CN113278705A - 检测口腔鳞癌的基于生物标志物的诊断产品及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了检测口腔鳞癌的基于生物标志物的诊断产品及其应用，具体的涉及基因ASPRV1、COX7A1和/或KRT23，通过对癌样本和对照样本进行检测，发现ASPRV1、COX7A1和/或KRT23在两组中呈现显著性差异，绘制ROC曲线判断ASPRV1、COX7A1和/或KRT23的诊断效能，显示该基因及其组合应用于口腔鳞癌的诊断具有较高的敏感性、特异性和准确性。

Description

检测口腔鳞癌的基于生物标志物的诊断产品及其应用
技术领域
本发明涉及疾病诊断领域，更具体地，本发明涉及检测口腔鳞癌的基于生物标志物的诊断产品及其应用。
背景技术
口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)简称口腔鳞癌，多发生于40~60岁成人，男性多于女性，好发部位以舌、颊、牙龈、腭等为主的上皮源性恶性肿瘤。近年来报道，OSCC是口腔领面部最常见肿瘤，其发病率约占口腔肿瘤的90%，其死亡率约占世界癌症死亡率的第六位。在临床上，OSCC侵犯到患者面部血管、神经等部位时会出现领面部剧烈疼痛或麻木等症状。严重时甚至会威胁生命，极大地影响患者生活质量。OSCC发病隐匿、病情进展快、恶性程度高、易复发等特点，且大部分患者确诊时已属中、晚期。而且OSCC容易发生***转移、局部侵袭性很强，因此预后一般都较差。在治疗方面，以手术为主的综合治疗依然是目前最有效的治疗手段。随着相关研究的不断进展，OSCC患者治愈率有所改善，但患者预后仍然较差，给临床治疗带来了很大困难。因此如何实现早期预防、早期诊断、探索 OSCC的敏感诊断标记物以及有效治疗的个体化治疗方案，提高临床治愈率及生存率是目前备受关注的问题之一。
近年来，基因相关研究日益增多，基因参与肿瘤的发生发展引起极大关注。异常表达的基因在口腔鳞癌中扮演癌基因或者抑癌基因的角色，调控口腔鳞癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移，与口腔鳞癌发生、发展和预后密切相关。因此，从筛选差异表达基因入手寻找口腔鳞癌的肿瘤相关生物标志物，可能为口腔鳞癌的高危人群的标志物筛查以及实施个体化预防、干预和治疗提供重要线索，同时有助于发现新的致癌基因，挖掘肿瘤药物的新靶点，为临床治疗寻找更有效的治疗方法。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了检测样本中基因标志物的试剂在制备用于诊断口腔鳞癌的产品中的应用，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。
进一步，所述产品包括检测样本中基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
进一步，所述试剂包括在mRNA水平或蛋白水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
进一步，在mRNA水平上检测基因标志的表达水平的试剂包括特异性识别基因标志物的核酸序列及互补序列的片段的引物对、探针或者引物对和探针。
进一步，在蛋白水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂包括特异性识别所述基因标志物蛋白质全长或其片段的抗体、抗体片段、适体、高亲和性多聚体或拟肽。
进一步，所述样本选自组织、血液。
本发明提供了一种诊断口腔鳞癌的产品，所述产品包括检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23的试剂。
进一步，所述产品包括芯片、试剂盒。
进一步，所述产品包括通过聚合酶链反应、实时荧光定量逆转录多聚酶链反应、逆转录聚合酶链反应、竞争性聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或DNA芯片的方法进行检测mRNA水平的试剂。
进一步，所述产品包括通过免疫印迹、酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、放射免疫扩散法、免疫电泳、组织免疫染色、免疫沉淀分析法、补体固定分析法、荧光激活细胞分选、质量分析或蛋白质微阵列的方法进行检测蛋白水平的试剂。
本发明提供了基因标志物在构建预测口腔鳞癌的计算模型中的应用，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。
有益效果：
本发明通过检测ASPRV1、COX7A1和/或KRT23的表达水平，可以实现口腔鳞癌的诊断，增加检测的敏感度，提高检测能力和效率，提升指导口腔鳞癌的临床治疗的能力。
附图说明
图1显示ASPRV1基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图2显示COX7A1基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图3显示KRT23基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图4显示ASPRV1基因诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图5显示COX7A1基因诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图6显示KRT23基因诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B： GEO；
图7显示ASPRV1+COX7A1基因诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图8显示ASPRV1+KRT23基因诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图9显示COX7A1+KRT23基因诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图10显示ASPRV1+COX7A1+KRT23联合诊断口腔鳞癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO。
具体实施方式
一般定义和术语
以下将对本发明进一步详细说明，应理解，所述用语旨在描述目的，而非限制本发明。
术语“和/或”是指并且包括一个或多个相关联的所列项目的任何和所有可能的组合，以及在备选方案(或)中解释时缺少组合。
术语 “样本” 或 “测试样本” 指获自或衍生自目的个体的生物试样，生物试样的供给源可以是新鲜、冷冻和/或保存的器官或组织样品或从活检或引物产生的固体组织；血液或任意血液组分。术语 “样本” 或 “测试样本” 包括在其获得后以任意方式操作过的生物样本，如通过试剂处理、稳定化、或针对某些成分（如蛋白质或多核苷酸）富集、或包埋在用于切片目的的半固体或固体基质中。在本发明的一实施例中，将组织组分用作试样。
术语“标志物”宽泛地是指存在于或源自样品的任何可检测化合物，如蛋白质、肽、蛋白聚糖、糖蛋白、脂蛋白、碳水化合物、脂质、核酸(例如DNA，诸如cDNA或扩增的DNA，或RNA，诸如mRNA)、有机或无机化学物质、天然或合成的聚合物、小分子(例如，代谢物)或上述任何物质的区分分子或区分片段。如这段内容中使用的 “源自” 是指检测时指示存在于样品中的特定分子的化合物。例如，特定cDNA的检测可以指示样品中特定RNA转录物的存在。作为另一个实例，特定抗体的检测或与特定抗体的结合可以指示样品中特定抗原(例如，蛋白质)的存在。在此，区分分子或片段是检测时指示以上鉴定的化合物的存在或丰度的分子或片段。生物标志物例如可以分离自样品、直接在样品中测量，或在样品中检测或测定。生物标志物可以例如是功能性的、部分功能性的或非功能性的。
术语 “基因” 是指编码具有功能的多肽或RNA链的核酸链。尽管该基因的外显子区域才是转录以形成mRNA的，但术语 “基因” 还包括控制外显子区域表达的调节区，如启动子和增强子。
在本发明中，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。生物标志物例如ASPRV1（aspartic peptidase retroviral like 1，gene ID：151516）、COX7A1（cytochromec oxidase subunit 7A1，gene ID：1346）、KRT23（keratin 23，gene ID：25984）；包括基因及其编码的蛋白及其同源物，突变，和同等型。该术语涵盖全长，未加工的生物标志物，以及源自细胞中加工的任何形式的生物标志物。该术语涵盖生物标志物的天然发生变体（例如剪接变体或等位变体）。gene ID可在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/获得。
术语“杂交”是指在适当条件下，两个核酸片段通过稳定且特异的氢键结合，形成双螺旋复合物的过程。
术语 “引物” 是指短核酸序列，其具有短的游离3 羟基的核酸序列，能够与互补的模板形成碱基对，其充当用于模板链复制的起点。引物可以在适当的缓冲液及温度下，在用于聚合反应(即，DNA聚合酶或逆转录酶)的试剂及不同的4种核苷三磷酸的存在下诱发DNA合成。
术语 “探针” 是指对应于能够特异性结合mRNA的数个碱基至数百个碱基的核酸片段，例如RNA或DNA等。由于被标记，因而可以确认是否存在特定的mRNA。探针能够以寡核苷酸探针、单链DNA探针、双链DNA探针、RNA探针等形式制造。在本发明中，利用与ASPRV1、COX7A1和/或KRT23基因互补的探针进行杂交，并且可通过是否杂交来诊断上述基因的表达水平。可以基于本技术领域中公知的技术来更改用于合适探针的选择及杂交条件，在本发明中，对此没有特别限制。
本发明的引物或探针可以使用亚磷酰胺固相载体方法或其他公知的方法化学合成。这种核酸序列可以利用本领域中公知的多种手段来进行变形。这种变形的非限制性例包括甲基化、封装、天然核苷酸的一种以上的同源物的取代以及核苷酸之间的变形，例如，变形为不带电的连接体(例：膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)或带电的连接体(例：硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯等)。
在本发明中，可通过优化步骤在一系列过程中确定使探针与cDNA分子杂交的合适条件。该步骤由本领域普通技术人员通过一系列过程进行，以建立用于在研究室中使用的协议。例如，温度、成分浓度、杂交及洗涤时间、缓冲液成分及其pH以及离子强度等条件取决于探针的长度、GC量及靶核苷酸序列等各种因素。
术语 “抗体” 是本领域中公知的术语，是指针对抗原性位点指示的特异蛋白分子。为了本发明的目的，抗体是指与作为本发明标志物的ASPRV1、COX7A1和/或KRT23基因中表达的蛋白质特异性结合的抗体，上述抗体可以使用公知的方法来制备。其中包括可以由上述蛋白质制成的部分肽。对本发明的抗体的形式没有特别限制，如果多克隆抗体，单克隆抗体或具有抗原结合特性的任何一种，则其一部分也包括在本发明的抗体中，并且包括所有的免疫球蛋白抗体。进而，本发明的抗体还包括特殊抗体，例如人源化抗体。
标志物的 “水平”、 “丰度” 或 “含量”是样本中可检测的水平或含量。这些可以过本领域技术人员已知的以及还在本文中公开的方法来测量。这些术语包括定量的含量或水平(例如，重量或摩尔)、半定量的含量或水平、相对含量或水平(例如，等级内的重量%或摩尔%)、浓度等。因此，这些术语包括样品中生物标志物的绝对或相对含量或水平。评估的基因标志物的表达水平或含量可以用于确定受试者是否患病以及患病的风险。
术语 “诊断” 来指分子或病理学状态、疾病或病症的鉴定或分类。例如，“诊断”可以指，通过所累及的组织/器官（例如，口腔鳞癌），或通过分子特征（例如，表征为特定基因或该基因所编码的蛋白质之一或其组合的表达），鉴定患口腔鳞癌的风险。
本文所述的基因表达水平的检测可以采用本领域已知的测定方法，包括但不限于检测所述生物标志物的RNA转录物的量或所述生物标志物编码的蛋白的量的方法。
生物标志物的RNA转录物可通过本领域已知的方法转化为与其互补的cDNA，通过测定互补cDNA的量可以获得RNA转录物的量。生物标志物的RNA转录物或与其互补的cDNA的量，可以针对样本中总RNA或总cDNA的量或者针对一组看家基因的RNA转录物或与其互补的cDNA的量来标准化。
在本文中，RNA转录物可以通过例如杂交、扩增、测序的方法来检测和量化，包括但不限于将RNA转录物与探针或者引物杂交的方法，通过基于聚合酶链式反应(PCR)的各种定量PCR技术或测序技术检测RNA转录物或其对应cDNA产物的量的方法。所述定量PCR技术包括但不限于荧光定量PCR、实时PCR或半定量PCR技术。所述测序技术包括但不限于Sanger测序、二代测序、三代测序和单细胞测序等。优选地，所述测序技术为二代测序，更优选地为靶向RNA-seq技术。
在本文中，多肽的量可以通过例如蛋白组学或试剂来检测。优选地，所述试剂为抗体、抗体片段或者亲和性蛋白。
应用
本发明涉及检测样本中基因标志物的试剂在制备用于诊断口腔鳞癌的产品中的应用，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。
在一实施方案中，所述基因标志物包括ASPRV1和COX7A1的组合。
在一实施方案中，所述基因标志物包括ASPRV1和KRT23的组合。
在一实施方案中，所述基因标志物包括COX7A1和KRT23的组合。
在一优选地实施方案中，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和KRT23的组合。
优选地，所述产品包括检测样本中ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
在一实施方案中，检测样本中ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂包括在mRNA水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
具体地，在mRNA水平上检测基因标志的表达水平的试剂包括特异性识别基因标志物的核酸序列及互补序列的片段的引物对、探针或者引物对和探针。
在一实施方案中，检测样本中ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂包括在蛋白水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
具体地，在蛋白水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂包括特异性识别所述基因标志物蛋白质全长或其片段的抗体、抗体片段、适体、高亲和性多聚体或拟肽。
作为可选择的实施方案，样本为组织或血液样本。
作为优选地实施方案，样本为组织样本。
诊断产品
一种诊断口腔鳞癌的产品，所述产品包括检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23的试剂。
在一实施方案中，所述试剂为检测所述生物标志物表达水平的试剂。
在一实施方案中，所述产品包括通过聚合酶链反应、实时荧光定量逆转录多聚酶链反应、逆转录聚合酶链反应、竞争性聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或DNA芯片的方法进行检测mRNA水平的试剂。
在一实施方案中，所述产品包括通过免疫印迹、酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、放射免疫扩散法、免疫电泳、组织免疫染色、免疫沉淀分析法、补体固定分析法、荧光激活细胞分选、质量分析或蛋白质微阵列的方法进行检测蛋白水平的试剂。
在一实施方案中，所述诊断产品为体外诊断产品的形式。
在一具体的实施方案中，所述诊断产品为诊断试剂盒。
“试剂盒” 是包含至用于特异性检测本发明的生物标志基因或蛋白质的探针的制成品（例如，包装或容器）。在某些实施方案中，该制成品作为用于进行本发明的方法的单位推销、分销或销售。
这类试剂盒可以包含区室化来紧密限制地容纳一个或多个容器手段（如小瓶、管等）的载体手段，每个容器手段包含将要在方法中使用的分开的组成部分之一。例如，容器手段之一可以包含进行可检测标或可以进行可检测标记的探针。这种探针可以是对包含基因表达特征的一个或多个基因的多核苷酸特异的多核苷酸。在试剂盒利用核酸杂交来检测靶核酸时，试剂盒还可以具有包含用于扩增靶核酸序列的一种或多种核酸的容器和/或包含报道手段的容器，如生物素结合蛋白，如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，结合于报道分子，如酶、荧光或放射性同位素标记。
试剂盒通常将包含上述容器和一个或多个其他容器，该其他容器包含商业和用户角度希望的物质，包括缓冲液、稀释液、滤器、针头、注射器和含有使用说明的包装说明书。容器上可以存在标签来指示该组合物用于具体的治疗或非治疗性应用，且还可以指示体内或体外使用的方向，如上文所述的那些。试剂盒中的其他可选成分包括一种或多种缓冲液（ 例如封闭缓冲液、洗涤缓冲液、底物缓冲液等）、其他试剂（如通过酶标记发生化学改变的底物）、表位修复溶液、对照样品（阳性和/或阴性对照）、对照切片等。
计算模型
本发明提供了基因标志物在构建预测口腔鳞癌的计算模型中的应用，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。
正如熟练技术人员会领会的，可以以不同方式实施和实现将标志物水平与某种可能性或风险关联起来的步骤。优选地，在数学上组合蛋白质和一种或多种其它标志物的测定浓度，并将组合值与根本的诊断问题关联起来。可以通过任何适宜的现有技术数学方法将标志物值的测定组合。
用于将标志物组合与疾病关联起来的对数函数优选采用通过应用统计方法开发和获得的算法。例如，适宜的统计方法是判别分析（DA）（即线性、二次、规则 DA）、Kernel 方法（即 SVM）、非参数方法（即 k- 最近邻居分类器）、PLS（部分最小二乘）、基于树的方法（即逻辑回归、CART、随机森林方法、助推 / 装袋方法）、广义线性模型（即对数回归）、基于主分量的方法（即SIMCA）、广义叠加模型、基于模糊逻辑的方法、基于神经网络和遗传算法的方法。熟练技术人员在选择适宜的统计方法来评估本发明的标志物组合并由此获得适宜的数学算法方面不会有问题。在一个实施方案中，用于获得评估口腔鳞癌中使用的数学算法的统计方法选自DA（即线性、二次、规则判别分析）、Kernel方法（即SVM）、非参数方法（即k-最近邻居分类器）、PLS（部分最小二乘）、基于树的方法（即逻辑回归、CART、随机森林方法、助推方法）、或广义线性模型（即对数回归）。
接受者操作曲线下面积（=AUC）是诊断规程的性能或精确性的一项指标。诊断方法的精确性由它的接受者操作特征（ROC）描述得最好。ROC 图是源自在观察的整个数据范围上连续改变决策阈的所有灵敏度/特异性对的线图。
实验室测试的临床性能取决于它的诊断精确性，或将受试者正确分类入临床有关亚组的能力。诊断精确性测量测试正确辨别所调查的受试者的两种不同状况的能力。此类状况是例如健康和疾病或者疾病进展对无疾病进展。
在每种情况中，ROC 线图通过对于决策阈的整个范围将灵敏度对 1- 特异性绘图来描绘两种分布之间的交叠。y 轴上是灵敏度，或真阳性分数[定义为 ( 真阳性测试结果的数目)/(真阳性的数目+假阴性测试结果的数目)]。这也称作疾病或状况的存在的阳性。它仅仅自受影响亚组来计算。x 轴上是假阳性分数，或 1- 特异性 [定义为 ( 假阳性结果的数目)/( 真阴性的数目 + 假阳性结果的数目)]。它是特异性的一项指标，而且完全自不受影响的亚组来计算。因为真和假阳性分数通过使用来自两个不同亚组的测试结果完全分开计算，所以 ROC 线图不依赖于样品中疾病的流行程度。ROC 线图上的每个点代表一个对应于特定决策阈的灵敏度 /1- 特异性对。一项具有完美区分（两种结果分布没有交叠）的测试具有通过左上角的ROC 线图，那里真阳性分数为1.0，或 100%（完美灵敏度），且假阳性分数为0（完美特异性）。一项不区分（两个组的结果分布相同）的测试的理论线图是从左下角到右上角的 45°对角线。大多数线图落在这两种极端之间。（如果ROC线图完全落在 45°对角线以下，那么这容易通过将“阳性”的标准从“大于”颠倒成“小于”或反之来矫正。）定性地，线图越接近左上角，测试的整体精确性越高。
量化实验室测试的诊断精确性的一项便利目标是通过单一数值来表述它的性能。最常见的全局度量是 ROC 曲线下面积（AUC）。常规地，此面积总是≥ 0.5 （如果不是这样，那么可以颠倒决策规则来使之这样）。数值范围介于 1.0（完美分开两个组的测试值）和0.5（两个组的测试值之间没有明显分布差异）之间。面积不仅取决于线图的特定部分诸如最接近对角线的点或 90% 特异性处的灵敏度，而且还取决于整个线图。这是 ROC 线图如何接近完美者（面积 =1.0）的一种定量、描述性表述。
以下结合附图对本申请的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本申请，并不用于限制本申请。
实施例 与口腔鳞癌诊断相关的基因标志物
1、数据和预处理
在基因表达综合数据库(GEO)和癌症基因组图谱数据库(TCGA)中搜索公共基因表达数据和完整的临床注释。根据临床信息，选择口腔临床标本(牙槽嵴、颊粘膜、口底、舌、唇、口腔、硬腭)，排除下咽、喉、口咽、扁桃体等解剖部位的标本，去除临床信息不完整的样本。
对于TCGA中的数据集，基因表达的RNA测序数据(FPKM值)和临床信息从UCSC Xena(https：//gdc.xenahubs.net)下载。使用tidyverse包对基因进行注释，将基因进行去重取平均值，并将FPKM进行2的次方转换，将FPKM值转化为每千碱基百万(TPM)值的转录本。
从GEO数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）下载GSE30784的基因表达数据，并利用注释文件对其注释，多个探针对应同一个基因的取平均值作为其表达量，然后获得基因表达矩阵文件。
其中，TCGA数据集作为训练集，GEO数据集作为验证集。再去除临床信息不完整的样本后，TCGA队列中包含的样本数为癌旁：癌=44:258，GEO队列中的样本量为癌旁：癌=45:167。
2、差异表达分析
使用R软件中的“limma”包进行差异表达分析，差异基因的筛选标准为adj.Pvalue<0.01，|log2FC|>1.5。
分析结果显示，ASPRV1、COX7A1、KRT23在TCGA和GEO数据库中均呈现差异表达，其表达情况如表1和图1-3所示，其中，相比癌旁组织，COX7A1、KRT23在口腔鳞癌中表达下调，ASPRV1在口腔鳞癌中表达上调。
表1 基因的表达情况
Figure 682903DEST_PATH_IMAGE001
3、诊断效能分析
使用R包“pROC”绘制受试者工作曲线（ROC），分析差异表达基因作为检测变量的AUC值、敏感性和特异性，判断指标单独或者联合的诊断效能。
在判断单独指标的诊断效能时，直接使用基因的表达量进行分析。在判断指标联合的诊断效能时，首先是使用glmnet对基因进行logistics回归，利用建立的Logistic回归模型，计算预测概率，绘制预测结果的ROC曲线。
结果如表2和图4-10所示，从表中可以看出ASPRV1、COX7A1、KRT23及其组合应用于口腔鳞癌的诊断具有较高的准确性，尤其是三者的组合，具有较高的准确性、敏感性以及特异性，在训练集中的AUC值、敏感性、特异性分别为0.915、0.909、0.802；在验证集中的AUC值、敏感性、特异性分别为0.949、0.933、0.868。
表2 基因诊断效能分析
Figure DEST_PATH_IMAGE002
以上结合附图详细描述了本申请的优选实施方式，但是，本申请并不限于上述实施方式中的具体细节，在本申请的技术构思范围内，可以对本申请的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本申请的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本申请对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本申请的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本申请的思想，其同样应当视为本申请所公开的内容。

Claims (9)

1.检测样本中基因标志物的试剂在制备用于诊断口腔鳞癌的产品中的应用，其特征在于，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测样本中基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括在mRNA水平或蛋白水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在mRNA水平上检测基因标志的表达水平的试剂包括特异性识别基因标志物的核酸序列及互补序列的片段的引物对、探针或者引物对和探针。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在蛋白水平上检测基因标志物ASPRV1、COX7A1和/或KRT23表达水平的试剂包括特异性识别所述基因标志物蛋白质全长或其片段的抗体、抗体片段、适体、高亲和性多聚体或拟肽。
6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述样本选自组织、血液。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过聚合酶链反应、实时荧光定量逆转录多聚酶链反应、逆转录聚合酶链反应、竞争性聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或DNA芯片的方法进行检测mRNA水平的试剂。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过免疫印迹、酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、放射免疫扩散法、免疫电泳、组织免疫染色、免疫沉淀分析法、补体固定分析法、荧光激活细胞分选、质量分析或蛋白质微阵列的方法进行检测蛋白水平的试剂。
9.基因标志物在构建预测口腔鳞癌的计算模型中的应用，其特征在于，所述基因标志物包括ASPRV1、COX7A1和/或KRT23。
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