CN113116804B

CN113116804B - 化妆品材料组合物及其制备方法以及化妆品

Info

Publication number: CN113116804B
Application number: CN201911425917.5A
Authority: CN
Inventors: 陈超; 李亨载; 朴晟均; 李昌炫; 洪俊基; 赵振勋
Original assignee: Shanghai Ruidian Biotechnology Co ltd; New Life Cosmetics Technology Shanghai Co ltd
Current assignee: Shanghai Ruidian Biotechnology Co ltd; Shanghai Ruyan Cosmetics Co ltd
Priority date: 2019-12-31
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2023-03-21
Anticipated expiration: 2039-12-31
Also published as: CN113116804A

Abstract

本申请涉及化妆品领域，具体而言，涉及一种化妆品材料组合物及其制备方法以及化妆品。该化妆品材料组合物包括杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物。水溶性萃取物和脂溶性萃取物具有协同作用，二者协同能够增强抗氧化功效，并且具有紫外线阻隔效果，能够防止皮肤老化。包含这种组合物的化妆品使得该化妆品具有优秀地抗氧化功效、紫外线阻隔效果并且能够防止皮肤老化，减小皱纹的产生。该方法能够获得同时包含杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物的化妆品材料组合物，二者协同能够增强抗氧化功效，并且具有紫外线阻隔效果，能够防止皮肤老化。

Description

化妆品材料组合物及其制备方法以及化妆品

技术领域

本申请涉及化妆品领域，具体而言，涉及一种化妆品材料组合物及其制备方法以及化妆品。

背景技术

目前皮肤老化可分为老化原因源自内部的内因性老化和源自外部的外因性老化。已知，内因性皮肤老化是随时间经过而发生的自然老化现象，活性氧是直接、间接的原因。据报道，外因性皮肤老化是由包括紫外线的各种外部压力而发生的老化现象，并且会增加粗而深的皱纹、皮肤弹性降低，色素沉积等，甚至皮肤癌的发生。

由于外因性皮肤老化的原因大部分为阳光，因此还被称为光老化。光老化的临床特征比内因性老化更严重，且更早地出现老化。光老化以真皮的异常为主要显著特征，胶原纤维的减少和弹性纤维物质的积累变得明显。

太阳光包含的紫外线可分为UVA(400~320nm)、UVB(320~280nm)及UVC(280~200nm)，穿过大气成分时，作为最强的紫外线即UVC在臭氧层被吸收，UVA和UVB到达地表。当紫外线UVB波长照射皮肤时，由于紫外线波长的能量穿过表皮并在毛细血管周围诱发炎症，因此仅通过短时间的照射也能够产生皮肤红斑或浮肿。此时，还会伴随发热或疼痛，当没有对此进行适当的处置时，随时间经过会产生色素沉积，还会产生皮肤脱皮。一方面，最近的研究表明，当长波长紫外线UVA照射到皮肤时,由于照射能量到达真皮层并损伤胶原弹性纤维，因此诱发皮肤皱纹或弹性降低。

紫外线照射的影响不仅限于皮肤。据报道，当人体长时间暴露于紫外线照射时，由于免疫功能下降或DNA损伤，皮肤癌发生的风险增加。因此，为了减少紫外线照射到人体的风险，一直在研究关于紫外线阻隔剂的技术。

紫外线阻隔剂基本分为紫外线吸收剂和紫外线散射剂。早期的紫外线吸收剂主要的方案是仅将有机类紫外吸收剂溶解在液体油中，或简单地将其乳化。有机类紫外线吸收剂可举出水杨酸衍生物、肉桂酸衍生物或二苯甲酮衍生物等的有机化合物。特征在于，它们吸收紫外线并变成激发态(excitedstate)，并将该能量转换成对皮肤刺激较小的热量或光能进行释放，从而回归到基态(groundstate)。

然而，这种早期的有机类紫外线吸收剂的使用感不佳，如涂抹在皮肤时仍持续油腻等，在大量混合乳化特性上有效剂量的技术存在局限。此外，在用于剂型时，由于其自身的刺激性，可能会导致发红或皮肤损伤，公开的有机紫外线阻隔剂指定了使用量的限制浓度。

为了克服这些问题，按照混合无机紫外线散射剂的方向进行了研究。氧化锌或氧化钛的金属氧化物通过周期性的电位场，存在电子的能量状态采用带结构，价带的上端部和导带的下端之间的能量差称为带隙能量(bandgapenergy)。氧化锌的带隙能量为3.2eV，当照射其以上的能量时，电子被激发，该电子间接跃迁，并在320nm以下发生光激发，从而被用作UVB及UVA波阻隔剂。氧化钛也具有相同的作用，并用作UVB波阻隔剂。

然而，用作无机紫外线散射剂的氧化钛的微粒粉体对UVB波的阻隔效果虽高，但在混合到紫外线阻隔剂时，皮肤上会形成金属蓝膜，难以用于美容个护用品，氧化钛具有的催化活性足够强，足以将有机物分解为氢和氧，具有劣化紫外线阻隔剂的其他成分的性能的倾向。这种倾向对能够用作UVB及UVA波阻隔剂的氧化锌也是如此。

因此，为了解决这种问题，迫切需要开发一种天然紫外线阻隔剂来代替现有的有机及无机类紫外线阻隔剂。

一方面，微藻是指大小小到用显微镜才能观察的单细胞形状的原核或真核藻类，与植物同样具有光合作用机制，能够光独立生长。这些微藻类根据环境条件具有***性的繁殖力，并且由于可进行培养，因此不会破坏现有的生态***，可以用于生产有用物质或解决环境问题的各种方面。

随着时间的经过，对微藻的关注不断增加，2004年~2009年，对微藻的关注度偏集中于美国，但此后扩大到了亚洲及太平洋地区，其中如韩国、马来西亚、印度等亚洲地区给予了极大关注（出处：***trends，microalgae）。

尤其，如螺旋藻(Spirulina)、杜氏盐藻(Dunaliella)、小球藻(Chlorella)、裂殖壶菌(Schizochytrium)、裸藻(Euglena)等微藻类用作食品添加剂、化妆品、保健食品、医药品，还用于生产用作抗氧化剂原料的类胡萝卜素(Carotenoid)、藻花青素(Phycocyanin)、脂质(EPA、DHA)等高附加价值产物的生产。然而，与丰富的种类相比，应用微藻的工业领域至今在其规模和多样性上仍然非常有限。

发明内容

本申请实施例的目的在于提供一种化妆品材料组合物及其制备方法以及化妆品，其旨在开发一种有助于防止皮肤老化的化妆品。

第一方面，本申请提供一种化妆品材料组合物，包括：

杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物。

进一步地，杜氏盐藻的脂溶性萃取物是杜氏盐藻水溶性萃取物的脂溶性萃取物。

进一步可选地，杜氏盐藻的水溶性萃取物为醇萃取物，杜氏盐藻的脂溶性萃取物是杜氏盐藻醇萃取物的烷烃、脂肪酸、油脂或者脂肪的萃取物。

进一步可选地，杜氏盐藻的水溶性萃取物为乙醇萃取物，杜氏盐藻的脂溶性萃取物是乙醇萃取物的正己烷萃取物。

该化妆品材料组合物，杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物具有协同作用，二者协同能够增强抗氧化功效，并且具有紫外线阻隔效果，能够防止皮肤老化。

第二方面，本申请提供一种化妆品，包括前述的化妆品材料组合物以及载体。

该化妆品包含前述的化妆品材料组合物，使得该化妆品具有优秀地抗氧化功效、紫外线阻隔效果并且能够防止皮肤老化，减小皱纹的产生。该化妆品具有优异的紫外线阻隔能力，且具有储存安全性，并且具有优异的抗氧化、美白、改善皱纹效果，可有效地用作防止因紫外线引起的皮肤老化的功能性化妆品。

第三方面，本申请提供一种化妆品材料组合物的制备方法，包括以下步骤：

以杜氏盐藻为萃取对象，采用水溶性萃取剂，萃取获得杜氏盐藻的水溶性萃取物；

取部分所述杜氏盐藻的水溶性萃取物作为萃取对象，采用脂溶性萃取剂，萃取获得杜氏盐藻的脂溶性萃取物；

将所述杜氏盐藻的水溶性萃取物和所述杜氏盐藻的脂溶性萃取物混合。

采用该方法能够获得同时包含杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物的化妆品材料组合物，这种化妆品材料组合物中的杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物具有协同作用，二者协同能够增强抗氧化功效，并且具有紫外线阻隔效果，能够防止皮肤老化。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1是通过杜氏盐藻油和乙醇萃取物处理的人源性角质形成细胞HaCaT细胞的细胞毒性评估结果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

本申请实施方式提供了一种化妆品材料组合物，其包括：杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物。

杜氏盐藻(Dunaliella Salina)是具有两个鞭毛的微藻，栖息在盐度高的湖泊或海洋中。

进一步地，上述的杜氏盐藻的水溶性萃取物是采用水溶性萃取剂萃取杜氏盐藻获得的萃取物，这种萃取物能够溶于水。

可选地，上述的水溶性萃取剂可以选择醇类等。

进一步地，上述的杜氏盐藻的脂溶性萃取物是采用脂溶性萃取剂萃取杜氏盐藻得到的萃取物，这种萃取物能够溶于有机物。

可选地，上述的脂溶性萃取剂可以选择烷烃、脂肪酸、油脂、脂肪等。

在本申请一些实施方式中，该化妆品材料组合物中杜氏盐藻的脂溶性萃取物是杜氏盐藻水溶性萃取物的脂溶性萃取物。即采用脂溶性萃取剂，以前述获得的杜氏盐藻水溶性萃取物作为萃取对象，萃取获得。

进一步地，上述的杜氏盐藻的水溶性萃取物为醇萃取物，杜氏盐藻的脂溶性萃取物是杜氏盐藻醇萃取物的烷烃、脂肪酸、油脂或者脂肪的萃取物。

进一步可选地，上述的醇溶剂可以选择甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇等。上述的脂溶性溶剂可以选择石蜡、异丙醚、正己烷、特丁基叔丁基醚、异丙醚等。

在本申请一些实施方式中，该化妆品材料组合物，杜氏盐藻的水溶性萃取物为乙醇萃取物，杜氏盐藻的脂溶性萃取物是乙醇萃取物的正己烷萃取物，即采用正己烷作为溶剂，以前述获得的杜氏盐藻乙醇萃取物作为萃取对象，萃取获得。

进一步地，按照质量分数计，杜氏盐藻的水溶性萃取物在化妆品材料组合物中添加量为0.001~1%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物在化妆材料组合物中添加量为0.02~1%。

进一步可选地，按照质量分数计，杜氏盐藻的水溶性萃取物在化妆品材料组合物中添加量为0.002~0.9%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物在化妆材料组合物中添加量为0.03~0.9%。

示例性地，按照质量分数计，在化妆品材料组合物中，杜氏盐藻的水溶性萃取物的添加量为0.005%、杜氏盐藻的脂溶性萃取物的添加量为0.05%；或者杜氏盐藻的水溶性萃取物的添加量为0.01%、杜氏盐藻的脂溶性萃取物的添加量为0.1%；或者杜氏盐藻的水溶性萃取物的添加量为0.1%、杜氏盐藻的脂溶性萃取物的添加量为0.8%。

进一步地，按照质量百分浓度计，杜氏盐藻的水溶性萃取物在化妆品材料组合物中浓度为0.01~3.00%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物在化妆品材料组合物中浓度为0.1~5.00%。

进一步可选地，按照质量百分浓度计，杜氏盐藻的水溶性萃取物在化妆品材料组合物中浓度为0.1~1.00%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物在化妆品材料组合物中浓度为0.2~3.00%。

示例性地，按照质量百分浓度计，在化妆品材料组合物中，杜氏盐藻的水溶性萃取物的浓度为0.5%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物的浓度为1.0%；或者杜氏盐藻的水溶性萃取物的浓度为3.0%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物的浓度为0.2%；或者杜氏盐藻的水溶性萃取物的浓度为1.00%；杜氏盐藻的脂溶性萃取物的浓度为0.1%。

本申请实施方式提供的化妆品材料组合物可以单独或与其他成分重复使用。另外，化妆品材料组合物可根据常规的使用方法使用，使用次数可根据使用者的皮肤状态或喜好而变化。

本申请的一些实施方式还提供一种化妆品，包括前述实施方式提供的化妆品材料组合物以及载体。

该化妆品通过包含前述实施方式提供的化妆品材料组合物，使得该化妆品具有优秀地抗氧化功效、紫外线阻隔效果并且能够防止皮肤老化，减小皱纹的产生。

进一步地，该化妆品的剂型包括悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、膏体、乳液、粉末、皂体、含表面活性剂洗面奶、油、粉末粉底液、乳浊液粉底液、蜡粉底液、面膜、按摩霜或者喷雾中的任意一种。

在本申请的一些实施方式中，当该化妆品的剂型为糊剂或凝胶时，载体包括动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅（silicone）、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌中的至少一种。

在本申请的一些实施方式中，当该化妆品的剂型为粉末或喷雾时，载体包括乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末；进一步可选地，当剂型为喷雾时，载体包括推进剂，推进剂包括氯氟烃（Chlorofluorohydrocarbon）、丙烷、丁烷或者二甲醚中的至少一种。

在本申请的一些实施方式中，当该化妆品的剂型为溶液或乳浊液时，载体的溶剂、增溶剂或乳化剂包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇或脱水山梨醇的脂肪酸酯中的至少一种。

在本申请的一些实施方式中，当该化妆品的剂型为悬浮液时，载体包括：

如水、乙醇或丙二醇的液状稀释剂；

如乙氧基异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯或聚氧乙烯山梨糖醇酐酯的悬浮剂；或者

微晶纤维素、间氢氧化铝、膨润土、洋菜胶、黄芪胶中的至少一种。

在本申请的一些实施方式中，当该化妆品的剂型为含表面活性剂洗面奶时，载体包括脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙磺酸盐、咪唑啉鎓衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯中的至少一种。

该化妆品具有优异的紫外线阻隔能力，且具有储存安全性，并且具有优异的抗氧化、美白、改善皱纹效果，可有效地用作防止因紫外线引起的皮肤老化的功能性化妆品。

本申请的一些实施方式还提供一种化妆品材料组合物的制备方法，包括以下步骤：

取部分杜氏盐藻的水溶性萃取物作为萃取对象，采用脂溶性萃取剂，萃取获得杜氏盐藻的脂溶性萃取物；

将杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物混合。

进一步地，水溶性萃取剂包括醇类，进一步可选地，醇类包括甲醇、乙醇、异丙醇或者正丙醇。

脂溶性萃取剂包括烷烃、脂肪酸、油脂或者脂肪中的任意一种，进一步可选地，脂溶性萃取剂包括石蜡、异丙醚、正己烷、特丁基叔丁基醚、异丙醚中的任意一种。

进一步地，在本申请的一些实施方式中，该化妆品材料组合物的制备方法，包括以下步骤：

S1、采用乙醇萃取杜氏盐藻，获得杜氏盐藻的水溶性萃取物。

具体而言，在常温条件下进行，采用乙醇溶液萃取杜氏盐藻，可选地，萃取时间2~5小时，乙醇溶液的质量分数为60~80%，每1g杜氏盐藻采用100~300ml乙醇溶液进行萃取。

进一步可选地，在常温条件下进行，采用乙醇溶液萃取杜氏盐藻，可选地，萃取时间2.5~4.5小时，乙醇溶液的质量分数为65~75%，每1g杜氏盐藻采用150~250ml乙醇溶液进行萃取。

示例性地，在常温条件下进行，采用乙醇溶液萃取杜氏盐藻，可选地，萃取时间3小时，乙醇溶液的质量分数为70%，每1g杜氏盐藻采用200ml乙醇溶液进行萃取。

进一步地，对杜氏盐藻的水溶性萃取物采用0.5~1.5㎛孔径的滤纸进行过滤，然后将滤液浓缩、干燥。

进一步可选地，对杜氏盐藻的水溶性萃取物采用0.6~1.3㎛孔径的滤纸进行过滤，然后将滤液浓缩、干燥。

示例性地，采用1㎛孔径滤纸过滤杜氏盐藻的水溶性萃取物后，将滤纸下方的滤液通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得萃取物。

S2、采用正己烷萃取步骤S1制得的杜氏盐藻的水溶性萃取物，获得杜氏盐藻的脂溶性萃取物。以下将“杜氏盐藻的脂溶性萃取物”简称为杜氏盐藻油。

具体而言，在常温条件下进行，采用正己烷溶液萃取杜氏盐藻的水溶性萃取物，可选地，萃取时间2~5小时；以质量比计，正己烷溶液的添加量为杜氏盐藻的水溶性萃取物的10~20倍，进一步可选地，正己烷溶液的质量分数为95~100%。

进一步可选地，在常温条件下进行，采用正己烷溶液萃取杜氏盐藻的水溶性萃取物，可选地，萃取时间2.5~4.5小时；以质量比计，正己烷溶液的添加量为杜氏盐藻的水溶性萃取物的12~18倍，进一步可选地，正己烷溶液的质量分数为96~100%。

示例性地，在常温条件下进行，采用正己烷溶液萃取杜氏盐藻的水溶性萃取物，可选地，萃取时间3小时，获得杜氏盐藻油。其中，以质量比计，正己烷溶液的添加量为杜氏盐藻的水溶性萃取物的15倍，进一步可选地，正己烷溶液的质量分数为100%。

进一步地，还对杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物采用0.5~1.5㎛孔径的滤纸进行过滤，然后将滤液浓缩、干燥。

以下结合实施例和对比例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述：

实施例1

提供一种化妆品材料组合物，是这样制得的：

取30g杜氏盐藻(Dunaliella Salina)，采用600mL的70wt%的乙醇，在常温条件下萃取3小时，利用1㎛孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻乙醇萃取物。

然后，取适量上述制得的杜氏盐藻乙醇萃取物，并向其中添加10倍重量的100 wt%正己烷，在常温条件萃取3小时，利用1μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得萃取物，即杜氏盐藻油。

实施例2

提供一种化妆品材料组合物，是这样制得的：

然后，取适量上述制得的杜氏盐藻乙醇萃取物，并向其中添加20倍重量的100 wt%正己烷，在常温条件萃取3小时，利用1μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得萃取物，即杜氏盐藻油。

实施例3

提供一种化妆品材料组合物，是这样制得的：

取30g杜氏盐藻(Dunaliella Salina)，采用900mL的60wt%的乙醇，在常温条件下萃取5小时，利用1.5㎛孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻乙醇萃取物。

然后，取适量上述制得的杜氏盐藻乙醇萃取物，并向其中添加15倍重量的95 wt%正己烷，在常温条件萃取4小时，利用1.5μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得萃取物，即杜氏盐藻油。

实施例4

提供一种化妆品材料组合物，是这样制得的：

取30g杜氏盐藻(Dunaliella Salina)，采用300mL的80wt%的乙醇，在常温条件下萃取2小时，利用1㎛孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻乙醇萃取物。

然后，取适量上述制得的杜氏盐藻乙醇萃取物，并向其中添加20倍重量的96wt%正己烷，在常温条件萃取2小时，利用0.5μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得萃取物，即杜氏盐藻油。

对实施例1-4提供的化妆品材料组合物的性能进行考察。

实验例1-细胞毒性评价

实验细胞株：HaCaT (human keratinocyte)

测试浓度：实施例1~4提供的杜氏盐藻乙醇萃取物(0.01~3%(w/v))和杜氏盐藻油(0.2~5%(w/v))

测试方法：

将细胞接种到培养皿的底部后，分别添加合适的培养基，在37℃、含有5%二氧化碳的培养箱中培养。在96-孔板中以1×105cells/mL的浓度稀释细胞，以100mL接种后，培养24小时。培养后，除去所有培养基，并使用不含血清的培养基，将样品稀释至适当的浓度，并以每孔100mL处理到3孔中，然后进一步培养24小时。24小时后，加入以5mg/mL的浓度溶于PBS的20mL的MTT试剂，并培养4小时。除去所有含有MTT试剂和样品的培养基后，向每个孔中加入100mL异丙醇(isopropanol)并搅拌15~20分钟，并使用ELISA读数器在570nm处测量吸光度值。

测试结果，见附图1。

从图1可以看出，杜氏盐藻乙醇萃取物和杜氏盐藻油各自的样品中，细胞毒性浓度依存性地增加。杜氏盐藻乙醇萃取物和杜氏盐藻油混合的样品中，细胞毒性随着油的浓度增加而增强。

但是，在进行实验的样品的所有浓度中，均确认了90%以上的细胞存活率，因此，可评价为安全的材料。

实验例2-抗氧化功效评价–细胞内ROS生成抑制能力评价

原理：ROS的生成以利用DCF(dichlorofluorescein)的荧光物质产生的强度来检测

实验细胞株：HaCaT(Human keratinocyte)

测试浓度：杜氏盐藻乙醇萃取物 (0.001、0.01、0.1、0.5、1%)、杜氏盐藻油(0.02、0.01、0.1、0.5、1%)

测试方法：

在96孔板中以1×105cells/mL的浓度稀释HaCaT细胞，以100mL接种后，在37℃、5%的CO₂培养箱中培养24小时。培养后，除去所有培养基，并使用不含血清的培养基将样品稀释至适当的浓度(10~200μg/mL)，并以每孔100mL处理到各孔，然后培养24小时。24小时后，除去培养基，并加入200μL的PBS并洗涤。重复此过程2~3次。将溶解在DMSO中的DCFH-DA稀释至20μM（在PBS中）并在孔中加入100μL，然后在37°C、5％CO₂的培养箱中培养20分钟。除去DCFH-DA后，加入200-300μL的PBS并洗涤。将该过程重复3次。稀释100μM的H₂O₂（在PBS中）并在每个孔中加入100μL后，在培养箱中培养，并使用ELISA读数器（485nm/535nm）测量荧光。

测试结果见表1。

表1检测杜氏盐藻油和乙醇萃取物的抗氧化能力的结果

表2 将测得的实验结果与预测值进行比较的结果

结合表1和表2可以看出：

1)杜氏盐藻油的细胞内ROS生成抑制率浓度依存性地增加。

2)杜氏盐藻乙醇萃取物的细胞内ROS生成抑制率浓度依存性地增加。

3)混合杜氏盐藻油和乙醇萃取物的样品的细胞内ROS生成抑制率随萃取物的浓度增加而增强。

4)对混合杜氏盐藻油和乙醇萃取物时的协同效果进行比较的结果显示，与最佳的预期值相比，在实际值中表现出提升的ROS产生抑制率的浓度是，杜氏盐藻油和乙醇提取物分别为“0.1％+1％”和“3％+0.1％”样品，这相比于预期值，细胞内ROS产生抑制率分别增加了113%、171%。

所述预期值为“乙醇萃取物实验值+杜氏盐藻油实验值”，实际值高于预期值，可以判断本申请的杜氏盐藻油和乙醇萃取物的复合使用具有协同效果。

实验例3-紫外线阻隔性能考察

采用实施例1或实施例2提供的化妆品材料组合物制备得到防晒霜。该防晒霜具体组分见表3，组分的单位均为“g”。表格中蒸馏水所在行“To 100”是指向对照组以及剂型例1~剂型例4组中，分别添加蒸馏水，使得各组的整体含量均达到100g。

表3防晒霜的组分

1、对上述制得的防晒霜的SPF增强效果进行考察。

测试方法：在没有皮肤疾病的18岁至60岁的健康男、女性中，选择了10人以上的最少红斑量在20mJ/cm²至50mJ/cm²的菲兹帕特克（Fitzpatrick）光学皮肤类型为I~III型的受试者，并根据《韩国化妆品法》第9条规定的紫外线阻隔效果检测方法及标准进行。在受试者背部划分未涂抹产品的部位后，让受试者采取舒适的姿势并用UVB照射，以在16~24小时时间范围的规定时间判断受试者的红斑状态。

红斑由两人以上的专业人员在足够明亮的光源下判断。在整个面中，照射到出现红斑的区域的UVB光的最小量为最少红斑量(MED)。根据每个受试者的最少红斑量，并根据标准样品和测试产品的预期防护指数确定光量的范围，然后在受试者的背部划分标准样品涂抹部位和测试产品涂抹部位。将橡胶指套套放在手指上，并涂抹适当量的标准样品和测试产品。在常温下放置15分钟，干燥并以与未涂抹产品部位的最少红斑量的检测方法相同方法进行检测。

红斑判断是由同一个人在与未涂抹产品区域的最少红斑测量时间相同的时间进行判断。光源使用安装有具有类似于太阳光的连续发射光谱且不显示特定峰值的氙弧灯(Xenon arclamp)的人工太阳光照射器(solar simulator)或与其类似的光源。此时，应使用适当的滤光片去除290nm以下的波长，并在测试期间保持恒定光量。作为标准样品，使用了紫外线防护指数高（SPF20以上）的标准样品，其紫外线防护指数为15.5±3.0。产品涂抹量为2.0mg/cm²或2.0μL/cm²，产品涂抹面积为24cm²（横6cm×竖4cm＝24cm²）以上，并划分五个以上的面积为0.5cm²以上的照射部位。

调节每个照射部位的光量，以使预期的最少红斑部位为中等（例：3或4位置），并据此以相等（当预计紫外线防护指数（SPF）小于20时为25%以下；20以上且小于30时为15％；30以上时为10％以下）间隔增加光亮。

紫外线防护指数（SPF）是通过求出未涂抹产品部位的最少红斑量（MEDu）和涂抹产品部位的最少红斑量（MEDp）并根据下式计算各受试者的紫外线防护指数（SPFi），取其算数平均值而得出。紫外线防护指数的95％置信区间应在紫外线防护指数(SPF)的±20％之内。但是，如果不满足此条件，应通过增加样本数量或重置测试条件来再次测试。紫外线防护指数(SPF)用根据紫外线防护指数计算方法获得的紫外线防护指数(SPF)值中去掉小数点后的整数（例：SPF30）来表示。用于试验的标准样品根据食药安全厅公示第2008-6号的紫外线阻隔效果检测方法及标准中公开的高SPF的标准样品制备方法制备使用。

对10位受试者的SPF增强试验结果见表4以及表5。

表4 10位受试者的SPF增强试验结果

受试者	年龄	对照组	剂型例1	剂型例2	剂型例3	剂型例4
							KNY	39	22.3	33.2	27	29.3	30.4
LHY	25	23.1	34.5	28.4	30.7	31.8
							PJS	20	22.9	34	30.9	29.6	30.7
KNM	23	24.9	32.6	29.9	32.2	33.3
							LOS	25	24.1	32.1	29.4	31.7	32.8
CSH	29	22.1	34	31.3	33.6	34.7
							PSK	31	19.8	34	31.3	32	33.1
LJY	27	19.3	35.6	31.3	33.6	34.7
							LLH	39	23.1	36.1	27.9	30.1	33
CHS	23	26.3	31	28.3	30.6	31.7
							平均	28.1	22.8	33.7	29.6	31.3	32.6

表5 杜氏盐藻油和乙醇萃取物对SPF增强效果的结果

区分	SPF指数	SPF协同效果 (%)
			对照群	22.8	-
剂型例1	33.7	32.3
			剂型例2	29.6	23.0
剂型例3	31.3	27.2
			剂型例4	32.6	30.1

2、对上述制得的防晒霜的PA增强效果进行考察。

测试方法：在没有皮肤疾病的18岁至60岁的健康男、女性中，选择了10人以上的最少红斑量在20mJ/cm2至50mJ/cm2的菲兹帕特克（Fitzpatrick）光学皮肤类型为I~III型的受试者，并根据《韩国化妆品法》第9条规定的紫外线阻隔效果检测方法及标准进行。

在受试者背部划分未涂抹产品的部位后，让受试者采取舒适的姿势并用UVB照射，以在16~24小时时间范围的规定时间判断受试者的红斑状态。红斑由两人以上的专业人员在足够明亮的光源下判断。在整个面中，照射到出现红斑的区域的UVB光的最小量为最少红斑量(MED)。

根据每个受试者的最少红斑量，并根据标准样品和测试产品的预期防护指数确定光量的范围，然后在受试者的背部划分标准样品涂抹部位和测试产品涂抹部位。将橡胶指套套放在手指上，并涂抹适当量的标准样品和测试产品。在常温下放置15分钟，干燥并以与未涂抹产品部位区域的最少红斑量的检测方法相同方法进行检测。

红斑判断是由同一个人在与未涂抹产品区域的最少红斑测量时间相同的时间进行判断。光源使用安装有具有类似于太阳光的连续发射光谱且不显示特定的峰值的氙弧灯(Xenon arclamp)的人工太阳光照射器(solar simulator)或与其类似的光源。

此时，应使用适当的滤光片去除290nm以下的波长，并在测试时间期间保持恒定光量。作为标准样品，使用了紫外线防护指数高（SPF20以上）的标准样品，其紫外线防护指数为15.5±3.0。产品涂抹量为2.0mg/cm²或2.0μL/cm²，产品涂抹面积为24cm²（横6cm×竖4cm＝24cm²）以上，并划分五个以上的面积为0.5cm²以上的照射部位。调节每个照射部位的光量，以使预期的最少红斑部位为中等（例：3或4位置），并据此以相等（当预计紫外线防护指数（SPF）小于20时为25%以下；20以上或小于30时为15％；30以上时为10％以下）间隔增加光亮。

紫外线防护指数（SPF）是通过求出未涂抹产品部位的最少红斑量（MEDu）和涂抹产品部位的最少红斑量（MEDp）并根据下式计算各受试者的紫外线防护指数（SPFi），取其算数平均值而得出。

紫外线防护指数的95％置信区间应在紫外线防护指数(SPF)的±20％之内。但是，如果不满足此条件，应通过增加样本数量或重置测试条件来再次测试。紫外线防护指数(SPF)用根据紫外线防护指数计算方法获得的紫外线防护指数(SPF)值中去掉小数点后的整数（例：SPF30）来表示。

对10位受试者的PA试验结果见表6以及表7。

表6 10位受试者的PA试验结果

受试者	年龄	对照群	剂型例1	剂型例2	剂型例3	剂型例4
							KNY	39	3.3	6.4	3.1	3.4	4
LHY	25	4.1	7.2	5.3	5.6	6.2
							PJS	20	3.9	5.3	3.4	3.7	4.3
KNM	23	1	4.1	2.2	2.5	3.1
							LOS	25	3.2	6.3	4.4	4.7	5.3
CSH	29	1.9	5	3.1	3.4	4
							PSK	31	0.4	3.5	1.1	2.6	3.2
LJY	27	4.3	4.3	0.9	3.1	3.7
							LLH	39	1.9	5	3.1	3.4	4
CHS	23	3.1	6.2	4.3	4.6	5.2
							平均	28.1	2.7	5.3	3.1	3.7	4.3

表7 杜氏盐藻油和乙醇萃取物对PA增强效果的结果。

区分	PA指数	PA协同效果 (%)
			对照群	2.7	-
剂型例1	5.3	49.1
			剂型例2	3.1	12.9
剂型例3	3.7	27.0
			剂型例4	4.3	37.2

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims

1.一种化妆品材料组合物，其特征在于，包括：

杜氏盐藻的水溶性萃取物和杜氏盐藻的脂溶性萃取物；按照质量百分浓度计，所述杜氏盐藻的水溶性萃取物在所述化妆品材料组合物中浓度为0.01~3.00%；所述杜氏盐藻的脂溶性萃取物在所述化妆品材料组合物中浓度为0.1~5.00%；

获取所述杜氏盐藻的水溶性萃取物的步骤为：取30g杜氏盐藻，采用600mL的70wt%的乙醇，在常温条件下萃取3小时，利用1μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻乙醇萃取物；获取所述杜氏盐藻的脂溶性萃取物的步骤为：取适量上述制得的杜氏盐藻乙醇萃取物，并向其中添加10倍重量的100 wt%正己烷，在常温条件萃取3小时，利用1μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻的脂溶性萃取物；或者

获取所述杜氏盐藻的水溶性萃取物的步骤为：取30g杜氏盐藻，采用600mL的70wt%的乙醇，在常温条件下萃取3小时，利用1μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻乙醇萃取物；获取所述杜氏盐藻的脂溶性萃取物的步骤为：取适量上述制得的杜氏盐藻乙醇萃取物，并向其中添加20倍重量的100 wt%正己烷，在常温条件萃取3小时，利用1μm孔径滤纸过滤后，通过减压浓缩和冻结干燥，从而获得杜氏盐藻的脂溶性萃取物。

2.一种化妆品，其特征在于，包括权利要求1所述的化妆品材料组合物以及载体；

所述化妆品的剂型包括悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、膏体、乳液、粉末、皂体、含表面活性剂洗面奶、油、蜡粉底液、面膜、按摩霜或者喷雾中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的化妆品，其特征在于，

所述化妆品的剂型为粉末粉底液或乳浊液粉底液。

4.根据权利要求2所述的化妆品，其特征在于，

所述化妆品的剂型为糊剂或凝胶时，所述载体包括动物油、植物油、蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌中的至少一种；或者

所述化妆品的剂型为粉末时，所述载体包括乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末；当剂型为喷雾时，所述载体包括推进剂，所述推进剂包括氯氟烃、丙烷、丁烷或者二甲醚中的至少一种；或者

所述化妆品的剂型为溶液时，所述载体包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇、脱水山梨醇的脂肪酸酯中的至少一种；或者

所述化妆品的剂型为悬浮液时，所述载体包括微晶纤维素、膨润土、洋菜胶、黄芪胶、液状稀释剂或悬浮剂中的至少一种；所述液状稀释剂选自水、乙醇或丙二醇；所述悬浮剂选自乙氧基异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯或聚氧乙烯山梨糖醇酐酯；或者

所述化妆品的剂型为含表面活性剂洗面奶时，所述载体包括脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙磺酸盐、咪唑啉鎓衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯中的至少一种。