CN113881610B - 多形拟杆菌bp8e及其应用 - Google Patents
多形拟杆菌bp8e及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113881610B CN113881610B CN202111476153.XA CN202111476153A CN113881610B CN 113881610 B CN113881610 B CN 113881610B CN 202111476153 A CN202111476153 A CN 202111476153A CN 113881610 B CN113881610 B CN 113881610B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacteroides thetaiotaomicron
- bp8e
- thetaiotaomicron
- bacteroides
- gaba
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000606123 Bacteroides thetaiotaomicron Species 0.000 title claims abstract description 123
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 47
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 claims abstract description 44
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 24
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 7
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 10
- 230000007267 depressive like behavior Effects 0.000 abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 abstract description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 abstract description 3
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 3
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 3
- 208000019022 Mood disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 4
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 3
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 3
- GIYXAJPCNFJEHY-UHFFFAOYSA-N N-methyl-3-phenyl-3-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]-1-propanamine hydrochloride (1:1) Chemical group Cl.C=1C=CC=CC=1C(CCNC)OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 GIYXAJPCNFJEHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000037326 chronic stress Effects 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 229960000389 fluoxetine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 235000020927 12-h fasting Nutrition 0.000 description 1
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 1
- 241000219122 Cucurbita Species 0.000 description 1
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 1
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000009704 beneficial physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 235000021329 brown rice Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 210000005095 gastrointestinal system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000021109 kimchi Nutrition 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005065 mining Methods 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000003867 tiredness Effects 0.000 description 1
- 208000016255 tiredness Diseases 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000007169 ycfa-medium Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/005—Amino acids other than alpha- or beta amino acids, e.g. gamma amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物及其应用领域，提供了多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E，其保藏编号为CGMCC No.22149。本发明还提供了多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E在生产GABA和预防和/或治疗抑郁症中的应用。本发明提供的多形拟杆菌BP8E能够在不额外添加谷氨酸的培养条件下高产GABA，并且能够改善小鼠抑郁样行为，可以为抑郁症、失眠等压力情绪障碍提供益生菌治疗的潜在菌株，具有很大的潜在市场价值。
Description
技术领域
本发明属于微生物及其应用领域，特别涉及多形拟杆菌BP8E及其应用。
背景技术
γ-氨基丁酸（γ-AminobutyricAcid，又称GABA）是一种非蛋白质天然氨基酸，广泛存在于哺乳动物的神经***中，也存在与植物中，如番茄、马铃薯、葡萄、南瓜及茶叶等。发酵食品如泡菜、发酵糙米中也富含GABA。
GABA是神经***中重要的抑制性神经递质。研究者发现GABA含量不足会产生焦虑、不安、疲倦和焦虑等情绪。然而，随着年龄的增长，人体内的人GABA含量会呈现不断下降趋势。据悉，每10年人体GABA含量下降约5%。目前GABA被报道具有以下生理作用：（1）缓解焦虑和抑制兴奋，（2）促进代谢，（3）提高记忆力，（4）延缓神经细胞衰老，（5）美容，（6）调节血压作用。适当补充GABA能较好的缓解精神压力、调节情绪、改善睡眠。鉴于GABA的有益生理作用以及扎实的理论依据，GABA已开始进入各国市场，早在2001年，日本批准GABA为新资源食品，随后我国也于2009年批准GABA为新资源食品（***2009年第12号公告）。至此，GABA入食应用正式打开了国门，GABA作为一种新食品原料，被誉为“神经维他命”，被广泛应用于针对高压力人群的舒压助眠类产品以及针对时尚爱美的美容升级产品。
除了直接补充GABA膳食补充剂以外，人们可以从天然食物，如谷物，十字花科植物，西红柿等中获取。微生物发酵是当下研究GABA合成的一个热点。肠道微生物栖居于宿主胃肠道***内，对机体代谢和免疫平衡起着至关重要的作用。乳杆菌和双歧杆菌中包含较多合成GABA的菌株，除此之外，其他菌种是否具有高产GABA的能力仍鲜为人知。由于肠道微生物，尤其是具有益生作用的肠道菌，不仅高产GABA，而且存在较高的安全性，因此，挖掘和开发具有高产GABA能力的肠道菌株具有很好的市场应用前景，同时也为抑郁症、失眠等压力情绪障碍提供益生菌治疗的潜在菌株。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种具有高效产GABA能力的多形拟杆菌BP8E。该多形拟杆菌能够在不额外添加谷氨酸的培养条件下高产GABA，两次高效液相色谱HPLC检测其GABA产生量平均值为528.6mg/L，并且动物实验显示BP8E能明显够改善小鼠抑郁样行为。
本发明第一方面提供了多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E，其保藏编号为CGMCC No. 22149。
本发明第二方面提供了含有下述至少一种的制剂在生产GABA中的应用：
1）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E；
2）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E菌剂；
3）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E活菌悬液；
4）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E死菌悬液；
5）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E代谢产物；
6）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E提取物；
其中，所述多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E为本发明第一方面所述的保藏编号为CGMCC No.22149的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E。
本发明第三方面提供了含有下述至少一种的制剂在制备用于预防和/或治疗抑郁症的产品中的应用：
1）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E；
2）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E菌剂；
3）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E活菌悬液；
4）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E死菌悬液；
5）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E代谢产物；
6）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E提取物；
其中，所述多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E为本发明第一方面所述的保藏编号为CGMCC No. 22149的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E。
本发明第四方面提供了一种用于预防和/或治疗抑郁症的产品，含有下述至少一种：
1）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E；
2）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E菌剂；
3）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E活菌悬液；
4）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E死菌悬液；
5）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E代谢产物；
6）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E提取物；
其中，所述多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E为本发明第一方面所述的保藏编号为CGMCC No. 22149的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E。
保藏说明：
菌种名称：BP8E
拉丁名：Bacteroides thetaiotaomicron
分类命名：多形拟杆菌
菌株编号：22149
