CN113424794B - 一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，包括如下选育步骤：组建优质鸡基础群与常规选育；肉质与抗病能力指标检测及候选基因分型分析；优质抗病型新品系最佳选育方案的确定。本发明能够更好地促进优质皖南三黄鸡的产业化开发，一方面解决了我国地方资源保护困难的问题；另一方面，优质抗病性的新品系个体健康，产品安全、营养丰富，同时减少了对养殖环境的污染，能够增加养殖户经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及品种改良技术领域，尤其涉及一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法。
背景技术
皖南三黄鸡是安徽省优良的地方家禽品种，属肉蛋兼用型品种，被列入《中国畜禽遗传资源志·家禽志》和《安徽省畜禽遗传资源保护名录》，主要分布于安徽省池州市和宣城市，该鸡喙、胫、皮肤和全身羽毛均为黄色，肉蛋细腻，味美香浓，生长较慢，性成熟早、冠红，体形美观，放牧觅食力强；适合安徽省沿江地区饲养，有较高的经济价值和开发前景。
作为国家畜禽遗传资源目录收录的优质地方鸡种，皖南三黄鸡所具备的遗传多样性是家禽品种改良和适应规模化生产条件变化的遗传基础。然而，目前的皖南三黄鸡的产业化开发中，不能有效的保护地方资源，地方品种资源不能合理利用，不便于选育优质抗病性的新品系，同时，养殖环境污染较大，成本高。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法。
本发明提出的一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，包括如下选育步骤：
S1组建优质鸡基础群与常规选育；
以现有的皖南三黄鸡群为育种素材，综合考虑羽色、胫色、体重性状，筛选出健康强健和生产性能优秀的个体留为种用，组建优质鸡基础群；
通过本品种选育，建立优质抗病系，每品系10个家系的皖南三黄鸡核心群，外貌特征为黄羽、黄胫，分别在出雏、4周龄、8周龄、12周龄时全体称重，其它各周龄抽5％个体称重，建立新品系选育体重数据；
父本主要采取个体选择，选择依据体重，羽色及肉品质和饲料效率候选基因分型结果进行；母本同时分别记录43周和60周产蛋量和平均蛋重，作为母本家系选择依据之一，母本采用家系选育结合家系内选择方法；
S2肉质与抗病能力指标检测及候选基因分型分析；
对已组建的选育群，测定相应的肉质性状和抗病能力指标，比较不同饲养方式下皖南三黄鸡的生长、屠宰、免疫、肉品质性状及血清生化指标的变化情况；
同时采用PCR-SSCP和多位点序列分型技术的分析技术，对肌肉发育的关键候选基因MyoD；抗病能力的候选基因TLR4进行基因表达与多位点检测，鉴定个体基因型并获得肉质优良、饲料转化效率与抗性有利基因型，进而进一步确定优质抗病选育群；
S3优质抗病型新品系最佳选育方案的确定：
利用鉴定个体基因型与肉质、抗病能力的关系，建立多基因聚合与分子综合选择指数，加快选择进程，具体方法为采用个体选择和家系选择相结合的方案，根据常规育种值估计和多位点有利分子标记相结合的原则，确定分子综合选择指数，建立最佳选育体系，实现新品系的选育；
建立包含育种目标性状，采用多位点检测方法对候选基因进行检测和鉴定，对多个目标性状分子标记进行聚合和分子评分，分子评分将根据多位点序列分型结果，利用最小二乘法进行育种效率评估，建立如下模型：Y＝μ+个体效应+合并基因型效应+家系间效应+剩余残差，最后，采用BLUP方法对分子遗传标记和常规育种值进行综合估计，确定分子综合选择指数；建立优质抗病性新品系MAS育种体系，实现多性状有利基因型在不同品系中聚合。
