CN113912727B

CN113912727B - 抗cd38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN113912727B
Application number: CN202111357686.6A
Authority: CN
Inventors: 李恢波; 王小亚; 杨清海; 彭永辉; 黄信超; 高慧然
Original assignee: Fuzhou Maixin Biotech Co ltd
Current assignee: Fuzhou Maixin Biotech Co ltd
Priority date: 2021-11-16
Filing date: 2021-11-16
Publication date: 2023-05-02
Anticipated expiration: 2041-11-16
Also published as: CN113912727A

Abstract

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗CD38蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。其制备方法中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。发明人还提供了一株分泌抗CD38蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，保藏号为：CGMCC NO.22319。抗CD38蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD38蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

Description

抗CD38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗CD38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

CD38是一种单链跨膜Ⅱ型糖蛋白，分子量为45kD，包括1个长的羧基端胞外区(258个氨基酸)，1个跨膜区(21个氨基酸)和1个短的氨基端胞内区(21个氨基酸)。人类CD38基因位于4号染色体(4p15),延伸超过62kb。该基因包含7个内含子和8个编码CD38蛋白的外显子。

CD38是一种具有受体和酶介导功能的多功能蛋白，可作为受体、黏附分子和外切酶。CD38有多种生理功能,可作为受体、黏附分子和外切酶。CD38主要表达于淋系和髓系细胞,也在一些非造血细胞低水平表达(如***上皮细胞,胰腺B细胞,破骨细胞,视网膜细胞等)。在正常人体中，约有20％的人骨髓细胞表达CD38,主要分布在浆细胞、髓细胞、红系细胞、前体细胞以及小部分T细胞中。外周血液中，90％的浆细胞为CD38阳性，自然杀伤细胞和单核细胞中约有60％表达CD38。大多数髓样胸腺细胞均表达CD38,循环T细胞则不表达,而又在活化的T细胞中诱导表达。早期的干细胞和祖细胞均不表达CD38,但也在B细胞上表达,且浆细胞CD38表达水平特别高,这些特点使CD38成为了治疗浆细胞疾病的重要靶点。

发明内容

发明人提供了一种抗CD38蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

进一步地，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别人CD38蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22319的杂交瘤细胞系产生。所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

进一步地，所述抗CD38蛋白为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一株分泌抗CD38蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

发明人还提供以上任一所述的抗CD38蛋白单克隆抗体在人CD38蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

发明人再提供了一种人CD38蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂内含有以上任一的抗CD38蛋白单克隆抗体为有效成分。

区别于现有技术，上述技术方案依据CD38蛋白的结构、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，上述技术方案选取CD38蛋白第99位至第296位氨基酸片段和其对应的核苷酸片段，通过大肠杆菌进行重组表达,对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和克隆，获得高效分泌抗CD38蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系13B5B11C8,并对单克隆细胞系13B5B11C8进行体外培养，并获得由该细胞系所分泌的抗CD38蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD38蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

上述发明内容相关记载仅是本申请技术方案的概述，为了让本领域普通技术人员能够更清楚地了解本申请的技术方案，进而可以依据说明书的文字及附图记载的内容予以实施，并且为了让本申请的上述目的及其它目的、特征和优点能够更易于理解，以下结合本申请的具体实施方式及附图进行说明。

附图说明

图1为实施例3纯化后CD38单克隆抗体的电泳结果图；M：分子量标记。

图2为B细胞淋巴瘤免疫组化染色结果图；其中左为13B5B11C8分泌的的CD38，右为市售CD38(38C03)。

具体实施方式

为详细说明本申请可能的应用场景，技术原理，可实施的具体方案，能实现目的与效果等，以下结合所列举的具体实施例并配合附图详予说明。本文所记载的实施例仅用于更加清楚地说明本申请的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本申请的保护范围。

在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中各个位置出现的“实施例”一词并不一定指代相同的实施例，亦不特别限定其与其它实施例之间的独立性或关联性。原则上，在本申请中，只要不存在技术矛盾或冲突，各实施例中所提到的各项技术特征均可以以任意方式进行组合，以形成相应的可实施的技术方案。

除非另有定义，本文所使用的技术术语的含义与本申请所属技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文中对相关术语的使用只是为了描述具体的实施例，而不是旨在限制本申请。

在本申请的描述中，用语“和/或”是一种用于描述对象之间逻辑关系的表述，表示可以存在三种关系，例如A和/或B，表示：存在A，存在B，以及同时存在A和B这三种情况。另外，本文中字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的逻辑关系。