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2021年4月9日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No. 22149
本发明提供的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E具有良好的生产GABA能力，能够明显缓解抑郁症模型小鼠的抑郁样行为，为日后开发有效的抗抑郁益生菌产品提供了很好的科学依据，具有很大的潜在市场价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1示出了本发明中的多形拟杆菌BP8E的质谱鉴定图。
图2示出了本发明中多形拟杆菌BP8E对抑郁模型小鼠悬尾实验的影响。n=8，*p<0.05, ***p<0.001。
具体实施方式
为使本发明的技术方案、目的和优点更加清楚，下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
除非另外定义，本发明中使用的所有术语（包括技术术语和科学术语）均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在现有技术与本发明冲突的情况下，应当以本发明为准。
下述实施例中所使用的各种试剂、材料等，若无特别说明，均为可以从商业渠道获得的产品；下述实施例中所使用的各种测试、检测方法若无特别说明，均为本领域中的常规测试、检测方法，均可以从教科书、工具书或学术期刊中获得。
实施例1：多形拟杆菌BP8E的分离鉴定
采集长期生活在北京城区的健康成年人的粪便样品，稀释后涂布于YCFA培养基，37℃厌氧培养24h，分离获得平板上不同的单菌落。用灭菌后的接种环挑取不同单菌落在新的YCFA固体培养基平板上划线纯化，37℃厌氧培养24h，得到纯化单菌落。将每个纯化单菌落涂布在质谱板上，分别加入裂解液和基质，干燥后在MALDI-TOF MS 1000质谱仪（Autobio，郑州安图生物科技有限公司）上进行质谱上机鉴定。鉴定完成后将各菌株于-80℃冻存在本公司的菌种资源库中，以待后用。其中，本发明所涉及的多形拟杆菌BP8E菌株鉴定结果如图1所示。根据图1结果可见，BP8E菌株在分类上与多形拟杆菌存在极高的相似性，据此，将其命名为多形拟杆菌BP8E菌株。
实施例2：多形拟杆菌BP8E的制备
取-80℃冻存的BP8E菌液涂布于YCFA固体平板，在37℃条件下倒置培养24h后，取单菌落接种于液体YCFA培养基中，37℃培养24h，得到一代菌液；取一代菌液10%接种至新鲜YCFA液体培养基，37℃培养24h得到二代菌液；取二代菌液10%接种于新鲜的YCFA液体培养基中，37℃培养24h得到工作菌液。将工作菌液置于13000 rpm，4℃的条件下离心15 min后，收集上清即为BP8E菌株代谢物，后续实验用，其中菌体沉淀用生理盐水重悬，即可获得具有活菌体的活菌液。
实施例3：GABA产生量检测
本实施例通过纸层析法和高效液相色谱法对多形拟杆菌BP8E菌株产生的GABA进行定量检测。
（1）纸层析法
取多形拟杆菌BP8E上清液、YCFA培养基和GABA标准溶液（0.2，0.4，0.8，1.2，1.6和2.0 g/L）各4 μL在层析纸上点样，然后放在展开剂（V（正丁醇）∶V（冰醋酸）∶V（水）＝5∶3∶2，茚三酮用量为1.2%（w/v））中展开。层析结束后，立即将层析纸放入90℃烘箱中干燥显色30min。将与标准品位置一致的斑点剪下，用5 mL洗脱液（V75%乙醇：V0.6%硫酸铜=38：2）在40℃、50rpm条件下洗脱。取混匀后的洗脱液200 μL用酶标仪检测510 nm处的吸光值。根据GABA标准品绘制的标准曲线可计算样本中所含GABA的浓度值（单位为mg/L）。
通过三次纸层析实验，多形拟杆菌BP8E在YCFA液体培养基中（无外源L-谷氨酸）培养24小时后产生GABA的量如表1所示：
（2）HPLC法
准确称量GABA标准品，配制质量浓度为0.04，0.08，0.12，0.16和0.20 g/L的GABA标准溶液，取各浓度的GABA标准溶液100μL，向其中分别加入100μL邻苯二甲醛，充分混匀后室温条件下孵育至少90s。反应后溶液各取20 μL进样，于338 nm处测吸收峰值。以峰面积建立GABA浓度检测标准曲线。然后，将稀释后的BP8E上清液中加入邻苯二甲醛，孵育混匀后进样，于338 nm处测吸收峰值。
为了得到较可靠的GABA产生量的数据，共进行了两次高效液相色谱HPLC检测，多形拟杆菌BP8E产生GABA的量如下表2所示。
表2显示两次HPLC实验检测到的GABA浓度分别为564.6mg/L和492.7mg/L，平均值为528.6mg/L。文献报道的许多菌株需要在培养体系中添加外源谷氨酸，用以刺激菌株合成GABA，而本发明中的BP8E菌株能够在没有外源刺激的条件下产生高于文献报道的GABA量（232.8mg/L, 朱宗涛等，高产氨基丁酸的双歧杆菌的筛选及对抑郁细胞模型的改善作用，《食品工业科技》，2020），表明本发明的多形拟杆菌BP8E菌株具有优异的高产GABA的能力。
实施例4：多形拟杆菌BP8E对慢性应激抑郁模型小鼠悬尾实验的影响
通过慢性应激刺激构建的抑郁症模型小鼠是筛选抑郁症治疗药物研究中最常用的动物模型。因此，在以下实施例中采用通过慢性应激刺激构建的抑郁症模型小鼠作为受试对象。
（1）分组与小鼠模型建立
采购雄性昆明种小鼠32只，体重20g左右，适应性喂养一周后随机分为4组：正常组，模型组，BP8E活菌组和盐酸氟西汀组，每组8只小鼠。除正常对照组外，其他组小鼠按照慢性不可预知应激（CUMS）方法，每周以随机的次序给予以下应激刺激，持续4周：禁食12h，束缚1h，潮湿垫料12h，禁水12h，昼夜颠倒24h，震荡1分钟，电击足底。BP8E活菌组小鼠每日每只灌胃109CFU/mL多形拟杆菌BP8E活菌悬液，持续28天。正常组和模型组小鼠则给予灌胃对应的YCFA培养基，阳性组小鼠腹腔注射盐酸氟西汀（10mg/kg）。
（2）小鼠悬尾实验
小鼠悬尾实验是一种药效学上常用的行为绝望模型，用以评价抗抑郁药物的药效，通过观察小鼠在实验中悬尾的不动时间，来判断小鼠的抑郁样行为的改变。实验时，将小鼠用胶带在尾端1cm处黏贴胶带，使其倒置悬挂鼻部离地面20-25cm高，使用动物行为视频分析***记录6min内小鼠的绝望行为，分析后4min内的累计不动时间（s）。实验中，小鼠被分开测试以避免彼此的视觉和声音的干扰，其中，小鼠悬尾不动时间的判断标准为小鼠停止挣扎，呈倒悬垂状态，静止不动。
统计结果如图2所示，在悬尾实验中，模型组与正常组相比，小鼠悬尾的不动时间明显增多（p<0.001），BP8E组与模型组相比，灌胃BP8E活菌悬液能够显著减少受试小鼠的绝对不动时间（p<0.05），平均不动时间由~120s降至~94s，效果仅稍弱于药物盐酸氟西汀对小鼠绝对不动时间的改善效果（平均不动时间~85s），这些表明本发明中的多形拟杆菌BP8E菌株能够明显缓解抑郁症模型小鼠的在悬尾实验中的抑郁样行为。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E，其保藏编号为CGMCC No.22149。
2.含有下述至少一种的制剂在生产γ-氨基丁酸中的应用：
1）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E；
2）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E菌剂；
3）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E活菌悬液；
4）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E死菌悬液；
5）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E代谢产物；
6）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E提取物；
其中，所述多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E为权利要求1所述的保藏编号为CGMCC No. 22149的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E。
3.含有下述至少一种的制剂在制备用于预防和/或治疗抑郁症的产品中的应用：
1）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E；
2）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E菌剂；
3）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E活菌悬液；
4）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E死菌悬液；
5）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E代谢产物；
其中，所述多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E为权利要求1所述的保藏编号为CGMCC No. 22149的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E。
4.一种用于预防和/或治疗抑郁症的产品，含有下述至少一种：
1）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E；
2）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E菌剂；
3）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E活菌悬液；
4）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E死菌悬液；
5）多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E代谢产物；
其中，所述多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E为权利要求1所述的保藏编号为CGMCC No. 22149的多形拟杆菌（Bacteroides thetaiotaomicron）BP8E。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111476153.XA CN113881610B (zh) | 2021-12-06 | 2021-12-06 | 多形拟杆菌bp8e及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111476153.XA CN113881610B (zh) | 2021-12-06 | 2021-12-06 | 多形拟杆菌bp8e及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113881610A CN113881610A (zh) | 2022-01-04 |
| CN113881610B true CN113881610B (zh) | 2022-02-25 |
Family
ID=79016320
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111476153.XA Active CN113881610B (zh) | 2021-12-06 | 2021-12-06 | 多形拟杆菌bp8e及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113881610B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019205188A1 (zh) * | 2018-04-24 | 2019-10-31 | 深圳华大生命科学研究院 | 抑郁症生物标志物及其用途 |
| WO2020076043A1 (ko) * | 2018-10-08 | 2020-04-16 | 한국생명공학연구원 | 우울증의 예방 또는 치료 효과를 가지는 장내 미생물 및 이의 용도 |
| CN111961616A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-11-20 | 浙江工商大学 | 多形拟杆菌及其用途 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1724281B1 (en) * | 2003-12-23 | 2013-02-13 | Biokit S.A. | Pathogenic infection detection compositions and methods |
| CA3016911A1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | Holobiome, Inc. | Modulation of the gut microbiome to treat mental disorders or diseases of the central nervous system |
| EP3520799A1 (en) * | 2018-02-06 | 2019-08-07 | European Molecular Biology Laboratory | In-vitro model of the human gut microbiome and uses thereof in the analysis of the impact of xenobiotics |
-
2021
- 2021-12-06 CN CN202111476153.XA patent/CN113881610B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019205188A1 (zh) * | 2018-04-24 | 2019-10-31 | 深圳华大生命科学研究院 | 抑郁症生物标志物及其用途 |
| CN112119167A (zh) * | 2018-04-24 | 2020-12-22 | 深圳华大生命科学研究院 | 抑郁症生物标志物及其用途 |
| WO2020076043A1 (ko) * | 2018-10-08 | 2020-04-16 | 한국생명공학연구원 | 우울증의 예방 또는 치료 효과를 가지는 장내 미생물 및 이의 용도 |
| CN111961616A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-11-20 | 浙江工商大学 | 多形拟杆菌及其用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 抑郁症患者肠道菌群研究;漆靖等;《中国微生态学杂志》;20180915(第09期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113881610A (zh) | 2022-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhong et al. | Isolation of high γ‑aminobutyric acid‑producing lactic acid bacteria and fermentation in mulberry leaf powders | |
| CN110835616B (zh) | 副干酪乳杆菌gks6的活性物质、含其的组合物及其促进长寿的用途 | |
| DK2360237T3 (en) | NEW Lactobacillus plantarum AND COMPOSITION CONTAINING SAME | |
| CN104277999B (zh) | 一种新型多效丁酸梭菌及其在提高动物抗氧化能力和改善肉品质方面的应用 | |
| CN116555129B (zh) | 格氏乳杆菌bdup、其应用及产品 | |
| JP5910978B2 (ja) | 非タンパク性アミノ酸生産乳酸菌及びその用途 | |
| CN103649304A (zh) | 分离的微生物菌株植物乳杆菌（lactobacillus plantarum）mcc1 dsm 23881和格氏乳杆菌（lactobacillus gasseri）mcc2 dsm 23882及其用途 | |
| Ścieszka et al. | Innovative fermented soya drink with the microalgae Chlorella vulgaris and the probiotic strain Levilactobacillus brevis ŁOCK 0944 | |
| Panda et al. | Characterization of novel folate producing Lactobacillus rhamnosus and its appliance in fortification of ragi (Eleusine coracana) gruel | |
| Wei et al. | Probiotic-fermented tomato alleviates high-fat diet-induced obesity in mice: Insights from microbiome and metabolomics | |
| CN110835615B (zh) | 乳双歧杆菌gkk2的活性物质、含其的组合物及其促进长寿的用途 | |
| CN113881610B (zh) | 多形拟杆菌bp8e及其应用 | |
| JP2019103460A (ja) | 乳酸菌、乳酸菌発酵食品及び血圧調整剤 | |
| CN115337327B (zh) | 一种具有降脂、抗炎和抗氧化功能的益生菌制剂的制备方法和应用 | |
| KR20180092178A (ko) | 항콜레스테롤 활성이 우수한 신규 락토바실러스 플란타룸 f.m.b #31 균주 및 이의 용도 | |
| KR100910657B1 (ko) | 신규한 락토바실러스 브츠네리 및 이의 용도 | |
| TWI689593B (zh) | 高產量γ-胺基丁酸之製備方法 | |
| Kirdar | Therapeutics effects and health benefits of the Caucasus koumiss: A Review | |
| JP7492208B2 (ja) | Ｇａｂａ及びオルニチンを高産生する新規乳酸菌、並びに当該乳酸菌を用いた経口組成物の製造方法 | |
| KR101894423B1 (ko) | L 카르니틴 함유 발효 산물을 이용한 l 카르니틴 함유 버섯의 재배 방법 및 이에 의하여 재배된 l 카르니틴 함유 기능성 버섯 | |
| JP6931012B2 (ja) | γーアミノ酪酸高産出の調理方法 | |
| Miltko et al. | Can fungal zoospores be the source of energy for the rumen protozoa Eudiplodinium maggii? | |
| KR100403565B1 (ko) | 다량의 모나콜린이 함유된 비지 홍국을 이용한 닭사료 제조방법 | |
| Tsai et al. | The effects of lactic acid bacteria-fermented lemon juice on blood pressure regulation and allergic responses in rodents. | |
| Guo et al. | Novel food isolates with striking α-glucosidase inhibitory activity and probiotic potential for an antidiabetic role |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |