CN113773302B

CN113773302B - 一种喹啉类化合物及其制备方法与应用

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Publication number: CN113773302B
Application number: CN202110978142.5A
Authority: CN
Inventors: 佘梦婷; 卢宇靖; 吴诗淇; 杨嘉伟; 邵炜杰; 陈泽鑫; 何泽洋; 罗竣仁; 郭晓纯
Original assignee: Guangdong University of Technology
Current assignee: Guangdong University of Technology
Priority date: 2021-08-24
Filing date: 2021-08-24
Publication date: 2022-12-20
Anticipated expiration: 2041-08-24
Also published as: CN113773302A

Abstract

本发明公开了一种喹啉类化合物及其制备方法与应用。本发明通过对喹啉结构的改造，引入吲哚苯乙烯基与环状胺基侧链得到所述的喹啉类化合物。本发明所述喹啉类化合物的结构式为式(I)，是一种与血管内皮生长因子(VEGF)G‑四链体具有较强选择性结合能力的荧光配体，能够稳定和调控VEGF G‑四链体功能，具有发展成抗肿瘤药物和血管生成相关药物的潜力。与此同时，本发明提供的配体在体外实验中能够从单链DNA、双链DNA和G‑四链体DNA中特异性识别出G‑四链体，细胞实验中能够对细胞中的G‑四链体进行染色。

Description

一种喹啉类化合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明内容涉及核酸化学与药物发现技术领域，公开了喹啉类化合物的制备及其作为VEGF G-四链体DNA配体和抗肿瘤药物的应用。

背景技术

实体瘤的生长和转移依赖于肿瘤内新生血管形成，新生血管所提供的氧及营养物质能够满足实体瘤代谢生长需要。与正常组织中的血管相比，肿瘤血管无论在生成方式还是在结构和功能方面均异常，由此而形成的肿瘤内异常血流供应和微环境均有利于肿瘤的生长和转移，并且影响一些肿瘤治疗方法的效果。血管生成过程受许多血管生成因子的调节，例如血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子 (PDGF)和一氧化氮合酶(NOS)。在这些血管生成调节剂中，VEGF可以通过刺激血管内皮细胞的增殖、迁移、存活和通透性，作为肿瘤血管生成的有效介质发挥关键作用。目前已有几种具有不同机制的抗 VEGF药物已在癌症治疗中得到临床应用，包括贝伐单抗、索拉非尼和舒尼替尼。

G-四链体(G-quadruplex)是一种特殊的核酸二级结构，存在于真核生物基因组的重要区域，例如许多基因的端粒和启动子区域，这种结构可能在调节生物功能中发挥重要作用。因此，在过去的几十年里，G-四链体一直是新型抗癌药物的靶点。人VEGF基因启动子区域的上游(-85至-50)有一段富含鸟嘌呤的序列，并作为Sp1和Egr等转录因子的多重结合位点。研究表明，该序列可以形成特定的G-四链体结构，并且可能通过G-四链体配体对VEGF启动子进行转录控制。

因此，如果能够设计出选择性结合VEGF启动子特定碱基序列，调控启动子区G-四链体的形成、性质和结构转变，抑制VEGF基因的转录和表达活性，无疑是抑制肿瘤血管生长的新策略。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于，通过对喹啉结构的改造，提供一种对VEGF具有强结合能力并且能够稳定其结构的荧光配体，并能通过作用VEGF核酸二级结构产生生物活性。

本发明内容涉及核酸化学与药物发现技术领域，公开了一种喹啉类化合物，其特征在于，所述喹啉类化合物的结构如式(I)所示：

其中，R₁为选自甲基、羟基、酰胺基、羧基或磷酸基，所述n为碳原子数，n＝1～6的自然数。

R₂选自C1～C6羟基，、

优选地，其特征在于具有但不局限于式(II)结构：

本发明的反应通式如式(III)所示：

上述喹啉化合物合成方法，包括以下步骤：

S1：将反应物4-氯-2-甲基-喹啉添加到反应容器中，环丁砜作为溶剂加入，超声振荡使两者混合均匀，再迅速加入碘甲烷，4-氯-2-甲基-喹啉与碘甲烷的摩尔比为1∶(1.5～4)，在60-70℃，冷凝回流的条件下进行反应24～30h，反应结束后加入乙酸乙酯静置沉淀，真空抽滤后用少量乙酸乙酯进行清洗，得到墨绿色粉末。

