CN113854533A

CN113854533A - 一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁的方法

Info

Publication number: CN113854533A
Application number: CN202111157981.7A
Authority: CN
Inventors: 刘庚贵; 黄华学; 曾润清; 何安乐; 黄�俊; 陈明明; 廖智强
Original assignee: Hunan Huacheng Biotech Inc
Current assignee: Hunan Huacheng Biotech Inc
Priority date: 2021-09-30
Filing date: 2021-09-30
Publication date: 2021-12-31
Anticipated expiration: 2041-09-30
Also published as: CN113854533B

Abstract

本发明涉及一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁的方法。本发明巧妙利用各个步骤之间的配合，通过一种便于工业化大规模的连续化的生产方式，同时得到了罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁，并且可以利用所得罗汉果甜苷和罗汉果酚酸，与赤藓糖醇一起制备得到甜味持续时间短，口感优异，溶于水后澄清透明的罗汉果糖。本发明实现了罗汉果的综合利用，形成了一套完整的罗汉果生物活性成分提取分离和终端应用产品的精深加工技术体系，涵盖了现阶段罗汉果的2个主要提取物品种以及1类终端应用品种，产品收率高，品质好，具有很强的工业实用性。

Description

一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁的方法

技术领域

本发明涉及植物提取分离技术和食品添加剂领域，具体涉及一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁的方法。

背景技术

罗汉果(Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffrey)，英文名：fructusmomordicae，葫芦科多年生藤本植物的果实，被人们誉为“神仙果，主要产于广西壮族自治区桂林市永福县龙江乡、百寿镇，龙胜各族自治县，以及湖南省怀化、永州、衡阳、邵阳等地。罗汉果是国家首批批准的药食两用材料之一，其主要功效是能润肺止咳、生津化痰。

无籽罗汉果，系将罗汉果的三倍体雌株和二倍体雄株进行种植，开花时用二倍体的雄株对三倍体的雌株人工授粉，雌株挂果后得到无籽罗汉果。

罗汉果及无籽罗汉果含有丰富的风味和营养成分，以及三萜皂苷类非糖甜味成分。

(一)挥发油成分。

罗汉果果实含挥发油0.2％～0.3％，挥发油成分达20余个，从中鉴定出13个主要成分，共占挥发油总量的94.96％。其中，n-十六烷酸(45.609％)和9,12-十八碳二烯酸(36.151％)是主要成分，它们共占挥发油总量的81.76％。

无籽罗汉果的挥发油组成与罗汉果相似，但是含量有所变化，目前已鉴定其中的24个成分。其中，乙二醇异丙醚(27.21％)、1,2-苯二甲酸丁基-2-乙基己酯(13.51％)、邻苯二甲酸二异丁酯(10.85％)、天竺葵醛(10.22％)，(E)3-葵烯酸(6.52％)、丁酸丁酯(4.99％)、乙酸-2-十三烷酯(4.86％)，它们共占挥发油总量的78.16％。

(二)化学成分。

罗汉果及无籽罗汉果均含葫芦素烷型三萜皂苷，主要是罗汉果苷V、IV、11-O-罗汉果苷V、赛门苷等，鲜果含量0.3～0.5％，其中罗汉果苷V为主要甜味成分，无毒、低热量、高甜度、热稳定性好；葡萄糖、果糖和蔗糖等还原糖，鲜果含量9～14％；蛋白质、氨基酸等氨基化合物，干果含量7.1％-7.8％；脂肪酸、黄酮类化合物、维生素C以及锰、铁、镍、硒、锡、碘、钼等26种无机元素和微量元素等。

(三)罗汉果甜苷等非糖甜味成分。

罗汉果果实中含非糖甜味成分，主要是以罗汉果醇为苷元的三萜皂苷，以罗汉果苷(Mogroside)Ⅴ、Ⅳ为代表。其中，罗汉果苷Ⅴ的甜度是蔗糖的256-344倍，罗汉果苷Ⅳ的甜度为蔗糖的126倍。

另含D-甘露醇(D-mannitol)，其甜度为蔗糖的0.55-0.65倍。

中文名称：罗汉果苷V

英文名称：Mogroside V

CAS No.：88901-36-4

分子式：C₆₀H₁₀₂O₂₉

国内对罗汉果的研究很多，涉及罗汉果的种质资源、种苗、种植、管护、化学成分研究、主要生物活性成分如罗汉果甜苷等三萜皂苷的提取分离、罗汉果和罗汉果甜苷的药理毒理及终端应用等；对罗汉果的综合利用也有一定研究，比如从罗汉果甜苷吸附树脂排出的废液生产罗汉果浓缩汁(糖浆)、从罗汉果甜苷脱色树脂排出的废液生产罗汉果黄酮等，但综合利用依据罗汉果甜苷的提取分离工艺而定，作为废弃物的资源化再利用，仅有一定报道，尚未形成完整的提取分离精深加工体系。因不同提取分离工艺技术的前处理不同，涉及到絮凝、pH调节、膜分离、吸附树脂精制、脱色树脂脱色等多种工艺技术，综合利用具有一定局限性，且絮凝对罗汉果甜苷有较大的损失，絮凝沉淀中的罗汉果甜苷实际中也难以回收再利用，技术有待进一步完善。现有关罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)、罗汉果酚酸、罗汉果糖的提取分离和制备技术的专利和文献报导，工艺过程主要涉及罗汉果的糖化后熟、破碎、提取、酶解、絮凝、大孔吸附树脂精制、离子树脂脱色、超滤和纳滤、有机溶剂萃取、氧化铝层析、聚酰胺层析、硅胶层析、活性炭层析等技术，普遍存在将破碎的罗汉果在较高温度提取，或较长时间的渗漉提取。

高温提取增加了罗汉果中各种成分的溶出，促使果肉过度熟化而形成细小的粘性沉淀，促进引起吸附树脂和脱色树脂板结的多糖类物质的溶出和蛋白类物质的变性并显著引起板结，从而导致提取液具有一定粘稠度和粘性沉淀，离心难以去除，此类物质极易堵塞陶瓷膜孔，难以澄清，进而影响树脂吸附分离及脱色效果；高温提取还显著促进了罗汉果中的还原糖和蛋白质类的美拉德反应，引起颜色加深，提高脱色难度。若要将粘性物质去除，就需要进行酶解、絮凝等处理，促使这类成分分解或共沉淀；若要达到较好的脱色效果，就需要用到多种脱色技术，如脱色树脂、聚酰胺、活性炭、膜分离等的组合。如前所述，此类操作造成了一定程度的罗汉果甜苷损失，从而直接提高了生产成本。

现阶段研究罗汉果甜苷的目标均指向高纯度罗汉果甜苷，高纯度的工艺过程伴随硅胶层析、高速逆流色谱等高成本操作，导致产品价格高，不利于市场接受；且高纯度产品由于各种原因，仍具有或多或少的入口微苦涩味。罗汉果浓缩汁(糖浆)主要涉及从鲜罗汉果制备，或是通过废液资源化再利用制备，以脱色浓缩汁为主，主要关注色泽、多种成分含量、透光率等指标，而对去除罗汉果浓缩汁(糖浆)中的农残、以及制备过程中的塑化剂等有害物质的研究少。罗汉果酚酸研究较少，主要涉及罗汉果黄酮、罗汉果黄素等，对能被离子交换树脂交换吸附的罗汉果酚酸类物质缺乏关注。罗汉果糖仅是利用市售成品罗汉果甜苷与赤藓糖醇等甜味填充剂进行简单配制，并未涉及到罗汉果甜苷的制备，尤其是罗汉果甜苷与罗汉果酚酸的制备，以及由此产生的一系列综合效果。

基于上述原因，进行罗汉果提取分离精深加工及高值化利用，需要将罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)、罗汉果酚酸、罗汉果糖作为一个整体来考虑，建成完整的产业链体系，形成技术方案，实现规模生产，从而促进罗汉果产业发展。

