CN113728922A - 一种鱼腥草种植苗制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种鱼腥草种植苗制备方法,包括:制备桔青霉孢子悬浊液,提取鱼腥草的组织,对所述组织进行无菌化处理得到鱼腥草的外植体,将所述外植体置于所述桔青霉孢子悬浊液中并震荡培养,得到带菌外植体,将所述带菌外植体移入无菌培养基中,培养得到带菌幼苗,培养所述带菌幼苗,得到鱼腥草种植苗。本发明实施例提供一种鱼腥草种植苗制备方法,通过将鱼腥草外植体与桔青霉真菌孢子悬浊液混合并在无菌条件下培养,使得桔青霉真菌能够与鱼腥草外植体充分共生,得到的种植苗在生产种植过程中根系发达,植株长势旺盛。

Description

一种鱼腥草种植苗制备方法
技术领域
本发明涉及鱼腥草育苗技术领域,具体而言,涉及一种鱼腥草种植苗制备方法。
背景技术
鱼腥草是中国传统中药之一,可用来治疗于肺痈吐脓、痰热喘咳等症,同时鱼腥草也是西南地区受人喜爱的蔬菜。随着生活水平的不断提高,居民对鱼腥草的产量和品质有了更高的追求。
然而,由于鱼腥草本身性质以及传统的选育技术手段的限制,目前单位面积的土地上鱼腥草的产量依然不高,仍然存在鱼腥草产量无法满足群众需求的问题,如何提高鱼腥草产量亟待解决。为此,提出一种鱼腥草种植苗制备方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种鱼腥草种植苗制备方法,其能够至少部分地克服了现有技术中的不足。
根据本发明的一个方面,提供一种鱼腥草种植苗制备方法,包括:
制备桔青霉真菌孢子悬浊液;
提取鱼腥草的组织,对所述组织进行无菌化处理得到鱼腥草的外植体;
将所述外植体置于所述桔青霉孢子悬浊液中,于16℃至30℃下震荡培养不小于0.5小时,得到带菌外植体;
将所述带菌外植体移入无菌培养基中,培养得到鱼腥草带菌幼苗;
培养所述鱼腥草带菌幼苗,得到鱼腥草种植苗。
优选地,所述桔青霉孢子悬浊液的孢子浓度为102CFU/ml至106CFU/ml。
优选地,所述桔青霉孢子悬浊液的孢子浓度为103CFU/ml。
优选地,所述震荡培养的时间为0.5小时至2小时。
优选地,所述培养所述鱼腥草带菌幼苗,得到鱼腥草种植苗包括:
制备无菌培养土;
将所述鱼腥草带菌幼苗植入所述无菌培养土,于避免强光直射条件下培养12至16天,得到所述鱼腥草种植苗。
优选地,所述将所述鱼腥草带菌幼苗植入所述无菌培养土包括选取株高3厘米至7厘米的所述鱼腥草带菌幼苗;
将所述鱼腥草带菌幼苗植入所述无菌培养土中,种植深度为2-3cm。。
优选地,所述制备无菌培养土包括:
选取有机质含量500-2000克/千克、粘粒硅铝率2.0至2.5、硅铁铝率1.8至2.2的黄壤,经过干燥、粉碎后,蒸汽灭菌不小于60分钟,得到所述无菌培养土。
优选地,所述于避免强光直射条件下培养12至16天,得到所述鱼腥草种植苗包括:
于避免强光直射条件下培养12至16天,每隔一天向所述鱼腥草带菌幼苗浇灌孢子浓度不低于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液,使得每棵所述鱼腥草带菌幼苗接种的桔青霉真菌孢子不低于20000CFU,得到所述鱼腥草种植苗。
优选地,所述提取鱼腥草植株的外植体包括:
提取鱼腥草的萌发种子、植株茎尖至少之一作为所述外植体。
优选地,所述无菌培养基选自1/2ms培养基或MS培养基。
本发明实施例提供一种鱼腥草种植苗制备方法,通过将鱼腥草外植体与桔青霉真菌孢子悬浊液混合并在无菌条件下培养,使得桔青霉真菌能够与鱼腥草外植体充分共生,得到的种植苗在生产种植过程中根系发达,植株长势旺盛。
附图说明
通过阅读参照以下附图所作的对非限制性实施例的详细描述,本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显:
图1是根据本发明的制备鱼腥草种植苗的流程图;
图2是根据本发明的由带菌幼苗培养为鱼腥草种植苗的流程图;
图3是根据本发明的实验例1-4及对比例1的实验数据。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。可以理解的是,此处所描述的具体实施例仅用于解释相关发明,而非对该发明的限定。为了便于描述,附图中仅示出了与发明相关的部分。
需要说明的是,在不冲突的情况下,本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面结合附图和实施例对本申请作进一步的详细说明。可以理解的是,此处所描述的具体实施例仅仅用于解释相关发明,而非对该发明的限定。另外还需要说明的是,为了便于描述,附图中仅示出了与发明相关的部分。
