CN113648455B - 一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属烧伤皮肤创面修复的医用敷料技术领域，提供了一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料，以丙烯酸为pH敏感性单体，以甲基丙烯酸2‑乙酯、寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯为温度敏感性单体的pH/温度双敏型智能水凝胶，包载消炎药物硫酸庆大霉素；通过高压静电滴注法制备包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球，在核心球的表面包覆载有抗菌药物阿奇霉素的壳聚糖壳层，形成双层微球，并将该微球载入上述水凝胶，得到可精准缓释两种药物和一种蛋白的水凝胶敷料。根据创面微环境的pH/温度变化，该水凝胶可以达到药物的精准控释、提高药物利用率，是一种综合性能良好的半互穿网络结合双层微球结构的新型双缓释载药水凝胶敷料。

Description

一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料及其 制备方法和应用
技术领域
本发明属于烧伤皮肤创面修复用医用敷料技术领域，具体涉及一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料及其制备方法和应用。
背景技术
烧伤引起的皮肤受损，极易导致细菌感染，严重时会威胁患者生命健康。医用敷料作为伤口处的覆盖物，在伤口愈合的过程中，可以替代受损皮肤起到暂时性屏障作用，提供有利于创面愈合的环境。目前多数医用敷料为泡沫型敷料，若伤口出现大量渗液，吸收了大量渗液的泡沫反渗到创面上，创面长时间浸泡在渗液中容易出现发白、溃烂等现象。正常皮肤表面pH值为4.0-6.0、温度为36-37℃，在创面愈合的不同阶段，伴随着生理变化，皮肤表面微环境的pH值和温度会不断发生改变。水凝胶载药敷料可降解、生物相容性良好，能有效解决上述问题，但传统水凝胶载药敷料具有结构不均一、不能精准释放药物等缺陷。因此，研发出一种能根据烧伤创口处不同时期的微环境pH和温度变化的新型智能型载药水凝胶敷料，是临床的迫切需求。
微球具有最小的表面积与体积之比，可以提高包封率，降低药物释放速率，减少突释现象，其作为药物载体持续、可控的释放药物到达目标组织，被广泛应用于药物递送***。水凝胶是一种以水为分散介质的亲水但又不溶于水的三维网络结构高分子体系，疏松多孔的结构使其能够包载药物，通过环境应答控制药物释放速率，实现药物缓释。制备微球的壳聚糖、海藻酸钠都具有良好的生物相容性、生物可降解性，在一定程度上可提高所载药物的生物利用度。
发明内容
本发明针对传统泡沫型医用敷料会吸收大量渗液并反渗到创面上、造成创面发白溃烂的现象，提供了一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料及其制备方法和应用，采用物理交联的方法，利用过硫酸钾和硫代硫酸钠构成氧化还原体系，产生自由基，通过自由基聚合的方法制备温度/pH双敏感水凝胶，并载入双层微球。
本发明由如下技术方案实现：一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料，以丙烯酸为pH敏感性单体，以甲基丙烯酸2-乙酯、寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯为温度敏感性单体的pH/温度双敏型智能水凝胶，包载消炎药物硫酸庆大霉素；通过高压静电滴注法制备包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球，在核心球的表面包覆载有抗菌药物阿奇霉素的壳聚糖壳层，形成双层微球，将双层微球载入所得pH/温度双敏型智能水凝胶，得到半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料。
制备所述的半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料的方法，具体步骤如下：
（1）制备包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球：在质量浓度为1%～5%的海藻酸钠溶液中加入牛血清白蛋白，搅拌混合均匀，混合溶液通过高压静电滴注法匀速滴入质量浓度为1%～5%的氯化钙溶液中，同时以300 r/min的速度搅拌2 h使海藻酸钠与钙离子交联，反应完成后抽滤除去残留溶液，然后用质量浓度为0.9%的生理盐水冲洗后收集微球即为海藻酸钙-牛血清白蛋白核心球；其中：牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为5～50g/L；
（2）制备壳聚糖-阿奇霉素包载海藻酸钙-牛血清白蛋白核心球的双层微球：抽取体积浓度为1%的醋酸溶液，加入壳聚糖，以300 r/min的速度搅拌1 h使其混合均匀，得到壳聚糖醋酸溶液，其中壳聚糖与醋酸溶液的质量体积比为1%～5%；在上述溶液中加入阿奇霉素，混合搅拌均匀，得到阿奇霉素与壳聚糖溶液质量体积比为20%～30%的混合溶液；加入步骤（1）所制备的包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球，震荡1 h后抽滤除去残液，用质量浓度为0.9%的生理盐水冲洗后收集微球即为双层微球，-20 ℃预冻24 h后冷冻干燥，4 ℃储存；其中：海藻酸钙核心球与阿奇霉素-壳聚糖混合溶液体积比为5%～15%；壳聚糖为30～50万分子量，95%脱乙酰度；
（3）制备半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料：
a.将0.1g壳聚糖溶解于10mL体积分数为1%的醋酸水溶液中得到壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中加入0.4 mL丙烯酸、0.3396 mL甲基丙烯酸2-乙酯和0.095 mL寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯单体，搅拌均匀即为壳聚糖和单体混合溶液；其中壳聚糖为30～50万分子量，脱乙酰度95%；
b. 0.02～0.045g过硫酸钾和0.02～0.045g硫代硫酸钠混合物溶解在0.2 mL的水溶液中，将该混合溶液加入壳聚糖和单体混合溶液中，搅拌20 min使其充分溶解，继续搅拌，搅拌过程中均匀加入0.02～0.05g壳聚糖-阿奇霉素包载海藻酸钙-牛血清白蛋白核心球的双层微球和0.2～0.4 mL硫酸庆大霉素，搅拌均匀；
c.将步骤b所制备的混合溶液倒入模具中，持续通氮气除去气泡，封口，置于50℃水浴锅反应24 h，凝胶成型即为半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料。
步骤（1）中海藻酸钠溶液的质量浓度为2%；氯化钙溶液的质量浓度为4%；牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为25 g/L。
步骤（1）中海藻酸钠-牛血清白蛋白混合溶液通过高压静电滴注法匀速滴入氯化钙溶液的具体方法为：采用由静电场发生器和注射器泵组成的高压静电滴注设备，静电场发生器提供电场力，电压为9 kv；注射器为10 mL注射器，推注速度为5mm/h，针头为30 G医用注射针头，针头距液面10 cm，在注射器泵的推动力和电场力的作用下，从针头以液滴状滴入氯化钙溶液中，形成包封牛血清白蛋白的海藻酸钙微球。
步骤（2）中壳聚糖-醋酸溶液的质量体积比为2%，阿奇霉素与壳聚糖-醋酸溶液质量体积比为25%，海藻酸钙核心球与阿奇霉素-壳聚糖混合溶液的体积比为10%。
本发明的载药微球是将海藻酸钠、壳聚糖和药物通过化学方法制备成微米级的聚合物，使药物在指定部位缓慢释放，以发挥定向给药作用。
本发明通过控制双层载药微球、甲基丙烯酸2-乙酯、寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯、丙烯酸成分的比例，开发出一种综合性能良好的半互穿网络结合双层微球结构的新型双缓释载药水凝胶敷料，其能根据创面微环境pH和温度的变化释放出不同的药物，达到药物的精准控释，对满足当前烧伤患者急需缓释药物能力强、生物相容性好的智能医用敷料的临床需求具有重要意义。
本发明制得微米级别的双层球可有效增强水凝胶机械强度；壳聚糖有利于提高载药率和包封率；含甲基丙烯酸2-乙酯和寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯的水凝胶具有对温度敏感的特性，含丙烯酸的水凝胶具有对pH敏感的特性，能根据创面微环境的pH/温度变化，达到药物的精准控释。利用上述特征对复合敷料进行改性优化，开发出一种综合性能良好的半互穿网络结合双层微球结构的新型双缓释载药水凝胶敷料，可提高有效载药率。
本发明通过半互穿网络技术，制备以丙烯酸为 pH 敏感性单体和甲基丙烯酸2-乙酯、寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯为温度敏感性单体的pH/温度双敏型智能水凝胶；以该水凝胶为载体，载入壳聚糖-海藻酸钠双载不同抗菌药物的双层微球，构建一种半互穿网络包载双层微球的载药水凝胶敷料，该水凝胶辅料可有效提高载药率；同时根据创面微环境的调控，达到药物的精准控释，有利于创面愈合，为新型功能敷料的研发、应用提供科学依据。
在水凝胶合成过程中加入了具有特殊结构的单体，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸2-乙酯、丙烯酸，其能够根据环境的温度、pH变化做出有规律的调整。水凝胶中载入双层载药微球，在微球降解过程中缓慢释放药物，药物作用时间延长。
附图说明
图1为核心球药物牛血清白蛋白的释放曲线；
图2为双层微球药物阿奇霉素的释放曲线；
图3为双层微球药物阿奇霉素的包封率；
图4为水凝胶电镜照片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实例和实验所用的材料及设备如下：
材料：壳聚糖(分子量30～50万，脱乙酰度95%)，青岛海汇生物科技有限公司；海藻酸钠，天津光复试剂公司；无水氯化钙, 北京化工厂；PBS（pH=7.4），武汉博士德生物工程有限公司；冰醋酸（分析纯），上海试剂公司；硫酸庆大霉素，牛血清白蛋白（纯度>96%）上海源叶生物科技有限公司；阿奇霉素，北京普利莱基因技术有限公司；甲基丙烯酸2-乙酯（纯度>98%），寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯（纯度>98%），丙烯酸（纯度>98%），北京百灵威科技有限公司；过硫酸钾，硫代硫酸钠，天津科密欧试剂有限公司。
设备：分析天平（BS210s），北京赛多利斯天平有限公司；加热磁力搅拌器（95-1），上海司乐仪器有限公司；恒温水浴箱（XMTB），北京长风仪器仪表公司；真空冷冻干燥机（FD-1D-80），北京博医康实验仪器有限公司；扫描电子显微镜（TM-1000），上海立丸分析仪器有限责任公司；酶联免疫检测仪（1510，Thermo），美国。
实施例1：正交试验进行双层微球的制备，相关因素及对应水平如下：
首先进行四组正交试验，比较四组实验做出微球的形态样貌，确定包载牛血清白蛋白的海藻酸钙微球制备的最佳配方。
a.量取质量浓度为4%的海藻酸钠溶液2mL，按牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为12.5g/L，载入牛血清白蛋白，进行实验。
b.量取质量浓度为4%的海藻酸钠溶液2mL，按牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为25g/L，载入牛血清白蛋白，进行实验。
c.量取质量浓度为2%的海藻酸钠溶液2mL，按牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为12.5g/L，载入牛血清白蛋白，进行实验。
d.量取质量浓度为2%的海藻酸钠溶液2mL，按牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为25g/L，载入牛血清白蛋白，进行实验。
具体实验流程：
1.制备包载药物牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球
称量1g海藻酸钠溶于 49mL 双蒸水中，用磁力搅拌器搅拌 1h，充分溶解，配成质量分数为2%海藻酸钠溶液。
50mL 质量分数为1%～5%海藻酸钠溶液，各浓度配置方法如上。
称量4gCaCl2固体，溶于 96mL 蒸馏水中，充分溶解后0.22μm过滤器过滤除菌，配成质量分数为4%CaCl2溶液。
质量分数为1%～5%的CaCl2溶液，各浓度配置方法如上。
10mL 质量分数为1%～5%海藻酸钠溶液中加5～50mg牛血清白蛋白，搅拌混合均匀。
用10mL注射器抽取海藻酸钠-牛血清白蛋白混合液2mL，通过30G针头匀速滴入10mL浓度为1%～5%的CaCl2溶液中，针头距液面10cm，以300r/min的速度搅拌30min，使海藻酸钠与钙离子交联。
反应完成后抽滤除去残留溶液，0.9%生理盐水冲洗后收集微球，即制成包载牛血清白蛋白的 CA 核心球。
实施例1结果： a组、b组海藻酸钠溶液的质量浓度为4%，粘度过高，不易形成液滴，导致核心球直径过大或无法成球；c组制得的核心球存在粘连现象；d组成球顺利、无明显粘连现象。
实施例1结论：采用质量浓度为2%的海藻酸钠溶液2mL，按牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为25g/L，载入牛血清白蛋白，进行实验，成球结果较理想。
2.制备以壳聚糖壳层包载海藻酸钙核心球的双层微球
称量 1g壳聚糖(分子量30～50万，脱乙酰度95%)固体溶于49mL 体积分数为1%冰醋酸溶液中，搅拌 1h，充分溶解，配成50mL质量分数为2%壳聚糖溶液，加入阿奇霉素，搅拌混合均匀，得到阿奇霉素与壳聚糖溶液质量体积比为20%～30%的混合溶液。
将制得的核心球加入到50mL壳聚糖-阿奇霉素溶液中，震荡1h后抽滤除去残液，0.9%生理盐水冲洗后收集微球，即制得双层微球，-20℃预冻后冷冻干燥，4℃储存备用。
微球冷冻干燥后进行扫描电镜观察，计算牛血清白蛋白和阿奇霉素的包封率、载药率和释放情况。
实施例2：正交试验进行载药水凝胶的制备，相关因素及对应水平如下：
首先进行六组正交试验，改变交联剂过硫酸钾和硫代硫酸钠的含量，比较六组实验做出凝胶的大小及电镜形貌，确定水凝胶制备的最佳配方。
a.选用分子量为50万的壳聚糖0.1 g，冰醋酸10 mL，丙烯酸0.4 mL，甲基丙烯酸2-乙酯0.3396 mL，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯0.095 mL，0.02 g过硫酸钾和0.02 g硫代硫酸钠进行实验；
b.选用分子量为50万的壳聚糖0.1 g，冰醋酸10 mL，丙烯酸0.4 mL，甲基丙烯酸2-乙酯0.3396 mL，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯0.095 mL，0.025 g过硫酸钾和0.025 g硫代硫酸钠进行实验；
c.选用分子量为50万的壳聚糖0.1 g，冰醋酸10 mL，丙烯酸0.4 mL，甲基丙烯酸2-乙酯0.3396 mL，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯0.095 mL，0.03 g过硫酸钾和0.03 g硫代硫酸钠进行实验；
d.选用分子量为50万的壳聚糖0.1 g，冰醋酸10 mL，丙烯酸0.4 mL，甲基丙烯酸2-乙酯0.3396 mL，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯0.095 mL，0.035 g过硫酸钾和0.035 g硫代硫酸钠进行实验；
e.选用分子量为50万的壳聚糖0.1 g，冰醋酸10 mL，丙烯酸0.4 mL，甲基丙烯酸2-乙酯0.3396 mL，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯0.095 mL，0.04 g过硫酸钾和0.04 g硫代硫酸钠进行实验；
f.选用分子量为50万的壳聚糖0.1 g，冰醋酸10 mL，丙烯酸0.4 mL，甲基丙烯酸2-乙酯0.3396 mL，寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯0.095 mL，0.045 g过硫酸钾和0.045 g硫代硫酸钠进行实验。
具体实验流程为：
0.1 g壳聚糖（分子量50万，脱乙酰度95%）置于烧杯中，取10 mL体积分数为1%的醋酸水溶液，搅拌至完全溶解；称取0.4 mL的丙烯酸、0.3396 mL甲基丙烯酸2-乙酯和0.095mL寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯单体加入壳聚糖溶液中，充分搅拌30 min使其混合均匀。
0.03 g过硫酸钾和0.03 g硫代硫酸钠混合物溶解在0.2 mL的水溶液中，将其混合溶液加入壳聚糖和单体混合溶液中，搅拌20 min使其充分溶解，在搅拌过程中加入0.2～0.4 mL硫酸庆大霉素。
将混合溶液倒入模具中，持续通氮气15 min以除去气泡，封口，置于50℃水浴锅反应24 h至凝胶成型，将凝胶取出，切成均匀小片，冷冻干燥得样品。
实施例2结果：六组水凝胶均可成型，为乳白色； a组、b组交联剂过硫酸钾和硫代硫酸钠含量较低，制备得到的水凝胶较软；d组、e组、f组交联剂含量较高，制备得到的水凝胶过硬；c组成胶结果较理想；随着交联剂含量的增加，成胶体积增加，过硫酸钾和硫代硫酸钠构成氧化还原体系，二者含量越高，进行氧化还原反应时产生的自由基越多，通过自由基聚合方法制备得到的凝胶体积越大。
实施例2结论：低剂量交联剂时，成胶较软；高剂量交联剂时，成胶过硬，但成胶体积更大；交联剂过硫酸钾和硫代硫酸钠含量均为0.03 g时，成胶结果较理想。
实施例3：载双层微球水凝胶的制备，具体实验流程为：
0.1 g壳聚糖（分子量50万，脱乙酰度95%）置于烧杯中，取10 mL体积分数为1%的醋酸水溶液，搅拌至完全溶解；称取0.4 mL的丙烯酸、0.3396 mL甲基丙烯酸2-乙酯和0.095mL寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯单体加入壳聚糖溶液中，充分搅拌30 min使其混合均匀。
0.03 g过硫酸钾和0.03 g硫代硫酸钠混合物溶解在0.2 mL的水溶液中，将其混合溶液加入壳聚糖和单体混合溶液中，搅拌20 min使其充分溶解，在搅拌过程中加入0.2～0.4 mL硫酸庆大霉素并加入0.02～0.05 g双层微球。
将混合溶液倒入模具中，持续通氮气15 min以除去气泡，封口，置于50℃水浴锅反应24 h至凝胶成型，将凝胶取出，冷冻干燥得样品。
新型双层微球双缓释载药水凝胶制备中各因素及相应水平为正交试验确定的最佳配方，药物投放量均为制备过程中确定的最佳投放量。
双层微球结构的新型双缓释载药水凝胶制备过程中，各种所需因素及相应水平参考上述正交试验。比较上述正交试验的成胶情况，确定负载硫酸庆大霉素的水凝胶制备的最佳配方并测定硫酸庆大霉素的包封率、载药率和释放情况。
分别计算两种不同药物的包封率和载药量。以PBS作为缓释介质研究微球内蛋白在不同时间的累积释放量。取不同时间缓释上清和包载前蛋白原液进行体外活性测定。
以下结合附图将本发明做进一步说明：
图1所示，为核心球药物牛血清白蛋白的释放曲线，图中可知：1 h内出现了药物缓释情况，pH=7.25的缓冲液中，牛血清白蛋白释放率最高，为23.138%。
图2所示，为双层微球药物阿奇霉素的释放曲线，图中可知：72 h内药物释放完全，pH=9的缓冲液中，阿奇霉素释放率最高，为30.187%，pH=6.35、pH=7.4、pH=8.55时，药物释放率依次降低，分别为20.612%、14.016%、5.556%。图3所示，为双层微球药物阿奇霉素的包封率，图中可知：pH=9的缓冲液中，阿奇霉素包封率最高，为69.78%，pH=6.35、pH=7.4、pH=8.55时，药物包封率依次降低，分别为47.65%、32.40%、12.84%。
图4所示，为水凝胶电镜照片，图中可知：水凝胶具有明显的三维孔洞结构。
最后应说明的是：以上各实例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (5)

1.一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料，其特征在于：以丙烯酸为pH敏感性单体，以甲基丙烯酸2-乙酯、寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯为温度敏感性单体的pH/温度双敏型智能水凝胶，包载消炎药物硫酸庆大霉素；通过高压静电滴注法制备包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球，在核心球的表面包覆载有抗菌药物阿奇霉素的壳聚糖壳层，形成双层微球，将双层微球载入所得pH/温度双敏型智能水凝胶，得到半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料；
具体制备步骤如下：
（1）制备包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球：在质量浓度为1%-5%的海藻酸钠溶液中加入牛血清白蛋白，搅拌混合均匀，混合溶液通过高压静电滴注法匀速滴入质量浓度为1%～5%的氯化钙溶液中，同时以300 r/min的速度搅拌2 h使海藻酸钠与钙离子交联，反应完成后抽滤除去残留溶液，然后用质量浓度为0.9%的生理盐水冲洗后收集微球即为海藻酸钙-牛血清白蛋白核心球；其中：牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为5～50 g/L；
（2）制备壳聚糖-阿奇霉素包载海藻酸钙-牛血清白蛋白核心球的双层微球：抽取体积浓度为1%的醋酸溶液，加入壳聚糖，以300 r/min的速度搅拌1 h使其混合均匀，得到壳聚糖醋酸溶液，其中壳聚糖与醋酸溶液的质量体积比为1%～5%；在上述溶液中加入阿奇霉素，混合搅拌均匀，得到阿奇霉素与壳聚糖溶液质量体积比为20%～30%的混合溶液；加入步骤（1）所制备的包载牛血清白蛋白的海藻酸钙核心球，震荡1 h后抽滤除去残液，用质量浓度为0.9%的生理盐水冲洗后收集微球即为双层微球，-20 ℃预冻24 h后冷冻干燥，4 ℃储存；其中：海藻酸钙核心球与阿奇霉素-壳聚糖混合溶液体积比为5%～15%；壳聚糖为30～50万分子量，95%脱乙酰度；
（3）制备半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料：
a.将0.1g壳聚糖溶解于10mL体积分数为1%的醋酸水溶液中得到壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中加入0.4 mL丙烯酸、0.3396 mL甲基丙烯酸2-乙酯和0.095 mL寡聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯单体，搅拌均匀即为壳聚糖和单体混合溶液；其中壳聚糖为30～50万分子量，脱乙酰度95%；
b. 0.02～0.045g过硫酸钾和0.02～0.045g硫代硫酸钠混合物溶解在0.2 mL的水溶液中，将该混合溶液加入壳聚糖和单体混合溶液中，搅拌20 min使其充分溶解，继续搅拌，搅拌过程中均匀加入0.02～0.05g壳聚糖-阿奇霉素包载海藻酸钙-牛血清白蛋白核心球的双层微球和0.2～0.4 mL硫酸庆大霉素，搅拌均匀；
c.将步骤b所制备的混合溶液倒入模具中，持续通氮气除去气泡，封口，置于50℃水浴锅反应24 h，凝胶成型即为半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料。
2.根据权利要求1所述的一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料，其特征在于：步骤（1）中海藻酸钠溶液的质量浓度为2%；氯化钙溶液的质量浓度为4%；牛血清白蛋白与海藻酸钠溶液的质量体积比为25 g/L。
3.根据权利要求1所述的一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料，其特征在于：步骤（1）中海藻酸钠-牛血清白蛋白混合溶液通过高压静电滴注法匀速滴入氯化钙溶液的具体方法为：采用由静电场发生器和注射器泵组成的高压静电滴注设备，静电场发生器提供电场力，电压为9kv；注射器为10 mL注射器，推注速度为5mm/h，针头为30 G医用注射针头，针头距液面10 cm，在注射器泵的推动力和电场力的作用下，从针头以液滴状滴入氯化钙溶液中，形成包封牛血清白蛋白的海藻酸钙微球。
4.根据权利要求1所述的一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料，其特征在于：步骤（2）中壳聚糖-醋酸溶液的质量体积比为2%，阿奇霉素与壳聚糖-醋酸溶液质量体积比为25%，海藻酸钙核心球与阿奇霉素-壳聚糖混合溶液的体积比为10%。
5.权利要求1所述一种半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料的应用，其特征在于：所述半互穿网络包载双层微球的双缓释载药水凝胶敷料在制备伤口敷料中的应用。
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