CN113827657A

CN113827657A - 一种治疗时疫感冒（气阴两虚证）的中药组合物制剂与应用

Info

Publication number: CN113827657A
Application number: CN202110764642.9A
Authority: CN
Inventors: 温伟波; 罗艳
Original assignee: Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2021-07-07
Filing date: 2021-07-07
Publication date: 2021-12-24

Abstract

本发明涉及一种具有治疗时疫感冒的健体抗疫中药合剂、制备方法及用途，属中药复方制剂领域。健体抗疫中药合剂包括以下重量份的中药组分：黄芪9‑12份、炒白术7‑9份、防风6‑8份、北沙参8‑11份、麦冬6‑8份、灵芝7‑9份、桔梗8‑10份、连翘8‑12份、紫苏叶7‑11份、藿香7‑10份、金银花8‑11份、甘草4‑6份；全方共凑益气养阴固表，芳香辟秽解毒之功效。适用于平素容易感冒，症见咳嗽咽痛，气虚乏力，以及健康人群的流感预防，增加机体免疫力。

Description

一种治疗时疫感冒（气阴两虚证）的中药组合物制剂与应用

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种具有治疗时疫感冒的健体抗疫中药合剂(以下简称：健体抗疫合剂)、制备方法及用途，属中药复方制剂领域。

背景技术

随着社会环境、人类生产生活方式的变化，国内外人员流动的增加以及疾病流行谱的变化，各种新发和再现传染病仍不断出现，且在全球传播和流行，新发突发传染病仍是严重威胁人类健康的重要疾病。近年来国内外新发突发传染病疫情日益严峻，甲型H1N1流感、H7N9禽流感、埃博拉病毒病和中东呼吸综合征等一系列新发突发传染病严重危害社会稳定，威胁民众健康，特别是近期新型冠状病毒肺炎暴发更是给疫情防控带来前所未有的挑战。新发突发传染病暴发速度快、传播范围广，需要研究者尽早启动干预类研究，以便为临床治疗提供依据。此次的新冠病毒，全球科学家对其认知都有所不足，虽然我国以最短的时间分离出冠状病毒，研制出诊断试剂，不断更新诊疗方案，在研发和救治能力上体现出一定优势，但也暴露出一些短板。在疫情初期，由于临床诊疗的紧迫性、对疾病认知的不充分、研究环境的特殊性、社会环境变化的不确定性和研究团队较低的顺应性等问题，导致临床研究方案关键要素的不确定性较强，临床研究组织实施难度较大。

通过对新型冠状病毒肺炎、SARS、H5N1禽流感和H7N9禽流感诊疗经验的总结，发现中医药在阻断疾病进展、缩短病程、提高疗效、促进患者康复等方面显示出较大的优势。中医药可以从多靶位、多机制及多环节综合治疗病毒性呼吸道疾病，调节机体免疫功能，发挥抗病毒效应，从而达到防治病毒性感染的作用。

目前，多数中医采取的是口服中药汤剂防治中医疫病(时疫感冒)，但汤剂存在煎煮费时费力、剂量大、不易携带、不能久贮等缺点，影响了患者的用药依从性，本专利适应临床需要，开展符合中医疫病(时疫感冒)发病特点且能够有效体现中医辨证论治特点的中药防治制剂的发明。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术不足，提供一种健体抗疫中药合剂，用于时疫感冒(气阴两虚证)，咳嗽咽痛，气虚乏力的症候者以及健康人群的流感预防。

本申请一种具有治疗时疫感冒的健体抗疫中药合剂，其特征在于合剂包括以下重量份的中药组分：黄芪9-12份、炒白术7-9份、防风6-8份、北沙参8-11份、麦冬6-8份、灵芝7-9份、桔梗8-10份、连翘8-12份、紫苏叶7-11份、藿香7-10份、金银花8-11份、甘草4-6份。

本发明具体采用以下技术方案：以制作1000ml合剂计量，制备方法包括如下步骤：

(1)取原材料黄芪10份、炒白术8份、防风8份、北沙参10份、麦冬8份、灵芝 8份、桔梗8份、连翘8份、紫苏叶8份、藿香8份、金银花8份、甘草6份。

(2)第一次加水至药材10倍量，常压煮沸60分钟，药液以60目滤网滤过；

第二次加水至药材8倍量，常压煮沸40分钟，60目滤网滤过；

第三次加水至药材6倍量，常压煮沸30分钟，60目滤网滤过；

将上述三次滤液混合之后进行减压浓缩至约900ml，400目滤网滤过；

再添加适量(100ml)纯化水至1000ml，混匀5分钟，半成品检验合格后分装，饱和水蒸气湿热灭菌；饱和水蒸气湿热灭菌温度110℃～115℃，压力>68.6KPa，灭菌时间 30min，终点F₀＝8～10，即得合剂饮品，所述减压浓缩混合滤液的减压温度：50℃～80℃，真空度：0.04MPa～0.10MPa。

本发明一种健体抗疫中药合剂作为制备时疫感冒药物的用途，则一种依据权利要求 1-4任所述健体抗疫中药合剂作为治疗时疫感冒的用途。

本发明各原料的机理如下：

黄芪：味甘，性微温，归脾、肺经，有益气固表的功效，用于用于气虚乏力、久泻脱肛、自汗等。

炒白术：味苦、甘，温，归脾、胃经，有健脾益气的功效，用于脾胃气弱，不思饮食，倦怠少气，虚胀，泄泻，痰饮，头晕，自汗等。

防风：味辛、甘，性微温，归膀胱、肝、脾、肝经，有祛风解表，胜湿止痛的功效，用于外感表证，风疹瘙痒，风湿痹痛等。

北沙参：性微寒，味甘、微苦；归肺经、胃经，有养阴清肺、益胃生津的功效，用治肺热燥咳、劳嗽痰血、热病津伤口渴。

麦冬：味甘、微苦、微寒，归心、肺、胃经，有养阴生津，润肺止咳的功效，用于肺胃阴虚之津少口渴、干咳咯血；心阴不足之心悸易惊及热病后期热伤津液等证。

灵芝：味甘，性平；归心、肺、肝、肾经，有补气安神，止咳平喘，用于1、心神不宁，失眠，惊悸：本品味甘性平，入心经，能补心血、益心气、安心神，故可用治气血不足、心神失养所致心神不宁、失眠、惊悸、多梦、健忘、体倦神疲、食少等症。2、咳喘痰多：本品味甘能补，性平偏温，入肺经，补益肺气，温肺化痰，止咳平喘，常可治痰饮证，见形寒咳嗽、痰多气喘者，尤其对痰湿型或虚寒型疗效较好。3、虚劳证：本品有补养气血作用，故常可用治虚劳短气、不思饮食、手足逆冷、或烦躁口干等症。

桔梗：味苦、辛，性平；归肺经；有宣肺，利咽，祛痰，排脓的功效，用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛音哑，肺痈吐脓。

连翘：味苦、微寒；归肺、心、小肠经；有清热解毒，消肿散结的功效。用于痈疽，瘰疠，乳痈，丹毒，风热感冒，温病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋尿闭。

紫苏叶：味辛，温；归肺、脾经；有解表散寒，行气和胃的功效，用于风寒感冒，咳嗽呕恶。

藿香：味辛，性温；归脾、胃、肺经；有化湿醒脾，辟秽和中，解暑，发表的功效，用于湿阻脾胃、脘腹胀满、湿温初起、呕吐、泄泻、暑湿、发热恶寒、恶寒发热、胸脘满闷等症。

金银花：性甘、寒，归肺、胃经；有清热解毒，消炎退肿的功效，主治外感风热或温病发热，中暑，热毒血痢，痈肿疔疮，喉痹，多种感染性疾病。

甘草：味甘，性平，归心、肺、脾、胃经；有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功效。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。

本申请的发明人依据时疫感冒发病机理，发病后以气阴两虚证为其常见证型等情况，拟定的“健体抗疫汤/合剂”。本申请全方由黄芪、炒白术、防风、北沙参、麦冬、灵芝、桔梗、连翘、紫苏叶、藿香、金银花、甘草等共12味药物组成。本发明申请药(物全)方中：君药为：黄芪益气固表，白术健脾，防风散风祛邪，该方补中有疏，散中寓补。臣药为：北沙参、麦冬、灵芝三味药具有益气养阴之效，益气而不燥，养阴而不腻；佐药：桔梗、金银花、连翘、苏叶、藿香、五味药有芳香化浊，辟秽解毒，祛风化湿之功效；使药为：甘草功效为补气健脾、祛痰止咳、清热解毒、调和药性。本申请全方共凑益气养阴固表，芳香辟秽解毒之功效。

本申请全方用于时疫感冒(气阴两虚证)，用于平素容易感冒，症见咳嗽咽痛，气虚乏力的症候者，以及健康人群的流感预防，增加机体免疫力，具有益气养阴固表，芳香辟秽解毒之功效。

附图说明

图1本发明复方健体抗疫中药合剂醇提组的UPLC-DAD-MS分析结果。

图2本发明健体抗疫合剂水相。

图3本发明健体抗疫合剂石油醚相。

图4本发明健体抗疫合剂乙酸乙酯相。

图5本发明健体抗疫合剂醇提物。

图6本发明健体抗疫合剂原液。

具体实施方式

下面结合附图以及具体的实施例对本发明的具体实施方式进行更加详细的说明。

处方来源：云南省中医医院院长、云南省名中医温伟波教授用于防治新型冠状病毒肺炎的处方。健体抗疫中药合剂系发明人根据时疫感冒发病机理，发病后以气阴两虚证为其常见证型等情况拟定的“健体抗疫汤”。全方由黄芪、炒白术、防风、北沙参、麦冬、灵芝、桔梗、连翘、紫苏叶、藿香、金银花、甘草等共12味药物组成。

处方：健体抗疫合剂中包括以下重量份的中药组分：所述健体抗疫合剂的制备方法包括如下步骤：

(1)取原材料黄芪10份、炒白术8份、防风8份、北沙参10份、麦冬8份、灵芝8份、桔梗8份、连翘8份、紫苏叶8份、藿香8份、金银花8份、甘草6份。

(2)第一次加水至药材10倍量，冷水浸泡30分钟，常压煮沸60分钟，药液以60目滤网滤过；第二次加水至药材8倍量，常压煮沸40分钟，60目滤网滤过；第三次加水至药材6 倍量，常压煮沸30分钟，60目滤网滤过；上述3次滤液减压浓缩(温度：50℃～80℃，真空度：0.04MPa～0.10MPa)至约900ml，400目滤网滤过。添加适量纯化水至1000ml，混匀 5分钟，半成品检验合格后分装，饱和水蒸气湿热灭菌(参数：温度110℃～115℃，压力>68.6 KPa，灭菌时间30min，终点F0＝8～10)，即得健体抗疫中药合剂饮品。

本申请发明药(物全)方中：黄芪益气固表，白术健脾，防风散风祛邪，该方补中有疏，散中寓补。北沙参、麦冬、灵芝三味药具有益气养阴之效，益气而不燥，养阴而不腻；桔梗、金银花、连翘、苏叶、藿香、五味药有芳香化浊，辟秽解毒，祛风化湿之功效；甘草功效为补气健脾、祛痰止咳、清热解毒、调和药性。全方共凑益气养阴固表，芳香辟秽解毒之功效。临床研究发现，健体抗疫合剂可减轻患者发热、咳嗽、乏力、全身酸痛、咽痛、鼻塞、流涕的症状，并能促进C反应蛋白、PTs、淋巴细胞绝对值(LY)恢复正常，具有良好的安全性。

新型冠状病毒肺炎属于中医疫病范畴，病因为感受以疫戾之气，病位在肺，基本病机特点为“湿、热、毒、瘀”。扶正祛邪是中医治疗疾病的指导原则，中医认为人们之所以会感染疾病就是因为体内的正气不足，邪气才会乘虚而入，或者体内邪气打败正气。所以，中医认为治疗疾病就是要扶正祛邪，帮助改变体内正邪的势力对比，帮助正气增加，祛除邪气使其减少或消失。扶正就是使用扶助正气的药物，或其他疗法，并配合适当的营养和功能锻炼等辅助方法，以增强体质，提高机体的抗病力，从而驱逐邪气，以达到战胜疾病，恢复健康的目的。祛邪是消除病邪以愈病的治疗原则，就是利用驱除邪气的药物，或其他疗法，以祛除病邪，达到邪去正复，恢复健康的目的。所谓“实者泻之”就是这一原则的具体应用。

本申请全方用于时疫感冒(气阴两虚证)，用于平素容易感冒，症见咳嗽咽痛，气虚乏力，以及健康人群的流感预防，增加机体免疫力；新型冠状病毒2019-nCoV感染轻中症及疑似患者见上述证候者。

临床观察发现，健体抗疫合剂可有效减轻时疫感冒患者发热身痛，咽痛咳嗽，腹胀痞满，纳差乏力等症状；我国新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)暴发时，健体抗疫合剂同样取得了良好的临床疗效。

实施例1：健体抗疫合剂可减轻患者发热、咳嗽、乏力、全身酸痛、咽痛、鼻塞、流涕的症状，并能促进C反应蛋白、PTs、淋巴细胞绝对值(LY)恢复正常，具有良好的安全性。

1、试验目的

适应临床需要，开展符合新型冠状病毒肺炎发病特点且能够有效体现中医辩证论治特点的中药防治制剂(健体抗疫方)的临床疗效观察研究。

2、观察指标

2.1比较健体抗疫方治疗前后患者临床主要症状的变化情况。

2.2进行健体抗疫方治疗后疾病疗效评价和中医疗效评价。

2.3比较健体抗疫方治疗前后患者C反应蛋白、PTs的变化情况。

2.4安全性指标：血常规、肝肾功。

3试验依据

3.1《***、国家中医药管理局、国家食品药品监督管理局关于印发加强医疗机构中药制剂管理意见的通知》；

3.2《中药新药临床研究的技术要求》；

3.3《中药新药临床研究指导原则》；

3.4《云南省医疗机构制剂注册管理实施细则》；

3.5《云南省医疗机构制剂研究技术指导原则(中药、民族药)(试行)》；

3.6《药物临床试验质量管理规范》。

4试验设计

本研究采用自身前后对照研究的方法，收集新型冠状病毒肺炎证属气阴两虚证患者，分析健体抗疫方对新型冠状病毒肺炎患者的临床疗效及安全性。

5研究对象

5.1伦理学审查

本研究内容及方案经云南省中医医院伦理委员会审查通过，每例患者在入组前由临床医生详细告知项目研究内容，患者需自愿参加本试验并签署知情同意书。

5.2受试者选择

5.2.1西医诊断标准

参照《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第八版)》的诊断标准。

5.2.2中医证候诊断标准

参考《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第八版)》和《云南省新型冠状病毒肺炎中医药防治方案(试行第三版)》所列证候标准进行辩证。

5.2.3纳入标准

符合《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第八版)》的诊断标准中新型冠状病毒肺炎的诊断标准者。

符合中医气阴两虚证者。

年龄不限，男女均可。

自愿参加研究，签署知情同意书，可规律随访。

5.2.4排除标准

正参加其他临床试验者。

研究者认为不适宜参加试验的其他情况。

5.2.5脱落标准

因出现严重不良反应而不能继续接受治疗者；

试验过程中患者病情进展较快，必须更改治疗方案的患者；

违背试验方案或服用试验禁忌药物者或同类药物患者；

无论基于何种原因，受试者本身不愿意或不可能继续试验，向临床医生提出退出中止试验的受试者；

受试者不再接受临床用药及检测而失访者；

受试者无论何时，因何原因退出，只要没有完成方案所规定的治疗周期，均视为脱失病例。

6研究方法

6.1治疗方案

使用健体抗疫合剂进行治疗每天3次，每次1瓶，疗程根据患者实际服药情况计算。

6.2药物管理

药物储存：药品存放在统一公共药库，其贮存场所确保温度、光线、温度适宜。药物保管员应随时登记，每月进行一次清算核对，且将填写好的药品使用情况表按预期上报课题负责人。

药物分发：根据工作进程，药物保管员依据课题负责人签字的药品领取单到公共药库领取所需的药品，在领取所需药品时，及时在药品分发登记表上签字。

药物运输：当药品管理的工作人员领取药物后，应立即将其运输至项目相关治疗点，交由临床医生，并填写药品交接表。药品在运输过程中，负责人员应当注意妥善保管药物，不能肆意损坏或丢失。

药物发放：临床医生根据课题进展定期定量发放药物给病人，当病人接受到药品，立即填写药物发放登记表，并经过负责人以及患者签字。

填写服药登记卡：在整个治疗过程中，病人整个用药情况(包括起止时间，剂量等)须填写服药登记卡，并且由病人和负责人员一起核对签字之后再交给课题负责人。

6.3观察指标

患者基本情况，临床主要症状频数分布情况，疾病疗效评价，中医疗效评价，实验室指标 (C反应蛋白、PTs)，安全性指标(血常规、肝肾功)。

6.4效评价标准

6.4.1疾病疗效评价标准

临床治愈：新型冠状病毒核酸检测阴性。

6.4.2中医疗效评价标准

中医疗效评价标准，采用证候疗效评定标准，采用尼莫地平法计算。疗效指数(％)＝[(治疗前积分－治疗后积分)/治疗前积分]×100％。(1)临床治愈：主要症状、体征消失或基本消失，疗效指数≥90％；(2)显效：主要症状、体征明显改善，疗效指数为70％～89％；(3)有效：主要症状、体征明显好转，疗效指数为30％～69％；(4)无效：主要症状、体征无明显改善，甚或加重，疗效指数<30％。

6.5不良事件观察

不良事件是指受试患者在签署知情同意书之后接受药物干预的时间内产生的所有预期之外的症状、体征、实验室检查异常或其他非正常的结果。无论异常事件是否和试验用药相关，都归结为不良事件。但如果在试验用药开始前就出现了异常状况，而在使用药物之后，此种异常状况并未增加，则不属于不良事件范畴。实验室检测的结果或者其他项检查的结果都必须具有临床意义，才能称之为不良事件。

研究人员每次进行访视时，均应询问患者是否存在不良事件。在本课题的进行过程中发生的任何不良事件需由工作人员立即对参与患者采取适当的治疗或处理措施，以确保患者的生命安全，并详细记录不良事件发生的地点、时间、患者症状、体征以及工作人员处理方法和预后情况。

7统计学分析

采用SPSS20.0进行统计分析，计数资料以频数、百分率描述，计量资料符合正态分布者，以

表示，不符合正态分布采用中位数(四分位数间距)表示。计量资料采用Kolmogorov-Smirnov方法检验变量是否服从正态性分布；符合正态分布者治疗前后比较采用配对样本t检验；不符合正态分布者，采用非参数统计方法。计数资料采用χ²检验。取P值小于0.05为差异有统计学意义的标准。

8研究结果

8.1患者基本情况

所观察病例中，确诊的86例患者轻型17例(19.77％)、普通型40例(46.51％)、无症状感染者29(33.72％)；男性39例(45.35％)，女性47例(54.65％)；年龄5-68岁；从发病到确诊时间最长14天，最短0天；平均治疗时间20.06±7.71天，最短治疗时间13天，最长治疗时间51天；合并基础疾病者24例。

8.2临床主要症状频数分布情况

服药后患者发热、咳嗽、乏力、全身酸痛、咽痛、鼻塞、流涕的症状较治疗前显著减少，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。见表1。

表1患者治疗前后临床主要症状频数比较频数(百分比)

8.3疗效评价情况

治疗后疾病疗效评价结果为患者临床治愈率100％，总有效率100％；中医疗效评价结果为患者临床治愈率15.12％，显效率84.88％，总有效率100％。见表2。

表2患者治疗后疗效判定n(％)

评价指标	临床治愈	显效	有效	无效	总有效率
						疾病疗效评价	86(100)	0	0	0	86(100)
中医疗效评价	13(15.12)	73(84.88)	0	0	86(100)

8.4实验室指标

患者治疗后C反应蛋白、PTs正常者多于治疗前，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。见表3。

表3患者治疗前后实验室指标比较[Median(IQR)]

8.5安全性指标

8.5.1血常规指标

血常规指标中，患者治疗后淋巴细胞绝对值(LY)正常者多于治疗前，差异有统计学意义(P＜0.01)，其余指标治疗前后差异无统计学意义(P＞0.05)。见表4。

表4患者治疗前后血常规指标比较n(％)

8.5.2肝肾功指标

肝肾功指标中，患者治疗前后差异无统计学意义(P＞0.05)。见表5。

表5患者治疗前后血生化指标比较n(％)

8.6不良反应

观察病例中患者未出现任何不良反应。

9小结

健体抗疫方治疗新型冠状病毒肺炎证属气阴两虚是有效的、安全的。可减轻患者发热、咳嗽、乏力、全身酸痛、咽痛、鼻塞、流涕的症状，并能促进C反应蛋白、PTs、淋巴细胞绝对值(LY)恢复正常，具有良好的安全性。

1.4健体抗疫合剂小鼠急性毒性实验预实验研究未见小鼠中毒及死亡情况

选用昆明小鼠24h内单次灌胃给药，最大给药体积为0.4ml/10g，高、中2个剂量组给药剂量分别为：98g/kg、19.6g/kg，其中高剂量为能用于灌胃的最大浓度乘以最大给药体积的剂量(将1500g原液浓缩至301g)，中剂量是原药液浓度乘以最大给药体积的剂量。观察并记录各小鼠在给药后14d内的死亡情况及中毒表现。结果如下：

高剂量组：共给药11只，其中雄性6只，雌性5只。给药当日，个别动物自主活动略有减少，给药后第4、第5天各死亡一只雌性小鼠。给药后第11天，一只雌性小鼠出现流眼泪、眼睑湿润，闭眼睛，活动迟缓。

中剂量组：共给药4只，其中雄性2只，雌性2只。给药当日，个别动物自主活动略有减少，实验期间其它未见明显异常。

1.5健体抗疫合剂醇提组的UPLC-DAD-MS分析实验

实验结合保留时间和离子流数据，对健体抗疫醇提组以及紫苏叶、金银花、连翘、灵芝、藿香、黄芪和白术7个主要配伍药材的LC-MS数据进行了指认，确定了54个离子峰可能对应的化学成分。发现来自紫苏叶的化学成分以黄酮和苯丙素类为主；来自金银花的成分，除黄酮和苯丙素外，还含有脂肪醇、脂肪酸和芳香衍生物等；来源于连翘的成分涉及环己醇苷、木脂素和三萜；白术中主要含有倍半萜、苯丙素和甾体类成分；灵芝中主要含有三萜类成分；黄芪中以黄酮类成分为主；藿香中则含有倍半萜、苯丙素和黄酮类成分。见表6，图1。

表6中药复方健体抗疫合剂醇提组LC-ESI+-MS保留时间及离子流信息

保留时间(min)；分子离子峰(m/z)；色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18,1.7μm,2.1×100mm；色谱条件:乙腈/水体系, 0-6min 20-60％乙腈/水梯度洗脱，6-8min 40-60％乙腈/水梯度洗脱，8-12min 60-70％乙腈/水梯度洗脱，12-30min 70-100％乙腈/水梯度洗脱，30-31min 100％乙腈等度洗脱；流速：0.2mL/min。

1.6健体抗疫合剂原液、水相、石油醚相、乙酸乙酯相、醇提物具有明显的体外抗甲型 H1N1流感病毒活性

1.6.1样品信息：健体抗疫合剂原液、健体抗疫水相、健体抗疫石油醚相、健体抗疫乙酸乙酯相、健体抗疫正丁醇相；健体抗疫合剂原液、健体抗疫水相、健体抗疫石油醚相、健体抗疫乙酸乙酯相、健体抗疫正丁醇相。

1.6.2受试样品溶液配制：原液过滤后使用，健体抗疫原液浓度为490mg/ml，健体抗疫合剂原液为600mg/ml；水相用生理盐水溶，其他相用DMSO溶，终浓度均为200mg/ml。

1.6.3实验方法：取对数生长期的MDCK细胞以8×10⁴个/孔接种于96孔板中，24小时后予以药物和A/Puerto Rico/8/34病毒处理，不做任何处理的孔为空白对照组，奥司他韦处理组为阳性对照组。用MTT检测法于490nm处测定其OD值，按如下公式进行数据处理，保护率％＝(加病毒处理实验组OD值-病毒对照组OD值)×100/(空白对照组平均OD值- 病毒对照组OD值)。使用IBM SPSS Statistics 23计算样品的半数有效浓度(EC₅₀)。

1.6.4实验结果(浓度单位为mg/mL)

结果发现健体抗疫合剂原液、水相、石油醚相、乙酸乙酯相、醇提均表现出明显的抗甲型H1N1流感病毒活性。见表7，图2-图6。

表7健体抗疫合剂体外抗甲型H1N1流感病毒活性

化合物

原液

水相

乙酸乙酯

石油醚

正丁醇

醇提

CC50(mg/mL)

＞16

＞51.20

＞0.40

＞0.16

—

＞1.25

EC50(mg/mL)

12.57

15.11

0.11

—

0.530

1.7健体抗疫合剂体外实验可抑制HRT-18/OC43-1558、Huh7/229E冠状病毒增殖

1.7.1体外细胞水平药物筛选：在HRT-18/OC43-1558(感染条件为100TCID50)中用MTT法检测健体抗疫合剂体外对冠状病毒(HRT-18/OC43-1558、Huh7/229E、LLC-MK2/NL63)增殖抑制效果。

1.7.2结果：健体抗疫合剂对HRT-18/OC43-1558、Huh7/229E低毒有效。见表8。

表8药物细胞毒性、病毒抑制活性和选择指数列表

SI＝TC50/IC50：以选择指数SI表示，(SI＝TC50/IC50)。

SI>2表示低毒有效；SI＝1～2表示高毒低效；SI<1表示无效

本申请健体抗疫合剂方在2021年瑞丽市新型冠状病毒肺炎疫情期间，由瑞丽市中医傣医医院煎成中药汤剂免费送给新冠密切接触者、抗疫一线工作者、居家隔离群众等人员预防性服用。截至2021年5月30日已有20000余人使用。因临床效果突出，2021年本申请健体抗疫方作为基础方被写入《瑞丽市新冠肺炎中医药治疗方案》和《瑞丽市新冠肺炎中医药康复方案》中，供瑞丽市医疗机构参考使用。

2020年全国新冠疫情期间，经云南省卫健委、省药品监督管理局应急审批，获新冠肺炎期间医院内制剂批文健体抗疫合剂（滇药制字Z2020004A），由我院制剂室内部制作，供我省定点救治医院和湖北受援单位使用，其中健体抗疫合剂经新冠定点救治医院——昭通市大关县人民医院同意捐赠后用于19例住院患者恢复期治疗，在支援武汉的云南医疗队中有56名医生自愿使用健体抗疫方，据云南中医药大学第一附属医院制剂室统计在云南中医药大学第一附属医院就诊患者中已有4000余人服用健体抗疫合剂或健体抗疫汤，武汉疫情期间经当地主管部门同意，医院捐赠咸宁一批健体抗疫合剂和健体抗疫合剂，由云南中医药大学第一附属医院支援武汉的临床医生将健体抗疫合剂用于6例轻中症住院患者的治疗，健体抗疫合剂用于10例住院患者恢复期的治疗，具有较好的临床疗效。

10观察指标

11效评价标准

11.1疾病疗效评价标准

临床治愈：新型冠状病毒核酸检测阴性。

11.2中医疗效评价标准

12不良事件观察

13统计学分析

14.研究结果

14.1患者基本情况

14.2临床主要症状频数分布情况

表1患者治疗前后临床主要症状频数比较频数(百分比)

14.3疗效评价情况

表2患者治疗后疗效判定n(％)

14.4实验室指标

表3患者治疗前后实验室指标比较[Median(IQR)]

14.5安全性指标

14.5.1血常规指标

表4患者治疗前后血常规指标比较n(％)

14.5.2肝肾功指标

表5患者治疗前后血生化指标比较n(％)

14.6不良反应

观察病例中患者未出现任何不良反应。

15小结

本发明的保护范围不仅仅局限于上述实施例，上述实施例只是为了帮助解释和说明本发明，而不是对本发明的保护范围进行限制，只要设计与本发明的设计相同或者是只要是等同替换的都落在本发明所要求保护的范围之内。

Claims

1.一种具有治疗时疫感冒的健体抗疫中药合剂，其特征在于合剂包括以下重量份的中药组分：黄芪9-12份、炒白术7-9份、防风6-8份、北沙参8-11份、麦冬6-8份、灵芝7-9份、桔梗8-10份、连翘8-12份、紫苏叶7-11份、藿香7-10份、金银花8-11份、甘草4-6份。

2.根据权利要求1所述的具有治疗时疫感冒的健体抗疫中药合剂，其特征在于，所述合剂中包括以下重量份的中药组分：黄芪10份、炒白术7-8份、防风7-8份、北沙参8-10份、麦冬7-8份、灵芝7-9份、桔梗8-11份、连翘8-11份、紫苏叶8-10份、藿香7-9份、金银花8-10份、甘草5-6份。

3.一种具有治疗时疫感冒健体抗疫中药合剂的制备方法，其特征在于，以制作1000ml合剂为计，制备方法包括如下步骤：

(1)取黄芪10份、炒白术8份、防风8份、北沙参10份、麦冬8份、灵芝8份、桔梗8份、连翘8份、紫苏叶8份、藿香8份、金银花8份、甘草6份；

第二次加水至药材8倍量，常压煮沸40分钟，60目滤网滤过；

第三次加水至药材6倍量，常压煮沸30分钟，60目滤网滤过；

将上述三次滤液混合之后，进行减压浓缩至约900ml，400目滤网滤过；

添加适量纯化水至1000ml，混匀5分钟，半成品检验合格后分装，饱和水蒸气湿热灭菌；饱和水蒸气湿热灭菌温度110℃～115℃，压力>68.6KPa，灭菌时间30min，终点F₀＝8～10，即得合剂饮品。

4.根据权利要求3所述的具有治疗时疫感冒的中药健体抗疫合剂制备方法，其特征在于，所述减压浓缩混合滤液的减压温度：50℃～80℃，真空度：0.04MPa～0.10MPa。

5.一种健体抗疫中药合剂作为制备时疫感冒药物的用途。