CN113150116A - 一种高效制备抗氧化活性肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种制备高效抗氧化肽的方法。本发明通过加热、加热‑体外模拟消化处理制备高抗氧化活性的牛皮胶原蛋白肽,可增加牛皮利用率,提高牛皮附加值。

Description

一种高效制备抗氧化活性肽的方法
技术领域
本发明涉及一种高效制备抗氧化活性肽的方法。
背景技术
近年来,人们对食品的营养和功能愈发关注,希望通过食物获取所需的营养。氧化应激是人体面临健康威胁的问题之一,能够抑制人体细胞脂质、蛋白质等的正常功能。就对人体健康的影响而言,抗氧化肽可以减少活性氧(ROS)对正常生理功能的不利影响,从而保护人体免受与炎症、癌症和衰老等疾病相关的氧化损伤,减少某些退行性疾病发展的风险。天然抗氧化剂与人工合成的抗氧化剂相比,具有分子量小、活性强、易于吸收及无毒害等优点。牛皮作为肉牛屠宰副产物之一,含有丰富的蛋白质,其中胶原蛋白是最主要的成分。胶原蛋白可进一步水解生成多肽和游离氨基酸。众所周知,牛皮在食用之前需经加热烹饪,最终在胃肠道酶的作用下消化吸收。在烹调和胃肠道消化过程中蛋白质的结构和水解性发生变化,进而影响肉类的抗氧化活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效制备抗氧化肽的方法。
本发明提供的一种高效抗氧化肽的方法,包括:
本发明提供的制备抗氧化肽的方法,包括:
1)将生牛皮进行煮制,得到煮制后的牛皮;
2)将步骤1)所得煮制后的牛皮进行除脂和除杂蛋白处理后,用乙酸和酶结合进行提取,盐析,静置分层,离心收集絮状沉淀,透析,酶解,得到所述抗氧化肽。
上述方法所述步骤1)煮制步骤中,温度为70-90℃;具体为80℃;时间为15-20min。
所述步骤2)除脂和除杂蛋白为依次用Na2CO3水溶液和NaCl水溶液浸泡,再用蒸馏水冲洗;
所述Na2CO3水溶液的质量百分浓度为4-7%;具体为6%;
所述NaCl水溶液的质量百分浓度为4-6%;具体为5%。
所述步骤2)乙酸和酶结合进行提取步骤包括:将进行除脂和除杂蛋白处理后的牛皮置于乙酸中溶胀后进行冰浴匀浆,将所得匀浆液中加入乙酸和胃蛋白酶在pH值为2的条件下进行提取;
具体的,所述乙酸的浓度为0.4-0.6mol/L;具体为0.5mol/L;
所述溶胀步骤中,温度为3-5℃;具体为4℃;时间为10-14h;具体为12h;牛皮与乙酸的用量比为1g:10mL;
所述提取步骤中,匀浆液与乙酸的用量比为1g:20mL;
所述胃蛋白酶的用量为提取体系总质量的千分之一;
所述离心步骤中,离心转速为3500-4500转/分钟;具体为4000转/分钟。
所述步骤2)盐析步骤中,所用盐为NaCl;
所述静置分层步骤中,时间为10-14h;具体为12h;
所述离心步骤中,离心转速为7500-8500r/min;时间为15-25min;具体为20min;温度为3-5℃;具体为4℃;
所述透析包括:将所述絮状沉淀用浓度为0.5mol/L的乙酸复溶后,再依次用浓度为0.1mol/L的乙酸和蒸馏水透析,得到胶原蛋白溶液。
所述步骤2)酶解步骤包括:将所得胶原蛋白溶液的pH值调至7.0,加入胃蛋白酶进行酶解,离心取上清液,冷冻干燥,得到所述牛皮胶原蛋白肽粉;
具体的,酶解温度为37℃;时间为7h;
所述离心步骤中,离心转速为7500-8500r/min;时间为15-25min;具体为20min;所述胃蛋白酶的用量为酶解体系总质量的千分之一。
另外,上述本发明方法制备得到的抗氧化肽及该抗氧化肽在抗氧化中的应用及在制备抗氧化产品中的应用,也属于本发明的保护范围。
本发明通过加热、加热-体外模拟消化处理制备高抗氧化活性的牛皮胶原蛋白肽,可增加牛皮利用率,提高牛皮附加值。
附图说明
图1为DPPH自由基清除率、还原力、超氧阴离子(O2 -·)自由基清除率和螯合金属离子能力的测定结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述,但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。下述实施例所用胃蛋白酶购自上海易恩化学技术有限公司,货号:R018603-100g,纯度:3000U/mg;所用胰蛋白酶购自上海麦克林生化科技有限公司,货号:T819002-1g,纯度:potency≥2500units/mg。
实施例1
牛皮经脱毛剔除皮下脂肪和肉,清水洗净,将生皮装入蒸煮袋中,80℃水浴煮制15~20min,用温度计测得牛皮样品中心温度为70℃后,切成1cm×1cm的小方块,在4℃下,用6%(m/m)的Na2CO3水溶液浸泡脱脂,得到的脱脂牛皮用5%(m/m)的NaCl水溶液去除盐溶性非胶原成分。蒸馏水冲洗数次以去除残留NaCl。
称取一定质量上述牛皮置于0.5mol/L的乙酸提取介质中,4℃溶胀12h(料液比1:10),冰浴匀浆。称取一定质量的匀浆液,加入0.5mol/L的乙酸作为提取介质(料液比1:20),调节pH=2,加入胃蛋白酶(用量为提取体系总质量的千分之一)缓慢搅拌提取,离心。向上清液中缓慢加入NaCl,并不断搅拌使其盐析,析出絮状物(NaCl的最终浓度为0.9mol/L)。静置分层12h,4℃离心(8000r/min,20min)。收集絮状沉淀,用0.5mol/L的乙酸复溶,置于0.1mol/L的乙酸溶液中透析,然后用蒸馏水透析,最后冷冻干燥即为牛皮胶原蛋白粉。
取适量的胶原蛋白溶液,调节pH值至7.0,添加胃蛋白酶(用量为酶解体系总质量的千分之一),酶解温度37℃,酶解7h,沸水灭酶活,离心取上清液,冷冻干燥即为牛皮胶原蛋白肽粉,备用。
加热-体外模拟消化抗氧化肽的提取
取50g加热处理后的牛皮置于500mL去离子水中,均质;将样液pH值调至2,加入胃蛋白酶(用量为体系总质量的千分之一),37℃恒温搅拌反应2h;再将溶液pH值调至7.2,加入胰蛋白酶(用量为体系总质量的千分之一),37℃恒温搅拌3h,之后加热至溶液沸腾,保持5~10min使蛋白酶酶失活。冷却后于4℃条件下离心(5 000r/min、15min),收集上清液,抽滤,冷冻干燥,即得到加热-模拟消化牛皮粗肽粉。
抗氧化活性测定
图1所示为该实施例所得DPPH自由基清除率,还原力,超氧阴离子(O2 -·)自由基清除率,螯合金属离子能力的测定结果。
由图1结果得出,生皮胶原蛋白肽的O2-·自由基清除率是GSH的1.0~1.3倍;经加热,牛皮胶原蛋白肽DPPH自由基清除率、还原力和Fe2+螯合能力增强,O2-·自由基清除率降低;经加热-体外模拟消化,DPPH自由基清除率显著降低(P<0.05),还原力、O2-·自由基清除率和Fe2+螯合能力增强,质量浓度为5mg/mL时,显示最高的Fe2+螯合能力44.4%,是GSH的1.21倍,生皮的5.29倍。牛皮经加热烹饪和胃肠道模拟消化后其胶原蛋白肽具有更高的抗氧化活性。牛皮可作为抗氧化肽来源的动物性食物,由于其天然特性,可作为对人类健康有价值的抗氧化剂替代品。

Claims (9)

1.一种制备抗氧化肽的方法,包括:
1)将生牛皮进行煮制,得到煮制后的牛皮;
2)将步骤1)所得煮制后的牛皮进行除脂和除杂蛋白处理后,用乙酸和酶结合进行提取,盐析,静置分层,离心收集絮状沉淀,透析,酶解,得到所述抗氧化肽。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤1)煮制步骤中,温度为70-90℃;具体为80℃;时间为15-20min。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述步骤2)除脂和除杂蛋白为依次用Na2CO3水溶液和NaCl水溶液浸泡,再用蒸馏水冲洗;
所述Na2CO3水溶液的质量百分浓度为4-7%;具体为6%;
所述NaCl水溶液的质量百分浓度为4-6%;具体为5%。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于:所述步骤2)乙酸和酶结合进行提取步骤包括:将进行除脂和除杂蛋白处理后的牛皮置于乙酸中溶胀后进行冰浴匀浆,将所得匀浆液中加入乙酸和胃蛋白酶在pH值为2的条件下进行提取;
具体的,所述乙酸的浓度为0.4-0.6mol/L;具体为0.5mol/L;
所述溶胀步骤中,温度为3-5℃;具体为4℃;时间为10-14h;具体为12h;牛皮与乙酸的用量比为1g:10mL;
所述提取步骤中,匀浆液与乙酸的用量比为1g:20mL;
所述胃蛋白酶的用量为提取体系总质量的千分之一;
所述离心步骤中,离心转速为3500-4500转/分钟;具体为4000转/分钟。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法,其特征在于:所述步骤2)盐析步骤中,所用盐为NaCl;
所述静置分层步骤中,时间为10-14h;具体为12h;
所述离心步骤中,离心转速为7500-8500r/min;时间为15-25min;具体为20min;温度为3-5℃;具体为4℃;
所述透析包括:将所述絮状沉淀用浓度为0.5mol/L的乙酸复溶后,再依次用浓度为0.1mol/L的乙酸和蒸馏水透析,得到胶原蛋白溶液。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法,其特征在于:所述步骤2)酶解步骤包括:将所得胶原蛋白溶液的pH值调至7.0,加入胃蛋白酶进行酶解,离心取上清液,冷冻干燥,得到所述牛皮胶原蛋白肽粉;
具体的,酶解温度为37℃;时间为7h;
所述离心步骤中,离心转速为7500-8500r/min;时间为15-25min;具体为20min;所述胃蛋白酶的用量为酶解体系总质量的千分之一。
7.权利要求1-6任一所述方法制备得到的抗氧化肽。
8.权利要求7所述抗氧化肽在抗氧化中的应用。
9.权利要求7所述抗氧化肽在制备抗氧化产品中的应用。
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