在本发明中的桔青霉为壳霉目、杯霉科、拉丁名为Penicillium citrinum的真菌。其孢子主要指来自桔青霉真菌菌丝的真菌繁殖器官,其具体获取方式可以是使用培养基培养桔青霉真菌,待长出菌丝后将菌丝刮下,并通过稀释、过滤等步骤得到的孢子,也可以是自野外条件下通过空气过滤等方法得到的孢子,属于桔青霉的真菌繁殖器官即可。
本发明中的种植苗,主要是指具备一定的植株高度和活性并能够被种植在适宜土壤中以获得鱼腥草成熟植株的苗体,这样可以在保持一些特殊形状的同时方便包装和运输,有利于大规模推广。
本发明中的鱼腥草为胡椒目三百草科蕺菜属蕺菜中下,学名为Houttuyniacordata Thunb.的植物。
本发明提供一种鱼腥草种植苗制备方法,如图1所示,包括如下处理:
S101:制备桔青霉孢子悬浊液;
S102:提取鱼腥草的组织,对组织进行无菌化处理得到鱼腥草的外植体;
S103:将外植体置于桔青霉孢子悬浊液中,于16℃至30℃下震荡培养不小于0.5小时,得到带菌外植体;
S104:将带菌外植体移入无菌培养基中,培养得到鱼腥草带菌幼苗;
S105:培养鱼腥草带菌幼苗,得到鱼腥草种植苗。
处理S101中,制取桔青霉孢子悬浊液的实现方法可以是在马铃薯葡萄糖琼脂培养基或葡萄糖培养基等本领域所熟知的培养基中培养桔青霉真菌,待长出菌丝后将其刮下并与无菌水混合后,经纱布过滤,收集滤液,即可得到桔青霉孢子悬浊液,也可以是对含有桔青霉真菌的培养物通过溶解、离心等步骤制得。桔青霉孢子悬浊液的孢子浓度不低于102CFU/ml,优选为102CFU/ml至106CFU/ml,更优选为103CFU/ml。适当的桔青霉孢子悬浊液的孢子浓度有助于在之后的外植体带菌过程中给外植体上种植足够的孢子数量,又避免由于孢子浓度过高导致干扰外植体今后的生长。经过实验研究,发现102CFU/ml至106CFU/ml为较好的桔青霉悬浊液孢子浓度区间。
处理S102中,提取鱼腥草的组织优选的可以是提取鱼腥草的根尖、茎段、茎尖、幼叶或幼胚,这些部分的植物细胞分化能力强,有利于后续培养形成完整的幼苗。处理S102中对鱼腥草的组织进行无菌化处理的方法可以是使用酒精、升汞或者漂白粉进行灭菌,具体灭菌操作为本领域技术人员所熟知,此处不再赘述。处理S102中的提取方法可以是剪断、剔取、掐尖等本领域技术人员所熟知的提取鱼腥草的组织的方法,此处不一一赘述。
需要说明的是,处理S101和处理S102可以互换,并不具备先后执行顺序,图1中仅为一种优选的实现方式的流程处理步骤,并不限定处理S101与处理S102的先后顺序。图1所示的实现方式中,可以降低所提取的鱼腥草的组织等待震荡培养的时间,提高鱼腥草的组织的活性。
处理S103中,外植体在桔青霉孢子悬浊液中的震荡培养时间优选地可以是0.5-2小时,这样培养时间充足,并且降低由于震荡培养时间过长导致外植体损坏的概率。
处理S104中,所使用的的无菌培养基可以是Murashige和Skoog于1962年设计的,含有硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾等大量元素及碘化钾、硼酸、硫酸镁等微量元素的为本领域技术人员所熟知的MS培养基,也可以是将MS培养基中各元素含量减半的1/2MS培养基,这样可以较为快速地将带菌外植体培养为带菌幼苗,培养过程中如控制温度湿度、补加电解质等操作均为本领域技术人员所熟知的植物克隆或植物组织培养的操作,此处不再赘述。
处理S105中,培养带菌幼苗至种植苗的目的是将在培养基中株高较低的幼苗培养成具备一定的植株高度和活性,并能够被种植在适宜土壤中以获得鱼腥草成熟植株的苗体,这样可以在保持一些特殊形状的同时方便包装和运输。
处理S105中培养带菌幼苗得到种植苗的具体实现方式,如图2所示,可以是如下处理:
S1051:制备无菌培养土;
S1052:将带菌幼苗植入无菌培养土,于避免强光直射条件下培养12至16天,得到鱼腥草种植苗。
处理S1051中的制备菌培养土的一种实现方式可以是:选取有机质含量500-2000克/千克、粘粒硅铝率2.0至2.5、硅铁铝率1.8至2.2的黄壤,经过干燥、粉碎后,蒸汽灭菌不小于60分钟,得到该无菌培养土。满足上述系数的黄壤经过试验证明,其肥力、蓄水性能和透气性能都能够较好地促进带菌幼苗成长为满足条件的鱼腥草种植苗
处理S1051中,优选的情况下,可以选取株高3厘米至7厘米的带菌幼苗,这样之后的培养存活率较高;将带菌幼苗植入处理S1050中所制备的无菌培养土中,种植深度为2-3cm。并于避免强光直射条件下培养12至16天,在此期间,为了进一步增加桔青霉真菌和鱼腥草的共生关系,可以每隔一天向带菌幼苗浇灌孢子浓度不低于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液,使得平均每棵带菌幼苗所接种的桔青霉真菌孢子不低于20000CFU,这样所得到的的鱼腥草种植苗所表现出的性状更加优良。
实验例1
使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养桔青霉真菌,培养直径为7厘米,待长出菌丝后,使用无菌刮片将菌丝刮下,将菌丝与纯水充分混合,并过滤得到桔青霉孢子悬浊液,调节该桔青霉孢子悬浊液至浓度为102CFU/ml。
提取鱼腥草的茎尖0.5厘米,使用75%酒精对该茎尖进行无菌化处理,得到外植体。
将外植体置于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液中,于24℃下震荡培养1小时,得到带菌外植体。
将带菌外植体移入1/2MS无菌培养基中,培养得到带菌幼苗。
选取株高3厘米至7厘米的带菌幼苗,移植入有机质含量1500克/千克、粘粒硅铝率2.0、硅铁铝率2.0并经过蒸汽灭菌90分钟的黄壤,在避免强光直射条件下培养14天,得到鱼腥草种植苗。
实验例2
使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养桔青霉真菌,培养直径为7厘米,待长出菌丝后,使用无菌刮片将菌丝刮下,将菌丝与纯水充分混合,并过滤得到桔青霉孢子悬浊液,调节该桔青霉孢子悬浊液至浓度为103CFU/ml。
提取鱼腥草的茎尖0.5厘米,使用75%酒精对该茎尖进行无菌化处理,得到外植体。
将外植体置于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液中,于24℃下震荡培养1小时,得到带菌外植体。
将带菌外植体移入1/2MS无菌培养基中,培养得到带菌幼苗。
选取株高3厘米至7厘米的带菌幼苗,移植入有机质含量1500克/千克、粘粒硅铝率2.0、硅铁铝率2.0并经过蒸汽灭菌90分钟的黄壤,在避免强光直射条件下培养14天,得到鱼腥草种植苗。
实验例3
使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养桔青霉真菌,培养直径为7厘米,待长出菌丝后,使用无菌刮片将菌丝刮下,将菌丝与纯水充分混合,并过滤得到桔青霉孢子悬浊液,调节该桔青霉孢子悬浊液至浓度为106CFU/ml。
提取鱼腥草的茎尖0.5厘米,使用75%酒精对该茎尖进行无菌化处理,得到外植体。
将外植体置于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液中,于24℃下震荡培养1小时,得到带菌外植体。
将带菌外植体移入1/2MS无菌培养基中,培养得到带菌幼苗。
选取株高3厘米至7厘米的带菌幼苗,移植入有机质含量1500克/千克、粘粒硅铝率2.0、硅铁铝率2.0并经过蒸汽灭菌90分钟的黄壤,在避免强光直射条件下培养14天,得到鱼腥草种植苗。
实验例4
使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养桔青霉真菌,培养直径为7厘米,待长出菌丝后,使用无菌刮片将菌丝刮下,将菌丝与纯水充分混合,并过滤得到桔青霉孢子悬浊液,调节该桔青霉孢子悬浊液至浓度为102CFU/ml。
提取鱼腥草的茎尖0.5厘米,使用75%酒精对该茎尖进行无菌化处理,得到外植体。
将外植体置于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液中,于24℃下震荡培养1小时,得到带菌外植体。
将带菌外植体移入1/2MS无菌培养基中,培养得到带菌幼苗。
选取株高3厘米至7厘米的带菌幼苗,移植入有机质含量1500克/千克、粘粒硅铝率2.0、硅铁铝率2.0并经过蒸汽灭菌90分钟的黄壤,在避免强光直射条件下培养14天,每隔一天向所述带菌幼苗浇灌孢子浓度不低于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液,使得平均每棵所述带菌幼苗所接种的桔青霉真菌孢子不低于20000CFU,得到鱼腥草种植苗。
对比例1
提取鱼腥草的茎尖0.5厘米,使用75%酒精对该茎尖进行无菌化处理,得到外植体。
将外植体移入1/2MS无菌培养基中,培养得到幼苗。
选取株高3厘米至7厘米的幼苗,移植入有机质含量1500克/千克、粘粒硅铝率2.0、硅铁铝率2.0并经过蒸汽灭菌90分钟的黄壤,在避免强光直射条件下培养14天,得到鱼腥草种植苗。
