CN113648405A - 一种口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物制剂领域。本发明涉及重组蛋白疫苗α1,3‑岩藻糖基转移酶纳米粒及其制备方法。本发明制备得到的重组蛋白疫苗α1,3‑岩藻糖基转移酶纳米粒，不仅能提高α1,3‑岩藻糖基转移酶在体肠吸收，还能提高巨噬细胞摄取α1,3‑岩藻糖基转移酶的能力，可用于预防和治疗幽门螺旋杆菌引起的感染。

Description

一种口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒及其制备方法
技术领域
本发明属于医药制剂领域，涉及一种口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒及其制备方法。
背景技术
幽门螺杆菌感染可引起胃十二指肠疾病，疫苗作为预防和治疗方法在全世界范围内被广泛采用，但疫苗常需采用注射给药，患者依从性较差，口服是患者最具依从性的给药途径。重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶可帮助幽门螺杆菌逃避宿主免疫监视，在幽门螺杆菌的定植和长期感染中起重要作用，但存在渗透性差，难以被肠道吸收，难以被淋巴组织中的抗原呈递细胞(巨噬细胞等)摄取等缺点，限制了该药在临床上的广泛应用。
疫苗纳米粒较疫苗常规剂型具有优势。本发明涉及的辅料聚酯材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物是由乳酸和羟基乙酸聚合而成的高分子化合物，具有良好的可降解性，作为载体可以负载抗原引起粘膜免疫反应。羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯作为肠溶材料包裹蛋白质药物有利于帮助疫苗克服恶劣的胃肠道环境。2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖可打开上皮细胞紧密连接，帮助抗原穿过上皮层，同时具有疫苗佐剂功能。本发明研究过程中，将卵白蛋白作为模型抗原，是因为卵白蛋白的分子量和等电点(43kDa、4.71)与α1,3-岩藻糖基转移酶的分子量和等电点相似(分别为53kDa、5.25)。
经查询专利及文献，目前尚无口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒的任何研究报道。本发明的纳米粒不仅能提高α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的在体肠吸收，还能提高巨噬细胞摄取α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的能力。本发明制备了口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒，可用于预防和治疗幽门螺旋杆菌引起的感染。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒配方及其制备方法。口服重组蛋白疫苗α1,3岩藻糖基转移酶纳米粒克服了α1,3-岩藻糖基转移酶渗透性差、在肠道吸收差、难以被淋巴组织中的抗原呈递细胞(巨噬细胞等)摄取等缺点，本发明的纳米粒不仅能提高α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的在体肠吸收，还能提高巨噬细胞摄取α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的能力。
本发明提供的口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒，其特征在于，制剂中α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为1.2-6.0mg/mL，制剂中其余组分重量比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.2-0.8份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯0.1-0.4份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.01-0.04份，乳化剂0.3-1.2份，蒸馏水50-100份。本发明提供的口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒，制备过程包括如下步骤：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于二氯甲烷或丙酮或三氯甲烷中的一种或两种或叁种的混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的乳化剂溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述乳化剂水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌18-36小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
本发明提供的口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒平均粒径175.70nm，小于200nm(图1)。相比于异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶(FT)，加入2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为骨架的异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒(HCFTN)在肠道的药物吸收速率常数(Ka)与FT相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.84、1.34、4.64和5.02倍。相比于异硫氰酸荧光素标记的模型抗原(FO)，加入2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为骨架的异硫氰酸荧光素标记的模型抗原纳米粒(HCFON)在肠道的Ka与FO相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.76、1.29、4.27和5.03倍。未加入2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的HCFON(HFON)在肠道的Ka与FO相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.21、1.13、2.05和1.84倍(图2A)。HCFTN在肠道的药物有效渗透系数(Peff)与FT相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了2.66、1.31、3.89和8.21倍。HCFON在肠道的Peff与FO相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了2.71、1.39、4.89和21.18倍。HFON在肠道的药物Peff与FO相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.41、1.14、2.98和12.29倍(图2B)。结果表明加入2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖后，能显著增加口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原纳米粒在肠道的Ka和Peff。α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原在肠道的Ka和Peff明显增加，原因分析如下：(1)2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯被覆的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为骨架的纳米粒提高了α1,3-岩藻糖基转移酶的稳定性和活性；(2)羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯作为肠溶材料包裹蛋白质药物有利于帮助疫苗克服恶劣的胃肠道环境；(3)2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖对蛋白疫苗的胃肠保护作用，且其可作为疫苗佐剂增强免疫反应的作用。壳聚糖具有缓释性，低毒性和生物可降解性等，能增强宿主的体液和细胞免疫，是潜在的疫苗佐剂候选物。然而，壳聚糖因在水中溶解性差，使其使用受到限制，预实验中我们曾尝试用壳聚糖制备壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被α1,3-岩藻糖基转移酶聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒，但外观、粒径、电导率等特性测定表明不能成功制备这种纳米粒。为了提高壳聚糖的水溶性，使其溶解于聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒内水相，我们将壳聚糖进行季胺化修饰得到2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖，并进一步制备得到了2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的α1,3-岩藻糖基转移酶聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒。
抗原呈递细胞(如巨噬细胞)摄取抗原是引起机体免疫反应的至关重要的步骤，将小鼠巨噬细胞RAW 264.7分别与FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN孵育12h、24h、48h后，其细胞相对活力均在80％以上，表明当浓度为20μg/mL时，FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN对巨噬细胞的活性在48h内基本无影响，初步说明FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN对巨噬细胞的安全性较好(图3)。巨噬细胞对HCFTN的摄取显著高于巨噬细胞对FT的摄取，巨噬细胞对HCFON的摄取显著高于巨噬细胞对HFON和FO的摄取(图4)。实验结果表明在一定浓度范围内，37℃时巨噬细胞对FO和HCFON的摄取均呈现浓度依赖性(图5)。口服重组蛋白疫苗纳米粒提高巨噬细胞摄取FT和FO的能力可能是因为：(1)将抗原包埋在2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖和肠溶材料包裹的聚合物纳米粒中可防止抗原降解，能增强抗原的持久性：(2)2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的d-氨基葡萄糖和N-乙酰-d-氨基葡萄糖单元能强结合巨噬细胞表面的C-型糖识别域，从而增加巨噬细胞对纳米粒制剂的摄取。
本发明不同于通常研究报道的口服疫苗递送纳米***和制备工艺。口服疫苗递送纳米***研究报道的有脂质体、Bilosome、免疫复合物、复合乳剂、聚合物颗粒、腺病毒递送。本发明所述口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒是一种新型聚酯纳米粒，壳聚糖具有独特的性质，如低毒性、良好的生物相容性、生物可降解性，能增强宿主的体液和细胞免疫，然而，壳聚糖的水溶性差大大限制了其应用。为了提高壳聚糖的水溶性，使其溶解于聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒内水相，将壳聚糖进行季胺化修饰得到2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖。2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖比壳聚糖具有更好的水溶性，且对蛋白疫苗具有胃肠保护作用和作为疫苗佐剂增强免疫反应的作用，能更好地应用于疫苗制剂。目前仅有少量报道将2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖应用于兽用疫苗的递送。如2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖提高猪细小病毒灭活疫苗肌肉注射给药后对母猪的免疫原性，该纳米粒所含辅料成分主要有：2-羟丙基甲基氯化铵壳聚糖(病毒溶液与2-羟丙基甲基氯化铵壳聚糖体积比为2000：1)、β丙内酯(病毒溶液与β丙内酯体积比为2000：1)和矿物油，该纳米粒的制备方法是：微乳液法(Zhou M,et al.Water-soluble N-2-Hydroxypropyl trimethylammonium chloridechitosan enhanced the immunogenicity of inactivated porcineparvovirus vaccinevaccination on sows against porcine parvovirusinfection.Immunol Lett.2020；223:26-32.)；2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒运载的抗新城疫和传染性支气管炎减毒活疫苗通过鸡鼻内给药增加病原体鸡的体液、细胞和粘膜免疫应答，该纳米粒所含辅料成分主要有：2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(1.0mg/mL)和N,O-羧甲基壳聚糖(0.8mg/mL)，该纳米粒的制备方法是：聚电解质复合法(Zhao K,etal.Quaternized chitosan nanoparticles loaded with thecombined attenuated livevaccine against newcastle disease and infectious bronchitis elicitimmuneresponse in chicken after intranasal administration.Drug Deliv.2017；24(1):1574-1586.)；2-羟丙基甲基氯化铵壳聚糖纳米粒运载的新城疫活疫苗通过口服给药增强病原体鸡细胞、体液和粘膜免疫应答，该纳米粒所含辅料成分主要有：2-羟丙基甲基氯化铵壳聚糖(1.2mg/mL)、磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.2)和司盘-80、三聚磷酸钠溶液(1.5mg/mL)，该纳米粒的制备方法是：离子交联法(Zhao K,et al.Biological evaluation ofN-2-hydroxypropyl trimethyl ammonium chloride chitosan as a carrier for thedelivery of livenewcastle disease vaccine.Carbohydr Polym.2016；149:28-39)。目前尚未见以2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖作为疫苗佐剂和载体材料递送人用疫苗的研究。目前尚未见以2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖作为疫苗佐剂和载体材料递送口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗的报道。本发明首次以聚乳酸-羟基乙酸共聚物为载体材料，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为疫苗佐剂和载体材料，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯作为肠溶材料制备了口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒，本发明所述纳米粒不仅能提高α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的在体肠吸收，还能提高巨噬细胞摄取α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的能力。本发明所述口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒，可用于预防和治疗幽门螺旋杆菌引起的感染。
附图说明
图1为本发明制得的口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒的粒径测定试验。
试验条件：采用马尔文激光粒度仪测定粒径。
研究结果：口服重组蛋白疫苗α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒平均粒径为175.70nm，小于200nm。
图2为本发明制得FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN吸收速率常数Ka(图A)和有效渗透系数Peff(图B)测定试验。
试验条件：15只SD雄性大鼠(给药前12h禁食不禁水)，将大鼠用7％水合氯醛麻醉，鼠板固定，暴露腹腔。依次找到十二指肠段、空肠段、回肠段、结肠段。分别取各肠段10cm，在肠段两端分别插管结扎，用37℃生理盐水将肠中内容物冲洗干净。空白Krebs-Ringer循环液以0.4mL/min流速平衡10min后更换为含药循环液(83.33μg/mL)，循环1h(0.2mL/min)后收集灌流液并收集肠道内的剩余药液，并于试验结束后测量各肠断长度和内径。荧光分光光度法分别检测异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原含量：将流出液用5％SDS 0.1/M NaOH稀释5倍，震荡10min，进样检测荧光强度，计算Ka和Peff。
研究结果：相比于FO，HCFON在肠道的Ka在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.76、1.29、4.27和5.03倍，HFON在肠道的Ka在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.21、1.13、2.05和1.84倍。相比于FT，HCFTN在肠道的Ka在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.84、1.34、4.64和5.02倍。相比于FO，HCFON在肠道的Peff在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了2.71、1.39、4.89和21.18倍，HFON在肠道的Ka在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了1.41、1.14、2.98和12.29倍。HCFTN在肠道的Peff与FT相比，在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别提高了2.66、1.31、3.89和8.21倍。
图3为本发明制得的FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN对巨噬细胞的活性检测试验。
试验条件：将细胞密度为3×104/mL的巨噬细胞接种于96孔板，每孔100μL。细胞培养箱中培养至细胞贴壁后，对照组细胞加入空白培养基200μL，实验组细胞分别加入异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原纳米粒，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原纳米粒浓度梯度为2.5、5、10、20、40μg/mL的含药培养基200μL，另设不含细胞的空白组，每组设3复孔。培养箱中培养至预定时间(12h、24h和48h)取出96孔板，拍照记录细胞形态。每孔加入MTT20μL，在生化培养箱中37℃避光培养4h，弃掉上清液，每孔加入150μL的DMSO，摇床避光摇晃后用酶标仪测量A570，以空白组调零，计算细胞活性。
研究结果：48h内细胞相对活力均在80％以上，表明当浓度为20μg/mL时，FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN对巨噬细胞的活性在48h内基本无影响，研究结果初步说明FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN对巨噬细胞的安全性较好。
图4为本发明制得FO、FT、HFON、HCFON和HCFTN被巨噬细胞摄取试验。
试验条件：将细胞密度为5×105/mL的巨噬细胞接种于96孔板，每孔100μL，培养12h至贴壁。弃掉培养基，在对照组加入空白培养基200μL，实验组分别加入含异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶或模型抗原纳米粒(浓度20μg/mL)的培养基200μL，另设不含细胞的空白组，每组设3复孔，在37℃孵育12h后，弃掉上清液，用PBS洗三次。每孔加入50μL的RIPA消解细胞，用荧光酶标仪测定荧光强度(EX：495nm，EM:：520nm)，分别比较巨噬细胞对异硫氰酸荧光素标记的模型抗原和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的异硫氰酸荧光素标记的模型抗原纳米粒的摄取，巨噬细胞对异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯包被的异硫氰酸荧光素标记的α1,3-岩藻糖基转移酶纳米粒的摄取。
研究结果：在浓度为20μg/mL时，HCFON处理后的巨噬细胞中的荧光强度为FO处理后的巨噬细胞中的荧光强度的18.16倍(**P＜0.01)。HFON处理后的巨噬细胞中的荧光强度为FO处理后的巨噬细胞中的荧光强度的8.79倍。HCFTN处理后的巨噬细胞中的荧光强度为FT处理后的巨噬细胞中的荧光强度的18.23倍。巨噬细胞对HCFON的摄取显著高于巨噬细胞对FO的摄取，巨噬细胞对HCTFN的摄取显著高于巨噬细胞对FT的摄取。
图5为本发明制得FO和HCFON的浓度在37℃下对巨噬细胞摄取的影响试验。
试验条件：将细胞密度为5×105/mL的巨噬细胞接种于96孔板，每孔100μL，培养12h至贴壁。弃掉培养基后，对照组加入空白培养基200μL，实验组分别加入含游离FO和HFON(浓度梯度为2.5、5、10、20、40μg/mL)的培养基200μL，另设不含细胞的空白组，每组设3复孔，在37℃孵育12h后，弃掉上清液，用PBS洗3次。每孔加入50μL的RIPA消解细胞，用荧光酶标仪测定其荧光强度(EX：495nm，EM：520nm)，研究不同浓度对巨噬细胞摄取的影响。
研究结果：巨噬细胞对FO和HCFON的摄取均与浓度呈正相关。当浓度为5～40μg/mL时，巨噬细胞对HFON的摄取的荧光强度显著大于巨噬细胞对FO的摄取的荧光强度(**P＜0.01)。实验结果表明在一定浓度范围内，37℃时巨噬细胞对FO和HCFON的摄取均呈现浓度依赖性。
具体实施方式
为了进一步说明本发明及其优点，给出了下列特定的实施例，应理解这些实施例仅有于具体说明而不是作为本发明范围的限制。
实施例1：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.40mg/mL，配方中其余各组分的重量比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(乳酸与羟基乙酸的单体比为75：25，以下简称为：L：G为75：25)0.40份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.20份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.02份，普朗尼克F-68为0.60份，蒸馏水90份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(乳酸与羟基乙酸的单体比为75∶25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(型号HP55)溶于二氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克(型号F-68)溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌18小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例2：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为3.90mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)0.65份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.325份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0325份，普朗尼克F-68为0.975份，蒸馏水146.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50溶于三氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌20小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例3：
α1,3岩藻糖基转移酶的含量为1.20mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)0.20份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.10份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.01份，普朗尼克F-127为0.30份，蒸馏水45份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于丙酮形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌22小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例4：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为3.30mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.55份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.275份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0275份，普朗尼克F-127为0.825份，蒸馏水123.75份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50溶于二氯甲烷和三氯甲烷混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌24小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例5：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为3.60mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.60份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.30份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.03份，普朗尼克F-68为0.45份，普朗尼克F-127为0.45份，蒸馏水135份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50溶于二氯甲烷和丙酮混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68和普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌26小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例6：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为3.60mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)0.30份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.30份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.10份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.20份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.03份，普朗尼克F-68为0.45份，普朗尼克F-127为0.45份，蒸馏水135份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于三氯甲烷和丙酮混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68和普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌28小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例7：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为4.20mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.30份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.40份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.10份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.25份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.035份，普朗尼克F-68为0.45份，普朗尼克F-127为0.60份，蒸馏水157.5份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷，三氯甲烷和丙酮混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68，普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌30小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例8：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.70mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)0.10份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.10份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.25份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.125份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.10份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0225份，普朗尼克F-68为0.255份，普朗尼克F-127为0.420份，蒸馏水101.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷，三氯甲烷和丙酮混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68和普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌32小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例9：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为4.50mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)0.20份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.20份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.35份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.125份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.25份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0375份，普朗尼克F-68为0.125份，普朗尼克F-127为1份，蒸馏水168.75份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68和普朗尼克F-127溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌34小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例10：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.10mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.35份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.175份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0175份，聚乙烯醇1750为0.525份，蒸馏水78.75份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50溶于三氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1750溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌36小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例11：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为1.50mg/mL，配方中各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.25份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.125份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0125份，聚乙烯醇1788为0.375份，蒸馏水56.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1788溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌18小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例12：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为4.80mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.40份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.40份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.40份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.04份，聚乙烯醇1750为1.20份，蒸馏水180份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1750溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌20小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例13：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为1.50mg/mL，配方中各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.25份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.025份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.1份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0125份，聚乙烯醇1750为0.375份，蒸馏水56.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于丙酮形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1750溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌22小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例14：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为1.50mg/mL，配方中各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.25份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.125份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0125份，聚乙烯醇1788为0.375份，蒸馏水56.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1788溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌24小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例15：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.10mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25：75)0.15份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)0.10份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)0.10份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.075份和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.1份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0175份，聚乙烯醇1788为0.525份，蒸馏水78.75份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25：75)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲醇和三氯甲烷混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1788溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌26小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例16：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为3.30mg/mL，配方中其余各组分的重量组成比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25：75)0.15份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.15份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)0.25份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.275份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0275份，聚乙烯醇1750为0.225份，聚乙烯醇1788为0.60份，蒸馏水123.75份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25：75)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50溶于二氯甲烷，三氯甲烷和丙酮混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的聚乙烯醇1750和聚乙烯醇1788溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌28小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例17：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.40mg/mL，配方中其余各组分的重量比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)0.40份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.20份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.02份，普朗尼克F-68为0.30份，聚乙烯醇1750为0.30份，蒸馏水90份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68和聚乙烯醇1750溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液，聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌30小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例18：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.40mg/mL，配方中其余各组分的重量比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)0.40份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.10份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55为0.10份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.02份，普朗尼克F-127为0.30份，聚乙烯醇1788为0.30份，蒸馏水90份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于三氯甲烷形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-127和聚乙烯醇1788溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液，聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌18小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例19：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为3.90mg/mL，配方中其余各组分的重量比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)0.35份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75：25)0.30份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50为0.325份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0325份，普朗尼克F-68为0.375份，普朗尼克F-127为0.30份，聚乙烯醇1750为0.30份，蒸馏水146.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50：50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50溶于丙酮形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68，普郎尼克F-127和聚乙烯醇1750溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液，聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌20小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
实施例20：
α1,3-岩藻糖基转移酶的含量为2.70mg/mL，配方中其余各组分的重量比为：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)0.10份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)0.10份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)0.25份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(型号HP50)0.125份，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP550.10份，2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖0.0225份，普朗尼克(型号F-68)0.025份，普朗尼克F-127为0.350份，聚乙烯醇1750为0.20份，聚乙烯醇1788为0.10份，蒸馏水101.25份。
制备方法：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为25∶75)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为50∶50)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(L：G为75∶25)，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP50和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP55溶于二氯甲烷，三氯甲烷和丙酮混合物形成溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶于蒸馏水后，加入溶液A中，混合，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)将处方量的普朗尼克F-68，普朗尼克F-127，聚乙烯醇1750和聚乙烯醇1788溶于蒸馏水中，将处方量的2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖溶于蒸馏水中，迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入上述普朗尼克水溶液，聚乙烯醇水溶液和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖水溶液，在冰浴中超声后得乳状液C；(3)将乳状液C搅拌24小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。

Claims (3)

1.一种口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒，其特征在于，该纳米粒含α1,3-岩藻糖基转移酶，含量为1.20-6.00mg/mL，该纳米粒包括以下各组分，其组分重量比为：
Figure FDA0003220104250000011
所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物为型号乳酸与羟基乙酸单体比为：75：25或50：50或25：75中的一种或两种或叁种的混合物，所述的羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯为：型号HP55或HP50中的一种或两种的混合物，所述的乳化剂可以是普朗尼克(型号F-68或F-127中的一种或两种的混合物)或聚乙烯醇(型号1750或1788中的一种或两种的混合物)的一种或几种的混合物。
2.根据权利要求1所述的一种口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒的制备方法，其特征在于，该制备方法包括下列步骤：(1)将处方量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶于二氯甲烷或丙酮或三氯甲烷中的一种或两种或叁种的混合物中得到溶液A，将处方量的α1,3-岩藻糖基转移酶溶液加入溶液A中，混匀，在冰浴中超声后得乳状液B；(2)迅速将乳状液B放入冰浴中，再缓慢加入乳化剂和2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的水溶液，在冰浴中超声后得到乳状液C；(3)将乳状液C搅拌18-36小时挥发除掉有机溶剂，即得口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒。
3.根据权利要求1所述的一种口服重组幽门螺杆菌蛋白疫苗纳米粒，其特征在于，平均粒径小于200nm，本发明的纳米粒不仅能提高α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的在体肠吸收，还能提高巨噬细胞摄取α1,3-岩藻糖基转移酶和模型抗原的能力。
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