CN112999356B - 一种清道夫受体-a靶向的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒及其制备方法和应用 - Google Patents

一种清道夫受体-a靶向的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种清道夫受体‑A靶向的脂肪酸修饰的白蛋白及其制备方法和应用。本发明利用脂肪酸的羧基与白蛋白赖氨酸残基的氨基进行酰化反应得到脂肪酸修饰的白蛋白；并通过溶剂挥发法成功地制备了脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，进一步还成功制备了用脂肪酸修饰的白蛋白修饰的具有清道夫受体‑A靶向作用的其他纳米制剂如脂质体、高分子纳米粒和胶束。本发明以脂肪酸修饰的白蛋白为新的药物载体或者靶头，通过其清道夫受体‑A靶向作用可特异性递送药物到活化的巨噬细胞。所制备的纳米制剂结构稳定，粒径均一，载药范围广，载药量高，特异性强，能显著提高药物的生物利用度，具有良好的安全性和生物相容性，在生物医药领域具备较大的应用价值。

Description

一种清道夫受体-A靶向的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒及其制 备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医用材料和药剂技术领域。更具体地，涉及一种脂肪酸修饰的白蛋白载药载体及其制备方法和应用。
背景技术
巨噬细胞是造血***中最具可塑性的细胞，存在于所有组织中，功能多样。它们在发育、体内平衡、组织修复和免疫方面发挥作用，对各类疾病比如炎症或者肿瘤的发展和治疗至关重要。以炎症为例，疾病发生发展时会有大量激活的巨噬细胞浸润，而这些巨噬细胞不仅会促进自身免疫的激活和炎症的进一步发生，延长炎症周期，也会分泌各种炎症细胞因子促进炎症部位其他细胞的恶性转化和转移，进一步加重疾病程度。以肿瘤为例，肿瘤相关巨噬细胞(tumour-associated Macrophages,TAMs)，即肿瘤部位大量存在的选择性激活的巨噬细胞，则会促进肿瘤的生长、侵袭和转移。因此疾病部位激活的巨噬细胞是能有效治疗炎症或者肿瘤的理想靶点。
目前有较多针对巨噬细胞靶向的研究，比如公开号为CN109735570A的中国专利提供了一种X非活性特异性转录物修饰的脂肪来源间充质干细胞外泌体靶向肝脏巨噬细胞，但是其制备过程复杂，需要大量的小鼠和成人的脂肪来源间充质干细胞，且只适用于肝脏巨噬细胞的靶向，在临床和其他疾病的治疗中的应用有限。公开号为CN108178783A的中国专利提供了一种肿瘤血管及M1型巨噬细胞靶向肽TCP-2，但其制备成本较高，此外，其靶向M1型巨噬细胞的能力可能会一定程度限制其在靶向肿瘤治疗中的应用，因为M1型巨噬细胞对肿瘤治疗有促进作用。也有其他研究采用天然高分子化合物比如透明质酸、甘露糖、叶酸或者硫酸软骨素实现巨噬细胞靶向，比如公开为CN107335064A的中国专利提供了一种硫酸软骨素修饰的纳米粒靶向巨噬细胞治疗溃疡性结肠炎，但是这类天然高分子化合物除了能靶向巨噬细胞以外，在其他主要脏器尤其是肝的分布也较高，不利于导向靶细胞且存在潜在的肝脏毒性。
清道夫受体-A(SR-A)是一种过表达在激活的巨噬细胞上的受体，不论是在炎症、纤维化，还是在肿瘤等疾病中都存在大量激活的巨噬细胞浸润。且SR-A在其他脏器的分布并不显著，除激活的巨噬细胞外，主要表达在氧化应激状态下的内皮细胞。此外，目前已经存在的具有SR-A靶向的载体均为具有较强电负性的聚阴离子分子，且尚未查询到利用SR-A靶向的载体靶向巨噬细胞并用于疾病治疗的相关内容。因此，一种新的通过不同机理靶向SR-A实现激活巨噬细胞靶向的载体可以克服上述现有技术的缺陷和不足，弥补相关研究的空缺，并能被广泛应用到炎症、纤维化和肿瘤等疾病的治疗中。
发明内容
本发明人在研究中意外发现，脂肪酸修饰的白蛋白具有较强的清道夫受体-A靶向性，且不同于现有的具有SR-A靶向的强电负性的聚阴离子分子实现SR-A靶向的机理。基于以上分析和实验发现，本发明以脂肪酸修饰的白蛋白为载体，提供一种通过SR-A靶向作用实现激活巨噬细胞靶向的药物载体材料，实现对炎症、纤维化或者肿瘤的靶向治疗。
本发明的第一个目的是提供一种药物载体材料。
本发明的第二个目的是提供一种靶向SR-A的脂肪酸修饰的白蛋白载体材料的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种含有上述药物载体材料的制剂，该制剂可为由所述脂肪酸修饰的白蛋白载体材料包载药物制备的纳米粒制剂，也可以是用所述脂肪酸修饰的白蛋白作为靶头修饰高分子纳米粒、脂质体、胶束等纳米制剂得到的具有SR-A靶向作用的纳米制剂。
本发明的第四个目的是提供上述脂肪酸修饰的白蛋白靶向载体材料在制备具有激活巨噬细胞靶向功能的纳米药物载体中的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明涉及一种清道夫受体-A靶向的药物载体材料，其特征在于，所述载体材料是由白蛋白通过酰化反应将其赖氨酸残基的氨基与脂肪酸的羧基相连而得的脂肪酸修饰的白蛋白。
所述白蛋白，选自牛血清白蛋白和/或人血清白蛋白；
所述脂肪酸，为碳原子数为12～20的饱和或不饱和脂肪酸；进一步优选为肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、油酸、亚麻酸、亚油酸、花生四烯酸中的一种或多种。
本发明中，所述白蛋白和所述脂肪酸的摩尔比为1:10～1:100。
本发明中，所述药物载体材料的制备方法，包括以下步骤：(1)脂肪酸溶于有机溶剂，加入二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，0℃～37℃反应2～24小时，分离纯化得到脂肪酸琥珀酰亚胺酯；(2)将白蛋白溶于pH 8.0～10的缓冲溶液中，脂肪酸琥珀酰亚胺酯溶于有机溶剂，按脂肪酸琥珀酰亚胺酯与白蛋白的摩尔比为10～100:1，20～37℃反应12～24小时，透析、离心并冷冻干燥，即得。
进一步地，在上述药物载体的制备方法中，步骤(1)所述有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或者二甲基亚砜(DMSO)；
进一步地，步骤(1)所述的反应温度优选为25～30℃；步骤(1)所述的反应时间优选为8～12小时；