检验方式:选取平均株高为10厘米的实验例1至4及对比例1所制得的鱼腥草种植苗各20株,共选取100株,移入有机质含量1500克/千克、粘粒硅铝率2.0、硅铁铝率2.0的黄壤,土壤厚度50厘米,栽培深度5厘米,保持25℃气温,湿度80%,每隔一天平均每株浇水30毫升,平均每株补充磷酸二氢钾10毫克,并在日均自然光照时间12小时的条件下生长30天,测量每个实验例及对比例的鱼腥草种植苗种植得到的植株的株高和根部长度,统计每组实验例及对比例的平均株高和平均根部长度,其结果如图3所示。
从图3中可以看出,实验例1至4所得到的鱼腥草种植苗在上述栽培条件下经过30天的培养,其平均株高范围在5.67厘米至7.17厘米,平均根部长度范围在4.11厘米至6.68厘米,远大于对比例1所制备的鱼腥草种植苗的平均株高为4.56厘米及平均根部长度为3.11厘米,充分证明了经过桔青霉真菌混合后,其对鱼腥草植株的生长有促进作用。
同时,实验例4所制备的鱼腥草种植苗在上述栽培条件下经过30天的培养,其平均株高为7.17厘米,平均根部长度为6.68厘米,略大于实验例1-3,可见在将带菌幼苗培养至鱼腥草种植苗的过程中,继续补充桔青霉真菌孢子对于之后的植株生长同样有一定的促进作用。
以上描述仅为本申请的较佳实施例以及对所运用技术原理的说明。本领域技术人员应当理解,本申请中所涉及的发明范围,并不限于上述技术特征的特定组合而成的技术方案,同时也应涵盖在不脱离发明构思的情况下,由上述技术特征或其等同特征进行任意组合而形成的其它技术方案。例如上述特征与本申请中公开的(但不限于)具有类似功能的技术特征进行互相替换而形成的技术方案。

Claims (10)

1.一种鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
制备桔青霉孢子悬浊液;
提取鱼腥草的组织,对所述组织进行无菌化处理得到鱼腥草的外植体;
将所述外植体置于所述桔青霉孢子悬浊液中,于16℃至30℃下震荡培养不小于0.5小时,得到带菌外植体;
将所述带菌外植体移入无菌培养基中,培养得到带菌幼苗;
培养所述带菌幼苗,得到鱼腥草种植苗。
2.如权利要求1所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述桔青霉孢子悬浊液的孢子浓度为102CFU/ml至106CFU/ml。
3.如权利要求2所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述桔青霉孢子悬浊液的孢子浓度为103CFU/ml。
4.如权利要求1所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述震荡培养的时间为0.5小时至2小时。
5.如权利要求1所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述培养所述带菌幼苗,得到鱼腥草种植苗的具体步骤包括:
制备无菌培养土;
将所述带菌幼苗植入所述无菌培养土,于避免强光直射条件下培养12至16天,得到所述鱼腥草种植苗。
6.如权利要求5所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述将所述带菌幼苗植入所述无菌培养土的具体步骤包括:
选取株高3厘米至7厘米的所述带菌幼苗;
将所述带菌幼苗植入所述无菌培养土中,种植深度为2-3cm。
7.如权利要求5所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述制备无菌培养土的具体步骤包括:
选取有机质含量500-2000克/千克、粘粒硅铝率2.0至2.5、硅铁铝率1.8至2.2的黄壤,经过干燥、粉碎后,蒸汽灭菌不小于60分钟,得到所述无菌培养土。
8.如权利要求5所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述于避免强光直射条件下培养12至16天,得到所述鱼腥草种植苗的具体步骤包括:
于避免强光直射条件下培养12至16天,每隔一天向所述带菌幼苗浇灌孢子浓度不低于102CFU/ml的桔青霉孢子悬浊液,使得平均每棵所述带菌幼苗所接种的桔青霉真菌孢子不低于20000CFU,得到所述鱼腥草种植苗。
9.如权利要求1所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述提取鱼腥草的组织的具体步骤包括:
提取鱼腥草的根尖、茎段、茎尖、幼叶、幼胚至少之一作为所述组织。
10.如权利要求1至8任一项所述的鱼腥草种植苗制备方法,其特征在于,所述无菌培养基选自1/2MS培养基或MS培养基。
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