WO2015066211A1 (en) * 2013-10-29 2015-05-07 Banyan Biomarkers, Inc. Uch-l1 isoforms, assays and devices for detection of a neurological condition
CN110366558A (zh) * 2016-10-28 2019-10-22 班扬生物标记公司 针对泛素c末端水解酶l1(uch-l1)和胶质纤维酸性蛋白(gfap)的抗体及相关方法
EP3635407A1 (en) * 2017-04-28 2020-04-15 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury using early biomarkers on at least two samples from the same human subject
CN107449914A (zh) * 2017-07-10 2017-12-08 北京大学人民医院 泛素羧基端酯酶l1自身抗体的应用
CN110684740B (zh) * 2019-08-09 2020-12-08 无锡傲锐东源生物科技有限公司 一种抗人泛素羧基末端水解酶-1(uch-l1)的单克隆抗体及其应用

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