进一步地，步骤(2)所述的缓冲液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液，优选为pH 8.3～9.2的碳酸盐缓冲液；
进一步地，步骤(2)所述有机溶剂选自DMF和/或DMSO，优选为DMF；
进一步地，步骤(2)所述的脂肪酸琥珀酰亚胺酯与白蛋白的摩尔比优选为10～20:1。
本发明还涉及一种清道夫受体-A靶向的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，其含有所述清道夫受体-A靶向的药物载体材料、以及所述纳米粒负载的药物。
优选地，所述纳米粒负载的药物包括但不限于雷公藤红素、姜黄素、水飞蓟宾、甘草次酸、紫杉醇、恩替卡韦、***、阿霉素、吡柔比星、卡巴他赛、奥沙利铂、替尼泊苷、丹参酮IIA、羟基喜树碱、米托蒽醌、吉西他滨、反式维甲酸中的一种或几种；进一步地，所述纳米粒负载的药物质量为所述药物载体材料质量的0.1％～20％。
优选地，所述纳米粒还可含有注射用油，所述注射用油优选自大豆油或者中链甘油三酯；进一步地，所述可注射用油用量优选为所述脂肪酸修饰的白蛋白用量的0～40％(wt％)；
优选地，所述纳米粒还可以包含其他药学上可接受的辅料，所述辅料包括但不限于聚乙二醇及聚乙二醇衍生物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、注射用磷脂如大豆磷脂和蛋黄卵磷脂、常用的注射剂附加剂如甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、海藻糖、蔗糖、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，中的一种或几种
优选地，所述纳米粒的制备方法，其特征在于，将所述药物载体溶于去离子水或溶于溶解有上述除注射用磷脂外的其他辅料的去离子水中，加入有机相，所述有机相选自有机溶剂、溶解有注射用油的有机溶剂、溶解有注射用油与药物的有机溶剂、溶解有药物的有机溶剂、溶解有药物的磷脂复合物的有机溶剂或溶解有注射用油和药物的磷脂复合物的有机溶剂，探头超声，旋转蒸发除去有机溶剂后，即得。
所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿中的一种或多种，优选为二氯甲烷或者乙酸乙酯。
所述纳米粒，其粒径优选为50～200nm。
优选地，本发明提供了一种具有清道夫受体-A靶向的负载雷公藤红素的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，其含有所述清道夫受体-A靶向的药物载体材料，以及用量为所述载体材料用量0～15％(wt％)的雷公藤红素。
所述载药纳米粒还含有用量为所述脂肪酸修饰的白蛋白用量的0～40％(wt％)的可注射用油；所述可注射用油优选自大豆油或者中链甘油三酯。
所述载药纳米粒还可以含有用量为所述载体材料用量0～25％(wt％)的药剂学辅料；所述辅料选自聚乙二醇衍生物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物；优选自DSPE-PEG2000、
Figure BDA0002325255530000041
HS 15或者聚山梨酯80。
所述纳米粒，其制备方法为将所述载体材料溶于去离子水或含有上述辅料的去离子水中，加入溶解有可注射用油和雷公藤红素的有机溶剂，高压均质或探头超声乳化，旋转蒸发除去有机溶剂后，即得。
所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿，优选为二氯甲烷或者乙酸乙酯。
本发明还涉及一种具有清道夫受体-A靶向的纳米制剂，其特征在于，该纳米制剂是以上述载体材料作为靶头，用于修饰高分子纳米粒、脂质体、胶束等制剂，以制备具有清道夫受体-A靶向的高分子纳米粒、脂质体、胶束等制剂。所述具有清道夫受体-A靶向的纳米制剂包含上述的脂肪酸修饰的白蛋白、以及用于负载药物的脂质体、高分子纳米粒或胶束等。
所述脂质体、高分子纳米粒、胶束包括但不限于脂质体、乙交酯丙交酯共聚物纳米粒、壳聚糖纳米粒、玉米醇溶蛋白(玉米朊)纳米粒、聚多巴胺纳米粒、聚赖氨酸纳米粒、葡聚糖纳米粒、二乙氨乙基葡聚糖纳米粒、磷脂胆盐混合胶束、聚乙二醇聚乙烯亚胺胶束、聚己内酯聚乙烯亚胺胶束以及聚己内酯聚乙二醇胶束中的一种或几种。
进一步地，所述脂肪酸修饰的白蛋白与脂质体或高分子纳米粒或胶束的质量比为4:1～1:16，优选为1:2～1:8；
进一步地，所述纳米制剂的制备方法，其特征在于，将所述载体材料溶于去离子水中，加入所述的不载药或载药的脂质体/高分子纳米粒/胶束，搅拌即得；进一步地，搅拌温度为20℃～37℃；
进一步地，搅拌时间为15min～2h，优选为30min～1h。
所述纳米制剂，其粒径优选为90～200nm。
有益效果
(1)本发明合成脂肪酸修饰的白蛋白，其清道夫受体-A特异性强、靶向活化的巨噬细胞的效果好。
(2)本发明的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，相较普通的白蛋白纳米粒可以有效延长药物的体内循环时间和提高药物的生物利用度。
(3)本发明的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，在利用其SR-A靶向作用和延长的循环时间到达目标部位时，可以进一步通过SR-A靶向作用和增高的亲脂性被目标部位的巨噬细胞和其他疾病有关细胞大量摄取，有助于全面提高所载药物的治疗作用。
(4)本发明的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，可以通过其SR-A靶向作用靶向炎症、纤维化或者肿瘤部位大量蓄积的活化的巨噬细胞，可实现对所述疾病的靶向治疗，应用范围广。
(5)本发明合成的脂肪酸修饰的白蛋白，在能制备成具有显著清道夫受体-A靶向作用的纳米粒之外，还能物理修饰在包括脂质体、高分子纳米粒、胶束等纳米制剂表面，发挥其针对激活巨噬细胞的靶向作用，具有非常广泛的应用范围。
(6)所述脂肪酸修饰的白蛋白的制备方法，反应过程简单，反应步骤少，重复性好，并且所述脂肪酸修饰的白蛋白纳载药纳米粒以及所述脂肪酸修饰的白蛋白修饰的纳米制剂的制备方法简单，重复性好，所述纳米粒和纳米制剂的安全性和稳定性良好，在医药领域具有良好的应用前景和广阔的发展空间。
附图说明
图1.PAB和BSA的荧光光谱和圆二色谱光谱图。
图2.不同取代度PAB和BSA的SDS-PAGE示意图。
图3.纳米粒的TEM表征。
图4.纳米粒的体外稳定性。
图5.DiD-BSA NPs和DiD-PAB NPs在巨噬细胞和LPS-AR中的摄取和摄取抑制实验结果。
图6.DiD-BSA NPs和DiD-PAB NPs在除巨噬细胞和LPS-AR外其他不同细胞中的摄取结果。
图7.PAB与LPS-AR中的SR-A的共定位。
图8.CLT原药，CLT-BSA NPs和CLT-PAB NPs的药时曲线。
图9.纳米粒在类风湿性关节炎模型大鼠体内的分布情况。
图10.纳米粒与类风湿性关节炎模型大鼠炎症关节部位SR-A的共定位情况。
图11.不同治疗组别中大鼠踝关节厚度的变化。
图12.治疗结束后不同组别大鼠的血清TNF-α和IL-1β水平。
图13.纳米粒在慢性胰腺炎并纤维化的模型大鼠胰腺的分布情况。
图14.纳米粒在黑色素瘤小鼠肿瘤部位的分布情况。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1
合成PAB，即棕榈酸(PA)修饰的牛血清白蛋白蛋白(BSA)。称取0.63mM PA，加入1mLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)，完全溶解后，加入1.5eq二环己基碳二亚胺(DCC)和1.5eq N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌反应12小时，重结晶得到棕榈酸琥珀酰亚胺酯(PA-NHSE)。称取0.005mM BSA，加入2mL碳酸氢钠缓冲液(pH8.47)，使其完全溶解。同时称取20eq的PA-NHSE，加入200uL DMF使其完全溶解。在37℃水浴条件下，将PA-NHSE的DMF溶液缓慢滴加到BSA的碳酸氢钠缓冲液溶液中，搅拌反应24小时。反应结束后，将反应液装入透析袋中，去离子水室温透析两天，10000rpm离心10min，收集上清液，离心三次后，上清液冷冻干燥，即得最终产物PAB。
实施例2
合成PAB。即棕榈酸(PA)修饰的牛血清白蛋白蛋白(BSA)。称取0.63mM PA，加入1mLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)，完全溶解后，加入1.5eq二环己基碳二亚胺(DCC)和1.5eq N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，30℃水浴条件下搅拌反应8小时，重结晶得到棕榈酸琥珀酰亚胺酯(PA-NHSE)。称取0.005mM BSA，加入2mL碳酸氢钠缓冲液(pH8.47)，使其完全溶解。同时称取10eq的PA-NHSE，加入200uL DMF使其完全溶解。将PA-NHSE的DMF溶液缓慢滴加到BSA的碳酸氢钠缓冲液溶液中，室温搅拌反应24小时。反应结束后，将反应液装入透析袋中，去离子水室温透析两天，10000rpm离心10min，收集上清液，离心三次后，上清液冷冻干燥，即得最终产物PAB。
实施例3
合成SAB，即硬脂酸(SA)修饰的牛血清白蛋白蛋白(BSA)。称取0.63mM SA，加入DMSO，完全溶解后，加入1.5eq二环己基碳二亚胺(DCC)和2eq N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，28℃水浴条件下搅拌反应10小时，重结晶得到硬脂酸琥珀酰亚胺酯(SA-NHSE)。称取0.005mMBSA，加入2mL碳酸氢钠缓冲液(pH8.47)，使其完全溶解。同时称取15eq的SA-NHSE，加入200uL DMF使其完全溶解。在30℃水浴条件下，将SA-NHSE的DMF溶液缓慢滴加到BSA的碳酸氢钠缓冲液溶液中，搅拌反应16小时。反应结束后，将反应液装入透析袋中，去离子水室温透析两天，10000rpm离心10min，收集上清液，离心三次后，上清液冷冻干燥，即得最终产物SAB。
实施例4
合成AAB，即花生酸(AA)修饰的牛血清白蛋白蛋白(BSA)。称取0.63mM AA，加入DMF，完全溶解后，加入2eq二环己基碳二亚胺(DCC)和2eq N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌反应12小时，重结晶得到花生酸琥珀酰亚胺酯(AA-NHSE)。称取0.005mM BSA，加入2mL碳酸氢钠缓冲液(pH8.47)，使其完全溶解。同时称取20eq的AA-NHSE，加入200uL DMF使其完全溶解。在35℃水浴条件下，将AA-NHSE的DMF溶液缓慢滴加到BSA的碳酸氢钠缓冲液溶液中，搅拌反应20小时。反应结束后，将反应液装入透析袋中，去离子水室温透析两天，10000rpm离心10min，收集上清液，离心三次后，上清液冷冻干燥，即得最终产物AAB。
实施例5
合成MAB，即肉豆蔻酸(MA)修饰的牛血清白蛋白蛋白(BSA)。称取0.63mM MA，加入DMF，完全溶解后，加入2eq二环己基碳二亚胺(DCC)和2eq N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，在28℃水浴条件下室温搅拌反应10小时，重结晶得到肉豆蔻酸琥珀酰亚胺酯(MA-NHSE)。称取0.005mM BSA，加入2mL碳酸氢钠缓冲液(pH8.47)，使其完全溶解。同时称取20eq的MA-NHSE，加入200uL DMF使其完全溶解。在32℃水浴条件下，将MA-NHSE的DMF溶液缓慢滴加到BSA的碳酸氢钠缓冲液溶液中，搅拌反应24小时。反应结束后，将反应液装入透析袋中，去离子水室温透析两天，10000rpm离心10min，收集上清液，离心三次后，上清液冷冻干燥，即得最终产物MAB。
实施例6
棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(PAB NPs)的制备。取80mg实施例1制备的PAB，溶解于4mL去离子水中成为水相，取18mg大豆油，溶解于800uL二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂中(体积比1:1)成为有机相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备PAB NPs。
实施例7
棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(PAB NPs)的制备。取80mg实施例1制备的PAB，溶解于4mL去离子水中成为水相，取30mg中链油，溶解于800uL二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂中(体积比1:1)成为有机相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备PAB NPs。
实施例8
棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(PAB NPs)的制备。取80mg实施例2制备的PAB，溶解于4mL去离子水中成为水相，向水相中加入800uL二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂中(体积比1:1)的有机相，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备PAB NPs。
实施例9
硬脂酸修饰的白蛋白纳米粒(SAB NPs)的制备。取80mg实施例3制备的SAB，溶解于4mL去离子水中成为水相，取20mg大豆油和中链油的混合物(质量比1:1)，溶解于800uL二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂中(体积比1:1)成为有机相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备SAB NPs。
实施例10
负载雷公藤红素(CLT)的棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(CLT-PAB NPs)的制备。取80mg实施例1制备的PAB，溶解于4mL去离子水中成为水相，取2.8mg CLT和18mg大豆油，溶解于800uL二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂中(体积比1:1)成为有机相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备CLT-PAB NPs。
实施例11
负载姜黄素(CUR)的棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(CUR-PAB NPs)的制备。取80mg实施例1制备的PAB，溶解于4mL去离子水中成为水相，取4mg CUR和28mg大豆油，溶解于400uL乙酸乙酯中，再加入400uL二氯甲烷成为有机相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备CUR-PAB NPs。
实施例12
负载雷公藤红素(CLT)的长循环的棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(CLT-PAB-PEGNPs)的制备。取80mg实施例1制备的PAB和20mg的DSPE-PEG2000，溶解于4mL去离子水中成为水相，取2.8mg CLT和18mg大豆油，溶解于800uL二氯甲烷和乙酸乙酯的混合溶剂中(体积比1:1)成为有机相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备CLT-PAB-PEG NPs。
实施例13
负载恩替卡韦(ETV)的棕榈酸修饰的白蛋白纳米粒(ETV-PAB NPs)的制备。取10mg恩替卡韦与50mg卵磷脂E80溶解于5mL体积比为1:1的异丙醇和乙醇的混合溶剂中，55℃水浴条件下搅拌1h，减压旋转蒸发除去有机溶剂，得到恩替卡韦的磷脂复合物。将所得磷脂复合物与30mg大豆油溶解于1mL二氯甲烷中成为有机相，取200mg实施例1制备的PAB，溶解于10mL去离子水中成为水相，将有机相和水相混合，冰浴探头超声10min(功率200W，工作3s，间歇7s)，旋转蒸发除去有机溶剂，成功制备ETV-PAB NPs。
实施例14
具有清道夫受体-A靶向作用的脂质体(PAB-Lip)的制备。取26mg大豆磷脂(S100)，8mg胆固醇(Chol)，6mg赖氨酸－胆固醇酯(Chol-lys)溶于适量氯仿和甲醇(体积比3:1)的混合溶剂中，旋转蒸发除尽有机溶剂后形成均匀的薄膜。加入4mL 250mol/L的硫酸铵溶液水化脂膜，再用探头超声10min(功率200W,超声5s,间隔5s)，再过Sephadex G-75凝胶柱，建立离子梯度，流动相为0.9％NaCl溶液，得到空白脂质体。取10mg实施例1制备的PAB，溶于2mL去离子水中，将所得PAB的水溶液加入到上述空白脂质体中，室温匀速搅拌30min～1h，成功制备PAB-Lip。
实施例15
具有清道夫受体-A靶向作用的载阿霉素(DOX)脂质体(PAB-DOX-Lip)的制备。其他条件和实施例14相同，唯一不同之处在于，将所述空白脂质体由载DOX脂质体替换。所述载DOX脂质体由实施例14中制备所得空白脂质体与DOX溶液(药脂比1∶10)混合，在37℃水浴中孵育1h，所得。
实施例16
具有清道夫受体-A靶向作用的玉米朊纳米粒(PAB-zein NPs)的制备。取20mg玉米朊，使之完全溶解于2mL 70％的异丙醇溶液中。取4mg实施例1中制备的PAB，使之溶解于10mL去离子水中。将所述玉米朊的异丙醇溶液在搅拌的情况下快速倒入所述的PAB溶液中，并在室温条件下持续搅拌30min。然后45℃加热并氮吹除去异丙醇，成功制备PAB-zeinNPs。
实施例17
具有清道夫受体-A靶向作用的载姜黄素(CUR)的玉米朊纳米粒(PAB-CUR-zeinNPs)的制备。其他条件同实施例16，唯一不同之处在于将玉米朊异丙醇溶液用玉米朊和姜黄素的异丙醇混合溶液替换。所述玉米朊和姜黄素的异丙醇混合溶液是将20mg玉米朊和2.5mg姜黄素同时完全溶解于2mL 70％的异丙醇溶液中所得。
实施例18
具有清道夫受体-A靶向作用的磷脂胆盐混合胶束(PAB micelles)的制备。称取35mg脱氧胆酸钠和25mg磷脂E80溶解于10mL甲醇中。在30℃水浴条件下旋转蒸发除去混合溶液中的甲醇以形成均匀薄膜。取1.5mL去离子水用于水化前述磷脂胆盐形成的薄膜，充分振摇，得到空白胶束。取10mg实施例1中制备的PAB，溶解于1mL去离子水中，将所得PAB的水溶液加入到上述空白胶束中，室温匀速搅拌30min～1h，成功制备PAB micelles。
实施例19
具有清道夫受体-A靶向作用的载反式维甲酸的磷脂胆盐混合胶束(RA-PABmicelles)的制备。其他条件同实施例18，只是除磷脂和脱氧胆酸钠外，在10mL甲醇中还要加入2mg反式维甲酸(RA)，先得到载RA的胶束，最终成功制备RA-PAB micelles。
对比例1
牛血清白蛋白纳米粒的制备(BSA NPs)。其他条件和实施例6相同，唯一不同之处在于：PAB由BSA替代，成功制备BSA NPs。其粒径大小均一，为113.3nm。
对比例2
负载雷公藤红素(CLT)的牛血清白蛋白纳米粒的制备(CLT-BSA NPs)。其他条件和实施例10相同，唯一不同之处在于将实施例1制备的PAB替换成BSA，成功制备CLT-BSA NPs。其粒径大小均一，为116.5nm，载药量为2.4％。
实验例1 PAB的荧光光谱和圆二色谱光谱图
将实施例1制备的PAB、BSA分别溶解于PBS(pH 7.3)溶液中，最终浓度为8×10- 7mol/L，用荧光分光光度计进行分析，同时将浓度为2×10-6mol/L的PAB PBS溶液和BSA PBS溶液用圆二色谱仪进行分析，结果参见图1。
图1a为PAB和BSA的荧光光谱图，可以看出PAB的最大发射波长相较BSA出现明显蓝移，并且荧光强度降低。图1b为PAB和BSA的圆二色谱光谱图，可以看出PAB和BSA都具有明显的象征α-螺旋的两个负的肩峰，且PAB的峰强度大于BSA，即PAB的α-螺旋数目高于BSA。这说明PA对BSA的修饰成功，PAB结构中荧光团(色氨酸)所处微环境的亲脂性高于BSA，使得其荧光光谱的最大发射波长蓝移，并且趋于折叠，α-螺旋数目变多。
实验例2 PAB的分子量和取代度
用茚三酮法和SDS-PAGE分别测定实施例1和实施例2制备的PAB的取代度和分子量，参见图2(lane 1表示实施例1中的PAB,lane 2表示实施例2中的PAB，lane 3表示BSA，lane 4为marker。茚三酮法的具体步骤为：1)用去离子水准备一系列合适浓度梯度的PAB/BSA溶液(0～10mg/mL)2)将1mL PAB/BSA溶液与1mL醋酸缓冲液(pH 5.4)以及1mL茚三酮显色液混合均匀3)将所述三者混合溶液于100℃水浴中加热15min，紧接着冷却至室温并静置5min 4)加入3mL 60％的乙醇稀释，并于570nm的波长处测定各样品的紫外吸收，计算取代度。用常规方法制备SDS-PAGE条带，最终用考马斯亮蓝对样品染色，通过对比样品和标记物的距离得出样品的大概分子量。用所得取代度和分子量相互印证，最终测得实施例1和实施例2制备的PAB的取代度分别为17.53％和9.81％，分子量分别为69.7KDa和68.5KDa。结果表明PAB可以通过用PA对BSA的修饰成功得到。
实验例3纳米制剂的理化性质
将实施例6、7、8的PAB NPs，实施例9的SAB NPs，实施例14的PAB-Lip，实施例16的PAB-zein NPs和实施例18的PAB micelles稀释后，用激光粒度仪测定粒径、PDI和Zeta电位。如表1所示。结果表明采取实施例6～9以及实施例14，实施例16和实施例18中所述方法可以成功制备得到粒径大小合适，分布均一的PAB NPs、SAB NPs、PAB-Lip、PAB-zein NPs以及PAB micelles。
表1.纳米制剂的理化表征
Figure BDA0002325255530000111
实验例4载药纳米制剂的理化性质
将实施例10的CLT-PAB NPs、实施例11的CUR-PAB NPs、实施例12中的CLT-PAB-PEGNPs、实施例13的EVT-PAB NPs、实施例15中的PAB-DOX-Lip，实施例17中的PAB-CUR-zeinNPs和实施例19中的RA-PAB micelles稀释后，用激光粒度仪测定粒径、PDI和Zeta电位，同时用凝胶排阻色谱法和HPLC测定纳米粒中CLT或者CUR的含量。如表2所示。结果表明采取实施例10～13、15、17和19中所述方法可以成功制备得到粒径大小合适，分布均一，且载药量满足实际给药需求的CLT-PAB NPs、CUR-PAB NPs、CLT-PAB-PEG NPs、EVT-PAB NPs、PAB-DOX-Lip、PAB-CUR-zein NPs以及RA-PAB micelles。
表2.载药纳米制剂的理化表征
Figure BDA0002325255530000121
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实验例5纳米粒的TEM表征
将实施例10制备的CLT-PAB NPs，用1％磷钨酸负染，滴至专用铜网上，自然挥干后用透射电子显微镜(TEM)观察纳米粒形态并拍摄照片。
图3为TEM表征结果，可观察到纳米粒呈类球状，粒径约在100nm左右，分布均一，同激光粒度仪所测定结果一致。
实验例6纳米粒的体外稳定性
用激光粒度仪观察实施例10制备的CLT-PAB NPs在4℃和37℃储存过程中粒径和PDI的变化，以表征纳米粒在体外的储存稳定性。如图4所示，无论是在4℃还是37℃，纳米粒在为期2周的储存中，粒径和PDI均无明显变化，表明其良好的稳定性。
实验例7纳米粒在巨噬细胞和脂多糖活化的巨噬细胞中的摄取和摄取抑制
发明人通过测定纳米粒在巨噬细胞(Raw264.7)和脂多糖(LPS)活化的巨噬细胞(LPS-AR)中的摄取和摄取抑制，初步判定PAB的SR-A靶向作用。
用亲脂性荧光染料DiD标记PAB NPs，对纳米粒进行示踪，制备方法与本发明实施例10相似，将其处方中的2.8mg CLT替换成50μg DiD即可，制备得到DiD-PAB NPs。同时采取和对比例2中相同的方法，仅将其处方中2.8mg CLT替换成50μg DiD制备得到DiD标记的BSANPs(DiD-BSA NPs)。
采用流式细胞术对纳米粒的细胞摄取进行定量分析。取对数生长期的Raw264.7细胞，0.25％胰酶消化得细胞悬液。细胞接种于12孔细胞培养板中，每孔1mL，在有或者无脂多糖(LPS)(2μg/mL)存在的情况下于37℃孵育24h，细胞贴壁生长。吸弃培养基，PBS洗2遍，加入用不含血清培养基稀释的DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs(DiD终浓度为0.4μg/mL)。37℃条件下孵育2h。吸弃含DiD的培养基，PBS洗3遍，0.25％胰酶消化，2000rpm离心3min，吸弃上清液，加入PBS溶液重悬细胞，重复离心洗涤共3次，最后将PBS重悬的细胞置于流式细胞仪中测定制剂的摄取量；同时采用流式细胞术对纳米粒在LPS-AR中用不同抑制剂处理后的摄取进行定量分析，操作过程如前所述，仅在加入用不含血清培养基稀释的DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs前，先用不同的抑制剂处理1小时。抑制剂包括4℃孵育条件(能量抑制)、阿米洛利(巨胞饮)、氯丙嗪(网格蛋白介导的内吞)、甲基-β-环糊精(脂阀/小窝蛋白介导的内吞)以及硫酸葡聚糖(DS,SR-A介导途径)。结果参见图5(图5a为DiD-BSA NPs和DiD-PAB NPs分别在巨噬细胞和LPS-AR中的摄取，图5b和c分别为DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs在LPS-AR中用不同抑制剂处理后的摄取结果，所有结果均为平均值±标准差，n＝5，*p<0.05，***p<0.001)。
巨噬细胞膜上表达SR-A，在激活的巨噬细胞中(LPS-AR)，SR-A的表达量进一步显著增高。图5结果显示无论是在Raw264.7还是在LPS-AR中，DiD-PAB NPs的摄取量都明显高于DiD-BSA NPs，尤其是在LPS-AR中；硫酸葡聚糖(DS)是针对SR-A的特异性抑制剂，而DiD-PAB NPs在LPS-AR中的摄取又可以被DS显著抑制，说明DiD-PAB NPs被巨噬细胞摄取尤其是激活的巨噬细胞摄取主要是通过SR-A介导的途径。
实验例8纳米粒在巨噬细胞、白介素(IL)-4活化的巨噬细胞以及其他不表达SR-A的细胞中的摄取
发明人通过测定纳米粒在Raw264.7、IL-4(80ng/mL)活化的巨噬细胞(IL-4-AR)以及人滑膜成纤维细胞(HFLS)、人肾小管上皮细胞(HK-2)和小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)细胞的摄取，进一步判定PAB的SR-A靶向作用。
采用实验例7中所述方法制备得到DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs。采用实验例7中所述方法对DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs在几种不同细胞中的摄取进行测定，仅将实验例7中的两种细胞用Raw264.7、IL-4活化的巨噬细胞(IL-4-AR)以及HFLS、HK-2和B16F10细胞替换。结果参见图6(图6a为在巨噬细胞和IL-4-AR中的摄取结果，图6b为在HFLS，HK-2和B16F10中的摄取结果，所有结果均表示为平均值±标准差，n＝5，***p<0.001)。
Raw264.7细胞膜上表达SR-A，其表达量在IL-4-AR中也进一步升高，而HFLS、HK-2和B16F10细胞中几乎不表达SR-A。图6结果显示无论是在Raw264.7还是在IL-4-AR中，DiD-PAB NPs的摄取量都明显高于DiD-BSA NPs，在IL-4-AR中DiD-PAB NPs的摄取增高更加明显；而DiD-PAB NPs在另外三种不表达SR-A的细胞中的摄取非常有限。以上实验结果进一步证明了PAB的SR-A靶向作用。
实验例9 PAB与LPS-AR中的SR-A的共定位
考察实施例1中的PAB与LPS-AR中的SR-A的共定位，观察PAB的SR-A靶向作用。
用荧光染料FITC修饰实施例1中的PAB以及BSA，得到PAB-FITC和BSA-FITC。将Raw264.7细胞接种到共聚焦皿中，在LPS存在的情况下(2μg/mL)，于5％CO2和37℃条件中培养24小时，然后加入PAB-FITC溶液与细胞孵育15min。设置加入BSA-FITC溶液的组别，两组进行对比。最终BSA或者PAB的浓度为300μg/mL。除去含PAB-FITC或者BSA-FITC的介质，用PBS洗涤细胞3次。4％formalin室温固定20min，PBS洗涤细胞，用CD204一抗按照说明书对细胞膜表面的SR-A进行染色。结束后用二抗Alexa Fluor 594标记的IgG继续孵育。PBS洗涤细胞，DAPI室温10min染细胞核。然后用PBS洗涤细胞3次，用激光共聚焦显微镜观察PAB和SR-A的共定位情况。结果参见图7(DAPI:细胞核，标尺：10μm)。
结果表明，PAB和SR-A有着十分明显的共定位，而在相同的浓度和培养条件下，LPS-AR细胞膜上BSA-FITC的荧光十分微弱，并且和SR-A存在十分明显的非共定位，说明PAB具有SR-A靶向作用，通过此作用，PAB可以实现比BSA在LPS-AR中显著增高的摄取。
实验例10纳米粒的体内药动学研究
健康雄性SD大鼠随机分为三组，每组n＝5,以CLT给药剂量为2mg/kg分别静脉注射游离的CLT，对比例2中的CLT-BSA NPs，实施例10中的CLT-PAB NPs，在给药后的第5,15,30,60,120,240,480,720,1440和2880min通过各组大鼠的眼眶静脉丛取血，以肝素钠为抗凝剂，5000rpm离心5min,得到血浆样品，最后用LC-MS检测血浆中的CLT含量。各组的药动学曲线参见图8(所有结果均表示为平均值±标准差，n＝5)。
结果表明，相比于CLT-BSA NPs，CLT-PAB NPs可以明显延长CLT的体内循环时间，并且各时间点的CLT浓度CLT-PAB NPs组都高于CLT-BSA NPs组，说明相较于BSA，PAB更能够有效延长药物的循环时间并提高药物的生物利用度。
实验例11纳米粒在类风湿性关节炎模型大鼠体内的分布情况
考察纳米粒在类风湿性关节炎大鼠体内的分布情况，判断PAB NPs能否在关节炎症部位有明显蓄积。
采用实验例7中所述方法制备得到DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs。用健康雄性SD大鼠建立佐剂诱导型关节炎大鼠(adjuvant-induced arthritis rat,AIA rat)模型，在AIA大鼠体内静脉注射入游离DiD，DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs后不同时间点麻醉大鼠，考察三种制剂在AIA大鼠关节的分布情况。
AIA大鼠模型建立的具体方法为：大鼠皮下注射含有10mg/mL热灭活分枝杆菌的完全弗氏佐剂(100μl)至尾部底部。每天监测关节炎进展情况，在造模后第14天可以观察到十分明显的脚掌红肿，踝关节***，严重时可以观察到部分大鼠的造模后爪残疾，显示造模成功。造模成功的AIA大鼠随机分为N.S,free DiD,DiD-BSA NPs,DiD-PAB NPs共4组，每组各5只，各组以DiD的给药剂量为55μg/mL静脉注射，给药后2,4,8,12,24以及48h麻醉大鼠，用活体成像仪观察各组制剂在大鼠炎症部位的分布情况。实验结果图9。
结果表明，两组纳米粒在关节部位都有蓄积，但是DiD-BSA NPs在关节部位的蓄积仅可以持续到给药后的12h，到第24h时，在关节部位及几乎观察不到荧光。DiD-PAB NPs在每个时间点，在关节部位的蓄积都高于DiD-BSA NPs组，并且可以持续到给药后第48h。说明PAB NPs可以由于其SR-A靶向作用实现在关节部位更高的蓄积。
实验例12纳米粒在类风湿性关节炎模型大鼠体内的SR-A靶向作用
通过考察纳米粒与类风湿性关节炎模型大鼠炎症关节部位的SR-A的共定位，进一步确认PAB在模型大鼠体内的SR-A靶向作用。
DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs的制备方法，AIA大鼠的模型建立方法，以及AIA大鼠的分组情况及给药剂量与实验例11相同，但在给药后一小时处死大鼠，取每只大鼠的炎症踝关节固定，脱钙，石蜡包埋，切片，对切片中的SR-A染色，用激光共聚焦显微镜观察各组中DiD和SR-A的共定位。实验结果参见图10(DAPI:细胞核，标尺：50μm)。
结果表明DiD-PAB NPs在给药后1h就可以实现比DiD或者DiD-BSA NPs显著增高的在炎症关节部位的蓄积，并且，相较于后两者，DiD-PAB NPs和SR-A有着十分明显的共定位。以上结果进一步证实了PAB的体内SR-A靶向作用。
实验例13 CLT-PAB NPs在AIA大鼠模型中的初步药效学评价
对比考察CLT原药，CLT-BSA NPs和CLT-PAB NPs对AIA大鼠的治疗情况。初步考察指标为治疗过程中每只大鼠炎症关节部位的厚度的变化，以及治疗结束后每只大鼠血清中的肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β水平。
按实施例10和对比例2分别制备CLT-PAB NPs和CLT-BSA NPs，按实验例11或12建立AIA大鼠模型。AIA大鼠随机分为4组，每组7只，造模后第14天开始给药，其中CLT原药和CLT-BSA NPs的给药剂量1mg/mL，CLT-PAB NPs组的给剂量为0.6mg/mL，另外一组静脉注射相同体积的生理盐水。隔一天给药一次，共给药4次。从造模后第14天开始到造模后第24天，隔一天记录一次大鼠的踝关节厚度。到造模后第24天，取各组大鼠的血样，离心收集血清，用ELISA试剂盒，按照说明书测定血清中TNF-α和IL-1β水平。实验结果参见图11(所有结果均显示为平均值±标准差，n＝7，***p<0.001)及图12(所有结果均显示为平均值±标准差，n＝7，**p<0.05，***p<0.001)。结果表明，在初次给药后，CLT-PAB NPs和CLT-BSA NPs就显示出明显的治疗效果，在疗程结束后，从踝关节厚度来看，CLT-PAB NPs组的大鼠关节情况更接近于正常大鼠，而CLT-BSA NPs和CLT-PAB NPs两组大鼠的血清炎症因子水平都与正常大鼠的血清炎症因子水平相当，说明CLT-BSA NPs和CLT-PAB NPs对类风湿性关节炎都有明显的治疗效果，而CLT-PAB NPs的给药剂量远远低于CLT-BSA NPs，说明相比于CLT-BSANPs，CLT-PAB NPs在类风湿性关节炎的治疗中有着更加广泛的潜在的巨大应用前景，而PAB也为炎症治疗提供了一种全新的载体和思考方向。
实验例14纳米粒在慢性胰腺炎并纤维化模型大鼠体内的分布情况
采用实验例7中所述方法制备得到DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs。用健康雄性SD大鼠建立慢性胰腺炎并纤维化的大鼠模型，在模型大鼠体内静脉注射入DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs后不同时间点处死大鼠并剖出胰腺，考察两种纳米粒在模型大鼠胰腺中的分布情况。
慢性胰腺炎并纤维化大鼠模型建立的具体方法为：用无水乙醇，甘油和DMSO的混合溶剂(体积比1:2:2)配置浓度为40mg/mL的二丁基二氯化锡(DBTC)溶液。以8mg/kg从大鼠尾静脉注射上述DBTC溶液。尾静脉注射后第4天即出现胰腺炎的症状，到第7天大鼠胰脏已经出现纤维化的症状。造模后大鼠的体重逐渐降低。造模成功的大鼠随机分为DiD-BSANPs,DiD-PAB NPs 2组，每组各5只，以静脉注射生理盐水的N.S.组为空白对照，以DiD的给药剂量为45ug/kg对大鼠静脉注射两种纳米粒。实验分为三个时间点，即给药后的2，6和12小时。在给药后的预设时间点处死大鼠，剖出胰腺，用活体成像仪记录胰腺中DiD的荧光强度。实验结果图13。
结果表明，两组纳米粒在发病胰腺都有蓄积，但是DiD-PAB NPs在每个时间点，在胰腺的蓄积都明显高于DiD-BSA NPs组。而且在给药后第12小时，DiD-BSA NPs组胰腺DiD的荧光已经很弱，但是DiD-PAB NPs组胰腺DiD的荧光依旧很强。说明PAB NPs可以由于其SR-A靶向作用实现在炎症并纤维化的胰腺部位更高的蓄积。
实验例15纳米粒在黑色素瘤小鼠肿瘤部位的分布情况
采用实验例7中所述方法制备得到DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs。用雄性C57BL/6小鼠建立黑色素瘤模型，从荷瘤小鼠尾静脉注射入DiD-PAB NPs和DiD-BSA NPs后2小时处死小鼠并分离肿瘤组织，考察两种纳米粒在肿瘤部位的分布情况。
黑色素瘤小鼠模型建立的具体方法为：对6周龄左右C57BL/6小鼠的侧腹进行脱毛处理，在脱毛的侧腹部接种5×105个B16F10细胞，用电子游标卡尺测量肿瘤体积，计算公式为V＝π/6×a×b2，其中a为肿瘤长径，b为肿瘤短径。造模成功的荷瘤小鼠随机分为DiD-BSANPs,DiD-PAB NPs 2组，每组各4只，以静脉注射生理盐水的N.S.组为空白对照，以DiD的给药剂量为45ug/kg对小鼠尾静脉注射两种纳米粒。在注射后2小时处死小鼠，分离肿瘤组织，用活体成像仪记录肿瘤中DiD的荧光强度。实验结果图14。
结果表明，DiD-PAB NPs在给药后2小时在肿瘤部位的蓄积远远高于DiD-BSA NPs组。说明PAB NPs可以由于其SR-A靶向作用实现在肿瘤部位更高的蓄积。

Claims (16)

1.一种药物载体的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
(1)脂肪酸溶于有机溶剂，加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，0℃～37℃反应2～24小时，分离纯化得到脂肪酸琥珀酰亚胺酯；所述有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜；
(2)将白蛋白溶于pH 8.0～10的缓冲溶液中，脂肪酸琥珀酰亚胺酯溶于有机溶剂，按脂肪酸琥珀酰亚胺酯与白蛋白的摩尔比为10～100:1，20～37℃反应12～24小时，透析，离心并冷冻干燥，即得；
所述药物载体是由白蛋白通过酰化反应将其赖氨酸残基的氨基与脂肪酸的羧基相连而得的脂肪酸修饰的白蛋白；
所述白蛋白，选自牛血清蛋白和/或人血清白蛋白；
所述脂肪酸为肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、油酸、亚麻酸、亚油酸、花生四烯酸中的一种或多种；
所述缓冲液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液，所述步骤(2)有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜。
2.根据权利要求1所述的一种药物载体的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)反应温度为20～37℃；反应时间为12～24小时。
3.根据权利要求1所述的一种药物载体的制备方法，其特征在于，所述缓冲液选自pH8.3～8.7的碳酸盐缓冲液。
4.根据权利要求1所述的药物载体的制备方法，其特征在于，所述的脂肪酸琥珀酰亚胺酯与白蛋白的摩尔比为10～20:1。
5.一种药物载体，其特征在于，由权利要求1-4任一项所述的制备方法制备获得。
6.一种清道夫受体-A靶向的脂肪酸修饰的白蛋白纳米粒，其含有具有清道夫受体-A靶向的药物载体材料、以及所述纳米粒负载的药物；所述纳米粒负载的药物质量为所述药物载体材料的质量的0.1％～20％；所述载体材料是由白蛋白通过酰化反应将其赖氨酸残基的氨基与脂肪酸的羧基相连而得的脂肪酸修饰的白蛋白；其中，所述具有清道夫受体-A靶向的药物载体材料由权利要求1-4任一项所述的制备方法制备获得；
所述白蛋白，选自牛血清蛋白和/或人血清白蛋白；
所述脂肪酸为肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、油酸、亚麻酸、亚油酸、花生四烯酸中的一种或多种；
所述纳米粒的粒径为90-200nm。
7.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒负载的药物为抗炎药物或抗癌药物。
8.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒负载的药物选自雷公藤红素、姜黄素、水飞蓟宾、甘草次酸、紫杉醇、恩替卡韦、***、阿霉素、吡柔比星、卡巴他赛、奥沙利铂、替尼泊苷、丹参酮IIA、羟喜树碱、米托蒽醌、吉西他滨、反式维甲酸中的一种或几种。
9.根据权利要求6所述的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒还含有注射用油、聚乙二醇衍生物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、注射用磷脂、注射剂附加剂，所述注射剂附加剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、海藻糖、蔗糖、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中的一种或几种，其中，所述注射用油选自大豆油、中链脂肪酸甘油酯、茶油、芝麻油中的一种或几种；所述注射用磷脂选自大豆磷脂和蛋黄卵磷脂中的一种或几种；所述注射用油用量为所述脂肪酸修饰的白蛋白用量的0～40％(wt％)。
10.一种权利要求6～9任意一项所述的纳米粒的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
将所述药物载体溶于去离子水或溶于溶解有除注射用磷脂外的其他辅料的去离子水中，加入有机相，所述有机相选自有机溶剂、溶解有注射用油的有机溶剂、溶解有注射用油与药物的有机溶剂、溶解有药物的有机溶剂、溶解有药物的磷脂复合物的有机溶剂或溶解有注射用油和药物的磷脂复合物的有机溶剂，高压均质或探头超声乳化，旋转蒸发除去有机溶剂后，即得；
所述有机溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿中的一种或多种。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷或者乙酸乙酯。
12.一种具有清道夫受体-A靶向的纳米制剂，其特征在于，该纳米制剂是以权利要求5所述药物载体作为靶头，修饰高分子纳米粒、脂质体或胶束纳米制剂，其中所述高分子纳米粒选自乙交酯丙交酯共聚物纳米粒、壳聚糖纳米粒、玉米醇溶蛋白纳米粒、聚多巴胺纳米粒、聚赖氨酸纳米粒、葡聚糖纳米粒、二乙氨乙基葡聚糖纳米粒中的一种或几种，所述胶束选自磷脂胆盐混合胶束、聚乙二醇聚乙烯亚胺胶束、聚己内酯聚乙烯亚胺胶束以及聚己内酯聚乙二醇胶束中的一种或几种。
13.一种权利要求12所述的具有清道夫受体-A靶向的纳米制剂的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
将权利要求5所述药物载体溶于去离子水中，加入不载药或载药的脂质体/高分子纳米粒/胶束，搅拌即得；所述药物载体与脂质体或高分子纳米粒或胶束的质量比为4:1～1:16；搅拌温度为20℃～37℃；搅拌时间为15min～2h。
14.一种根据权利要求5所述药物载体在制备靶向清道夫受体-A的纳米制剂中的应用。
15.一种根据权利要求6-9任一项所述的纳米粒或权利要求10-11任一项所述的制备方法在制备靶向清道夫受体-A的纳米粒中的应用。
16.一种根据权利要求12所述的纳米制剂或权利要求13所述的制备方法在制备靶向清道夫受体-A的纳米制剂中的应用。
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