优选的，所述步骤S1的羽色分为黄羽和麻黄羽，胫色为黄胫，体重为90日龄体重：1000-1100g。
优选的，所述步骤S2的肉质性状包括有剪切力、滴水损失、肉色、肌苷酸、多不饱和脂肪酸。
优选的，所述步骤S2的抗病能力指标为免疫器官指数、IgA、IgG、IgM、IL-2和IL-6。
优选的，所述步骤S3确定分子综合选择指数，即I＝EBV+MS，其中EBV为估计育种值，MS代表分子评分。
优选的，所述步骤S3育种目标性状包括有肉质和抗病能力。
本发明中，所述一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，在皖南三黄鸡现有群体基础上，利用品种的遗传变异开展品系培育，从而实现了地方品种资源的保存和合理利用，是地方品种遗传资源的保护的最佳途径之一。通过优质抗病性新品系的选育和开发，可以进一步提高优质鸡生产水平、降低生产成本，对增加农民收入和提高人们生活水平具有重要的现实意义；
本发明能够更好地促进优质皖南三黄鸡的产业化开发，一方面解决了我国地方资源保护困难的问题；另一方面，优质抗病性的新品系个体健康，产品安全、营养丰富，同时减少了对养殖环境的污染，能够增加养殖户经济效益。
附图说明
图1为MyoD基因PCR扩增图；
图2为皖南三黄鸡胸肌中MyoD mRNA发育性表达变化图；
图3为皖南三黄鸡腿肌中MyoD mRNA发育性表达变化图；
图4为TLR4基因PCR扩增图；
图5为TLR4基因在不同组织中表达差异图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
参照图1-5，一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，包括如下选育步骤：
S1组建优质鸡基础群与常规选育；
以现有的皖南三黄鸡群为育种素材，综合考虑羽色、胫色、体重性状，筛选出健康强健和生产性能优秀的个体留为种用，组建优质鸡基础群；
通过本品种选育，建立优质抗病系，每品系10个家系的皖南三黄鸡核心群，外貌特征为黄羽、黄胫，分别在出雏、4周龄、8周龄、12周龄时全体称重，其它各周龄抽5％个体称重，建立新品系选育体重数据；
父本主要采取个体选择，选择依据体重，羽色及肉品质和饲料效率候选基因分型结果进行；母本同时分别记录43周和60周产蛋量和平均蛋重，作为母本家系选择依据之一，母本采用家系选育结合家系内选择方法；
S2肉质与抗病能力指标检测及候选基因分型分析；
对已组建的选育群，测定相应的肉质性状和抗病能力指标，比较不同饲养方式下皖南三黄鸡的生长、屠宰、免疫、肉品质性状及血清生化指标的变化情况；
同时采用PCR-SSCP和多位点序列分型技术的分析技术，对肌肉发育的关键候选基因MyoD；抗病能力的候选基因TLR4进行基因表达与多位点检测，鉴定个体基因型并获得肉质优良、饲料转化效率与抗性有利基因型，进而进一步确定优质抗病选育群；
S3优质抗病型新品系最佳选育方案的确定：
利用鉴定个体基因型与肉质、抗病能力的关系，建立多基因聚合与分子综合选择指数，加快选择进程，具体方法为采用个体选择和家系选择相结合的方案，根据常规育种值估计和多位点有利分子标记相结合的原则，确定分子综合选择指数，建立最佳选育体系，实现新品系的选育；