S2：将上一步产物与反应物3-吲哚甲醛添加到反应容器中，溶剂 A加入，超声振荡使其混合均匀，再加入反应物a，摩尔比为1∶(1.2～2)∶ (1.2～2)，再加入200μL的催化剂。在60-100℃条件下进行反应12～24 h，反应结束后有沉淀析出，将沉淀的各组分通过柱层析的方式分离即可得到目标产物。其中，溶剂A可选为乙醇、正丁醇、甲醇等；催化剂可选为三乙胺、吡啶等。

本发明还提供了上述任意一项所述的喹啉类化合物在体外检测 G-四链体DNA的应用。

本发明还提供了上述任意一项所述的喹啉类化合物在细胞成像中检测G-四链体DNA的应用。

本发明还提供了上述任意一项所述的喹啉类化合物在抗肿瘤药物当中的应用。

本发明还提供了上述任意一项所述的喹啉类化合物在血管生成相关药物方面的应用。

本发明通过对喹啉结构的改造，引入吲哚苯乙烯基与环状胺基侧链，提供一种与血管内皮生长因子(VEGF)G-四链体具有较强结合能力的荧光配体，能够稳定和调控VEGFG-四链体功能，具有发展成抗肿瘤药物的潜力和血管生成相关药物方面的应用。与此同时，本发明提供的配体在体外实验中能够从单链DNA、双链DNA、G-四链体中特异性识别出G-四链体DNA，细胞实验中则能够对细胞中的G-四链体进行染色。

附图说明

图1为化合物1e滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图2为化合物1f滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图3为化合物1g滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图4为化合物1h滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图5为化合物1i滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图6为化合物1j滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图7为化合物1k滴定不同类型核酸的荧光柱状图；

图8为本化合物1f滴定VEGF G-四链体荧光图；

图9为化合物1f对da21，dt21，4a4t，ds26，ds12，4at，VEGF， bcl2，pu27，telo21，htg24等11种核酸在水溶液体系中的成像情况；

图10为化合物1f对dt21，ds26，4at，telo21，htg24，pu27，VEGF， bcl2等8种核酸在凝胶体系中的成像情况；

图11为商用染料SYBRgold对dt21，ds26，4at，telo21，htg24， pu27，VEGF，bcl2等8种核酸在凝胶体系中的成像情况；

图12为化合物1f对乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞成像图；

图13为化合物1f对VEGF G-四链体CD熔点稳定情况。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。除特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

实施例1：中间体A1的合成

反应式如式(1)所示，称取4g(11.26mmol)的4-氯-2-甲基喹啉置于防爆瓶中，20mL(210mmol)环丁砜作为溶剂，超声片刻使两者混合均匀，在通风橱条件下加入两倍摩尔量(22.52mmol)的碘甲烷，将反应体系置于由于锅中并打开磁力搅拌，反应温度为60℃，反应时间为24h；待反应体系冷却至室温后，加过量乙酸乙酯充分振荡，静置片刻，析出晶体，真空过滤，并用少量乙酸乙酯冲洗滤饼，烘干得到墨绿色粉末3.05g，薄板层析显示无副产物，粗产率为85％。

实施例2：目标化合物合成

(1)目标产物1e的合成

反应式如式(2)所示，称取0.2g(0.626mmol)的上一步产物A1和0.109g(0.751mmol)3-吲哚甲醛、0.086g(0.751mmol)4-哌啶甲醇置于防爆瓶中，3mL(34.25mM)乙醇作为溶剂，超声片刻使其混合均匀，将反应体系置于油浴锅中并打开磁力搅拌，反应温度为 60℃，反应时间为12h；待反应体系冷却至室温后，会有固体析出，抽滤并用少量乙酸乙酯洗涤，最终获得棕黄色粉末0.204g，产率为 62％。目标产物1e氢谱数据如下：¹H NMR(400MHz，DMSO d6)δ 11.99(s，1H)，8.24(dd，J＝15.7，12.3Hz，2H)，8.19-8.12(m，2H)，8.09(d，J＝7.6Hz，1H)，7.99(t，J＝7.9Hz，1H)，7.71(t，J＝7.6Hz，1H)，7.55 -7.51(m，1H)，7.47(d，J＝20.1Hz，1H)，7.40(d，J＝15.7Hz，1H)，7.32 -7.23(m，2H)，4.62(t，J＝5.2Hz，1H)，4.23(s，3H)，4.10(t，J＝16.3Hz， 2H)，3.39(dd，J＝12.8，7.1Hz，3H)，3.31(s，1H)，1.92(d，J＝11.2Hz，2H)， 1.86-1.77(m，1H)，1.53(dd，J＝21.5，11.4Hz，2H).表明本发明实施例 2-(1)成功喹啉类化合物1e。

