CN113307893A - 一种高纯度灰树花多糖提取物的制备与纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种高纯度灰树花多糖提取物的制备与纯化方法，包括:(1)向灰树花子实体原料中加入水，高温提取，过滤得到提取液；(2)将灰树花提取液利用分子筛截留膜，进行超滤浓缩；(3)将超滤浓缩液，利用离子交换层析树脂进行再一次提纯，得到高纯度灰树花多糖提取液；(4)将高纯度灰树花多糖提取液干燥，得到灰树花多糖。本发明具有有益效果:所制备的灰树花多糖纯度高于传统工艺制备多糖的纯度；有效地防止灰树花提取液中活性成分被破坏；工艺简便，无需乙醇等其他试剂，有利于提高生产效率；更适用于工业化，有效地解决了工业生产中环保和安全问题，具有良好的经济效益与社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌灰树花多糖的提取分离技术领域，具体而言，涉及一种高纯度灰树花多糖提取物的制备与纯化方法。
背景技术
灰树花(Grifola frondosa)，属于真菌界、担子菌门、担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、多孔菌属，又名贝叶多孔菌，栗子蘑，佛菌，重菇等，在日本称之为“舞茸”，属于珍贵的食药两用真菌。灰树花的化学成分主要包括多糖、蛋白质和脂类等，其中主要的活性成分为灰树花多糖，主要由β-1,6-及β-1,3-糖苷键组成的真菌多糖，具有明显的生理活性，灰树花多糖主要是碱溶性水提取物。研究表明，灰树花多糖具有多种活性功能，例如：提高机体免疫力、抗癌、抗病毒、抗炎症、降血糖和降血压等功效。国外科学家从灰树花中提取出一种可以高效抗癌的物质灰树花多糖，研究表明其抗癌活性是灵芝的16倍。同时，灰树花通过与化疗的协同作用，能显著提高治疗效果、降低放化疗的毒副反应，其药用价值不可估量。灰树花多糖的分离提取方法较多，有热水、酸、碱浸提法，复合酶，超声波提取，每种方法各有利弊。同时，灰树花粗多糖去蛋白主要分为：大孔吸附树脂法，三氯乙酸-正丁醇的方法、Sevage法为主，除了以上较为常用的去蛋白方法之外，文献中所用方法还有鞣酸法、等电点法、盐酸法、氯化钠法、氯化钙法等，所用方法还要根据样品性质以及蛋白种类选择合适的一种方法和多种结合。目前较为常用为复合酶-微波提取法，酶解提取法有着多糖提取率高、反应条件温和、对多糖结构破坏小的优点，但由于酶的价格较贵，生产成本相对较高，不适合应用于大批量的工业生产。超声波提取法和微波提取法可以提高多糖的提取率，缩短提取时间，但有时会造成多糖提取物的组分更加复杂，给后续的分离纯化工序带来一定的难度。
发明内容
针对以上不足，本发明的目的在于提供一种高纯度灰树花多糖提取物的制备与纯化方法，可以极大简化灰树花多糖的制备过程，提取的多糖纯度高，实现产业化提取应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
(1)向灰树花子实体原料中加入原料重量10-40倍的水，采用80-105℃提取1-4次，每次提取1-4小时，80-200目过滤提取液，合并提取液；
(2)将灰树花提取液利用分子筛截留膜超滤，截留分子量范围为10-80kD，工作压力为0.3-1Mpa，温度为25-50℃，当透过液的体积在总体积的40-70％时停止超滤，收集截留浓缩液，
(3)将超滤浓缩液，利用离子交换层析树脂进行再一次提纯，采用大孔吸附树脂以1-4BV/h的流速对所得截留浓缩液以3-10倍柱体积水进行浓缩提纯，洗脱流速为0.5-5BV/h，之后，调节pH值范围为6.5-8，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱脱蛋白处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:1-5，得到高纯度灰树花多糖提取液；
(4)将得到高纯度灰树花多糖提取液进行干燥，控制成品粉体水分含量<15％，所得干粉即为灰树花多糖成品。
优选地，所述的超滤截留液的干燥包括:喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥或常压干燥方法中的一种或几种。
优选地，所述的微滤膜材料为陶瓷膜、有机高分子膜、金属膜中的一种或几种。
优选地，所述的超滤膜,截留分子量范围10-80KDa，超滤膜材料为陶瓷膜、有机高分子膜、金属膜中的一种或几种。
优选地，所述的离子交换树脂包括阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、非离子型交换树脂中的一种或几种
根据上述提取方法得到的灰树花多糖具有提高机体免疫力、抗癌、抗病毒、抗炎症、降血糖和降血压等方面的用途。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
(1)在本发明提供的制备方法中，提取完成后采用分子量超滤技术进行提取浓缩，然后进行离子交换吸附联用，具有操作简单，能耗低，生产周期短，滤膜可多次使用，防止破坏灰树花提取液中活性成分，结果表明:所制备的灰树花多糖纯度远高于传统工艺制备的灰树花多糖的纯度。
(2)操作过程不涉及乙醇，节约了生产成本，同时提高了生产操作便捷性和安全。
(3)本发明的方法适用于工业化，有效地解决了工业生产中环保和安全问题，具有良好的经济效益与社会效益。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1:
(1)向灰树花子实体原料中加入原料重量20倍的水，采用100℃提取4次，每次提取2小时，200目过滤提取液，合并提取液；
(2)将灰树花提取液利用分子筛截留膜超滤，截留分子量范围为40kD，工作压力为1Mpa，温度为40℃，当透过液的体积在总体积的50％时停止超滤，收集截留浓缩液；
(3)将超滤浓缩液，利用离子交换层析树脂进行再一次提纯，采用大孔吸附树脂以4BV/h的流速对所得截留浓缩液以10倍柱体积水进行浓缩提纯，洗脱流速为2BV/h，之后，调节pH值范围为7，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:1，得到高纯度灰树花多糖提取液；
(4)将得到高纯度灰树花多糖提取液利用喷雾干燥，控制成品粉体水分含量<15％，所得干粉即为灰树花多糖成品。
实施例2:
(1)向灰树花子实体原料中加入原料重量40倍的水，采用100℃提取2次，每次提取1小时，200目过滤提取液，合并提取液；
(2)将灰树花提取液利用分子筛截留膜超滤，截留分子量范围为10kD，工作压力为0.5Mpa，温度为40℃，当透过液的体积在总体积的75％时停止超滤，收集截留浓缩液；
(3)将超滤浓缩液，利用离子交换层析树脂进行再一次提纯，采用大孔吸附树脂以4BV/h的流速对所得截留浓缩液以5倍柱体积水进行浓缩提纯，洗脱流速为1BV/h，之后，调节pH值范围为7，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:5，得到高纯度灰树花多糖提取液；
(4)将得到高纯度灰树花多糖提取液利用喷雾干燥，控制成品粉体水分含量<20％，所得干粉即为灰树花多糖成品。
实施例3:
(1)向灰树花子实体原料中加入原料重量40倍的水，采用100℃提取1次，每次提取4小时，200目过滤提取液，合并提取液；
(2)将灰树花提取液利用分子筛截留膜超滤，截留分子量范围为20kD，工作压力为1Mpa，温度为25℃，当透过液的体积在总体积的75％时停止超滤，收集截留浓缩液；
(3)将超滤浓缩液，利用离子交换层析树脂进行再一次提纯，采用大孔吸附树脂以2BV/h的流速对所得截留浓缩液以5倍柱体积水进行浓缩提纯，洗脱流速为4BV/h，之后，调节pH值范围为6.5，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:4，得到高纯度灰树花多糖提取液；
(4)将得到高纯度灰树花多糖提取液利用喷雾干燥，控制成品粉体水分含量<15％，所得干粉即为灰树花多糖成品。
将经过本发明提取的灰树花多糖含量与单纯高温水提取灰树花多糖得到的灰树花多糖含量进行对比，利用本方法提取的灰树花多糖含量平均为83.27％，单纯高温水提取灰树花多糖得到的灰树花多糖含量平均仅为26.12％。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (6)
1.一种高纯度灰树花多糖提取物的制备与纯化方法，其特征在于，包括:
(1)向灰树花子实体原料中加入原料重量10-40倍的水，采用80-105℃提取1-4次，每次提取1-4小时，80-200目过滤提取液，合并提取液；
(2)将灰树花提取液利用分子筛截留膜超滤，截留分子量范围为10-80kD，工作压力为0.3-1Mpa，温度为25-50℃，当透过液的体积在总体积的40-70％时停止超滤，收集截留浓缩液；
(3)将超滤浓缩液，利用离子交换层析树脂进行再一次提纯，采用大孔吸附树脂以1-4BV/h的流速对所得截留浓缩液以3-10倍柱体积水进行浓缩提纯，洗脱流速为0.5-5BV/h，之后，调节pH值范围为6.5-8，采用阴阳离子交换树脂串联树脂柱脱蛋白处理；所述的阴离子交换树脂与阳离子树脂的质量比为1:1-5，得到高纯度灰树花多糖提取液；
(4)将得到高纯度灰树花多糖提取液进行干燥，控制成品粉体水分含量<15％，所得干粉即为灰树花多糖成品。
2.根据权利要求1中所述的提取方法，其特征在于，所述的超滤截留液的干燥包括:喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥或常压干燥方法中的一种或几种。
3.根据权利要求1中所述的提取方法，其特征在于，所述的微滤膜材料为陶瓷膜、有机高分子膜、金属膜中的一种或几种。
4.根据权利要求1中所述的提取方法，其特征在于，所述的超滤膜,截留分子量范围10-80KDa，超滤膜材料为陶瓷膜、有机高分子膜、金属膜中的一种或几种。
5.根据权利要求1中所述的提取方法，其特征在于，所述的离子交换树脂包括阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、非离子型交换树脂中的一种或几种。
6.根据权利要求1中所述的提取方法得到的灰树花多糖具有提高机体免疫力、抗癌、抗病毒、抗炎症、降血糖和降血压等方面的用途。
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|---|---|---|---|---|
| CN114149514A (zh) * | 2022-01-05 | 2022-03-08 | 江苏华骏生物科技有限公司 | 一种舞茸提取物的提取方法及应用 |
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