建立包含育种目标性状，采用多位点检测方法对候选基因进行检测和鉴定，对多个目标性状分子标记进行聚合和分子评分，分子评分将根据多位点序列分型结果，利用最小二乘法进行育种效率评估，建立如下模型：Y＝μ+个体效应+合并基因型效应+家系间效应+剩余残差，最后，采用BLUP方法对分子遗传标记和常规育种值进行综合估计，确定分子综合选择指数；建立优质抗病性新品系MAS育种体系，实现多性状有利基因型在不同品系中聚合。
本发明中，所述步骤S1的羽色分为黄羽和麻黄羽，胫色为黄胫，体重为90日龄体重：1000-1100g。
本发明中，所述步骤S2的肉质性状包括有剪切力、滴水损失、肉色、肌苷酸、多不饱和脂肪酸。
本发明中，所述步骤S2的抗病能力指标为免疫器官指数、IgA、IgG、IgM、IL-2和IL-6。
本发明中，所述步骤S3确定分子综合选择指数，即I＝EBV+MS，其中EBV为估计育种值，MS代表分子评分。
本发明中，所述步骤S3育种目标性状包括有肉质和抗病能力。
实施例1：优质抗病型皖南三黄鸡基础群建立及持续选育根据《中国畜禽遗传资源志·家禽志》和皖南三黄鸡地方标准(DB34/T 413-2004)要求，综合考虑羽色、胫色、体重等性状，从皖南三黄鸡种质资源保种场中筛选出健康强健和生产性能优秀的个体，作为选育基础群。按照公母1:10比例，组建家系，进行谱系孵化，出雏时进行性别鉴定、戴翅号。8周龄全群称重后，根据体重大小选留体重为(X±8％)个体，建立种群系谱，小家系个体记录、配种。选留个体根据留种标准于1日龄、8周龄和18周龄进行三次个体选择和淘汰，并进行扩繁与繁育后代。母本同时分别记录43周和60周产蛋量和平均蛋重，作为母本家系选择依据之一，母本采用家系选择与家系内选择相结合办法进行。2个世代根据分子标记辅助进行遗传标记辅助选育。
连续3个世代选育优质抗病型新品系进行生产性能测定。性能测试结果表明，经过连续3个世代选育，种鸡5％产蛋率日龄为137天，66周龄饲养日产蛋数为162枚，受精蛋孵化率为93％，健雏率97％。商品代13周龄公鸡平均体重1.05kg，母鸡体重0.845kg。平均饲料转化率3.09:1，成活率98.3％，符合市场对优质抗病型皖南三黄鸡新品系的需求。结果详见表1-4。
表1优质抗病型皖南三黄鸡种鸡生产性能
表2优质抗病型皖南三黄鸡商品代生产性能指标
表3优质抗病型皖南三黄鸡13周龄主要屠宰性能
表4优质抗病型皖南三黄鸡商品代13周龄肉品质测定
实施例2：不同饲养方式对鸡生产性能、屠宰性能、肉品质和血清生化指标的影响；
为选育出适合不同饲养环境的优质抗病型皖南三黄鸡新品系，本项目探究不同饲养方式对鸡新品系生产、肉质、屠宰及血清指标的影响。本项目以具有完整系谱记录的优质抗病新品系皖南三黄鸡为试验素材，出雏时，雌雄鉴别，带翅号，从中挑选700只体重相近的皖南三黄鸡公鸡，统一饲养至56日龄。56日龄挑选体重相近的皖南三黄鸡公鸡640只，分为2组，笼养组(CRS)和散养组(FRS)，每个组4个重复，每个重复80只鸡。112日龄时，控食12小时后，每个重复挑选8只鸡用于试验。
研究结果表明，笼养组体重、日采食量、日增重显著高于散养组，饲料转化效率显著低于散养组，见表5。
表5不同饲养方式对鸡生产性能的影响
由表6可知，与笼养组相比，散养组鸡胸肌率和腿肌率逐渐显著增加；腹脂率显著降低。
表6饲养方式对鸡屠宰性能的影响
由表7可知，与笼养相比，散养组在胸肌和腿肌中的滴水损失显著减低；剪切力显著升高，L值和a值降低。
表7饲养方式对鸡肉品质的影响
血清生化指标表明，与散养组相比，笼养能显著提高GLU和总蛋白(TP)含量；笼养组TC和TG显著升高，HDLC显著降低。原因为，散养组中，高甘油三酯和高胆固醇，以及较低高密度脂蛋白更有利用于脂肪沉积，与腹部脂肪减低趋势一致。结果详见表8。
表8饲养方式对血清生化指标的影响
不同饲养方式对鸡免疫器官及免疫指标的影响
为探究机体免疫能力，本试验研究了不同饲养方式对免疫器官及免疫指标的影响。本项目研究结果表明，与笼养组相比，散养组胸腺重量以及胸腺与体重的比例逐渐增加。(详见表9)
表9饲养方式对鸡免疫器官的影响
实施例3：MyoD基因表达、基因型与屠宰性能、肉质性能关联性(1)MyoD基因表达研究
本试验旨在研究生肌因子MyoD基因在皖南三黄鸡不同发育阶段肌肉组织中的表达水平及其与肌肉重量的相关分析。分别于胚胎发育的11胚龄、1日龄、70日龄、98日龄采集胸肌和腿肌组织，并测定1日龄、70日龄、98日龄的胸肌重、腿肌重和体重，采用实时荧光定量PCR方法分析MyoD基因在不同阶段胸肌和腿肌中的相对表达量。
相关性分析表明，MyoD基因的相对表达量与胸肌重呈显著负相关。
项目研究中采用PCR扩增方法，扩增MyoD基因片段。皖南三黄鸡胸肌中MyoD基因在不同日龄中的表达规律如图2。随日龄的增长，MyoD基因的表达量呈降低趋势。其中，11胚龄和1日龄MyoD基因表达量无显著性差异，但是均显著高于70与98日龄；70日龄MyoD基因表达量显著高于98日龄。
皖南三黄鸡腿肌中MyoD基因在不同胚龄/日龄中的表达规律如图3。70日龄MyoD基因表达量显著高于其他发育阶段，与11胚龄、1日龄和98日龄差异显著；11胚龄、1日龄和98日龄MyoD基因表达量之间差异均不显著。
项目进一步对MyoD基因表达量及其与胸肌和腿肌重进行相关性分析。结果表明，皖南三黄鸡MyoD基因表达与胸肌组织重变化呈极显著负相关，MyoD基因表达与腿肌重无显著相关性，详见表10。
表10皖南三黄鸡不同肌肉组织中MyoD基因与其肌肉组织重的相关性
上述研究结果，提示MyoD基因相对表达量与肌肉发育相关，为进一步研究MyoD基因对鸡肌肉发育的调控作用提供重要的参考。
(2)MyoD不同基因型个体之间屠宰性能及肉品质差异
为研究MyoD不同基因型个体之间屠宰性能及肉品质差异，为优质皖南三黄鸡新品系选育提供重要分子标记，本项目以青阳县平云牧业开发有限公司提供的皖南三黄鸡为试验材料，挑选体重相近的、优质抗病型皖南三黄鸡公鸡，统一饲养至112日龄，采集300只鸡血清，并进行屠宰测定。试验选取MyoD基因G12396043A突变，设计引物，采用PCR扩增，测序方法进行基因分型，并采用最小二乘差异显著分析方法，比较不同基因型个体之间的差异。
由表11可知，MyoD基因GG基因型个体胸肌率、腿肌率、肌苷酸和多不饱和脂肪酸含量显著高于AA基因型个体，结果初步揭示GG为优势基因型，可考虑将GG基因型作为一种重要标记用于辅助选育中。
表11 MyoD不同基因型个体屠宰性能及肉品质比较
实施例4：TLR4基因表达、位点与抗病性状的关联性
(1)TLR4基因表达研究
为分析TLR4基因的表达调控规律，出雏时，雌雄鉴别，带翅号，从中挑选700只体重相近的皖南三黄鸡公鸡，统一饲养至56日龄。56日龄挑选体重相近的皖南三黄鸡公鸡640只，分为2组，笼养组(CRS)和散养组(FRS)，每个组4个重复，每个重复80只鸡。112日龄时，控食12小时后，每个重复挑选8只鸡用于试验。采用PCR方法扩增TLR4基因片段。采集肝脏、脾脏、胸腺组织，提取总RNA，反转录成cDNA，采用qPCR方法进行TLR4基因的表达分析。
结果表明，PCR扩增后能看到清晰的扩增条带，详见图4。定量表达分析表明，TLR4在散养组脾脏和胸腺中表达量显著高于笼养组表达量，肝脏中表达差异不显著(图5)。
(2)TLR4基因型与免疫指标相关性
为分析TLR4不同基因型个体之间免疫指标差异，为优质抗病型皖南三黄鸡新品系选育提供重要分子标记，本项目以青阳县平云牧业开发有限公司提供的皖南三黄鸡为试验材料，挑选体重相近的、优质抗病型皖南三黄鸡公鸡，统一饲养至112日龄，采集300只鸡血清。试验选取TLR4基因C3942256T突变，设计引物，采用PCR扩增，测序方法进行基因分型，并采用最小二乘差异显著分析方法，比较不同基因型个体之间的差异。
由表12可知，TLR4基因TT基因型个体免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、白介素2、白介素6显著高于CC基因型个体，结果初步揭示TT为优势基因型，可考虑将TT基因型作为一种重要标记用于辅助选育中。
表12 TLR4基因不同基因型个体免疫指标比较
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，其特征在于，包括如下选育步骤：
S1组建优质鸡基础群与常规选育；
以现有的皖南三黄鸡群为育种素材，综合考虑羽色、胫色、体重性状，筛选出健康强健和生产性能优秀的个体留为种用，组建优质鸡基础群；其中，羽色分为黄羽和麻黄羽，胫色为黄胫，体重为90日龄体重：1000-1100g；
通过本品种选育，建立优质抗病系，每品系10个家系的皖南三黄鸡核心群，外貌特征为黄羽、黄胫，分别在出雏、4周龄、8周龄、12周龄时全体称重，其它各周龄抽5％个体称重，建立新品系选育体重数据；
父本主要采取个体选择，选择依据体重，羽色及肉品质和饲料效率候选基因分型结果进行；母本同时分别记录43周和60周产蛋量和平均蛋重，作为母本家系选择依据之一，母本采用家系选育结合家系内选择方法；
S2肉质与抗病能力指标检测及候选基因分型分析；
对已组建的选育群，测定相应的肉质性状和抗病能力指标，比较不同饲养方式下皖南三黄鸡的生长、屠宰、免疫、肉品质性状及血清生化指标的变化情况；
同时采用PCR-SSCP和多位点序列分型技术的分析技术，对肌肉发育的关键候选基因MyoD；抗病能力的候选基因TLR4进行基因表达与多位点检测，鉴定个体基因型并获得肉质优良、饲料转化效率与抗性有利基因型，进而进一步确定优质抗病选育群；
S3优质抗病型新品系最佳选育方案的确定；
利用鉴定个体基因型与肉质、抗病能力的关系，建立多基因聚合与分子综合选择指数，加快选择进程，具体方法为采用个体选择和家系选择相结合的方案，根据常规育种值估计和多位点有利分子标记相结合的原则，确定分子综合选择指数，建立最佳选育体系，实现新品系的选育；其中，分子综合选择指数，即I＝EBV+MS，其中EBV为估计育种值，MS代表分子评分；
建立包含育种目标性状，采用多位点检测方法对候选基因进行检测和鉴定，对多个目标性状分子标记进行聚合和分子评分，分子评分将根据多位点序列分型结果，利用最小二乘法进行育种效率评估，建立如下模型：Y＝μ+个体效应+合并基因型效应+家系间效应+剩余残差，最后，采用BLUP方法对分子遗传标记和常规育种值进行综合估计，确定分子综合选择指数；建立优质抗病性新品系MAS育种体系，实现多性状有利基因型在不同品系中聚合；
所述步骤S3育种目标性状包括有肉质和抗病能力。
2.根据权利要求1所述的一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，其特征在于，所述步骤S2的肉质性状包括有剪切力、滴水损失、肉色、肌苷酸、多不饱和脂肪酸。
3.根据权利要求1所述的一种优质抗病型地方鸡新品系选育方法，其特征在于，所述步骤S2的抗病能力指标为免疫器官指数、IgA、IgG、IgM、IL-2和IL-6。
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