CN113416183B - 一种从芒果叶中提取芒果苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：1）芒果叶膨化得到膨化的芒果叶；2）乙醇提取得到浸提液；3）一次过滤得到一次滤液和滤渣；4）萃取得到一次粗提液；5）烘干、粉碎；6）菌种活化：将黑曲霉和活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中培养；7）制备混合菌悬液得到混合菌悬液；8）料液混合：将粉碎后的滤渣与混合菌悬液混合后置于振荡培养箱中培养，得到二次粗提液；9）二次过滤得到芒果苷提取液；10）将芒果苷提取液进行浓缩后冷冻干燥得到芒果苷。本发明先采用低温高压膨化技术预处理芒果叶，并采用黑曲霉和活性干酵母提取滤渣中残留的芒果苷，使滤渣细胞壁破裂，促进芒果苷的溶出，提高了芒果苷的提取率。

Description

一种从芒果叶中提取芒果苷的方法
技术领域
本发明涉及技术植物有效成分提取技术领域，特别涉及一种从芒果叶中提取芒果苷的方法。
背景技术
芒果叶漆树科植物芒果的叶，其性微酸、甘、凉、平，具有行气疏滞、祛痧积的功能，主要用于治疗热滞腹痛、气胀、小儿疳积、消渴等症状。芒果叶中含有芒果苷、原儿茶酸、叶绿素等多种化学成分，是芒果苷提取的主要来源。
经研究，芒果苷治疗慢性支气管炎有较好疗效；芒果苷具有明显的抗肝毒和利胆作用，常用于治疗肝炎，芒果苷对肝癌细胞株有明显的毒性作用，能诱导肝癌细胞凋亡。芒果苷作为原料已广泛应用于医药保健品，主要有胶囊剂、片剂、水剂等，芒果苷还大量用作化妆品的添加剂，具有防晒功效，无副作用，而且具有成本低、效果好的优势。
现有技中有许多用于提取芒果叶中芒果苷的方法，如专利申请号为CN201710057903.7公开了一种从芒果叶中提取分离芒果苷的方法，包括A、原料准备；B、酯提除杂；C、甲醇提取；D、浓缩洗涤可以获得纯度60～70％的芒果苷粗品：以及进一步进行步骤E、结晶纯化，可得到纯度90～98％的芒果苷纯品。本发明提取方法只需采用几步简单的提取分离手段，就可以获得较高纯度的芒果苷，操作简便，成本大大降低。本发明提取方法可分别得到纯度为60～70％的芒果苷粗品和纯度为90～98％的芒果苷纯品，芒果苷粗品的产率≥83％，纯品的产率≥65％。采用该方法提取芒果叶中的芒果苷时，经过提取后的芒果叶滤渣中残留的芒果苷未得以充分提取出来，降低了芒果苷的提取率。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种提取方法简单且提取率高的从芒果叶中提取芒果苷的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，将筛选的芒果叶置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
2）乙醇提取：按料液比为1：3-4将膨化的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1-2h，得到浸提液；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎；
6）菌种活化：将黑曲霉和活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中在30-40℃下培养黑曲霉5-6天，活性干酵母1-2天；
7）制备混合菌悬液：将步骤6）活化后的黑曲霉和活性干酵母接种到培养液中，使黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL，活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL，得到混合菌悬液；
8）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与混合菌悬液混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养1-2天，得到二次粗提液；
9）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，吸附完后用浓度为75%的乙醇溶液洗脱，得到芒果苷提取液；
10）将芒果苷提取液进行浓缩后冷冻干燥得到芒果苷。
进一步，所述步骤1）中膨化处理的温度为70-80℃，膨化时间为1-1.5min，膨化压力为20-30mPa。
进一步，所述步骤2）中乙醇溶液的制备方法为：按质量体积比为1：4-6向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸。
进一步，所述步骤5）中烘干的温度为70-80℃，烘干时间为40-60min，滤渣粉碎粒径为80-100目。
进一步，所述PDA培养基的制备方法为：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得。
进一步，所述培养液的制备方法为：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得。
进一步，所述滤渣与培养液的料液比为1：20-40。
当滤渣与培养液的料液比小于1：20时，黑曲霉和活性干酵母的含量较少，破坏滤渣中细胞壁的程度受到限制，芒果苷的提取率低；当滤渣与培养液的料液比大于1：20时，滤渣的浓度较低，其含有的芒果苷的含量较低，不仅增大了黑曲霉和活性干酵母的使用量，且其提取率的增加也没有显著的变化，提高了提取成本；且当料液比大于1：20时，在培养过程中会产生异味不利于实验的进行，此外，随着料液比的增大，培养液中水的含量也逐渐增大，有利于滤渣细胞中水溶性成分的溶出，从而抑制了芒果苷的溶出。
优选地，所述滤渣与培养液的料液比为1：30。
进一步，所述振荡培养箱中培养时的温度为30-35℃，转速为150-200rpm。
进一步，所述步骤9）中混合粗提液上样体积为10-12BV，洗脱液体积为3-5BV，上样流速和洗脱液流速为3mL/min。
本发明一种从芒果叶中提取芒果苷的方法的有益效果：
（1）本发明的提取方法先采用低温高压膨化技术预处理芒果叶，芒果叶受热膨胀，增大了细胞孔隙，促进了芒果苷的溶出，提高芒果苷的提取率，缩短芒果苷的提取时间；
（2）本发明采用黑曲霉和活性干酵母的混合菌悬液处理经过乙醇浸提后的滤渣，进一步提取滤渣中残留的芒果苷，使滤渣细胞壁破裂，促进芒果苷的溶出，其相对于采用单一菌种的菌悬液处理，大大提高了芒果苷的提取率。
附图说明
图1—为芒果苷的提取率随黑曲霉浓度变化的趋势图；
图2—为芒果苷的提取率随活性干酵母浓度变化的趋势图；
图3—为芒果苷的提取率随滤渣与混合菌悬液的料液比变化的趋势图。
具体实施方式
以下结合附图及实施例对本发明作进一步说明，但这些具体实施方案不以任何方式限制本发明的保护范围。
实施例1
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化处理的温度为75℃，膨化时间为1.5min，膨化压力为25mPa，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
在芒果叶用乙醇进行浸提之前采用低温高压膨化处理，使芒果叶的组织结构变得疏松，增大了芒果叶的细胞孔隙，有助于乙醇溶液渗入细胞内，有效促进细胞内芒果苷的浸出；
