CN113827518B - 抑制黑色素生成组合物、美白组合物、美白乳液及其制备 - Google Patents

Abstract

本申请属于日化领域，具体提供了一种抑制黑色素生成组合物及其应用。本申请提供的抑制黑色素生成组合物由苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物组成，其中，苦枥白蜡树提取物与鹅绒委陵菜提取物与的质量比为1～7:1～101:1‑99。本申请的抑制黑色素生成组合物利用苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物搭配，具有协同增效作用，能够很好的抑制黑色素的生成。应用所述抑制黑色素生成组合物制备的美白组合物及美白乳液，协同有促渗剂双‑二乙氧基二甘醇环己烷1,4‑二羧酸酯，能够减少黑色素的生成、起到美白的作用，还可以增加角质层水分含量，阻挡皮肤深层的水分流失。美白乳液的制备方法，操作简单，可用于大规模生产。

Description

抑制黑色素生成组合物、美白组合物、美白乳液及其制备

技术领域

本发明涉及日化领域，具体涉及一种抑制黑色素生成组合物、美白组合物、美白乳液及其制备。

背景技术

在亚洲经济和文化的推动下，亚洲占据了全球皮肤美白市场的主导地位，以白为美，皮肤白成为不少女性追求的目标。2020年中国护肤品市场达到2605亿元，其中美白类护肤品占据重要的份额。

皮肤颜色受多种内在以及外在因素的影响，实际上取决于黑色素的数量及其在皮肤中的分散程度。皮肤美白效果主要是与黑色素生成抑制活性和自由基清除能力密切有关，还通过可以加快皮肤代谢及角质层脱落达到美白效果。其中最重要的途径就是抑制黑色素的生成。传统的美白药物一般是通过抑制黑素细胞的成熟从而降低黑色素的生成，但是容易产生不良反应，包括刺痛、接触性皮炎等。所以这些年来化妆领域研究的美白产品，大多数是通过选择地抑制酪氨酸酶（TYR）的活性，以减少黑色素的沉着，同时能避免对正常成熟的黑素细胞产生毒性，降低使用的不良反应。

参与调节黑色素生成的三条主要信号通路为：(1)黑素皮质素1受体（Mc1R）；（2）Wnt/β-catenin信号通路；（3）酪氨酸酶受体KIT/SCF通路。在黑色素形成过程中，L-酪氨酸羟基化生成L-3，4-二羟基苯丙氨酸(L-DOPA)是整个过程的限速步骤，是由酪氨酸酶催化。酪氨酸酶是通过黑素合成黑色素的关键酶，它成为直接抑制酪氨酸酶催化活性的黑色素合成抑制剂最显著的靶点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制黑色素生成组合物，其通过抑制酪氨酸酶催化活性实现抑制黑色素的生成。

本发明的目的还在于提供一种美白组合物，可有效美白。

作为本发明的第一方面，本发明提出一种抑制黑色素生成组合物，包含苦枥白蜡树提取物，和其他中草药复合提取物；优选地，所述中草药复合提取物为鹅绒委陵菜提取物。

具体的，所述的抑制黑色素生成组合物，由苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物组成，其中，所述苦枥白蜡树提取物与鹅绒委陵菜提取物的质量比为1:~7:1:10。

在一些实施方案中，所述苦枥白蜡树提取物与所述鹅绒委陵菜提取物的质量比为1~5:1~7。如，在在一些具体的实施方案中，所述苦枥白蜡树提取物与所述鹅绒委陵菜提取物的质量比为1:1、或者为1:3、1:5、1:7、1:9等，又或者为苦枥白蜡树提取物与所述鹅绒委陵菜提取物的质量比为2:1、5:3、3:1、4:1等。优选的，所述苦枥白蜡树提取物与所述鹅绒委陵菜提取物的质量比为1:7~5:3。其中在所述苦枥白蜡树提取物与所述鹅绒委陵菜提取物的质量比为1:7、1：3或者5:3能达到更优抑制效果。

苦枥白蜡树是一种落叶乔木，可长到20米高。主要生长于我国的西部地区，以及俄罗斯远东的山谷，从钩藤中分离出的植物化学物质包括香豆素类化合物，木质素和类环糊精衍生物，广泛用于治疗腹泻和结膜炎的消炎，同时也具有抗抗炎、抗病毒的功效，在神经***疾病方面也具有一定的缓解作用。

本发明的发明人发现，苦枥白蜡树提取物对黑色素生成过程中的酪氨酸酶具有优异的抑制作用，抑制率会随着苦枥白蜡树提取物的质量浓度的增加而逐渐变大。

鹅绒委陵菜隶属于蔷薇科，是一种典型的匍匐茎和玫瑰花无性系植物。广泛分布在我国，特别是在极端寒冷或高海拔地区，如青海、西藏、四川和甘肃等。是一种很有价值的补品食品和民间药物，其块根具有促进体液产生、解渴、健胃、补血等功效，此外还具有抗衰老、抗炎、抗高脂血症、肝保护、免疫调节等多种功能。

本申请利用苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物搭配，相比于单独采用苦枥白蜡树提取物或鹅绒委陵菜提取物，具有协同增效作用，抑制黑色素生成组合物能够很好的抑制皮肤黑色素的生成。

在一些实施方案中，所述苦枥白蜡树提取物的制备方法包括以下步骤：

将苦枥白蜡树原料粉碎；

将粉碎后的苦枥白蜡树原料加入至提取罐中，利用水和醇进行提取，所述苦枥白蜡树原料、水以及醇的质量比为1：0.05-5：0.05-5，提取温度为50-80℃，提取1-5次，提取时间为1-5小时，获得苦枥白蜡树粗提液；

将获得的苦枥白蜡树粗提液过滤，并经过外循环罐、沉降罐进行浓缩并进行冷冻干燥，过筛得到苦枥白蜡树提取物。

在一些实施方案中，所述步骤S3中，浓缩制备得到的液体成分进行冷冻干燥，过80-100目筛，得到苦枥白蜡树提取物。所得到的苦枥白蜡树提取物溶解于50%丁二醇水溶液中，便于其定量。

在一些实施方案中，所述步骤S2中苦枥白蜡树原料、水以及醇的质量比为1：0.05-5：0.05-5，优选为1：0.1-4：0.1-4，更优选为1：0.2-2：0.2-4。当苦枥白蜡树原料、水以及醇的比例在1：0.05-5：0.05-5的范围内时，所获得的苦枥白蜡树提取物的有效成分较高，能够进一步有效抑制酪氨酸酶活性，降低黑色素的生成。所述醇可以是乙醇、乙二醇、丙醇等。

采用本发明的制备方法，制备获得的苦枥白蜡树提取物为棕色粉末，其灰分含量在10%以下，水分含量在5%以下，重金属含量在10ppm以下，铅含量在2ppm以下，砷含量在3ppm以下，细菌总数在1000 CFU/g以下；霉菌和酵母菌的总数在100 CFU/g以下，无沙氏门菌和大肠杆菌等细菌。

在一些实施方案中，所述提取的温度为50-80℃，优选60-70℃。所述提取的次数为1-5次，优选2-4次。所述提取的时间为1-5小时，优选2-4小时。

所述的抑制黑色素生成组合物，利用苦枥白蜡树提取物与鹅绒委陵菜提取物的增效作用，对黑色素生成过程中的酪氨酸酶具有优异的抑制作用，从而抑制黑色素的生成，实现美白功效。

作为本发明的第二方面，本发明提供了一种美白组合物，包括所述的抑制黑色素生成组合物，还包括促渗透剂，以所述美白组合物的质量百分比计，所述抑制黑色素生成组合物的加入量为0.01-10%；所述促渗透剂的加入量为0.01-10%，所述促渗透剂为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯。

在一些实施方案中，以所述美白组合物的质量百分比计，所述抑制黑色素生成组合物的加入量为0.01-10%，例如：所述组合物的加入量可以是1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、9%等。所述组合物的加入量在0.01-10%之间时，使用美白组合物的皮肤黑色素生成减少。当抑制黑色素生成组合物的加入量小于0.01%时，皮肤黑色素抑制效果不明显，不能起到美白作用；当抑制黑色素生成组合物加入量大于10%时，组合物含量高，成本过高且对应美白效果增加不明显。

在一些实施方案中，以所述美白组合物的质量百分比计，所述促渗透剂的加入量为0.01-10%，例如：0.5%、1%、2%、3%、5%、6%、7% 、8%等。当促渗透剂的加入量小于0.01%时，促渗透效果不明显。当促渗透剂的加入量大于10%时，不能进一步起到促渗透的作用。

在一些实施方案中，还包括保湿剂、增稠剂、pH调节剂、乳化剂、油脂、皮肤调理剂、抗氧化剂、防腐剂、舒敏剂及芳香剂中的至少一种。

在一些实施方案中，以所述美白组合物的质量百分比计，所述保湿剂的加入量为0.01-20%；所述增稠剂的加入量为0.02-1.5%；所述pH调节剂的加入量为0.01-1%；所述乳化剂的加入量为0.01-2%；所述油脂的加入量为1-8%；所述皮肤调理剂的加入量为0.01-10%；所述抗氧化剂的加入量为0.01-1%；所述防腐剂的加入量为0.01-1%；所述舒敏剂的加入量为0.01-5%；所述芳香剂的加入量为0.005-0.5%。

在一些实施方案中，所述保湿剂选自甘油、双丙甘醇、甘油聚醚-26、透明质酸钠、泛醇、PEG/PPG-17/6共聚物、丁二醇、木糖醇、甜菜碱、甘油聚丙烯酸酯、丙二醇、甘露糖、海藻糖中的至少一种。

以所述美白组合物的质量百分比计，所述保湿剂的加入量为0.01-20%，在一些实施方案中，所述保湿剂的加入量可以是1-19%，可以是3-18%，可以是5-16%，可以是7-15%，可以是8-14%等。当保湿剂的含量低于0.01%时，保湿作用不明显；当保湿剂的含量高于20%时，会使美白组合物有黏腻感。

在一些实施方案中，所述增稠剂选自卡波姆、黄原胶、小核菌胶、山嵛醇、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP 共聚物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/C10-30 烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物中的至少一种。

以所述美白组合物的质量百分比计，所述增稠剂的加入量为0.02-1.5%。在一些实施方案中，所述增稠剂的加入量可以是0.05-0.6%，可以是0.1-0.5%等。

在一些实施方案中，所述油脂选自环五聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物、油醇芥酸酯、牛油果树果脂、棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、环己硅氧烷、氢化聚异丁烯、C20-24 烷基聚二甲基硅氧烷、C13-14异链烷烃、C12-15 醇苯甲酸酯中的至少一种。

以所述美白组合物的质量百分比计，所述油脂的加入量为5-20%。例如，所述油脂的加入量可以是8%、10%、12%、14%、16%、18%等。通过在美白组合物中添加油脂，可以减少皮肤表面水分的蒸发，防止皮肤干裂。另外，通过添加油脂，可以在皮肤表面形成疏水性薄膜，防止外部有害物质的侵入。当油脂的含量小于5%时，不能减少皮肤表面水分的蒸发，且不能有效防止有害物质的侵入；当油脂的含量大于20%时，使美白组合物过于油腻，使用感会有所下降。

在一些实施方案中，所述乳化剂选自PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、聚甘油-3 甲基葡糖二硬脂酸酯、月桂醇聚醚-7、异硬脂醇聚醚-20中的至少一种。

以所述美白组合物的质量百分比计，所述乳化剂的加入量为0.01-5%，例如：可以是0.1-4.5%，可以是1-4%等。本申请的乳化剂用量小于0.01%时，导致乳化不充分使得体系不稳定；乳化剂用量大于5%时，会对产品的稳定性也会造成一定的影响。

本申请的美白组合物，其乳化体系是水包油体系，因此，当使用丙二醇和双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯作为促渗透剂使用时，即使不同时加入，也不会影响其协同作用的发挥。

本发明的美白组合物还可以添加少量舒敏剂，在一些实施方案中，所述舒敏剂包括北美金缕梅花水、红没药醇、胶态燕麦粉、姜根提取物、芦荟提取物中的一种或两种以上的组合。

其中，红没药醇是从菊类植物中提取，有抗炎抑菌的作用，该成分稳定性好，和皮肤有很好的相容性，降低皮肤炎症，减轻皮肤粉刺，防止暗疮产生，提高皮肤的抗刺激能力，修复有炎症受伤的皮肤。红没药醇有明显的抗炎、缓和刺激和抗过敏功能。

以所述美白乳液的质量百分比计，所述舒敏剂的加入量为0.01-5%。例如可以是0.5%、1%、2%、3%等。当舒敏剂的加入量小于0.01%时，舒敏效果不明显；当舒敏剂的加入量大于5%时，不能进一步起到舒敏的作用，而且成本过高。

在一些实施方案中，所述抗氧化剂选自维生素E、生育酚乙酸酯、丁羟甲苯、番茄红素中的至少一种。以所述美白组合物的质量百分比计，所述抗氧化剂的加入量为0.01-1%。例如，可以是0.1，0.3，0.5，0.7，1.0等。本发明通过加入抗氧化剂，可以防止美白组合物中的油脂、蜡、烃类等油性成分接触空气中的氧，发生氧化作用，产生过氧化物、醛、酸等，导致变色、酸败、质量下降等情形出现。

在一些实施方案中，所述皮肤调理剂选自水解胶原蛋白、燕麦肽、神经酰胺3、墨角藻提取物、小球藻发酵产物、绿藻提取物、褐藻提取物、尿囊素、白果槲寄生叶提取物、白茅根提取物、丝氨酸、巨藻提取物、β-葡聚糖、仙人掌提取物中的至少一种。

在一些实施方案中，以所述美白组合物的质量百分比计，所述皮肤调理剂的加入量为0.01-5%。所述皮肤调理剂的加入量可以是0.1-4%，可以是0.15-3%，可以是0.2-2%等。当皮肤调理剂的加入量小于0.01%时，无法起到相应的功效；当皮肤调理剂的加入量大于5%时，成本过高。

在一些实施方案中，所述pH调节剂选自氨甲基丙醇、精氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠中的至少一种。

以所述美白组合物的质量百分比计，所述PH调节剂的加入量为0.01-1%，通过添加pH调节剂，使美白组合物的pH值更适宜人体皮肤。在一些实施方案中，本发明的pH调节剂的加入量可以是0.03-0.8%，可以是0.06-0.5%，可以是0.1-0.3%等。当pH调节剂的加入量大于1%或者小于0.01%时，均不能获得pH值合适的美白组合物。

在一些实施方案中，本发明的美白组合物中还含有防腐剂和芳香剂。以所述美白组合物的质量百分比计，本发明的美白组合物中的防腐剂的加入量为0.01-1%，所述芳香剂的加入量为0.01-0.5%。所述防腐剂可以包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲酸及其盐中的一种或两种以上的组合。所述芳香剂可以是香精等。

本发明的美白组合物，其可以是乳液状，或者为具有美白功能的护肤水等。

作为本发明的第三方面，本发明还提供了一种美白乳液，按美白乳液的质量百分比计，由以下组分组成：

A相氢化聚癸烯 0.1-3%；

聚二甲基硅氧烷 0.5-5%；

聚甘油-3 甲基葡糖二硬脂酸酯 0.1-4%；

棕榈酸乙基己酯 0.5-8%；

牛油果树果脂 0.1-2%；

甘油硬脂酸酯 0.1-8%；

红没药醇 0.1-2%；

油醇芥酸酯 0.01-2%；

神经酰胺 2 0.05-1%；

羟苯甲酯 0.05-0.4%；

丁羟甲苯 0.001-0.5%；

B相环五聚二甲基硅氧烷和环己硅氧烷的复合物 0.1-5%；

生育酚乙酸酯 0.01-0.5%；

C相水余量至 100%；

丙二醇 0.1-5%；

甘油 0.1-5%；

丁二醇 0.1-7%；

双丙甘醇 0.5-10%；

甜菜碱 0.1-5%；

丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物 0.02-0.8%；

尿囊素 0.01-2%；

卡波姆 0.01-1.5%；

D相甘油聚甲基丙烯酸酯 0.1-5%；

C12-15醇苯甲酸酯 0.1-5%；

氨甲基丙醇 0.01-1%；

E相β-葡聚糖 0.01-1%；

双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯 0.01-10%；

苯氧乙醇 0.1-1%；

香精 0.005-0.5%；

苦枥白蜡树提取物 0.1-5%；

鹅绒委陵菜提取物 0.1-10%。

本申请还提供了上述美白乳液的制备方法，其包括以下步骤：

将A相加入油相锅，搅拌并加热至完全溶解，加热温度为75-85℃；将B相加入A相中混合，在75-85℃保温5-20min，形成A/B混合相；

将C相加入水相锅，搅拌至完全溶解，并加热至75-85℃，保温5-20min；

抽真空预热并烘干乳化锅，先抽入C相，真空抽入A/B混合相，进行均质1-10分钟，随后在75-85℃保温搅拌20-40分钟，搅拌速度1000-1500 r/min；

降温至55-65℃，加入D相，搅拌速度500-1000r/min，搅拌均匀；

降温至40-50℃，加入E相搅拌均匀；

降温至30-40℃，静置，得到美白乳液。

本发明的有益效果：

本申请的抑制黑色素生成组合物，利用苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物搭配，具有协同增效作用，通过对酪氨酸酶的抑制，能够很好的抑制皮肤黑色素的生成。

本申请的美白组合物，包含抑制黑色素生成组合物及促渗透剂，其中抑制黑色素生成组合物由苦枥白蜡树提取物及鹅绒委陵菜提取物配伍，能够减少黑色素的生成、起到美白的作用，还具有保湿锁水，能够阻挡水分流失，为肌肤营造保湿屏障。

本申请所提供的美白乳液，同时添加有苦枥白蜡树提取物及鹅绒委陵菜提取物作为抑制黑色素生成组合物，能有效抑制黑色素声场，具有优异的美白效果，同时，对肌肤有修护作用，可活化肌肤的机能。美白乳液的制备方法，操作简单，可用于大规模生产。

附图说明

图1为实施例1-6中苦枥白蜡树提取物的样品浓度-细胞活力关系图，其中样品浓度为苦枥白蜡树提取物的质量浓度；

图2为实施例7-12中苦枥白蜡树提取物对酪氨酸酶抑制的对比图；

图3为本发明实施例13-17的B16细胞黑色素含量变化率的对比图。

图4为本发明应用实施例1-5以及应用对比例1-2的皮肤黑色素含量变化率的对比图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

在本发明实施例/对比例中，所应用的苦枥白蜡树提取物的制备方法为：

将苦枥白蜡树原料粉碎后，加入到提取罐内，在70℃的温度下加入水和乙醇，其中，苦枥白蜡树原料、水和乙醇的质量比为1:1:4，煮提取3次，每次2.5小时，获得苦枥白蜡树粗提取液。之后将获得的苦枥白蜡树粗提取液过滤并存放于储存罐，让储存罐中的滤液缓慢流入外循环罐和沉降罐进行浓缩，获得液体成分和沉淀物，将液体成分进行喷雾干燥，将沉淀物进行烘干后过80-100目筛，获得苦枥白蜡树提取物，然后对苦枥白蜡树提取物进行检测，灰分含量为7%，水分含量为4%。

实施例1-6

将苦枥白蜡树提取物用磷酸盐缓冲液稀释得到6组不同浓度（终浓度）的测试溶液，使用0.22μm滤头进行过滤。进行细胞活力测试时，苦枥白蜡树提取物的质量浓度如下表1所示。

细胞活性测试

Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester，钙黄绿素乙酰氧基甲酯)是一种容易穿透活细胞膜进入细胞内，从而标记细胞的绿色荧光探针，Calcein AM本身并无荧光，进入细胞后被细胞中内源性酯酶水解生成发出强绿色荧光的不能通透细胞膜的钙黄绿素(Calcein)。近年来被广泛用于细胞活性的检测。

角质形成细胞经计数后使用稀释到5×10⁴个/mL，并取100μL接种到黑色96孔细胞培养板中，在37 ℃培养箱避光孵育12小时，空白组无需加角质形成细胞。吸取并弃掉培养基后，实验组加入100μL不同浓度的苦枥白蜡树提取物，空白组和对照组加入100μL培养基，在37 ℃培养箱避光孵育2~4小时。加入100μL的3×Calcein-AM溶液，在37 ℃培养箱避光孵育30分钟。孵育结束后，可以直接用荧光酶标仪(激发波长494nm，发射波长517nm)检测荧光并计算细胞活性，细胞活性和荧光强度成正比。

细胞相对活力=[(OD_实验组-OD_空白组)/(OD_对照组-OD_空白组)]×100%

表1、实施例1-6相对细胞活力

实施例7-12

将苦枥白蜡树提取物用磷酸盐缓冲液稀释得到6组不同浓度（终浓度）的测试溶液，使用0.22μm滤头进行过滤。进行细胞活力测试时，苦枥白蜡树提取物的质量浓度如下表2所示。

细胞内酪氨酸酶活力测定

左旋多巴（L－DOPA）在酪氨酸酶的作用下发生氧化生成棕褐色多巴醌，此颜色变化在475nm处有一明显吸收峰。酪氨酸酶活性大小决定了生成多巴醌的量影响着规定时间内在475nm处吸光度值的变化，根据规定时间内吸光度的变化量即可确定培养细胞中酪氨酸酶活性的大小。

取对数生长期浓度为5×10⁴个/mL的B16F10细胞100 μL接种于96孔板中，加入1μM浓度的α-MSH进行黑色素诱导，在37 ℃ CO₂培养箱生长24 小时。吸取上清培养基，并使用PBS液冲洗2次，实验组加入100 μL含不同浓度苦枥白蜡树提取物的DMEM培养基（表2），对照组加入100 μL DMEM培养基，各三个复孔，培养基中均含10%胎牛血清，并放入37 ℃ CO₂培养箱生长24小时。吸取上清培养基，并使用PBS冲洗2次，每孔加入90 μL 1%TritonX-100进行细胞裂解，各孔再加入100 μL浓度为10g/L的L－DOPA，37℃水浴4小时。即刻置于酶标仪下测OD₄₇₅各孔值。复孔取平均值，实验重复3次。计算酪氨酸酶抑制率。

酪氨酸酶抑制率（%）=[(OD_实验组-OD_空白组)/( OD_对照组-OD_空白组)]×100%

表2、实施例7-12 酪氨酸酶抑制率

实施例13-17

将苦枥白蜡树提取物用磷酸盐缓冲液稀释得到5组不同浓度（终浓度）的测试溶液。进行测试时，苦枥白蜡树提取物质量浓度如下表3所示。

细胞内黑色素含量测定

取对数期的B16黑素瘤细胞，弃去培养液，用PBS液清洗2次，加入培养液，调节细胞浓度为0.5×10⁴~1×10⁴个/孔相当于干细胞悬液5×10⁴ ~10×10⁴个/mL，加入96孔板中，并加入1μM浓度的α-MSH进行黑色素诱导，在37 ℃ CO₂培养箱生长12小时。细胞贴壁后，弃去原有培养液，实验组加入100 μL不同浓度苦枥白蜡树提取物的DMEM培养基，对照组加入100μL DMEM培养基，各三个复孔，培养基中均含10%胎牛血清，于37摄氏度5%CO₂恒温培养箱中培养24小时后，弃去培养液，用 0.25%胰酶消化，以1000r/min离心5min弃上清液，每个孔的细胞加入200μL含10%二甲基亚砜（DMSO）的NaOH （1mol/L）溶液，于65摄氏度水浴完全溶解黑色素颗粒，酶联免疫检测仪检侧490nm处吸光度。黑色素含量（%）=[(OD_实验组-OD_空白组)/(OD_对照组-OD_空白组)]×100%

1、实验组加入苦枥白蜡树提取物+α-MSH；

2、对照组加入α-MSH；

3、空白组加入磷酸盐缓冲液。

表3、实施例13-17黑色素含量

实施例	苦枥白蜡树提取物质量浓度（mg/ml）	黑色素含量（%）
			实施例13	0.1	92.11
实施例14	0.2	72.55
			实施例15	0.4	43.08
实施例16	0.8	34.37
			实施例17	1.0	22.68

通过表2和表3以及图1-3的结果，可以得出，苦枥白蜡树提取物可以抑制酪氨酸酶的活性，并减少α-MSH引起的黑色素生成，并且不同浓度呈现出的效果不同。

应用实施例1-5

根据下表4中的应用实施例1-5的乳液配方中各组分的含量（质量百分比），并按照下述生产工艺步骤制备得到乳液。

表4、应用实施例1-5配方表

生产工艺步骤如下：

1、将A相各组分加入油相锅，搅拌并加热至82℃，完全溶解；乳化前将B相各组分加入油相锅，82℃保温10min，形成A/B混合相；

2、将C相各组分加入水相锅，搅拌溶解完全，并加热至82℃，保温10min；

3、抽真空预热并烘干乳化锅，然后先抽入C相，真空抽入A/B混合相，然后开均质5分钟，开搅拌速度1200r/min，82℃保温搅拌30分钟；

4、降温至60℃，加入D相，搅拌速度800r/min，搅拌均匀；

5、降温至45℃，加入E相搅拌均匀；

6、降温至36℃，静置24小时，得到美白乳液。

注：工艺中的A、B、C、D、E相分别为：

A相：聚甘油-3 甲基葡糖二硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、油醇芥酸酯、牛油果树果脂、聚二甲基硅氧烷、羟苯甲酯、丁羟甲苯、神经酰胺 2、红没药醇；

B相：环五聚二甲基硅氧烷和环己硅氧烷的复合物、生育酚乙酸酯；

C相：水、甘油、丙二醇、丁二醇、双丙甘醇、尿囊素、甜菜碱、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、卡波姆；

D相：甘油聚甲基丙烯酸酯、C12-15 醇苯甲酸酯、氨甲基丙醇；

E相：苦枥白蜡树提取物、鹅绒委陵菜提取物、β-葡聚糖、苯氧乙醇、香精、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯。

其中，聚甘油-3 甲基葡糖二硬脂酸酯是乳化剂；

甘油硬脂酸酯、甘油、丁二醇、丙二醇、双丙甘醇、甜菜碱、甘油聚甲基丙烯酸酯是保湿剂；

棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、油醇芥酸酯、牛油果树果脂、聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷和环己硅氧烷的复合物、C12-15 醇苯甲酸酯是油脂；

苯氧乙醇、羟苯甲酯是防腐剂；丁羟甲苯、生育酚乙酸酯是抗氧化剂；

丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、卡波姆是增稠剂；

氨甲基丙醇是pH调节剂；红没药醇是舒敏剂；

神经酰胺2、尿囊素、β-葡聚糖是皮肤调理剂；香精是芳香剂。

双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯是促渗透剂；

苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物是抑制黑色素生成组合物。

环五聚二甲基硅氧烷和环己硅氧烷的复合物的生产厂家：牌号：DC345；购自：美国道康宁公司。

应用对比例1-2

根据下表5中的应用对比例1-2的乳液配方中各组分的含量（质量百分比），并按照与应用实施例1-2相同的方法，制备得到乳液。

表5、应用对比例1-2配方表

美白功效测试

皮肤黑色素变化率的测试方法：通过测定特定波长的光照在人体皮肤上后的反射量来确定皮肤中黑色素的含量。探头的发射器发出波长分别为568nm、660nm、和880nm三种波长的光照射在皮肤表面，接受器测得皮肤反射的光，并测定被皮肤吸收的光的量，从而可以得出皮肤黑色素的变化率。

皮肤黑色素变化率的测试采用德国CK公司的色素检测仪进行测试，其中，皮肤黑色素的测试探头 MX 18 由光源发射器和接收器组成，另有弹簧以保持检测时对皮肤的压力恒定。探头的测量范围是 0-999，测量数值越高，可以说明皮肤中黑色素的含量越高。

受试者人数为35人，试验周期为4周，试验选取应用实施例1-5的美白乳液以及应用对比例1-2的乳液，每天早晚涂抹于前臂内侧的不同区域，分别测定实验前（Day1）和使用28天时（Day28）的受试区域的皮肤在特定波长的光照后的反射量以确定皮肤中黑色素的含量，进而表征黑色素的变化率，具体黑色素的变化率的结果如图4及表6所示。

表6、应用例皮肤黑色素变化

由图4及表6可以看出，本申请的应用对比例1-2中，在单一使用苦枥白蜡树提取物或者单一使用鹅绒委陵菜提取物时，其黑色素含量变化率小，黑色素含量降低少，美白效果较差。

本申请的应用实施例1、2、4的黑色素的变化率较大，即黑色素含量降低，因此，同时加入苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物作为抑制黑色素生成组合物，能够有效美白皮肤。

另外，本申请的应用实施例3和5中黑色素变化率小于其他应用实施例，其黑色素含量相降低较少，但相比单独使用苦枥白蜡树提取物或鹅绒委陵菜提取物，其依然有较有益的抑制效果。

本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种美白组合物，其特征在于，包括抑制黑色素生成组合物及促渗透剂，还包括保湿剂、增稠剂、pH调节剂、乳化剂、油脂、皮肤调理剂、抗氧化剂、防腐剂、舒敏剂及芳香剂中的至少一种，其中以所述美白组合物的质量百分比计，所述抑制黑色素生成组合物的加入量为0.01-10%；所述促渗透剂的加入量为0.01-10%，所述促渗透剂为双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯，所述抑制黑色素生成组合物由苦枥白蜡树提取物和鹅绒委陵菜提取物组成，其中，所述苦枥白蜡树提取物与鹅绒委陵菜提取物的质量比为1~7:1~10。

2.如权利要求1所述的美白组合物，其特征在于，所述苦枥白蜡树提取物与鹅绒委陵菜提取物的质量比为1~5:1~7。

3.如权利要求2所述的美白组合物，其特征在于，所述苦枥白蜡树提取物的制备方法包括以下步骤：

将苦枥白蜡树原料粉碎；

将粉碎后的苦枥白蜡树提取物原料加入至提取罐中，利用水和醇进行提取，所述苦枥白蜡树提取物原料、水以及醇的质量比为1：0.05-5：0.05-5，提取温度为50-80℃，提取1-5次，提取时间为1-5小时，获得苦枥白蜡树粗提液；

将获得的苦枥白蜡树粗提液过滤，并经过外循环罐、沉降罐进行浓缩并进行冷冻干燥，过筛得到苦枥白蜡树提取物。

4.如权利要求1所述的美白组合物，其特征在于，以所述美白组合物的质量百分比计，所述保湿剂的加入量为0.01-20%；所述增稠剂的加入量为0.02-1.5%；所述pH调节剂的加入量为0.01-1%；所述乳化剂的加入量为0.01-5%；所述油脂的加入量为5-20%；所述皮肤调理剂的加入量为0.01-10%；所述抗氧化剂的加入量为0.01-1%；所述防腐剂的加入量为0.01-1%；所述舒敏剂的加入量为0.01-5%；所述芳香剂的加入量为0.005-0.5%。

5.如权利要求4所述的美白组合物，其特征在于，所述保湿剂选自甘油、双丙甘醇、甘油聚醚-26、透明质酸钠、泛醇、PEG/PPG-17/6共聚物、丁二醇、木糖醇、甜菜碱、甘油聚丙烯酸酯、丙二醇、甘露糖、海藻糖中的至少一种；和/或，

所述增稠剂选自卡波姆、黄原胶、小核菌胶、山嵛醇、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP 共聚物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/C10-30 烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物中的至少一种。

6.如权利要求4所述的美白组合物，其特征在于，所述油脂选自环五聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物、油醇芥酸酯、牛油果树果脂、棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、环己硅氧烷、氢化聚异丁烯、C20-24 烷基聚二甲基硅氧烷、C13-14异链烷烃、C12-15 醇苯甲酸酯中的至少一种；

所述乳化剂选自PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、聚甘油-3 甲基葡糖二硬脂酸酯、月桂醇聚醚-7、异硬脂醇聚醚-20中的至少一种；和/或，

所述舒敏剂包括北美金缕梅花水、红没药醇、胶态燕麦粉、姜根提取物、芦荟提取物中的至少一种。

7.如权利要求4所述的美白组合物，其特征在于，所述抗氧化剂选自维生素E、生育酚乙酸酯、丁羟甲苯、番茄红素中的至少一种；

所述pH调节剂选自氨甲基丙醇、精氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠中的至少一种；和/或，

所述皮肤调理剂选自水解胶原蛋白、燕麦肽、神经酰胺3、墨角藻提取物、小球藻发酵产物、绿藻提取物、褐藻提取物、北美金缕梅水、红没药醇、尿囊素、白果槲寄生叶提取物、白茅根提取物、丝氨酸、巨藻提取物、β-葡聚糖、仙人掌提取物中的至少一种。

8.一种美白乳液，其特征在于，按美白乳液的质量百分比计，由以下组分组成：

A相氢化聚癸烯 0.1-3%；

聚二甲基硅氧烷 0.5-5%；

聚甘油-3 甲基葡糖二硬脂酸酯 0.1-4%；

棕榈酸乙基己酯 0.5-8%；

牛油果树果脂 0.1-2%；

甘油硬脂酸酯 0.1-8%；

红没药醇 0.1-2%；

油醇芥酸酯 0.01-2%；

神经酰胺 2 0.05-1%；

羟苯甲酯 0.05-0.4%；

丁羟甲苯 0.001-0.5%；

B相环五聚二甲基硅氧烷和环己硅氧烷的复合物 0.1-5%；

生育酚乙酸酯 0.01-0.5%；

C相水余量至 100%；

丙二醇 0.1-5%；

甘油 0.1-5%；

丁二醇 0.1-7%；

双丙甘醇 0.5-10%；

甜菜碱 0.1-5%；

丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物 0.02-0.8%；

尿囊素 0.01-2%；

卡波姆 0.01-1.5%；

D相甘油聚甲基丙烯酸酯 0.1-5%；

C12-15 醇苯甲酸酯 0.1-5%；

氨甲基丙醇 0.01-1%；

E相β-葡聚糖 0.01-1%；

双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯 0.01-10%；

苯氧乙醇 0.1-1%；

香精 0.005-0.5%；

苦枥白蜡树提取物 0.1-7%；

鹅绒委陵菜提取物 0.1-10%。

9.一种如权利要求8所述的美白乳液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将A相加入油相锅，搅拌并加热至完全溶解，加热温度为75-85℃；将B相加入A相中混合，在75-85℃保温5-20min，形成A/B混合相；

将C相加入水相锅，搅拌至完全溶解，并加热至75-85℃，保温5-20min；

抽真空预热并烘干乳化锅，先抽入C相，真空抽入A/B混合相，进行均质1-10分钟，随后在75-85℃保温搅拌20-40分钟，搅拌速度1000-1500 r/min；

降温至55-65℃，加入D相，搅拌速度500-1000r/min，搅拌均匀；

降温至40-50℃，加入E相搅拌均匀；

降温至30-40℃，静置，得到美白乳液。

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