(2)目标产物1f的合成

反应式如式(3)所示，称取0.2g(0.626mmol)的上一步产物A1和0.109g(0.751mmol)3-吲哚甲醛、0.097g(0.751mmol)4-哌啶乙醇置于防爆瓶中，3mL(34.25mM)乙醇作为溶剂，超声片刻使其混合均匀，将反应体系置于油浴锅中并打开磁力搅拌，反应温度为 60℃，反应时间为12h；待反应体系冷却至室温后，会有固体析出，抽滤并用少量乙酸乙酯洗涤，最终获得深棕黄色粉末0.220g，产率为 65％。目标产物1f氢谱数据如下：¹H NMR(400MHz，DMSO d6)δ 11.99(s，1H)，8.24(dd，J＝13.9，12.8Hz，2H)，8.16(d，J＝6.7Hz，2H)，8.09(d，J＝8.2Hz，1H)，7.99(t，J＝7.7Hz，1H)，7.71(t，J＝7.6Hz，1H)， 7.53(dd，J＝6.3，2.3Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.40(d，J＝15.7Hz，1H)，7.30 -7.23(m，2H)，4.46(t，J＝5.0Hz，1H)，4.23(s，3H)，4.08(t，J＝11.3Hz， 2H)，3.53(dd，J＝11.6，6.2Hz，2H)，3.31(d，J＝12.9Hz，2H)，1.93(d，J＝ 12.3Hz，2H)，1.84(s，1H)，1.57-1.45(m，4H).表明本发明实施例2-(2) 成功喹啉类化合物1f。

(3)目标产物1g的合成

反应式如式(4)所示，称取0.2g(0.626mmol)的上一步产物 A1和0.109g(0.751mmol)3-吲哚甲醛、0.096g(0.751mmol)4-哌啶甲酰胺置于防爆瓶中，3mL(34.25mM)乙醇作为溶剂，超声片刻使其混合均匀，将反应体系置于油浴锅中并打开磁力搅拌，反应温度为60℃，反应时间为12h；待反应体系冷却至室温后，会有固体析出，抽滤并用少量乙酸乙酯洗涤，最终获得棕红色粉末0.232g，产率为69％。目标产物1g氢谱数据如下：¹H NMR(400MHz，DMSO d6) δ11.97(s，1H)，8.25(dd，J＝12.2，9.6Hz，2H)，8.18-8.14(m，2H)，8.10(d，J＝7.5Hz，1H)，8.03-7.97(m，1H)，7.72(t，J＝7.6Hz，1H)，7.55- 7.50(m，2H)，7.41(d，J＝15.6Hz，2H)，7.27(pd，J＝7.1，3.5Hz，2H)，6.92 (s，1H)，4.24(s，3H)，4.10(d，J＝13.0Hz，2H)，3.39(d，J＝11.7Hz，2H)， 2.60-2.52(m，1H)，1.94(dt，J＝21.3，11.7Hz，4H).表明本发明实施例 2-(3)成功喹啉类化合物1g。

(4)目标产物1h的合成

反应式如式(5)所示，称取0.2g(0.626mmol)的上一步产物 A1和0.109g(0.751mmol)3-吲哚甲醛、0.197g(0.751mmol)4-(2，4- 二氟苯甲酰基)-哌啶盐酸盐置于防爆瓶中，3mL(34.25mM)乙醇作为溶剂，200μL三乙胺作为催化剂，超声片刻使其混合均匀，将反应体系置于油浴锅中并打开磁力搅拌，反应温度为60℃，反应时间为 12h；再通过柱层析对产物中各组分进行分离，最终获得橙红色粉末 0.179g，产率为45％。目标产物1h氢谱数据如下：¹H NMR(400MHz， DMSO d6)δ12.05(s，1H)，8.26(dd，J＝12.2，7.7Hz，2H)，8.21-8.07(m， 3H)，8.06-7.94(m，2H)，7.71(t，J＝7.6Hz，1H)，7.54(t，J＝4.3Hz，2H)，7.48(ddd，J＝11.6，9.3，2.4Hz，1H)，7.42(d，J＝15.7Hz，1H)，7.35-7.23 (m，3H)，4.25(s，3H)，4.11(d，J＝13.1Hz，2H)，3.61(t，J＝10.6Hz，1H)， 3.50(t，J＝11.6Hz，2H)，2.11(d，J＝10.9Hz，2H)，1.95(dd，J＝22，1，10.9 Hz，2H).表明本发明实施例2-(4)成功喹啉类化合物1h。

