CN113336816B

CN113336816B - 胞苷类化合物及其抗肿瘤用途

Info

Publication number: CN113336816B
Application number: CN202110618042.1A
Authority: CN
Inventors: 刘明亮; 夏桂民; 汪阿鹏
Original assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Current assignee: Institute of Medicinal Biotechnology of CAMS
Priority date: 2021-06-03
Filing date: 2021-06-03
Publication date: 2022-05-17
Anticipated expiration: 2041-06-03
Also published as: CN113336816A

Abstract

本发明涉及胞苷类化合物及其抗肿瘤用途。具体地说，本发明涉及一组具有抗肿瘤活性的新型胞苷类化合物及其制备方法，以及在抗肿瘤方面的应用。本发明的化合物具有如下式(I)和式(II)所示的化学结构，其中各取代基如说明书所述。本发明所制得的化合物对白血病具有优良的抑瘤作用。

Description

胞苷类化合物及其抗肿瘤用途

技术领域

本发明属于医药化学领域，涉及改善胞苷类药物抗肿瘤性能的方法，尤其是涉及一组具有优良抗肿瘤活性的阿糖胞苷前药及其制备方法，以及它们在抗肿瘤方面的应用。

背景技术

阿糖胞苷(Cytarabine，Ara-C)，又称胞嘧啶***糖苷，化学名为1-β-D-***呋喃糖基-4-氨基-2(1H)-嘧啶酮，CAS号147-94-4，分子式C₉H₁₃N₃O₅，分子量243.22，其化学结构式如以下式(VI)所示：

阿糖胞苷最早在1959年由加州大学伯克利分校的Walwick R等药物学家合成。美国FDA于1969年6月批准阿糖胞苷上市。它最初由Upjohn公司以Cytosar-U的商品名出售这种药物的化学结构是胞嘧啶与***糖结合成的核苷，因此得名“阿糖胞苷”。

阿糖胞苷为主要作用于细胞S增殖期的嘧啶类抗代谢药物，通过抑制细胞DNA的合成，干扰细胞的增殖。阿糖胞苷进入人体必须先经活化才能起作用，即需在脱氧胞嘧啶激酶的催化下先转化为5-磷酸核苷酸(Ara-CMP)，Ara-CMp能与合适的核苷酸激酶反应形成二磷酸和三磷酸核苷酸(Ara-CDP和Ara-CTP)，前者能强有力地抑制DNA聚合酶的合成，后者能抑制二磷酸胞苷转变为二磷酸脱氧胞苷，从而抑制细胞DNA聚合及合成。本品为细胞周期特异性药物，对处于S期增殖期细胞的作用最敏感，对抑制RNA及蛋白质合成的作用较弱。

广泛存在于实体瘤中的胞苷脱氨酶(但其在白血病细胞中的水平低)可使阿糖胞苷发生脱氨而转化为失活代谢物-阿糖尿苷(Ara-U)(Shimma N，等.Bioorganic&MedicinalChemistry 8(2000)1697-1706)，故本品(静脉给药阿糖胞苷盐酸盐)在临床上主要用于急性淋巴细胞性及非淋巴细胞性白血病的诱导缓解期或维持巩固期、慢性粒细胞性白血病的急变期。遗憾的是，仍有较多患者病情不能缓解或缓解后复发，而耐药因素占有很大的比重。本品的常见不良反应包括白细胞减少、血小板减少和巨幼红细胞性贫血等骨髓抑制，恶心、呕吐亦为常见。此外，可出现口腔溃疡、血栓静脉炎和肝功能受损。尽管阿糖胞苷目前仍是临床上治疗急性髓系白血病的一线药物之一，但其耐药性及毒副作用的不断加剧严格限制了本品的临床应用。

现有技术仍然期待有新的方法并且预期具有某种或某些更优异效果来***，例如期待有性能更加优良的抗肿瘤药物胞嘧啶类化合物例如阿糖胞苷前药及其组合物应用于临床。

发明内容

本发明的目的是提供新的、并且期待具有某种或某些更优异效果的方法来***，例如提供具有更加优良性能的抗肿瘤药物应用于临床。本发明人出人意料地发现，具有本发明结构的化合物作为抗肿瘤药物呈现一个或者多个方面的优异效果。本发明基于此类发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了以下式(I)化合物(其在本发明中亦可称为阿糖胞苷氨基甲酸酯类化合物或阿糖胞苷氨基甲酸酯)和式(II)化合物(其在本发明中亦可称为阿糖胞苷三酯类化合物)，

