CN113227097B

CN113227097B - 作为tnf活性调节剂的稠合五环咪唑衍生物

Info

Publication number: CN113227097B
Application number: CN201980070050.8A
Authority: CN
Inventors: J·A·约翰逊; E·O·加利莫尔; 宣梦阳
Original assignee: UCB Biopharma SRL; Sanofi SA
Current assignee: UCB Biopharma SRL; Sanofi SA
Priority date: 2018-10-24
Filing date: 2019-10-23
Publication date: 2023-09-08
Anticipated expiration: 2039-10-23
Also published as: WO2020084008A1; US20210361668A1; JP2022505706A; CA3117344A1; JP7429694B2; EP3870586A1; CN113227097A; EP3870586B1; ES2951837T3; PT3870586T; US11554122B2

Abstract

如本文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，作为人类TNFα活性的有效调节剂，相应地有利于治疗和/或预防各种人类病恙，包括自身免疫和炎性障碍；神经和神经变性障碍；疼痛和伤害感受障碍；心血管障碍；代谢性障碍；眼部障碍；和肿瘤学障碍。

Description

作为TNF活性调节剂的稠合五环咪唑衍生物

本发明涉及一个独立类别的稠合五环咪唑衍生物和它们在治疗中的用途。更特别地，本发明涉及药理学活性的取代的稠合五环苯并咪唑衍生物。这些化合物充当TNFα的信号传导的调节剂，因此作为药用物质是有益的，尤其是在不利的炎症性障碍和自身免疫性障碍、神经学障碍和神经变性障碍、疼痛和伤害感受性障碍、心血管障碍、代谢障碍、眼障碍和肿瘤学障碍的治疗中。

TNFα是共有调节细胞存活和细胞死亡的主要功能的肿瘤坏死因子(TNF)超级家族的蛋白质的原型成员。TNF超家族的所有已知成员共有的一个结构特征是结合和激活特定TNF超家族受体的三聚体复合物的形成。作为实例，TNFα以可溶和跨膜形式存在，且通过被称为TNFR1和TNFR2、带有独特功能端点的两种受体发信号。

多种能够调节TNFα活性的产品已是商购可得的。上述全部都已被批准用于治疗炎症性障碍和自身免疫性障碍比如类风湿性关节炎和克罗恩氏病。目前全部批准的产品是大分子的，且通过抑制人TNFα与其受体的结合而起作用。典型的大分子TNFα抑制剂包括抗-TNFα抗体；和可溶性TNFα受体融合蛋白。商购可得的抗-TNFα抗体的实例包括全人抗体比如阿达木单抗和戈利木单抗/>嵌合抗体比如英夫利昔单抗和聚乙二醇化的Fab′片段比如培化舍珠单抗/>商购可得的可溶性TNFα受体融合蛋白的一个实例是依那西普/>

TNF超家族成员(包括TNFα本身)涉入多种被认为在一些具有显著医学重要性的病症中发挥作用的生理学和病理学功能(参见，例如，M.G.Tansey和D.E.Szymkowski,DrugDiscovery Today,2009,14,1082-1088；和F.S.Carneiro等人,J.Sexual Medicine,2010,7,3823-3834)。

根据本发明的化合物是人TNFα活性的有效调节剂，因此在多种人病恙的治疗和/或预防中是有益的。这些包括自身免疫和炎症性障碍；神经学障碍和神经变性障碍；疼痛和伤害感受性障碍；心血管障碍；代谢障碍；眼障碍；和肿瘤学障碍。

根据本发明的化合物也是人类血液细胞中的粒细胞上表达的CD11b的有效抑制剂，这确认它们充当潜在的人类细胞TNFα调节剂的能力，其如游离化合物在本文描述的人类全血测定中的低IC₅₀值("游离IC₅₀")所展示。

另外，根据本发明的化合物作为药理学标准可以是有益的，所述药理学标准用于开发新生物学试验和寻找新的药理学试剂。因而，在一个实施方式中，本发明的化合物可以作为放射性配体用在检测药理学活性化合物的测定中。在一个替代实施方式中，本发明的某些化合物可以用于偶合到荧光团以提供荧光缀合物，所述荧光缀合物可以用在用于检测药理学活性化合物的测定(例如荧光偏振测定)中。

WO 2013/186229涉及取代的苯并咪唑衍生物，其是TNFα信号传导的调节剂。

WO 2015/086525涉及稠合三环咪唑衍生物，其是TNFα信号传导的调节剂。

WO 2016/050975涉及稠合五环咪唑衍生物，其是TNFα信号传导的调节剂。

共同未决的国际专利申请PCT/EP2018/060489涉及独立类别的稠合五环咪唑衍生物，其是TNFα信号传导的调节剂。

本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中

X代表N或C-F；

R¹代表氢或甲基(包括-CD₃)；

R²代表羟基或氰基；

R³代表羟基或氰基；和

R²不同于R³。

根据本发明的化合物涵盖在WO 2016/050975的一般范围内。然而，其中并没有具体公开如前文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明也提供如上文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗中。

本发明也提供如上文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗和/或预防指示给予TNFα功能的调节剂的障碍。

在又一方面，本发明提供如前文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗和/或预防炎性或自身免疫障碍，神经或神经变性障碍，疼痛或伤害感受障碍，心血管障碍，代谢性障碍，眼部障碍，或肿瘤学障碍。

本发明也提供如上文描述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防指示给予TNFα功能的调节剂的障碍。

在又一方面，本发明提供如前文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防炎性或自身免疫障碍，神经或神经变性障碍，疼痛或伤害感受障碍，心血管障碍，代谢性障碍，眼部障碍，或肿瘤学障碍。

本发明也提供治疗和/或预防指示给予TNFα功能的调节剂的障碍的方法，其包括向需要所述治疗的患者给予有效量的如上文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

在又一方面，本发明提供治疗和/或预防炎性或自身免疫障碍、神经或神经变性障碍、疼痛或伤害感受障碍、心血管障碍、代谢性障碍、眼部障碍或肿瘤学障碍的方法，其包括向需要所述治疗的患者给予有效量的如前文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

为了用于药物，式(I)化合物的盐将是药学上可接受的盐。但是，其它盐可用于制备式(I)化合物或它们的药学上可接受的盐。选择和制备药学上可接受的盐的基础标准原理描述于例如Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use,ed.P.H.Stahl&C.G.Wermuth,Wiley-VCH,2002。

当式(I)的化合物具有一个或多个不对称中心时，它们可以相应地作为对映异构体存在。当根据本发明的化合物具有两个或多个不对称中心时，它们可以另外作为非对映异构体存在。本发明应当理解为延伸至使用所有这样的对映异构体和非对映异构体，及其以任何比例存在的混合物，包括外消旋体。除另有说明或证实外，式(I)和在下文中描述的式意图代表所有单一立体异构体及其所有可能的混合物。

