CN113416764B

CN113416764B - 一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法及其在面膜中的应用

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Publication number: CN113416764B
Application number: CN202110773292.2A
Authority: CN
Inventors: 王宝贝; 刘璐璐; 杨槟煌; 陈洪彬; 郑宗平
Original assignee: Quanzhou Normal University
Current assignee: Quanzhou Normal University
Priority date: 2021-07-08
Filing date: 2021-07-08
Publication date: 2023-10-03
Anticipated expiration: 2041-07-08
Also published as: CN113416764A

Abstract

本发明公开了一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法及其在面膜中的应用，所述方法包括如下步骤：往鲭鱼肉糜中加入水搅拌得到肉糜溶液，沸水浴中加热15~20 min，冷却；然后用碱性蛋白酶酶解1.5 h～3.5 h，酶解结束后于100℃水浴10 min，离心去除沉淀后，上清液冷冻干燥后即为鲭鱼抗氧化肽。将所述鲭鱼抗氧化肽用于制备美白保湿面膜，所述面膜中添加有具有良好抗氧化活性的鲭鱼抗氧化肽，能有效清除各种自由基，促进细胞新陈代谢，修复皮肤受损细胞；同时，富含透明质酸钠、海藻糖、葡聚糖等，可以锁定面部皮肤水分，保持皮肤的湿润，起抗皱养颜的作用；抗氧化肽与维生素C和烟酰胺联合使用还能起到美白效果。

Description

一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法及其在面膜中的应用

技术领域

本发明属于生物化工领域，具体涉及一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法及其在面膜中的应用。

背景技术

生物活性肽具有抗氧化、抑菌等多种生物活性，其活性由分子大小、氨基酸种类和次序决定。生物活性肽不仅具有低毒、高效、高选择性等优点，还具有良好的水溶性，低粘度、低发泡率和低凝胶性等特点，因此其在保健食品、药品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。其中，具有抗氧化功能的生物活性肽又称为抗氧化肽，可以改善不饱和脂肪酸的氧化，防止生物组织中的蛋白质交联、DNA变性和膜损伤等不良后果。由于低温、低照、高盐、高压和寡营养等特殊的生存条件使得海洋鱼类蛋白有别于陆生生物的氨基酸组成和结构。

研究表明，海洋鱼蛋白源抗氧化肽可以通过不同途径清除外源性和内源性自由基，且具有结构复杂、种类多、活性强和低副作用等优势。随着研究技术的不断提高及生物活性物质的研究范围的扩大，越来越多的海洋鱼类生物活性肽被发掘。鲭鱼又名鲐鱼，主要分布在西太平洋及大西洋的海岸附近，是我国重要的经济鱼种。鲭鱼作为一种高蛋白的经济鱼类，主要用于直接食用，资源利用率低，其经济价值未被充分挖掘。鲭鱼含有相当大比例的肌肉蛋白，这部分肌肉蛋白营养价值高，氨基酸组成均衡，同时还含有多种生理功能的生物活性肽等物质。鲭鱼多肽的生物学功能的探索实现鲭鱼的高值化利用和深度开发的一个方向。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法及其在面膜中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法，包括如下步骤：

1)取鲭鱼肉糜，加入去离子水，搅拌混匀得到肉糜溶液；

2)将所述肉糜溶液在沸水浴中加热15～20min，冷却至室温，然后，调节溶液pH为8.0～9.0，加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；