2）乙醇提取：按料液比为1： 4将膨化后的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1.5h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：5向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得，通过加入抗坏血酸使该乙醇溶液保持在微酸性环境，提高芒果苷的稳定性，同时，也抑制了芒果苷的氧化；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液，由于抗坏血酸不溶于***，采用***萃取可去除一次滤液中的抗坏血酸；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎，烘干的温度为75℃，烘干时间为50min，滤渣粉碎粒径为100目；
6）制备PDA培养基：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得；
7）菌种活化：将黑曲霉和活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中在35℃下培养黑曲霉6天，活性干酵母2天；
8）制备培养液：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得；pH为7.0有助于提高芒果苷的稳定性；
9）制备混合菌悬液：将步骤7）活化后的黑曲霉和活性干酵母接种到培养液中，使黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL，活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL，得到混合菌悬液；采用黑曲霉和活性干酵母制备的混合菌悬液处理滤渣，黑曲霉和活性干酵母培养过程中的代谢产物可使滤渣中细胞的细胞壁破裂，使芒果苷从细胞中充分释放出来，有效提高了芒果苷的提取率，且两种菌共同作用发挥了更好的效果；
10）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与混合菌悬液按料液比为1：30混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养2天，所述振荡培养箱中培养时的温度为32℃，转速为180rpm得到二次粗提液。
11）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为11BV，吸附完后用4BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
12）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
实施例2
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化处理的温度为70℃，膨化时间为10min，膨化压力为20mPa，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
2）乙醇提取：按料液比为1： 3将膨化后的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：4向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎，烘干的温度为70℃，烘干时间为40min，滤渣粉碎粒径为80目；
6）制备PDA培养基：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得；
7）菌种活化：将黑曲霉和活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中在30℃下培养黑曲霉5天，活性干酵母1天；
8）制备培养液：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得；
9）制备混合菌悬液：将步骤7）活化后的黑曲霉和活性干酵母接种到培养液中，使黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL，活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL，得到混合菌悬液；
10）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与混合菌悬液按料液比为1：20混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养1天，所述振荡培养箱中培养时的温度为30℃，转速为150rpm得到二次粗提液。
11）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为10BV，吸附完后用3BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
12）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
实施例3
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化处理的温度为80℃，膨化时间为1.5min，膨化压力为30mPa，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
2）乙醇提取：按料液比为1： 4将膨化后的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提2h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：6向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎，烘干的温度为80℃，烘干时间为60min，滤渣粉碎粒径为100目；
6）制备PDA培养基：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得；
7）菌种活化：将黑曲霉和活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中在40℃下培养黑曲霉6天，活性干酵母2天；
8）制备培养液：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得；
9）制备混合菌悬液：将步骤7）活化后的黑曲霉和活性干酵母接种到培养液中，使黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL，活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL，得到混合菌悬液；
10）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与混合菌悬液按料液比为1：40混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养2天，所述振荡培养箱中培养时的温度为35℃，转速为200rpm得到二次粗提液。
11）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为12BV，吸附完后用5BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
12）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
对比例1
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g，按料液比为1：4将芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1.5h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：5向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得；
2）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
3）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液
4）将一次粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为11BV，吸附完后用4BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
4）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
对比例2
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g，在烘干机中烘干后粉碎，烘干的温度为75℃，烘干时间为50min，粉碎粒径为100目，按料液比为1： 4将粉末原料浸泡于乙醇溶液中进行浸提1.5h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：5向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得；
2）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
3）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液
4）将一次粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为11BV，吸附完后用4BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
5）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
对比例3
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化处理的温度为75℃，膨化时间为1.5min，膨化压力为25mPa，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
在芒果叶用乙醇进行浸提之前采用低温高压膨化处理，使芒果叶的组织结构变得疏松，增大了芒果叶的细胞孔隙，有助于乙醇溶液渗入细胞内，有效促进细胞内芒果苷的浸出；
2）乙醇提取：按料液比为1： 4将膨化后的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1.5h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：5向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得，通过加入抗坏血酸使该乙醇溶液保持在微酸性环境，提高芒果苷的稳定性，同时，也抑制了芒果苷的氧化；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液
5）将一次粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为11BV，吸附完后用4BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
6）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
对比例4
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化处理的温度为75℃，膨化时间为1.5min，膨化压力为25mPa，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
2）乙醇提取：按料液比为1： 4将膨化后的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1.5h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：5向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液，由于抗坏血酸不溶于***；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎，烘干的温度为75℃，烘干时间为50min，滤渣粉碎粒径为100目；
6）制备PDA培养基：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得；
7）菌种活化：将黑曲霉转接到PDA培养基中，置于培养箱中在35℃下培养黑曲霉6天；
8）制备培养液：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得；pH为7.0有助于提高芒果苷的稳定性；
9）制备混合菌悬液：将步骤7）活化后的黑曲霉接种到培养液中，使黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL，得到菌悬液；
10）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与菌悬液按料液比为1：30混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养2天，所述振荡培养箱中培养时的温度为32℃，转速为180rpm得到二次粗提液。
11）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为11BV，吸附完后用4BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
12）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
对比例5
一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，称取筛选后的芒果叶2000g置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化处理的温度为75℃，膨化时间为1.5min，膨化压力为25mPa，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
2）乙醇提取：按料液比为1： 4将膨化后的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1.5h，得到浸提液，该乙醇溶液是按质量体积比为1：5向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸制得；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液，由于抗坏血酸不溶于***；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎，烘干的温度为75℃，烘干时间为50min，滤渣粉碎粒径为100目；
6）制备PDA培养基：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得；
7）菌种活化：将活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中在35℃下培养活性干酵母2天；
8）制备培养液：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得；pH为7.0有助于提高芒果苷的稳定性；
9）制备混合菌悬液：将步骤7）活化后的黑曲霉和活性干酵母接种到培养液中，使活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL，得到菌悬液；
10）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与菌悬液按料液比为1：30混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养2天，所述振荡培养箱中培养时的温度为32℃，转速为180rpm得到二次粗提液。
11）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，上样体积为11BV，吸附完后用4BV、浓度为75%的乙醇溶液洗脱，上样流速和洗脱液流速为3mL/min得到芒果苷提取液；
12）将芒果苷提取液在60℃下旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/6，冷冻干燥得到芒果苷。
实验例1 对实施例1-3以及对比例1-5的提取率进行了检测实验
采用实施例1-3以及对比例1-5提取芒果苷的方法提取后的提取率如表1所示：
表1 实施例1-3及对比例1-5中芒果苷的提取率
Figure 907284DEST_PATH_IMAGE002
由上表可知，对比例1-5中提取率均小于86%，采用本发明的提取方法，芒果叶中芒果苷的提取率高达91.2%，有效提高了芒果苷的提取率，且通过比较实施例1与对比例4、5可知，采用黑曲霉和活性干酵母制备的混合菌悬液具有比采用单独菌种制备的菌悬液更高的提取率。
实验例2 黑曲霉浓度的优化实验
采用本实施例1的提取方法，分别制备成混合菌悬液中黑曲霉的浓度为0.4×109cfu/mL、0.6×109cfu/mL、0.8×109cfu/mL、1×109cfu/mL、1.2×109cfu/mL、1.4×109cfu/mL、1.6×109cfu/mL，测定其分别对应的芒果苷的提取率，如图1所示，由图可知，芒果苷的提取率随黑曲霉浓度的增加呈现先增大，在浓度为1.2×109cfu/mL时，达到最大为91%，随着浓度进一步增大提取率下降，由于细胞壁破裂程度的增大，水溶性成分的溶出抑制了芒果苷的溶出，因此，选择黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL。
实验例3 活性干酵母浓度的优化实验
采用本实施例1的提取方法，分别制备成混合菌悬液中活性干酵母的浓度为0.4×107cfu/mL、0.6×107cfu/mL、0.8×107cfu/mL、1×107cfu/mL、1.2×107cfu/mL、1.4×107cfu/mL、1.6×107cfu/mL，测定其分别对应的芒果苷的提取率，如图2所示，由图可知，芒果苷的提取率随活性干酵母浓度的增加呈现先增大，在浓度为1.4×107cfu/mL时，达到最大为90.8%，随着浓度进一步增大提取率下降，由于细胞壁破裂程度的增大，水溶性成分的溶出抑制了芒果苷的溶出，因此，选择活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL。
实验例4 滤渣与混合菌悬液的料液比的优化实验
采用本实施例1的提取方法，分别采用滤渣与混合菌悬液的料液比为1：5、1：10、1：20、1：30、1：40、1：50、1：60进行提取芒果苷，测定其分别对应的芒果苷的提取率，如图3所示，由图可知，随着料液比的增大，提取率呈现先增大后下降的趋势，在料液比为1：20-40时，提取率达到了90%，当料液比为1：30时最大为91%，因此，选择料液比为1：30。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）芒果叶膨化：选用新鲜的芒果叶，去除枯叶烂叶，将筛选的芒果叶置于低温高压膨化机中膨化处理，膨化完后冷却至室温，得到膨化的芒果叶；
2）乙醇提取：按料液比为1：3-4将膨化的芒果叶浸泡于乙醇溶液中进行浸提1-2h，得到浸提液；
3）一次过滤：将浸提液进行过滤，过滤后得到一次滤液和滤渣；
4）萃取：将一次滤液加入***中，用***进行萃取得到一次粗提液；
5）烘干、粉碎；将滤渣在烘干机中烘干后粉碎；
6）菌种活化：将黑曲霉和活性干酵母转接到PDA培养基中，置于培养箱中在30-40℃下培养黑曲霉5-6天，活性干酵母1-2天；
7）制备混合菌悬液：将步骤6）活化后的黑曲霉和活性干酵母接种到培养液中，使黑曲霉的浓度为1.2×109cfu/mL，活性干酵母的浓度为1.4×107cfu/mL，得到混合菌悬液；
8）料液混合：将步骤5）粉碎后的滤渣与混合菌悬液混合均匀后置于振荡培养箱中振荡培养1-2天，得到二次粗提液；
9）二次过滤：将一次粗提液和二次粗提液混合后得到的混合粗提液用大孔吸附树脂AB-8液进行吸附，吸附完后用浓度为75%的乙醇溶液洗脱，得到芒果苷提取液；
10）将芒果苷提取液进行浓缩后冷冻干燥得到芒果苷。
2.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述步骤1）中膨化处理的温度为70-80℃，膨化时间为1-1.5min，膨化压力为20-30mPa。
3.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述步骤2）中乙醇溶液的制备方法为：按质量体积比为1：4-6向95%乙醇溶液中加入抗坏血酸。
4.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述步骤5）中烘干的温度为70-80℃，烘干时间为40-60min，滤渣粉碎粒径为80-100目。
5.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述PDA培养基的制备方法为：称取300g去皮后的马铃薯，切块，煮沸后过滤，加入葡萄糖30g、琼脂30g，补水至300nL，然后灭菌即得。
6.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述培养液的制备方法为：称取山芋粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁1g，氯化钠1g，硝酸钾2g，补水至1000mL，调整pH=7.0，灭菌即得。
7.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述滤渣与培养液的料液比为1：20-40。
8.如权利要求7所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述滤渣与培养液的料液比为1：30。
9.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述振荡培养箱中培养时的温度为30-35℃，转速为150-200rpm。
10.如权利要求1所述一种从芒果叶中提取芒果苷的方法，其特征在于：所述步骤9）中混合粗提液上样体积为10-12BV，洗脱液体积为3-5BV，上样流速和洗脱液流速为3mL/min。
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