在本申请中，诸如“第一”和“第二”之类的用语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何实际的数量、主次或顺序等关系。

在没有更多限制的情况下，在本申请中，语句中所使用的“包括”、“包含”、“具有”或者其他类似的表述，意在涵盖非排他性的包含，这些表述并不排除在包括所述要素的过程、方法或者产品中还可以存在另外的要素，从而使得包括一系列要素的过程、方法或者产品中不仅可以包括那些限定的要素，而且还可以包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法或者产品所固有的要素。

与《审查指南》中的理解相同，在本申请中，“大于”、“小于”、“超过”等表述理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等表述理解为包括本数。此外，在本申请实施例的描述中“多个”的含义是两个以上(包括两个)，与之类似的与“多”相关的表述亦做此类理解，例如“多组”、“多次”等，除非另有明确具体的限定。

实施例1重组CD38蛋白片段的制备

一、抗原片段选择

从Uniprot数据库(http://www.uniprot.org)中选择编号P62736的CD38蛋白序列作为标准序列。本发明选取人CD38蛋白第99位至第296位氨基酸片段作为抗原，根据其对应碱基序列(SEQ ID NO.1)利用软件Primer 5.0设计CD38蛋白的特异性上游引物5’TTCGGGATCCTGCAACATCAC’(SEQ ID NO.6酶切位点，BamH I)和下游引物：5’ATCTCGAGGCAGGAAGAGTCTTC 3’(SEQ ID NO.7，酶切位点，Xho I)，反转录扩增编码第99位至第296位氨基酸的基因片段SEQ ID NO.1。

将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分离后回收，分别对回收的目的基因和用于表达的质粒载体pET27b进行BamH I和Xho I双酶切，再次电泳回收，以T4DNA连接酶连接。连接产物转化大肠杆菌感受态细胞Rosetta，挑取平板上的克隆接种扩培，提取质粒DNA，进行PCR鉴定。将PCR显示目的基因阳性的克隆进行测序分析，序列完全正确的克隆用于进行下一步。

二、重组CD38蛋白片段的表达和纯化

取出-80℃保存的感受态细胞100ul(Rosetta)，解冻后加入5ul CD38质粒DNA，冰上放置30min。42℃热激90秒后冰浴5min后，加入800μL无抗性的LB培养基。37℃复苏培养60min，涂板，过夜培养。从转化的平板挑单克隆到4ml的LB液体培养基中，37℃，200rpm过夜培养后保菌。

取4ul菌液到4ml LB液体培养基中，过夜培养复苏。将培养的菌液转接到200ml LB液体培养基混合，37℃，200rpm，培养至OD＝0.6-0.8，加入IPTG(0.5mM)低温过夜诱导。400ml大离心筒，4000rpm，离心10min收集菌体，弃上清。沉淀用20-30ml 10mM Tris-HCl(pH8.0)和终浓度为0.5M的NaCl溶液吹散，超声破碎菌体。12000rpm离心20分钟，取离心上清上样到Ni-NTA镍柱(QIAGEN)进行纯化，之后分别用含50mM咪唑、250mM咪唑、500mM咪唑的10mMTris-HCl(pH 7.0)(含0.5M氯化钠)溶液洗脱，分别收集蛋白峰，电泳检测，备用。

实施例2 13B5B11C8杂交瘤细胞系的建立

一、免疫

将实施例1中获得的重组CD38蛋白，与等体积的完全弗氏佐剂(CFA,Sigma公司)混合乳化，对18-20g的Balb/c小鼠(购自福州吴氏实验动物)进行腹部注射免疫，注射剂量为50μg/只。此后每14天加强免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐剂(IFA,Sigma公司)乳化，剂量为25μg/只。第2次加强免疫后14天以间接ELISA(波长450nm)检测小鼠血清中抗免疫原的多抗效价，效价最高的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，抗原用PBS溶液混匀，剂量为50μg/只。

二、细胞融合：

无菌制备免疫达标的小鼠脾细胞悬液，与小鼠骨髓瘤细胞sp2/0(ATCC)以5:1比例混合，1000rpm离心10min，弃上清后，在1分钟内由慢到快加入1mL预热至37℃的PEG(Sigma公司)溶液，加入过程中需轻轻转动离心管，使细胞与PEG充分接触。室温静置90s后，2min内由慢到快加入4mL预热至37℃的无血清DMEM(Hyclone公司)培养基，随后的2min内再加入10mL预热无血清DMEM培养基，最后2min内加完剩余的预热无血清DMEM培养基，定容至50mL，整个加入过程需要缓慢摇动离心管，确保混合均匀，减轻对细胞的伤害。室温静置10min后离心(1000rpm，5min)，弃上清，用10-20mLHAT(Sigma公司)培养基重悬细胞，并用HAT培养基稀释至终浓度为0.5×10⁶cells/mL，所有溶液转移至96孔板中，200μL/孔，并做好标记。将96孔培养板小心转移至37℃，5％CO₂培养箱中培养。定期检查细胞的生长状态及潜在的污染，注意尽量少开合培养箱，确保培养环境稳定。融合后第5天，向培养板中补加HAT培养基，50μL/孔。

三、克隆化及ELISA筛选阳性杂交瘤细胞：

当融合细胞直径长至大概为1-2mm时，吸取50-200μL培养液上清进行首次细胞筛选(ELISA、IHC-P及其他方法检测)，同时往培养孔中补加HAT培养基至200μL。ELISA检测该培养液上清，将检测得到阳性结果的培养孔内细胞培养液全部转移至24孔培养板，补加HT培养基，2mL/孔，培养3天。

重复筛选24孔板中各细胞系，剔除不是阳性结果的培养孔细胞，获得阳性结果较好的培养孔细胞。将这些24孔培养板得到的阳性孔细胞采用有限稀释法进行亚克隆筛选，即将有限稀释法得到细胞液加入96孔培养板中转移至CO₂培养箱培养11天，待克隆细胞直径为1-2mm时，重复进行细胞筛选。根据检测结果，每个亚克隆细胞系，选取4个生长良好的单克隆阳性培养孔，并转移至24孔板中继续培养。一段时间后再次筛选24孔板中克隆得到的阳性克隆细胞系，即为分泌特定单克隆抗体的杂交瘤细胞系13B5B11C8。将此细胞系转入T-75培养瓶中扩增至对数生长期保种或进行后续实验。

实施例3体外培养法制备单克隆抗体

一、体外培养

获得稳定的杂交瘤细胞系13B5B11C8后，采用体外培养法获取单抗。

以含10％胎牛血清的DMEM完全培养基培养杂交瘤细胞，然后低速离心后收集培养上清，4℃储存备用。

二、单克隆抗体的纯化

用rProtein A sepharose Fast Flow(GE公司)亲和层析柱纯化抗体：①装柱，将购买的ProteinA填料适量装于重力层析柱中用平衡缓冲液(含1.5M Nacl的0.1M Tris溶液，pH7.0)冲洗至平衡；②上样，将经过0.22μm滤膜过滤的细胞上清加入装好的层析柱中，控制流速1滴/秒；③平衡，上完样液后使用平衡缓冲液冲洗至平衡；④洗脱，加入洗脱缓冲液(0.1M柠檬酸溶液，pH4.5)冲洗柱子并收集洗脱液；⑤再生，洗脱完成后加入平衡缓冲液冲洗柱子至平衡，2倍柱体积的20％乙醇冲洗后置于4℃保存。最后采用SDS-PAGE法鉴定抗体纯度。结果见图1，纯化后CD38单克隆抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳图,纯度达95％以上，紫外微量分光光度计法测定抗体浓度，浓度达到3.0mg/mL以上。

实施例4单克隆抗体特性鉴定

一、亚型鉴定

将抗原蛋白稀释成1μg/mL包被酶标板,每孔加100μL，4℃包被过夜，倾空液体，用含0.05％Tween的PBS(PBS-T)洗板3次，每孔加入200μL封闭液(含2％BSA的PBS-T溶液)，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。每孔加入稀释5倍的0.1mL杂交瘤细胞系培养液上清，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。用封闭液1：400稀释HRP标记的羊抗鼠(κ,λ，IgM，IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG₃，IgA)抗体(Southern Biotech公司)，每孔分别加入0.1mL，37℃孵育1h。倾空液体，用PBS-T清洗3次。每孔加100μLTMB(湖州英创生物科技有限公司)底物(A、B等体积混合溶液)进行显色,室温反应15min，每孔加入50μL 1N HCl溶液终止显色反应，然后酶标仪测定450nm波长下的OD值。结果显示，本发明单克隆抗体为IgG1型鼠源单克隆抗体。

