CN113194991A - 针对c-kit的人源化抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了特异性结合c‑Kit的抗体。本发明还提供了消融内源性HSPC的方法，其包括向需要消融的受试者施用上述抗体的有效方案。本发明还提供了治疗表达c‑Kit的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用抗体的有效方案。本发明还提供了药物组合物，其包含c‑Kit抗体和药学上可接受的载体。

Description

针对C-KIT的人源化抗体
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背景技术
c-Kit(CD117)是一种III型受体酪氨酸激酶，其与干细胞因子(SCF)结合，干细胞因子是导致某些类型细胞生长的物质，也称为“钢因子”或“c-Kit配体”。当这种受体与干细胞因子结合时，其形成二聚体，从而激活其固有的酪氨酸激酶活性，进而磷酸化并激活在细胞中传播信号的信号转导分子。C-Kit是用于鉴定骨髓中某些类型的HSPC的细胞表面标志物。造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)和普通骨髓祖细胞(CMP)表达高水平的c-Kit。已经提出在干细胞替代疗法中可以使用抗c-Kit抗体以消融内源性细胞(WO2016033201、WO2008067115)。
发明概述
本发明提供了特异性结合人c-Kit的抗体，其包含成熟重链可变区和成熟轻链可变区，除了存在1、2或3个CDR残基取代以外，所述成熟重链可变区包含分别为SEQ ID NO：2-4的由Kabat定义的CDR H1、H2和H3，所述成熟轻链可变区包含分别为SEQ ID NO：6-8的由Kabat定义的CDR L1、L2和L3，所述取代选自重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。
任选地，除了存在重链位置64处的K至Q和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDR H1、H2和H3分别为SEQ ID NO：2-4，由Kabat定义的CDR L1、L2和L3分别为SEQ ID NO：6-8。
任选地，除了存在重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDR H1、H2和H3分别为SEQ ID NO：2-4，由Kabat定义的CDRL1、L2和L3分别为SEQ ID NO：6-8，。
任选地，成熟重链可变区与SEQ ID NO：13、17或21(AH2、AH3或AH4)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，成熟轻链可变区与SEQ ID NO：53(NL2)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，条件是与所示SEQ ID NO的任何变化在CDR之外。
任选地，通过Kabat编号的重链位置1是E。任选地，成熟轻链可变区的以下位置被如下氨基酸占据：位置9被L占据，位置12被P占据，位置14被T占据，位置15被P占据，位置18被P占据，位置20被S占据，位置22被S占据，位置37被L占据，位置43被S占据，位置45被Q占据，位置74被K占据，位置77被R占据，位置78被V占据，位置79被E占据，位置84被G占据。任选地，除了位置1可以是E以外，成熟重链可变区具有选自SEQ ID NO：13、17或21的序列，并且成熟轻链可变区具有SEQ ID NO：53的序列。任选地，成熟重链可变区与重链恒定区连接，并且成熟轻链可变区与成熟轻链恒定区连接。任选地，重链恒定区是人IgG1。任选地，抗体相对于AMG191具有增强的与人c-Kit的结合。任选地，抗体相对于AMG191-IgG1具有增强的ADCP。任选地，抗体相对于AMG191-IgG1具有增强的ADCC。
本发明还提供了药物组合物，其包含如上所述的抗体和药学上可接受的载体。
本发明还提供了消融内源性HSPC的方法，其包括向需要消融的受试者施用如上所述的抗体的有效方案。
本发明还提供了治疗表达c-Kit的癌症的方法，其包括向患有所述癌症的受试者施用如上所述的抗体的有效方案。
定义
单克隆抗体或其他生物实体通常以分离的形式提供。这意味着抗体或其他生物实体相对于由其生产或纯化引起的干扰蛋白和其他污染物，通常具有至少50％w/w的纯度，但不排除单克隆抗体与过量的药学上可接受的载体或旨在促进其使用的其他媒介物组合的可能性。有时，单克隆抗体相对于来自生产或纯化的干扰蛋白和污染物的纯度为至少60％、70％、80％、90％、95％或99％w/w。通常，分离的单克隆抗体或其他生物实体是其纯化后剩余的主要大分子物质。
特异性结合是在数量上可检测地更高于并且可区别于发生在至少一个不相关靶标上的非特异性结合。特异性结合可以是在特定官能团之间或特定空间配合(例如，锁和钥匙类型)之间形成键的结果，而非特异性结合通常是范德华力的结果。然而，特异性结合不一定意味着抗体结合一个且仅一个靶标。本发明的抗体通常以至少108、109、1010、1011或1012M-1的亲和力特异性结合c-Kit。
基本的抗体结构单元是亚基的四聚体。每个四聚体包括多肽链的两个相同配对，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括约100至110或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。该可变区最初被表达为与可裂解的信号肽连接。没有信号肽的可变区有时被称为成熟可变区。因此，例如，轻链成熟可变区是指没有轻链信号肽的轻链可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应物功能的恒定区。
轻链分为κ或λ。重链分为γ、μ、α、δ或ε，并且将抗体的同种型分别定义为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在轻链和重链中，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“J”区相连，其中重链还包括约10个或更多个氨基酸的“D”区。通常参见，Fundamental Immunology，Paul，W.，ed.，2nd ed.Raven Press，N.Y.,1989,Ch.7(通过引用全文并入用于所有目的)。
免疫球蛋白轻链或重链可变区(在本文中分别也称为“轻链可变结构域”(“VL结构域”)或“重链可变结构域”(“VH结构域”))由被三个“互补决定区”或“CDR”中断的“框架”区组成。框架区用于排列CDR以与抗原表位特异性结合。CDR包括主要负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。从氨基末端到羧基末端，VL和VH结构域均包含以下框架(FR)区和CDR区：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。VL结构域的CDR 1、2和3在本文中也分别称为CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；VH结构域的CDR 1、2和3在本文中也分别称为CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。
氨基酸在每个VL和VH结构域的分配是根据CDR的任何常规定义。常规定义包括Kabat定义(Kabat，Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD，1987和1991)，Chothia定义(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917,1987；Chothia et al.,Nature342:878-883,1989)；ChothiaKabat CDR的复合，其中CDR-H1是Chothia和Kabat CDR的复合；牛津分子的抗体建模软件所使用的AbM定义；以及Martin等人的联系定义(world wide web bioinfo.org.uk/abs)。Kabat提供了广泛使用的编号惯例(Kabat编号)，其中不同重链之间或不同轻链之间的相应残基分配了相同的编号。除非另有说明，否则抗体可变区内的位置编号是Kabat编号。当通过某一定义的CDR(例如Kabat)提及抗体包含CDR时，该定义指定了抗体中存在的CDR残基(Kabat CDR)的最小数量。不排除落入另一个常规CDR定义内但在指定定义外的其他残基也存在。例如，包含由Kabat定义的CDR的抗体包括其他可能性，即其中CDR包含Kabat CDR残基而没有其他CDR残基的抗体，以及其中CDR H1是复合Chothia-Kabat CDR H1并且其他CDR包含Kabat CDR残基且无基于其他定义的额外CDR残基的抗体。
术语“抗体”包括完整的抗体及其结合片段。通常，片段与衍生出其的完整抗体竞争与靶标的特异性结合，包括分离的重链、轻链Fab、Fab′、F(ab′)2、F(ab)c、Dab、纳米抗体和Fv。片段可以通过重组DNA技术产生，或通过酶促或化学方法分离完整的免疫球蛋白而产生。术语“抗体”还包括双特异性抗体和/或人源化抗体。双特异性或双功能抗体是具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂合抗体(参见例如，Songsivilai andLachmann，Clin.Exp.Immunol.，79:315-321(1990)；Kostelny et al.，J.Immunol.,148:1547-53(1992))。
示例性的双特异性抗体也可以是：(1)双可变域抗体(DVD-lg)，其中每条轻链和重链通过短肽连接包含串联的两个可变结构域(Wu et al.,Generation andCharacterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin(DVD-IgTM)Molecule,In:Antibody Engineering，Springer Berlin Heidelberg(2010))；(2)Tandab，其是两个单链双抗体的融合物，从而产生四价双特异性抗体，该四价双特异性抗体对每个靶抗原具有两个结合位点；(3)柔性抗体(flexibody)，其是scFv与双抗体的组合，从而产生多价分子；(4)基于蛋白激酶A中“二聚化和对接结构域”的所谓的“对接和锁定”分子，其在应用于Fab时，可以产生三价双特异性结合蛋白，该蛋白由两个连接至不同Fab片段的相同Fab片段组成；或(5)所谓的蝎型分子(Scorpion molecule)，包括例如与人Fc区的两个末端融合的两个scFv。可用于制备双特异性抗体的平台的实例包括BiTE(Micromet)、DART(MacroGenics)、Fcab和Mab2(F-star)、Fc工程化IgG1(Xencor)或DuoBody(基于Fab的臂交换，Genmab)。
术语“表位”是指抗原上抗体结合的位点。表位可以由连续氨基酸或由通过一种或多种蛋白质的三级折叠而并列的不连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位(也称为线性表位)通常在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常在用变性溶剂处理时丢失。表位通常以独特的空间构象包含至少3个，更通常至少5或8至10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括例如X射线晶体学和二维核磁共振。参见例如，Epitope Mapping Protocols,in Methods in Molecular Biology,Vol.66,GlennE.Morris，Ed.(1996)。
抗体之间的竞争通过其中待测抗体抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合的测定法来确定(参见例如，Junghans et al.,Cancer Res.50:1495,1990)。如果如竞争性结合测定中测得的过量测试抗体(例如至少2x、5x、10x、20x或100x)将参考抗体的结合抑制至少50％，则测试抗体与参考抗体竞争。一些测试抗体将参考抗体的结合抑制至少75％、90％或99％。通过竞争测定法鉴定的抗体(竞争性抗体)包括与参考抗体结合相同表位的抗体，以及与参考抗体结合的表位足够接近的邻近表位结合以发生空间位阻的抗体。
术语“药学上可接受的”是指载体、稀释剂、赋形剂或助剂与制剂的其他成分兼容并且对其接受者基本上无害，和/或此类载体、稀释剂、赋形剂或助剂经FDA批准或可批准用于包含在对人肠胃外给药的药物组合物中。
术语“受试者”包括接受预防或治疗性处理的人和其他哺乳动物受试者。
为了将氨基酸取代分类为保守或非保守，将氨基酸分为以下几组：第一组(疏水性侧链)：met、ala、val、leu、ile；第二组(中性亲水性侧链)：cys、ser、thr；第三组(酸性侧链)：asp、glu；第四组(碱性侧链)：asn、gln、his、lys、arg；第五组(影响链取向的残基)：gly、pro；和第六组(芳香族侧链)：trp、tyr、phe。保守取代涉及相同类别氨基酸之间的取代。非保守取代涉及将这些类别之一的成员替换为另一类别的成员。
序列同一性百分比由通过Kabat编号惯例最大对齐的抗体序列确定。对齐后，如果将目标抗体区域(例如，重链或轻链的整个成熟可变区)与参考抗体的相同区域进行比较，则目标抗体区域和参考抗体区域之间的序列同一性百分比为在目标抗体区域和参考抗体区域中相同氨基酸占据的位置的数量除以两个区域的对齐位置的总数(未计算缺口)，乘以100即可转换成百分比。
“包含”或“包括”一个或多个所列举的要素的组合物或方法可以包括未具体列举的其他要素。例如，“包含”或“包括”抗体的组合物可以单独或与其他成分组合包含抗体。
值的范围的指定包括该范围内或限定该范围的所有整数，以及由该范围内的整数所限定的所有子范围。
除非从上下文中另外明显看出，否则术语“约”涵盖非实质变化，例如在所述值的标准误差测量值(例如SEM)范围内的值。
统计学显著性是指p＜0.05。
人源化抗体是基因工程化抗体，其中来自非人“供体”抗体的CDR被嫁接到人“受体”抗体序列中(参见例如，Queen,US 5,530,101和5,585,089；Winter，US 5,225,539；Carter,US 6,407,213；Adair,US 5,859,205；和Foote,US6,881,557)。受体抗体序列可以是例如成熟的人抗体序列、此类序列的复合物、人抗体序列的共有序列或种系区域序列。因此，人源化抗体是具有完全或基本上来自供体抗体的CDR以及完全或基本上来自人抗体序列的可变区框架序列和恒定区(如果存在的话)的抗体。当各个CDR之间至少85％、90％、95％或100％的相应残基(如Kabat所定义)相同时，人源化抗体中的CDR基本上来自非人抗体中的相应CDR。当至少85％、90％、95％或100％的由Kabat定义的相应残基与人类受体序列相同时，抗体链的可变区框架序列或抗体链的恒定区分别基本上来自人可变区框架序列或人恒定区。
附图简要说明
图1A和1B显示了由保藏为HB-10716的杂交瘤产生的小鼠抗c-Kit抗体的成熟重链和轻链可变区。
图2A和2B显示了与小鼠和人受体序列相比，本发明的五个人源化重链成熟可变区以及两个人源化轻链成熟可变区的成熟重链和轻链可变区。人源化序列的可变区框架与AMG191的可变区框架相同，但CDR不同。
图2C比较了AMG191与其具有CDR取代的变体的结合。所有CDR取代的变体均显示出增强的结合。
图2D比较了AMG191与具有其他CDR取代的变体的结合。这些变体显示出减少的结合。
图3A和3B提供了与AMG191、小鼠序列和人受体序列相比，六个人源化重链成熟可变区和三个人源化轻链成熟可变区的序列。在这些人源化链中，可变区框架与AMG191抗体中的框架不同。一些人源化链的CDR也不同。
图3C比较了AMG191与具有相同的CDR但不同的可变区框架(由使用不同的人受体序列而引起)的人源化抗体的结合。具有新框架(NF)的抗体具有更高的亲和力。
图3D比较了AMG191与基于新框架并且相对于AMG191还具有CDR取代的另外的人源化变体的结合。所有三种变体抗体均具有较高的亲和力。
图4比较了AMG191与三种人源化抗体的结合，该三种人源化抗体与AMG191的区别在于存在CDR取代和不同的轻链可变区框架(重链可变区框架相同)。所有三种变体抗体均具有较高的亲和力。
图5比较了AMG191、具有野生型IgG1恒定区的AMG191变体、本发明的五种新人源化抗体的吞噬活性。新的变体，特别是HF12和NF112，显示出吞噬作用增强，尤其是在较低的测试浓度下。
图6比较了AMG191与两种新的人源化变体HF112和HF12以及同种型匹配的无关对照的ADCC活性。HF112和HF12具有更强的ADCC活性。
图7显示了与AMG191、AMG191-人IgG1和阴性对照相比，HF12和HF112对SCF诱导的HSPC增殖的抑制。
图8比较了与阳性对照A23187和IgE+抗IgE相比，抗c-Kit抗体的肥大细胞脱粒。
序列简要说明
SEQ ID NO：1-4是HB-10716的抗体的成熟重链可变区和CDR-H1、H2和H3。
SEQ ID NO：5-8是HB-10716的抗体的成熟轻链可变区和CDR-L1、L2和L3。
SEQ ID NO：9-12是人源化重链AH1的成熟重链可变区和CDR-H1、H2和H3。
SEQ ID NO：13-16是人源化重链AH2的成熟重链可变区和CDR-H1、H2和H3。
SEQ ID NO：17-20是人源化重链AH3的成熟重链可变区和CDR-H1、H2和H3。
SEQ ID NO：21-24是人源化重链AH4的成熟重链可变区和CDR-H1、H2和H3。
SEQ ID NO：25-28是人源化重链AH5的成熟重链可变区和CDR-H1、H2和H3。
SEQ ID NO：29是AMG191的成熟重链可变区。
SEQ ID NO：30是IGHV1-46*01的可变区序列。
SEQ ID NO：31-34是人源化轻链可变区AL1的成熟轻链可变区和CDR-L1、L2和L3。
SEQ ID NO：35-38是人源化轻链AL2的成熟轻链可变区和CDR-L1、L2和L3。
SEQ ID NO：39是AMG191的成熟轻链可变区。
SEQ ID NO：40-43是IGKV4-1*01的可变区序列和三个CDR-L1、L2和L3。
SEQ ID NO：44-50是人源化重链NH、NH1、NH2、NH3、NH4和NH5以及IGHV3-23*01的成熟重链可变区。
SEQ ID NO：51-54是人源化轻链NL、NL1、NL2和IGKV2-28*01的成熟轻链可变区。
发明详述
I.一般内容
本发明提供了特异性结合人c-Kit的抗体(Swiss Prot P10721)。抗体代表由保藏为HB-10716的杂交瘤产生的先前公开的小鼠抗c-Kit抗体的人源化形式，其分别具有SEQID NO：1和5的成熟重链和轻链可变区。该小鼠抗体先前已被人源化为AMG191(参见US7915391)。AMG191的Kabat CDR与衍生出其的小鼠抗体相同。AMG191可从Creative Biolabs商购获得。
本发明的抗体具有基本上来自保藏为HB-10716的小鼠抗体的CDR，该CDR嫁接到人受体序列中，任选地在某些位置具有取代，如下文进一步描述。
一些抗体包含含有SEQ ID NO：1的CDR H1、H2和H3的成熟重可变区，和含有SEQ IDNO：5的CDR L1、L2和L3的成熟轻链可变区，条件是存在至少一个CDR残基取代。CDR H1、H2和H3优选地分别包含SEQ ID NO：2-4，并且CDR L1、L2和L3优选地包含SEQ ID NO：6-8(即，如Kabat所定义)，条件是存在至少一个CDR取代。CDR取代优选地选自重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。可以存在这些取代中的一个、两个或全部三个。一些抗体包括重链位置64和轻链位置30处的取代。一些抗体包括重链位置60、重链位置64和轻链位置30处的取代。一些抗体包括重链位置60和轻链位置30处的取代。一些抗体包括重链位置60和重链位置64处的取代。一些抗体除了单独或以所列组合在重链位置60和64以及轻链位置30处的取代之外，没有Kabat CDR的取代。如果存在Kabat CDR的任何其他取代，则优选存在不超过1、2、3、4或5个这样的其他取代。
本发明的一些抗体与AMG191的区别在于相对于AMG191中存在的残基存在至少一个CDR残基的取代。优选的取代为重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。可以存在这些取代中的一个、两个或全部三个。一些抗体包括重链位置64和轻链位置30处的取代。一些抗体包括重链位置60、重链位置64和轻链位置30处的取代。一些抗体包括重链位置60和轻链位置30处的取代。一些抗体包括重链位置60和重链位置64处的取代。一些抗体除了单独或以所列组合在重链位置60和64以及轻链位置30处的取代之外，相对于AMG191的Kabat CDR没有取代。如果存在Kabat CDR的任何其他取代，则优选存在不超过1、2、3、4或5个这样的其他取代。
重链位置60和64以及轻链位置30处的CDR取代单独地和组合地可以赋予对人c-Kit的增加的结合亲和力。取代还代表对于某位置用人种系残基替换小鼠残基因此其他部分相同，这增加了人源化抗体的人属性。下表1比较了占据保藏为HB-10716的小鼠抗体、AMG191和三种本发明人源化抗体中重链位置60和64以及轻链位置30的残基：
表1
Figure BDA0003082419060000101
另外地或替代地，本发明的一些人源化抗体与AMG191的人源化抗体的区别在于存在不同的可变区框架序列。通过将小鼠CDR序列分别嫁接到IGHV1-46*01和IGKV4-1*01的重链和轻链的种系框架中而衍生出AMG191。本公开提供了将CDR嫁接到IGH3-23*01的重链可变区框架和IGKV2-28*01的轻链可变区框架中。已经发现这些框架比AMG191的框架赋予了更高的结合亲和力。本发明的一些优选的抗体包括基于IGHV1-46*01的重链可变区框架，该框架并入了与AMG191的重链可变区相同的回复突变，并且包括基于IGKV2-28*01的轻链可变区框架。这种框架组合联合了相对于AMG191亲和力提高的优点以及相对于组合了IGH3-23*01的重链可变区框架和IGKV2-28*01的轻链可变区框架的抗体表达改善的优点。
因此，本发明的一些优选的抗体具有成熟重链可变区和成熟轻链可变区，该成熟重链可变区具有对应于AH2、AH3和AH4的SEQ ID NO：13、17或21的任何指定链的序列，该成熟轻链可变区具有对应于NL2的SEQ ID NO：53的序列。重链可变区序列彼此不同之处在于，仅在重链位置60处，仅在重链位置64处、或在重链位置60和64处具有CDR取代，所有这些通过Kabat编号。除CDR取代之外，重链可变区序列与AMG191的成熟重链可变区相同。SEQ IDNO：13、17和21的重链序列包括Kabat位置71(R至A)、73(T至K)和78(V至A)处的可变区框架取代(即，人受体残基至小鼠供体)。存在位置69处M至I的附加取代。
SEQ ID NO：53的成熟轻链可变区具有位置30处的CDR取代。SEQ ID NO：53的成熟轻链可变区与AMG191的成熟轻链可变区的区别还在于如下可变区框架中的几个位置，这归因于受体选择的不同：
位置9被L占据
位置12被P占据
位置14被T占据
位置15被P占据
位置18被P占据
位置20被S占据
位置22被S占据
位置37被L占据
位置43被S占据
位置45被Q占据
位置74被K占据
位置77被R占据
位置78被V占据
位置79被E占据
位置84被G占据。
SEQ ID NO：53的成熟轻链可变区不包含从人种系至小鼠残基的可变区框架的任何回复突变。
本发明还提供了具有代表示例性序列变体的重链和轻链可变区的抗体。例如，本发明包括具有成熟重链可变区和成熟轻链可变区的抗体，该成熟重链可变区与SEQ ID NO：13、17或21的任一个具有至少85％、90％、95％、98％或99％的同一性，该成熟轻链可变区与SEQ ID NO：53具有至少85％、90％、95％、98％或99％的序列同一性。指定序列的任何变化优选在Kabat定义的CDR之外。变化还优选地不在指定序列中进行回复突变的可变区框架位置处(通过Kabat编号的位置71、73和78)。在一些抗体中，不在Kabat编号的重链位置69处进行任何取代。在一些抗体中，除了SEQ ID NO：53不同于AMG191的成熟轻链可变区的那些以外，在可变区框架位置处存在变化。在其他抗体中，变化存在于SEQ ID NO：53不同于AMG191的成熟轻链可变区的可变区框架位置处，任选地与可变区框架中的其他位置组合。在一些抗体中，保留了SEQ ID NO：53不同于AMG191的成熟轻链可变区的可变区框架残基中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个。在一些抗体中，变化通过保守取代的方式进行。在某些抗体中，重链位置1处的Q可以被E取代，从而降低焦谷氨酸转化的可能性(Liu,etal.,2011,J.Biol.Chem.,286:11211–11217)。谷氨酸(E)向焦谷氨酸(pE)的转化比从谷氨酰胺(Q)转化为焦谷氨酸更慢。由于谷氨酰胺向pE转化过程中失去了伯胺，抗体变得更加酸性。不完全转化在抗体中产生异质性，这可以使用基于电荷的分析方法观察为多个峰。异质性差异可能表明缺乏过程控制。
可以使用实施例中提供的测定法测试抗体对人c-Kit的结合亲和力、ADCP、ADCC和对SCF诱导的HSPC增殖的抑制。也可以在例如WO2016033201中描述的动物模型中筛选抗体。使用此类测定法测量了本发明优选的抗体相对于AMG191或其人IgG1形式具有增强的与人c-Kit的结合亲和力、增强的ADCP和/或增强的ADCC和/或增强的对SCF诱导的HSPC增殖的抑制。优选的抗体还抑制人c-Kit与其配体人干细胞因子的结合。
本发明还提供了与AMG191或其人IgG1形式相比，增强与人c-Kit的结合和/或针对表达人c-Kit的细胞的ADCP和/或ADCC的手段，其中增强如本申请实施例中那样测量。示例性的手段是具有SEQ ID NO：13、17或21中任一个的成熟重链可变区和SEQ ID NO：53的成熟轻链可变区的抗体，该抗体具有人IgG1重链恒定区和人κ轻链恒定区。CDR内重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q和/或在轻链位置30处的N至Q的相对于AMG191的取代贡献了示例性手段的增强性质。可以将此类手段与药物活性载体一起并入药物组合物中。
抗体可以进行或可以不进行翻译后修饰，例如糖基化，这取决于表达条件或恒定区的选择等因素。
II.恒定区的选择
上述的重链和轻链可变区可以与人恒定区的至少一部分连接。恒定区的选择部分取决于是否需要抗体依赖性细胞介导的细胞毒性、抗体依赖性细胞吞噬作用和/或补体依赖性细胞毒性。例如，人同种型IgG1和IgG3具有补体依赖性细胞毒性，而人同种型IgG2和IgG4则没有。人IgG1和IgG3还诱导比人IgG2和IgG4更强的细胞介导的效应物功能。人IgG1对于本发明的抗体是优选的。轻链恒定区可以是λ或κ。
轻链和/或重链的氨基或羧基末端的一个或几个氨基酸，例如重链的C-末端赖氨酸，可以在分子的一部分或全部中缺失或衍生化。可以在恒定区进行取代以减少或增加效应物功能，例如补体介导的细胞毒性或ADCC，或去除糖基化位点(参见例如，Winter etal.，US专利号5,624,821；Tso et al.，US专利号5，834，597；和Lazar et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:4005,2006)，或延长在人中的半衰期(例如参见，Hinton etal.,J.Biol.Chem.279:6213,2004)。示例性的取代包括位置250处的Gln和/或位置428处的Leu(在该段落中，针对恒定区使用EU编号)以增加抗体的半衰期。M252Y/S254T/T256E也增加半衰期，如N434A或S、T250Q和V3089P那样。位置234、235、236和/或237中的任何位置或全部位置处的取代降低了对Fcγ受体(尤其是FcγRI受体)的亲和力(参见例如US 6,624,821)。以下取代中的任一种增强效应物功能：F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L、S298A/E333A/K334A、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L和S298A/E333A/K334A。
人恒定区在不同个体之间显示出同种异型变异和同族同种异形变异，即恒定区在不同个体的一个或多个多态性位置处可以不同。同族同种异型(isoallotype)与同种异型(allotype)的区别在于识别同族同种异型的血清结合一种或多种其他同种型的非多态性区域。
III.重组抗体的表达
人源化抗体通常通过重组表达产生。重组多核苷酸构建体通常包含与抗体链的编码序列可操作地连接的表达控制序列，包括天然相关或异源的表达控制元件，例如启动子。表达控制序列可以是能够转化或转染真核或原核宿主细胞的载体中的启动子***。一旦将载体引入合适的宿主中，就将宿主维持在适合于核苷酸序列的高水平表达以及交叉反应抗体的收集和纯化的条件下。
这些表达载体通常可以作为游离基因或作为宿主染色体DNA的组成部分在宿主生物体中复制。通常，表达载体含有选择标记，例如氨苄青霉素抗性或潮霉素抗性，以允许检测那些被期望DNA序列转化的细胞。
大肠杆菌是可用于表达抗体，特别是抗体片段的原核宿主。微生物，例如酵母，也可用于表达。酵母菌属(Saccharomyces)是具有合适载体的酵母宿主，该载体具有所需的表达控制序列、复制起点、终止序列等。典型的启动子包括3-磷酸甘油酸激酶和其他糖酵解酶。可诱导的酵母启动子包括来自乙醇脱氢酶、异细胞色素C和负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子。
哺乳动物细胞可用于表达编码免疫球蛋白或其片段的核苷酸片段。参见Winnacker,From Genes to Clones,(VCH Publishers，NY,1987)。已经开发了许多能够分泌完整异源蛋白质的合适宿主细胞系，包括CHO细胞系，各种COS细胞系，HeLa细胞，HEK293细胞，L细胞和不产生抗体的骨髓瘤，包括Sp2/0和NS0。细胞可以是非人的。用于这些细胞的表达载体可以包括表达控制序列，例如复制起点、启动子、增强子(Queen et al.,Immunol.Rev.89:49(1986))，以及必要的加工信息位点，例如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。表达控制序列可包括衍生自内源基因、巨细胞病毒、SV40、腺病毒、牛***瘤病毒等的启动子。参见Co et al.,J.Immunol.148:1149(1992)。
或者，可以将抗体编码序列掺入转基因中，以引入转基因动物的基因组中，并随后在转基因动物的乳汁中表达(参见例如，US专利号5,741,957；US专利号5,304,489；和US专利号5,849,992)。合适的转基因包括轻链和/或重链的编码序列，该编码序列与来自乳腺特异性基因例如酪蛋白或β乳球蛋白的启动子和增强子可操作地连接。
可以根据细胞宿主的类型通过一定的方法将含有目的DNA片段的载体转移到宿主细胞中。例如，氯化钙转染通常用于原核细胞，而磷酸钙处理、电穿孔、脂质转染、生物弹射或基于病毒的转染可用于其他细胞宿主。用于转化哺乳动物细胞的其他方法包括使用聚丙烯、原生质体融合、脂质体、电穿孔和显微注射。为了产生转基因动物，可以将转基因显微注射到受精的***中，或者可以将其整合到胚胎干细胞的基因组中，并将这种细胞的核转移到去核的***中。
将编码抗体重链和轻链的载体引入细胞培养物之后，可以在无血清培养基中筛选细胞库的生长生产率和产物质量。然后可以对产量最高的细胞库进行基于FACS的单细胞克隆，以产生单克隆细胞系。可以使用每细胞每天高于50pg或100pg的比生产率，这对应于大于7.5g/L培养物的产物滴度。还可以测试由单细胞克隆产生的抗体的浊度、过滤特性、PAGE、IEF、UV扫描、HP-SEC、碳水化合物-寡糖图谱、质谱和结合测定，例如ELISA或Biacore。然后可以将选定的克隆存放在多个小瓶中，并冷冻保存以备后用。
一旦表达，就可以根据本领域的标准程序纯化抗体，包括蛋白A捕获、HPLC纯化、柱色谱、凝胶电泳等(通常参见，Scopes，Protein Purification(Springer-Verlag，NY，1982))。
可以采用商业化生产抗体的方法，包括密码子优化，启动子选择，转录元件选择，终止子选择，无血清单细胞克隆，细胞储存，使用拷贝数扩增的选择标记，CHO终止子，或改善蛋白滴度(参见例如，US 5,786,464；US6,114,148；US 6,063,598；US 7,569,339；W02004/050884；W02008/012142；W02008/012142；W02005/019442；W02008/107388；W02009/027471；和US5,888,809)。
IV.核酸
本发明进一步提供了编码上述任何重链和轻链的核酸。任选地，此类核酸还编码信号肽，并且可以与连接至恒定区的信号肽一起表达。核酸的编码序列可以与调节序列可操作地连接，以确保编码序列的表达，调节序列例如为启动子、增强子、核糖体结合位点、转录终止信号等。编码重链和轻链的核酸可以分离的形式存在，或者可以克隆到一个或多个载体中。可以通过例如固态合成或重叠寡核苷酸的PCR来合成核酸。编码重链和轻链的核酸可以例如在表达载体内连接成一个连续核酸，或者可以是分开的，例如每个克隆到其自身的表达载体中。
V.缀合抗体
可以将本发明的抗体与细胞毒性或细胞抑制部分缀合以提供细胞毒性的附加机制。
一些此类可以被修饰以充当免疫毒素。参见例如，US专利号5,194，594。例如，蓖麻毒素(一种衍生自植物的细胞毒素)可以通过使用用于抗体的S-乙酰巯基琥珀酸酐和用于蓖麻毒素的琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯的双功能试剂而与抗体偶联。参见Pietersz et al.，Cancer Res.48(16):4469-4476(1998)。偶联导致蓖麻毒素的B链结合活性丧失，同时不损害蓖麻毒素A链的毒性潜能或抗体的活性。类似地，皂草素(saporin，核糖体装配的抑制剂)可以通过化学***的巯基之间的二硫键与抗体偶联。参见Polito etal.，Leukemia 18:1215-1222(2004)。
一些此类抗体可以与放射性同位素连接。放射性同位素的实例包括例如钇90(90Y)、铟(111I n)、131I、99mTc、放射性银111，放射性银199和铋213。放射性同位素与抗体的连接可以用常规的双功能螯合物进行。对于放射性银111和放射性银199连接，可以使用基于硫的接头。参见Hazra et al.,Cell Biophys.24-25:1-7(1994)。银放射性同位素的连接可能涉及用抗坏血酸还原免疫球蛋白。对于例如111In和90Y的放射性同位素，可以使用ibritumomab tiuxetan，并且其将会与这些同位素反应形成111In-ibritumomab tiuxetan和90Y-ibritumomab tiuxetan。参见Witzig,Cancer Chemother.Pharmacol.,48Suppl 1:S91-S95(2001)。
一些此类抗体可以与毒性化学治疗药物例如美登素，格尔德霉素，微管蛋白抑制剂例如微管蛋白结合剂(例如澳瑞他汀)或小沟结合剂例如加利车霉素(calicheamicin)缀合。
VI.治疗应用
本发明的抗体或包含此类抗体的药物组合物可用于治疗各种病症。例如，此类抗体可用于在有需要的受试者中消融内源性造血干细胞和祖细胞(HSPC)。内源性HSPC的消融是干细胞替代疗法的第一步。干细胞替代疗法通常涉及减少或消除某些方面存在缺陷的内源性HSPC，并用替代性HSPC对其进行替换。替代性HSPC可以是自体的、同种异体的或异种的。内源性HSPC可以是由于遗传突变损害功能或表达而存在缺陷(例如镰状细胞性贫血或地中海贫血)，由于血液学癌症而存在缺陷或由于治疗癌症所使用的化学疗法所导致的损伤而存在缺陷。内源性HSPC也可以与器官移植物一起替换，因为内源性HSPC将导致移植物的免疫攻击。
抗c-Kit抗体还可以用于治疗表达c-Kit的癌症。此类癌症包括血液学癌症，例如AML，以及实体瘤，例如肥大细胞癌、睾丸基质癌、胃肠道基质癌、黑素瘤、乳腺癌和肺癌。如通过免疫组织化学测定所确定的，c-Kit的表达优选地高于组织匹配的正常对照细胞的水平。
抗体以有效的方案施用，有效的方案意指达到预期目的例如减少内源性HSPC或表达c-Kit的癌细胞的剂量、施用途径和施用频率。在某些情况下，相对于历史对照或同一患者过去的经历，可以在单个患者中观察到疗效。在其他情况下，相对于未治疗患者的对照群体，可以在已治疗患者的群体中的临床前或临床试验中证明疗效。
示例性剂量为至少0.05mg/kg且至多10mg/kg，例如约0.05至10mg/kg，或0.1至5mg/kg或5至750mg作为固定剂量。剂量取决于患者的状况和对先前治疗(如果有的话)的反应、治疗是预防性的还是治疗性的、以及疾病是急性还是慢性的、以及其他因素。
施用可以是肠胃外、静脉内、经口、皮下、动脉内、颅内、鞘内、腹膜内、局部、鼻内或肌内施用。一些抗体可以通过静脉内或皮下施用进入体循环。静脉内施用可以例如通过在例如30-90分钟的时间段内输注来进行。
抗体可以施用一次或多次。如果是多次，则间隔可以是例如每天、每周、每两周、每月或每季度。
VI.药物组合物和使用方法
用于肠胃外施用的包含本发明抗体的药物组合物可以是无菌的并且基本上等渗的(250-350mOsm/kg水)并且可以在GMP条件下生产。药物组合物可以以单位剂型(即单次施用的剂量)提供。可以使用一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或助剂来配制药物组合物。剂型取决于选择的施用途径。对于注射，可以在水溶液中，例如在生理相容的缓冲液如汉克氏溶液、林格氏溶液或生理盐水或乙酸盐缓冲液中配制抗体(以减少注射部位的不适)。溶液可以包含配制剂，例如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，抗体可以是冻干形式，以在使用前用合适的载体例如无菌无热原的水重构。
方案可以与在所治疗的病症的治疗中有效的另一药剂(例如，用于治疗癌症的化疗剂或生物制剂)组合施用。
治疗后，可以监测治疗对象的状况，以了解对治疗反应的变化(例如，减少内源性HSPC的数量)或减少表达c-Kit的癌细胞的数量。
VII.其他用途
本发明的抗体还可以用于通过免疫测定法，例如ELISA、蛋白质印迹或免疫组织化学来检测c-Kit。此类测试可用于确定癌症是否表达c-Kit，从而使其适于用本发明的方法治疗。抗体还可用于通过亲和层析富集表达c-Kit的HSPC。
实施例
1.材料和方法
抗体V克隆和测序。从ATCC购买了抗人c-kit杂交瘤细胞系(HB-10716)。克隆重链(VH)和轻链(VL)可变区并通过Genscript测序。
抗体人源化和CDR取代。HB-10716的人源化通过将小鼠抗体的CDR残基安装到人种系框架(FR)上来进行。简而言之，通过适当募集相应的CDR残基和一些框架(FR)残基到人IGHV1-46*01或IGHV3-23*01中使小鼠VH人源化。通过适当募集相应的CDR残基和一些框架(FR)残基到人IGKV4-1*01或IGKV2-28*01中使小鼠VL人源化。单独地模拟了小鼠和人FR残基之间的差异，以研究它们对CDR构象的可能影响。为了进一步使抗体人源化并增加人源化抗体的结合亲和力，选择CDR中的残基并将其突变为人种系序列的相应CDR残基。
细胞转染。在FreeStyleTM 293表达培养基(Invitrogen)下培养F293F细胞。根据制造商的说明，使用293fectin转染试剂(Invitrogen)通过共转染编码抗体重链和轻链的表达载体进行瞬时转染。四到五天后，收获转染细胞的上清液并通过ELISA测试抗体分泌。简而言之，将96孔板(Nunc,Roskilde，Denmark)用磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的1ug/ml山羊抗人Fcγ抗体在4℃下包被16小时。在室温下用含0.4％BSA的PBS封闭1小时后，以1/3连续稀释添加分离的上清液，并在室温下孵育1小时。随后将板洗涤3次，并与HRP偶联的山羊抗人κ特异性抗体在室温下孵育1小时。洗涤后，将板用TMB显影。用2MH2SO4终止反应，并在450nM下测量OD。
抗体纯化和表征。将培养上清液施加至蛋白A Sepharose色谱柱(GEHealthcare)。用PBS洗涤柱，然后用洗脱缓冲液(0.1M柠檬酸钠缓冲液，pH3.0)洗脱蛋白。用1M pH 9.0的Tris中和收集的级分。最后，将纯化的样品针对PBS进行透析。通过在还原或非还原条件下在10％凝胶上的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)来分析洗脱的抗体级分的纯度。通过考马斯亮蓝染色使条带可视化。
通过ELISA测量抗原结合活性。将96孔板(Nunc,Roskilde,Denmark)用磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的1ug/ml人c-Kit-Fc融合蛋白在4℃下包被16小时。在室温下用含0.4％BSA的PBS封闭1小时后，以1/3连续稀释添加抗c-Kit抗体，并在室温下孵育1小时。随后将板洗涤3次，并与HRP偶联的山羊抗人κ特异性抗体在室温下孵育1小时。洗涤后，将板用TMB显影。用2M H2SO4终止反应，并在450nM下测量OD。
体外吞噬作用测定。洗涤并计数MHC-1癌细胞，然后将25μL含1×105个细胞的无血清IMDM加入每个孔中。将终浓度为10μg/mL的抗体处理液(25μL)加入孔中，并在37℃下孵育30分钟。在30分钟时，对先前用TrypLE收获的巨噬细胞进行计数，并用含5x 104个细胞的50μL无血清IMDM铺板。将板在37℃孵育2小时(效应物：靶标＝1∶2)。通过寻找GFP+巨噬细胞的流式细胞术分析来计算吞噬作用百分比。
ADCC测定。使用来自Stemcell Technologies(Vancouver,British Columbia,Canada，目录号17855)的EasySep人CD56阳性选择试剂盒，从人PBMC分离自然杀伤细胞。将分离的细胞在补充有10％FBS和100U/mL重组人IL-2(PeproTech，Rocky Hill，NJ，目录号200-02)的RPMI 1640培养基中培养过夜。将GIST-T1细胞在37℃下用5uM钙黄绿素-AM(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，目录号C3100MP)标记10分钟，然后洗涤两次。将抗c-Kit或同种型对照抗体从0.0003至30ug/mL连续稀释10倍，然后转移至V底测定板。将标记的GIST-T1细胞添加至测定板，然后添加活化的自然杀伤细胞，使最终的靶标与效应物比为1：5。孵育2小时后，收集上清液并转移至干净的平底板。使用SoftMax Pro 7.0软件在SpectraMax M3荧光板读数器上以490nm激发、520nm发射和515nm截止值读取板。采用以下公式基于相对荧光单位(RFU)计算特异性裂解百分比：[(测试RFU-平均背景RFU)/(平均最大RFU-平均背景RFU)]X 100，其中背景是没有抗体的情况下效应细胞+靶细胞，最大裂解是裂解缓冲液的情况下效应细胞+靶细胞。用GraphPad Prism 7.05分析数据。将特异性抗体依赖性裂解百分比相对于抗体浓度作图。
HSPC增殖测定。将冷冻的脐带血CD34+干/祖细胞(ALLCELLS目录号CB005F)重悬于补充有20ng/ml人重组SCF(STEMCELL technologies目录号78062)、20ng/ml重组人Flt3-配体(Peprotech目录号300-19)和20ng/ml重组人TPO(Peprotech目录号300-18)的HSC保留培养基StemSpan SFEMII(STEMCELL technologies目录号09605)中。将每孔约3000个干细胞铺在三个COSTAR超低簇96孔板(Corning目录号7007)上。将板在4℃下以1250rpm离心5分钟，并将细胞一式三份重悬于200ul具有或不具有抗c-Kit抗体的HSC保留培养基中。以0.1、1、10和50ug/ml的浓度测试了四种抗c-Kit抗体AMG191、AMG191-G1、HF12和HF112。在第1、3、5和11天使用Countbright绝对计数珠(InvitrogenTM目录号C36950)测试细胞增殖。AMG191具有位置297处的N至E突变，导致降低效应物功能的非糖基化。AMG191-G1或-IgG1具有野生型人IgG1恒定区。
2.结果
(a)抗c-Kit杂交瘤可变区的克隆和测序
从ATCC购买了抗人c-Kit杂交瘤细胞系(HB-10716)。通过ELISA检查杂交瘤克隆HB-10716结合人c-Kit的特异性。使用通用抗体引物从杂交瘤克隆HB-10716的重链和轻链可变区。对每个V基因产物的多个克隆进行测序，以监测PCR诱导的错误。确定HB-10716的VH和VL的核苷酸序列，推导的氨基酸序列分别示于图1A和B中。
(b)抗体人源化和CDR取代
为了选择用作CDR嫁接模板的人抗体框架(FR)，将小鼠HB-10716VL和VH区与人种系序列进行比较。发现小鼠HB-10716VL区的FR与IGKV4-1亚组具有较高的同源性，而VH区的FR与人IGHV1-46亚组具有较高的同源性。因此，将人IGKV4-1和IGHV1-46的FR用作设计人源化HB-10716的基础。通过分子建模鉴定了HB-10716和IGKV4-1/IGHV1-46序列之间不同且可能对抗原结合产生影响的FR区中的氨基酸位置。根据分子建模程序，保留了FR中相同的残基，并且保留或替换了FR中不同的残基。此外，通过分子建模鉴定了VH和VL的CDR区中的残基。通过定点诱变完成CDR取代。
表2总结了所制备的新人源化抗体及其重链和轻链成熟可变区组分。简而言之，命名为AF的抗体具有与AMG191相同的可变区框架。命名为NF的抗体具有与AMG191不同的可变区框架。命名为HF的抗体具有与AMG191相同的重链可变区框架和不同的轻链可变区框架。编号2-1、11、12、112和3分别表示在位置H54/L30、H60/L30、H64/L30、H60/H64/L30、H95/L30存在CDR取代。
表2
Figure BDA0003082419060000201
Figure BDA0003082419060000211
单独或组合使用H60、H64和L30处的CDR取代(AF11、AF12和AF112，表2，图2A-C)增强了结合。最重要的是，H60和H64处的残基回复突变至人种系序列，从而提高了AF11、AF12和AF112的人源化抗c-Kit抗体的人属性。此外，在H54、H95或L27处的单个氨基酸CDR取代(表2，图2A-B)削弱了AF-2-1、AF-3和AF-1-1的人源化抗c-Kit抗体的结合(图2D)。
抗c-Kit人源化抗体NF通过使用IGHV3-23*01和IGKV2-28*01的不同人种系序列作为框架进行CDR嫁接而制备(表2，图3A-B)。与AMG191相比，抗体NF显示出增强的结合活性(图3C)。然后，将H54、H60、H64、H95、L27和L30处的相同CDR取代应用于NF(表2，图3A-B)。H60、H64和L30处的CDR取代不仅适用于具有IGKV4-1/IGHV1-46框架的抗体，也适用于具有IGHV3-23*01/IGKV2-28*01框架的抗体。单独或组合使用H60、H64和L30的CDR取代增强或保留了NF11、NF12和NF112的结合活性(图3D)。
如表2所示，通过组合不同的VH和VL构建人源化HF11、HF12和HF112，并且与AMG191相比，它们均显示出增加的结合活性(图4)。
(c)人源化抗c-Kit抗体促进巨噬细胞介导的吞噬作用
接下来，我们研究了人源化抗c-Kit抗体使人外周血来源的巨噬细胞吞噬人癌细胞的能力。因为AMG191具有沉默的Fc，所以我们制备了AMG191-G1，其除了具有活性人IgG1Fc恒定区外，与AMG191具有相同的序列。与PBS对照相比，AMG191不诱导吞噬作用；但是，AMG191-G1如所预期的诱导了较高的吞噬活性，因为它具有活性的人IgG1支架(图5)。AMG191-G1在0.1、1和10ug/ml时诱导相似水平的吞噬活性。与AMG191-G1相比，人源化AF12、AF112、HF12、HF112和NF112在较低浓度下更有效，并且比AMG191-G1在0.1、1或甚至10ug/ml下诱导更高的吞噬活性，这表明人源化AF12、AF112、HF12、HF112和NF112所需的治疗剂量更低(图5)。数据显示，尽管AMG191-G1、AF12、AF112、HF12、HF112和NF112都是人IgG1形式的抗体，但AF12、AF112、HF12、HF112和NF112更有效。这可能是由于框架和/或CDR取代所引起的AF12、AF112、HF12、HF112和NF112更高的结合亲和力。
(d)人源化抗c-Kit抗体诱导有效的ADCC
针对GIST细胞测试了人源化抗c-Kit抗体诱导ADCC活性的能力。在任何测试浓度下，AMG191均未诱导ADCC。HF12和HF112以剂量依赖性方式介导ADCC(图6)。
(e)人源化抗c-Kit抗体抑制造血干/祖细胞(HSPC)增殖
成熟的造血细胞由造血干细胞(HSC)通过分级组织的过程发展而来，该过程产生自我更新能力降低的谱系限制增加的细胞。细胞表面蛋白酪氨酸激酶c-Kit与其同源配体干细胞因子(SCF)相互作用，从而调节HSC的自我更新。通过阻断c-Kit与SCF的相互作用，我们测试了人源化抗c-Kit抗体是否可以抑制HSPC增殖。如图7所示，在没有任何抗体处理的情况下，SCF诱导了HSPC增殖。但是，AMG191、AMG191-G1、HF12和HF112抑制HSPC增殖(图7)。此外，与AMG191和AMG191-G1相比，HF12和HF112在抑制HSPC增殖方面更有效(图7)。这可能是由于框架和/或CDR取代所引起的HF12和HF112更高的结合亲和力。
(f)人源化抗c-kit不诱导显著的肥大细胞脱粒
cKIT在造血干细胞和成熟肥大细胞上表达。肥大细胞来源于骨髓中的CD34+造血祖细胞。在迁移到各个周围组织后，这些祖细胞分化为成熟的肥大细胞，该成熟的肥大细胞表达cKIT以及高亲和力IgE受体FcεRI。抗原与肥大细胞上IgE引发的FcεRI的结合触发脱粒并释放化学介质，例如组胺和类胰蛋白酶以及细胞因子、白三烯和蛋白酶。化学介质的释放引起过敏的典型症状。在临床应用中，期望抗cKIT抗体减少造血干细胞而不诱导肥大细胞脱粒。
将从健康人供体外周血分化的成熟表型肥大细胞(CD34-，FcεRIα+，cKIT+)与不同浓度的HF12和HF12人源化抗c-Kit抗体(10、1、0.1和0.01μg/ml)一起孵育7小时。将A23187(10μM)和IgE加上抗IgE(各10ug ml)用作阳性对照。通过使用方法中所述的吸光度法测量β-己糖胺酶的释放对脱粒进行定量。
人原代肥大细胞在体外分化，并在第9周结束时表现出CD34-、FcεRIα+和cKIT+表型，这与成熟肥大细胞的表型特征一致。然后用钙离子载体A23187或IgE与抗IgE的组合刺激细胞。如通过β-己糖胺酶的释放所测量的，A23187和IgE+抗IgE有效地诱导肥大细胞脱粒。
与A23187和抗lgE处理相比，用抗c-Kit抗体直接处理细胞或用抗c-Kit抗体与抗IgG抗体的交联处理未诱导显著的肥大细胞脱粒(图8)。将抗c-Kit抗体固定在板上对肥大细胞脱粒也几乎没有影响。在各种浓度的抗c-Kit抗体存在下，肥大细胞和NK细胞的共孵育在所有测试浓度下也未诱导肥大细胞脱粒。
综上，与钙离子载体A23187或IgE与抗IgE处理的组合相比，抗c-Kit抗体HF12和HF112对原代人肥大细胞的体外脱粒几乎没有影响。
出于所有目的，以上或以下引用的所有专利文件、网站、其他出版物、登录号等均以引用的方式全文并入，其程度如同特别地且单独地指出每个独立的项目通过引用而并入。如果序列的不同版本在不同时间与登录号相关联，则意指在本申请的有效提交日与登录号相关联的版本。有效提交日是指实际提交日或涉及登录号的优先权申请(如果有的话)的提交日中较早的日期。同样，如果出版物、网站等的不同版本在不同时间发布，除非另有说明，否则是指在离本申请的有效提交日最近发布的版本。除非另外明确指出，否则本公开的任何特征、步骤、要素、实施方案或方面可以与任何其他组合使用。尽管出于清楚和理解的目的已经通过图示和实施例的方式详细描述了本公开，但显而易见的是，可以在所附权利要求的范围内进行某些改变和修改。
序列表
<110> 四十七公司
<120> 针对C-KIT的人源化抗体
<130> 063673-540687
<150> 62/771,526
<151> 2018-11-26
<160> 54
<170> PatentIn version 3.5
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
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Gly Val Ile Tyr Ser Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Asp Thr Arg Phe Gly Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
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Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Val Ile Tyr Ser Gly Gln Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
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Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Val Ile Tyr Ser Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro
100

Claims (15)

1.特异性结合人c-Kit的抗体，其包含成熟重链可变区和成熟的轻链可变区，除了存在1、2或3个CDR残基取代以外，所述成熟重链可变区包含分别为SEQ ID NO：2-4的由Kabat定义的CDR H1、H2和H3，所述成熟轻链可变区包含分别为SEQ ID NO：6-8的由Kabat定义的CDRL1、L2和L3，所述取代选自重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。
2.权利要求1的抗体，其中除了存在重链位置64处的K至Q和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDR H1、H2和H3分别为SEQ ID NO：2-4，并且由Kabat定义的CDR L1、L2和L3分别为SEQ ID NO：6-8。
3.权利要求1的抗体，其中除了存在重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDR H1、H2和H3分别为SEQ ID NO：2-4，由Kabat定义的CDR L1、L2和L3分别为SEQ ID NO：6-8。
4.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述成熟重链可变区与SEQ ID NO：13、17或21(AH2、AH3或AH4)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，并且所述成熟轻链可变区与SEQ ID NO：53(NL2)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，其中与所示SEQ ID NO的任何变化在由Kabat定义的CDR之外。
5.权利要求4的抗体，其中通过Kabat编号的重链位置1是E。
6.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述成熟轻链可变区的以下位置被如下氨基酸占据：
位置9被L占据
位置12被P占据
位置14被T占据
位置15被P占据
位置18被P占据
位置20被S占据
位置22被S占据
位置37被L占据
位置43被S占据
位置45被Q占据
位置74被K占据
位置77被R占据
位置78被V占据
位置79被E占据
位置84被G占据。
7.权利要求1的抗体，其中除了位置1可以是E以外，所述成熟重链可变区具有选自SEQID NO：13、17或21的序列，并且所述成熟轻链可变区具有SEQ ID NO：53的序列。
8.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述成熟重链可变区与重链恒定区连接，并且所述成熟轻链可变区与成熟轻链恒定区连接。
9.权利要求7的抗体，其中所述重链恒定区是人IgG1。
10.前述权利要求中任一项的抗体，其相对于AMG191具有增强的与人c-Kit的结合。
11.前述权利要求中任一项的抗体，其相对于AMG191-IgG1具有增强的ADCP。
12.前述权利要求中任一项的抗体，其相对于AMG191-IgG1具有增强的ADCC。
13.药物组合物，其包含前述权利要求中任一项的抗体和药学上可接受的载体。
14.消融内源性HSPC的方法，其包括向需要消融的受试者施用前述权利要求中任一项的抗体的有效方案。
15.治疗表达c-Kit的癌症的方法，其包括向患有所述癌症的受试者施用前述权利要求中任一项的抗体的有效方案。
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA202190986A1 (ru) 2018-11-26 2021-12-14 Фоти Севен, Инк. ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА К c-Kit
EP3886869A4 (en) 2018-11-28 2022-07-06 Forty Seven, Inc. GENETICALLY MODIFIED CSPH RESISTANT TO ABLATIVE TREATMENT
CN113906049A (zh) * 2019-05-24 2022-01-07 四十七公司 用于共施用针对c-kit和CD47的免疫治疗剂的方案
MX2022009947A (es) 2020-02-14 2022-11-07 Jounce Therapeutics Inc Anticuerpos y proteinas de fusion que se unen a ccr8 y usos de estos.
JP2024506758A (ja) * 2021-02-09 2024-02-14 ジャスパー・セラピューティクス・インコーポレイテッド 改変された幹細胞組成物およびその使用方法
WO2023069961A1 (en) * 2021-10-18 2023-04-27 Jasper Therapeutics, Inc. Modified stem cell compositions and methods for use
WO2023111311A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Universität Basel Discernible cell surface protein variants of cd117 for use in cell therapy
WO2023204547A1 (ko) * 2022-04-18 2023-10-26 주식회사 노벨티노빌리티 슈도모나스 외독소 a를 포함하는 c-kit 표적 면역접합체
WO2024008910A1 (en) 2022-07-07 2024-01-11 Cimeio Therapeutics Ag Antibodies targeting cd117
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101472949A (zh) * 2006-04-24 2009-07-01 安姆根有限公司 人源化c-Kit抗体
CN102481340A (zh) * 2009-05-28 2012-05-30 葛兰素集团有限公司 干细胞靶向
CN103533960A (zh) * 2011-05-12 2014-01-22 英克隆有限责任公司 c-KIT抗体及其用途
CN104812775A (zh) * 2012-07-25 2015-07-29 科尔坦制药公司 抗kit抗体及其用途
CN105007950A (zh) * 2013-03-15 2015-10-28 诺华股份有限公司 抗体药物缀合物
WO2016020791A1 (en) * 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
EP0279582A3 (en) 1987-02-17 1989-10-18 Pharming B.V. Dna sequences to target proteins to the mammary gland for efficient secretion
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5194594A (en) 1990-09-07 1993-03-16 Techniclone, Inc. Modified antibodies
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US5786464C1 (en) 1994-09-19 2012-04-24 Gen Hospital Corp Overexpression of mammalian and viral proteins
US5821108A (en) 1995-04-07 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Enrichment for a thymocyte subset having progenitor cell activity using c-kit as a selection marker
DE19539493A1 (de) 1995-10-24 1997-04-30 Thomae Gmbh Dr K Starker homologer Promotor aus Hamster
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
US5888809A (en) 1997-05-01 1999-03-30 Icos Corporation Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA
DE60036082T2 (de) 1999-02-05 2008-06-12 Samsung Electronics Co., Ltd., Suwon Verfahren und vorrichtung zur wiederauffindung von texturbildern
WO2004006955A1 (en) 2001-07-12 2004-01-22 Jefferson Foote Super humanized antibodies
WO2004050884A2 (de) 2002-11-29 2004-06-17 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Neue neomycin-phosphotransferase-gene und verfahren zur selektion von hochproduzierenden rekombinanten zellen
DE10338531A1 (de) 2003-08-19 2005-04-07 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Reklonierung von Produktionszellen
PT1820022E (pt) 2004-11-10 2009-08-05 Boehringer Ingelheim Pharma Utilização de análise por citometria de fluxo para optimizar estratégias de conservação de bancos de células cho
US20080124760A1 (en) 2006-07-26 2008-05-29 Barbara Enenkel Regulatory Nucleic Acid Elements
DK2088864T3 (en) 2006-11-03 2017-10-02 Univ Leland Stanford Junior SELECTIVE IMMUN DEPLETATION OF ENDOGEN STEM CELL NICHES FOR INPUT
MY148472A (en) 2007-03-02 2013-04-30 Boehringer Ingelheim Pharma Improvement of protein production
EP2031064A1 (de) 2007-08-29 2009-03-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Verfahren zur Steigerung von Proteintitern
CA3108119C (en) 2008-01-15 2024-01-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Markers of acute myeloid leukemia stem cells
ES2740823T3 (es) 2008-01-15 2020-02-06 Univ Leland Stanford Junior Métodos para manipular fagocitosis mediada por CD47
PT2477648T (pt) 2009-09-15 2022-10-27 The Board Of Trustees Of The Univ Of The Leland Stanford Junior Univ Terapia sinérgica anti-cd47 para cancros hematológicos
US20120283124A1 (en) 2009-11-10 2012-11-08 Park Christopher Y Cell Surface Marker Expression in Hematopoietic Stem Cells and Progenitors for the Diagnosis, Prognosis, and Treatment of Myelodysplastic Syndromes
JP6166177B2 (ja) 2010-05-14 2017-07-19 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー Ｃｄ４７に対するヒト化及びキメラモノクローナル抗体
KR20200139254A (ko) 2012-01-20 2020-12-11 임무노포토닉스 인코퍼레이티드 키토산 유래 조성물
WO2014049477A1 (en) 2012-09-25 2014-04-03 Koninklijke Philips N.V. A treatment device and a treatment system
KR20150143458A (ko) * 2013-03-06 2015-12-23 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. 항-C-MET 탠덤 Fc 이중특이적 항체
AR100280A1 (es) * 2014-05-22 2016-09-21 Rohm & Haas Aglutinantes poliméricos para impresoras de chorro de tinta
CA3229961A1 (en) 2014-08-26 2016-03-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Engraftment of stem cells with a combination of an agent that targets stem cells and modulation of immunoregulatory signaling
AU2016246707B2 (en) 2015-04-06 2021-03-25 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods for non-myeloablative conditioning
WO2016179399A1 (en) 2015-05-06 2016-11-10 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University High affinity cd47 analogs
DK3298043T3 (da) 2015-05-18 2021-02-15 Ab Initio Biotherapeutics Inc SIRP-polypeptidsammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse
EP4349412A2 (en) 2016-04-15 2024-04-10 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Methods for determining and achieving therapeutically effective doses of anti-cd47 agents in treatment of cancer
SG11201811290VA (en) * 2016-06-17 2019-01-30 Magenta Therapeutics Inc Compositions and methods for the depletion of cd117+cells
JOP20190155A1 (ar) * 2016-12-21 2019-06-23 Novartis Ag مترافقات عقار جسم مضاد لإزالة خلايا جذعية مكونة للدم
JP7321934B2 (ja) 2017-01-30 2023-08-07 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 幹細胞移植のための非遺伝毒性移植前処置レジメン
JP7312706B2 (ja) 2017-06-21 2023-07-21 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 血液悪性腫瘍に対するｃｄ４７標的化治療のための投与パラメータ
EP3658589B1 (en) 2017-07-26 2023-09-27 Forty Seven, Inc. Anti-sirp-alpha antibodies and related methods
EA202190986A1 (ru) 2018-11-26 2021-12-14 Фоти Севен, Инк. ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА К c-Kit
EP3886869A4 (en) 2018-11-28 2022-07-06 Forty Seven, Inc. GENETICALLY MODIFIED CSPH RESISTANT TO ABLATIVE TREATMENT
CN113906049A (zh) 2019-05-24 2022-01-07 四十七公司 用于共施用针对c-kit和CD47的免疫治疗剂的方案

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101472949A (zh) * 2006-04-24 2009-07-01 安姆根有限公司 人源化c-Kit抗体
CN102481340A (zh) * 2009-05-28 2012-05-30 葛兰素集团有限公司 干细胞靶向
CN103533960A (zh) * 2011-05-12 2014-01-22 英克隆有限责任公司 c-KIT抗体及其用途
CN104812775A (zh) * 2012-07-25 2015-07-29 科尔坦制药公司 抗kit抗体及其用途
CN105007950A (zh) * 2013-03-15 2015-10-28 诺华股份有限公司 抗体药物缀合物
WO2016020791A1 (en) * 2014-08-05 2016-02-11 Novartis Ag Ckit antibody drug conjugates

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