CN113820434A - 一种洋槐蜜成熟度的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品检测技术领域,具体涉及一种洋槐蜜成熟度的鉴别方法。本发明提供的洋槐蜜成熟度的鉴别方法为以松二糖作为特征性标志物检测洋槐蜜样品,若洋槐蜜样品中松二糖的含量≥0.5%,则判断洋槐蜜样品为成熟洋槐蜜,若洋槐蜜样品中松二糖的含量大于等于0.3%且小于0.5%,则判断洋槐蜜样品为半成熟洋槐蜜,若洋槐蜜样品中松二糖的含量<0.3%,则判断洋槐蜜样品为未成熟洋槐蜜。该方法具有操作简单、高效、成本低廉等特点,检测结果可靠稳定、判断度高,可以用于洋槐蜜的品质评价和分级,便于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域,具体涉及一种洋槐蜜成熟度的鉴别方法。
背景技术
洋槐蜜是蜜蜂收集洋槐的花蜜酿造而成的蜂蜜。洋槐蜜色泽水白、口感柔和、甜而不腻、具有独特的槐花清香,属于优质高端的蜂蜜品种,其市场价值明显高于其他蜂蜜。洋槐蜜的成熟过程从蜜蜂采集花蜜的工作完成时就已经开始,采集蜂将洋槐花花蜜摄入到蜜囊里带回蜂巢,在蜂巢内开始洋槐蜜的酿造。在采集过程中,采集蜂就会分泌转化酶和淀粉酶混入花蜜中,归巢后,吐出蜜汁分给内勤蜂。内勤蜂将蜜汁吸入蜜囊,利用自身的喙进行反复抽缩,在此反复进行过程中,内勤蜂不断地加入各种酶类,实现成分转化。内勤蜂在吞吐、转化时不断振动翅膀,加快水分的蒸发,当蜜脾中蜂蜜水分含量降到 20%左右,蜜蜂将其用蜂蜡封盖后,洋槐蜜就基本成熟。通常情况下,洋槐蜜的成熟过程需要至少7天,蜜脾的封盖达到75%及以上。因此,在蜂巢内酿造至少7天,且蜜脾封盖75%及以上的洋槐蜜通常被认为是成熟洋槐蜜。
但是洋槐花花期短,为了使产量最大化,通常会人工收集超过1−3天的洋槐花蜜,通过人工浓缩将水分含量降低至21%及以下,从而获得未成熟的洋槐蜜。这类未成熟的洋槐蜜的理化指标均满足国标洋槐蜜的理化指标的要求,因此无法将其与自然成熟的洋槐蜜进行有效区分,也很难区分洋槐蜜是否成熟及成熟度如何。目前市场上不同成熟度的洋槐蜜的价值也不相同,有些企业为了追求高价值,将未成熟或未完全成熟的洋槐蜜作为成熟洋槐蜜售卖,严重扰乱了蜂蜜市场秩序。因此,亟需开发稳定可靠的指标来判别洋槐蜜的成熟度,以其区分不同质量的洋槐蜜,保证洋槐蜜的质量与价值。
发明内容
本发明的目的是提供利用松二糖作为特征性标志物鉴别洋槐蜜成熟度的方法。
蜂蜜在成熟过程中会发生物质组成的改变,但并非蜂蜜中高含量的化学成分均会在成熟过程中发生特征性的含量变化,很多成分的含量变化并无可循的规律,较难作为成熟蜂蜜的特征性标志物。蜂蜜掺假和蜂蜜的成熟程度是蜂蜜两个不同的评价方式,相比掺假,成熟度的评价可以很好的实现产品分级,即在不涉及掺假的情况下,根据成熟度的不同,将产品分成不同的等级,实现产品不同的价值。成熟度的鉴别和评价对于实现蜂蜜的优质优价具有重要的支撑作用。本发明在对洋槐蜜成熟过程的研究中发现,松二糖在洋槐蜜成熟过程中的含量变化随着巢内的酿造时间和封盖具有明显相关性,可以作为特征性标志物用于鉴别成熟与未成熟的洋槐蜜。进一步地,通过对不同年份、不同来源、不同成熟度的大样本量的洋槐蜜进行检测,发现松二糖在不同成熟度的洋槐蜜中的含量变化特征非常稳定,而且,松二糖价格昂贵,很难被人为加入洋槐蜜中,适合作为洋槐蜜成熟度的特征性标志物,用于鉴别成熟与未成熟的洋槐蜜。
基于上述发现,本发明提供以下技术方案:
第一方面,本发明提供松二糖作为成熟洋槐蜜特征性标志物的应用。
第二方面,本发明提供松二糖在鉴别洋槐蜜成熟度中的应用。
第三方面,本发明提供松二糖在鉴别成熟洋槐蜜与未成熟洋槐蜜中的应用。
第四方面,本发明提供一种洋槐蜜成熟度的鉴别方法,该方法为:以松二糖作为特征性标志物检测洋槐蜜样品,若待鉴定洋槐蜜样品中松二糖的含量≥0.5%,则判断待鉴定洋槐蜜样品为成熟洋槐蜜,若待鉴定洋槐蜜样品中松二糖的含量大于等于0.3%且小于0.5%,则判断待鉴定洋槐蜜样品为半成熟洋槐蜜,若待鉴定洋槐蜜样品中松二糖的含量<0.3%,则判断待鉴定洋槐蜜样品为未成熟洋槐蜜。
其中,所述成熟洋槐蜜为蜂巢内酿造至少7天,且蜜脾封盖率≥75%;
所述半未成熟洋槐蜜为蜂巢内酿造大于3天且小于等于5天,且蜜脾封盖率在30-70%;
所述未成熟蜂蜜为蜂巢内酿造0-3天,且蜜脾封盖≤10%。
优选地,上述鉴别方法采用高效液相色谱蒸发光散射检测器检测所述洋槐蜜样品。
具体地,通过松二糖的含量与峰面积间的线性关系,制作标准曲线,根据该标准曲线和洋槐蜜样品中检测的松二糖的峰面积计算其含量。
本发明中,松二糖的含量为相对于洋槐蜜样品的质量百分含量。
所述鉴别方法为:采用高效液相色谱蒸发光散射检测器检测待鉴定定的洋槐蜜样品,所得谱图中含有松二糖对应的特征峰,且其含量≥0.5%,则判定该洋槐蜜样品是成熟洋槐蜜。
优选地,所述高效液相色谱蒸发光散射检测器检测的液相条件如下:采用Hi-PlexPb, USP L19色谱柱,柱温为68-72℃(优选为70℃)。
上述Hi-Plex Pb,USP L19色谱柱具体可为Agilent Hi-Plex Pb,USP L19,4.0×250mm。
所述液相色谱以水为流动相,洗脱方法为等度洗脱。
采用上述液相条件时,流动相的流速优选为0.5-0.7mL/min(更优选为0.6mL/min),进样量优选为45-55μL(更优选为50μL)。
优选地,所述高效液相色谱蒸发光散射检测器检测的蒸发光散射检测器条件如下:雾化温度为90℃,蒸发温度为60℃,载气流速为1.2SLM。
在高效液相色谱蒸发光散射检测器检测前,还包括对洋槐蜜样品进行预处理的步骤,所述预处理包括:将所述洋槐蜜样品溶解于水中后,过滤处理。
具体地,将所述洋槐蜜样品溶解于超纯水中,混匀,所得溶液经滤膜过滤后直接进行高效液相色谱蒸发光散射检测器检测。
作为本发明的一种实施方式,上述制备洋槐蜜样品溶液的加水体积为洋槐蜜样品质量的3-5倍。所述蜂蜜样品的预处理方法可为:取洋槐蜜样品1g,加入3 mL超纯水,涡旋,定容至5mL,0.22µm尼龙滤膜过滤,进样。
本发明的有益效果在于:本发明首次发现了洋槐蜜的成熟过程中松二糖的含量变化具有明显特征,并确定松二糖的含量≥0.5%可作为成熟洋槐蜜的判断标准,用于鉴别成熟洋槐蜜与未成熟洋槐蜜,并确定其成熟度。
本发明开发了一种以松二糖作为特征性标准物鉴别洋槐蜜成熟度的方法,该方法采用高效液相色谱蒸发光散射检测器检测洋槐蜜样品中的松二糖,具有较高的特异性和灵敏度,对于松二糖的检出限可以达到0.1%。本发明进一步通过对高效液相色谱蒸发光散射检测器检测的关键条件参数的优化,提高了洋槐蜜样品中松二糖检测的准确性。
本发明的洋槐蜜成熟度的鉴别方法具有操作简单、高效、成本低廉等特点,检测结果可靠稳定、判断度高,便于推广应用,为成熟洋槐蜜的鉴别提供了有效方法,对优质洋槐蜜的相关行业或国家标准的制定具有一定的指导意义,同时对保护蜂蜜消费者的合法权益和维护蜂蜜消费行业的健康发展具有重要的意义。
附图说明
图1为本发明实施例1中不同成熟度洋槐蜜的色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。其中,使用的部分仪器与试剂如下:高效液相色谱蒸发光散射检测器,美国Agilent Technologies公司;电子分析天平(PL203),德国METTLERTOLEDO公司;超纯水机(Milli-Q Gradient),美国Millipore公司;涡动仪(G560E),美国Scientific Industries公司。
实施例l 不同成熟度的洋槐蜜中松二糖的含量检测
1、样品来源:于2019年、2020年、2021年分别在陕西延安和河南三门峡(洋槐蜜主产区)的多个不同的蜂场采集蜜蜂酿造1天(1d),3天(3d),5天(5d),7天(7d),9天(9d),11天(11d),13天(13d)的洋槐蜜样品。对于不同酿造天数的样品,每个蜂场取3个,并记录酿造时间和蜜脾的封盖率。其中,采集的所有1d-5d的样品通过人工浓缩控制其水分含量在18-21%范围内,采集的7d-13d的样品,需要测定水分含量,其水分含量应在21%及以下,且需要满足蜜脾的封盖达到≥75%。
具体的洋槐蜜样品的信息见表1和表2。对所有的洋槐蜜样品进行常规品质指标测定和花粉鉴定,结果表明,所有样品均符合对应洋槐蜜属性特征。
对所有采集的洋槐蜜样品进行松二糖的含量检测。
2、样品预处理:洋槐蜜样品1g,加入3 mL超纯水,涡旋,用水定容至5mL容量瓶,0.22µm尼龙滤膜过滤,进样。
3、仪器条件设置:
(1)液相色谱条件
色谱柱:Agilent Hi-Plex Pb,USP L19,4.0×250mm;
柱温:70℃;
进样量:50µL;
流动相:超纯水;
洗脱条件:等度洗脱;
流速: 0.6 mL/min。
(2)蒸发光散射检测器条件:
雾化温度:90℃;
蒸发温度:60℃;
载气流速:1.2 SLM;
采集时间段:0-9min 不采集(可以避免蜂蜜中高含量的果糖和葡萄糖干扰),9-15min采集数据。
4、标准曲线绘制:配制浓度为0.02%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%、5.0%的松二糖标准品,浓度值求对数(10为底对数)与响应值对数绘制标准曲线。
5、洋槐蜜样品中松二糖的含量检测:通过松二糖的含量与峰面积间的线性关系,制作标准曲线,根据该标准曲线和洋槐蜜样品中检测的松二糖的峰面积计算其含量。
经统计,不同成熟度洋槐蜜样品中松二糖的含量如表1和表2所示,根据以上检测结果,洋槐蜜样品中的松二糖含量≥0.5%,可以判断为成熟洋槐蜜,与实际取样时结果吻合,符合成熟洋槐蜜的条件,即洋槐蜜在蜂巢中酿造至少7d,且封盖率≥75%。洋槐蜜样品中的松二糖含量小于0.5%且大于等于0.3%,可以判断为半成熟洋槐蜜,为在蜂巢中酿造大于3天且小于等于5天的样品,其封盖率在30%-70%。洋槐蜜样品中松二糖含量<0.3%,可以判断为未成熟洋槐蜜(1-3d的样品,基本无封盖)。
不同成熟度的洋槐蜜的检测图谱见图1。
表1 陕西延安地区不同年份、不同成熟天数的洋槐蜜样品中松二糖的含量(%)以及蜜脾封盖率(%)(3个不同地域,每个地域蜂场中随机取样, 1d-13d样品,每个样品采集3个,每年63个样品,3年189个样品)
表2 河南三门峡洋槐产区不同年份、不同成熟天数的洋槐蜜样品中松二糖的含量(%)和蜜脾封盖率(%)(3个不同地域,每个地域蜂场中随机取样, 1d-13d样品,每个样品采集3个,每年63个样品,3年189个样品)
实施例2 松二糖作为特征性标志物用于市售洋槐蜜的鉴别
1、样品来源
从市场购买标签为洋槐蜜的多种品级或品牌的蜂蜜样品共18份,对所有样品进行花粉检验,证明其为洋槐蜜。
2、样品预处理:洋槐蜜样品1g,加入3 mL超纯水,涡旋,用水定容至5.0mL,0.22µm尼龙滤膜过滤,进样。
3、仪器条件设置:
(1)液相色谱条件
色谱柱:Agilent Hi-Plex Pb,USP L19,4.0×250mm;
柱温:70℃;
进样量:50µL;
流动相:超纯水;
洗脱条件:等度洗脱;
流速: 0.6 ml/min。
(2)蒸发光散射检测器条件:
雾化温度:90℃;
蒸发温度:60℃;
载气流速:1.2 SLM。
4、标准曲线绘制:配制浓度为0.02%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%、5.0%的松二糖标准品,浓度值求对数(10为底对数)与响应值对数绘制标准曲线。
5、洋槐蜜样品中松二糖的含量检测:通过松二糖的含量与峰面积间的线性关系,制作标准曲线,根据该标准曲线和洋槐蜜样品中检测的松二糖的峰面积计算其含量。
结果如表3所示。
表3 市场上抽检的洋槐蜜中松二糖的含量测定
检测结果显示,7个样品的松二糖含量大于0.5%,判断为成熟洋槐蜜,根据样品溯源信息,可以确认样品来自生产成熟洋槐蜜的认证企业,说明本发明提供的成熟度鉴别方法的判别准确度较高。其中,4个样品中的松二糖的含量介于0.3%至0.5%之间,判断为半成熟的洋槐蜜,7个样品的松二糖含量小于0.3%,判断为未成熟洋槐蜜。以上结果证明,本发明的鉴别方法可以有效识别洋槐蜜的成熟度,可以用于洋槐蜜商品蜜的成熟度分级,实现洋槐蜜根据成熟度进行不同定价。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.松二糖作为成熟洋槐蜜特征性标志物的应用。
2.松二糖在鉴别洋槐蜜成熟度中的应用。
3.松二糖在鉴别成熟洋槐蜜与未成熟洋槐蜜中的应用。
4.一种洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,以松二糖作为特征性标志物检测洋槐蜜样品,若待鉴定洋槐蜜样品中松二糖的含量≥0.5%,则判断待鉴定洋槐蜜样品为成熟洋槐蜜,若待鉴定洋槐蜜样品中松二糖的含量大于等于0.3%且小于0.5%,则判断待鉴定洋槐蜜样品为半未成熟洋槐蜜,若待鉴定洋槐蜜样品中松二糖的含量<0.3%,则判断待鉴定洋槐蜜样品为未成熟洋槐蜜;
所述成熟洋槐蜜为蜂巢内酿造至少7天,且蜜脾封盖≥75%;
所述半未成熟洋槐蜜为蜂巢内酿造大于3天且小于等于5天,且蜜脾封盖30%-70%;
所述未成熟蜂蜜为蜂巢内酿造0-3天,且蜜脾封盖≤10%。
5.根据权利要求4所述的洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,采用高效液相色谱蒸发光散射检测器检测所述洋槐蜜样品。
6.根据权利要求5所述的洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,所述高效液相色谱蒸发光散射检测器检测的液相条件如下:采用Hi-Plex Pb, USP L19色谱柱,柱温为68-72℃。
7.根据权利要求6所述的洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,以水为流动相,洗脱方法为等度洗脱。
8.根据权利要求7所述的洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,流动相的流速为0.5-0.7mL/min,进样量为45-55μL。
9.根据权利要求5~8任一项所述的洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,所述高效液相色谱蒸发光散射检测器检测的蒸发光散射检测器条件如下:雾化温度为90℃,蒸发温度为60℃,载气流速为1.2SLM。
10.根据权利要求4~8任一项所述的洋槐蜜成熟度的鉴别方法,其特征在于,在高效液相色谱蒸发光散射检测器检测前,还包括对洋槐蜜样品进行预处理的步骤,所述预处理包括:将所述洋槐蜜样品溶解于水中后,过滤处理。
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