3)将酶解液于100℃水浴10-15min，然后离心(8000r/min离心20min)去除沉淀后，收集上清液进行冷冻干燥，得到鲭鱼抗氧化肽。

步骤1)所述鲭鱼肉糜与水的比例为1mg∶3～5mL。

步骤2)所述蛋白酶为碱性蛋白酶，酶的添加量为3000U/g鲭鱼肉糜。

步骤2)所述酶解条件为：50℃水浴1.5h～3.5h，酶解过程伴有搅拌，搅拌速度为80-100r/min。

所述的鲭鱼抗氧化肽用于制备美白保湿面膜，包括如下成分：大分子透明质酸钠0.1％-0.3％，小分子透明质酸钠0.1％-0.3％，皱波角叉菜粉0.3％-0.5％，甜菜碱1.5％-2.5％，尿囊素0.2％-0.3％，海藻糖1.5％-3.0％，葡聚糖0.4％-0.8％，水解胶原蛋白肽0.15％-0.3％，鲭鱼抗氧化肽0.1％-0.3％，寡肽0.3％-0.5％，甘油3.0％-5.0％，水溶性橄榄油0.2％-0.4％，1,2-戊二醇0.1％-0.3％，丙二醇0.2％-0.3％，山梨醇0.1％-0.2％，香精0.02-0.05％，氢化蓖麻油(PEG40)0.05％-0.15％，苯氧乙醇0.2％-0.3％，维生素C0.3％-0.5％，烟酰胺0.1％-0.25％，余量用纯净水补足。

其中，本发明所述大分子透明质酸钠是指分子量为1200kDa透明质酸。所述小分子透明质酸钠是指分子量为200-400kDa透明质酸。大分子透明子酸主要在皮肤表面让皮肤更加光滑，并且保持皮肤表面的水分。小分子的透明质酸更容易被皮肤吸收，其作用主要是提高皮肤内层的水分。

所述美白保湿面膜的制作方法如下：

1)称取0.1-0.3份小分子透明质酸钠和0.1-0.3份大分子透明质酸钠粉末溶解于少量去离子水中，搅拌至固体充分溶解；

2)依次加入0.3-0.5份皱波角叉菜、1.5-2.5份甜菜碱、0.15-0.3份水解胶原蛋白肽、0.2-0.3份尿囊素，搅拌至固体充分溶解；

3)依次加入1.5-3.0份海藻糖、0.4-0.8份β-葡聚糖、0.3-0.5份维生素C和0.1-0.25份烟酰胺，搅拌至充分溶解，得到透明液体；

4)向上述透明液体中依次加入0.1-0.3份鲭鱼抗氧化肽、0.3-0.5份寡肽-1、3.0-5.0份甘油、0.2-0.4份水溶性橄榄油、0.1-0.3份1,2-戊二醇、0.2-0.3份丙二醇、0.1-0.2份山梨醇和0.2-0.3份苯氧乙醇，搅拌使溶液充分混匀；

5)将0.02-0.05份香精加入到0.05-0.15份氢化蓖麻油中，混合均匀，得到预混液；

6)向步骤4)所得溶液中加入步骤5)制备的预混液，搅拌使其充分混匀，混合液冷却至室温，即得到多肽精华液。

各步骤中的搅拌速度为500～800rpm，搅拌温度为20～50℃。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明以鲭鱼肌肉为原料，通过酶解制备得到具有抗氧化活性的鲭鱼抗氧化肽，该多肽能有效清除各种自由基，促进细胞新陈代谢，修复皮肤受损细胞，且该抗氧化肽为小分子，易于被皮肤吸收。

2、本发明将鲭鱼抗氧化肽用于制备美白保湿面膜，所述面膜将水解胶原蛋白肽和寡肽-1与鲭鱼抗氧化肽进行复配，进一步提高抗皱养颜、修复受损肌肤的功效。其中，寡肽-1为甘氨酸、组氨酸和赖氨酸组成的多肽，具有抗紫外的功效。水解胶原蛋白肽对超氧阴离子(ROS)具有很好的清除作用，可以减轻辐射诱导的皮肤氧化损伤进而修复皮肤光老化；并能促进成纤维细胞增殖及分泌胶原蛋白和弹性蛋白。所述面膜还富含海藻糖、beta-葡聚糖、透明质酸钠、甜菜碱、尿囊素等成分，具有超强的保湿功效，可以使皮肤保持滋润，促进皮肤细胞对营养因子的吸收。保湿是防止皮肤衰老的第一步，它不仅能加强皮肤对外界有害环境的防御能力，还能维持皮肤外观和弹性。本发明将各种保湿原料进行科学搭配，为皮肤提供多重保湿，保湿更持久。小分子透明质酸钠直接到达皮肤基层，深层锁水。海藻糖具有卓越的补水保湿功能，能与皮肤蛋白结合形成保湿性的凝胶，在皮肤表面形成保护膜，防止水分蒸发。大分子透明质酸钠在皮肤表面形成弹性保湿膜，防止水分散失，抵御外界侵害。此外，抗氧化肽与维生素C和烟酰胺联合使用还能起到美白效果。

附图说明

图1为鲭鱼抗氧化肽分子量分布图。

图2为鲭鱼抗氧化肽清除DPPH的能力。

图3为鲭鱼抗氧化肽清除羟基自由基的能力。

图4为实施例3-5的面膜对羟基自由基的清除效果。

图5为实施例3-5的面膜对DPPH的清除效果。

图6为实施例3-5的面膜对酪氨酸酶活性的抑制效果。

图7为实施例3-5面膜的保湿效果

具体实施方式

实施例1鲭鱼抗氧化肽的制备

取鲭鱼肉糜，按固液比为1mg∶3～5mL向所述鲭鱼肉糜中加入去离子水，得到肉糜溶液；将所述肉糜溶液在沸水浴中加热15～20分钟，自然冷却至室温。然后，调节溶液pH至8.5，按照3000U/g肉糜的标准加入碱性蛋白酶，于50℃水浴，搅拌(80-100r/min)酶解2h。酶解结束后于100℃水浴10min，然后将所述溶液离心(8000r/min离心20min)去除沉淀后，上清液进行冷冻干燥，得到鲭鱼抗氧化肽干粉制品。

所得鲭鱼抗氧化肽分子量分布情况如表1和图1所示。该方法制备所得活性肽平均相对分子量为727，其中分子量低于1000Da的多肽达到77.6％，属于小分子多肽，容易被吸收。

表1鲭鱼抗氧化肽分子量分布

实施例2鲭鱼抗氧化肽的抗氧化功效评价

将所得鲭鱼多肽用去离子水配置成不同浓度的多肽溶液，分析其对DPPH、羟基自由基的清除能力，以评价鲭鱼活性多肽的抗氧化能力。

(1)DPPH清除能力检测，参考文献：张玲.小球藻(Chlorella sorokiniana C74)的培养及活性物质的研究[D].海口:海南大学,2015.

取离心管3支，分别标记为A₀、A_i和A_j。向A₀管加入1mL DPPH溶液和1mL无水乙醇，向Ai管中加入1mL DPPH溶液+1mL待测样品，向A_j中加入1mL待测样品和1mL无水乙醇。利用分光光度计测量OD517。清除率按如下公式计算：

DPPH清除率(％)＝(A₀-A_i+A_j)/A₀×100

(2)羟基自由基清除能力检测，参考文献：杨红卫，蔡晨波，李天星，等.冷杉寄生总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究[J].楚雄师范学院学报.2019,34(03):86-90.

取离心管3支，分别标记为A₀、A_i和A_x。向A₀管加入1mL FeSO₄，1mL水和1mL水杨酸-乙醇溶液，混匀；向Ai管中加入1mL FeSO₄，1mL待测样品和1mL水杨酸-乙醇溶液，混匀；向Ax中加入1mL FeSO₄，1mL待测样品和1mL水杨酸-乙醇溶液，混匀。静置10min后，分别向A₀、Ai和Ax中加入500μL H₂O₂，500μL H₂O₂和500μL DI水。利用分光光度计测定OD510值。清除率按如下公式计算：

羟基自由基清除率(％)＝(A₀-A_i+A_X)/A₀×100

检测结果见图2和图3，本发明制备的鲭鱼抗氧化肽对1,1-二苯基-2-苦味酰基自由基(DPPH)和羟基自由基的半数清除浓度(IC50)分别为1.90±0.19mg/mL和1.99±0.09mg/mL。说明鲭鱼抗氧化肽具有很好的自由基清除能力。

实施例3一种含鲭鱼抗氧化肽的美白保湿面膜制作

一种含鲭鱼抗氧化肽的美白保湿面膜，由以下成分组成：大分子透明质酸钠0.3％，小分子透明质酸钠0.3％，皱波角叉菜粉0.3％，甜菜碱2.0％，尿囊素0.2％，海藻糖2.0％，葡聚糖0.5％，(鱼)水解胶原蛋白肽0.3％，鲭鱼抗氧化肽0.3％，寡肽-1 0.3％，甘油5.0％，水溶性橄榄油0.3％，1,2-戊二醇0.3％，丙二醇0.2％，山梨醇0.1％，香精0.04％，氢化蓖麻油(PEG-40)0.15％，苯氧乙醇0.2％，维生素C 0.5％，烟酰胺0.2％，余量纯净水补足。

制作方法包括如下步骤：

1)称取0.3份小分子透明质酸钠和0.3份大分子透明质酸钠粉末溶解于少量去离子水中，搅拌至固体充分溶解。

2)依次加入0.3份皱波角叉菜、2.0份甜菜碱、0.3份鱼水解胶原蛋白肽、0.2份尿囊素，搅拌至固体充分溶解。

3)依次加入2.0份海藻糖、0.5份β-葡聚糖、0.5份维生素C和0.2份烟酰胺，搅拌至固体充分溶解，得到透明液体。

4)向上述透明液体中依次加入0.3份鲭鱼抗氧化肽、0.3份寡肽-1、5.0份甘油、0.3份水溶性橄榄油、0.3份1,2-戊二醇、0.2份丙二醇、0.1份山梨醇和0.2份苯氧乙醇，搅拌使溶液充分混匀。

5)将0.04份香精加入到0.15份氢化蓖麻油(PEG-40)中，混合均匀，得到预混液。

6)向步骤4)所得溶液中加入步骤5)所得的预混液，搅拌使其充分混匀，混合液冷却至室温，即得到多肽精华液。

步骤中所使用搅拌速度为500～800rpm，匀速搅拌，搅拌温度20～50℃。

实施例4一种含鲭鱼抗氧化肽的美白保湿面膜制作

一种鲭鱼抗氧化肽的制备及多肽美白保湿面膜，由以下成分组成：大分子透明质酸钠0.2％，小分子透明质酸钠0.2％，皱波角叉菜粉0.4％，甜菜碱2.0％，尿囊素0.2％，海藻糖2.0％，葡聚糖0.5％，(鱼)水解胶原蛋白肽0.25％，鲭鱼抗氧化肽0.25％，寡肽-10.3％，甘油5.0％，水溶性橄榄油0.3％，1,2-戊二醇0.3％，丙二醇0.2％，山梨醇0.1％，香精0.03％，氢化蓖麻油(PEG-40)0.1％，苯氧乙醇0.2％，维生素C 0.3％，烟酰胺0.15％，余量纯净水补足。

制作方法包括如下步骤：

1)称取0.2份小分子透明质酸钠和0.2份大分子透明质酸钠粉末溶解于少量去离子水中，搅拌至固体充分溶解。

2)向步骤1)中依次加入0.4份皱波角叉菜、2.0份甜菜碱、0.25份鱼水解胶原蛋白肽、0.2份尿囊素，搅拌至固体充分溶解。

3)向步骤2)中依次加入2.0份海藻糖、0.5份β-葡聚糖、0.5份维生素C和0.2份烟酰胺，搅拌至固体充分溶解，得到透明液体。

4)向上述透明液体中依次加入0.25份鲭鱼抗氧化肽、0.3份寡肽-1、5.0份甘油、0.3份水溶性橄榄油、0.3份1,2-戊二醇、0.2份丙二醇、0.1份山梨醇和0.2份苯氧乙醇，搅拌使溶液充分混匀。

5)将0.03份香精加入到0.1份氢化蓖麻油(PEG-40)中，混合均匀，得到预混液。

实施例5一种含鲭鱼抗氧化肽的美白保湿面膜制作

一种鲭鱼抗氧化肽的制备及多肽美白保湿面膜，由以下成分组成：大分子透明质酸钠0.2％，小分子透明质酸钠0.2％，皱波角叉菜粉0.5％，甜菜碱2.0％，尿囊素0.2％，海藻糖2.0％，葡聚糖0.5％，水解胶原蛋白肽0.2％，鲭鱼抗氧化肽0.2％，寡肽-1 0.3％，甘油5.0％，水溶性橄榄油0.3％，1,2-戊二醇0.2％，丙二醇0.2％，山梨醇0.1％，香精0.02％，氢化蓖麻油(PEG-40)0.1％，苯氧乙醇0.2％，维生素C 0.3％，烟酰胺0.1％，余量纯净水补足。

制作方法包括如下步骤：

2)向步骤1)中依次加入0.4份皱波角叉菜、2.0份甜菜碱、0.2份鱼水解胶原蛋白肽、0.2份尿囊素，搅拌至固体充分溶解。

3)向步骤2)中依次加入2.0份海藻糖、0.5份β-葡聚糖、0.3份维生素C和0.1份烟酰胺，搅拌至固体充分溶解，得到透明液体。

4)向上述透明液体中依次加入0.2份鲭鱼抗氧化肽、0.3份寡肽-1、5.0份甘油、0.3份水溶性橄榄油、0.2份1,2-戊二醇、0.2份丙二醇、0.1份山梨醇和0.2份苯氧乙醇，搅拌使溶液充分混匀。

(1)实施例3-5制备的面膜的抗氧化效果对比

皮肤衰老、色素沉积、炎症等很多均与细胞的氧化应激水平有关。及时清除细胞内过量的自由基有助于消炎、减少色素沉积、延缓皮肤衰老等作用。本发明实施例3-5的面膜对羟基自由基和DPPH均有很好的清除效果，其清除率分别在72.47％-95.5％和62.03％-88.14％之间，见图4、图5。可见，本发明的面膜具有很好的抗氧化活性。

(2)实施例3-5制备的面膜的美白效果对比(酪氨酸酶活性抑制效果)

酪氨酸酶抑制率的测定参考胡大强等的方法，稍作修改，具体如下：在96孔板中依次加入20μL待测样品、20μL酪氨酸酶溶液(200U/mL)，对照组用20μL磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH 6.8)代替待测样品，37℃孵育20min，再加入160μL底物(L-多巴)震板混匀，37℃孵育5min后在475nm处吸光值。酪氨酸酶抑制率计算如下式：

抑制率＝[1-(A₁-A₀)/(T₁、T₀)]×100

其中，A₁、A₀、T₁、T₀分别表示反应体系在475nm的吸光值(详见表2)。

表2酪氨酸酶反应体系

酪氨酸酶是皮肤黑色素形成的关键蛋白酶，抑制酪氨酸酶的活性可以有效减少色素的合成和沉积，从而达到去除痘印、美白的效果。目前大部分美白、祛斑产品都是以酪氨酸酶作为作用靶点，通过抑制其活性，或是阻断酪氨酸氧化生成黑色素的反应来减少皮肤黑色素的生成，从而达到美白的效果。本发明实施例3-5的面膜对酪氨酸酶活性的抑制率达到50％以上，这说明本产品具有良好的美白功效，见图6。

(3)实施例3-5制备的面膜的保湿效果对比

分别称量实施例3-5的样品(1.00g)于称量瓶中，置于装有饱和硫酸铵溶液(控制湿度在81％，20℃)的干燥器中，放置6h，12h和24h后称重，通过下式计算样品的保湿率。由图7可见，实施例3-5的面膜在6小时后保湿率为94％，12小时后保湿率大于87％，24小时后保湿率仍然大于75％。说明实施例3-5面膜的保湿效果较佳。

其中，保湿率按如下公式计算：

保湿率(％)＝M_T/M₀×100％

其中，M_T为放置T小时后水分质量；M₀为放置前水分质量。

(4)实施例3-5制备的面膜的使用效果对比

抗氧化肽美白保湿面膜营养液的制备：将剪成面膜大小的面膜用无纺布浸泡在抗氧化肽美白保湿面膜营养液中(实施例3-5)。其中面膜用无纺布与抗氧化肽美白保湿面膜营养液的质量体积比为1g:25mL，浸泡时间为30分钟，浸泡后即得到抗氧化肽美白保湿面膜。

本发明的护肤检测效果如下：

1)短期效果

选择四组年龄为18～45周岁的女性志愿者进行测试，每组30人。志愿者清洗好手臂后，在恒温恒湿(室内温度22～26℃，湿度40～60％)的环境平衡30分钟后定位，测定皮肤基础数据。将实施例3-5中的样品按定位分别敷在相应的区域，分别在敷20分钟后，测定使用面膜后该部位皮肤表面的数据(空白对照组不作处理)。表3测试结果表明，使用本发明面膜短期内具有明显的保湿功效，但对皮肤弹性的增加、细纹的减少及美白等功能暂未体现。

表3抗氧化肽美白保湿面膜营养液短期使用效果

2)长期效果

选择年龄为18～45周岁的女性志愿者，每组30人，进行为期28天的测试。志愿者清洗好手臂后，在恒温恒湿(室内温度22～25℃，湿度40～60％)的环境平衡30分钟后定位，测定皮肤(包括水分、亮白度、黑色素、弹性)，并在测试位置做好标记。四组志愿者分别连续使用一种实施例样品共28天，在使用4周后在测试的同一位置测定皮肤数据，测试方法及时间同上。对比使用前后各参数的变化情况。表4的测试结果表明，连续使用本发明面膜一个28天的周期，不仅起到保湿的功能，还能有效淡化细纹、增加皮肤弹性，并且还具有明显的美白功效。

表4抗氧化肽美白保湿面膜营养液长期使用效果

Claims

1.一种鲭鱼抗氧化肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）取鲭鱼肉糜，加入水，搅拌混匀得到肉糜溶液，所述鲭鱼肉糜与水的比例为1mg∶3～5mL；

2）将所述肉糜溶液在沸水浴中加热15~20 min，冷却至室温，然后，调节溶液pH，加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；

所述蛋白酶为碱性蛋白酶，酶的添加量为3000U/g鲭鱼肉糜，酶解过程溶液pH为8.0~9.0，酶解条件为：50 ℃水浴1.5h～3.5h，酶解过程伴有搅拌，搅拌速度为 80-100 r/min；

3）将酶解液于100℃水浴10-15 min，然后离心去除沉淀后，收集上清液进行冷冻干燥，得到鲭鱼抗氧化肽，所述鲭鱼抗氧化肽对1,1-二苯基-2-苦味酰基自由基和羟基自由基的半数清除浓度(IC50)分别为1.90±0.19 mg/mL和1.99±0.09 mg/mL。

2.根据权利要求1所述的制备方法得到的鲭鱼抗氧化肽。

3.根据权利要求2所述的鲭鱼抗氧化肽在美白保湿面膜中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述美白保湿面膜的成分及其重量百分含量如下：大分子透明质酸钠0.1%-0.3%，小分子透明质酸钠0.1%-0.3%，皱波角叉菜粉0.3%-0.5%，甜菜碱1.5%-2.5%，尿囊素0.2%-0.3%，海藻糖1.5%-3.0%，葡聚糖0.4%-0.8%，水解胶原蛋白肽0.15%-0.3%，鲭鱼抗氧化肽0.1%-0.3%，寡肽 0.3%-0.5%，甘油3.0%-5.0%，水溶性橄榄油0.2%-0.4%，1,2-戊二醇0.1%-0.3%，丙二醇0.2%-0.3%，山梨醇0.1%-0.2%，香精0.02-0.05%，氢化蓖麻油0.05%-0.15%，苯氧乙醇0.2%-0.3%，维生素C 0.3%-0.5%，烟酰胺0.1%-0.25%，余量用纯净水补足。

5.根据权利要求3所述的应用，特征在于，所述美白保湿面膜的制作方法包括如下步骤：

1）称取0.1-0.3份小分子透明质酸钠和0.1-0.3份大分子透明质酸钠粉末溶解于少量去离子水中，搅拌至固体充分溶解；

2）依次加入0.3-0.5份皱波角叉菜、1.5-2.5份甜菜碱、0.15-0.3份水解胶原蛋白肽、0.2-0.3份尿囊素，搅拌至固体充分溶解；

3）依次加入1.5-3.0份海藻糖、0.4-0.8份β-葡聚糖、0.3-0.5份维生素C和0.1-0.25份烟酰胺，搅拌至充分溶解，得到透明液体；

4）向上述透明液体中依次加入0.1-0.3份鲭鱼抗氧化肽、0.3-0.5份寡肽-1、3.0-5.0份甘油、0.2-0.4份水溶性橄榄油、0.1-0.3份1,2-戊二醇、0.2-0.3份丙二醇、0.1-0.2份山梨醇和0.2-0.3份苯氧乙醇，搅拌使溶液充分混匀；

5）将0.02-0.05份香精加入到0.05-0.15份氢化蓖麻油中，混合均匀，得到预混液；

6）向步骤4）所得溶液中加入步骤5）制备的预混液，搅拌使其充分混匀，混合液冷却至室温，即得到多肽精华液。

6. 根据权利要求3所述的应用，特征在于，各步骤中的搅拌速度为500~800 rpm，搅拌温度为20~50℃。