CN113683653B - 一种腺苷晶型、其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种腺苷晶型、其制备方法及用途。该晶型使用Cu‑Kα辐射、以2θ角度表示的X‑射线粉末衍射图谱在5.5°±1、7.1°±1、13.5°±1、14.2°±1、14.8°±1、16.3°±1、18.3°±1和19.6°±1处具有衍射峰。该晶型具有稳定性良好，产品不易降解，能够满足生产、运输、储存的制药要求的优势，并且溶解速度快，显著缩短了制剂工艺时间。

Description

一种腺苷晶型、其制备方法和用途

本申请要求2021年6月28日提交的名称为“一种腺苷晶型、其制备方法和用途”、申请号为202110719209.3的中国发明专利申请的优先权。

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种腺苷晶型、该晶型的制备方法和用途。

背景技术

腺苷(Ado，adenosine)全称腺嘌呤核苷，由腺嘌呤和戊糖结合而成。其CAS号为58-61-7，化学名称为6-氨基-9-β-D-呋喃核糖基-9H-嘌呤，化学结构式如式I所示。

腺苷作为一种内源性活性物质，在诊断冠心病等临床多方面均有广泛的应用。腺苷既是腺嘌呤核苷酸的前体，又是其代谢产物，是一种广泛存在于有机体的生理调节物。腺苷可以激活腺苷受体(A受体)发挥生理和药理作用。到目前为止，已发现腺苷的4种受体，即A1、A2、A2b、A3受体。心脏中的Al受体主要分布于心房肌、心室肌、窦房结和房室细胞表面，腺苷及其类似物通过兴奋Al受体而产生负性变时、变力、变传导作用，通过受体后信号转导机制产生心肌保护作用。A2受体依据其与腺苷的亲和力分为高亲和力的A2受体和低亲和力的A2b受体。腺苷与A2受体结合后使cAMP增加，进而扩张血管平滑肌。腺苷与A3受体结合，增加超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽酶的活性，启动细胞的抗氧化***，减少心肌损伤。启动的A3受体又通过促进肥大细胞脱颗粒，增加肥大细胞过敏介质的释放。腺苷对心肌的保护作用机制可能为：(1)腺苷促进微血管血流量的保持；(2)腺苷抑制中性粒细胞的功能；(3)腺苷可以改善心肌能量供给；(4)腺苷抑制氧自由基的产生；(5)腺苷恢复钙平衡；(6)腺苷促进血管修复、抑制心室重构；(7)腺苷介导缺血预处理与缺血后处理；(8)腺苷抑制心肌细胞的凋亡。腺苷的心脏保护作用与A1、A2和A3受体的激动均有关系。

腺苷可以通过多种途径制备，包括化学合成法、生物发酵法以及通过生物组织分离纯化获得。专利CN1629178公开一种腺苷的制备方法，其中包括通过结晶的方式获得针状、柱状或片状结晶以提高腺苷制备的产率，但没有公开具体的晶型信息。

腺苷注射液的制剂浓度为3mg/mL，但腺苷在水中的溶解度为5.1mg/mL。因此在制剂浓配过程中，腺苷溶解度接近于饱和浓度，所以腺苷溶解需要较长的时间，成为了腺苷注射液制备过程中最长的工序之一。并且可能会在溶解过程中残留细小的未溶解的腺苷产品，从而导致腺苷注射液含量偏低或者不溶性微粒不合格的风险。

因此，当作为注射液原料药使用时，需要开发稳定性好，溶解速度快，作为药品可以有效延长其有效期的腺苷原料，进而缩短制剂的工时，并提高注射液的安全性。

发明内容

本发明的发明人考察了腺苷在不同结晶条件下得到的结晶产物，对所得结晶产物进行了X-衍射、红外检测以及热重分析和DSC检测，发现在某些特定的结晶条件下，可以得到一种稳定性良好的腺苷晶型。

本发明提供了一种腺苷晶型，其使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在5.5°±1、7.1°±1、13.5°±1、14.2°±1、14.8°±1、16.3°±1、18.3°±1和19.6°±1处具有衍射峰。

优选地，所述腺苷晶型的使用Cu-Ka辐射、以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在5.5°±1、7.1°±1、8.2°±1、11.4°±1、13.5°±1、14.2°±1、14.8°±1、16.3°±1、16.5°±1、18.3°±1、19.6°±1、21.4°±1、23.2°±1、24.7°±1、26.4°±1、27.9°±1、29.8°±1和36.2°±1处具有衍射峰。

更优选地，所述腺苷晶型的使用Cu-Kα辐射、以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱如图1所示。

所述腺苷晶型的差示扫描量热分析曲线在54.2±5℃、110.3±5℃、235.7±5℃处具有吸热峰，并且在151.7±5℃处具有一放热峰。

优选地，所述腺苷晶型的差示扫描量热分析曲线如图2所示。

优选地，所述腺苷晶型的热重分析曲线如图3所示。

优选地，本发明所述腺苷晶型的水分含量为8.0％～15.0％。

另一方面，本发明还提供了上述腺苷晶型的制备方法，其包括：将腺苷溶解于水和有机溶剂的混合溶液中，放置析晶。

在上述制备方法中，所述混合溶液的体积与腺苷重量之比可以为10～200mL:1g，优选为100～150mL:1g。

在上述制备方法中，所述混合溶液中的水和有机溶剂的体积比可以为1:0.1～10，优选为1:0.25～4。

在上述制备方法中，所述溶解的温度可以为30～85℃。

在上述制备方法中，所述有机溶剂可以选自四氢呋喃、乙腈、甲醇、乙醇或丙酮中的一种或多种。

在上述制备方法中，所述析晶在大气压或真空下，在0～30℃，优选15～30℃的温度下进行。

优选地，所述方法还包括在析晶后过滤和干燥晶体的步骤。

另一方面，本发明还提供了一种药物组合物，其包含上述腺苷晶型或包含上述制备方法制备的腺苷晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

另一方面，本发明还提供了上述腺苷晶型或上述制备方法制备的腺苷晶型在制备用于预防和/或治疗心脏疾病的药物中的用途。

优选地，所述心脏疾病为心绞痛、心机梗塞、心肌缺血或阵发性室上性心动过速。

另一方面，本发明还提供了上述腺苷晶型或上述制备方法制备的腺苷晶型在制备用于诊断心血管疾病、评价窦房结功能、判断心肌活力和冠心病预后评价的药物中的用途；优选地，所述心血管疾病为心动过速、隐性预激综合征、冠状动脉病和慢性冠脉综合征(CCS)。

本发明具有以下有益效果：

1.本发明制备的腺苷晶型稳定性良好，产品不易降解，能够满足生产、运输、储存的制药要求；

2.该产品溶解速度快，显著缩短了制剂工艺时间，不但可以避免配制过程中杂质的产生，并且可以减少样品被污染的风险，提高了制剂的安全性；

3.新晶型在光照、高温、高湿、受热等条件下稳定性均良好，产品也不易降解；

4.作为药品原料可以有效延长产品有效期，能够满足生产、运输、储存的制药要求；

5.生产工艺稳定、可重复、可控，能够适应工业化生产的需要。

附图说明

结合以下附图说明本发明的具体实施方案：

图1是本发明的实施例1制备的腺苷晶型的X-射线粉末衍射图。

图2是本发明的实施例1制备的腺苷晶型的DSC图谱。

图3是本发明的实施例1制备的腺苷晶型的TGA图谱。

图4是本发明的实施例1制备的腺苷晶型的DVS图谱。

图5是本发明的实施例1制备的腺苷晶型在DVS测试前后的X-射线粉末衍射对比图。

图6是本发明的实施例1制备的腺苷晶型在60℃的条件下考察30天后的X-射线粉末衍射图。

图7是本发明的实施例1制备的腺苷晶型光照30天后的X-射线粉末衍射图。

图8是本发明的实施例1制备的腺苷晶型在加速条件下(40℃，RH75％)考察6个月后的X-射线粉末衍射图。

图9是专利CN1629178公开的方法制备的腺苷晶型的TGA图谱。

图10为本发明的实施例1制备的腺苷晶型全部溶解后的配制溶液的HPLC色谱图。

图11为专利CN1629178A获得的晶型在配制过程中60min时的配制溶液的HPLC色谱图。

图12为专利CN1629178A获得的晶型全部溶解后(120min)的配制溶液的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明作进一步说明，以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但实施例本身并不以任何方式限制本发明。

本发明的腺苷晶型的粉末X-射线衍射(XRPD)数据由BrukerX-射线衍射仪测得，测试条件为：

射线：单色Cu-Kα射线(λ＝1.5406)；

扫描方式：θ/2θ，扫描范围：5-40°；

电压：45KV，电流：40mA；

DSC、TGA测试条件为：

参数	TAG	DSC
			方法	线性升温	线性升温
样品盘	铝盘，敞口	铝盘，压盖/不压盖
			温度范围	室温～设定终点温度	25℃～设定终点温度
扫描速度(℃/min)	10	10
			保护气体	氮气	氮气

DVS测试条件为：

实施例1腺苷晶型的制备

将10g腺苷溶于85℃的1200mL乙腈水溶液(乙腈/水＝1/1)中，置于20℃真空条件下自然挥发，析出晶体，过滤干燥后得到腺苷8.9g，纯度99.7％。图1为该晶型的X-射线粉末衍射(XRPD)图谱，其在5.5°±1、7.1°±1、8.2°±1、11.4°±1、13.5°±1、14.2°±1、14.8°±1、16.3°±1、16.5°±1、18.3°±1、19.6°±1、21.4°±1、23.2°±1、24.7°±1、26.4°±1、27.9°±1、29.8°±1和36.2°±1处具有衍射峰。图2显示了该晶型的DSC图谱，其在54.2±5℃、110.3±5℃、235.7±5℃处具有吸热峰，并且在151.7±5℃处具有一放热峰。将此晶型定义为腺苷的新晶型。图3显示了该晶型的TGA图谱，可以看出该腺苷晶体的水分含量为12.1％。

实施例2腺苷晶型的制备

将10g腺苷溶于30℃的2000mL四氢呋喃水溶液(四氢呋喃/水＝10/1)中，置于30℃真空条件下自然挥发，析出晶体，过滤干燥后得到腺苷8.8g，纯度99.8％。得到的晶体样品的X-射线衍射图谱经研究比对，确定为与实施例1得到的晶型一致。该腺苷晶体的水分含量为8.0％。

实施例3腺苷晶型的制备

将10g腺苷溶于50℃的100mL甲醇和丙酮的水溶液(甲醇/丙酮/水＝4/1/50)中，置于15℃自然挥发，析出晶体，过滤干燥后得到腺苷9.0g，纯度99.9％。得到的晶体样品的X-射线衍射图谱经研究比对，确定为与实施例1得到的晶型一致。该腺苷晶体的水分含量为15.0％。

实施例4腺苷晶型的制备

将10g腺苷溶于40℃的1000mL乙醇水溶液(乙醇/水＝1/4)中，置于25℃真空条件下自然挥发，析出晶体，过滤干燥后得到腺苷8.5g，纯度99.9％。得到的晶体样品的X-射线衍射图谱经研究比对，确定为与实施例1得到的晶型一致。该腺苷晶体的水分含量为10.0％。

实施例5腺苷晶型的制备

将10g腺苷溶于30℃的1500mL丙酮和乙醇的水溶液(丙酮/乙醇/水＝2/2/1)中，置于0℃自然挥发，析出晶体，过滤干燥后得到腺苷7.8g，纯度99.8％。得到的晶体样品的X-射线衍射图谱经研究比对，确定为与实施例1得到的晶型一致。该腺苷晶体的水分含量为14.0％。