或其药用盐、溶剂化物，

其中：

R₁、R₂、R₃独立地代表C_6-22直链或支链(例如C_8-22直链或支链，例如C_10-22直链或支链)的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个或2个CH₂可任选被O替代；

X代表O、NH或不存在。

根据本发明第一方面的化合物，其中所述R₁、R₂、R₃选自：正癸烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、正二十烷基、正二十二烷基、正十六烷氧丙基、正十八烷氧乙基、(9-烯)正十烷基、(11-烯)正十二烷基、(11-烯)正十二烷乙基。

根据本发明第一方面的化合物或者本发明其它任一方面提及的，其中所述药用盐是与无机酸或者与有机酸形成的盐。

根据本发明第一方面的化合物或者本发明其它任一方面提及的，其中所述无机酸选自：盐酸、硫酸、磷酸。尤其优选的药用盐为盐酸盐。

根据本发明第一方面的化合物或者本发明其它任一方面提及的，其中所述有机酸选自：乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸、苹果酸、氨基酸(例如丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸)、磺酸(例如甲磺酸、对甲苯磺酸)。

根据本发明第一方面的化合物，其也可以溶剂化物(例如水合物)的形式存在，因此，这些溶剂化物(例如水合物)也包括在本发明的化合物之内。

根据本发明第一方面的化合物，其为选自下列的化合物1～化合物17：

化合物1：N⁴-正十四烷氧羰基阿糖胞苷，

化合物2：N⁴-正己氧羰基阿糖胞苷，

化合物3：N⁴-正癸氧羰基阿糖胞苷，

化合物4：N⁴-正二十烷氧羰基阿糖胞苷，

化合物5：N⁴-正二十二烷氧羰基阿糖胞苷，

化合物6：N⁴-(9-癸烯基氧基羰基)阿糖胞苷，

化合物7：N⁴-(13-十四烯基氧基羰基)阿糖胞苷，

化合物8：N⁴-(21-二十二烯基氧基羰基)阿糖胞苷，

化合物9：2’,3’,5’-三-O-正十四酰基阿糖胞苷，

化合物10：2’,3’,5’-三-O-正十一酰基阿糖胞苷，

化合物11：2’,3’,5’-三-O-(21”-正二十二烯基酰基)阿糖胞苷，

化合物12：2’,3’,5’-三-O-(正己氧酰基)阿糖胞苷，

化合物13：2’,3’,5’-三-O-(正十四烷氧酰基)阿糖胞苷，

化合物14：2’,3’,5’-三-O-(21”-正二十二烯基氧基甲酰基)阿糖胞苷，

化合物15：2’,3’,5’-三-O-(正癸氨基酰基)阿糖胞苷，

化合物16：2’,3’,5’-三-O-(正十四烷氨基酰基)阿糖胞苷，

化合物17：2’,3’,5’-三-O-(21”-正二十二烯氨基酰基)阿糖胞苷。

进一步的，本发明第二方面提供了制备式(I)化合物和式(Ⅱ)化合物的方法，二者分别按以下反应路线一和反应路线二进行：

反应路线一：

在反应路线一中，R₁如本发明第一方面任一实施方案所定义的。

反应路线二：

在反应路线二中，R₁、R₂、R₃和X如本发明第一方面任一实施方案所定义的。

根据本发明第二方面的方法，其中制备式(I)化合物包括如下步骤：

1)使式(III)化合物溶于非极性溶剂(例如，二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环)，在1.5-3倍当量有机碱(例如，三乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶)存在下，与1-2倍当量的式(IV)化合物在0℃-40℃下搅拌反应3-10小时，得到式(V)化合物；

2)使式(V)化合物溶于质子性溶剂(例如，水、醇或醇-水混合溶剂)，加入0.1-2当量的无机碱(例如0.1～0.5当量；例如，氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠)，在0℃-室温下搅拌反应0.5-3小时，得到式(I)化合物。

根据本发明第二方面的方法，其中制备式(II)化合物包括如下步骤：

1)使式(VI)化合物溶于选自如下的非极性溶剂：二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环，在选自如下的有机碱存在下：三乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶，与1～6倍当量的Boc₂O在室温～50℃下搅拌反应3～15小时，得到氨基保护的式(VII)化合物；

2)使式(VII)化合物溶于选自如下的非极性溶剂：二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环，在选自如下的有机碱存在下：三乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶，与1～4倍当量的式(IV)化合物、式(VIII)化合物或式(IX)化合物于0℃～室温下搅拌反应4～15小时，得到式(X)化合物；

3)使式(X)化合物溶于选自如下的非极性溶剂：二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环，加入1～2倍当量的选自如下的酸：三氟乙酸、盐酸，于0℃～室温下搅拌反应0.5～5小时，即得到式(II)化合物。

进一步的，本发明第三方面提供了本发明第一方面任一项所述化合物或者本发明第二方面任一项所述方法制备的化合物在制备用于治疗哺乳动物肿瘤或者眼炎的药物中的用途。

根据本发明第三方面的用途，其中所述肿瘤选自：白血病(例如急性白血病例如急性粒细胞白血病、对急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病)、恶性淋巴瘤、肺癌、消化道癌、头颈部癌。

根据本发明第三方面的用途，其中所述眼炎选自：病毒性角膜炎、流行性结膜炎。

根据本发明第三方面的用途，其中所述化合物在哺乳动物体内引发的血小板减少的不良反应比阿糖胞苷低，例如统计学显著性差异的p值<0.05。

进一步的，本发明第四方面提供了降低阿糖胞苷在哺乳动物体内造成血小板减少的不良反应的方法，该方法包括以阿糖胞苷为原料制备得到本发明第一方面任选一项所述式(I)化合物或者式(II)化合物的步骤。在本发明的一个实施方案中，所述哺乳动物是人。

本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

一、制备化合物的实施例部分

实施例1、N⁴-正十四烷氧羰基阿糖胞苷

2’,3’,5’-三-O-苯甲酰基阿糖胞苷(Ⅲ，555mg,1.0mmol)溶于二氯甲烷(15ml)中，依次加入三乙胺(417μl,3.0mmol)和氯甲酸十四烷酯(IV^/,333mg,1.2mmol)。室温搅拌8-15小时，反应结束。后处理：反应体系用水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后浓缩，残余物直接用于下一步反应。2’,3’,5’-三-O-苯甲酰基阿糖胞苷可以通过本领域公知的方法容易制备得到，例如从阿糖胞苷为原料制备得到。

将上步反应所得产物Ⅴ^/溶于甲醇(10ml)中，加入氢氧化钠溶液(0.5mL,1M)，室温搅拌1小时后，反应结束。后处理：反应液浓缩，残余物经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝25：1转为10：1)分离纯化，得到纯白色固体(I^/)为标题化合物，HPLC纯度>98.6％。本发明各种物料(包括原料药和组合物)中测定目标物的含量或纯度使用如下条件的HPLC法进行：InertsilODS-SP色谱柱(5μm，150mm×4.6mm)，以甲醇：水(80:20)为流动相等度洗脱，流速1.0mL/min，检测波长241nm，柱温30℃，进样量20μL。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.08(s,1H),8.03(d,J＝7.5Hz,1H),7.01(d,J＝7.6Hz,1H),6.04(d,J＝3.9Hz,1H),5.48(d,J＝5.3Hz,2H),5.07(d,J＝5.1Hz,1H),4.09(t,J＝6.6Hz,2H),4.04(d,J＝5.9Hz,1H),3.92(d,J＝3.4Hz,1H),3.82(d,J＝3.6Hz,1H),3.61(t,J＝5.6Hz,2H),1.59(t,J＝7.1Hz,2H),1.24(d,J＝6.8Hz,22H),0.85(t,J＝6.8Hz,3H).MS-ESI(m/z):483.3(M+H)⁺.

实施例2、N⁴-正己氧羰基阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸正己基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.3％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.13(s,1H),7.77(d,J＝7.7Hz,1H),6.91(d,J＝7.7Hz,1H),5.98(d,J＝6.0Hz,1H),5.16(d,J＝4.4Hz,1H),4.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.79(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.08(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.86(dt,J＝6.9,3.1Hz,1H),3.72–3.60(m,2H),1.72–1.63(m,1H),1.43(dp,J＝8.1,6.9Hz,2H),1.38–1.24(m,6H),0.89(t,J＝6.8Hz,3H).MS-ESI(m/z):371.2(M+H)⁺.