二、亲和常数测定

包被CD38蛋白，包被浓度为100μg/ml,100μl/孔，4℃包被过夜，PBS-T洗3次。每孔加200μl封闭液37℃封闭1h，PBS-T洗3次。实施例4中纯化的单克隆抗体，稀释成以下浓度(单位：ng/mL)：2000、500、125、62.5、31.25、15.625、3.125、0.625，37℃孵育1h，PBS-T洗3次。HRP标记的羊抗鼠二抗1：5000稀释，每孔100μl，37℃孵育1h，PBS-T洗3次。每孔加入100μlTMB(湖州英创生物科技有限公司)显色液，显色13min，加100μl 1.0N盐酸溶液终止反应。用酶标仪测定波长450nm的吸光值。画出OD值对应抗体稀释倍数的曲线，找出1/2“平台OD值”对应的抗体浓度A。利用下列公式计算出亲和常数为6.99×10⁹。

实施例5组织芯片染色和鉴定

一、组织蜡块制备

对样本组织进行HE切片染色，以确定肿瘤病变部位。对病变位点画圈，预备打孔。制作受体蜡块时，将塑料架置于模具上，将融化的石蜡(熔点在56～58℃)倒入模具，将组织块放入模具中的蜡液中后再加入适量蜡液使组织块完全包埋在蜡液中，冷却至室温后将模具放入-20℃冰箱6min，将蜡块从模具中取出，切片或放入4℃冰箱内保存备用。修片后进行连续切片，厚度定为4μm，将连续切片漂40％酒精中,让其自然展开，再将分开的切片转移到45℃的温水中展片30秒，用经2％APES丙酮液处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入60℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入-4℃冰箱保存。

二、IHC染色及分析

常规二甲苯脱蜡3次，每次6分钟，100％、100％、95％、95％、85％梯度乙醇中水化，每次3分钟，最后自来水冲洗。进行抗原修复，然后将切片放入湿盒中，PBS冲洗3×3分钟。滴加3％H₂O₂孵育10分钟，PBS冲洗3×3分钟。甩去PBS，滴加过氧化物酶阻断剂室温孵育10分钟。甩干切片，滴加适当比例稀释的一抗(首次稀释根据抗体浓度来设计抗体的稀释比例)室温(25℃)孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟。苏木素复染20秒，PBS返蓝。按照85％(3分钟)、95％(3分钟)、95％(3分钟)、100％(3分钟)、100％(3分钟)的酒精梯度依次脱水，最后两次二甲苯透明10分钟，中性树胶封片。

免疫组化染色结果分为：阳性和阴性。阳性表达必须在细胞和组织特定的抗原部位才能视为阳性。在组织染色分布清晰及细胞定位准确的情况下，染色结果根据染色强度的差异进行进一步划分，具体如下：

1、样本为弱阳性；标记为“+”；

2、样本为中度阳性；标记为“++”；

3、样本为高度阳性；标记为“+++”。

4、样本为阴性，标记为“-”。

三、样本检测结果：

用本发明所制备的抗CD38蛋白单克隆抗体(13B5B11C8)和市售抗CD38蛋白单克隆抗体(38C03)在17例T细胞淋巴瘤和50例B细胞淋巴瘤进行同步检测，结果如下表所示：

结果显示:抗CD38蛋白单克隆抗体(13B5B11C8)的染色定位准确，染色清晰且无非特异性染色，背景干净，说明抗CD38蛋白单克隆抗体(13B5B11C8)特异性强。

在17例T细胞淋巴瘤和50例B细胞淋巴瘤中，使用抗CD38蛋白单克隆抗体(13B5B11C8)的阳性率均高于市售抗体，抗CD38蛋白单克隆抗体(13B5B11C8)的敏感度高，可检测到CD38蛋白的低水平表达，在T细胞淋巴瘤和B细胞淋巴瘤上的鉴别诊断相对市售抗体更具敏感度，可避免漏检的风险。图2为B细胞淋巴瘤免疫组化染色结果图，其中左为(13B5B11C8)的CD38，右为市售CD38(38C03)。

而采用抗CD38蛋白单克隆抗体(13B5B11C8)和对照抗体(38C03)，在30种正常组织芯片上进行同步检测，样本阳性和阴性结果一致，说明本抗体在市售组织的特异性同市售抗体相当。