实施例6腺苷晶体TGA实验

TGA测试条件为：

参数	TAG
		方法	线性升温
样品盘	铝盘，敞口
		温度范围	室温～设定终点温度
扫描速度(℃/min)	10
		保护气体	氮气

分别选用实施例1的样品与专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末进行TGA测定。其结果如图3和图9所示。

结果表明本发明实施例1的样品为水合物，水分含量为12.1％，而专利CN1629178A制备的样品在200℃之前未发生失重，在260℃左右才开始失重，而该温度为腺苷的降解温度，说明其失重是由于腺苷的降解而非失水造成的，因此判断该腺苷粉末为无水物。

实施例7腺苷晶体DVS实验

选用实施例1的样品进行引湿性评估，结果如图4所示，腺苷晶型在20％RH～100％RH重量变化不大，仅在低于10％RH时出现明显失重，但随湿度增加，失去的水分子可以与腺苷重新结合，从而保持该晶型的稳定。并且如图5所示，比较DVS实验前后的XRPD图谱，腺苷晶型未发生变化。说明该晶型为稳定态晶型，具有较好的稳定性。

实施例8腺苷晶体影响因素实验

将实施例1制得的腺苷晶型均匀分摊至敞口培养皿中，厚度约5mm，分别放置于高温(60℃)和光照(4500lx±500lx)条件下，分别于5天、10天和30天取样检测，并与0天的结果进行对比，结果如表1和2所示。其中，腺苷晶型在60℃下30天后的X-射线粉末衍射图见图6，腺苷晶型在光照30天后的X-射线粉末衍射图见图7。

表1腺苷晶型高温稳定性实验结果

时间(天)	外观	纯度(％)
			0	白色粉末	99.7％
5	白色粉末	99.7％
			10	白色粉末	99.7％
30	白色粉末	99.7％

表2腺苷晶体光照稳定性实验结果

时间(天)	外观	纯度(％)
			0	白色粉末	99.7％
5	白色粉末	99.7％
			10	白色粉末	99.7％
30	白色粉末	99.7％

试验结论：本发明的晶体在高温和光照下稳定性良好，在30天以内能保持稳定的外观和纯度。

实施例9腺苷加速稳定性实验

将实施例1制得的包装好的腺苷晶型置于40℃、RH75％条件下的稳定性试验箱中，放置六个月，分别于3和6月末取样检测，并与0月的结果进行比较。结果见表3。6个月的样品的X-射线粉末衍射图见图8。

表3腺苷晶体加速稳定性实验结果

时间(月)	外观	纯度(％)
			0	白色粉末	99.7％
3	白色粉末	99.7％
			6	白色粉末	99.6％

试验结论：本发明的晶体在40℃、RH75％条件下稳定性良好，在6个月以内能够保持稳定的外观形态和纯度。

实施例10腺苷晶型溶解速度实验

将本发明腺苷晶型(由实施例1制备)和专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末分别溶于生理盐水，模拟浓配过程，比较其溶解速度，结果如表4所示：

表4腺苷晶体溶解速度实验结果

实验结果表明：本发明实施例1制备的腺苷晶体溶解速度明显快于专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末，从而可以明显缩短制剂生产工时。

实施例11不同温度下腺苷晶型溶解速度实验

将本发明腺苷晶型(由实施例1制备)和专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末在不同温度下分别溶于生理盐水，模拟浓配过程，比较其溶解速度，结果如表5所示：

表5腺苷晶体溶解速度实验结果

实验结果表明：本发明实施例1制备的腺苷晶体在不同温度下溶解速度明显快于专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末，尤其是在接近于室温的20℃时，相对比于专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末，其溶解速度的优势更加明显，说明本发明制备的腺苷晶体的溶解性更好，从而可以明显缩短制剂生产工时，不但可以避免配制过程中杂质的产生，并且可以减少样品被污染的风险。

实施例12腺苷晶型配制溶液稳定性试验

将本发明的腺苷晶型(由实施例1制备)和专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末分别溶于生理盐水，模拟浓配过程。具体实验参数如表6所示。

本发明的腺苷晶型在全部溶解后(5min)测定有关物质；专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末分别在配制过程中60min时和完全溶解后(120min)测定有关物质。

有关物质测定方法采用《中国药典》2020版中腺苷有关物质测定方法。图10为本发明的腺苷晶型全部溶解后的配制溶液的HPLC色谱图，图11、图12分别为专利CN1629178A获得的晶型在配制过程中60min时及全部溶解后(120min)的配制溶液的HPLC色谱图。

表6.模拟浓配过程具体实验参数

结论：本发明的腺苷晶型在生理盐水中全部溶解后，检测样品溶液中的有关物质，HPLC色谱图如图10所示，除腺苷外，其它杂质含量极小，样品溶液纯度高。专利CN1629178A方法获得的腺苷粉末在配制过程中60min时取样，检测样品溶液中的有关物质，如HPLC色谱图如图11所示，除腺苷外，其他杂质含量增加；当腺苷粉末在生理盐水中全部溶解后(120min)，检测样品溶液中的有关物质，HPLC色谱图如图12所示，除腺苷外，其它杂质，如腺嘌呤，含量明显增加，样品溶液纯度受到影响。

从以上可知，在长时间的配制过程中，因腺苷原料与外界环境接触时间增加，可能导致原料降解，从而造成杂质含量的增加。因此，在试验及生产过程中，腺苷溶液的配制时间为影响后续制剂质量的重要因素。

尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (13)

1.一种腺苷晶型，其特征在于：其使用Cu-Kα辐射、以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在5.5°±1、7.1°±1、13.5°±1、14.2°±1、14.8°±1、16.3°±1、18.3°±1和19.6°±1处具有衍射峰；所述腺苷晶型的水分含量为8.0％～15.0％。

2.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于：其使用Cu-Ka辐射、以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱在5.5°±1、7.1°±1、8.2°±1、11.4°±1、13.5°±1、14.2°±1、14.8°±1、16.3°±1、16.5°±1、18.3°±1、19.6°±1、21.4°±1、23.2°±1、24.7°±1、26.4°±1、27.9°±1、29.8°±1和36.2°±1处具有衍射峰。

3.根据权利要求2所述的晶型，其特征在于：其使用Cu-Kα辐射、以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱如图1所示。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的晶型，其特征在于，其差示扫描量热分析曲线在54.2±5℃、110.3±5℃、235.7±5℃处具有吸热峰，并且在151.7±5℃处具有一放热峰。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的晶型的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将腺苷溶解于水和有机溶剂的混合溶液中，放置析晶；所述混合溶液的体积与腺苷重量比为100～200mL:1g；所述有机溶剂选自四氢呋喃、乙腈、甲醇、乙醇或丙酮中的一种或多种；

其中，所述混合溶液中的水和有机溶剂的体积比为1:0.1～10；所述溶解的温度为30～85℃；所述析晶在大气压或真空下，在0～30℃的温度下进行；

所述方法还包括在析晶后过滤和干燥晶体的步骤。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述混合溶液的体积与腺苷重量比为100～150mL:1g。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中的水和有机溶剂的体积比为1:0.25～4。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述析晶在15～30℃的温度下进行。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1至4中任一项所述的腺苷晶型或权利要求5至8中任一项所述的方法制备的腺苷晶型，以及一种或多种药学上可接受的载体。

10.权利要求1至4中任一项所述的腺苷晶型或权利要求5至8中任一项所述的方法制备的腺苷晶型在制备用于预防和/或治疗心脏疾病的药物中的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述心脏疾病为心绞痛、心机梗塞、心肌缺血或阵发性室上性心动过速。

12.权利要求1至4中任一项所述的腺苷晶型或权利要求5至8中任一项所述的方法制备的腺苷晶型在制备用于诊断心血管疾病、评价窦房结功能、判断心肌活力和冠心病预后评价的药物中的用途。

13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述心血管疾病为心动过速、隐性预激综合征、冠状动脉病和慢性冠脉综合征(CCS)。