适宜地，式(I)化合物的基团R²和R³彼此顺式排列。

应当理解，在式(I)中或在下文所描述的式中存在的每个单独原子可以事实上以它的天然存在的同位素中的任一种形式存在，最丰富的同位素是优选的。因而，作为实例，在式(I)中或在下文所描述的式中存在的每个单独氢原子可以作为¹H、²H(氘，D)或³H(氚，T)原子存在，优选¹H。类似地，作为实例，在式(I)中或在下文所描述的式中存在的每个单独碳原子可以作为¹²C、¹³C或¹⁴C原子存在，优选¹²C。

在第一实施方式中，X代表N。在第二实施方式中，X代表C-F。

在第一实施方式中，R¹代表氢。在第二实施方式中，R¹代表甲基。在第二实施方式的第一方面中，R¹代表-CD₃。在第二实施方式的第二方面中，R¹代表-CH₃。

在第一实施方式中，R²代表羟基。在第二实施方式中，R²代表氰基。

在第一实施方式中，R³代表羟基。在第二实施方式中，R³代表氰基。

适宜地，R³代表羟基，和R²代表氰基。

适宜地，R³代表氰基，和R²代表羟基。

根据本发明的化合物的特定子类别包括式(IIA)和(IIB)化合物及其药学上可接受的盐：

其中X和R¹如前文所定义。

按照本发明的具体新化合物包括其制备描述于所附实施例的每个化合物，及其药学上可接受的盐。

根据本发明的化合物在多种人病恙的治疗和/或预防中是有益的。这些包括自身免疫和炎症性障碍；神经学障碍和神经变性障碍；疼痛和伤害感受性障碍；心血管障碍；代谢障碍；眼障碍；和肿瘤学障碍。

炎症性障碍和自身免疫性障碍包括全身性自身免疫障碍、自身免疫性内分泌障碍和器官特异性的自身免疫障碍。***性自身免疫障碍包括***性红斑狼疮(SLE)、银屑病、银屑病性关节病、血管炎、炎性肌病(包括多肌炎，皮肤肌炎和包涵体肌炎)、硬皮病、多发性硬化、***性硬化症、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎、非特异性的炎症性关节炎、青少年炎症性关节炎、青少年特发性关节炎(包括其少关节的和多关节的形式)、慢性疾病的贫血(ACD)、斯蒂尔病(青少年期和/或成年期发作)、氏病和舍格伦综合征。自身免疫性内分泌障碍包括甲状腺炎。器官特异性的自身免疫障碍包括阿狄森氏病、溶血性或恶性贫血、急性肾损伤(AKI；包括顺铂诱导的AKI)、糖尿病肾病(DN)、梗阻性尿路病(包括顺铂诱导的梗阻性尿路病)、肾小球肾炎(包括古德帕斯丘综合征、免疫复合物介导的肾小球肾炎和抗中性白细胞细胞质抗体(ANCA)-相关的肾小球肾炎)、狼疮肾炎(LN)、轻微改变型肾病、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病(包括克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、不确定性结肠炎和隐窝炎)、天疱疮、特应性皮炎、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性肺炎、自身免疫性心炎、重症肌无力、自发性不育、骨质疏松症、骨质减少、侵蚀性骨病、软骨炎、软骨变性和/或破坏、纤维化障碍(包括多种形式的肝和肺纤维化)、哮喘、鼻炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、呼吸窘迫综合征、脓毒症、发热、肌营养不良(包括杜兴肌营养不良)和器官移植排斥(包括肾同种异体移植物排斥)，巩膜炎(包括巨细胞动脉炎巩膜炎)，高安动脉炎，化脓性汗腺炎，坏疽性脓皮症，肉瘤样病，多肌痛风湿性和直立脊椎关节炎。

神经学障碍和神经变性障碍包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿病、缺血、中风、肌萎缩性侧索硬化、脊髓损伤、头损伤、癫痫发作和癫痫。

心血管障碍包括血栓形成、心脏肥大、高血压、不规则的心脏收缩(例如心力衰竭过程中)和性障碍(包括***功能障碍和女性性功能障碍)。TNFα功能调节剂还可以用于治疗和/或预防心肌梗塞(参见J.J.Wu等人,JAMA,2013,309,2043-2044)。

代谢障碍包括糖尿病(包括胰岛素依赖型糖尿病和青少年糖尿病)、血脂异常和代谢综合征。

眼障碍包括视网膜病变(包括糖尿病视网膜病变、增殖性视网膜病变、非增殖性视网膜病变和早产儿视网膜病变)、黄斑水肿(包括糖尿病黄斑水肿)、年龄相关的黄斑变性(ARMD)、血管化(包括角膜血管化和新生血管形成)、视网膜静脉闭塞和多种形式的葡萄膜炎(包括虹膜炎)和角膜炎。

肿瘤学障碍(其可以是急性的或慢性的)包括增殖障碍，特别是癌症和癌症相关的并发症(包括骨骼并发症、恶病质和贫血)。癌症的特定类型包括血液学恶性肿瘤(包括白血病和淋巴瘤)和非血液学恶性肿瘤(包括实体瘤癌症、肉瘤、脑膜瘤、多形性胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤、胃癌和肾细胞癌)。慢性白血病可以是骨髓的或淋巴的。白血病的种类包括成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性/淋巴样白血病(CLL)、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征、慢性嗜中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞的大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核母细胞性白血病、急性巨核细胞白血病、前髓细胞白血病和红白血病。淋巴瘤的种类包括恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、MALT1淋巴瘤和边缘带淋巴瘤。非血液学恶性肿瘤的种类包括***、肺、***、直肠、结肠、***、膀胱、肾、胰腺、肝、卵巢、子宫、子宫颈、脑、皮肤、骨、胃和肌肉的癌症。TNFα功能调节剂还可以用于增加TNF的有效抗癌作用的安全性(参见F.V.Hauwermeiren等人,J.Clin.Invest.,2013,123,2590-2603)。

本发明也提供药物组合物，其包含如前文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。

根据本发明的药物组合物可以呈适于口服，颊，肠胃外，鼻，局部，眼或直肠给药的形式，或适于吸入或吹入法给药的形式。

对于口服施用，药物组合物可以采取例如通过常规方式用以下物质制备的片剂、锭剂或胶囊剂的形式：药学上可接受的赋形剂比如粘合剂(例如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或乙醇酸钠)；或润湿剂(例如月桂基硫酸钠)。片剂可以通过本领域熟知的方法包覆。口服给药的液体制剂可以呈例如溶液、糖浆剂或悬浮液形式，或者它们可以作为在使用前用水或其它适宜媒介物构造的干燥产品存在。所述液体制剂可以通过常规手段用药学上可接受的添加剂比如助悬剂，乳化剂，非水媒介物或防腐剂来制备。制剂还可以酌情含有缓冲剂盐，调味剂，着色剂或甜味剂。

可以适当地配制用于口服施用的制品以提供活性化合物的控释。

对于含服施用，所述组合物可以采取按常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

可以将式(I)的化合物配制成用于通过注射胃肠外施用，例如通过快速推注或输注。用于注射的配制剂可以以单元剂型呈现，例如在玻璃安瓿或多剂量容器例如玻璃小瓶中。用于注射的组合物可以呈比如油性或水性媒介物中的悬浮液，溶液或乳液形式，并且可以含有配制用试剂比如助悬剂，稳定剂，防腐剂和/或分散剂。另选地，活性成分可以呈粉末形式，用于在使用前用适宜媒介物例如无菌无热原水构造。

除了上述的制剂以外，还可以将式(I)的化合物配制为贮库制剂。所述长效配制剂可以通过植入或通过肌内注射给予。

对于鼻施用或通过吸入施用，利用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、氟三氯甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体或气体混合物，可以以加压包或喷雾器所用的气溶胶喷雾递送形式方便地递送根据本发明的化合物。

如果希望，组合物可以呈包装或分配装置，其可以含有含活性成分的一种或多种单元剂型。包装或分配装置可以伴随给药指导。

对于局部施用，在本发明中使用的化合物可以方便地配制成合适的软膏剂，其含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。特别的载体包括例如矿物油，液体石油，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯，乳化蜡和水。备择地，在本发明中使用的化合物可以配制成合适的洗剂，其含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。特别的载体包括例如矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，聚山梨酯60，鲸蜡基酯蜡，鲸蜡硬脂醇，苯甲醇，2-辛基十二烷醇和水。

对于眼施用，在本发明中使用的化合物可以方便地配制为在等渗的、调过pH的无菌盐水中的微粉化混悬液，用或不用防腐剂比如杀细菌剂或杀真菌剂，例如硝酸苯汞、苯扎氯铵或乙酸氯己定。备择地，对于眼施用，可以将化合物配制在软膏剂比如矿脂中。

对于直肠施用，在本发明中使用的化合物可以方便地配制为栓剂。这些可以如下制备：将活性组分与合适的非刺激性赋形剂混合，所述赋形剂在室温为固体，但是在直肠温度为液体且所以将在直肠中融化以释放活性组分。所述物质包括例如可可油，蜂蜡和聚乙二醇。

预防或治疗特定病症所需要的在本发明中使用的化合物的量将随选择的化合物和要治疗的患者的病症而变化。但是，一般而言，对于口服或含服施用，日剂量可以在约10ng/kg至1000mg/kg的范围内，通常从100ng/kg至100mg/kg，例如从约0.01mg/kg至40mg/kg体重；对于胃肠外施用，从约10ng/kg至50mg/kg体重；和对于鼻施用或通过吸入或吹入法施用，从约0.05mg至约1000mg，例如从约0.5mg至约1000mg。

如果需要的话，根据本发明的化合物可以与另一种药学活性剂(例如抗炎分子)一起共同施用。

上述式(I)化合物可以通过下述方法制备，其包括将式(III)化合物与式(IV)化合物反应：

其中X、R¹、R²和R³如前文所定义，L¹代表适宜的离去基团，M¹代表取代硼酸部分-B(OH)₂或其与有机二醇例如频哪醇、1,3-丙二醇或新戊二醇形成的环状酯，反应在过渡金属催化剂存在下进行。

离去基团L¹一般是卤素原子，例如溴。

在化合物(III)与(IV)之间反应中使用的过渡金属催化剂适宜地是三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，或[1,1'-二(二苯基膦基)-二茂铁]二氯化钯(II)，或氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)(XPhos Pd G2)。过渡金属催化剂可以一般地与2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(XPhos)或三环己基鏻四氟硼酸盐结合使用。反应适宜地在磷酸钾或碳酸钾存在下进行。反应方便地在升高的温度、在适宜的溶剂例如环醚比如1,4-二噁烷中进行，任选与水混合。

上述式(IV)中间体，其中M¹代表取代硼酸部分-B(OH)₂与频哪醇形成的环状酯，可以制备如下：将二-(频哪醇基)二硼与式(V)化合物反应：

其中L²代表适宜的离去基团；反应在过渡金属催化剂存在下进行。

离去基团L²一般地是卤素原子，例如氯。

在二(频哪醇基)二硼与化合物(V)之间的反应中所用的过渡金属催化剂适宜地是三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，其可以与2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(XPhos)或三环己基鏻四氟硼酸盐结合使用。反应适宜地在乙酸钾存在下进行。反应方便地在升高的温度、在适宜的溶剂例如环醚比如1,4-二噁烷中进行。

其中R¹是甲基的上述式(V)中间体可以通过与甲基卤例如碘甲烷反应制备自其中R¹是氢的相应式(V)化合物。该甲基化反应一般在碱例如甲硅烷基胺化碱比如二(三甲基甲硅烷基)胺化钾存在下进行。反应可以方便地在适宜的溶剂例如环醚溶剂比如四氢呋喃中进行。

在WO 2016/050975中具体公开的是，上述式(V)中间体，其中R¹是氢和L²代表氯，以及上述式(IV)中间体，其中R¹是分别氢或-CD₃和M¹代表4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂-硼杂环戊烷-2-基。

式(III)中间体其中R³是羟基可以制备如下：将式(VI)中间体与式(VII)中间体反应,

其中X、L¹和R²如前文所定义和L³是适宜的离去基团；反应在n-BuLi存在下进行。

离去基团L³一般地是卤素原子例如氯或碘。

反应方便地在二氯甲烷中在低温根据本领域技术人员熟知的方法进行。

式(III)中间体其中R³是氰基可以通过在升高的温度与四氟硼酸反应制备自式(VIII)中间体,

其中X和L¹如前文所定义。

另选地，在X代表C-F的情况下，式(VIII)中间体可以首先在3-氯过氧苯甲酸存在下、在适宜的溶剂例如二氯甲烷中氧化为相应的环氧化物，随后在适宜的溶剂例如乙醇或甲醇或其混合物中与硼氢化钠反应。

式(VIII)中间体可以通过类似于实施例所描述那些的方法或通过本领域熟知的标准方法制备。

在从上面关于根据本发明的化合物的制备所描述的任何方法得到产物的混合物的情况下，可以在适当的阶段通过常规方法从其分离期望的产物，所述常规方法是比如制备型HPLC；或利用例如与适当的溶剂***结合的二氧化硅和/或氧化铝的柱色谱法。

在上文描述的方法产生立体异构体的混合物的情况下，这些异构体可以通过常规技术分离。具体地，在期望得到特定对映异构体的情况下，这可以使用任何合适的拆分对映异构体的常规程序从对应的对映异构体混合物产生。因而，例如，通过使对映异构体的混合物(例如外消旋体)与适当的手性化合物(例如手性酸或碱)反应，可以得到非对映异构的衍生物(例如盐)。然后可以通过任何方便的方式(例如通过结晶)分离非对映异构体，并回收期望的对映异构体，例如在非对映异构体是盐的情况下通过用酸处理。在又一拆分方法中，外消旋体可以用手性HPLC分离。此外，如果需要的话，在上述方法之一中使用适当的手性中间体可以得到特定对映异构体。备择地，可以如下得到特定对映异构体：执行对映异构体-特异性的酶促生物转化，例如使用酯酶的酯水解，然后从未反应的酯对映体中仅纯化对映异构地纯的水解的酸。在希望时还可以使用色谱法、重结晶和其它常规分离程序来获得特别的几何异构体。另选地，不希望的对映体可以根据本领域技术人员已知的方法或根据实施例中描述的方法在酸或碱存在下外消旋化为所希望的对映体。

在以上合成顺序中的任一个中，可能必须和/或需要保护在涉及的任何分子上的敏感基团或反应基团。这可以借助于常规保护基实现，比如在以下文献中描述的那些：Protective Groups in Organic Chemistry,J.F.W.McOmie编,Plenum Press,1973；以及T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,第3版,1999。利用本领域已知的方法，可以在任何方便的后续阶段除去保护基。

根据本发明的化合物在被称为HEK-Blue^TMCD40L的商购可得的HEK-293衍生的报道细胞系中有效地中和TNFα的活性。这是在融合到5个NF-κB结合位点的IFNβ最小启动子的控制下的表达SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)的稳定的HEK-293转染的细胞系。这些细胞对SEAP的分泌由TNFα以浓度依赖性的方式刺激。在HEK-293生物测定(本文还称为报道基因测定)中测试时，本发明化合物展示10nM或更佳的IC₅₀值(技术人员将理解更低的IC₅₀数值表示更高活性的化合物)。

另外，根据本发明的化合物是人类血液细胞中的粒细胞上表达的CD11b的有效抑制剂，其在如本文描述的人类全血测定中测试。在该测定中测试时，本发明化合物展示15nM或更低的游离化合物IC₅₀(下文称为"游离IC₅₀")(技术人员将理解在该测定中更低的IC₅₀值表示更优异的化合物，也即对CD11b在粒细胞上表达显示更高抑制的化合物，因此其是更佳的TNFα调节剂)。

报道基因测定

TNFα诱导的NF-κB活化的抑制

TNFα对HEK-293细胞的刺激导致NF-κB途径的活化。用于确定TNFα活性的报道细胞系购自InvivoGen。HEK-Blue^TMCD40L是稳定的HEK-293转染的细胞系，其在融合至五个NF-κB结合位点的IFNβ最小启动子控制下表达SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)。这些细胞对SEAP的分泌被TNFα以剂量依赖性的方式刺激，对于人TNFα而言具有0.5ng/mL的EC50。将化合物从10mM DMSO储备液(最终测定浓度0.3％DMSO)稀释以得到10个点的3倍系列稀释曲线(例如，30,000nM至2nM终浓度)。将稀释的化合物与TNFα一起预温育60分钟，随后加至384-孔微量滴定板中并温育18h。测定板中的最终TNFα浓度是0.5ng/mL。使用比色测量底物例如QUANTI-Blue^TM或HEK-Blue^TMDetection培养基(InvivoGen)，确定上清液中的SEAP活性。对单独含有TNFα的DMSO(对照)和过量阻断的抗-TNFα单克隆抗体产生的最大抑制计算化合物的百分比抑制。抑制曲线在ActivityBase用4参数对数模型(XLfit^TM)构建。在拟合的抑制剂的最小与最大效果之间的拐点提供IC₅₀值。

在报道基因测定中测试的情况下，测得全部实施例化合物展示10nM或更佳的IC₅₀值。

在报道基因测定中测试的情况下，实施例化合物展示一般范围是0.01nM至10nM的IC₅₀值。

TNF人类全血筛选测定

在内源表达的TNFα驱动的人类全血测定中评价根据实施例的化合物：测量CD11b在用酵母聚糖攻击的人类全血中的粒细胞上的表达。酵母聚糖结合至TLR2和其它受体，导致NF-κB信号传导，其又诱导包括TNFα的促炎性介导物的产生。然后，TNFα能够刺激CD11b在粒细胞上的表达。

从10mM DMSO储备液稀释化合物(最终测试浓度为0.2％DMSO)以产生10-点2.5-倍系列稀释曲线(例如20,000nM至5.3nM最终测试浓度)。于37℃将稀释化合物与EDTA抗凝的人类全血预温育60分钟，随后用1ug/ml酵母聚糖刺激。在用酵母聚糖刺激3小时之后，将全血用荧光标记的抗CD45和抗CD11b抗体染色。将样品固定和进行红血细胞裂解，随后用FACSCANTO II分析。

FACS(荧光活化的细胞分选)分析用FloJo软件进行。用SSC-A(峰的侧分散面积)和CD45信号来鉴定粒细胞，随后用SSC-A和SSC-W(峰的侧分散宽度)来选择单个细胞。用MESF(分子of Equivalent可溶的荧光染料)珠来校准单细胞粒细胞上的CD11b信号。CD11b的活化以剂量依赖性的方式被TNFα抑制剂抑制。

对单独含有TNFα的DMSO(对照)和用过量阻断的抗-TNFα单克隆抗体产生的最大抑制计算化合物的百分比抑制。抑制曲线在ActivityBase中用4参数对数模型(XLfit^TM)构建。在拟合的抑制剂最小与最大效果之间的拐点提供IC₅₀值。

在测试时，实施例化合物展示大约50nM至大约300nM范围的IC₅₀值。

人类血液结合测定

该测定的目的是确定根据本发明的化合物在血液中的未结合级分。

根据本发明的化合物在种类特定的血液中制备。将血液溶液加至平衡透析***中的膜的一侧，同时将缓冲液(100mM磷酸缓冲液，pH 7.4)加至另一侧。在37℃让***达到平衡。通过LC-MS/MS测量膜两侧的化合物并计算未结合化合物的级分。

用肝素锂作抗凝剂采样血液并在24小时内用于测试。在已于100mM磷酸缓冲液中1:1(v：v)稀释的人类血液中制备试验化合物溶液(1μM；0.5％最终DMSO浓度)。用两个腔室被半渗透膜分开的平衡透析进行实验。将缓冲液(100mM磷酸缓冲液；pH 7.4)加至膜的一侧，并将含有试验化合物的血液溶液加至另一侧。在37℃在温育器(5％CO₂和在轨道摇动器上300rpm搅动)中平衡4小时之后，从膜两侧取得样品。将缓冲液或血液加入有关样品对样品进行基质匹配(也即将缓冲液加入血液样品和将血液加入缓冲液样品)。然后从基质匹配的样品沉淀蛋白质：加入含有内标的甲醇(200μL甲醇+IS加入100μL样品)随后于4℃于2500rpm离心30分钟。然后在分析之前用水稀释上清液。试验化合物温育以双份进行。各实验中包括对照化合物氟哌啶醇。

测量血液中的未结合级分(Fu)和百分比回收。也测量全部样品的峰面积比率数据。

在测试时，实施例化合物展示按百分比表示大约1％至大约7％范围的血液未结合级分。

考虑血液未结合级分的程度来确定游离化合物的计算IC₅₀(本文称为"游离IC₅₀")：将第一测试(人类全血筛选测定)产生的IC₅₀乘以第二测试(人类血液结合测定)产生的未结合级分(Fu)。

在测试时，实施例化合物在人类全血测定中展示15nM或更佳的游离IC₅₀值。本领域技术人员将理解"更佳的"IC₅₀值是更低的IC₅₀值。

特别地，实施例2化合物展示大约12nM的游离IC₅₀值；实施例1和3化合物展示大约6nM的游离IC₅₀值；实施例5化合物展示大约5nM的游离IC₅₀值；和实施例4、6和7全部展示比4nM更佳的游离IC₅₀值。

下述实施例举例说明了根据本发明的化合物的制备。

实施例

缩写

DCM：二氯甲烷 EtOAc：乙酸乙酯

MeOH：甲醇 THF：四氢呋喃

DMSO：二甲亚砜

MeCN：乙腈 EtOH：乙醇

TBME：甲基叔丁基醚

XPhos：2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯

rt：室温 h：小时

M：质量 RT：保留时间

HPLC：高效液相色谱

LCMS：液相色谱法质谱

ES⁺：电喷雾正离子化

命名

本文描述的全部中间体和实施例的IUPAC命名都用PipelIne Pilot(版本2018)产生，其使用OpenEye Scientific提供的OEMMetachem软件版本1.4.5.。

分析条件

全部NMR谱图于250MHz，300MHz，400MHz或500MHz获得。

牵涉空气或水分敏感试剂的全部反应在氮气氛下用干燥溶剂和玻璃仪器进行。

LCMS数据确定

方法1

方法1：用Agilent 1200RR-6140LC-MS***进行，其配有Agilent二元泵和AgilentDAD(230-400nm)模块。6140质量检测(ES)100-1000m/z。

柱：XBridge C18，2.1x 20mm，2.5μm

流动相A：10mM甲酸铵/水+0.1％氨溶液

流动相B:乙腈+5％水+0.1％氨溶液

流速：1mL/min

运行时间:6分钟

方法2

方法2：粗制***2(碱性)-用Agilent 1260-6120LC-MS***进行，其配有Agilent二元泵和Agilent DAD(240-400nm)模块。6120质量检测(ES)120-1000m/z。

柱：XBridge C18，2.1x 20mm，2.5μm

流动相A：10mM甲酸铵/水+0.1％氨溶液

流动相B:乙腈+5％水+0.1％氨溶液

流速:1mL/min

运行时间:3.5分钟

方法3

方法3：粗制***2(碱性)-用Agilent 1260-6120LC-MS***进行，其配有Agilent二元泵和Agilent DAD(240-400nm)模块。6120质量检测(ES)120-1000m/z。

柱：XBridge C18，2.1x 20mm，2.5μm

流动相A：10mM甲酸铵/水+0.1％氨溶液

流动相B:乙腈+5％水+0.1％氨溶液

梯度:

流速:1mL/min

运行时间:6分钟

方法4

Waters UPLC-SQD设备，离子化：正模式和/或负模式电喷雾(ES+/-)，色谱条件：柱：Acquity CSH C18 1.7μm-2.1x 50mm，溶剂：A：H2O(0.1％甲酸)B：CH3CN(0.1％甲酸)，柱温：45℃，流速：1.0ml/min，梯度(2.5分钟)：5至100％的B.

中间体1

(1R,11R)-5-氯-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-13-酮

在15分钟内，向在氮下冷却至-78℃的(7R,14R)-11-氯-1-(二氟甲氧基)-6,7-二氢-7,14-桥亚甲基苯并咪唑并[1,2-b][2,5]苯并二氮芳辛-5(14H)-酮(WO 2016/050975，实施例11)(10g，26.6mmol)的无水THF(135mL)溶液滴加二(三甲基甲硅烷基)胺化钾(1M，在THF中，30mL，30mmol)。所得混合物在-78℃搅拌1h，随后在5分钟内逐滴加入碘甲烷(2.5mL，40mmol)。在-78℃搅拌反应混合物1小时，然后缓慢温热至环境温度过夜。将反应混合物倾至饱和氯化铵水溶液(600mL)中，用EtOAc(2x 800mL)萃取。有机萃取物(Na₂SO₄)干燥，过滤和减压浓缩。在二氧化硅上进行快速色谱法纯化(用5％MeOH/DCM洗脱)，提供标题化合物(9.12g，88％)，是米白色固体。

δ_H(300MHz，DMSO-d₆)8.33-8.21(m，1H)，7.87-7.33(m，5H)，7.22(dd，J 8.7，2.1Hz，1H)，6.23(d，J 7.1Hz，1H)，5.22(d，J 7.1Hz，1H)，3.55-3.41(m，1H)，3.33(s，3H)，2.81(d，J13.8Hz，1H)。LCMS(ES+)[M+H]⁺390.0，RT 1.10分钟(方法2)。

中间体2

(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-13-酮

将中间体1(4g，10.3mmol)/1,4-二噁烷(42mL)用二(频哪醇基)二硼(3.9g，15mmol)和乙酸钾(3g，30.6mmol)处理。将反应混合物脱气和用氮冲洗。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(484mg，0.51mmol)和三环己基鏻四氟硼酸盐(390mg，1.03mmol)，将反应混合物脱气和用氮冲洗，随后在140℃加热过夜。再加入二(频哪醇基)二硼(2.6g，10.3mmol)，反应混合物在140℃加热24小时。反应混合物在EtOAc与盐水之间分配，分离有机相，真空浓缩和在二氧化硅上进行快速柱色谱法纯化(用EtOAc/MeOH 0至10％梯度洗脱)，提供标题化合物(2.5g，50％)，是白色固体。

LCMS(ES+)[M+H]⁺482，RT 2.40分钟(方法3)。

中间体3

3-(5-溴嘧啶-2-基)-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

将均可商购的1-甲基-3-氧代-环丁烷腈(2.0g，18.3mmol)和5-溴-2-碘-嘧啶(6g，21.0mmol)溶于DCM(100mL)。将混合物冷却至-78℃，随后滴加n-丁基锂(8.4mL，21mmol，2.5mol/L)。混合物在-78℃搅拌一小时，随后缓慢温热至r.t.和搅拌额外的小时。混合物过滤通过分相器，用DCM洗涤，真空浓缩。粗制产品在二氧化硅上进行快速柱色谱法纯化(用0-10％EtOAc/己烷梯度洗脱)，提供主要的不希望异构体700mg，和含有比率约1:1的两种异构体的混合级分(1.7g)。合并混合级分和通过制备型LC纯化，提供标题化合物，是黄色固体(700mg，10％)

LCMS(ES+)[M+H]⁺250/270，RT 0.90分钟(方法3)。

中间体4

(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-6-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-13-酮

将(7R,14R)-11-氯-1-(二氟甲氧基)-10-氟-6,7-二氢-7,14-桥亚甲基苯并咪唑并[1,2-b][2,5]苯并二氮芳辛-5(14H)-酮(WO 2016/050975的实施例10)(150mg，0.38mmol)/1,4-二噁烷(1.3mL，15mmol)加入二(频哪醇基)二硼(145.1mg，0.57mmol)，和加入乙酸钾(112mg，1.14mmol)，三环己基鏻四氟硼酸盐(14mg，0.038mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(18mg，0.019mmol)。反应混合物脱气10分钟，随后在密封管中在微波中加热至140℃持续3小时。在该时间之后，将水和EtOAc加入反应混合物。分离两相，水层用EtOAc萃取。经合并的有机层过滤通过分相器和蒸发溶剂。残余物通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用0至100％的EtOAc/异己烷然后0至15％的DCM/MeOH梯度洗脱)。合并含有产品的级分和蒸发溶剂，提供标题化合物，是灰色固体(145mg，79％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺486，RT 1.90分钟(方法3)。

中间体5

3-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

在-70℃将n-丁基锂(2.5M，在己烷中，12.54mL，31.3mmol)溶液滴加至2,5-二溴-3-氟吡啶(7.99g，31.3mmol)的甲苯(200mL)溶液，在加入后在-70℃搅拌反应混合物1h。在-70℃将1-甲基-3-氧代环丁烷腈(3.00g，26.1mmol)的甲苯(50mL)溶液滴加至反应混合物，所得溶液然后在-70℃搅拌2h。

然后让反应混合物温热至0℃和在0℃加入饱和氯化铵溶液(50mL)。所得混合物用EtOAc(2x 100mL)萃取和经合并的有机相用盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤和真空浓缩。残余物通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用MeOH/DCM 0-2％梯度洗脱)，提供标题化合物(857mg，11.5％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.29(s，3H)，2.6(d，J＝13.3Hz，1H)，2.89(dd，J＝1.8&13.3Hz，1H)，6.21(s，1H)，8.17(dd，J＝1.8&10.2Hz，1H)，8.53(t，J＝1.8Hz，1H)。

中间体6

3-甲亚基-1-(吗啉-4-亚氨代甲酰基)环丁烷-1-腈

将3-亚甲基环丁烷腈(8g，83.3mmol)溶于四氢呋喃(100mL)，在-78℃滴加二异丙基氨基锂(46mL，92mmol，2.0mol/L)。混合物在-78℃搅拌1小时，随后逐滴加入吗啉-4-腈(9.4mL，92mmol)的THF(20mL)溶液。混合物在-78℃搅拌额外1小时。反应用饱和NH₄Cl溶液淬灭和用TBME萃取两次。合并有机物，浓缩。粗制物质通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用0-20％MeOH/DCM梯度洗脱)，提供标题化合物(8.0g，47％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺206，RT 0.68分钟(方法3)。

中间体7

1-(5-溴嘧啶-2-基)-3-甲亚基环丁烷-1-腈

将可商购的5-溴-1,2,3-三嗪(1.30g，8.13mmol)悬浮于MeCN(5mL)和在冰浴中冷却。然后滴加中间体6(1.83g，8.92mmol)的MeCN(10mL)溶液。在搅拌10分钟之后，除去冰浴，将反应加热至45℃过夜。真空浓缩混合物，残余物在二氧化硅上进行快速柱色谱法纯化(用0-25％EtOAc/异己烷梯度洗脱)。合并有关级分和浓缩，提供标题化合物，是黄色油状物，其经放置固化(375mg，18.5％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺250/252，RT 1.99分钟(方法3)。

中间体8

1-(5-溴嘧啶-2-基)-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-腈

将中间体7(375mg,1.50mmol)/四氟硼酸(2.5mL，19mmol)加热至70℃持续6小时，随后冷却。加入饱和碳酸氢钠溶液猝灭反应。然后加入EtOAc，分层，水层再次用EtOAc萃取。干燥经合并的有机相，过滤和真空浓缩。残余物通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用20-50％EtOAc/异己烷梯度洗脱)。合并有关级分和真空浓缩，提供产品，是异构体的混合物。然后通过制备型HPLC将它们分离，提供标题化合物，是白色固体(110mg，27％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺268/270，RT 0.93分钟(方法3)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.10(s，2H)，2.95-2.85(m，2H)，2.84-2.75(m，2H)，1.21(s，3H)。

中间体9

1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-3-甲亚基环丁烷-1-腈

在1升3-颈圆底烧瓶中、在氮下，将5-溴-2,3-二氟吡啶(25.0g，126mmol)和3-亚甲基环丁烷腈(16mL，152mmol)在无水甲苯(250mL)中合并。将溶液冷却至0℃(冰/盐浴)。然后经由滴液漏斗加入二(三甲基甲硅烷基)氨基钠(242mL，145mmol)。在加入期间，温度短时间升至12℃。在加入完成后，在0℃将反应搅拌45分钟。将反应混合物倾至1M柠檬酸(200mL)中，分层，水层用EtOAc(2x 250mL)萃取。经合并的有机物通过分相器，过滤和真空浓缩，提供褐色油状物。将其用快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用0-20％EtOAc/异己烷梯度洗脱)，提供标题化合物，是白色固体(25.2g，75％)

LCMS(ES+)[M+H]⁺267/269，RT 1.09分钟(方法2)。

中间体10

5-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-1-氧杂螺[2.3]己烷-5-腈

将3-氯过氧苯甲酸(2.69g，12.0mmol)加入中间体9(1.50g，5.62mmol)的DCM(60mL)溶液，在室温搅拌过夜。反应溶液用饱和Na₂S₂O₅溶液淬灭，用DCM稀释和分层。有机层用饱和碳酸氢盐洗涤两次，然后用水洗涤，随后真空浓缩。该残余物用快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用10-30％EtOAc/异己烷梯度洗脱)。合并有关级分和真空浓缩，提供米白色固体(1.10g，69％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺283/285，1.53分钟(方法3)。

中间体11

1-(5-溴-3-氟吡啶-2-基)-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-腈

/>

将中间体10(900mg，3.18mmol)溶于无水EtOH(30mL)，搅拌10分钟。然后加入无水MeOH(5mL)促进溶解，随后是硼氢化钠(425mg，11.1mmol)。在6.5小时之后，在饱和氯化铵水溶液和EtOAc之间分配猝灭反应。分层，水层进一步用EtOAc萃取。经合并的有机相用盐水洗涤，然后干燥，过滤和真空浓缩。粗制残余物用快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用30-45％EtOAc/异己烷梯度洗脱)。合并有关级分和真空浓缩，提供产品异构体的混合物。通过制备型HPLC将它们分离，提供中间体11，是白色固体(52mg，6％)

LCMS(ES+)[M+H]⁺285/287，RT 1.28分钟。(方法3)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.69-8.62(m，1H)，8.36(dd，J＝10.0，1.9Hz，1H)，5.54(s，1H)，2.97(d，J＝12.7Hz，2H)，2.80(d，J＝12.7Hz，2H)，1.05(s，3H)。

实施例1

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-13-氧代-12-(三氘甲基)-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

将(7R,14R)-11-氯-1-(二氟甲氧基)-6-(三氘)甲基-6,7-二氢-7,14-桥亚甲基苯并咪唑并[1,2-b][2,5]苯并二氮芳辛-5(14H)-酮(WO 2016/050975的中间体159)(700mg，1.44mmol)，中间体3(461mg，1.72mmol)，三碱式磷酸钾(1252mg，5.78mmol)和三环己基鏻四氟硼酸盐(66mg，0.174mmol)悬浮于1,4-二噁烷(15mL，175mmol)和水(2mL)的混合物中。将混合物脱气/氮冲洗3次，随后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(70mg，0.074mmol)。将混合物进一步脱气/氮冲洗，在微波中在110℃加热2.5小时。混合物然后用水稀释和用EtOAc萃取两次。合并有机物，干燥和真空浓缩。粗制产品通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(0-100％EtOAc/异己烷和0-10％MeOH/DCM梯度洗脱)，提供标题化合物(343mg，31％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺546，RT 1.97分钟(方法1)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.11(s，2H)，8.28(dd，J＝6.1，3.3Hz，1H)，7.83-7.74(m，2H)，7.69(t，J＝73.0Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，7.55-7.46(m，2H)，6.32(d，J＝7.1Hz，1H)，6.16(s，1H)，5.26(d，J＝7.1Hz，1H)，3.53(dt，J＝14.1，7.2Hz，1H)，2.96-2.86(m，2H)，2.85(d，J＝13.7Hz，1H)，2.81-2.72(m，2H)，1.45(s，3H)。

实施例2

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

在氮下向经火焰干燥的三颈烧瓶加入(6R,12R)-2-氯-11-(二氟甲氧基)-7,12-二氢-6H-6,12-桥亚甲基苯并咪唑并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂(WO 2016/050975的实施例11)(750mg，1.996mmol))，XPhos(PiAllyl)预催化剂(67mg，0.099mmol)，乙酸钾(494mg，4.98mmol)和二(频哪醇基)二硼(532mg，2.10mmol)，随后三次将其排空和反填充氮。然后加入1,4-二噁烷(4mL)，在100℃搅拌混合物。在3.5小时之后，加入中间体3(589mg，2.20mmol)的无水1,4-二噁烷(2mL)溶液，随后三碱式磷酸钾(1.5mL，3.0mmol)的水溶液。在100℃继续搅拌19小时，随后将混合物冷却至室温，倾至盐水(100mL)中，用EtOAc(100mL)稀释并分配。含水洗涤液用EtOAc(100mL)再萃取。合并的有机萃取物在Na₂SO₄上干燥，过滤和减压浓缩。在二氧化硅上进行快速柱色谱法纯化(用MeOH/DCM(0至5％梯度洗脱)，随后在Et2O中研磨产品，提供标题化合物，是黄褐色固体(511mg，49％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.16(d，J＝6.8Hz，1H)，9.11(s，2H)，8.23(dd，J＝5.7，3.8Hz，1H)，7.81-7.73(m，2H)，7.70(t，J＝73Hz，1H)，7.63(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，7.55-7.46(m，2H)，6.38(d，J＝7.0Hz，1H)，6.15(s，1H)，4.91(t，J＝6.8Hz，1H)，3.50(dt，J＝13.6，7.1Hz，1H)，2.96-2.87(m，2H)，2.81-2.72(m，3H)，1.45(s，3H)

LCMS(ES+)[M+H]⁺529，RT 1.45分钟(方法3)

实施例3

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-6-氟-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

将中间体4(910mg，1.69mmol)，中间体3(500mg，1.87mmol)，三碱式磷酸钾(1.10g，5.08mmol)和三环己基鏻四氟硼酸盐(65mg 0.171mmol)悬浮于1,4-二噁烷(20mL)中并加水(5mL)。反应用三个循环真空和氮脱气，随后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(80mg0.085mmol)。反应再次脱气/再填充，加热至100℃持续4.5小时，随后冷却至室温过夜。反应在盐水与EtOAc间分配和分层。除去有机层，水层进一步用EtOAc萃取。干燥经合并的有机相，过滤和真空浓缩。残余物在DCM中研磨，过滤。物质通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用0-20％MeOH/DCM梯度洗脱)，合并有关级分和浓缩，提供标题化合物，是淡黄色固体(465mg，50％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.17(d，J＝6.9Hz，1H)，9.01(d，J＝1.7Hz，2H)，8.27-8.20(m，1H)，7.69(d，J＝11.4Hz，1H)，7.62(t，J＝73.0Hz，1H)，7.57(d，J＝6.8Hz，1H)，7.54-7.48(m，2H)，6.36(d，J＝7.1Hz，1H)，6.19(s，1H)，4.92(t，J＝6.8Hz，1H)，3.55-3.45(m，1H)，2.92(d，J＝13.5Hz，2H)，2.82-2.70(m，3H)，1.46(s，3H)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺547，1.74分钟(方法1)。

实施例4

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3,5,7,9,14(19),15,17-七烯-5-基]-3-氟吡啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

将K₃PO₄(521mg，2.38mmol)的水(3.75mL)溶液加入中间体5(226mg，794μmol)和中间体2(382mg，793μmol)在1,4-二噁烷(15mL)中的混合物。一旦将氩鼓泡通过该溶液，则加入[二(二苯基膦基)二茂铁]-二氯化钯(II)(30mg，40μmol)。所得反应混合物在回流下加热4h，然后冷却至室温和倾至水中(50mL)。该溶液用EtOAc(3x 50mL)萃取。经合并的有机相用水洗涤(2x 50mL)，在MgSO4上干燥，过滤和真空浓缩。残余物通过快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用MeOH/DCM 0-5％梯度洗脱)，提供标题化合物(192mg，43％)，是米白色固体。

LCMS(ES+)[M+H]⁺560，RT 1.28分钟。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.33(s，3H)，2.78至2.85(m，3H)，2.96(宽d，J＝12.2Hz，2H)，3.36(s，3H)，3.52(m，1H)，5.24(d，J＝7.2Hz，1H)，6.16(s，1H)，6.30(d，J＝7.2Hz，1H)，7.47至7.52(m，2H)，7.60(dd，J＝1.7&8.5Hz，1H)，7.68(t，J＝73.3Hz，1H)，7.75(m，2H)，7.95(dd，J＝2.0&12.0Hz，1H)，8.27(m，1H)，8.65(t，J＝2.0Hz，1H)。

实施例5

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3,5,7,9,14(19),15,17-七烯-5-基]-3-氟吡啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈

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将K₃PO₄(535mg，2.45mmol)的水(2.5mL)溶液加入中间体5(232.5mg，815.4μmol)和(7R,14R)-1-(二氟甲氧基)-11-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-6,7-二氢-7,14-桥亚甲基苯并咪唑并[1,2-b][2,5]苯并二氮芳辛-5(14H)-酮(WO 2016/050975的中间体171)(381mg，815.4μmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物。一旦将氩鼓泡通过该溶液，则加入[二(二苯基膦基)二茂铁]-二氯化钯(II)(31.4mg，40.8μmol)。所得反应混合物在回流下加热4hr，然后冷却至室温和倾至水中(50mL)。该溶液用EtOAc(3x 50mL)萃取。经合并的有机相用水洗涤(2x 50mL)，在MgSO4上干燥，过滤和真空浓缩。残余物通过快速色谱法(MeOH/DCM 0-5％)纯化，提供标题化合物(67mg，15％)，是米白色固体。

LCMS(ES+)[M+H]⁺546，RT 1.21分钟(方法4)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：1.34(s，3H)，2.75(d，J＝13.4Hz，1H)，2.80(宽d，J＝13.4Hz，2H)，2.96(宽d，J＝13.4Hz，2H)，3.49(m，1H)，4.89(t，J＝6.9Hz，1H)，6.16(s，1H)，6.36(d，J＝7.2Hz，1H)，7.48至7.53(m，2H)，7.58(dd，J＝1.8&8.6Hz，1H)，7.68(t，J＝73.3Hz，1H)，7,73(m，2H)，7.94(dd，J＝1.8&11.9Hz，1H)，8.23(m，1H)，8.65(t，J＝1.8Hz，1H)，9,13(d，J＝6.9Hz，1H)。

实施例6

1-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-腈

将中间体2(140mg，0.29mmol)，中间体8(85mg，0.32mmol)，三碱式磷酸钾(185mg，0.85mmol)和三环己基鏻四氟硼酸盐(11mg，0.029mmol)溶于1,4-二噁烷(5mL)和加水(1mL)。反应用三个真空和氮循环脱气，随后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(14mg，0.015mmol)。反应再次脱气/再填充氮，加热至100℃持续5小时，随后冷却至室温过夜。反应混合物用DCM和水稀释，通过分相器，真空浓缩有机相。用快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用50-100％EtOAc/异己烷然后0-10％MeOH/DCM梯度洗脱)。合并希望级分和真空浓缩，提供标题化合物，是白色固体(56mg，36％)。

LCMS(ES+)[M+H]⁺543，RT 1.67分钟(方法1)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.16(s，2H)，8.34-8.21(m，1H)，7.83-7.74(m，2H)，7.71-7.63(m，1H)，7.70(t，J＝73.6Hz，1H)，7.54-7.47(m，2H)，6.32(d，J＝7.1Hz，1H)，5.52(s，1H)，5.27(d，J＝7.1Hz，1H)，3.61-3.47(m，1H)，3.37(s，3H)，3.05-2.91(m，2H)，2.89-2.79(m，3H)，1.24(s，3H)

实施例7

1-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十碳-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]-3-氟吡啶-2-基]-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-腈

将中间体2(95mg，0.16mmol)，中间体11(50mg，0.18mmol)，三碱式磷酸钾(100mg，0.46mmol)和三环己基鏻四氟硼酸盐(10mg，0.026mmol)溶于1,4-二噁烷(2.0mL)和加水(0.5mL)。反应用三个真空和氮循环脱气，随后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(10mg，0.011mmol)。反应再次脱气/再填充氮，加热至100℃持续5小时，随后冷却至室温。反应用DCM和水稀释，通过分相器，真空浓缩有机相。用快速柱色谱法在二氧化硅上纯化(用50-100％EtOAc/异己烷然后0-15％MeOH/DCM梯度洗脱)。合并用大约10％MeOH/DCM洗脱的希望级分和真空浓缩，提供淡黄色沫状物，进一步通过制备型HPLC纯化和冷冻-干燥过夜，提供标题化合物，是白色粉末(20mg，23％)

LCMS(ES+)[M+H]⁺560，RT 1.81分钟(方法1)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.75(t，J＝1.7Hz，1H)，8.31-8.25(m，1H)，8.12(dd，J＝11.8，1.9Hz，1H)，7.90-7.68(m，3H)，7.65(dd，J＝8.6，1.7Hz，1H)，7.53-7.49(m，2H)，6.31(d，J＝7.1Hz，1H)，5.55(s，1H)，5.27(d，J＝7.1Hz，1H)，3.65-3.44(m，1H)，3.37(s，3H)，3.04(d，J＝12.2Hz，2H)，2.85(d，J＝13.3Hz，3H)，1.10(s，3H)。

Claims

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中

X代表N或C-F；

R¹代表氢，甲基或-CD₃；

R²代表羟基或氰基；

R³代表羟基或氰基；和

R²不同于R³。

2.权利要求1所要求保护的化合物，其由式(IIA)代表，或其药学上可接受的盐：

其中X和R¹如权利要求1中所定义。

3.权利要求1所要求保护的化合物，其由式(IIB)代表，或其药学上可接受的盐：

其中X和R¹如权利要求1中所定义。

4.权利要求1所要求保护的化合物，其是：

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-13-氧代-12-(三氘甲基)-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈；

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈；

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3,5,7,9,14(19),15,17-七烯-5-基]-3-氟吡啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈；

3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3,5,7,9,14(19),15,17-七烯-5-基]-3-氟吡啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈；

1-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-腈；或

1-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-12-甲基-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]-3-氟吡啶-2-基]-3-羟基-3-甲基环丁烷-1-腈。

5.化合物，其是3-[5-[(1R,11R)-18-(二氟甲氧基)-6-氟-13-氧代-2,9,12-三氮杂五环[9.8.1.02,10.03,8.014,19]二十-3(8),4,6,9,14(19),15,17-七烯-5-基]嘧啶-2-基]-3-羟基-1-甲基环丁烷-1-腈或其药学上可接受的盐。

6.药物组合物，包含如权利要求1或5中所定义的化合物或其药学上可接受的盐，和与之联合的药学上可接受的载体。

7.权利要求6中所要求保护的药物组合物，还包含额外的药学活性成分。

8.如权利要求1或5中所定义的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防指示给予TNFα功能的调节剂的障碍。

9.如权利要求1或5中所定义的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗炎性或自身免疫障碍，神经或神经变性障碍，疼痛或伤害感受障碍，心血管障碍，代谢性障碍，眼部障碍，或肿瘤学障碍。