CN113214904A - 一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，包括超临界CO2萃取法和乙醇提取法，超临界CO2萃取法的二氧化碳流量为5～40L/h，萃取温度30～50℃，萃取压力10～30Mpa，萃取时间60～120min，萃取率为3.5％～6.0％；乙醇提取法的回流提取次数为1～5次，回流提取温度为40～120℃，每次回流提取时间为30～80min，萃取率为2.0％～6.0％。本发明制备的植物精油在体外能够显著抑制酪氨酸酶。经超临界CO2萃取得到的植物精油可起到抑制酪氨酸酶的作用。采用灵芝孢子油、川穹油、玫瑰花油、肉桂精油、厚朴油、艾叶精油、康乃馨油、绿茶籽精油和月桂精油对酪氨酸酶的抑制效果较好。

Description

一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法
技术领域
本发明涉及植物精油技术领域，尤其是一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法。
背景技术
酪氨酸酶又叫做多酚氧化酶，是一种多功能含铜氧化还原酶，普遍存在于哺乳动物、植物、微生物和昆虫中。在酪氨酸酶的作用下，酪氨酸转变成L-多巴胺(3，4-二羟基苯丙氨酸)，多巴胺再转变为多巴醌，其再通过一连串反应后，不断累积聚合为黑色素。尽管人类皮肤黑色素的出现大部分是因为人体为防御紫外线做出的反应措施，但是黑色素的过度积累会带来一系列皮肤问题，如：黄褐斑、晒斑和黑痣等等。黑色素生成量和受酪氨酸酶的表达和活性是成正比的，酪氨酸酶活性越低，皮肤中黑色素形成的量就越少，反之则越多。因此，酪氨酸酶抑制剂在医药和化妆品方面的应用越来越受欢迎，在医药方面能治疗色素沉着障碍，在化妆品方面能美容祛斑。
酪氨酸酶抑制剂有着非常广泛的来源，包括天然产物和有机合成化合物，其中有机化合物占主要部分。目前在医药和化妆品行业研究最多的酪氨酸酶抑制剂是苯二酚、氢醌、曲酸等等，但这些物质有一定的弊端，如对人体具有一定的刺激性和细胞毒性，容易造成皮肤损害，有的甚至有致癌风险。这些弊端促使我们从天然来源寻找更安全、更有效和稳定的酪氨酸酶抑制剂。因此，植物美白剂的开发成了美白活性剂研究的一个重要方向。
中国专利文献，CN201611173195.5公开了一种玫瑰柠檬美白养颜精油，由玫瑰油和柠檬油组成。所述精油可应用于凝胶、洁面乳、面霜、乳液等各种剂型的皮肤外用化妆品。但玫瑰油和柠檬油的酪氨酸酶抑制活性并不强。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，该类植物精油可有效抑制酪氨酸酶，具有美白功效的作用。
本发明的技术方案为：一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，所述的方法包括超临界CO2萃取法和乙醇提取法。
作为优选的，所述的超临界CO2萃取法包括以下步骤：
S11)、称取干燥的植物粉末100g于超临界萃取釜中，将CO2在高压下注入萃取釜；并用二氧化碳流量计测量CO2用量，而且在超临界萃取过程中，通过调节阀控制提取温度和压力；
S21)、萃取完成后，将萃取釜减压并收集容器中的挥发油，溶剂则用旋转真空蒸发器去除，而提取物则用氮气处理以除去残留溶剂；
S31)、对收集的挥发油进行称重，并计算萃取率；
作为优选的，步骤S11)中，采用的超临界CO2提取植物精油的方法为植物精油的超临界萃取；
作为优选的，步骤S11)中，所述植物为灵芝孢子、厚朴、川芎、玫瑰花和肉桂中的一种或多种的组合。
作为优选的，步骤S11)中，所述的二氧化碳流量为5～40L/h，萃取温度30～50℃，萃取压力10～30Mpa，萃取时间60～120min。
更加优选地，步骤S11)中，所述二氧化碳流量为25L/h，萃取温度为40℃，萃取压力为20MPa，萃取时间为90min。
作为优选的，步骤S21)中，所述旋转真空蒸发仪器的转速为10～100rpm/min，真空度为0.1～1MPa，蒸发温度为35～55℃，蒸馏时间为20～60min，氮气的流量为15～25L/h。
更加优选地，步骤S21)中，所述旋转真空蒸发仪器的转速为60rpm/min，真空度为0.2MPa，蒸发温度为40℃，蒸馏时间为40min，氮气的流量为20L/h。
作为优选的，步骤S31)中，所述植物精油的萃取率为萃取率为3.5％～6.0％，萃取率的计算公式为：精油萃取率(％)＝(提取的精油质量/植物粉末的质量)×100％。
作为优选的，所述的乙醇提取法包括以下步骤：
S201)、称取干燥的植物粉末100g于提取器中，加入溶剂，回流提取；
S202)、过滤完成后，合并提取液，减压浓缩得到浓缩液，即为相应的植物精油；
S203)、对收集的挥发油进行称重，并计算萃取率。
作为优选的，步骤S201)中，所述的乙醇提取法提取植物精油的方法，所述的溶剂为乙醇。
作为优选的，步骤S201)中，所述植物为艾叶、康乃馨、绿茶籽和月桂。
作为优选的，步骤S201)中，回流提取次数为1～5次，回流提取的温度为40～120℃，每次回流提取时间为30～80min。
更加优选地，步骤S201)中，所述流提取次数为3次，回流提取的温度为80℃，每次回流提取时间为60min。
作为优选的，步骤S202)中，所述旋转真空蒸发仪器的转速为10～100rpm/min，真空度为0.1-1MPa，蒸发温度为35～55℃，蒸馏时间为20～60min。
更加优选地，步骤S202)中，所述旋转真空蒸发仪器的转速为60rpm/min，真空度为0.2MPa，蒸发温度为40℃，蒸馏时间为40min。
作为优选的，步骤S203)中，所述植物精油的萃取率为萃取率为2.0％～6.0％。
本发明的有益效果为：
1、本发明采用超临界CO2萃取法和乙醇提取法制备植物精油，具有操作简便和提取率较高的优点；
2、本发明制备的精油可有效抑制酪氨酸酶活性；
3、本发明制备的精油组合拓宽了精油的使用范围，且制备工艺较简单，操作方便，适于工业化生产。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明：
实施例1
本实施例提供一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，所述的方法采用超临界CO2萃取法，包括以下步骤：
S11)、称取干燥的植物粉末100g于超临界萃取釜中，将CO2在高压下注入萃取釜；并用二氧化碳流量计测量CO2用量，而且在超临界萃取过程中，为保证萃取率为最大值，通过调节阀控制提取温度和压力。其中，二氧化碳流量为5～40L/h，萃取温度30～50℃，萃取压力10～30Mpa，萃取时间60～120min；
S21)、萃取完成后，调节旋转真空蒸发仪器的转速为60rpm/min，真空度为0.2MPa，蒸发温度为42℃，蒸馏时间为40min，将溶剂去除；并将萃取釜减压，然后收集容器中的挥发油，用氮气(流量为20L/h)处理以除去残留溶剂；
S31)、对收集的挥发油进行称重，并计算萃取率，此时提取得到的植物精油的萃取率为3.5～6.0％。
实施例2
本实施例提供一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，所述的方法采用乙醇提取法，包括以下步骤：
S201)、称取干燥的植物粉末100g于提取器中，加入乙醇，回流提取后，过滤，合并提取液，减压浓缩得到浓缩液。其中回流提取次数为1～5次，回流提取的温度为40～120℃，每次回流提取时间为30～80min；
S202)、萃取完成后，调节旋转真空蒸发仪器的转速为60rpm/min，真空度为0.2MPa，蒸发温度为40℃，蒸馏时间为40min；
S203)、对收集的挥发油进行称重，并计算萃取率，此时提取得到的植物精油的萃取率为2.0～6.0％。
实施例3
精油组合物体外抑制酪氨酸酶活性实验
首先，用0.05mol/L的磷酸缓冲液配制酪氨酸酶溶液，先向96孔板中每孔加入0.05mol/L的磷酸盐缓冲溶液，加入的量为85μL，加入PBS溶液的目的为反应营造一个适宜的环境，然后加入酪氨酸酶溶液10μL，紧接着加入精油样品溶液5μL(根据精油的溶解程度来选择用DMSO还是丙酮溶解)，阴性对照组用5μLDMSO或丙酮溶液代替样品溶液，每孔重复4次。然后将96孔板迅速放进去震荡30s后，在37℃下孵育9min30s。
接着，孵育完成后将板取出，用排枪加入100μL浓度为2mmol/L的L-DOPA溶液引发反应，并将板迅速放回到酶标仪中，分别测量0s和60s时的吸光度值，中间震荡反应60s。
最后，由抑制率的计算公式：
Figure BDA0003120097780000061
计算各个样品的抑制率，通过用origin2017对抑制剂浓度和抑制效果的关系进行线性拟合，从曲线计算得到不同种植物精油对酪氨酸酶的半抑制浓度IC50值。
其中，A1、A2分别是阴性对照60s、0s的OD值；B1、B2分别是样品组60s、0s的OD值。
本实验首先对相同浓度(25μg/mL)的植物精油进行抑制酪氨酸酶活性测试，结果见表1。
表1精油对酪氨酸酶活性的影响
Figure BDA0003120097780000062
然后对9种精油的IC50进行测试，结果见表2。
表2精油的IC50
Figure BDA0003120097780000063
表1和表2可以看出植物精油在体外能够显著抑制酪氨酸酶。因此，数据表明经超临界CO2萃取得到的植物精油可起到抑制酪氨酸酶的作用。综上所述，本发明提供的采用灵芝孢子油、川穹油、玫瑰花油、肉桂精油、厚朴油、艾叶精油、康乃馨油、绿茶籽精油和月桂精油对酪氨酸酶的抑制效果较好。
上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理和最佳实施例，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (10)

1.一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于，所述的方法包括超临界CO2萃取法和乙醇提取法，其中，
所述的超临界CO2萃取法的二氧化碳流量为5～40L/h，萃取温度30～50℃，萃取压力10～30Mpa，萃取时间60～120min，萃取率为3.5％～6.0％；
乙醇提取法的回流提取次数为1～5次，回流提取的温度为40～120℃，每次回流提取时间为30～80min，萃取率为2.0％～6.0％。
2.根据权利要求1所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：所述的超临界CO2萃取法包括以下步骤：
S11)、称取干燥的植物粉末100g于超临界萃取釜中，将CO2在高压下注入萃取釜；并用二氧化碳流量计测量CO2用量，而且在超临界萃取过程中，通过调节阀控制提取温度和压力；
S21)、萃取完成后，将萃取釜减压并收集容器中的挥发油，溶剂则用旋转真空蒸发器去除，而提取物则用氮气处理以除去残留溶剂；
S31)、对收集的挥发油进行称重，并计算萃取率。
3.根据权利要求2所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：步骤S11)中，所述植物为灵芝孢子、厚朴、川芎、玫瑰花和肉桂中的一种或多种的组合。
4.根据权利要求2所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：步骤S11)中，所述二氧化碳流量为25L/h，萃取温度为40℃，萃取压力为20MPa，萃取时间为90min。
5.根据权利要求2所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：步骤S21)中，所述旋转真空蒸发仪器的转速为10～100rpm/min，真空度为0.1～1MPa，蒸发温度为35～55℃，蒸馏时间为20～60min，氮气的流量为15～25L/h。
6.根据权利要求2所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：步骤S21)中，所述旋转真空蒸发仪器的转速为60rpm/min，真空度为0.2MPa，蒸发温度为40℃，蒸馏时间为40min，氮气的流量为20L/h。
7.根据权利要求1所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：所述的乙醇提取法包括以下步骤：
S201)、称取干燥的植物粉末100g于提取器中，加入溶剂，回流提取；
S202)、过滤完成后，合并提取液，减压浓缩得到浓缩液，即为相应的植物精油；
S203)、对收集的挥发油进行称重，并计算萃取率。
8.根据权利要求7所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：步骤S201)中，所述的溶剂为乙醇，所述植物为艾叶、康乃馨、绿茶籽和月桂。
9.根据权利要求7所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：步骤S201)中，所述流提取次数为3次，回流提取的温度为80℃，每次回流提取时间为60min。
10.根据权利要求7所述的一种具有抑制酪氨酸酶活性的植物精油的制备方法，其特征在于：所述旋转真空蒸发仪器的转速为10～100rpm/min，真空度为0.1-1MPa，蒸发温度为35～55℃，蒸馏时间为20～60min。
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