CN112986229A - 一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法 - Google Patents
一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112986229A CN112986229A CN202110225271.7A CN202110225271A CN112986229A CN 112986229 A CN112986229 A CN 112986229A CN 202110225271 A CN202110225271 A CN 202110225271A CN 112986229 A CN112986229 A CN 112986229A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sheet
- color development
- enzyme
- heavy metal
- pad
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 40
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 86
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 85
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 78
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 46
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 30
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims abstract description 20
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 21
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 18
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 12
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 11
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 10
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 10
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 6
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 3
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 claims 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 abstract 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 50
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 20
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 206010042496 Sunburn Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 description 1
- 238000001095 inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000001637 plasma atomic emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012420 spiking experiment Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/34—Purifying; Cleaning
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N2021/775—Indicator and selective membrane
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N2021/7756—Sensor type
- G01N2021/7759—Dipstick; Test strip
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法，涉及重金属检测领域，包括下盖及与下盖相扣合的上盖，下盖内固定有测试化妆品重金属铅的测试纸，测试纸包括底板，底板上从左到右依次设有样品垫、酶片、显色片和吸水垫，酶片上吸附有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶，酶片上还固定有酶保护剂，显色片上吸附有显色剂，显色片上吸附有TMB，显色片上还固定有大分子聚合物，样品垫、酶片、显色片和吸水垫均粘结在底板上，本发明适用于霜剂、膏剂、乳剂、溶液剂、口红等化妆品，提高了通用性和检测效率，且操作简单、灵敏度高、技术适用、环保安全，可进行现场检测，无需仪器辅助，检测时间短、效率高，检测成本低，检出限为5ppm，小于国家规定的铅限量标准。
Description
技术领域
本发明涉及重金属检测领域，具体涉及一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法。
背景技术
近年来随着人们对“美白”的需求，化妆品宣传往往注重美白养颜、抗衰老、保湿、防晒等功效，其中美白祛斑类化妆品的开发引起了国内外众多化妆品公司的高度重视，美白祛斑类化妆品也不断地推陈出新，目前已成为一类重要的护肤类化妆品。但某些企业在产品中非法添加了铅、汞等重金属，从而出现重金属超标现象，严重危害大众的健康。2016年底，国家食品药品监督管理总局通告(2016年第170号)在化妆品监督抽检中发现60批次祛斑类化妆品存在非法添加禁用物质问题，其中，31种产品重金属铅超标。2017年，国家食品药品监督管理总局通告(2018年第20号)在全国范围内组织抽检了祛斑/美白类化妆品3120批次，抽样检验项目不合格产品29批次，其中19种产品重金属铅含量超标。2017年315晚会也曝光了重金属铅、汞含量超标的多个知名化妆品，由此可知，一种简单、经济的化妆品重金属快速检测技术的研究、创新及应用对于切实保障我国的公民安全具有重要意义。
检测重金属的传统方法(原子吸收法、原子荧光光度法、电感耦合等离子体质谱法、电感偶和等离子发射光谱法等)应用比较成熟，但是其所需仪器受到很多限制，比如仪器价格昂贵、携带不方便、样品前处理周期长等。随着经济的发展和人们生活水平的改善，人们对安全性的要求不断提高，待测样品量迅速增加。找到一种具有快速、简便、对所分析的样品需要量少，适合现场检测的速测卡受到广泛关注。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供采用了酶抑制法开发出一种前处理简单、操作便捷且灵敏度较高的化妆品重金属铅速测卡。
技术方案为：包括下盖及与下盖相扣合的上盖，下盖内固定有测试化妆品重金属铅的测试纸，测试纸包括底板，底板上从左到右依次设有样品垫、酶片、显色片和吸水垫，酶片上吸附有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶，葡萄糖氧化酶和过氧化物酶的酶活力为0.02～0.05U，酶片上还固定有质量百分数为0.5～2％的酶保护剂，显色片上吸附有显色剂，显色片上吸附有TMB，显色片上还固定有大分子聚合物，大分子聚合物的量为0.2～0.5mg；样品垫、酶片、显色片和吸水垫均粘结在底板上，样品垫与酶片之间进行搭桥过渡，且样品垫搭接在酶片上，酶片和显色片之间进行搭桥过渡，显色片与吸水垫之间进行搭桥过渡，且吸水垫搭接在显色片上，上盖设有样品孔及观察孔，样品孔的位置对应样品垫的位置，观察孔的位置对应显色片的位置。
优选地，样品垫与酶片之间重叠1/7～1/4，酶片和显色片之间重叠1/5～1/2，显色片与吸水垫之间重叠1/7～1/5。
优选地，底板为带粘性的PVC板，长55～80mm，宽4～5mm。
优选地，样品垫采用玻璃纤维制成，样品垫长20～30mm，宽4～5mm，样品垫为白色。
优选地，酶片长10～20mm，宽4～5mm，酶片的材质可以为滤纸、层析纸、合成纤维素纸，酶片为白色。
优选地，显色片采用层析纸，显色片可以为滤纸、层析纸、合成纤维素纸，显色片为白色。
优选地，吸水垫采用吸水纸，吸水垫长5～7mm，宽4～5mm，吸水垫为白色。
优选地，酶保护剂为牛血清白蛋白，大分子聚合物可以为聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮，葡聚糖的其中一种。
采用上述重金属铅速测卡对化妆品中重金属铅检测的方法，步骤为：
(A)、棉签用水润湿，薄薄涂于样品孔将测试纸润湿；
(B)、取米粒大小待测物通过样品孔均匀滴加或者涂抹于样品垫，待测物可为霜剂、膏剂、乳剂、溶液剂、口红；
(C)、通过滴管滴加提取液3滴，于10-45℃反应2-5min；
(D)、再通过滴管滴加铅反应液2滴，于10-45℃反应5-10min；
(E)、通过观察孔的颜色与比色卡对比判断是否存在重金属铅：在样品垫上滴加待测物及提取液后，待测物及提取液后通过侧向层析只能作用于酶片上，同时与酶片上固定的葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶接触并反应，待测物中的铅可抑制酶片上葡萄糖氧化酶的活性，随后向样品孔滴加铅反应液后，铅反应液中的底物通过侧向层析与葡萄糖氧化酶反应，生成的过氧化物与辣根过氧化物酶继续反应，生成的产物继续层析与显色片上固定的显色剂TMB发生显色反应，生成有色物质，附着在显色片上，若样品中含有铅，使得反应生成物过氧化物减少，则显色片上颜色就会减弱，甚至无色，通过观察孔查看显色片显色程度与配套比色卡比色得到样品中铅含量，检出限为5ppm。
优选地，提取液为PBS或tris-HCl缓冲溶液，pH为6～8，铅反应液为0.1～0.5％的葡萄糖溶液。
本发明的有益效果：
1、本发明利用酶促显色反应原理研制出的快速检测化妆品中铅残留的酶层析速测卡，不但显色迅速，而且速测卡显色片底色和反应后的显色层次较大，颜色档次清楚，容易辨别，增加了检测的灵敏度，与市面上化妆品铅速测卡相比，灵敏度高，在0-10mg/L范围内色阶变化明显，结果易读；同时解决了反应物颜色结果的保存，这对于现场执法保存物证尤为重要，这也是其它同类产品所不具备的优势，因此本产品具有很强的市场竞争力；将显色剂与酶液固定在不同的区域并单独保存可延长酶的保质期；
2、本发明在酶片前固定样品垫，可对化妆品中的色素及大分子化合物起到过滤吸附的作用，有效地减少化妆品中的干扰物质对酶片的影响；
3、本发明操作简单、灵敏度高、技术适用、环保安全，简单培训或按照说明书便可直接操作，无需专业技术人员；
4、本发明可进行现场检测，操作安全、无毒无害、无有机试剂、无需仪器辅助，检测时间短、效率高，检测成本低；
5、本发明速测卡检出限为5ppm，小于国家规定的铅限量标准。
附图说明
图1：本发明提供化妆品重金属铅快速检测卡内部结构。
图2：本发明提供化妆品重金属铅快速检测卡外部结构。
图3：本发明提实施例十五中加标实验中比色卡示意图。
图中：1-底板、2-样品垫、3-酶片、4-显色片、5-吸水垫、6-样品孔、7-观察孔。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合实施实例进一步阐述本发明的内容，但本发明的内容并不仅仅局限于下述的实施例。
实施例一、如图1所示，重金属铅速测卡，包括下盖及与下盖相扣合的上盖，下盖内固定有测试化妆品重金属铅的测试纸，测试纸包括底板1，底板1上从左到右依次设有样品垫2、酶片3、显色片4和吸水垫5，酶片3上吸附有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶，葡萄糖氧化酶和过氧化物酶的酶活力为0.02～0.05U，酶片3上还固定有质量百分数为0.5～2％的酶保护剂，酶保护剂为牛血清白蛋白。显色片4上吸附有显色剂，显色片上吸附有TMB(四甲基联苯胺)，显色片4上还固定有大分子聚合物，大分子聚合物的量为0.2～0.5mg，大分子聚合物可以为聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮，葡聚糖的其中一种。
样品垫2、酶片3、显色片4和吸水垫5均粘结在底板1上，样品垫2与酶片3之间进行搭桥过渡，且样品垫2搭接在酶片3上，酶片3和显色片4之间进行搭桥过渡，显色片4与吸水垫5之间进行搭桥过渡，且吸水垫5搭接在显色片4上。样品垫2与酶片3之间重叠1/7～1/4，酶片3和显色片4之间重叠1/5～1/2，显色片4与吸水垫5之间重叠1/7～1/5。
底板1为带粘性的PVC板，长55～80mm，宽4～5mm。
样品垫2采用玻璃纤维制成，样品垫2长20～30mm，宽4～5mm，样品垫2为白色。
酶片3长10～20mm，宽4～5mm，酶片3的材质可以为滤纸、层析纸、合成纤维素纸，酶片3为白色。
显色片4采用层析纸，显色片4可以为滤纸、层析纸、合成纤维素纸，显色片4为白色。
吸水垫5采用吸水纸，吸水垫5长5～7mm，宽4～5mm，吸水垫5为白色。
上盖设有样品孔6及观察孔7，样品孔6的位置对应样品垫2的位置，观察孔7的位置对应显色片4的位置。
用上述重金属铅速测卡对化妆品中重金属铅检测的方法，步骤为：
(A)、棉签用水润湿，薄薄涂于样品孔6将测试纸润湿；
(B)、取米粒大小待测物通过样品孔6均匀滴加或者涂抹于样品垫2，待测物可为霜剂、膏剂、乳剂、溶液剂、口红；
(C)、通过滴管滴加提取液3滴，于10-45℃反应2-5min；
(D)、再通过滴管滴加铅反应液2滴，于10-45℃反应5-10min；
(E)、通过观察孔7的颜色与比色卡对比判断是否存在重金属铅：在样品垫2上滴加待测物及提取液后，待测物及提取液后通过侧向层析只能作用于酶片3上，同时与酶片3上固定的葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶接触并反应，待测物中的铅可抑制酶片3上葡萄糖氧化酶的活性，随后向样品孔6滴加铅反应液后，铅反应液中的底物通过侧向层析与葡萄糖氧化酶反应，生成的过氧化物与辣根过氧化物酶继续反应，生成的产物继续层析与显色片4上固定的显色剂TMB发生显色反应，生成有色物质，附着在显色片4上，若样品中含有铅，使得反应生成物过氧化物减少，则显色片4上颜色就会减弱，甚至无色，通过观察孔7查看显色片4显色程度与配套比色卡比色得到样品中铅含量，检出限为5ppm。
其中，提取液为PBS或tris-HCl缓冲溶液，pH为6～8，铅反应液为0.1～0.5％的葡萄糖溶液。
实施例二、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，显色片4上固定TMB及PEG，量分别为0.3mg、0.4mg。
实施例三、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，显色片4上固定TMB及PEG，量分别为0.4mg、0.3mg。
实施例四、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，显色片4上固定TMB及PEG，量分别为0.5mg、0.2mg。
实施例五、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，样品垫2与酶片3、酶片3与显色片4重叠，分别重合1/6、1/5，吸水垫5在显色片4上面重叠，重合1/7。
实施例六、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，样品垫2与酶片3、酶片3与显色片4重叠，分别重合1/5、1/5，吸水垫5在显色片4上面重叠，重合1/7。
实施例七、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，样品垫2与酶片3、酶片3与显色片4重叠，分别重合1/4、1/5，吸水垫5在显色片4上面重叠，重合1/7。
实施例八、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫5在显色片4上面重叠，重合1/6。
实施例九、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫5在显色片4上面重叠，重合1/5。
实施例十、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫5长5mm。
实施例十一、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫5长7mm。
实施例十二、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫5长10mm。
对比例一、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，显色片4上固定PEG，量为0.01mg。
对比例二、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，不粘贴样品垫。
对比例三、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫5与显色片4不重叠。
对比例四、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫长2mm。
对比例五、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，吸水垫长15mm。
上述实施例采用铅标准溶液用纯水配制标液0.5、5、10、15mg/L，按照实施例一中给出的重金属铅检测的方法进行检测。
表1不同条件下速测卡结果
检测结果见表1所示：表中(+)代表对空白对照显阳性，表示酶受抑制程度较大，颜色为白色或淡蓝色，表中(-)代表对空白对照显阴性，表示酶受抑制程度较小，颜色为蓝色或浅蓝色，由此可知，添加样品垫2时色阶明显，灵敏度高，有利于浓度范围判断。吸水垫5与显色片4重叠时由于吸水垫5的毛细作用有利于生成物向显色片4层析并抑制生成物反流，有利于显色及浓度范围和结果判断。在显色片4添加大分子聚合物聚乙二醇(PEG)后，可保证TMB固定在显色片4上，且大分子聚合物能有效的截留过氧化物酶的反应产物并与TMB反应，若不添加大分子聚合物，同样的反应时间内，显色片4上大量的蓝色产物被吸水垫5吸附，造成假阳性结果或显色不均匀，不利于观察结果。吸水垫5的长度对实验结果至关重要，吸水垫5过长或过短都会显著影响酶的受抑制程度。
实施例十三、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，酶片3上固定有0.03U的葡萄糖氧化酶及辣根过氧化物酶。
实施例十四、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，酶片3上固定有0.04U的葡萄糖氧化酶及辣根过氧化物酶。
对比例六、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，酶片3上固定有0.005U的葡萄糖氧化酶及辣根过氧化物酶。
对比例七、制备速测卡：按照实施例一的方法制备速测卡，其中，酶片3上固定有0.06U的葡萄糖氧化酶及辣根过氧化物酶。
上述实施例采用铅标准溶液用纯水配制标液0.5、5、10、15mg/L，按照实施例一中给出的重金属铅检测的方法进行检测。
表2不同条件下速测卡结果
| 浓度(mg/L) | 实施例13-14 | 对比例6 | 对比例7 |
| 15 | + | + | + |
| 10 | + | + | + |
| 5 | - | + | - |
| 0.5 | - | + | - |
对催化TMB显色的酶浓度进行试验，研究发现在较低酶浓度条件下，随着酶量的加大，显色后颜色梯度更加明显，但是当酶浓度大于0.05U后，任凭加大使用量，试纸的显色速度和显色梯度都不会有变化，即酶量达到饱和，因此确定酶量最佳使用浓度为0.02～0.05U。
实施例十五、用乳液、水溶液、粉底、口红、霜膏做加标实验，分别取3g上述样品进行加标0、5、10、15ppm进行混匀。混匀后按照上述实施例一中记载方法进行测试(结果判定在6min时判读，不要超过10min)。
表2加标实验结果与比色卡进行比对结果
由表2可知，加标实验结果与比色卡对应一致。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围。
Claims (10)
1.重金属铅速测卡，包括下盖及与下盖相扣合的上盖，所述下盖内固定有测试化妆品重金属铅的测试纸，其特征在于，所述测试纸包括底板(1)，所述底板(1)上从左到右依次设有样品垫(2)、酶片(3)、显色片(4)和吸水垫(5)，所述酶片(3)上吸附有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶，所述葡萄糖氧化酶和所述过氧化物酶的酶活力为0.02～0.05U，所述酶片(3)上还固定有质量百分数为0.5～2％的酶保护剂，所述显色片(4)上吸附有显色剂，所述显色片上吸附有TMB，所述显色片(4)上还固定有大分子聚合物，所述大分子聚合物的量为0.2～0.5mg；所述样品垫(2)、酶片(3)、显色片(4)和吸水垫(5)均粘结在所述底板(1)上，所述样品垫(2)与所述酶片(3)之间进行搭桥过渡，且所述样品垫(2)搭接在所述酶片(3)上，所述酶片(3)和所述显色片(4)之间进行搭桥过渡，所述显色片(4)与所述吸水垫(5)之间进行搭桥过渡，且所述吸水垫(5)搭接在所述显色片(4)上，所述上盖设有样品孔(6)及观察孔(7)，所述样品孔(6)的位置对应所述样品垫(2)的位置，所述观察孔(7)的位置对应所述显色片(4)的位置。
2.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述样品垫(2)与所述酶片(3)之间重叠1/7～1/4，所述酶片(3)和所述显色片(4)之间重叠1/5～1/2，所述显色片(4)与所述吸水垫(5)之间重叠1/7～1/5。
3.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述底板(1)为带粘性的PVC板，长55～80mm，宽4～5mm。
4.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述样品垫(2)采用玻璃纤维制成，所述样品垫(2)长20～30mm，宽4～5mm，所述样品垫(2)为白色。
5.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述酶片(3)长10～20mm，宽4～5mm，所述酶片(3)的材质可以为滤纸、层析纸、合成纤维素纸，所述酶片(3)为白色。
6.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述显色片(4)采用层析纸，所述显色片(4)可以为滤纸、层析纸、合成纤维素纸，所述显色片(4)为白色。
7.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述吸水垫(5)采用吸水纸，所述吸水垫(5)长5～7mm，宽4～5mm，所述吸水垫(5)为白色。
8.根据权利要求1所述的重金属铅速测卡，其特征在于，所述酶保护剂为牛血清白蛋白，所述大分子聚合物可以为聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮，葡聚糖的其中一种。
9.用权利要求1所述的重金属铅速测卡对化妆品中重金属铅检测的方法，其特征在于，步骤为：
(A)、棉签用水润湿，薄薄涂于样品孔(6)将测试纸润湿；
(B)、取米粒大小待测物通过样品孔(6)均匀滴加或者涂抹于样品垫(2)，所述待测物可为霜剂、膏剂、乳剂、溶液剂、口红；
(C)、通过滴管滴加提取液3滴，于10-45℃反应2-5min；
(D)、再通过滴管滴加铅反应液2滴，于10-45℃反应5-10min；
(E)、通过观察孔(7)的颜色与比色卡对比判断是否存在重金属铅：在样品垫(2)上滴加待测物及提取液后，待测物及提取液通过侧向层析只能作用于酶片(3)上，同时与酶片(3)上固定的葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶接触并反应，待测物中的铅可抑制酶片(3)上葡萄糖氧化酶的活性，随后向样品孔(6)滴加铅反应液后，铅反应液中的底物通过侧向层析与葡萄糖氧化酶反应，生成的过氧化物与辣根过氧化物酶继续反应，生成的产物继续层析与显色片(4)上固定的显色剂TMB发生显色反应，生成有色物质，附着在显色片(4)上，若样品中含有铅，使得反应生成物过氧化物减少，则显色片(4)上颜色就会减弱，甚至无色，通过观察孔(7)查看显色片(4)显色程度与配套比色卡比色得到样品中铅含量，检出限为5ppm。
10.根据权利要求9所述的化妆品中重金属铅检测的方法，其特征在于，所述提取液为PBS或tris-HCl缓冲溶液，pH为6～8，所述铅反应液为0.1～0.5％的葡萄糖溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110225271.7A CN112986229A (zh) | 2021-03-01 | 2021-03-01 | 一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110225271.7A CN112986229A (zh) | 2021-03-01 | 2021-03-01 | 一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112986229A true CN112986229A (zh) | 2021-06-18 |
Family
ID=76351570
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110225271.7A Pending CN112986229A (zh) | 2021-03-01 | 2021-03-01 | 一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112986229A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114674816A (zh) * | 2022-04-18 | 2022-06-28 | 广州新原生物科技有限公司 | 一种乳过氧化物酶检测卡及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-03-01 CN CN202110225271.7A patent/CN112986229A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114674816A (zh) * | 2022-04-18 | 2022-06-28 | 广州新原生物科技有限公司 | 一种乳过氧化物酶检测卡及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0071934B1 (en) | Method for preparing a color stable chromogenic analytical element | |
| Puangbanlang et al. | A paper-based device for simultaneous determination of antioxidant activity and total phenolic content in food samples | |
| Martinez-Pérez et al. | A reagent less fluorescent sol–gel biosensor for uric acid detection in biological fluids | |
| US20040147036A1 (en) | Means and method for determining the content of sulfurous acid in liquids | |
| AU3368097A (en) | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound | |
| US4273868A (en) | Color stable glucose test | |
| CN104007104A (zh) | 快速检测有机磷农药残留的试剂盒及其使用方法 | |
| CN109358043B (zh) | 一种用有机溶剂提取样品快速检测农药残留的方法 | |
| Jiao et al. | Application of p-phenylenediamine as an electrochemical substrate in peroxidase-mediated voltammetric enzyme immunoassay | |
| Veselova et al. | Visual determination of mercury (II) using horseradish peroxidase immobilized on polyurethane foam | |
| CN112986229A (zh) | 一种化妆品的重金属铅速测卡及其检测方法 | |
| EP0036563B1 (en) | Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device | |
| CN107153044A (zh) | 一种改良型的同型半胱氨酸试剂盒及其检测方法 | |
| US10246732B2 (en) | Stabilized test strip for the detection of hydrogen peroxide | |
| CN112986227A (zh) | 一种化妆品的重金属汞速测卡及其检测方法 | |
| EP1410001A1 (en) | Multilayer analytical element and method for determination of analytes in fluids containing interfering substances | |
| CN102384971A (zh) | 唾液酒精含量测试条及其制作方法 | |
| US5093082A (en) | Purified guaiacum resin and method for making the same | |
| CN108623522A (zh) | 一种快速高选择性检测次氯酸的方法 | |
| JPS6259782B2 (zh) | ||
| Bartik et al. | Nα-TOSYL-l-arginine-p-nitroanilide as substrate in color test and polarographic test of trypsin | |
| CN202626186U (zh) | 肌酐测定试剂盒 | |
| CN102095856A (zh) | 一种超氧化物歧化酶快速检测卡及其检测方法 | |
| US7514265B2 (en) | Aldehyde detection kit and method thereof | |
| Möttönen | Comparison of the agar‐plate diffusion method for α‐Amylase assay with the colorimetric stationary‐stage method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |