CN113493751A - 一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用 - Google Patents
一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113493751A CN113493751A CN202110645457.8A CN202110645457A CN113493751A CN 113493751 A CN113493751 A CN 113493751A CN 202110645457 A CN202110645457 A CN 202110645457A CN 113493751 A CN113493751 A CN 113493751A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- bifidobacterium
- capacity
- bifidobacterium animalis
- diabetes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 title claims abstract description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title abstract description 15
- 241001134770 Bifidobacterium animalis Species 0.000 claims abstract description 42
- 229940118852 bifidobacterium animalis Drugs 0.000 claims abstract description 42
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 40
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims abstract description 24
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 26
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 17
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 13
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 abstract description 10
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 abstract description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 238000004088 simulation Methods 0.000 abstract description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 7
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- -1 oxygen radicals Chemical class 0.000 description 4
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- IFBHRQDFSNCLOZ-ZIQFBCGOSA-N 4-nitrophenyl alpha-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-ZIQFBCGOSA-N 0.000 description 3
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000001380 Diabetic Ketoacidosis Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 208000022329 Protein metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N [4-fluoro-2-(hydroxymethyl)phenyl]methanol Chemical compound OCC1=CC=C(F)C=C1CO VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 208000020450 carbohydrate metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002727 hyperosmolar Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 208000017745 inborn carbohydrate metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开一株动物双歧杆菌作为潜在的干预糖尿病作用菌株的应用,属于食品微生物及乳酸菌益生技术领域。以阳性对照菌株动物双歧杆菌BB12、受试菌株20‑9和15‑2为研究对象,分析三者的抗氧化性质,α‑葡萄糖苷酶活力抑制能力,对酸、胆盐和模拟消化道环境的抗性、粘附能力和粘附抑制能力。结果表明:动物双歧杆菌15‑2完整细胞和细胞提取物的羟自由基清除能力和还原能力高于菌株20‑9和菌株BB12,α‑葡萄糖苷酶活力抑制能力高于菌株20‑9,两者抑制率分别为26.90%和12.83%。菌株15‑2经模拟消化道后的存活率和对Caco‑2细胞的粘附率均强于菌株20‑9和菌株BB12。菌株15‑2对酸耐受性高于菌株20‑9和BB12,在胆盐和粘附抑制能力方面虽略逊于菌株BB12,但仍优于菌株20‑9。因此,动物双歧杆菌15‑2可以作为潜在的干预糖尿病作用菌株进一步用于动物实验。研究结果为进一步研究动物双歧杆菌对糖尿病的潜在干预作用奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于乳酸菌益生及食品微生物技术领域,涉及一株动物双歧杆菌在潜在的干预 糖尿病的应用。
背景技术
随着城市化的发展和生活方式的改变,人们逐渐形成了高脂饮食、运动量减少等不良 的生活***衡肠道微生物和调节 免疫等方式来降低血糖。氧化应激是指损害脂质、蛋白质和DNA的氧自由基水平升高。α- 葡萄糖苷酶是来自小肠刷状缘膜的酶,其功能是促进淀粉和多糖等碳水化合物水解成易被吸 收单糖,抑制其活性,可以降低葡萄糖吸收,利于降低餐后血糖。
研究表明动物双歧杆菌01具有抗氧化作用;两歧双歧杆菌F-35发酵上清具有抑制α-葡 萄糖苷酶活力的能力;鼠李糖乳杆菌CCFM0528可以降低Ⅱ型糖尿病小鼠的餐后血糖水平, 这可能与鼠李糖乳杆菌CCFM0528抑制α-葡萄糖苷酶活力有关,并且体外实验已经证实了鼠 李糖乳杆菌CCFM0528具有抑制α-葡萄糖苷酶活力的能力。本研究主要比较了两株动物双歧 杆菌包括DPPH清除能力、羟自由基清除能力、还原能力在内的抗氧化能力、α-葡萄糖苷酶 活力抑制能力、对模拟消化道环境的抗性和粘附Caco-2细胞的能力,通过体外筛选方法,获 得具有潜在干预糖尿病作用的双歧杆菌菌株,为糖尿病的预防与治疗提供参考。
发明内容
发明目的:提供一株动物双歧杆菌在潜在的干预糖尿病的应用。
本发明解决的技术问题:提供一株动物双歧杆菌在潜在的干预糖尿病的应用,帮助解 决以慢性高血糖为特征的代谢紊乱疾病的问题,同时为本领域人员进一步研究预防与治疗糖 尿病提供研究基础。
本发明公开了以下技术效果:本发明通过体外筛选方法,获得具有潜在干预糖尿病作 用的双歧杆菌菌株。结果表明动物双歧杆菌15-2具有潜在的干预糖尿病作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要 使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对 于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他 的附图;
图1为菌株完整细胞和细胞提取物的DPPH清除能力(a)羟自由基清除能力(b)及还原能力(c);
图2为菌株在pH=2和pH=3条件下37℃孵育时的存活率;
图3为菌株对不同浓度胆盐的耐受性;
图4为菌株黏附Caco-2细胞的能力;
图5为菌株的竞争性粘附抑制(a),排除性粘附抑制(b)和替代性粘附抑制(c) 能力;
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式,该详细说明不应认为是对本发明的限制, 而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式,并非用于限制本发明。 另外,对于本发明中的数值范围,应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中 间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之 间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在 范围内。
除非另有说明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技 术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料,但是在本发明的实施 或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献 通过引用并入,用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲 突时,以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下,可对本发明说明书的具体实施方式做多种 改进和变化,这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方 式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
实施例1
一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用
1.材料与方法
1.1实验材料
一株动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)H15-2,所述动物双歧杆菌H15-2为双 歧杆菌属(Bifidobacterium),已保藏于东北农业大学菌种库,保藏日期为2017年6月20 日,保藏编号为H15-2。
α-葡萄糖苷酶、4-硝基酚-α-D-吡喃葡葡糖苷(PNPG)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) 美国Sigma公司;1,10-邻菲罗啉、三氯乙酸(TCA)、30%过氧化氢(H2O2)、硫酸亚铁(FeSO4)、铁***、三氯化铁(FeCl3)国产分析纯;Caco-2细胞中国科学院上海细胞库。
1.2菌株完整细胞和无细胞提取物的制备
将在mMRS培养基中培养18h的菌液在4℃、8000r/min离心10min。PBS清洗2 次后,菌体重悬于PBS中,并将菌体调整到1×109CFU/mL,此为完整细胞菌悬液。此菌悬 液在冰浴条件下进行超声破碎,超声破碎条件为:功率200W,每工作5s,停8s,共10min。 超声后的破碎液在12000r/min条件下离心20min,上清经过0.22μm的滤膜过滤,即为无 细胞提取物。
1.3菌株抗氧化能力的测定
1.3.1乳酸菌无细胞提取物DPPH清除率的测定
取乳酸菌无细胞提取物1mL加入试管中,再加入1mL 0.2mmol/L的DPPH无水乙 醇溶液,充分混匀后,避光反应30min,然后取上清液,于517nm处测定吸光值,以等体 积的PBS代替样品溶液作为对照组。按照以下公式计算:DPPH自由基清除率(%)=(1-A517样品/A517对照)×100。式中:A517样品和A517对照分别为样品组和对照组在517nm处测得 的吸光值。
1.3.2乳酸菌无细胞提取物清除羟自由基能力的测定
将2.5mmol/L的1,10-菲啰啉溶液、PBS(pH7.4)和样品溶液各1mL混匀,再加入1 mL2.5mmol/L的FeSO4溶液,充分混匀后加入1mL 20mmol/L的H2O2溶液。将混合液放 入37℃水浴中恒温反应1.5h。6000r/min离心10min收集上清,于536nm波长处测定其吸 光值。同时按照上述方法,以1mLPBS替代混合液中1mL待测样品溶液作为空白对照组, 测定在536nm处的吸光值。按照以下公式计算:羟自由基清除率(%)=(1-A536样品/A536对 照)×100。式中:A536样品和A536对照分别为样品组和对照组在波长536nm处测得的吸光值。
1.3.3乳酸菌无细胞提取物还原能力的测定
取0.5mL待测无细胞提取物,向其中加入0.5mL 1%铁***溶液及0.5mL PBS(pH6.6),混匀后置于50℃水浴恒温反应20min。从水浴中取出后放入冰浴中急速冷却,再加入0.5mL10%的三氯乙酸溶液,混匀后离心收集上清(3000r/min,10min)。取上清液1mL,再加入1mL 0.1%的三氯化铁溶液,混合均匀。10min后在700nm处测定其吸光值,其中 以L-半胱氨酸盐酸盐作为标品。同时,将上述混合液中的样品换成蒸馏水作为对照组,于 700nm波长处测定其吸光值。吸光值越大表示待测样品的还原能力越强。
1.4菌株对α-葡萄糖苷酶活力抑制能力的测定
将20μL 0.1mol/L的PBS(pH 7.0),20μL 2.5mmol/L PNPG,20μL 0.2U/mL的α- 葡萄糖苷酶溶液与20μL菌悬液或无细胞提取物充分混合,在37℃水浴15min,加入80μL0.2mol/L的Na2CO3终止反应。在405nm处测量反应液的吸光值。吸光值与对硝基酚(PNP) 的游离量成正比。反应体系中采用pH 7.0的0.1mol/L PBS作为α-葡萄糖苷酶溶液及待测样品的空白对照,采用以下公式计算样品的抑制活性:酶活性抑制率(%)=[1-(C-D)/(A-B)]×100。式中:A为含有α-葡萄糖苷酶不含样品的测定吸光值;B为不含α-葡萄糖苷酶及样 品的测定吸光值;C为含有α-葡萄糖苷酶及样品的测定吸光值;D为不含α-葡萄糖苷酶但 含样品的测定吸光值。
1.5菌株耐受性实验
1.5.1酸耐受实验
在37℃,pH2、3的条件下对菌株进行孵育,并测定存活率,存活率为各自pH条件 下不同孵育时间活菌数的对数值与其孵育0h活菌数对数值比值的百分数。
1.5.2胆盐耐受实验
参照1.5.1所述方法,在胆盐浓度0.3%、0.5%和1%的条件下进行实验。
1.5.3模拟消化道耐受实验
参照1.5.1所述方法。
1.6菌株粘附能力实验
黏附试验需在孔板中进行,12孔板铺板过程如下(接种密度为2×105cells/well):在 孔板各孔中加入500μL经PBS洗涤2遍、胰酶消化、离心并重悬于DMEM培养基中的Caco-2 细胞悬液,补加500μL细胞培养基使培养体系为1mL/well,以8或十字型充分混合均匀(非 常关键)以防止细胞在孔板中分散不均而脱落,封口置于CO2培养箱中培养。每2d换一次 液。待细胞长至单层后(即达到完全分化状态,约7d左右)方可进行黏附试验(试验前24 h需将细胞培养基换为无双抗培养基):培养好的双歧杆菌过夜培养物经离心、洗涤2遍后 悬于无双抗的DMEM培养基中,调整菌体浓度为108CFU/mL。弃去孔板中旧的培养基,洗涤细胞层2遍后按1mL/well加入菌悬液,置于培养箱中培养2h。培养结束后,细胞和黏 附的菌体经漂洗5遍、消化5min、终止消化后将洗脱下来的细胞与黏附的菌体收集到离心 管中。稀释并涂布于mMRS固体琼脂培养皿上,通过计算每孔黏附后菌数与黏附前加入每 孔菌数的比值来评价黏附能力的大小。
1.7统计分析
采用SPSS 20.0进行数据处理及显著性分析,每个实验重复3次。
2结果
2.1DPPH清除能力
如图1所示,动物双歧杆菌BB12、H15-2和H20-9的完整细胞和细胞提取物都具有DPPH清除能力。动物双歧杆菌H15-2和H20-9-完整细胞DPPH清除率均显著低于BB12(p <0.05),菌株H15-2和H20-9之间无显著差异(p>0.05)。菌株H15-2和H20-9细胞提取物 DPPH清除率显著高于BB12(p<0.05),其中,菌株H20-9高于菌株15-2,两者之间差异 显著(p<0.05)。
2.2羟自由基清除能力
动物双歧杆菌BB12,15-2和20-9完整细胞和细胞提取物都具有羟自由基清除能力。 动物双歧杆菌15-2和20-9完整细胞羟自由基清除率都显著高于BB12(p<0.05),其中,15-2的清除率最高为24.59%,显著高于20-9(p<0.05)。15-2细胞提取物的羟自由基清除率显著高于BB12和20-9(p<0.05)。20-9低于BB12,两者之间无显著差异(p>0.05)。
2.3还原能力
动物双歧杆菌BB12、15-2和20-9的完整细胞和细胞提取物都有一定还原能力。动物双歧杆菌15-2的完整细胞和细胞提取物还原能力都显著高于菌株BB12。菌株20-9完整细胞还原能力与菌株BB12无显著差异,但却显著低于菌株15-2(p<0.05)。菌株20-9的细胞提取物还原能力显著高于菌株BB12(p<0.05),低于菌株15-2,两者无显著差异。
2.4菌株的α-葡萄糖苷酶活力抑制能力
动物双歧杆菌15-2对α-葡萄糖苷酶抑制率显著高于菌株20-9(p<0.05),两者分别 为26.90%和12.83%,而菌株BB12对α-葡萄糖苷酶活力无抑制作用。
2.5菌株的酸耐受性
如图2所示,酸性条件下,随孵育时间延长,动物双歧杆菌BB12、15-2和20-9的 存活率皆下降。然而,动物双歧杆菌15-2在pH2时的存活率显著高于菌株BB12(p<0.05), 而菌株20-9显著低于菌株BB12(p<0.05),菌株15-2和菌株20-9之间有显著差异(p<0.05)。在pH3条件下孵育0~3h的过程中,动物双歧杆菌15-2的存活率一直高于BB12,而菌株 20-9一直低于菌株BB12。在孵育3h时,15-2的存活率显著高于菌株BB12(p<0.05),菌 株20-9显著低于菌株BB12,且三者之间均有显著差异(p<0.05)。
2.6菌株的胆盐耐受性
如图3所示,在含0.3%、0.5%和1%胆盐条件下,随孵育时间的延长,动物双歧杆菌BB12、15-2和20-9的存活率均呈下降趋势。在0.3%胆盐条件下孵育8h时,动物双歧 杆菌15-2的存活率为72.41%,虽高于菌株BB12,但两者间无显著差异,而菌株20-9存活 率显著低于BB12(p<0.05)。菌株15-2和菌株20-9两者间存活率差异显著(p<0.05)。在 0.5%的胆盐浓度下孵育8h时,菌株15-2和BB12、菌株20-9和BB12及菌株15-2和20-9 之间存活率均无显著差异。在1%的胆盐条件下孵育8h时,动物双歧杆菌20-9的存活率显 著低于菌株BB12(p<0.05),菌株15-2的存活率与菌株BB12之间无显著差异,而菌株20-9 和菌株15-2之间差异也不显著。
2.7对Caco-2细胞的粘附能力
如图4所示,动物双歧杆菌15-2和20-9对Caco2细胞的粘附率皆高于BB12,但两 者都与BB12无显著差异,菌株15-2的粘附率最高为27.59%,与菌株20-9无显著差异。
2.8菌株的粘附抑制能力
如图5所示,动物双歧杆菌BB12、15-2和20-9对大肠杆菌ATCC25922都有竞争性 粘附抑制作用,动物双歧杆菌20-9的粘附抑制率显著低于BB12(p<0.05),15-2和BB12 之间无显著性差异,而菌株15-2的粘附抑制率显著高于20-9(p<0.05)。三者对鼠伤寒沙 门氏菌ATCC14028也有粘附抑制作用,动物双歧杆菌15-2低于BB12,两者间有显著差异 (p<0.05),虽菌株20-9粘附抑制率低于BB12,但两者间无显著差异(p>0.05),菌株20-9 高于菌株15-2,两者间差异不显著。
动物双歧杆菌BB12、20-9和15-2都对大肠杆菌ATCC25922有排除性粘附抑制作用,三者的粘附抑制率分别为25.22%、12.53%和18.65%,其中,菌株20-9和15-2粘附抑制 率都显著低于BB12(p<0.05),而菌株15-2粘附抑制率显著高于20-9(p<0.05)。三株菌 株也对鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028有粘附抑制作用,菌株20-9的粘附抑制率显著低于BB12, 虽然15-2的-粘附抑制率高于BB12,但无显著差异,而动物双歧杆菌15-2显著高于20-9(p <0.05)。
动物双歧杆菌BB12,15-2和20-9对大肠杆菌ATCC25922有替代性黏附作用,菌株BB12的粘附抑制率最高为24.36%,菌株15-2和20-9的粘附抑制率显著低于BB12(p<0.05), 而菌株20-9的粘附抑制率最低为6.41%,显著低于菌株15-2(p<0.05)。三者对鼠伤寒沙门 氏菌ATCC14028也有粘附抑制作用,动物双歧杆菌20-9粘附抑制率显著低于BB12(p< 0.05),而菌株15-2低于BB12,两者间无显著差异,菌株15-2高于20-9,两者间有显著差 异(p<0.05)。
3.结论
本实验中,动物双歧杆菌15-2在抗氧化能力(羟自由基清除能力和还原能力)高于菌 株20-9和菌株BB12;α-葡萄糖苷酶活力抑制能力高于菌株20-9和菌株BB12;菌株15-2经模拟消化道后的存活率和对Caco-2细胞的粘附率强于菌株20-9和菌株BB12;菌株15-2对酸耐受性也高于菌株20-9和BB12,对鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028和大肠杆菌ATCC25922粘附抑制能力等方面虽略逊于菌株BB12,但仍优于菌株20-9。因此动物双歧杆菌15-2可作为潜在的干预糖尿病作用受试菌株用于下一步的动物实验。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述,并非对本发明的范围进行限 定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各 种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (3)
1.一株动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)H15-2,其特征在于,所述动物双歧杆菌H15-2为双歧杆菌属(Bifidobacterium),已保藏于东北农业大学菌种库,保藏日期为2017年6月20日,保藏编号为H15-2。
2.一种权利要求1所述的动物双歧杆菌H15-2可作为潜在的干预糖尿病作用菌株。
3.一种权利要求1所述的动物双歧杆菌H15-2可增强机体的抗氧化能力,其完整细胞羟自由基清除率高达24.59%,对α-葡萄糖苷酶抑制率高达26.90%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110645457.8A CN113493751A (zh) | 2021-06-10 | 2021-06-10 | 一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110645457.8A CN113493751A (zh) | 2021-06-10 | 2021-06-10 | 一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113493751A true CN113493751A (zh) | 2021-10-12 |
Family
ID=77997355
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110645457.8A Pending CN113493751A (zh) | 2021-06-10 | 2021-06-10 | 一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113493751A (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107893044A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-04-10 | 江南大学 | 一株长双歧杆菌及其应用 |
KR20180044245A (ko) * | 2018-04-06 | 2018-05-02 | 주식회사 종근당바이오 | 변비 개선 효능을 갖는 신규한 유산균 및 이의 용도 |
-
2021
- 2021-06-10 CN CN202110645457.8A patent/CN113493751A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107893044A (zh) * | 2017-12-27 | 2018-04-10 | 江南大学 | 一株长双歧杆菌及其应用 |
KR20180044245A (ko) * | 2018-04-06 | 2018-05-02 | 주식회사 종근당바이오 | 변비 개선 효능을 갖는 신규한 유산균 및 이의 용도 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
SHANG等: "Potential Immunomodulatory Activity of a Selected Strain Bifidobacterium bifidum H3-R2 as Evidenced in vitro and in Immunosuppressed Mice", 《FRONTIERS IN MICROBIOLOGY》, vol. 11, pages 2 * |
万峰等: "婴儿源动物双歧杆菌消化道胁迫抗性及 体外对免疫细胞活性影响的比较", 《食品科学》, vol. 40, no. 22 * |
朱宗涛;赵鹏昊;AMRO ABDELAZEZ;周诗昊;万峰;张晟;孟祥晨;: "两株动物双歧杆菌的潜在干预糖尿病作用", 食品工业科技, no. 13 * |
朱宗涛等: "两株动物双歧杆菌的潜在干预糖尿病作用", 《食品工业科技》, no. 13, pages 138 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ma et al. | In vitro simulated digestion and fermentation characteristics of polysaccharide from oyster (Crassostrea gigas), and its effects on the gut microbiota | |
Wang et al. | Yeast β-glucan, a potential prebiotic, showed a similar probiotic activity to inulin | |
CN109182207B (zh) | 一株具有调节血糖和胆固醇水平等益生功能的嗜酸乳杆菌La-SJLH001及其应用 | |
CN111280355B (zh) | 植物乳杆菌p_17及利用该菌制备发酵苹果汁的方法 | |
CN110106119B (zh) | 一株分离自母乳的鼠李糖乳杆菌m9及其应用 | |
CN112075638A (zh) | 包含降低血糖的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物 | |
CN114642686B (zh) | 一种复合益生菌及其延缓衰老和抗氧化的作用 | |
CN111213885A (zh) | 一种具有调节血脂功效的益生菌组合物及其制备方法与应用 | |
Li et al. | In-vitro digestion by simulated gastrointestinal juices of Lactobacillus rhamnosus cultured with mulberry oligosaccharides and subsequent fermentation with human fecal inocula | |
CN116676225B (zh) | 一株具有安神助眠功效的鼠李糖乳杆菌lr-28菌株、发酵产物、嘉眠菌群组合剂及应用 | |
Zhou et al. | Probiotic assessment and antioxidant characterization of Lactobacillus plantarum GXL94 isolated from fermented chili | |
TWI519644B (zh) | 生產玻尿酸之益生菌株及其用途 | |
KR102310336B1 (ko) | 복합 소화 효소 생산능 및 항균 활성을 갖는 락토바실러스 플란타럼 q1 균주 및 이의 용도 | |
CN113425747A (zh) | 凝结芽孢杆菌ja845在制备具有降血糖功能的酶活性抑制剂中的应用 | |
CN112080449B (zh) | 一种屎肠球菌r40及其在降胆固醇、产胞外多糖和抗氧化中的应用 | |
CN115895966B (zh) | 一株辅助缓解痛风的两歧双歧杆菌bl002及其应用 | |
CN113493751A (zh) | 一株动物双歧杆菌在潜在干预糖尿病的应用 | |
CN104164379A (zh) | 生产玻尿酸的益生菌株及其用途 | |
CN113881592B (zh) | 一株罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
KR100769299B1 (ko) | 알코올 분해능이 있는 유산균 및 그를 함유하는 유제품, 건강 기능성 식품 및 식품 첨가제 | |
CN113549583A (zh) | 一种复合菌剂、应用以及利用复合菌剂制备藜麦发酵乳的方法 | |
KR101591978B1 (ko) | 항당뇨 및 항고지혈증 활성을 갖는 락토바실러스 브레비스 jb pml-127 균주 및 이의 용도 | |
CN113832085A (zh) | 戊糖乳杆菌bnpv及其应用 | |
CN110559319A (zh) | 一种副干酪乳杆菌n1115改善糖尿病的应用及相应的奶粉、应用 | |
CN106520609A (zh) | 来源于海洋褐藻的植物乳杆菌yys‑06及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20211012 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |