CN113181221A - 富硒乳酸菌缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用 - Google Patents
富硒乳酸菌缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113181221A CN113181221A CN202110503113.3A CN202110503113A CN113181221A CN 113181221 A CN113181221 A CN 113181221A CN 202110503113 A CN202110503113 A CN 202110503113A CN 113181221 A CN113181221 A CN 113181221A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- selenium
- small intestine
- lactic acid
- acid bacteria
- aflatoxin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 122
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 104
- 239000011669 selenium Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 104
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 title claims abstract description 92
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 title claims abstract description 84
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 title claims abstract description 78
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 78
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 61
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 61
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 47
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000003940 Occludin Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 108090000304 Occludin Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 12
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 abstract description 5
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 description 94
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 80
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 54
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 54
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 50
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 42
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 description 31
- 239000002115 aflatoxin B1 Substances 0.000 description 27
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 description 27
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 23
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 16
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 13
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 12
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 10
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 8
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 8
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 8
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 7
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 7
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 4
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 4
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 101000760085 Daucus carota 21 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000007674 genetic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 231100000386 immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007688 immunotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 210000005026 intestinal epithelial barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 231100000701 toxic element Toxicity 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/465—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from birds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了富硒乳酸菌在缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用;所述的缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损指的是:富硒乳酸菌抑制黄曲霉毒素致鸡小肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin蛋白水平下降。实验结果显示:对于鸡小肠上皮细胞,使用0.01‑0.1μmol/L的富硒乳酸菌,在黄曲霉毒素浓度为200‑300μmol/L,可抑制黄曲霉毒素所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,以此达到减弱黄曲霉毒素对鸡小肠肠道屏障损伤的作用,为富硒乳酸菌在预防和治疗鸡黄曲霉毒素中毒,特别是缓解肠道屏障损伤、维持肠道功能方面的应用提供技术支持。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及细胞工程技术,尤其是一种富硒乳酸菌抑制黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用和方法。
背景技术
黄曲霉毒素(AF)的毒性作用主要包括:生长发育毒性、肝毒性、免疫毒性、遗传毒性,AF除了对机体肝、肾造成损伤以外,对肠道也产生相应的毒害作用;肠道是真菌毒素的初始屏障,肠粘膜的屏障保护对于肠道健康至关重要。
硒作为机体必需的微量元素,具有抗氧化,提高机体免疫力和抗病力,调节机体代谢,影响动物和人的繁育机能,抗肿瘤,延缓衰老,拮抗有毒元素等等多种生物学功能,另外其对肠道菌群失调、改善肠道炎症方面有一定的改善作用。乳酸菌能够通过其体内的生物学作用将无机硒转化为有机硒并制得富硒乳酸菌,其对于AF的毒性有拮抗作用,并且对于黄曲霉的生长也能起到抑制作用。
正常的肠屏障在维持体内和外界环境的稳态上发挥重要作用。紧密连接是多种蛋白组成的复合物,其对肠上皮屏障的通透性、性质和功能至关重要,对营养物质的运输、吸收和利用具有重要意义。紧密连接蛋白对于维持肠上皮结构十分重要,其能够封闭细胞间隙,阻止有害物质进入机体,是调节上皮细胞通透性的机械屏障;紧密连接蛋白不仅在调节屏障方面发挥作用,也参与调节细胞形态、细胞极性等。闭合蛋白(Occludin)是一种重要的跨膜紧密连接蛋白,与上皮机械屏障有着密切关系;若Occludin蛋白水平下降,则会导致肠道屏障受损,加剧毒素经肠腔进入血液循环。研究发现AF能够降低Occludin蛋白水平、增加肠道细胞旁通透性,损伤肠道的机械屏障,进而影响肠道的正常功能。
本发明用富硒乳酸菌来抑制AF引起的鸡小肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin蛋白水平下降,达到抵抗AF对肠屏障的损伤,维持肠道正常功能的作用效果。目前,国内外未见到富硒乳酸菌抑制AF所致鸡小肠肠道屏障损伤方面的专利公开文献或报道。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术中的不足之处,提供一种富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的应用和方法,为富硒乳酸菌在预防和治疗鸡AF中毒,特别是缓解肠道屏障损伤、维持肠道功能方面的应用提供技术支持。
为实现上述目的,本发明公开了如下的技术内容:
一种富硒乳酸菌在缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤方面的应用;所述的缓解AF致鸡小肠肠屏障损指的是:富硒乳酸菌抑制AF所致鸡小肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin蛋白水平下降。
本发明所述的应用,其特征在于:对于鸡小肠上皮细胞,当AF浓度为200-300μmol/L时,使用0.01-0.1 μmol/L 的富硒乳酸菌(在培养液中的终浓度,以硒计),能够抑制AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,以此达到减弱AF对鸡小肠肠道屏障损伤的作用效果。实验结果显示:对于鸡小肠上皮细胞,使用0.01-0.1 μmol/L 的富硒乳酸菌(在培养液中的终浓度,以硒计),在AF浓度为200-300 μmol/L,能够抑制AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,并减弱AF对鸡小肠肠屏障损伤的作用,
本发明进一步公开了富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的方法,步骤如下:
对于鸡小肠上皮细胞,加入硒浓度为0.01-0.1μmol/L(在培养液中的终浓度)的富硒乳酸菌,培养6-12h后,再向其中加入AF,使其浓度为200-300μmol/L,继续培养12-24h后培养结束,能够抑制AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,以此达到减弱AF对鸡小肠肠道屏障损伤的作用。
本发明还公开了富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的验证方法,步骤如下:
S1:将鸡小肠上皮细胞接种于六孔板,调整细胞浓度为2×105个/孔;试验分为对照组、AF攻毒组和富硒乳酸菌组;待细胞汇合60-70%,更换培养液;对照组和AF攻毒组更换为普通培养液,富硒乳酸菌组更换含富硒乳酸菌的培养液,硒浓度为0.01-0.1μmol/L;继续培养8-12h后取出六孔板,在AF攻毒组和富硒乳酸菌组加入AF,使其浓度为200-300μmol/L,继续培养12-24h后,培养结束;
S2:采用Western bloting法测定Occludin蛋白水平的改变:
提取鸡小肠上皮细胞总蛋白,采用BCA法测定蛋白浓度,加入5×buffer,100℃煮沸变性蛋白;通过SDS-PAGE分离蛋白,转膜至PVDF膜,常规孵育一抗二抗,通过ImageLab显影,测定Occludin蛋白水平。
而且,所述步骤S2的具体步骤如下:
(1)蛋白提取
用预冷的PBS洗涤细胞3次,每孔加入150µL的含1mM PMSF的RIPA细胞裂解液,充分接触细胞后,刮下细胞移至1.5mL离心管中,于4℃继续裂解1h,每15min震荡10s以充***解细胞。4℃ 12000g离心10min,收集上清液;于-20℃保存;
(2)BCA法测定蛋白浓度
将试剂盒中的蛋白标准品稀释为0.5mg/kg;
配制BCA工作液:按50:1混合A液和B液;
将标准品按0、1、2、4、8、12、16和20µL加到96孔板,用生理盐水补至20µL;取2µL待测样品加到96孔板,用生理盐水补至20µL;
每孔加入200µLBCA工作液,37℃孵育30min;
于540nm下测定其OD值,计算样品蛋白浓度;
向待测样品中加入30µL 5×LoadingBuffer,煮沸10min以变性蛋白,于-20℃保存待用;
(3)SDS-PAGE电泳
正确组装电泳槽,放入预制胶;倒入电泳缓冲液,拔掉梳子,依次加入多色预染蛋白Maker和待测样品;室温110V恒压电泳至凝胶底部结束;
(4)转膜
1)将PVDF膜于甲醇中浸泡5min,滤纸浸泡在转膜缓冲液中;
2)取出凝胶,对照Marker切下包含目的蛋白的凝胶;
3)按照滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸的顺序铺好,去掉气泡使凝胶与膜充分接触;
4)用15V电压转膜45min;
(5)封闭
转膜结束后,取出PVDF膜,在70转/min摇床上用TBST洗涤3次,每次5min;配制5%脱脂乳作封闭液,将PVDF膜充分与封闭液接触,4℃封闭过夜;
(6)结合抗体
结合一抗:
根据抗体说明书使用封闭液稀释Occludin抗体,稀释度为1:600;兔源β-actin抗体稀释度为1:1000。取封闭后的PVDF膜置于稀释后的一抗中,室温孵育90min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
结合二抗:
根据抗体说明书,使用封闭液稀释二抗,使用的羊抗兔IgG抗体稀释度为1:1000;取孵育一抗后的PVDF膜与稀释后二抗孵育,室温孵育60min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
(7)ECL法显色
取ECL试剂盒中等量A液和B液,充分混合后与PVDF膜接触,避光室温反应5min。与BIO-RAD凝胶成像仪采集图像,用ImageLab软件扫描灰度,测定Occludin蛋白水平。
本发明公开的富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的有益效果在于:
本发明提出了富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤方面的应用;实验结果显示:对于鸡小肠上皮细胞,使用0.01-0.1 μmol/L 的富硒乳酸菌(在培养液中的终浓度,以硒计),在AF浓度为200-300 μmol/L,可抑制AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,以此达到减弱AF对鸡小肠肠道屏障损伤的作用,可为富硒乳酸菌在预防和治疗鸡AF中毒,特别是缓解肠道屏障损伤、维持肠道功能方面的应用提供技术支持。
将本发明中能够缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的富硒乳酸菌,用于保护同时给予AF攻毒的鸡小肠上皮细胞,试验结果表明,与AF攻毒组相比,富硒乳酸菌能够上调AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin表达的降低,进而抑制了鸡小肠上皮细胞损伤所引起的培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性的升高,从缓解了AF对肠道细胞的损伤,维持了肠道细胞的完整性(见图1)。
本发明主要解决了如何应用富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的方法及应用;重点考察了富硒乳酸菌作为能够抑制细胞损伤的物质在减弱AF对鸡小肠肠屏障毒性作用方面的作用效果;主要的难点在于,确定富硒乳酸菌对AF所致鸡小肠肠屏障损伤具有最佳保护效果的时间以及最佳应用浓度;为此先后考察了AF对鸡小肠上皮细胞生长的影响、攻毒的毒素剂量、攻毒时间、富硒乳酸菌的应用剂量和应用时间等条件;最后确定的方案是:鸡小肠上皮细胞培养12h,处于生长对数期时,应用含有富硒乳酸菌的培养液(在培养液中的终浓度0.01-0.1μmol/L,以硒计)对肠屏障进行保护;继续培养6-12h,待富硒乳酸菌充分发挥作用后,加入200-300μmol/L的AF进行攻毒,攻毒进行12-24h,在此条件下,富硒乳酸菌抑制AF所致鸡小肠肠屏障损伤具有最佳的作用效果。
附图说明
图1 富硒乳酸菌缓解AF对鸡小肠上皮细胞LDH活力的影响;注:不同小写字母表示差异显著(P<0.05);不同大写字母表示差异极显著(P<0.01);相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05);下同;
图2 富硒乳酸菌(0.01μmol/L)缓解AFB1 (200µg/mL)致鸡小肠肠道屏障损伤的测定结果;其中,上图为富硒乳酸菌(0.01μmol/L)对AFB1(200μmol/L)导致的鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平改变的条带图,下图为富硒乳酸菌(0.01μmol/L)对AFB1(200μmol/L)导致的鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平改变的统计结果图。
图3 富硒乳酸菌(0.1μmol/L) 缓解AFB1(300μmol/L)致鸡小肠肠道屏障损伤的测定结果;其中,上图为富硒乳酸菌(0.1μmol/L)对AFB1(300μmol/L)导致的鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平改变的条带图,下图为富硒乳酸菌(0.1μmol/L)对AFB1(300μmol/L)导致的鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平改变的统计结果图。
具体实施方式
下面详细叙述本发明的实施例,需要说明的是,本实施例是叙述性的,不是限定性的,不能以此限定本发明的保护范围。本发明中所使用的原料,如无特殊说明,均为常规的市售产品;本发明中所使用的方法,如无特殊说明,均为本领域的常规方法。
较优地,本发明中鸡小肠上皮细胞培养液可以购买于GIBCO公司,AF可以购买于Fermentek Ltd公司。富硒乳酸菌由天津农学院临床兽医学实验室参照文献(姚婉, 赵方红, 刘丽娜, 等. 不同浓度硒含量的富硒乳酸菌抑制黄曲霉菌生长以及产毒效果的研究[J]. 中国饲料, 2016,(12):19-21+26.)的方法进行制备,制备原料:乳酸菌(鼠李糖乳杆菌,购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心)由实验室保存,***钠可以购自天津市化学试剂究所;制备的富硒乳酸菌中硒含量为9.69 µg/mL。
富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的应用。
较优地,所述应用为富硒乳酸菌提高AF致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降的应用。
较优地,对于鸡小肠上皮细胞,当AF浓度为200-300μmol/L时,使用硒在培养液中的终浓度为0.01-0.1μmol/L的富硒乳酸菌,能够抑制AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,以此达到减弱AF对鸡小肠肠道屏障损伤的作用。
富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的方法,步骤如下:
对于鸡小肠上皮细胞,加入硒浓度为0.01-0.1μmol/L(培养液中的终浓度)的富硒乳酸菌,培养8-12h后,再向其中加入AF,使其浓度为200-300μmol/L,继续培养12-24h后培养结束,能够抑制AF所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降,以此达到减弱AF对鸡小肠肠道屏障损伤的作用。
富硒乳酸菌缓解AF致鸡小肠肠屏障损伤的验证方法,步骤如下:
S1:将鸡小肠上皮细胞接种于六孔板,调整细胞浓度为2×105个/孔;试验分为对照组、AF攻毒组和富硒乳酸菌组;待细胞汇合60-70%,更换培养液:对照组和AF攻毒组更换为普通培养液,富硒乳酸菌组更换含富硒乳酸菌的培养液,硒浓度为0.01-0.1μmol/L;继续培养8-12h后取出六孔板,在AF攻毒组和富硒乳酸菌组加入AF,使其浓度为200-300μmol/L,继续培养12-24h后,培养结束;
S2:采用Western bloting法测定Occludin蛋白水平的改变:
提取鸡小肠上皮细胞总蛋白,采用BCA法测定蛋白浓度,加入5×buffer,100℃煮沸变性蛋白;通过SDS-PAGE分离蛋白,转膜至PVDF膜,常规孵育一抗二抗,通过ImageLab显影,测定Occludin蛋白水平。
而且,所述步骤S2的具体步骤如下:
(1)蛋白提取
用预冷的PBS洗涤细胞3次,每孔加入150µL的含1mM PMSF的RIPA细胞裂解液,充分接触细胞后,刮下细胞移至1.5mL离心管中,于4℃继续裂解1h,每15min震荡10s以充***解细胞。4℃ 12000g离心10min,收集上清液;于-20℃保存;
(2)BCA法测定蛋白浓度
将试剂盒中的蛋白标准品稀释为0.5mg/kg;
配制BCA工作液:按50:1混合A液和B液;
将标准品按0、1、2、4、8、12、16和20µL加到96孔板,用生理盐水补至20µL;取2µL待测样品加到96孔板,用生理盐水补至20µL;
每孔加入200µLBCA工作液,37℃孵育30min;
于540nm下测定其OD值,计算样品蛋白浓度;
向待测样品中加入30µL5×LoadingBuffer,煮沸10min以变性蛋白,于-20℃保存待用;
(3)SDS-PAGE电泳
正确组装电泳槽,放入预制胶;倒入电泳缓冲液,拔掉梳子,依次加入多色预染蛋白Maker和待测样品;室温110V恒压电泳至凝胶底部结束;
(4)转膜
1)将PVDF膜于甲醇中浸泡5min,滤纸浸泡在转膜缓冲液中;
2)取出凝胶,对照Marker切下包含目的蛋白的凝胶;
3)按照滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸的顺序铺好,去掉气泡使凝胶与膜充分接触;
4)用15v电压转膜45min;
(5)封闭
转膜结束后,取出PVDF膜,在70转/min摇床上用TBST洗涤3次,每次5min;配制5%脱脂乳作封闭液,将PVDF膜充分与封闭液接触,4℃封闭过夜;
(6)结合抗体
结合一抗:
根据抗体说明书,使用封闭液稀释Occludin抗体,稀释度为1:600;兔源β-actin抗体稀释度为1:1000。取封闭后的PVDF膜置于稀释后的一抗中,室温孵育90min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
结合二抗:
根据抗体说明书,使用封闭液稀释二抗,使用的羊抗兔IgG抗体稀释度为1:1000;取孵育一抗后的PVDF膜与稀释后二抗孵育,室温孵育60min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
(7) ECL法显色
取ECL试剂盒中等量A液和B液,充分混合后与PVDF膜接触,避光室温反应5min。与BIO-RAD凝胶成像仪采集图像,用ImageLab软件扫描灰度,测定Occludin蛋白水平。
实施例1
富硒乳酸菌缓解AFB1(黄曲霉毒素B1)致鸡小肠肠屏障损伤的方法,步骤如下:
对于鸡小肠上皮细胞,加入硒浓度为0.01μmol/L(在培养液中的终浓度)的富硒乳酸菌,培养8 h后,再向其中加入AFB1,使其浓度为200μmol/L,继续培养12 h后培养结束,达到抑制AFB1所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降、减弱AFB1对鸡小肠肠道屏障损伤的作用。
富硒乳酸菌在抑制AFB1致鸡小肠肠屏障损伤的验证方法,步骤如下:
1.1 鸡小肠上皮细胞培养与分组处理
鸡小肠上皮细胞接种于6孔板,调整细胞浓度至2×105个/孔,加样布板前要缓慢多次吹打。试验分为3组,即对照C组、AFB1攻毒组(AFB1毒素200μmol/L)和富硒乳酸菌组(0.01μmol/LSe+AFB1毒素200μmol/L),每组6个重复。细胞生长至60%-70%后,弃掉培养液并清洗2次,更换培养液:对照组和AFB1攻毒组更换普通培养液;富硒乳酸菌组更换含有0.01μmol/L(以硒计)的富硒乳酸菌培养液。继续培养8 h后取出细胞培养板,富硒乳酸菌组和AFB1组均加入AFB1,使其浓度为200μmol/L,继续培养12 h后,培养结束。
1.2 蛋白提取
用预冷的PBS洗涤细胞3次,每孔加入150µL的含1mM PMSF的RIPA细胞裂解液,充分接触细胞后,刮下细胞移至1.5mL离心管中,于4℃继续裂解1h,每15min震荡10s以充***解细胞。4℃ 12000g离心10min,收集上清液;于-20℃保存;
1.3 BCA法测定蛋白浓度
将试剂盒中的蛋白标准品稀释为0.5mg/kg;
配制BCA工作液:按50:1混合A液和B液;
将标准品按0、1、2、4、8、12、16和20µL加到96孔板,用生理盐水补至20µL;取2µL待测样品加到96孔板,用生理盐水补至20µL;
每孔加入200µLBCA工作液,37℃孵育30min;
于540nm下测定其OD值,计算样品蛋白浓度;
向待测样品中加入30µL 5×LoadingBuffer,煮沸10min以变性蛋白,于-20℃保存待用;
1.4 SDS-PAGE电泳
正确组装电泳槽,放入预制胶;倒入电泳缓冲液,拔掉梳子,依次加入多色预染蛋白Maker和待测样品;室温110V恒压电泳至凝胶底部结束;
1.5 转膜
(1)将PVDF膜于甲醇中浸泡5min,滤纸浸泡在转膜缓冲液中;
(2)取出凝胶,对照Marker切下包含目的蛋白的凝胶;
(3)按照滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸的顺序铺好,去掉气泡使凝胶与膜充分接触;
(4)用15v电压转膜45min;
1.6 封闭
转膜结束后,取出PVDF膜,在70转/min摇床上用TBST洗涤3次,每次5min;配制5%脱脂乳作封闭液,将PVDF膜充分与封闭液接触,4℃封闭过夜;
1.7 结合抗体
结合一抗:
根据抗体说明书使用封闭液稀释Occludin抗体,稀释度为1:600;兔源β-actin抗体稀释度为1:1000。取封闭后的PVDF膜置于稀释后的一抗中,室温孵育90min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
结合二抗:
根据抗体说明书,使用封闭液稀释二抗,使用的羊抗兔IgG抗体稀释度为1:1000;取孵育一抗后的PVDF膜与稀释后二抗孵育,室温孵育60min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
1.8 ECL法显色
取ECL试剂盒中等量A液和B液,充分混合后与PVDF膜接触,避光室温反应5min。与BIO-RAD凝胶成像仪采集图像,用ImageLab软件扫描灰度,测定Occludin蛋白水平。
富硒乳酸菌(0.01μmol/L)缓解AFB1(200μmol/L)致鸡小肠肠屏障损伤的测定结果见图2。
结果表明,200μmol/L的AFB1可显著的降低鸡小肠上皮细胞中Occludin蛋白的表达量(P<0.05),而0.01μmol/L(以硒计)的富硒乳酸菌能显著的提高AFB1所致的鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平量的降低(P<0.05)。
实施例2
富硒乳酸菌缓解AFB1致鸡小肠肠屏障损伤的方法,步骤如下:
对于鸡小肠上皮细胞,加入硒浓度为0.1μmol/L(在培养液中的终浓度)的富硒乳酸菌,培养12 h后,再向其中加入AFB1,使其浓度为300μmol/L,继续培养24 h后培养结束,达到抑制AFB1所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降、减弱AFB1对鸡小肠肠道屏障损伤的作用。
富硒乳酸菌在抑制AFB1致鸡小肠肠屏障损伤的验证方法,步骤如下:
2.1 鸡小肠上皮细胞培养与分组处理
鸡小肠上皮细胞接种于6孔板,调整细胞浓度至2×105个/孔,加样布板前要缓慢多次吹打。试验分为3组,即对照C组、AFB1攻毒组(AFB1毒素300μmol/L)和富硒乳酸菌组(0.1μmol/LSe+AFB1毒素300μmol/L),每组6个重复。细胞生长至60%-70%后,弃掉培养液并清洗2次,更换培养液:对照组和AFB1攻毒组更换普通培养液;富硒乳酸菌组更换含有0.1μmol/L(以硒计)的富硒乳酸菌培养液。继续培养12 h后取出细胞培养板,富硒乳酸菌组和AFB1组均加入AFB1,使其浓度为300μmol/L,继续培养24 h后,培养结束。
2.2 蛋白提取
用预冷的PBS洗涤细胞3次,每孔加入150µL的含1mM PMSF的RIPA细胞裂解液,充分接触细胞后,刮下细胞移至1.5mL离心管中,于4℃继续裂解1h,每15min震荡10s以充***解细胞。4℃ 12000g离心10min,收集上清液;于-20℃保存;
2.3 BCA法测定蛋白浓度
将试剂盒中的蛋白标准品稀释为0.5mg/kg;
配制BCA工作液:按50:1混合A液和B液;
将标准品按0、1、2、4、8、12、16和20µL加到96孔板,用生理盐水补至20µL;取2µL待测样品加到96孔板,用生理盐水补至20µL;
每孔加入200µLBCA工作液,37℃孵育30min;
于540nm下测定其OD值,计算样品蛋白浓度;
向待测样品中加入30µL 5×LoadingBuffer,煮沸10min以变性蛋白,于-20℃保存待用;
2.4 SDS-PAGE电泳
正确组装电泳槽,放入预制胶;倒入电泳缓冲液,拔掉梳子,依次加入多色预染蛋白Maker和待测样品;室温110V恒压电泳至凝胶底部结束;
2.5 转膜
(1)将PVDF膜于甲醇中浸泡5min,滤纸浸泡在转膜缓冲液中;
(2)取出凝胶,对照Marker切下包含目的蛋白的凝胶;
(3)按照滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸的顺序铺好,去掉气泡使凝胶与膜充分接触;
(4)用15v电压转膜45min;
2.6 封闭
转膜结束后,取出PVDF膜,在70转/min摇床上用TBST洗涤3次,每次5min;配制5%脱脂乳作封闭液,将PVDF膜充分与封闭液接触,4℃封闭过夜;
2.7 结合抗体
结合一抗:
根据抗体说明书,使用封闭液稀释Occludin抗体,稀释度为1:600;兔源β-actin抗体稀释度为1:1000。取封闭后的PVDF膜置于稀释后的一抗中,室温孵育90min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
结合二抗:
根据抗体说明书,使用封闭液稀释二抗,使用的羊抗兔IgG抗体稀释度为1:1000;取孵育一抗后的PVDF膜与稀释后二抗孵育,室温孵育60min后,取出PVDF膜,用TBST洗涤3次,每次5min;
2.8 ECL法显色
取ECL试剂盒中等量A液和B液,充分混合后与PVDF膜接触,避光室温反应5min。与BIO-RAD凝胶成像仪采集图像,用ImageLab软件扫描灰度,测定Occludin蛋白水平。
富硒乳酸菌(0.1μmol/L)缓解AFB1(300μmol/L)致鸡小肠肠屏障损伤的测定结果见图3。
结果表明,300μmol/L的AFB1可极显著的降低鸡小肠上皮细胞中Occludin蛋白的表达量(P<0.01),而0.1μmol/L(以硒计)的富硒乳酸菌能极显著的提高AFB1所致的鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平量的降低(P<0.01)。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例,但是本领域的技术人员可以理解:在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内,各种替换、变化和修改都是可能的,因此,本发明的范围不局限于实施例和附图所公开的内容。
Claims (2)
1.富硒乳酸菌在用于缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用;所述的缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损指的是:富硒乳酸菌抑制黄曲霉毒素致鸡小肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin蛋白水平下降。
2.权利要求1所述的应用,其特征在于:对于鸡小肠上皮细胞细胞,当黄曲霉毒素浓度为200-300μmol/L时,使用硒在培养液中的终浓度(以硒计)为0.01-0.1μmol/L的富硒乳酸菌,能够抑制黄曲霉毒素所致鸡小肠上皮细胞Occludin蛋白水平下降。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110503113.3A CN113181221A (zh) | 2021-05-10 | 2021-05-10 | 富硒乳酸菌缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110503113.3A CN113181221A (zh) | 2021-05-10 | 2021-05-10 | 富硒乳酸菌缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113181221A true CN113181221A (zh) | 2021-07-30 |
Family
ID=76988543
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110503113.3A Pending CN113181221A (zh) | 2021-05-10 | 2021-05-10 | 富硒乳酸菌缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113181221A (zh) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107412272A (zh) * | 2017-04-20 | 2017-12-01 | 吉林省农业科学院 | 植物乳杆菌在预防肠道屏障损伤中的应用 |
CN109929773A (zh) * | 2019-01-10 | 2019-06-25 | 江苏德禧生物科技有限公司 | 一株可用于富硒培养的双歧杆菌及其活性蛋白和应用 |
CN111281970A (zh) * | 2018-12-10 | 2020-06-16 | 河南普爱饲料股份有限公司 | 一种复合益生菌发酵组合物及其在制备防治霉菌毒素引起的上皮细胞损伤的制剂中的应用 |
-
2021
- 2021-05-10 CN CN202110503113.3A patent/CN113181221A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107412272A (zh) * | 2017-04-20 | 2017-12-01 | 吉林省农业科学院 | 植物乳杆菌在预防肠道屏障损伤中的应用 |
CN111281970A (zh) * | 2018-12-10 | 2020-06-16 | 河南普爱饲料股份有限公司 | 一种复合益生菌发酵组合物及其在制备防治霉菌毒素引起的上皮细胞损伤的制剂中的应用 |
CN109929773A (zh) * | 2019-01-10 | 2019-06-25 | 江苏德禧生物科技有限公司 | 一株可用于富硒培养的双歧杆菌及其活性蛋白和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
姚婉等: "不同浓度硒含量的富硒乳酸菌抑制黄曲霉菌生长以及产毒效果的研究", 《中国饲料》 * |
杨雪等: "霉菌毒素对肠道紧密连接蛋白的影响及其调控机制", 《动物营养学报》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102181376B (zh) | 同时降解玉米赤霉烯酮和纤维素的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN110408663B (zh) | 一种高产胞外多糖的乳酸菌及制备方法和应用 | |
CN113862164B (zh) | 一株高蛋白酿酒酵母及其应用 | |
CN115322932B (zh) | 一株具有解酒醒酒能力的植物乳植杆菌和应用 | |
CN106701833B (zh) | 一种抑菌的类芽孢杆菌发酵液提取物 | |
CN111500482A (zh) | 一种羊a型产气荚膜梭菌菌株及其灭活疫苗和疫苗制备方法 | |
CN103992969B (zh) | 一种具有抗菌活性菌素的植物乳杆菌及其应用 | |
CN104381990B (zh) | 富肽钙毛虾酱的制备方法 | |
CN106387317A (zh) | 一种保护猪肝脏的微生物饲料添加剂及其制备方法 | |
CN107012095B (zh) | 猪结肠微生物组体外模拟培养的发酵参数 | |
CN111560333B (zh) | 乳酸菌胞外多糖的分离及其应用 | |
CN105969765A (zh) | 金黄色葡萄球菌基因组dna快速提取试剂盒及提取方法 | |
CN116240150B (zh) | 一种改善宠物软便的干酪乳杆菌King99及菌剂、制备方法和应用 | |
CN113181221A (zh) | 富硒乳酸菌缓解黄曲霉毒素致鸡小肠肠屏障损伤的应用 | |
CN110331104B (zh) | 一种植物乳杆菌cv10d1及其应用 | |
CN108330082B (zh) | 一株副干酪乳杆菌及其应用 | |
CN104789488A (zh) | 具有降胆固醇作用的鼠李糖乳杆菌及用途 | |
CN111944712A (zh) | 一株具有优良酒精耐受能力的植物乳杆菌和应用 | |
CN104894031A (zh) | 一株肠膜明串珠菌及其在低温青贮中的应用 | |
CN107988024A (zh) | 养生保健诺丽果酒 | |
CN114617191A (zh) | 一种利用南极磷虾制备的功能性饲料及其方法 | |
CN101886043B (zh) | 一种复合酸奶发酵剂及其应用 | |
CN105146100B (zh) | 一种利用啤酒废液生产酵母发酵态铁饲料添加剂的方法 | |
CN116948861A (zh) | 具有抗衰功能的菌株及其应用 | |
CN116855559A (zh) | 一种调控皮肤微生态的雪衣藻寡糖的制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210730 |