脉冲电场(PEF)作为一种非热加工技术可应用于提取、浸渍、灭菌等。脉冲电场产生磁场，这种脉冲电场和脉冲磁场交替作用，使细胞膜透性增加，振荡加剧，膜强度减弱，因而膜被破坏，膜内物质容易流出，膜外物质容易渗入，细胞膜的保护作用减弱甚至消失；电极附近物质电离产生的阴、阳离子与膜内生命物质作用，因而阻断了膜内正常生化反应和新陈代谢过程等的进行，同时，液体介质电离产生强烈氧化作用，能与细胞内物质发生一系列化学反应而灭菌。

目前国内尚无利用脉冲电场对罗汉果碎料进行前处理，从而实现低温至常温短时、高效提取罗汉果生物活性成分并显著降低美拉德反应的报道；无从鲜罗汉果中同时提取V50纯味罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)和罗汉果酚酸，并用罗汉果甜苷和罗汉果酚酸制备罗汉果糖的报道；无先低温或常温提取，不采用酶解、絮凝、pH调节等技术手段，以离子树脂的脱色并形成碱性溶液条件，脱色液再进吸附树脂进行二次吸附与弱碱性分离、MCI树脂选择性去除苦味皂苷并调节酚酸比例制备罗汉果甜苷，并用植物油萃取去除罗汉果甜苷中的塑化剂，以低温微滤去除后沉淀，从而制备有害物质残留符合国标、滋味口感纯正、颜色牛奶白色、10％水溶液无后沉淀、罗汉果苷V含量49～62％的罗汉果甜苷的报道；无采用脱农残专用树脂与植物油萃取联用去除罗汉果浓缩汁(糖浆)中的农残，以植物油萃取与一定截留分子量的超滤膜联用去除罗汉果浓缩汁(糖浆)中的塑化剂、以脉冲电场实现罗汉果浓缩汁(糖浆)的常温灭菌而非热灭菌的报道；无利用离子树脂和吸附树脂联用从罗汉果中提取高纯度罗汉果酚酸，并采用植物油萃取除去塑化剂的报道。

现有公开的有关罗汉果综合利用，从罗汉果中提取罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)、罗汉果酚酸，或从生产废液中提取罗汉果浓缩汁(糖浆)和黄酮，制备罗汉果糖的技术内容，分述如下：

1、罗汉果的综合利用。

CN201910089371.4公开了一种干罗汉果综合利用的提取纯化方法。该方法包括：S1、将破壳的干罗汉果用乙醇水溶液提取得到提取液和果渣，之后浓缩提取液至水相溶液；S2、澄清水相溶液，得到第一滤液和第一滤渣；S3、向第一滤液中加入沉淀剂得到第二滤液，将第二滤液通过陶瓷膜设备得到第三滤液；S4、将第三滤液注入树脂柱，将流出液通过阳离子交换树脂与阴离子交换树脂，得到罗汉果果葡糖浆；S5、将树脂柱用低浓度乙醇洗脱，并收集洗脱液，干燥得到罗汉果棕色色素；S6、将洗脱后的树脂柱使用高浓度乙醇解吸，将解吸液浓缩并干燥得到罗汉果苷V。实现了从干罗汉果中综合提取纯化罗汉果果葡糖浆、罗汉果棕色色素和罗汉果苷V。

该方法为干罗汉果的综合利用，同时制备罗汉果果葡糖浆、罗汉果棕色色素、罗汉果苷V，但至今国内外尚未有企业以干罗汉果为原料制备罗汉果果葡糖浆和罗汉果苷V、罗汉果棕色色素，也未见有干罗汉果的综合利用在企业中的转化，罗汉果生产企业均以鲜罗汉果为原料。干罗汉果虽然易于保存和运输，但成本至少为鲜罗汉果的2倍以上，且经过长时间的烘烤，已发生严重的美拉德反应，产生了明显的药味和极深的颜色，味道难以去除，无法脱色；罗汉果甜苷、罗汉果棕色色素和罗汉果浓缩汁(糖浆)均为水易溶成分，用含水醇显著提高生产成本，增加生产操作复杂性；干罗汉果经充分的美拉德反应，极难脱色，无法用吸附树脂和阴阳离子树脂简单脱色得到浅色的罗汉果浓缩汁(糖浆)，失去了罗汉果浓缩汁(糖浆)的原汁原味；被吸附树脂吸附的仅为经美拉德反应的部分色素，经美拉德反应而来，多数非罗汉果本身的酚酸类色素，经低度醇洗脱时，此类色素会和部分罗汉果苷V一并流出而造成罗汉果苷V的损失，色素不纯；简单的吸附树脂加梯度洗脱的方式，无法得到25％以上罗汉果苷V，仅能得到较低含量且颜色棕褐色的罗汉果苷V，非市场上的罗汉果甜苷品种。

2、提取罗汉果甜苷。

CN201811250821.5公开了一种高含量罗汉果苷V的生产方法，以经过冷冻后立即进行瞬时高温加热处理的罗汉果为原料，1)预处理：将原料罗汉果经冷冻后立即进行瞬时高温加热，将原料罗汉果在-25℃～-10℃条件下冷冻1～2小时后，立即在105℃～120℃条件下加热5～50秒；2)提取：将经过预处理的罗汉果去皮，果肉破碎，加水进行逆流循环提取，得提取液；3)过滤：提取液进行离心，离心得到的上清液经陶瓷膜过滤，得过滤液；4)吸附与解析：过滤液经大孔树脂柱吸附后，用乙醇溶液解析，得解析液；5)脱色：解析液依次通过阳离子交换树脂、阴离子交换树脂，收集过柱液；6)浓缩与干燥：过柱液浓缩、干燥，得罗汉果苷V；其中，所述的罗汉果苷V的含量≥50％。

CN201510634737.3公开了一种提高罗汉果甜苷中罗汉果甜甙V纯度的方法，以罗汉果鲜果或罗汉果干果为原料，经过1)提取、2)预浓缩、3)酶解、4)一次过滤、5)树脂吸附、洗脱、6)浓缩、二次过滤、7)树脂柱脱盐、8)树脂柱脱色、9)活性炭进一步脱色以及10)灭菌、干燥步骤完成。

CN201410190403.7公开了一种罗汉果甙V的提取方法，以罗汉果鲜果为原料，经清洗、破碎，再按下述步骤提取：1)糖化鲜罗汉果；2)水提取和浓缩；3)沉降离心处理；4)大孔树脂吸附、分离，采用多树脂柱组选择吸附，并分段收集解析液，根据含量不同，分批次合并处理；5)离子交换树脂精制；6)浓缩、回收乙醇；7)硅胶精制；8)浓缩和喷雾干燥，获得终产品罗汉果甙V提取物。

CN201410192274.5公开了一种罗汉果甜甙V的制备方法。该制备方法利用成熟罗汉果鲜果为起始原料，经破碎、提取、澄清除杂、过滤、大孔吸附树脂吸附、洗脱、二次离子交换树脂吸附、浓缩、干燥、乙醇精制得到罗汉果甜甙V。

CN201410186296.0本发明公开了一种高纯度罗汉果皂苷Ⅴ的制备方法，包括如下步骤：(1)将新鲜罗汉果打成桨糊状，加入去离子水加热条件下高剪切萃取，过滤，滤渣再萃取，合并所得滤液并减压浓缩得到A；(2)将A用AB-8型大孔吸附树脂柱分离，先用碱性水洗脱至无色，去离子水洗至中性，最后用乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩得到B；(3)将B用001×16强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱分离，用酸性水洗脱，洗脱液减压浓缩得到C；(4)将C用D941弱碱性阴离子交换树脂柱分离，用水洗脱，洗脱液减压浓缩得到D，喷雾干燥后得到罗汉果皂苷Ⅴ。