(5)目标产物1i的合成

反应式如式(6)所示，称取0.2g(0.626mmol)的上一步产物A1和0.109g(0.751mmol)3-吲哚甲醛、0.145g(0.751mmol)4-派啶乙酸甲酯盐酸盐，3mL(34.25mM)乙醇作为溶剂，200μL三乙胺作为催化剂，超声片刻使其混合均匀，将反应体系置于油浴锅中并打开磁力搅拌，反应温度为60℃，反应时间为12h；再通过柱层析对产物中各组分进行分离，最终获得橙黄色粉末0.153g，产率为43％。目标产物1i氢谱数据如下：¹H NMR(400MHz，DMSOd6)δ11.99(s， 1H)，8.24(dd，J＝16.6，12.2Hz，2H)，8.15(dd，J＝7.2，3.5Hz，2H)，8.08 (d，J＝8.4Hz，1H)，8.02-7.97(m，1H)，7.71(t，J＝7.4Hz，1H)，7.54(dd， J＝6.3，2.4Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.41(d，J＝15.7Hz，1H)，7.30-7.24 (m，2H)，4.24(s，3H)，4.09(d，J＝12.8Hz，2H)，3.64(s，3H)，3.32(s，2H)， 2.42(d，J＝7.0Hz，2H)，2.16-2.09(m，1H)，1.93(d，J＝11.4Hz，2H)， 1.59(dd，J＝21.8，11.3Hz，2H).表明本发明实施例2-(5)成功喹啉类化合物1i。

(6)目标产物1j的合成

反应式如式(7)所示，称取0.1g(0.176mmol)1i于圆底烧瓶中，1mL(24.25mM)甲醇作为溶剂溶解，加入0.2mmol的NaOH，反应16h后，使用HCl将反应体系pH调节为4，黄色粉末析出，抽滤得到0.056g，产率为58％。目标产物1j氢谱数据如下：¹H NMR (400MHz，DMSO-d6)δ12.17(s，1H)，8.28-8.22(m，2H)，8.16(d，J＝ 3.7Hz，2H)，8.08(d，J＝8.4Hz，1H)，8.02-7.97(m，1H)，7.71(t，J＝7.5 Hz，1H)，7.56-7.50(m，2H)，7.41(d，J＝15.7Hz，1H)，7.30-7.23(m， 2H)，4.24(s，3H)，4.09(d，J＝12.6Hz，2H)，3.64(s，1H)，3.37(s，1H)，2.42 (d，J＝7.0Hz，1H)，2.32(d，J＝7.0Hz，1H)，2.15-2.06(m，1H)，1.97- 1.89(m，2H)，1.58(q，J＝12.0Hz，2H).表明本发明实施例2-(6)成功喹啉类化合物1i。

(7)目标产物1k的合成

反应式如式(8)所示，称取0.1g(0.157mmol)1h于圆底烧瓶中，1mL(24.25mM)甲醇作为溶剂溶解，置于冰浴环境下，将NaBH4 缓慢加入反应体系中，反应2h后，加入饱和NH₄Cl溶液将反应体系 pH调节为7，橙红色固体析出，抽滤并用水洗涤，得到橙色固体0.042 g，产率为42％。目标产物1k氢谱数据如下：¹H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ12.14(s，1H)，8.27-8.20(m，2H)，8.15(q，J＝2.4Hz，2H)， 8.06(d，J＝8.3Hz，1H)，7.98(t，J＝7.9Hz，1H)，7.71(t，J＝7.6Hz，1H)， 7.60-7.52(m，2H)，7.48(s，1H)，7.40(d，J＝15.7Hz，1H)，7.29-7.18 (m，3H)，7.14(td，J＝8.5，2.3Hz，1H)，5.60(d，J＝4.8Hz，1H)，4.75-4.69 (m，1H)，4.23(s，3H)，4.16-4.06(m，2H)，3.30-3.20(m，2H)，2.03-1.92 (m，2H)，1.67(q，J＝12.1Hz，2H)，1.55(d，J＝12.4Hz，1H).表明本发明实施例2-(7)成功喹啉类化合物1k。

实施例3：化合物1e-1k荧光配体对不同核酸选择性的荧光光谱实验

将5mM的本发明制备的化合物1e-1k分别用10mM Tris溶液 (含有60mM KCl)稀释成5μM的浓度，再加入不同种类的核酸，用荧光分光光度计(狭缝宽度＝2.5，扫描速度＝200nm，化合物1e、 1f：Ex＝421nm；化合物1g、1h、1i、1j、1k：Ex＝450nm)测出其各自的荧光强度，图1-7分别为化合物1e-1k七种荧光配体分别滴定 da21等2种单链DNA；ds12等4种双链DNA；VEGF等4种启动子 G-四链体DNA和telo21等2种端粒G-四链体的荧光数据的柱状图。

从图结果可以看出，化合物1e-1k在体外实验中都能够区分单链 DNA和双链DNA与G-四链体，具有很好的核酸区分性。

表1 本发明所述核酸的种类、序列及类别信息

实施例4

溶液体系成像

将5mM的本发明制备的化合物1f分别用10mM Tris溶液(含有60mM KCl)稀释成5μM的浓度，每个玻璃瓶分别加入500μL化合物溶液，并且按照空白组(等量的含有60mM KCl的Tris溶液)， da21，dt21，4a4t，ds26，ds12，4at，VEGF，bcl2，pu27，telo21，htg24 的顺序加入到玻璃瓶中，核酸浓度为18μM，充分混匀后到紫外灯下进行成像拍照。

实验结果如图9所示，化合物1f与G-四链体DNA结合可产生较强的荧光现象，而对双链DNA，单链DNA荧光较弱，说明化合物 1f在水溶液体系中可以从双链DNA和单链DNA中识别出G-四链体，对G-四链体具有良好的选择性。

实施例5

核酸凝胶电泳实验

电泳缓冲液与溶液的配置：用27g Tris，13.5g硼酸和2.0811g EDTA得到5×TBE电缓冲液、10％的过硫酸铵溶液：将29g丙烯酰胺和1g N，N-亚甲基双烯酰胺定容到100mL后得到29％丙烯酰胺加1％N，N-亚甲基双烯酰胺溶液。

制胶：将上述配置的溶液按照一定的配比制成胶体溶液，混匀后打进夹板中，然后放入数字，完成后静置至胶成型。

配样：配置含有loading buffer的DNA浓度为30μM，加入到 well中。

跑胶：将上述溶液加入到胶板跑道中，将其放入电泳槽中，用1 ×TBE溶液作为电泳液，45伏电压跑胶1h，然后用100伏电压跑胶 2h。

凝胶成像：将跑完的胶分别用5μM的化合物1f和商用染料SYBR gold染色，放置在摇床上20min，最后放入凝胶成像仪中拍照。

结果见图10-11，从图中可以看出化合物1f相较于商用染料 SYBR gold，只对G-四链体核酸能够产生荧光，说明化合物1f在凝胶电泳体系中可以从双链DNA和单链DNA中识别出G-四链体，对 G-四链体具有良好的选择性。

实施例6

化合物1f细胞成像实验

细胞染色：将乳腺癌细胞(MCF-7)细胞接种在激光共聚焦专用细胞培养皿中，使细胞的密度约为10000个/mL，然后在37℃、5％ CO₂环境下培养24h。接着弃去培养皿中的细胞培养液，用预冷的 1×PBS洗3次，然后再加入预冷的纯甲醇1.5mL常温避光放置5min。弃去上步培养皿中的溶液，用预冷的1×PBS洗3次，在上述培养皿中分别加入1mL 5uM的化合物1f，然后避光放置30min。弃去上步培养皿中的化合物溶液，用预冷的1×PBS洗3次，在上述培养皿中加入5uM的Hoehst溶液1mL并37℃避光放置15min，然后再用预冷的1×PBS洗6次，每次浸泡5min，最后在激光共聚焦显微镜下观察细胞染色情况。

DNA酶与RNA酶消化：将乳腺癌细胞细胞(MCF-7)细胞分别接种在激光共聚焦专用细胞培养皿中，使细胞的密度约为10000个 /mL，然后在37℃、5％CO₂环境下培养24h。接着弃去培养皿中的细胞培养液，用预冷的1×PBS洗3次，然后再加入预冷的纯甲醇1.5mL 常温避光放置5min。弃去上步培养皿中的溶液，用预冷的1×PBS洗 3次，在上述培养皿中分别加入1mL 5μM的化合物1f，然后放置30 min。弃去上步培养皿中的化合物溶液，用预冷的1×PBS洗3次，在上述培养皿中加入5μM的Hoehst溶液1mL并37℃放置15min，然后再用预冷的1×PBS洗6次，每次浸泡5min。在一个培养皿中加入DNA酶进行消化，一个皿中加入RNA酶进行消化，最后在激光共聚焦显微镜下观察细胞染色情况。

结果见图12，化合物1f分别与细胞核染料Hoehst复染MCF-7 细胞的细胞成像图，从图中可知，该荧光配体作用于细胞核内，并且能够与细胞核G-四链体染料Hoehst共定位；经过DNA酶消化后，荧光消失，而经过RNA酶消化的细胞荧光没有明显变化，由此可以证明，化合物1f染色位置为细胞核的G-四链体DNA，能够在细胞体系内对G-四链体DNA进行成像和检测。

实施例7

化合物1f与VEGF G-四链体的结合能力研究

小分子荧光配体与G-四链体DNA的结合能力K_a值是衡量其作为G-四链体DNA荧光配体的重要指标。通过实施例3的荧光滴定实验数据。计算其与G-四链体DNA相互作用的结合能力，计算公式如下：

F/F₀＝1+(Q-1)/2{N+1+X-[(X+1+N)²4X]^1/2}

其中，F₀代表不加入核酸时化合物的荧光强度，F代表加入核酸时化合物的荧光强度，F_max代表滴定饱和时的荧光强度，N＝(K_aC_dye)^-1，Q＝F_max(F₀)^-1，X＝nC_DNA(C_dye)^-1，K_a＝K_d ^-1。经计算，化合物1f与VEGF G-四链体为14.29*10⁵M^-1，具有高结合能。

实施例8

化合物1f对VEGF G-四链体的结合能力研究

通过CD熔点实验测试化合物对G-四链体的稳定情况。CD熔点实验通过Chirascan分光光度计进行测量。用10mM Tris-HCl缓冲溶液(含20mM KCl，pH＝7.4)制备5μM浓度的VEGF G4-DNA。在25-95℃范围内记录数据，加热速率为1.0℃/min。接着加入10 μM化合物1f后测试CD熔点变化。最后使用Origin 9.0进行数据的最终分析。结果如图13所示，加入化合物1f后，VEGF G4的熔点升高了7.35℃，说明化合物1f具有稳定VEGF G-四链体的作用。通过稳定血管内皮生长因子G-四链体(VEGF G-四链体)，提高了通过G- 四链体配体对VEGF进行转录调控的可能性。

实施例9

化合物1e-1k对乳腺癌细胞(MCF-7)细胞毒性实验

将乳腺癌细胞(MCF-7)接种至96孔板中培养，使每孔细胞数量为3000个，然后在37℃、5％CO₂环境下培养；24h后细胞贴壁，弃去96孔板中的培养基，加入用培养基配置的浓度为40、30、20、 10、5、2.5、1.25μM的化合物1e溶液(化合物1f-1k的细胞毒实验操作同化合物1e)，孵育48h后，弃去含有化合物的培养基，每孔100 μL的0.5mg/mL的MTT，孵育4h后，弃去MTT溶液，每孔加入 100μL DMSO，置于摇床上孵育20min，用酶标仪测量其吸光度值，测量波长为570nm。细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)见表2。

表2 化合物1e-1f对MCF-7细胞的IC₅₀

从表2可以看出，化合物1f、1h、1i、1k对乳腺癌细胞(MCF- 7)具有比较大的细胞毒性，较低浓度即可抑制癌细胞的生长，由此可以看出化合物1f、1h、1i、1k具有作为抗肿瘤药物的潜力。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合和简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。

Claims

1.一种喹啉类化合物在体外检测G-四链体DNA的应用，其特征在于，所述喹啉类化合物的结构式如式(I)中1e-1k所示：

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2.一种喹啉类化合物在非诊断和治疗目的的细胞成像中检测G-四链体DNA的应用，其特征在于，所述喹啉类化合物的结构式如式(1)中1e-1k所示：

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