CN113116941B - 一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂及其制备方法 - Google Patents

一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物，其中益生菌复合物的质量百分比为30%‑80%，益生元复合物的质量百分比为20%‑70%；其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。

Description

一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于糖尿病治疗技术领域，具体涉及一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂及其制备方法。
背景技术
2型糖尿病（T2D）病因源于胰岛素抵抗，主要的临床表现为多饮、多尿、多食和体质量下降，当今已成为继癌症、心脑血管疾病之后，严重威胁人类健康的世界第三大疾病。根据国家卫生计生委于2016 年11 月12 日发布的最新数据显示：中国糖尿病患者总人数达到1亿，并将持续增长，中国现已成为世界上拥有糖尿病患者人数最多的国家。随着生物信息学和宏基因组学的快速发展，越来越多的研究表明肠道菌群失调与2型糖尿病密切相关。人体肠道内产丁酸的细菌减少、条件致病菌增多，可增加肠道内的炎症反应，导致胰岛素抵抗，进而罹患2型糖尿病。
2型糖尿病现有的传统治疗方式以口服类药物为主：如磺酰脲类、格列奈类、双胍类、噻唑烷二酮类和α-葡萄糖苷酶抑制剂类等。长期应用这种治疗方法易引起一些副作用，如腹泻、头晕、恶心、食欲不振、低血糖和肝功能损伤等，严重威胁人们的健康。此外，注射胰岛素或胰岛素类似物也是降低血糖的途径。然而每日多次注射药物给糖尿病患者带来了痛苦，价格高昂且伴有低血糖的不良反应。
因此，探索更加安全、更加有效，同时又经济的方法缓解糖尿病的症状对于当前形势是十分必要的，特别是目前糖尿病患者的年龄有低龄化普遍化趋势，因此安全有效的疗法尤为重要。近年来，益生菌与益生元由于其安全性、易获得、成本低廉和无副作用等特点，逐渐成为糖尿病防治的研究热点。益生菌和益生元的混合制剂，它既可发挥益生菌的生理活性，又能选择性地增加益生菌数量，使其作用更加显著和持久。
虽然益生菌对肠道微生态环境能够起到改善的作用，但在益生菌微生态制剂中，单一益生菌制剂更为常见，而结合益生菌与益生元形式的合生元复配剂较少，因此现有技术单独使用益生菌并不能很有效的降低血糖，更不能达到与2型糖尿病口服药等效的结果。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的第一目的是提供一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，所述的益生菌、益生元复合制剂创新的添加了丁酸梭菌及嗜黏蛋白艾克曼菌成分，且益生元纳豆和菊苣粉可起到辅助降糖作用。
本发明的第二目的是提供了一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂及其制备方法。
本发明的第一目的是这样实现的，一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物，其中益生菌复合物的质量百分比为30%-80%，益生元复合物的质量百分比为20%-70%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
进一步的优选方案，益生菌复合物的质量百分比是70%，益生元复合物的质量百分比为30%。
进一步的优选方案，所述益生菌复合物中长双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
进一步的优选方案，所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比10%-20%、乳双歧杆菌占比10%-25%、嗜酸乳杆菌占比20%-35%、丁酸梭菌占比25%-40%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比5%-20%。
进一步的优选方案，所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为30%-85%，菊苣粉的质量百分比为15%-70%。
本发明的第二目的是这样实现的，一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
进一步的优选方案，所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
进一步的优选方案，所述步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
进一步的优选方案，所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
本发明的第三目的是这样实现的，可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，所述的益生菌、益生元复合制剂中加入药学上可以接受的辅料制成粉剂、片剂或胶囊。
本发明的第四目的是这样实现的，可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的应用，所述的益生菌、益生元复合制剂在在制备降血糖、改善胰岛素抵抗，改善糖尿病的药物或保健食品中的应用。
本发明的作用机理：利用宏基因组学手段、16S rRNA测序技术检测健康人群与2型糖尿病人群粪便中的菌群丰度差别，通过菌群差异性分析比较发现多个不同的菌属与 2型糖尿病有关，如：拟杆菌属、罗斯氏菌属、Akk 菌属、双歧杆菌属。进一步通过特异菌属功能基因注释与对比分析，进一步精确到5种肠道微生物（长双歧杆菌、乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌Akkermansiamuciniphila），它们可减缓2型糖尿病的形成，对2型糖尿病有一定的预防作用。其中，乳双歧杆菌会导致糖原（葡萄糖在体内储存的主要形式）合成的增加，同时也会增加葡萄糖的吸收，从而降低血糖水平。丁酸梭菌可产生丁酸，丁酸是一种由细菌发酵产生的短链脂肪酸SCFA，许多研究已经指出，丁酸与肠道上皮细胞结合，分泌胰高血糖素样肽-1，从而抑制胰高血糖素的分泌，有抗糖尿病的作用。嗜黏蛋白阿克曼菌可保护肠道上皮，并且有证据表明，它可以改善胰岛素敏感性和人体的其他代谢反应。长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在预防呼吸道感染，减轻发热、流涕和咳嗽等感冒症状上表现优秀。这些菌种是肠道中的常见微生物，有助于改善肠道健康。
作为益生菌的“食物”，益生元可能通过两种不同的机制缓解2型糖尿病。首先，益生元可增加粪便中胆固醇的***，从而导致较低的胆固醇吸收。另一个机制是通过肠道细菌微生物群的选择性发酵产生短链脂肪酸。菊苣粉作为一种纤维成分，可参与微生物的发酵产生短链脂肪酸。纳豆是用枯草芽孢杆菌发酵大豆制成，富含维生素K2，发酵过程产生了多种生物活性物质，如纳豆激酶、多糖、皂甙、大豆异黄酮、多种氨基酸等，具有溶解血栓、调节血指、血糖、血压、抗氧化的作用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、 复合制剂中，活菌菌粉中创新性的加入灭活的嗜黏蛋白艾克曼菌粉，提高了所得益生菌与益生元组合物改善糖尿病的功效。
2、本发明采用冻干保护剂，结合预冻、冷冻干燥工艺，得到的冻干菌粉乳酸菌活性高。本发明益生菌组合物中，益生菌活菌总含量达到1011CFU/g以上。
3、本发明制备过程中所采用的纳豆和菊苣原料为药食同源，有利于肠道微生态平衡，与使用药物相比，本发明所制得的益生菌粉在改善糖尿病的同时，毒副作用小、安全性好。
4、本发明所制得的复合制剂可用于即食服用，能显著降低大鼠的血糖水平，显著降低血脂，并恢复胰岛素和肝糖原的含量，具有改善2型糖尿病的功能。复合制剂原材料容易获得，制备方法简单，成本低，易于工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
实施例1
一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物；其中益生菌复合物的质量百分比为30%，益生元复合物的质量百分比为70%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
所述益生菌复合物长双歧杆菌活菌数为109CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比10%、乳双歧杆菌占比10%、嗜酸乳杆菌占比35%、丁酸梭菌占比40%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比5%。
所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为30%，菊苣粉的质量百分比为70%。
所述可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
所述益生菌复合物粉的制备方法的步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
实施例2
一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物；其中益生菌复合物的质量百分比为40%，益生元复合物的质量百分比为60%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
所述益生菌复合物长双歧杆菌活菌数为109CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比20%、乳双歧杆菌占比25%、嗜酸乳杆菌占比20%、丁酸梭菌占比25%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比5%。
所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为40%，菊苣粉的质量百分比为60%。
所述可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
所述益生菌复合物粉的制备方法的步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
实施例3
一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物；其中益生菌复合物的质量百分比为50%，益生元复合物的质量百分比为50%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
所述益生菌复合物长双歧杆菌活菌数为109CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比10%、乳双歧杆菌占比25%、嗜酸乳杆菌占比20%、丁酸梭菌占比25%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比20%。
所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为60%，菊苣粉的质量百分比为40%。
所述可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
所述益生菌复合物粉的制备方法的步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
实施例4
一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物；其中益生菌复合物的质量百分比为60%，益生元复合物的质量百分比为40%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
所述益生菌复合物长双歧杆菌活菌数为109CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比20%、乳双歧杆菌占比10%、嗜酸乳杆菌占比20%、丁酸梭菌占比40%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比10%。
所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为70%，菊苣粉的质量百分比为30%。
所述可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
所述益生菌复合物粉的制备方法的步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
实施例5
一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物；其中益生菌复合物的质量百分比为70%，益生元复合物的质量百分比为30%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
所述益生菌复合物长双歧杆菌活菌数为109CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比15%、乳双歧杆菌占比18%、嗜酸乳杆菌占比28%、丁酸梭菌占比29%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比10%。
所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为60%，菊苣粉的质量百分比为40%。
所述可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
所述益生菌复合物粉的制备方法的步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
实施例6
一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物；其中益生菌复合物的质量百分比为80%，益生元复合物的质量百分比为20%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分包括以下5种益生菌：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成。
所述益生菌复合物长双歧杆菌活菌数为109CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌，109～1010个/g。
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比10%、乳双歧杆菌占比10%、嗜酸乳杆菌占比20%、丁酸梭菌占比40%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比20%。
所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为85%，菊苣粉的质量百分比为15%。
所述可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉。
所述益生菌复合物粉的制备方法的步骤2中冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
益生菌、益生元复合制剂功效研究数据如下：
一、不同实施例组的降血糖效果研究
（1）糖尿病大鼠模型的建立及给药方法（实施例1-实施例6）
取成年雄性大鼠(150g-170g)80只，随机分为8组：空白组（N）、糖尿病模型组（M）、实施例1制剂干预组，实施例2制剂干预组，实施例3制剂干预组，实施例4制剂干预组，实施例5制剂干预组，实施例6制剂干预组，每组含大鼠10只。连续4周喂食高脂饲料，空白组喂食普通饲料。4周后，禁食 (不禁水)12h过夜，一次性腹腔注射STZ链脲佐菌素溶液55mg/kg，3d后禁食不禁水12h后检测空腹血糖 (FBG) ≥250 mg / dL（高血糖）的大鼠用于实验。正常对照大鼠注射柠檬酸缓冲液pH 4.7。
动物分组及给药方法：上述得到的7组糖尿病大鼠模型与1组空白对照组，其中6组实验组糖尿病大鼠模型灌胃给予复合制剂，每日给药剂量设为 1.0g/kg，空白组和糖尿病模型组（M）灌胃相同体积的生理盐水。每天称体重和测量空腹血糖值 FBG值1次，根据体重调整用药剂量，连续给药4周。实验结束后测量空白对照组、实验组大鼠的空腹血糖
表1各组大鼠空腹血糖测定结果（n=10）
注：与对照组对比，*p＜0 .05，**p＜0 .01。
二、不同剂量益生菌、益生元复合制剂的降血糖血脂效果研究
取成年雄性大鼠(150g-170g)50只，随机分为五组：空白组（N）、糖尿病模型组（M）、复合制剂低剂量干预组（YL）、复合制剂中剂量干预组（YM）、复合制剂高剂量干预组（YH）每组含大鼠10只。连续4周喂食高脂饲料，空白组喂食普通饲料。4周后，禁食 (不禁水)12h过夜，一次性腹腔注射STZ链脲佐菌素溶液55mg/kg，3d后禁食不禁水12h后检测空腹血糖(FBG) ≥250 mg / dL（高血糖）的大鼠用于实验。正常对照大鼠注射柠檬酸缓冲液pH 4.7。
动物分组及给药方法：上述得到的4组糖尿病大鼠模型与1组空白对照组，其中3组实验组糖尿病大鼠模型灌胃给予低中高剂量复合制剂（低剂量组每日给药剂量设为 0.5g/kg，中剂量组每日给药剂量设为 1.0g/kg，高剂量组每日给药剂量设为 1.5g/kg），空白组与模型组灌胃相同体积的生理盐水。每天称体重和测量空腹血糖值 FBG值1次，根据体重调整用药剂量，连续给药4周。实验结束后测量空白对照组、模型组、低中高剂量组大鼠的空腹血糖，血清胆固醇TC、甘油三酯TG含量，血浆胰岛素和肝糖原含量。在本实验中，益生菌、益生元复合制剂的制备按照实施例5的配方和方法制备。
（1）益生菌与益生元复合制剂对糖尿病模型大鼠血糖的影响
上述五组大鼠给药4周后，空腹血糖结果如表1所示。
表2 各组大鼠空腹血糖测定结果（n=10）
注：与对照组对比，*p＜0 .05，**p＜0 .01。
由表2可知，在高脂饲料喂食后，又经STZ注射，使大鼠的胰岛细胞功能遭到部分破坏，造成外周组织对胰岛素不敏感，所以各组大鼠的空腹血糖明显升高，各组动物经过30天的给药治疗后，与模型组对比，各给药动物组血糖值具有不同程度的下降。其中益生菌、益生元复合制剂低、中、高剂量组血糖下降率分别为12.06％，24.92％，46.15％，复合菌粉高剂量组（JH）下降率为14.83%，略强于复合制剂的低剂量组。结果表明，前述益生菌、益生元复合制剂具有显著的降血糖作用，强于复合菌粉的降糖效果，且随着剂量增加效果更加显著，该复合制剂调节血糖效果良好。
（2）益生菌、益生元复合制剂对糖尿病模型大鼠血脂的影响
表3各组大鼠TC和TG含量水平测定
注：与对照组对比，*p＜0 .05，**p＜0 .01。
由表3可知，与模型对照组比较，益生菌、益生元复合制剂低、中、高剂量给药组TC与TG均有显著下降趋势，且中、高剂量组TC、 TG均显著降低(p＜0 .01)，复合菌粉组的TC、TG显著减低，效果介于益生菌、益生元复合制剂低、中剂量之间。结果表明，优于复合菌粉给药组，益生菌、益生元复合制剂对糖脂代谢紊乱大鼠具有降血脂作用，且高剂量组对糖脂代谢紊乱大鼠的降血脂作用显著，益生菌、益生元复合制剂可以显著降低大鼠的血脂使其恢复至空白组的水平。
（3）益生菌、益生元复合制剂对糖尿病模型大鼠胰岛素和肝糖原的影响
表4 各组大鼠胰岛素和肝糖原含量
注：与对照组对比，*p＜0 .05，**p＜0 .01。
由表4可知，与模型对照组动物比较，复合菌粉给药组与益生菌、益生元复合制剂各剂量给药组动物胰岛素含量和肝脏糖原含量均有增加趋势，其中益生菌、益生元复合制剂高剂量组胰岛素含量和肝脏糖原含量增加最为显著，接近正常组水平，复合菌粉组效果比益生菌、益生元复合制剂中、高剂量组要差。结果表明，益生菌、益生元复合制剂中益生菌与益生元成分的组合，对具有促进糖脂代谢紊乱大鼠肝糖原的生成及恢复胰岛素含量水平作用显著，优于单独使用益生菌组合物的效果。
通过本发明应用例可以看到，益生菌、益生元复合制剂在改善链脲佐菌素腹腔注射联合高脂饲料喂养诱导的2型糖尿病大鼠模型糖脂代谢方面有着明显的促进作用，显著改善诱导的2型糖尿病大鼠模型糖脂代谢病理状态，优于单独使用益生菌组合物的效果，在降糖降脂功能性产品开发方面具有很好的应用前景。

Claims (6)

1.一种可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，其特征在于：包括以下成分：益生菌复合物和益生元复合物，其中益生菌复合物的质量百分比为70%，益生元复合物的质量百分比为30%；
其中，益生菌复合物中益生菌成分由以下5种益生菌组成：长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌和嗜黏蛋白阿克曼菌；
其中，所述益生元复合物由纳豆冻干粉和菊苣粉组成，所述益生元复合物中，纳豆冻干粉的质量百分比为30%-85%，菊苣粉的质量百分比为15%-70%；
所述益生菌复合物中长双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，乳双歧杆菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜酸乳杆菌活菌数为109～1010CFU/g，丁酸梭菌活菌数为109～1010CFU/g，嗜黏蛋白阿克曼菌为灭活菌109～1010个/g；
所述复合益生菌按照质量分数计，长双歧杆菌占比10%-20%、乳双歧杆菌占比10%-25%、嗜酸乳杆菌占比20%-35%、丁酸梭菌占比25%-40%，嗜黏蛋白阿克曼菌占比5%-20%。
2.一种权利要求1所述的可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
 (1)称量菊苣粉和纳豆冻干粉，混合备用；
(2)将过筛后的益生元复合物粉与益生菌复合物粉进行混合均匀，进一步制成粉剂。
3.根据权利要求2所述的缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，其特征在于：所述益生菌复合物粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）菌种活化与发酵培养
将长双歧杆菌、乳双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌菌种在MRS培养基中活化，嗜黏蛋白阿克曼菌在脑心浸液肉汤培养基中活化；之后分别按照占培养基总质量4％的接种量接种到培养液中，于厌氧条件37℃下培养16~20h，其中嗜黏蛋白阿克曼菌需培养32~48h，得到培养液；活化液在培养基上划线37℃下培养48h，挑取单菌落在37℃下发酵培养液中培养16~20h；4℃，12000rpm条件下将培养液进行低温高转速离心处理，弃去上清液，得到菌体；
（2）益生菌冻干粉的制备方法
将步骤1中得到的菌体用缓冲液清洗2~3次后用两倍的冻干保护剂重悬，将重悬液采用真空冷冻法进行冷冻干燥，得到冻干品，将冻干品进行磨粉，过筛，即得目标产品益生菌复合物粉；
冻干保护剂的成分为脱脂奶粉、维生素E、谷氨酸钠。
4.根据权利要求2所述的缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的制备方法，其特征在于：所述纳豆冻干粉的制备方法，包括以下步骤：大豆清洗干净后按质量比1:3的比例加入纯水浸泡24h；浸泡后的大豆在固体发酵罐中121℃灭菌蒸煮40min；发酵罐内的大豆冷却至40～50℃后按原料重量的2％～3%接种枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备中控制温度37～42℃，溶氧5.0mg/L；发酵后的纳豆放入真空冷冻干燥机进行干燥，干燥时间为24h；冻干后的纳豆在粉碎机中进行粉碎、过80目筛，得纳豆冻干粉。
5.一种如权利要求1～4任一所述的可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂，其特征在于：所述的益生菌、益生元复合制剂制成粉剂、片剂或胶囊。
6.一种如权利要求1～4任一所述的可缓解2型糖尿病的益生菌、益生元复合制剂的应用，其特征在于：所述益生菌、益生元复合制剂在制备降血糖、改善胰岛素抵抗、改善糖尿病的药物的应用。
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