实施例3、N⁴-正癸氧羰基阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸正癸基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.7％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),6.78(d,J＝7.7Hz,1H),6.19(d,J＝6.0Hz,1H),5.03(d,J＝4.4Hz,1H),4.84(d,J＝4.7Hz,1H),4.79(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.08(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.86(dt,J＝6.8,3.0Hz,1H),3.72–3.60(m,2H),1.71–1.62(m,2H),1.44–1.34(m,2H),1.34–1.22(m,6H),1.26(s,6H),0.95–0.84(m,3H).MS-ESI(m/z):427.2(M+H)⁺.

实施例4、N⁴-正二十烷氧羰基阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸正二十烷基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.1％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ7.90(d,J＝7.7Hz,1H),6.71(d,J＝7.7Hz,1H),6.21(d,J＝6.0Hz,1H),5.19(d,J＝4.4Hz,1H),4.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.79(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.02(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.89(dt,J＝6.8,3.0Hz,1H),3.72–3.60(m,2H),1.67(tt,J＝7.7,6.4Hz,2H),1.44(dt,J＝8.1,7.0Hz,2H),1.37–1.25(m,32H),0.93–0.85(m,3H).MS-ESI(m/z):567.4(M+H)⁺.

实施例5、N⁴-正二十二烷氧羰基阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸正二十二烷基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>97.7％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.88(s,1H),7.94(d,J＝7.7Hz,1H),6.68(d,J＝7.7Hz,1H),6.14(d,J＝6.0Hz,1H),5.03(d,J＝4.4Hz,1H),4.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.79(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.01(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.86(dt,J＝6.8,3.0Hz,1H),3.72–3.60(m,2H),1.67(tt,J＝7.7,6.4Hz,2H),1.44–1.34(m,2H),1.33–1.22(m,36H),0.93–0.85(m,3H).MS-ESI(m/z):595.4(M+H)⁺.

实施例6、N⁴-(9-癸烯基氧基羰基)阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸(9-癸烯基酯)进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.3％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.96(s,1H),7.89(d,J＝7.7Hz,1H),6.62(d,J＝7.7Hz,1H),6.12(d,J＝6.0Hz,1H),5.80(tt,J＝10.2,6.8Hz,1H),5.08(ddt,J＝10.3,2.1,1.0Hz,1H),5.00(d,J＝4.4Hz,1H),4.97(ddt,J＝10.3,2.1,0.9Hz,1H),4.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.69(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.08(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.86(dt,J＝6.8,3.0Hz,1H),3.66(ddd,J＝4.4,3.1,1.1Hz,2H),2.23(tdt,J＝7.8,6.7,1.0Hz,2H),1.77–1.65(m,1H),1.39(dq,J＝8.1,6.7Hz,2H),1.34–1.22(m,8H).MS-ESI(m/z):425.2(M+H)⁺.

实施例7、N⁴-(13-十四烯基氧基羰基)阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸(13-十四烯基酯)进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.6％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.77(s,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),6.79(d,J＝7.7Hz,1H),6.03(d,J＝6.0Hz,1H),5.80(tt,J＝10.2,6.8Hz,1H),5.28(ddt,J＝10.3,2.1,1.0Hz,1H),5.00(d,J＝4.4Hz,1H),4.97(ddt,J＝10.2,2.2,0.9Hz,1H),4.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.73(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.11(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.93(dt,J＝6.8,3.0Hz,1H),3.58(ddd,J＝4.4,3.1,1.1Hz,2H),2.03(tdt,J＝7.8,6.7,1.0Hz,2H),1.71–1.62(m,2H),1.39(dq,J＝8.1,7.1Hz,2H),1.34–1.22(m,16H).MS-ESI(m/z):481.3(M+H)⁺.

实施例8、N⁴-(21-二十二烯基氧基羰基)阿糖胞苷

参照实施例1，化合物Ⅲ与氯甲酸(21-二十二烯基酯)进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>97.3％。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.04(s,1H),7.33(d,J＝7.7Hz,1H),6.82(d,J＝7.7Hz,1H),6.00(d,J＝6.0Hz,1H),5.79(tt,J＝10.2,6.8Hz,1H),5.08(ddt,J＝10.3,2.1,1.0Hz,1H),5.00(d,J＝4.4Hz,1H),4.97(ddt,J＝10.3,2.2,1.0Hz,1H),4.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.79(t,J＝4.5Hz,1H),4.24(ddd,J＝6.9,5.9,4.7Hz,1H),4.15(t,J＝6.4Hz,2H),4.08(td,J＝6.8,4.5Hz,1H),3.86(dt,J＝6.8,3.0Hz,1H),3.66(ddd,J＝4.3,3.1,1.1Hz,2H),2.08–1.99(m,2H),1.67(tt,J＝7.7,6.4Hz,2H),1.44–1.34(m,2H),1.34–1.22(m,32H).MS-ESI(m/z):593.4(M+H)⁺.

实施例9、2’,3’,5’-三-O-正十四酰基阿糖胞苷

阿糖胞苷(Ⅵ,244mg,1.0mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺溶液(15ml)中，0℃下将Boc₂O(437mg,2.0mmol)加入到溶液中，搅拌10分钟后，加热到60℃搅拌6-8小时。后处理：用水洗涤反应液，乙酸乙酯(10ml)萃取。合并萃取液，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。残余物经柱层析分离纯化，得到化合物Ⅶ^/。化合物Ⅶ^/溶解于二氯甲烷溶液(10ml)中，依次加入三乙胺(417μl,3mmol)和十四酰氯(VIII^/，890mg，3.6mmol)至反应液中，室温搅拌3-6小时后，反应完全。后处理：浓缩反应液，残余物(X^/)直接用于下一步反应。

上述产物Ⅹ^/溶于二氯甲烷溶液(10ml)中，加入三氟乙酸(2ml)去除保护基，得到白色固体化合物Ⅱ^/为标题化合物，HPLC纯度>97.6％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.58(t,J＝5.6Hz,1H),6.33(d,J＝3.9Hz,1H),5.71(dd,J＝7.6,4.6Hz,1H),5.48(d,J＝3.8Hz,1H),5.01(s,1H),4.44(dd,J＝11.8,7.2Hz,1H),4.34(dd,J＝11.8,4.0Hz,1H),4.15(dt,J＝7.1,3.6Hz,1H),2.40–2.31(m,4H),2.27–2.14(m,2H),1.63(q,J＝6.9Hz,4H),1.54–1.46(m,2H),1.36–1.18(m,61H),0.87(t,J＝6.8Hz,9H).MS-ESI(m/z):915.7(M+H)⁺.

实施例10、2’,3’,5’-三-O-正十一酰基阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与正十一酰氯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.1％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.88(d,J＝7.3Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.17(d,J＝4.1Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.43(dd,J＝6.8,4.2Hz,1H),5.25–5.21(m,1H),4.33(dt,J＝6.3,3.9Hz,1H),4.23(dd,J＝11.9,4.0Hz,1H),4.15(dd,J＝11.8,3.9Hz,1H),2.35–2.26(m,6H),1.60–1.49(m,6H),1.34–1.19(m,42H),0.91–0.85(m,9H).MS-ESI(m/z):747.5(M+H)⁺.

实施例11、2’,3’,5’-三-O-(21”-正二十二烯基酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与21”-正二十二烯基甲酰氯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.5％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.86(d,J＝7.3Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.17(d,J＝4.1Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.80(tt,J＝10.0,6.9Hz,3H),5.43(dd,J＝6.8,4.2Hz,1H),5.26–5.21(m,1H),5.12–5.04(m,3H),5.01–4.93(m,3H),4.33(dt,J＝6.4,4.0Hz,1H),4.19(d,J＝3.9Hz,2H),2.35–2.26(m,6H),2.08–1.99(m,6H),1.56(dddd,J＝34.0,16.4,8.6,7.3Hz,6H),1.27(ddd,J＝5.8,3.4,2.0Hz,102H).MS-ESI(m/z):1246.1(M+H)⁺.

实施例12、2’,3’,5’-三-O-(正己氧酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与氯甲酸正己基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>97.3％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.72(d,J＝7.3Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.18(d,J＝4.1Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.47(dd,J＝6.7,4.1Hz,1H),5.37(t,J＝6.5Hz,1H),4.79(dt,J＝6.1,4.0Hz,1H),4.38(dd,J＝3.9,2.1Hz,2H),4.22–4.13(m,6H),1.71(tt,J＝7.3,6.2Hz,6H),1.44–1.24(m,18H),0.89(t,J＝6.7Hz,9H).MS-ESI(m/z):627.3(M+H)⁺.

实施例13、2’,3’,5’-三-O-(正十四烷氧酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与氯甲酸正十四烷基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.6％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.80(d,J＝7.3Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.18(d,J＝4.1Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.47(dd,J＝6.7,4.1Hz,1H),5.37(t,J＝6.5Hz,1H),4.79(dt,J＝6.1,4.0Hz,1H),4.42–4.34(m,2H),4.17(td,J＝6.3,1.8Hz,6H),1.72(tt,J＝7.7,6.2Hz,6H),1.39(p,J＝7.3Hz,6H),1.34–1.21(m,60H),0.93–0.85(m,9H).MS-ESI(m/z):963.7(M+H)⁺.

实施例14、2’,3’,5’-三-O-(21”-正二十二烯基氧基甲酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与氯甲酸(21-二十二烯基酯)进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.4％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.76(d,J＝7.3Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.18(d,J＝4.2Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.80(tt,J＝10.3,6.9Hz,3H),5.47(dd,J＝6.7,4.1Hz,1H),5.42–5.32(m,1H),5.12–5.04(m,3H),5.01–4.93(m,3H),4.79(dt,J＝6.1,3.9Hz,1H),4.43–4.34(m,2H),4.17(td,J＝6.1,1.7Hz,6H),2.03(dtd,J＝8.0,6.8,1.1Hz,6H),1.72(tt,J＝7.6,6.2Hz,6H),1.39(p,J＝7.3Hz,6H),1.38–1.21(m,96H).MS-ESI(m/z):1294.0(M+H)⁺.

实施例15、2’,3’,5’-三-O-(正癸氨基酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与异氰酸正癸基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.2％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.68(d,J＝7.5Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.14(d,J＝3.8Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.41(dd,J＝6.8,3.8Hz,1H),5.27(dd,J＝6.8,5.9Hz,1H),5.16–5.06(m,2H),4.39–4.30(m,2H),3.15(q,J＝5.5Hz,2H),3.03(dq,J＝13.9,5.5Hz,1H),2.90–2.79(m,2H),1.53–1.41(m,6H),1.33–1.24(m,42H),0.93–0.85(m,9H).MS-ESI(m/z):792.6(M+H)⁺.

实施例16、2’,3’,5’-三-O-(正十四烷氨基酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与异氰酸正十四烷基酯进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>97.9％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.85(d,J＝7.5Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.14(d,J＝3.8Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.43–5.40(m,1H),5.27(dd,J＝6.8,5.9Hz,1H),5.16–5.06(m,2H),4.36(ddd,J＝5.7,4.5,3.5Hz,1H),4.33–4.31(m,2H),3.15(q,J＝5.5Hz,2H),3.03(dq,J＝13.9,5.5Hz,1H),2.89–2.81(m,2H),1.53–1.41(m,6H),1.34–1.23(m,66H),0.93–0.85(m,9H).MS-ESI(m/z):960.8(M+H)⁺.

实施例17、2’,3’,5’-三-O-(21”-正二十二烯氨基酰基)阿糖胞苷

参照实施例9，化合物Ⅶ与异氰酸(21-二十二烯基酯)进行取代反应、脱Bz保护基后得白色固体为标题化合物，HPLC纯度>98.4％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.77(d,J＝7.5Hz,1H),6.91(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝6.0Hz,1H),6.14(d,J＝3.8Hz,1H),6.08(d,J＝7.3Hz,1H),5.80(tt,J＝10.3,6.9Hz,3H),5.41(dd,J＝6.8,3.8Hz,1H),5.28–5.25(m,1H),5.16–5.04(m,6H),4.97(dt,J＝13.7,3.1Hz,3H),4.39–4.28(m,3H),3.15(q,J＝5.5Hz,2H),3.03(dq,J＝13.9,5.5Hz,1H),2.90–2.80(m,2H),2.03(td,J＝7.9,6.8Hz,6H),1.53–1.41(m,6H),1.35–1.23(m,102H).MS-ESI(m/z):1291.1(M+H)⁺.

以上实施例1～8从化合物III至化合物V的步骤的收率为57～64％(例如实施例1为61.6％)，实施例9～17从化合物VII至化合物X的步骤的收率为52～58％(例如实施例9为56.3％)。在本发明的一个补充实施例(在本发明中可称为实施例18)中，分别参照实施例1～8，不同的仅是在从化合物III至化合物V的步骤中随化合物III一起还添加相对于化合物III而言0.1摩尔当量的丙酮酸钠，得到标题化合物；分别参照实施例9～17，不同的仅是在从化合物VII至化合物X的步骤中随化合物VII一起还添加相对于化合物VII而言0.1摩尔当量的丙酮酸钠，得到标题化合物；经测定，本补充实施例从化合物III至化合物V的步骤的收率为77～81％(例如参考实施例1的补充实施例为78.4％)，本补充实施例从化合物VII至化合物X的步骤的收率为71～77％(例如参考实施例9的补充实施例为74.7％)。出人意料的发现，在本发明制备化合物的过程中，在从化合物III至化合物V的步骤中随化合物III一起还添加0.1摩尔当量的丙酮酸钠或者在从化合物VII至化合物X的步骤中随化合物VII一起还添加0.1摩尔当量的丙酮酸钠可以明显提高反应收率。因此，根据本发明的任一方面，其中在制备式(I)化合物或式(II)化合物时，在从化合物III至化合物V的制备步骤中随化合物III一起还添加0.1摩尔当量的丙酮酸钠，在从化合物VII至化合物X的制备步骤中随化合物VII一起还添加0.1摩尔当量的丙酮酸钠。

二、化合物的生物学试验例部分

试验例1、化合物对血小板的影响

已知临床上使用阿糖胞苷会造成血小板减少的不良反应，进而会影响凝血功能。本实验通过测定给予本发明化合物后对动物的血小板以及凝血时间的影响，考察药物的体内性能。所有数据均用均值±SD表示，组间比较采用t检验。

1、材料

昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18～22g，购于本所饲养；注射用盐酸阿糖胞苷市售品(H20084073)；本发明实施例1～17产物的灭菌水溶液，临用现配；倒置显微镜XDS-900(蔡康)。

2、分组

取试验小鼠，随机分组，每组10只，组别包括：a正常对照组、b阿糖胞苷组、c化合物组(包括使用实施例1化合物的c1组、使用实施例2化合物的c2组、…使用实施例17化合物的c17组。

3、组药

a正常对照组每天腹腔注射给予与b阿糖胞苷组等体积的0.9％氯化钠注射液；b阿糖胞苷组每天腹腔注射给予阿糖胞苷0.1mmol/kg/d；c组每天腹腔注射给予相应化合物0.1mmol/kg/d；各组药物按每次腹腔注射的药液体积为0.1～0.2ml/只动物的浓度使用0.9％氯化钠注射液为溶剂配制成溶液。每天按上述剂量给药7天，每日观察动物的一般状况、活动、感染、出血、摄食等。

4、参考文献(陈奇，中药药理研究方法学，北京：人民卫生出版社，1994：484-484)方法测定凝血时间：分别于给药前一天(0d)和末次给药6h后(7d)用毛细管眼眶取血，滴于载波片上，血滴直径约5mm，立即用秒表记时。用清洁的4号注射针头自血滴边缘向里轻轻拨动，观察有无血丝挑起，从采血开始至挑起血丝止即为凝血时间。

结果：给药前凝血时间(s)以全部组别动物的数据汇总为118.24±26.47；给药7天后，b阿糖胞苷组的凝血时间(s)为282.24±43.72**，c1组的凝血时间(s)为176.63±38.46**##，c2～C17组的凝血时间(s)均值均在161～195范围内、与0天相比均呈现**p<0.01的显著差异、与b阿糖胞苷组7天相比均呈现##p<0.01的显著差异。其中**是与0天结果比较p<0.01，##是与7天b阿糖胞苷组结果比较p<0.01。

5、参考文献(中华人民共和国***医政司，全国临床检验操作规程，南京：东南大学出版社，1997：22-23)方法进行血细胞计数：于给药前一天(0天)与给药结束后一天(8天)进行剪尾采血，采用显微镜人工计数外周血血小板(Bpc)数，照《全国临床检验操作规程》之《血小板计数》的“目视计数法”操作。以Bpc变化率表示结果：Bpc变化率＝(0天Bpc数均值-8天Bpc数均值)/0天Bpc数均值×100％。

结果：给药前即0天Bpc数(×1000/μL)以全部组别动物的数据汇总为847.16±138.34；给药7天后，b阿糖胞苷组Bpc数(×1000/μL)为402.73±86.54**，c1组Bpc数(×1000/μL)为683.48±116.58*##，c2～C17组Bpc数(×1000/μL)均值均在653～698范围内##**或*，其中**是与0天结果比较p<0.01，*是与0天结果比较p<0.05，##是与7天b阿糖胞苷组结果比较p<0.01；各组在第8天的Bpc数的变化率方面，b阿糖胞苷组52.46％、c1组19.32％、c2～C17组17.6～22.9％。

根据本试验结果，出人意料的发现，在同等当量的剂量下，本发明化合物在引起血小板降低方面显著弱于阿糖胞苷，由此可以预期本发明化合物引发血小板降低的不良反应将显著降低。尽管本试验例使用小鼠进行试验，然而本领域技术人员显而易见的是这类动物模型的试验结果可以推知到其他哺乳动物例如人的结果。

试验例2、化合物的药效学研究

参考柯鸿文献(柯鸿，等，淫羊藿提取物对急性髓系白血病SCID小鼠模型细胞生物学特性的影响，中国中医急症，2018(03)：389-393)的方法，考察本发明化合物对急性髓系白血病SCID模型小鼠细胞生物学特性的影响。HL-60细胞株即人早幼粒白血病细胞是在美国国家癌症研究所从一个36岁患急性早幼粒细胞白血病的女性身上得到的，主要是一种嗜中性的早幼粒细胞，该细胞株是一种用于实验室研究某些血细胞如何形成的细胞株，尤其是作为急性髓系白血病药物的抗肿瘤活性考察的细胞株。HL-60细胞购自普诺赛公司，其余材料均可市售获得。

细胞培养参照柯鸿文献方法进行。试验小鼠随机分组，每组10只，组别包括：a正常对照组、b阿糖胞苷组、c化合物组(包括使用实施例1化合物的c1组、使用实施例2化合物的c2组、…使用实施例17化合物的c17组)、d模型组(造模成功后不给药)。参照柯鸿文献方法进行造模并达到成瘤标准，a正常对照组不造模，其余组均进行造模。

给药：注射HL-60细胞悬液后第3周最后1d，a正常对照组和d模型组二组每天腹腔注射给予与b阿糖胞苷组等体积的0.9％氯化钠注射液；b阿糖胞苷组每天腹腔注射给予阿糖胞苷0.4mmol/m²/d；c组每天腹腔注射给予相应化合物0.4mmol/m²/d；各组药物按每次腹腔注射的药液体积为0.1～0.2ml/只动物的浓度使用0.9％氯化钠注射液为溶剂配制成溶液。每天按上述剂量给药7天，每日观察动物的一般状况、活动、感染、出血、摄食等。

参照柯鸿文献方法进行标本采集与检测，动物在末次给药48小时之后取尾静脉血，用人工计数法计数HL-60细胞数(％)，结果：a正常对照组HL-60细胞数(％)＝0，b阿糖胞苷组HL-60细胞数(％)＝6.62±0.87*，c1组HL-60细胞数(％)＝5.12±0.63*，c2～C17组HL-60细胞数(％)的均值均在4.3～6.4范围内*，d模型组HL-60细胞数(％)＝19.73±2.04，其中*表示与d模型组结果比较p<0.05。

上述结果表明本发明化合物在抑制HL-60细胞方面比阿糖胞苷稍优但无统计学显著差异。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims

1.式(II)所示化合物：

或其药用盐，其中：

R₁、R₂、R₃各自独立地代表C_6-22直链或支链的饱和烷基或不饱和烯基，其中碳链中的1个CH₂任选地被O替代；

X代表O或NH。

2.根据权利要求1的化合物，其中所述R₁、R₂、R₃选自：正癸烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、正二十烷基、正二十二烷基、正十六烷氧丙基、正十八烷氧乙基、(9-烯)正十烷基、(11-烯)正十二烷基、(11-烯)正十二烷乙基。

3.根据权利要求1的化合物，所述药用盐是与选自下列的无机酸或者有机酸形成的盐：盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、抗坏血酸、苹果酸、丙氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、甲磺酸、对甲苯磺酸。

4.根据权利要求1的化合物，其为选自下列的化合物12~化合物17：

化合物12：2’,3’,5’-三-O-(正己氧酰基)阿糖胞苷，

化合物13：2’,3’,5’-三-O-(正十四烷氧酰基)阿糖胞苷，

化合物15：2’,3’,5’-三-O-(正癸氨基酰基)阿糖胞苷，

化合物16：2’,3’,5’-三-O-(正十四烷氨基酰基)阿糖胞苷，

5.权利要求1~4任一项所述式(II)化合物在制备用于治疗哺乳动物白血病的药物中的用途。

6.根据权利要求5的用途，其中所述白血病选自急性粒细胞白血病、对急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病。