CN113288830A - 一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用 - Google Patents

一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物，包括以下成分：含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液、含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液、1，2‑己二醇、对羟基苯乙酮；且所述1，2‑己二醇含量为0.5‑2％，对羟基苯乙酮的含量为0.1‑1％，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液80‑90％，剩余均为含松露白桦茸乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液。本发明将松露和白桦茸发酵产物引入化妆品领域，扩大了松露白桦茸的运用范围，明主要物质由天然发酵制得，具有安全环保的特点，活性物质更为丰富，而且富含含多肽、氨基酸、有机酸、维生素等物质，这些能改善肤质，促进新陈代谢，进而缓解肌肤表面生态平衡带来的肌肤问题，达到护肤的作用。

Description

一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制 备方法及其应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用。
背景技术
发酵指人们借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体本身、或者直接代谢产物或次级代谢产物的过程。通常所说的发酵，多是指生物体对于有机物的某种分解过程。发酵是人类较早接触的一种生物化学反应，如今在食品工业、生物和化学工业中均有广泛应用。
酵母是最早被人类利用起来进行商业化开发的微生物品种，也是最重要的一种，也是进行酒精发酵的主要菌种，通过对不同的酵母种类及不同的营养和应激条件的筛选，进而可以得到众多品种的酵母发酵滤液提取物。酵母菌发酵产物滤液中含有大量小分子氨基酸、多肽、核苷酸、维生素等天然活性成分物质，是良好的综合皮肤调理剂。酵母滤液本身呈弱酸性，对皮肤表面的有害细菌有着明显的抑制作用。因为碱性环境下更适合皮肤有害细菌的生存，一定程度上保持皮肤酸性环境，可以有效抵抗感染，充分发挥角质层的屏障作用，保持健康的皮肤微生态。酵母菌发酵产物滤液能平衡油脂、润白淡斑、抗氧化、修护肌肤；富含天然保湿因子(NMF)促使角质层充盈的水分，有利于营养物质吸收与转化。
人们普遍对于益生菌的认知，大多数都是停留于它对于肠道的益处。其实，对于肌肤它也是有自己独特的优势存在。作用于肌肤表面时，能够影响肌肤的微生物群，进而致使肌肤保持一个平衡的状态。进而缓解肌肤表面生态平衡带来的肌肤问题，达到护肤的作用。乳酸菌与双歧杆菌是最为人熟知得益生菌。
松露是一种子囊菌类大型块状真菌，又称块菌。研究表明，黑松露含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸和多不饱和脂肪酸，同时，还含有丰富的矿物质和固醇类物质。现有研究表明松露在抗菌抑菌与抗氧化方面有着极强的生物活性。同时神经酰胺是松露的有效活性成分之一。神经酰胺是脂肪酸与鞘氨醇通过酰胺键脱水缩合而成。神经酰胺是一种水溶性脂质物质，与皮肤的角质结构相似，能够促进角质蛋白的再生，被大量用于生产化妆品。
白桦茸，是一种生长于白桦树上的药用真菌。白桦茸具有抗菌，抗氧化和保护功效，并含有丰富的维生素和矿物质，有助于防止细胞衰老，促进新陈代谢。并且，白桦茸的超氧化物歧化酶含量居菌菇界第一，具有强效抗炎、抗氧化成分，能修复长期肌肤炎症带来的细胞损伤。同时研究表明白桦茸含有多糖类、三萜类和花青素类等活性物质，对生物体内自由基有很好的清除作用。
蜂蜜中含有大量的维生素、氨基酸及多种活性物质，同时蜂蜜具有较强的渗透性、保水性和吸湿性，这种特性决定了蜂蜜具有较多的保健功能，如促进血液的循环、治理内分泌的失衡以及促进机体的代谢循环等。因此，在化妆品中应用广泛。蜂蜜能够有效的杀菌和抑制细菌增长，同时不伤害皮肤表面。正因为如此，含有蜂蜜的化妆品，能够使得皮肤表面更加光滑，且无副作用，故而备受推崇。
随着国内化妆品市场的不断发展壮大，消费者对面容外表的追求不断升级，大众对化妆品与化妆品原料也提出了新的期望与要求。不在单纯的追求化妆品的效果，起效时间，而是有效的同时成分天然，刺激性小。而在这些方面发酵来源的化妆品优势明显，因而市场更加喜爱这类化妆品。皮肤作为人体抵抗外界侵害的第一道屏障，时时刻刻都在经受着考验。加之现阶段快节奏的生活与空气污染等因素，皮肤所面临的问天更加严重。肌肤问题也在这些情况下不断暴露出来。大众在迫切找寻能保养肌肤，改善肤质的产品，仅仅传统的化学合成品已经不能打动人们了。同时好的肌肤也反映着人的精气神与状态。
发明内容
为克服现有技术中的存在的肌肤问题日益严重，人类对化妆品原料的要求越来越高，本发明提出了一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用，其中含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物为松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液1，2-己二醇，对羟基苯乙酮，且所述1，2-己二醇含量为0.5-2％，对羟基苯乙酮的含量为0.1-1％，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液80-90％，剩余均为含松露白桦茸乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液。
通过采用上述技术方案，在复配的发酵滤液中加入1，2-己二醇，1，2-己二醇本身是优异的溶剂且还具有增溶的能力，在减少了表面活性剂的使用的情况下同样能够得到稳定的产品性能，具有杀菌、保湿和防腐的作用，对羟基苯乙酮存在于菊科植物滨蒿的茎、叶，茵陈蒿、萝藦科植物、人参娃儿藤等植物的根中，是一种天然植物提取物，对于皮肤无任何害处，是目前医药界安全的高温辅助活性稳定剂。
通过采用上述技术方案，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液的制备步骤包括：S1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；S2：菌种接种：向S1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，采用密封盖封住S1所述的发酵容器口，种子液接入量为发酵基液体积的(1-5％)；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％-60％，温度25-32℃，转速130-300r/min的混合培养器皿中发酵培养3-5天，所得液体即为含松露白桦茸酵母菌发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时通入无菌空气。
通过采用上述技术方案，步骤S1中所述基液灭菌采用加热灭菌法中的湿热灭菌法，将发酵容器放入到高压蒸汽灭菌器中采用121℃，30min灭菌。
通过采用上述技术方案，步骤S1所述的培养基配方以松露白桦茸提取液为溶剂，其配方如下:
Figure BDA0003110802990000031
通过采用上述技术方案，在培养基中加入松露白桦茸提取液和大米浆，含有大量天然成分，再经过灭菌发酵，冷却到室温再进行菌种的接种，最后放入混合培养器皿中混合培养，并且提供了适宜的湿度和温度，并且持续的混合，让菌群发酵的更加亲密。
作为优选的，步骤S1所述的松露白桦茸提取液制备方法为：对精选过的松露与白桦茸进行粉碎，过40-100目筛，对过筛后的粉末混合均匀制成粉料；所述混合粉料中松露含量为40％-60％，其余为白桦茸；所述混合粉料与水的重量之比为(10-25)：(90-120)，75-90℃加热12-18h，冷却至室温后过滤后即为松露白桦茸提取液。
采用上述技术方案，所述大米浆的制备过程为，按照大米与水质量之比1～2:1～4把精选大米浸泡水中12～18小时，然后进行研磨，产物经40-100目纱布过滤即为所需大米浆。
通过采用上述技术方案，控制米的水的比例在研磨的时候能防止高温破坏大米内的营养成分，更大程度保证大米浆的稳定。提高培养的营养丰富度。
采用上述技术方案，步骤S2中所述的种子液为中国工业微生物菌种保藏管理中心所购酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae(保藏号为：CICC 1001)干粉加入到配好的YPD培养基中培养8小时，得到发酵种子。
采用上述技术方案，步骤S2中所述的种子液为中国工业微生物菌种保藏管理中心所购乳酸片球菌Pediococcus acidilactici(保藏号为：CICC 10344)与动物双歧杆菌乳亚种Bifidobacterium animalis subsp.lactis(保藏号为：CICC 21712)干粉加入到配好的MRS培养基中培养8小时，得到发酵种子。
采用上述技术方案，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液的制备过程包括以下步骤：Q1：发酵基液制备：配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；Q2：菌种接种：向Q1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，种子液接入量为发酵基液体积的1-5％；Q3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％-60％，温度30-40℃，转速130-300r/min的混合培养器皿中发酵培养3-5天，所得液体即为含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时进行无氧发酵，严格控制其无氧环境。
步骤Q1中所述基液灭菌采用加热灭菌法中的湿热灭菌法，将发酵容器放入到高压蒸汽灭菌器中采用121℃，30min灭菌。
采用上述技术方案，步骤Q1所述的培养基配方以松露白桦茸提取液溶剂，其配方如下:
Figure BDA0003110802990000051
所述豆浆的制备过程为，按照大豆与水质量之比(1-2)：(1-4)把精选大豆浸泡水中12-18小时，到时间进行研磨，产物经40-100目纱布过滤即为所需豆浆。
通过采用上述技术方案，松露白桦茸提取液采用是松露和白桦茸混合的方式，可以让活性物质更为丰富，进过长时间的高温加热煮沸，充分的将松露和白桦茸内的成分传递到水中。
同理，在配制松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液步骤Q1时，培养基中大豆也是采用豆浆形式。
采用上述技术方案，步骤S3与Q3中采用的混合培养器皿为摇床、振荡器、混匀器和搅拌器中的一种。
本发明公开的一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物可以应用在柔肤水、乳液、精华或面霜中。
与现有技术相比，本发明的技术效果是：本发明将松露和白桦茸发酵产物引入化妆品领域，扩大了松露白桦茸的运用范围，本发明主要物质由天然发酵制得，具有安全环保的特点，同时采用松露白桦茸混合底物发酵，活性物质更为丰富。松露白桦茸发酵产物含多肽、氨基酸、有机酸、维生素等物质，这些能改善肤质，促进新陈代谢，进而缓解肌肤表面生态平衡带来的肌肤问题，达到护肤的作用。
附图说明
图1是本发明的产品自由基(DPPH)清除实验的清除率图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用，其特征在于：化妆品原料组合物中1，2-己二醇含量为0.5％，对羟基苯乙酮的含量为0.3％，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液80％，剩余均为含松露白桦茸乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液。同时包括以下步骤：
对精选过的松露与白桦茸进行粉碎，过40目筛，对过筛后的粉末混合均匀制成粉料；所述混合粉料中松露含量为40％，其余为白桦茸；所述混合粉料与水的重量之比为10：90，75℃加热12，冷却至室温后过滤后即为松露白桦茸提取液。
按照大米与水质量之比1：2把精选大米浸泡水中12小时，到时间进行研磨，产物经40目纱布过滤即为所需大米浆。
按照大豆与水质量之比1:2把精选大豆浸泡水中12小时，到时间进行研磨，产物经40目纱布过滤即为所需豆浆。
含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液的制备，包括步骤：S1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；S2：菌种接种：向S1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，采用密封盖封住S1所述的发酵容器口，种子液接入量为发酵基液体积的1％；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％，温度25℃，转速130r/min的混合培养器皿中发酵培养3-5天，所得液体即为含松露白桦茸酵母菌发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时通入无菌空气。
含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液的制备，包括步骤：Q1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；Q2：菌种接种：向Q1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，种子液接入量为发酵基液体积的1；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％，温度30℃，转速130r/min的混合培养器皿中发酵培养3天，所得液体即为含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时进行无氧发酵，严格控制其无氧环境。
最后按照松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液，1，2-己二醇，对羟基苯乙酮进行复配制成成品。
本发明所述的化妆品原料，包括但不限于松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液，1，2-己二醇，对羟基苯乙酮。
本发明所述的化妆品原料组合物用于精华类化妆品中，配方如下：
Figure BDA0003110802990000071
实施例2
一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用，其特征在于：化妆品原料组合物中1，2-己二醇含量为0.6％，对羟基苯乙酮的含量为0.5％，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液85％，剩余均为含松露白桦茸乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液。同时包括以下步骤：
对精选过的松露与白桦茸进行粉碎，过60目筛，对过筛后的粉末混合均匀制成粉料；所述混合粉料中松露含量为45％，其余为白桦茸；所述混合粉料与水的重量之比为10：90，75℃加热14，冷却至室温后过滤后即为松露白桦茸提取液。
按照大米与水质量之比1：3把精选大米浸泡水中14小时，到时间进行研磨，产物经40目纱布过滤即为所需大米浆。
按照大豆与水质量之比1:3把精选大豆浸泡水中14小时，到时间进行研磨，产物经40目纱布过滤即为所需豆浆。
含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液的制备，包括步骤：S1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；S2：菌种接种：向S1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，采用密封盖封住S1所述的发酵容器口，种子液接入量为发酵基液体积的2％；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％，温度25℃，转速130r/min的混合培养器皿中发酵培养3天，所得液体即为含松露白桦茸酵母菌发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时通入无菌空气。
含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液的制备，包括步骤：Q1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；Q2：菌种接种：向Q1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，种子液接入量为发酵基液体积的2％；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％，温度32℃，转速130r/min的混合培养器皿中发酵培养3天，所得液体即为含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时进行无氧发酵，严格控制其无氧环境。
最后按照松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液，1，2-己二醇，对羟基苯乙酮进行复配制成成品。
本发明所述的化妆品原料，包括但不限于松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液，1，2-己二醇，对羟基苯乙酮。
本发明所述的化妆品原料用于乳类化妆品中，配方如下：
Figure BDA0003110802990000091
Figure BDA0003110802990000101
实施例3
一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法及其应用，其特征在于：化妆品原料组合物中1，2-己二醇含量为0.7％，对羟基苯乙酮的含量为1％，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液90％，剩余均为含松露白桦茸乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液。同时包括以下步骤：
对精选过的松露与白桦茸进行粉碎，过80目筛，对过筛后的粉末混合均匀制成粉料；所述混合粉料中松露含量为50％，其余为白桦茸；所述混合粉料与水的重量之比为10：120，75℃加热16，冷却至室温后过滤后即为松露白桦茸提取液。
按照大米与水质量之比1：4把精选大米浸泡水中16小时，到时间进行研磨，产物经40目纱布过滤即为所需大米浆。
按照大豆与水质量之比1:4把精选大豆浸泡水中16小时，到时间进行研磨，产物经40目纱布过滤即为所需豆浆。
含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液的制备，包括步骤：S1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；S2：菌种接种：向S1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，采用密封盖封住S1所述的发酵容器口，种子液接入量为发酵基液体积的2％；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度40％，温度30℃，转速200r/min的混合培养器皿中发酵培养5天，所得液体即为含松露白桦茸酵母菌发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时通入无菌空气。
含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液的制备，包括步骤：Q1：发酵基液制备：按照配方表配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；Q2：菌种接种：向Q1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，种子液接入量为发酵基液体积的2％；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度40％-60％，温度30℃，转速200r/min的混合培养器皿中发酵培养5天，所得液体即为含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时进行无氧发酵，严格控制其无氧环境。
最后按照松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液，1，2-己二醇，对羟基苯乙酮进行复配制成成品。
本发明所述的化妆品原料，包括但不限于松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液，含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液，1，2-己二醇，对羟基苯乙酮。
本发明所述的化妆品原料用于霜类化妆品中，配方如下：
Figure BDA0003110802990000111
Figure BDA0003110802990000121
本发明化妆品原料组合物，其皮肤刺激测试如下：
实验过程
被测者(平均年龄25岁，24-27岁)用Finn Chamber在小臂进行皮肤斑贴试验(斑贴试验)。但是银屑病(牛皮癣)，湿疹(皮疹)患者或其他皮肤损伤，正处在怀孕、哺乳期或服用避孕药、抗组织胺等人群不能参与这项研究。在测试部位用70％的乙醇擦拭，干燥后，在芬兰小室中加入25-30μL的香榧复合精油样品，在小臂区域固定芬兰小室，不要沾水。24h后除去贴片；用标记笔在试验部位做好标记，并在30分钟后，24小时后的再次观察测试部位并详细记录测试人员信息。刺激程度根据((International Contact Dermatitis ResearchGroup:ICDRG)的标准进行了分类，拆除贴片后30分钟后确定，24小时后再次确定，根据皮肤反应国际接触性皮炎研究会判定标准(表1)判定后。再根据皮肤反应平均得分公式[表2]，估算平均得分，皮肤斑贴试验(斑贴试验)根据得分结果确定是否刺激。
[表1]国际接触性皮炎研究会((International Contact Dermatitis ResearchGroup:ICDRG)
判定标准：
Figure BDA0003110802990000122
※皮肤反应判定标准
1)Negative(-)：无刺激
2)Double or slight reaction and erythema(±)；微刺激，微弱的勉强可见的轻微红斑
3)Erythema+Induration(+)；轻刺激，有明显的红斑，皮肤硬化
4)Erythema+Induration+Vesicle(++)；中刺激，红斑，硬化，有小泡
5)Erythema+Induration+Bullae(+++)；强刺激，红斑，硬化，有大泡
※皮肤反应平均得分Mean score计算公式
Figure BDA0003110802990000131
maximum score：满分response：反应人数no.of total subjects：总人数
No.of evalution：评估数mean score：平均分
i＝除去贴片，在30分钟后，24小时后的测试部位根据ICDRG判定标准所得各自分数的结果。标记erythema(红斑)和edema(水肿)两种反应,全部适用。
j＝除去贴片，30分钟后,24小时后各自的皮肤有反应测试者人数，标记erythema和edema两种反应,全部适用。
[表2]皮肤斑贴试验(Patch test))结果
判定(Grade) MeanScore
无刺激(1) 0.00～0.75
微刺激(2) 0.76～1.50
轻刺激(3) 1.51～2.50
中刺激(4) 2.51～4.00
强刺激(5) 4.01
结果：(ICDRG Score合计)
实验结论：
Figure BDA0003110802990000132
Figure BDA0003110802990000141
本发明化妆品原料，其抗菌实验如下：
实验步骤：
(1)菌液获得：冰箱储存菌种
(2)实验样品菌液配制
Figure BDA0003110802990000142
以0.85％NaCl作为阴性对照，每组5个EP管，分别加入菌液，27℃放置一夜，待明日处理。
(3)确定稀释浓度
取saline组，用0.85％NaCl稀释到10^1、10^2、10^3、10^4倍，用移液枪取0.01ml点在相应的培养基上，27℃，倒扣培养1d，数菌落数，以菌落数在10-50之间的稀释倍数作为实验稀释倍数。A.niger生长周期长，选择10^3倍作为稀释倍数。
(4)菌的处理：
处理1d后，将各组样品菌液稀释到实验稀释倍数(原液、10^1、10^2-10^n)，取0.01ml点在相应培养基上，做好标记，27℃培养1-3d，观察菌落生长情况，数菌落数并记录；取0.05ml点在相应培养基上，做好标记，27℃培养1-3d，观察菌落生长情况，数菌落数并记录；计算菌的抑制率(％)
抑制率(％)公式＝(1-各组菌落数cfu/ml/0.85％NaCl/组菌落数)*100％
若抑制率(％)未达标，则处理3d、7d等，重复步骤(4)。
实验结果：
1d
Figure BDA0003110802990000143
Figure BDA0003110802990000151
3d
Figure BDA0003110802990000152
注：E.coli(大肠杆菌)S.aure(金黄色葡萄球菌)P.aeru(铜绿芽孢杆菌)C.albican(白色念珠球菌)A.niger(黑曲霉菌)
本发明化妆品原料组合物，其清除DPPH自由基测试如下：
一、试剂准备
(1)3.943mgDPPH用95％乙醇定容至50mL
(2)10mgTrolox用95％乙醇定容至100mL
(3)本发明
二、实验步骤
(1)UV校零，95％乙醇作为空白样
(2)预实验(DPPH浓度选择)
500μL DPPH+1000μL 95％乙醇震荡10s，静置10min，测吸光度值(520nm处吸光度值0.45-0.55，则可作为以下实验DPPH溶液)
(3)Trolox的测定
Sample Trolox(μL) 95％乙醇(μL) DPPH(μL)
S 100 900 500
SB 100 900+500 0
C 0 100+900 500
CB 0 100+900+500 0
加入DPPH或95％乙醇后，震荡10s，静置10min，测吸光度值
(4)实验步骤
Figure BDA0003110802990000161
(5)分别在520nm处测吸光度值，制作表格，作图，得IC50值。
计算公式：抑制率(％)＝[1-(S-SB)/(C-CB)]*100
三、实验结果
Figure BDA0003110802990000162
Figure BDA0003110802990000163
Figure BDA0003110802990000171
Inner(μL) Con(μL/mL) DPPH(％)
400 266.67 9.40
300 200 9.27
200 133.33 6.30
本发明清除DPPH自由基测试结如图1所示。
本实验过程中随着本发明添加量的增加，DPPH清除率也在增加。添加量在200ul-300ul时，DPPH清除率增加效果明显。
本发明经过天然发酵制得，对皮肤温和无刺激，适应群体广泛，同时具有良好的抗菌抑菌和抗氧化效果，可以减少减少对化妆品中防腐剂的使用，这样能使得化妆品更加温和，增加安全性和大众对化妆品的接受度，具有极高的经济价值。
上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物，其特征在于：所述化妆品原料组合物包括以下成分：含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液、含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液、1，2-己二醇、对羟基苯乙酮；且所述1，2-己二醇含量为0.5-2％，对羟基苯乙酮的含量为0.1-1％，含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液80-90％，剩余均为含松露白桦茸乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液。
2.根据权利要求1所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物，其特征在于应用在柔肤水、乳液、精华或面霜中。
3.一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：包括含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液的制备，包括步骤：S1：发酵基液制备：配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；S2：菌种接种：向S1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，采用密封盖封住S1所述的发酵容器口，种子液接入量为发酵基液体积的1-5％；S3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％-60％，温度25-32℃，转速130-300r/min的混合培养器皿中发酵培养3-5天，所得液体即为含松露白桦茸酵母菌发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵母菌发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时通入无菌空气。
4.根据权利要求3所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：步骤S1所述的培养基配方以松露白桦茸提取液为溶剂，其配方如下:
Figure FDA0003110802980000011
5.根据权利要求4所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：以松露白桦茸提取液作为发酵基液溶剂，制取方法如下：对精选过的松露与白桦茸进行粉碎，过40-100目筛，对过筛后的粉末混合均匀制成粉料；所述混合粉料中松露含量为40％-60％，其余为白桦茸；所述混合粉料与水的重量之比为10～25:90～120，75～90℃加热12-18h，冷却至室温后过滤后即为松露白桦茸提取液。
6.根据权利要求3所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：步骤S1中所述基液灭菌采用加热灭菌法中的湿热灭菌法，将发酵容器放入到高压蒸汽灭菌器中采用121℃，30min灭菌。
7.根据权利要求5所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：所述大米浆的制备过程为，按照大米与水质量之比1～2:1～4把精选大米浸泡水中12～18小时，然后进行研磨，产物经40-100目纱布过滤即为所需大米浆。
8.一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：包括含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液的制备，制备过程包括以下步骤：Q1：发酵基液制备：配制发酵基液，将所述发酵基液置于发酵容器内，将所述容器密封，并对基液进行灭菌，而后将所述发酵基液冷却至室温；Q2：菌种接种：向Q1所述发酵基液中接入种子液，等待发酵，种子液接入量为发酵基液体积的1-5％；Q3：发酵过程：将装有待发酵液的容器置于湿度30％-60％，温度30-40℃，转速130-300r/min的混合培养器皿中发酵培养3-5天，所得液体即为含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物原液，过滤即得含松露白桦茸酵乳酸菌双歧杆菌混合发酵产物滤液；所述发酵容器在发酵时进行无氧发酵，严格控制其无氧环境。
9.根据权利要求8所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：步骤Q1所述的培养基配方以松露白桦茸提取液溶剂，其配方如下:
Figure FDA0003110802980000021
Figure FDA0003110802980000031
10.根据权利要求9所述一种含有松露白桦茸发酵产物滤液的化妆品原料组合物的制备方法，其特征在于：所述豆浆的制备过程为，按照大豆与水质量之比(1-2)：(1-4)把精选大豆浸泡水中12-18小时，到时间进行研磨，产物经40-100目纱布过滤即为所需豆浆。
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