30种正常组织包括：大脑、心脏、小脑、食管、肾上腺、胃、卵巢、小肠、胰腺、结直肠、甲状旁腺、肝脏、垂体、唾液腺、睾丸、肾、甲状腺、***、乳腺、子宫、脾、膀胱、扁桃体、骨骼肌、胸腺(幼儿)、皮肤、骨髓、外周神经、肺、间皮细胞。

最后需要说明的是，尽管在本申请的说明书文字及附图中已经对上述各实施例进行了描述，但并不能因此限制本申请的专利保护范围。凡是基于本申请的实质理念，利用本申请说明书文字及附图记载的内容所作的等效结构或等效流程替换或修改产生的技术方案，以及直接或间接地将以上实施例的技术方案实施于其他相关的技术领域等，均包括在本申请的专利保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 福州迈新生物技术开发有限公司

<120> 抗CD38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

<130> 2020

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 594

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 1

tgcaacatca ccgaggaaga ctaccagcca ctgatgaaac tgggtactca gaccgtgccg 60

tgcaacaaaa ttctgctgtg gtcccgcatc aaggatctgg cacaccagtt tacccaggta 120

cagtgggata tgttcaccct ggaagatacc ctgctgggct atctggcaga tgacctgacc 180

tggtgtggtg aattcaatac ctctaagatc aactatcaaa gctgtccgga ttggcgtaaa 240

gattgcagca ataatccggt ttccgttttc tggaaaaccg taagccgtcg cttcgcggaa 300

gcggcgtgcg atgtggtgca cgtgatgctg aacggttctc gttctaaaat ctttgacaaa 360

aactctacct tcggctccgt cgaagttcac aacctgcagc cggaaaaagt gcagaccctg 420

gaagcctggg ttattcacgg cggtcgtgaa gattcccgtg acctgtgcca ggacccgacc 480

atcaaagaac tggaaagcat catcagcaaa cgtaacattc agttcagctg caaaaacatc 540

taccgcccag acaaatttct gcaatgtgtt aaaaacccgg aagactcttc ctgc 594

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<211> 139

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 2

Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ser Thr Ala Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg

20 25 30

Pro Gly Thr Ser Val Glu Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe

35 40 45

Thr Thr Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Met Ile Asp Pro Ser Asp Ser Arg Thr Gly Leu Asn

65 70 75 80

Pro Lys Phe Lys Asp Arg Ala Ser Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met His Leu Asn Ser Pro Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Tyr Arg Ser Phe Phe Trp Phe Phe Asp Val

115 120 125

Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 3

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 3

Met Arg Phe Gln Val Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Ile Ser

1 5 10 15

Gly Val Gln Cys Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala

20 25 30

Ala Ser Pro Gly Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Asn

35 40 45

Ile Ser Lys Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn

50 55 60

Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser

65 70 75 80

Arg Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

85 90 95

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr

100 105 110

Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Asp Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

115 120 125

<210> 4

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 4

atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtatcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60

gtgcaactgc agcaatctgg gcctcagcta gttaggcctg ggacttcagt ggaaatatcc 120

tgcaaggctt ctggttactc attcaccacc tactggatgc actgggtgaa gcagaggcct 180

ggacaaggtc ttgagtggat tggcatgatt gatccttccg atagtagaac tggattaaat 240

ccgaagttca aggacagggc ctcattgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 300

cacctaaaca gcccgacatc tgatgactct gcggtctatt actgtgcacg gacctatagg 360

tccttcttct ggttcttcga tgtctggggc gcagggacca cggtcaccgt ctcctca 417

<210> 5

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<212> DNA

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atgaggttcc aggttcaggt tctggggctc cttctgctct ggatatcagg tgtccagtgt 60

gatgtccaga ttacccagtc tccatcttat cttgctgcat ctcctggaga aaccattact 120

attaattgca gggcaagtaa gaacattagc aaatatttag cctggtatca ggagaaacct 180

ggtaaaacta ataagcttct tatctactct ggatccactt tgcaatctgg aattccatca 240

aggatcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagcag cctggagcca 300

gaagattttg caatatatta ctgtcaacag cattatgaag acccgctcac gttcggtgat 360

gggaccaagc tggagctgaa a 381

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<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 6

ttcgggatcc tgcaacatca c 21

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<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 7

atctcgaggc aggaagagtc ttc 23

Claims

1.一种抗CD38蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.22319的杂交瘤细胞系产生。

4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述抗CD38蛋白单克隆抗体为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。

5.一株分泌抗CD38蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.22319。

6.一种人CD38蛋白免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测试剂内含有权利要求1-4任一所述的抗CD38蛋白单克隆抗体为有效成分。