CN200910044558.9公开了一种罗汉果苷V含量大于60％的罗汉果提取物生产方法。该方法是将新鲜罗汉果经过：破碎→糖化→水提取→浓缩→沉降离心→离子交换树脂精制→大孔树脂精制→浓缩→氧化铝精制→浓缩→喷雾干燥→成品的工艺流程。

CN200710049737.2公开了一种罗汉果苷V≥40％、罗汉果苷≥98％的牛奶白色罗汉果提取物及其制备方法，它以鲜罗汉果为原料，经水提取→浓缩→酶解→大孔吸附树脂精制→离子交换树脂脱色→浓缩→喷雾干燥制得。

上述方法提取罗汉果苷V的工艺路线为罗汉果提取液经澄清、有/无酶解、大孔吸附树脂精制、离子树脂脱色、有/无活性炭脱色、有/无硅胶精制等主要工艺步骤得到50％左右纯度的罗汉果苷V，涉及到生物酶解、过滤前浓缩、硅胶精制等，是对罗汉果苷V的分离纯化，不涉及制备罗汉果浓缩汁(糖浆)和罗汉果酚酸，也不涉及去除罗汉果苷V中影响滋味口感的成分、去除罗汉果苷V中的塑化剂等有害物质，以及产品溶液的后沉淀处理。

3、提取罗汉果浓缩汁(糖浆)。

CN201710141754.2公开了从罗汉果甜甙吸附树脂柱排出的废液中生产罗汉果浓缩汁(糖浆)的工艺，其步骤是：鲜罗汉果生产过程的吸附树脂进料废液→陶瓷膜微滤澄清→阴离子树脂调pH→反渗透膜浓缩→脱色树脂脱色→活性炭脱色→板框过滤→钛棒精滤→反渗透膜浓缩→低温冷却→陶瓷膜微滤澄清→真空减压浓缩制膏→灭菌→真空包装→罗汉果浓缩汁(糖浆)。

CN202011089686.8公开了一种富糖风味罗汉果浓缩汁(糖浆)的制备方法，包括以下步骤：以制备罗汉果甜苷过程中产生的废液为原料，将所述废液过滤、真空浓缩、醇沉、回收酒精、树脂脱色、调pH值，再真空浓缩，即得富糖风味罗汉果浓缩汁(糖浆)。

CN201910820713.5公开了一种无添加的天然罗汉果糖浆，以鲜罗汉果生产过程的吸附树脂废水为原料制得，具体为：葡萄糖14～24％、果糖16～24％、蔗糖1～14％、甘露醇1～8％、水40～50％，其余成分≤2％，其从鲜罗汉果生产过程中的吸附树脂废液经过精制、脱色、脱酸、去农残和重金属，浓缩等步骤得到，除罗汉果、无籽罗汉果和水外，无其它添加物，是一种纯天然的无添加罗汉果糖浆。

CN201710277285.7公开了用新鲜成熟的罗汉果制备鲜罗汉果脱色浓缩汁的工艺，其步骤是：鲜罗汉果→糖化→选果和洗果→破碎→渗漉提取→碟式离心→0.45μm陶瓷膜微滤澄清→分子量超滤分离→聚酰胺树脂脱色→脱色树脂脱色→阳离子树脂调pH→反渗透膜浓缩→粒状活性炭柱去残留→0.22μm陶瓷膜微滤澄清→真空减压浓缩制膏→灭菌→真空包装→鲜罗汉果脱色浓缩汁。

上述方法涉及从鲜罗汉果或罗汉果甜苷生产废液制备罗汉果浓缩汁(糖浆)，主要涉及到罗汉果浓缩汁(糖浆)的脱色、澄清、pH、去农残和重金属等，重点在于制备脱色浓缩汁，不涉及同时制备罗汉果甜苷和罗汉果酚酸，也不涉及去除罗汉果浓缩汁(糖浆)中的塑化剂残留等。

4、制备罗汉果糖。

CN201710035875.9公开了一种两倍糖或多倍糖的健康型罗汉果糖的制作方法，包括如下步骤：(1)分别称取罗汉果甜甙V和赤藓糖醇，所述罗汉果甜甙V和赤藓糖醇重量比为(8-40):(1000-5000)；(2)将赤藓糖醇加热混合至30-35℃，得到微热的赤藓糖醇；(3)将罗汉果甜甙V溶解于为其2-3倍重量的质量浓度为98％的食用酒精中，得到罗汉果甜甙V溶液，并均匀地喷雾在步骤(2)所得的微热的赤藓糖醇上，然后继续混合15-25min，得到罗汉果糖粗品；(4)将步骤(3)得到的罗汉果糖粗品烘干。

CN200410022754.3公开了一种低热量罗汉果糖，本发明还公开这种低热量罗汉果糖的制造方法，其制造方法的包括下述步骤：选果、破碎—水提—过滤—吸附—洗脱—浓缩—干燥—混合—包合重结晶—干燥，得成品。

上述方法涉及罗汉果糖的制备，以罗汉果甜苷或罗汉果经吸附树脂精制所得的黄褐色罗汉果提取物与赤藓糖醇复配，不涉及V50纯味罗汉果甜苷和罗汉果酚酸的制备及其与糖醇类甜味填充剂的复配，也不涉及流化床造粒技术。

5、脉冲电场在植物提取中的应用。

CN201810373260.1公开了一种脉冲电场-双水相-柱层析组合提取植物多酚的方法，包括如下步骤：(1)对待提取植物进行预处理得原料液；(2)以乙醇为溶剂，利用脉冲电场提取原料液中的活性物质，得提取液；(3)提取液过滤后采用双水相萃取提取液中的活性成分，得植物多酚粗提液；(4)植物多酚粗提液旋蒸除醇后采用柱层析法对提取物中活性物质进行纯化；(5)浓缩干燥即得植物多酚产品。

CN201310140746.8本发明公开了一种超声协同脉冲电场提取葡萄皮渣多酚的方法，包括以下步骤：待处理的葡萄皮渣和乙醇水溶液置于脉冲电场两电极之间的处理室，将超声探头***到葡萄皮渣乙醇水溶液中，同时开启超声波和脉冲电场进行提取；所述葡萄皮渣和乙醇水溶液质量比为1:2。本发明采用超声协同脉冲电场提取葡萄皮渣多酚，利用超声波产生的空化效应和一些次级效应，在相同的操作条件下，提取率比纯脉冲电场或超声场有明显提高。本发明提取过程简单，易操作，可以在短时间到达较好的提取效果。

上述方法以单一脉冲电场或与超声协同提取多酚，但均以乙醇水溶液为提取溶剂，而乙醇本身对植物细胞具有极强的穿透能力，不需要脉冲电场处理，二者互相矛盾，造成资源浪费和成本增加；多酚为水溶性物质，从生产成本及生产操作方面综合考虑，乙醇提取的方法不适合工业规模生产。因此，脉冲电场应用于提取植物多酚，需要结合生产实际考虑，目前尚未有脉冲电场前处理技术应用于罗汉果生物活性成分的提取分离。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上不足，提供一种充分利用鲜罗汉果的方法，一种同时制备得到罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)和罗汉果糖的方法：以鲜罗汉果为原料，改变传统高温提取或长时间渗漉提取方式，以脉冲电场对罗汉果碎料进行前处理，实现罗汉果生物活性成分低温至常温的短时、高效提取，并降低美拉德反应程度，提高罗汉果甜苷等有效成分的收率及显著提升罗汉果甜苷和罗汉果浓缩汁(糖浆)的脱色效果；实现鲜罗汉果的综合利用，同时制备V50纯味罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)和罗汉果酚酸，并用罗汉果甜苷、罗汉果酚酸与赤藓糖醇制备罗汉果糖；去除3种产品中的农残、塑化剂等有害物质，解决产品后沉淀难题；运用离子树脂、吸附树脂、专用树脂、MCI树脂与植物油萃取联用技术，制备得到高品质的罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)、罗汉果酚酸，将此技术应用于规模生产，实现罗汉果生物活性成分的同时提取分离及精深加工，实现产业化。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁的方法，包括以下步骤：

(S1)鲜罗汉果破碎后用水浸没，在脉冲电场条件下进行处理，低温条件下对罗汉果进行连续逆流提取或提取罐提取，过滤，上碱性阴离子树脂柱，全部进料后水洗，收集水洗液1，合并进料流出液和水洗液1；然后用含水和酸的醇溶液解吸，再用水洗脱，收集水洗液2，合并解吸液和水洗液2；

步骤(S1)中水的加入量以能够浸没碎料表面即可，在本发明一个具体实施方式中，水的体积加入量为鲜罗汉果重量的0.8～1.2倍(L/kg)。

步骤(S1)中所述破碎为破壳不碎籽，是将罗汉果壳破开，但保持种籽的完整性，因种籽具有一定苦味且含油脂，影响罗汉果甜苷和罗汉果浓缩汁(糖浆)的滋味口感。

步骤(S1)中，前处理脉冲电场强度为0.5～2.0kv/cm，次数为10～30，处理程度为至罗汉果碎料果肉组织结构疏松。脉冲电场处理破坏了果肉组织细胞结构，极大地促进了易溶于水的罗汉果甜苷等生物活性物质的溶出，减少多糖等杂质的溶出，提高提取效率，缩短提取时间。

步骤(S1)中，所述低温是10-20℃(改成：3～30℃)，温度过低不利于提取液中罗汉果甜苷等有效成分的浓度扩散，降低提取效率；温度过高则会使罗汉果果肉熟化而生成细小粘性沉淀，影响过滤澄清及树脂分离效果，还会造成严重的美拉德反应而使产品难脱色。

步骤(S1)中，所述连续逆流提取的工艺为本领域所熟知。在本发明一个具体实施方式中，连续逆流提取的工艺使两节提取槽；时间2.0h～3.0h；加水量1.5～3.0倍(水体积/鲜罗汉果，V/W)；提取完后挤压过滤，收集提取液。常规提取罐提取：开启搅拌或压缩空气反冲；提取3次；时间分别是1-2.0h、0.5-1.5h、0.5-1h；每次加水量为罗汉果鲜果的2-4倍(水体积/鲜罗汉果质量，V/W)；合并前2次提取液，第3次套提。

步骤(S1)中，所述过滤是碟式离心与陶瓷膜澄清的组合，先用碟式离心分离果肉碎屑等沉淀，再用陶瓷膜澄清；所述陶瓷膜材质为氧化铝或氧化锆，孔径为100～400nm。

步骤(S1)中，所述碱性阴离子树脂包括凝胶型及大孔型丙烯酸弱碱阴离子树脂、丙烯酸系强碱和弱碱阴离子树脂、凝胶型及大孔型苯乙烯系强碱阴离子树脂、大孔型丙烯酸强碱阴离子树脂、大孔型苯乙烯系弱碱阴离子树脂，优选型号：D900、D941、D316、D296、D280。此类树脂对罗汉果中的酚酸类物质具有很好的交换吸附作用，而对罗汉果甜苷、果糖等还原糖类等无吸附。碱性阴离子树脂的用量是鲜罗汉果的7-20wt％。碱性阴离子树脂的高径比为4-8:1，进料流速0.6-1.5BV/h，水洗流速1.0-2.0BV/h，水洗至流出液pH为7.5～8.5。

步骤(S1)中，所述含水和酸的醇溶液是醇浓度50～75wt％，无机酸浓度0.3～1wt％的醇水溶液，所述醇为甲醇、乙醇、丙醇中的至少一种，优选为乙醇。所述含水和酸的醇溶液的用量是阴离子树脂重量的1.5～3倍。调节上述解吸的工艺参数可以将离子树脂上交换吸附的罗汉果酚酸完全洗脱下来，并通过稀酸使酚酸类物质处于游离态，从而提高了酚酸的稳定性。

(S2)合并碱性阴离子树脂进料流出液和水洗液1，上大孔吸附树脂柱，水洗至流出液澄清透明无色，用含水醇1解吸，再用水洗，收集解吸液和水洗液，浓缩，上MCI柱，收集MCI柱进料流出液后，用含水醇2解吸，再用水洗脱，解吸液和水洗液合并后，浓缩，与MCI柱进料流出液合并，得MCI柱精制液，浓缩后加入食用植物油，加热条件下搅拌，逆流萃取，静置分层，收集水相，水相冷藏后过滤，浓缩，喷雾干燥得V50罗汉果甜苷；

步骤(S2)中，所述大孔吸附树脂型号为非极性D101、LX-100B、LX-T28、LX-T81，弱极性AB-8或它们的任意组合。此类树脂对罗汉果甜苷等皂苷类物质具有很好的吸附作用，而对果糖等还原糖无吸附。大孔吸附树脂的用量是投料鲜罗汉果重量的25～60％。含水醇1的体积用量是大孔吸附树脂质量的1.5-3倍(V/W)，含水醇1解吸后水洗水的体积用量是大孔吸附树脂质量的0.7-1.5倍(V/W)。

步骤(S2)中，所述MCI柱填料为聚苯乙烯基反相凝胶填料CHP20P 75～150um系列，规格型号为聚苯乙烯型GEL CHP 20SS、GEL CHP 2MG，甲基丙烯酸酯型GEL CHP 2MG中的一种或它们的任意组合，收集部分为进柱流出液，35～50％含水醇解吸液和水洗液的总和。由于罗汉果中苦味皂苷--罗汉果苷IIE、III与罗汉果甜苷中主要甜味成分，如罗汉果苷IV、罗汉果苷V、11-O-罗汉果苷V、赛门苷I分子结构与配位糖基差异，MCI柱填料的树脂对罗汉果甜苷中的苦味物质，特别是苦味的一些皂苷具有很好的吸附作用，而对罗汉果甜苷吸附较小，可以在前期吸附树脂精制、脱盐及脱苦基础上，进一步去除苦涩味成分，从而显著改善罗汉果甜苷的滋味口感。MCI树脂的质量用量是大孔吸附树脂解吸液和水洗液中固形物质量的15～30倍。含水醇2的体积用量是MCI树脂质量的1-2.5倍(V/W)，含水醇2解吸后水洗水的体积用量是MCI树脂质量的0.5-1.5倍(V/W)。

步骤(S2)中，所述含水醇1的醇浓度为50-70w％，含水醇2的醇浓度为35-50wt％，所述醇为甲醇、乙醇、丙醇中的至少一种。含水醇2的醇浓度不能高于含水醇1，这是因为大孔吸附树脂与MCI树脂的吸附和解吸附性能、使用目的不同，MIC柱的目的是吸附影响产品口感的苦味物质，如果含水醇2的浓度较高，会把一部分的苦味物质一起洗脱下来，导致产品口感滋味方面变差。

步骤(S2)中，MCI柱精制液浓缩至固含量8～15％，食用植物油的用量是MCI柱精制液浓缩后体积的0.7-1.5倍，加热温度为60-75℃。在此温度和操作条件下，植物油对农残和塑化剂类油溶性成分具有很好的溶解度，而罗汉果甜苷、果糖等还原糖不溶，水相和油相静置分层，从而显著去除农残、塑化剂等有害物质。

步骤(S2)中，所述冷藏是在1-5℃条件下冷藏，在此冷藏温度条件下，一方面直接承接之前萃取脱塑化剂步骤的固形物含量，另一方面有利于罗汉果甜苷中的后沉淀充分析出。过滤后浓缩是浓缩至固形物含量20-30％，喷雾干燥工艺条件是进风温度160-190℃，出风温度75-90℃。

(S3)收集步骤(S2)大孔吸附树脂进料流出液和初期水洗液，上阳离子树脂柱，收集进料流出液，进完料后进纯化水，水洗，合并阳离子树脂柱进料流出液和0～2BV水洗液，浓缩，得脱盐液，再进入脱农残专用树脂柱，水洗，合并流出液和水洗液，第一次浓缩，加入食用植物油，加热搅拌，逆流萃取，静置分层，收集水相，水相进截留分子量2KD～3KD的有机膜成套设备，第二次浓缩，过滤，第三次浓缩，冷藏，再次过滤，浓缩至合适糖度，得浓缩液；

步骤(S3)中，所述初期水洗液是进完料以后，再进纯化水，收集1-2BV以内的水洗液；所述阳离子树脂包括凝胶型及大孔型苯乙烯系强酸阳离子树脂、丙烯酸系凝胶型和大孔型弱酸阳离子树脂，优选型号：001×16，D717。阳离子树脂的质量是步骤(S1)碱性阴离子树脂质量的0.4～1.0倍。

步骤(S3)中，所述脱农残专用树脂包括凝胶型及大孔型丙烯酸树脂、丙烯酸系树脂、凝胶型及大孔型苯乙烯系树脂、大孔型丙烯酸树脂、大孔型苯乙烯系树脂、丙烯酸系凝胶型树脂，优选型号：LSA-900B、LSA-900D。此类树脂对微量农残具有显著的吸附作用，而对果糖等还原糖无吸附。脱农残专用树脂质量是步骤(S3)阳离子树脂质量的0.2～1.0倍。

步骤(S3)中，所述第一次浓缩是浓缩至固形物含量9～12％；所述第二次浓缩是浓缩至固形物含量4～10％；所述第三次浓缩是浓缩至固形物含量12～20％。分两步过滤澄清可完全去除罗汉果浓缩汁(糖浆)中产生浑浊和后沉淀的物质，实现了整个工艺过程不需要酶解、絮凝等降低罗汉果甜苷收率的操作而仅通过物理分离即完全解决了罗汉果浓缩汁(糖浆)的后沉淀难题。

步骤(S3)中，食用植物油的加入量是第一次浓缩所得脱农残液体积的0.4～1.5倍，加入食用植物油后，加热的温度为60-75℃。

步骤(S3)中，所述冷藏是温度在1-5℃，使沉淀充分析出。

步骤(S3)中，所述浓缩至合适糖度，是浓缩至50～70Brix，浓缩后还可以对浓缩液灭菌，比如脉冲电场灭菌，或者高温灭菌。优选为脉冲电场灭菌，脉冲电场强度为30～50kv/cm，次数为400～600。此工艺以非热处理方式实现了罗汉果浓缩汁(糖浆)的常温高效灭菌，避免了浓缩汁由于受热而发生美拉德反应并影响到色泽。

步骤(S3)所得罗汉果浓缩汁(糖浆)糖度为60～70Brix，主要组成：果糖15～25％、葡萄糖15～25％、蔗糖5～12％，单糖和双糖总量38～52％。主官体验指标：1、滋味口感：接近蜂蜜的醇厚口感，极甜，入口愉悦；2、气味：具蜂蜜香味，以及罗汉果的特征果香味；3、颜色：淡黄色至黄色，澄清透明，无浑浊和沉淀。

(S4)合并步骤(S1)的阴离子树脂解吸液和水洗液2，浓缩，上酚酸专用吸附树脂，水洗，含水醇3解吸，解吸液浓缩，加入食用植物油，加热搅拌，逆流萃取，静置分层，收集水相，过滤，浓缩，喷雾干燥得罗汉果酚酸；

步骤(S4)中，所述专用树脂为酚酸吸附专用树脂，对罗汉果酚酸具有专一和选择性吸附，规格型号为非极性苯乙烯材质LXD-200，极性聚酰胺材质LX-8、丙烯酸材质LX-17、苯乙烯溴化树脂LX-207中的一种或它们的任意组合。此类树脂系专用树脂，具有很强的选择吸附性，是制备高纯度酚酸的关键，相比广谱树脂，酚酸的含量提高30％以上。

步骤(S4)中，所述阴离子树脂解吸液和水洗液2合并液浓缩是浓缩至无醇味，解吸液浓缩是浓缩至固形物含量9～12％，喷雾干燥前浓缩是浓缩至固形物含量20-30％。

步骤(S4)中，食用植物油的体积加入量是浓缩后解吸液的0.4-1.5倍，加热温度为60-75℃，

步骤(S2)至(S4)中，所述过滤是过陶瓷膜成套设，陶瓷膜材质为氧化铝或氧化锆、孔径100-400nm。

在本发明一个优选技术方案中，所述方法还包括步骤制备罗汉果糖的步骤(S5)：

(S5A)制备原味罗汉果糖：

按比例取步骤(S2)的罗汉果甜苷V50与步骤(S4)的罗汉果酚酸，加水溶解，作为粘合剂，将赤藓糖醇投入流化床，均匀喷入粘合剂，干燥，得原味罗汉果糖；

和/或(S5B)制备罗汉果零卡糖：

按比例取步骤(S2)的罗汉果甜苷V50，加水溶解，作为粘合剂，将赤藓糖醇投入流化床，均匀喷入粘合剂，干燥，得罗汉果零卡糖。

优选地，步骤(S5A)中罗汉果甜苷V50和罗汉果酚酸的质量比为1：0.5～15。优选1:6-12。

优选地，步骤(S5)中，所述罗汉果糖由流化床造粒法制备，粘合剂的固形物含量5～20％；赤藓糖醇加入量为V50罗汉果甜苷，或V50罗汉果甜苷与罗汉果酚酸总和重量的2～250倍。

赤藓糖醇的甜度为蔗糖的60～70％，赤藓糖醇的加入量取决于所需要得到罗汉果糖甜味剂的甜度。当想要得到高倍甜味剂时，赤藓糖醇加入量低，比如为V50罗汉果甜苷的2倍；如果需要得到甜度接近蔗糖的罗汉果代糖，赤藓糖醇加入量高，比如V50罗汉果甜苷的250倍。

发明人发现，按照本发明上述方法得到的罗汉果甜苷V50和罗汉果酚酸制备得到的原味罗汉果糖，口感得到了改善，无入口微苦涩味，并且后甜味时间缩短，甜度持续时间在15秒左右，更加接近蔗糖。

本发明提供了一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)和罗汉果糖的方法，以新鲜成熟的罗汉果为原料，在保持种籽完好状态下破壳，避免溶出对罗汉果甜苷和罗汉果浓缩汁(糖浆)滋味口感有影响的苦味物质和油脂。加适量水使果汉果碎料充分舒展，通过脉冲电场使果肉细胞膜透性增加，振荡加剧，膜强度减弱，膜内罗汉果甜苷、果糖等还原糖、酚酸类物质容易流出，膜外物质容易渗入，细胞膜的保护作用减弱甚至消失。完成前处理以后，通过低温至常温以动态提取方式，进一步促进罗汉果果肉细胞膜内的罗汉果甜苷、果糖等还原糖、罗汉果酚酸向溶液体系转移，形成最大的浓度梯度差，从而实现短时、高效提取，极大地减少多糖等物质的溶出，避免了果肉过度熟化而产生粘性沉淀，也显著降低了美拉德反应程度，有利于产品精制和脱色。低温提取的罗汉果提取液不粘稠，也无明显的粘性沉淀，可以通过碟式离心和陶瓷膜简单操作得到澄清透明的料液，显著提高树脂分离纯化效果。

一定规格型号的阴离子交换树脂具有较大的交换容量，对罗汉果酚酸具有选择交换吸附作用，而对罗汉果甜苷和果糖、葡萄糖、蔗糖等还原糖类无吸附，因此，通过阴离子交换树脂，经纯化水洗将不被树脂吸附的物质洗出树脂柱，从而实现罗汉果酚酸与罗汉果甜苷、富含果糖等还原糖的罗汉果浓缩汁(糖浆)分离。

离子树脂柱的流出液中含有罗汉果甜苷，葡萄糖、果糖、蔗糖等还原糖，一定规格型号的大孔吸附树脂对罗汉果甜苷具有很好的吸附，而对果糖等还原糖无吸附，因此，通过大孔吸附树脂，经纯化水洗将不被树脂吸附的物质洗出树脂柱，从而实现罗汉果甜苷与富含果糖等还原糖的罗汉果浓缩汁(糖浆)分离。因离子树脂流出液呈碱性，在经大孔吸附树脂分离时，三萜皂苷类中性物质-罗汉果甜苷被充分吸附，而透过离子树脂的部分色素等杂质在碱性条件下以离子形式不被吸附而流出，从而实现阴离子交换树脂与大孔吸附树脂联用对罗汉果甜苷精制并充分脱色。大孔吸附树脂经充分水洗至流出液澄清透明，可以将不被树脂吸附的物质基本完全洗出，从而实现了对罗汉果甜苷的脱盐，显著改善了罗汉果甜苷的滋味口感。MCI树脂对罗汉果甜苷中的苦味成分具有专一选择性吸附，而对罗汉果甜苷吸附较小，可以通过收集流出液和一定浓度的醇水解吸液而得到滋味口感纯正的罗汉果甜苷。罗汉果在种植过程中施用过农药，在罗汉果甜苷的提取分离过程中使用了离子交换树脂和大孔吸附树脂就会存在有农残和塑化剂残留，这两类有害物质残留为脂溶性即油溶性，可以被热的植物油基本完全溶解，而植物油和水不互溶，通过分分层即可除去。罗汉果甜苷虽经树脂纯化，但有时会存在微量杂质而引起高浓度水溶液具有后沉淀，因此，通过将其浓缩至一定浓度再用陶瓷膜澄清即可去除，从而制备得到高品质的V50纯味罗汉果甜苷。

经离子交换树脂和大孔吸附树脂两级分离纯化，葡萄糖、果糖、蔗糖等还原糖随着大孔吸附树脂的进料流出液以及水洗柱液流出，如前所述，经阴离子交换树脂分离罗汉果酚酸后的流出液呈弱碱性，并含有离子盐等杂质，不仅影响罗汉果浓缩汁(糖浆)的滋味口感，也影响溶液的稳定性和澄清度。阳离子交换树脂可以交换吸附阴离子交换树脂所产生的离子盐类，并可调节流出液的pH，使溶液恢复原有的平衡，因此，可以通过阳离子交换树脂还原溶液。罗汉果浓缩汁(糖浆)中仍然存在农残和塑化剂等残留，且由于浓缩汁糖度较高而具有一定粘稠性，因此，可以在一定浓度下通过脱农残专用树脂，并与植物油萃取联用以去除农残。塑化剂为具有苯环的一类物质，具有较大的空间位阻而被一定分子量的超滤膜截留，而果糖等还原糖可以通过，因此，在植物油萃取农残和塑化剂的基础上，通过膜分离进一步去除塑化剂残留。与果糖等还原糖伴随的还有部分产生沉淀和后沉淀的物质，在常温以及低浓度条件下不易析出，因此，通过分步沉淀，在不同固形物含量和温度进行陶瓷膜澄清，可以完全去除这类后沉淀物质。过去对罗汉果浓缩汁(糖浆)的灭菌主要是热灭菌，由于美拉德反应而引起浓缩汁的颜色加深，故需要在灭菌前进行深度脱色，并尽可能去除蛋白和氨基酸类物质，但脉冲电场灭菌作为一种非热处理技术，可以实现在常温下的高效灭菌，对罗汉果浓缩汁(糖浆)的颜色几无改变，因此，通过脉冲电场灭菌技术，结合之前离子交换树脂的脱色，可以得到颜色极浅的高品质罗汉果浓缩汁(糖浆)。

罗汉果酚酸在本申请的阴离子交换树脂步骤被交换吸附而与罗汉果甜苷、果糖等还原糖分离，通过水洗离子树脂柱并用含水醇解吸即可实现罗汉果酚酸的富集，而在解吸之前的含水醇中加入适量酸，有利于罗汉果酚酸及时转变成游离态而提高稳定性。酚酸专用吸附树脂对罗汉果酚酸具有专一选择性吸附，而对其他类物质吸附很少，通过阴离子交换树脂以及酚酸专用树脂的联用，可以制备得到高纯度罗汉果酚酸。通过植物油热萃取去除农残和塑化剂等有害物质，通过一定浓度的陶瓷膜澄清去除溶液的后沉淀，可以制备得到高品质罗汉果酚酸。

罗汉果甜苷甜度是蔗糖的256～344倍，甜度过高而不宜直接使用；罗汉果酚酸具有多种生物活性，是罗汉果生物活性的主要物质；赤藓糖醇是一种优良的甜味填充剂，可以对罗汉果甜苷的甜度进行稀释。本申请制备所得罗汉果甜苷可与罗汉果酚酸一起作为罗汉果甜味和生物活性的代表，再与赤藓糖醇复配，可制备滋味口感、甜度倍数、甜味持续时间与蔗糖相当并具有罗汉果生物活性的原味罗汉果糖；本申请制备所得罗汉果甜苷可与赤藓糖醇复配，可制备滋味口感、甜度倍数、甜味持续时间与蔗糖相当的罗汉果零卡糖。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明提供了一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)、罗汉果酚酸和罗汉果糖的方法。以新鲜成熟罗汉果为原料，经脉冲电场前处理、低温提取、过滤澄清、阴离子树脂分离、离子树脂流出液再经吸附树脂纯化、MCI柱层析、植物油萃取脱塑化剂、低温澄清等步骤制备V50纯味罗汉果甜苷；吸附树脂流出液再经脱盐、树脂脱农残、萃取、膜分离塑化剂、分步澄清、脉冲电场灭菌等制备罗汉果浓缩汁(糖浆)；离子树脂解吸液经酚酸专用树脂精制、萃取脱塑化剂、澄清等步骤制备罗汉果酚酸。最后将罗汉果甜苷与罗汉果酚酸，或罗汉果甜苷，分别与赤藓糖醇复配制备罗汉果糖。本申请实现了罗汉果的综合利用，形成了一套完整的罗汉果生物活性成分提取分离和终端应用产品的精深加工技术体系，涵盖了现阶段罗汉果的2个主要提取物品种以及1类终端应用品种，具有工业实用性。

(2)本发明提供了一种罗汉果甜苷、罗汉果浓缩汁(糖浆)、罗汉果酚酸和罗汉果糖。罗汉果甜苷为纯味罗汉果甜苷，其中罗汉果苷V含量45～62％，类白色粉末，农残和塑化剂残留符合国标，10％水溶液澄清透明无浑浊和沉淀，无入口微苦涩味。所述罗汉果浓缩汁(糖浆)糖度为60～70Brix，果糖15～25％、葡萄糖15～25％、蔗糖5～12％，单糖和双糖总量38～52％。所述罗汉果酚酸中酚酸含量80～90％。所述罗汉果糖包括原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖，甜味持续时间≤15秒，罗汉果苷V含量0.1～3.0％，赤藓糖醇含量70.0～～99.9％。

(3)本发明将脉冲电场技术应用于罗汉果提取分离精深加工。提供了一种常温至低温高效提取罗汉果生物活性成分的方法，即通过脉冲电场对罗汉果碎料进行前处理，破坏细胞结构，促进罗汉果甜苷等生物活性成分的溶出，并显著降低了罗汉果中果糖等还原糖与蛋白质等氨基类物质的美拉德反应，使罗汉果甜苷和罗汉果浓缩汁(糖浆)易于脱色，无需再经过复杂的脱色步骤和程序，也进一步提高了产品收率。用脉冲电场对罗汉果浓缩汁(糖浆)灭菌，避免了浓缩汁在受热条件下发生的美拉德反应，在保持浅色色泽的前提下也保持了浓缩汁的风味和营养成分，与本申请的脱色技术联用，通过简单方法得到高品质罗汉果脱色浓缩汁。

(4)本发明提供了一个新的罗汉果提取物品种-罗汉果酚酸。罗汉果酚酸作为罗汉果生物活性成分的代表，具有罗汉果原有的生物活性，并可与罗汉果甜苷搭配，制备原味罗汉果糖，从而使罗汉果的甜味和生物活性作用得到充分发挥。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进行进一步的说明。

本发明实施例所使用的鲜罗汉果，购于湖南省怀化市靖州县，罗汉果苷V含量0.47％。

所使用纯化水为生产车间用二级纯水设备制备，所使用的阴离子交换树脂、大孔吸附树脂、MCI柱填料、阳离子交换树脂、脱农残专用树脂、多酚吸附专用大孔树脂、食用植物油以及其他原辅材料，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。

若无特别说明，本发明实施例中出现的“％”均指质量百分比。

本发明实施例中，罗汉果苷V含量用高效液相色谱法(HPLC)测定；葡萄糖、果糖、蔗糖根据《中国药典》2020版“蜂蜜”项下用高效液相色谱法配示差折光检测器检测；罗汉果酚酸用紫外-可见分光光度法(UV)采用(770nm，福林法)测定；罗汉果糖的滋味口感、甜度倍数、甜味持续时间用感观测定。

实施例1

(1)破碎、脉冲电场前处理。取5000kg新鲜成熟的罗汉果，用鲜果破碎机破碎，保持破壳但不碎籽状态，加4500L自来水浸过碎料表面，用0.15kv/cm的脉冲电场处理25次，至果肉组织结构疏松。

(2)低温提取。在13℃对经前处理的罗汉果碎料进行连续逆流提取：提取槽分2节，共加水9000L，其中第一节4500L，第二节4500L；提取运行2.5h。提取完后过药渣挤压过滤器，收集流出液，得13000L提取液。

(3)过滤澄清。提取液先过碟式离心机，离心液再过材质为氧化锆、孔径500nm的陶瓷膜成套设备，进完料后，加500L纯化水洗陶瓷膜上游液，收集透过液，得13000澄清透明的陶瓷膜清液。

(4)离子树脂分离。预先在层析柱内装750kg型号D900的大孔弱碱性阴离子交换树脂并用酸碱处理好待用，将13000L陶瓷膜清液进树脂柱，进完料后，用3000L纯化水洗树脂柱，离子树脂流出液和解吸液分别按ⅠA和ⅠB处理：

ⅠA.离子树脂流出液制备罗汉果甜苷。

①吸附树脂精制。预先在层析柱内装1200kg型号AB-8的大吸附树脂并用含水醇、酸碱处理好待用，将离子树脂柱的进料流出液和水洗液共约16000L依次、连续进树脂柱，进完料后用4000L纯化水洗树脂柱至流出液澄清透明接近无色，然后用2400L浓度65％的乙醇解吸，进完解吸乙醇后，再进1000L纯化水洗脱层析柱内乙醇，收集乙醇解吸液和水洗醇液，得3300L解吸液。

②MCI柱层析。将3300L吸附树脂解吸液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至800L，固形物含量5.1％。预先在树脂柱内装GEL CHP20SS树脂800kg并用含水醇处理好待用，将浓缩液过MCI柱，收集进料流出液；再用1200L浓度42％乙醇解吸，进完解吸乙醇后，再进500L纯化水洗脱层析柱内乙醇，收集解吸液，得1700L解吸液。将解吸液浓缩回收乙醇后与流出液合并，得MCI柱精制液1800L。

③萃取脱塑化剂。浓缩MCI柱精制液至370L，固形物含量10.72％，加入300L食用植物油，持续搅拌，加热至69℃，保温，逆流萃取，静置分层，收集水相。

④低温澄清。将水相冷藏至体系温度1℃，过材质为氧化锆、孔径200nm的陶瓷膜成套设备，收集膜透过液，进完料后，加100L纯化水洗上游液，得澄清透明的陶瓷膜清液。

⑤干燥。浓缩陶瓷膜清液至固形物含量24.6％，在进风温度180℃、出风温度85℃喷雾干燥，得V50纯味罗汉果甜苷38.9kg。

Ⅱ.吸附树脂流出液制备罗汉果浓缩汁(糖浆)。

脱盐。预先在层析柱内装600kg型号001×16的大孔强酸性阳离子交换树脂并用酸碱处理好待用，收集步骤ⅠA吸附树脂柱的进料流出液(16000L)和初期水洗液(步骤IA大孔吸附树脂1.5BV为初期水洗液1800L，用反渗透膜浓缩得到8000L浓缩液，进阳离子树脂柱，进完料后再进1800L纯化水洗至流出液pH为5.8，合并浓缩液和水洗液得脱盐液。

②树脂脱农残。预先在层析柱内装LSA-900B树脂500kg并用含水醇、酸碱处理好待用，将9800L脱盐液进树脂柱，进完料后用1500L纯化水洗柱，收集进料流出液和水洗液，得脱农残液11200L。

③萃取。在温度62℃三效真空减压浓缩脱农残液至3500L，固形物含量11.4％，加入2000L食用植物油，持续搅拌，加热至65℃，保温，逆流萃取，静置分层，收集水相。

④膜分离塑化剂。将水相3500L进截留分子量2KD的有机膜成套设备，收集膜透过液；当上游液体积至1000L左右时，往上游液加1000L纯化水，继续过膜，收集膜透过液；当上游液体积至400L左右时，往上游液加400L纯化水，继续过膜，至上游液体积200L，收集水洗透过液，与之前的膜透过液合并，得脱塑化剂液4700L。

⑤分步澄清。经检测，脱塑化剂液的固形物含量8.1％，冷却至室温，过材质为氧化锆、孔径500nm的陶瓷膜成套设备，收集膜透过液；再将陶瓷膜透过液浓缩至2500L，固形物含量15.1％，冷藏至体系温度2℃，使沉淀充分析出，再过材质为氧化锆、孔径200nm的陶瓷膜成套设备，收集膜透过液，得澄清透明的陶瓷膜清液。

⑥浓缩。将陶瓷膜清液在温度62℃、真空度-0.085MPa真空减压浓缩至糖度67Brix，得557.8kg浓缩液。

⑦脉冲电场灭菌。用45kv/cm的脉冲电场处理500次，对浓缩液灭菌，得罗汉果浓缩汁(糖浆)557.8kg。

ⅠB.离子树脂解吸液制备罗汉果酚酸。

①解吸。承前所述，750kg型号D900的大孔弱碱性阴离子树脂柱进完料后用3000L纯化水洗柱，至流出液pH为8.2，然后用1500L盐酸浓度0.4％、乙醇浓度65％的含水酸醇解吸，收集解吸液；进完解吸溶剂后，再进600L纯化水洗酸醇，收集洗柱液。合并解吸液和洗柱液，得2000L解吸液。

②专用树脂精制。在温度65℃、真空度-0.085MPa真空减压回收解吸液中的乙醇至无醇味，加纯化水调节固形物含量5.4％，得860L。预先在层析柱内装1000kg型号LX-8酚酸专用大孔吸附树脂并用含水醇、酸碱处理好待用，将860L解吸浓缩液进树脂柱，进完料后用3000L纯化水洗柱至流出液澄清透明接近无色，然后用2000L浓度65％的乙醇解吸，收集解吸液；再进600L纯化水洗柱内乙醇，收集流出液。合并解吸液和流出液，得2500L解吸液。

③萃取脱塑化剂。浓缩解吸液至360L，固形物含量11.1％，加入200L食用植物油，持续搅拌，加热至70℃，保温，逆流萃取，静置分层，收集水相。

④澄清。冷却水相至室温，过材质为氧化锆，孔径500nm的陶瓷膜成套设备，收集膜透过液，得澄清透明的陶瓷膜清液。

⑤干燥。浓缩陶瓷膜清液至固形物含量22.6％，在进风温度185℃、出风温度82℃喷雾干燥，得罗汉果酚酸38.7kg。

(5)制备罗汉果糖。

Ⅰ.原味罗汉果糖。

取步骤(4)ⅠA的V50纯味罗汉果甜苷0.95kg、步骤ⅠB的罗汉果酚酸10.2kg，加110kg纯化水溶解，固形物含量9.2％，作为粘合剂。将88.85kg赤藓糖醇投入流化床，温度75℃、真空度-0.085MPa，以45kg/h的速度均匀喷入粘合剂，干燥，得原味罗汉果糖98.5kg。

Ⅱ.罗汉果零卡糖。

取步骤(4)ⅠA的V50纯味罗汉果甜苷0.48kg，加8kg纯化水溶解，固形物含量5.66％，作为粘合剂。将99.52kg赤藓糖醇投入流化床，温度75℃、真空度-0.085MPa，以3kg/h的速度均匀喷入粘合剂，干燥，得原味罗汉果糖99.3kg。

经检测，

罗汉果甜苷V50为纯味罗汉果甜苷，其中罗汉果苷V含量52.93wt％，牛奶白色粉末，未检出农残和塑化剂，10％水溶液澄清透明无浑浊和沉淀，无入口微苦涩味。

罗汉果浓缩汁(糖浆)糖度为67Brix，果糖20.1％、葡萄糖18.4％、蔗糖8.27％，单糖和双糖总量46.77％。

罗汉果酚酸中酚酸含量86.31wt％。

原味罗汉果糖甜度约为蔗糖2倍，甜味持续时间15.3秒，罗汉果苷V含量0.50wt％，赤藓糖醇含量88.85wt％。

罗汉果零卡糖，甜度约为蔗糖1倍，甜味持续时间12.5秒，罗汉果苷V含量0.25wt％，赤藓糖醇含量99.52wt％。

实施例2

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤(2)中，在10℃对经前处理的罗汉果碎料进行连续逆流提取。最终得到V50纯味罗汉果甜苷33.2kg，其中罗汉果苷V含量51.33wt％，颜色乳白色，未检出农残和塑化剂，10％水溶液澄清透明无浑浊和沉淀，无入口微苦涩味。

按照实施例1中相同条件和原料配比将实施例2中所得V50罗汉果甜苷和罗汉果酸粉制备为原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖。

实施例3

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤(2)中，在20℃对经前处理的罗汉果碎料进行连续逆流提取。最终得到V50纯味罗汉果甜苷35.1kg，其中罗汉果苷V含量52.16wt％，颜色略微发黄，未检出农残和塑化剂，10％水溶液澄略显黄色，无入口微苦涩味。

按照实施例1中相同条件和原料配比将实施例3中所得V50罗汉果甜苷和罗汉果酸粉制备为原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖。

实施例4

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤(2)中，在30℃对经前处理的罗汉果碎料进行连续逆流提取。最终得到V50纯味罗汉果甜苷34.7kg，其中罗汉果苷V含量50.58wt％，颜色微黄白色，未检出农残和塑化剂，10％水溶液澄淡黄色，无入口微苦涩味，有。

按照实施例1中相同条件和原料配比将实施例4中所得V50罗汉果甜苷和罗汉果酸粉制备为原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖。

实施例5

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤IA的②MCI柱层析中，使用1200L浓度50％乙醇解吸。最终得到V50纯味罗汉果甜苷39.0kg，其中罗汉果苷V含量52.70wt％。

按照实施例1中相同条件和原料配比将实施例5中所得V50罗汉果甜苷和罗汉果酸粉制备为原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖。

实施例6

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤IA的②MCI柱层析中，使用1200L浓度60％乙醇解吸。最终得到V50纯味罗汉果甜苷39.4kg，其中罗汉果苷V含量50.61wt％。

按照实施例1中相同条件和原料配比将实施例6中所得V50罗汉果甜苷和罗汉果酸粉制备为原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖。

实施例7

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤IA的②MCI柱层析中，使用1200L浓度65％乙醇解吸。最终得到V50纯味罗汉果甜苷39.4kg，其中罗汉果苷V含量50.61wt％。

实施例8

其他操作和条件和实施例1相同，区别在于步骤ⅠB.离子树脂解吸液制备罗汉果酚酸的步骤①解吸中。解吸液为1500L乙醇浓度65％的醇水溶液解吸，即不含有0.4％的盐酸。最终得到罗汉果酚酸29.5kg，酚酸含量85.29wt％。

将上述实施例所得原味罗汉果糖和罗汉果零卡糖按照以下方法进行感官测试：

1.感官分析人员的筛选与培训

根据GB/T 16291.2-2010的规定来筛选感官评定人员，经过气味，口味敏感性培训后，筛选感官评价人员，组成感官评定小组。

2.口感主观评价：

感官分析人员在评定实验开始前1h内限制饮食，尤其是限制食用能严重影响嗅觉和味觉的食物。从20名收试者中替挑选12名感官分析人员(男女各半)进行本发明减糖甜味料的感官评定。针对甜味剂的溶液的气味和口感进行综合打分评价，分值为1分至10分。

口感测试具体是将实施例的罗汉果糖和水一起配制为和3wt％蔗糖溶液相同甜度的溶液后进行测试，取10mL待评定溶液于一次性纸杯中，由感官评定人员含于口中，停留数秒吐出，5分为满分，口感最好，评定时间间隔为20min，评定结果去掉以评价最高分和最低分，取剩余10名评定人员打分的平均值。

气味测试请评定人员在距鼻约3-5cm直接进行气味评价，评定时间间隔为20min，5分为满分，气味测试感官最佳，评定结果去掉最高分和最低分，取剩余10名评定人员打分的平均值。结果如下表1所示：

表1

可见，按照本发明方法制备得到罗汉果苷V50和罗汉果酸酚后，制成的罗汉果糖口感有明显提升。可能的原因在于1、去除了影响罗汉果甜苷滋味口感的已知物质，如苦味皂苷类成分罗汉果苷IIE等；2、去除了离子树脂脱色时由于离子交换可能引入的未知杂质；3、罗汉果甜苷与罗汉果酚酸在滋味口感方面的优势互补，协同改善口感。

Claims

1.一种用鲜罗汉果制备罗汉果甜苷、罗汉果酚酸、罗汉果浓缩汁的方法，包括以下步骤：

(S4)合并步骤(S1)的阴离子树脂解吸液和水洗液2，浓缩，上酚酸专用吸附树脂，水洗，含水醇3解吸，解吸液浓缩，加入食用植物油，加热搅拌，逆流萃取，静置分层，收集水相，过滤，浓缩，喷雾干燥得罗汉果酚酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤(S5)的制备罗汉果糖的步骤：

(S5A)制备原味罗汉果糖：

和/或

(S5B)制备罗汉果零卡糖：

取步骤(S2)的罗汉果甜苷V50，加水溶解，作为粘合剂，将赤藓糖醇投入流化床，均匀喷入粘合剂，干燥，得罗汉果零卡糖。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S1)中，前处理脉冲电场强度为0.5～2.0kv/cm，次数为10～30。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S1)中，所述低温是3～30℃，优选为10-20℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S1)中，所述含水和酸的醇溶液是醇浓度50～75wt％，无机酸浓度0.3～1wt％的醇水溶液。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S2)中，所述含水醇1的醇浓度为50-70w％，含水醇2的醇浓度为35-50wt％；含水醇1的体积用量是大孔吸附树脂质量的1.5-3倍，单位L/kg，含水醇2的体积用量是MCI树脂质量的1-2.5倍，单位L/kg。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S2)中，所述冷藏是在1-5℃条件下冷藏。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S3)中，所述第一次浓缩是浓缩至固形物含量9～12％；所述第二次浓缩是浓缩至固形物含量4～10％；所述第三次浓缩是浓缩至固形物含量12～20％。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(S2)、(S3)、(S4)中，食用植物油的加入量是浓缩液体积的0.4～1.5倍，加入食用植物油后，加热的温度为60-75℃。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(S5A)中罗汉果甜苷V50和罗汉果酚酸的质量比为1：0.5～15，优选1:6-12。