CN112980719B - 一株耐氧动物双歧杆菌 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一株耐氧动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)AR668‑R1菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20457。该菌株在摇瓶有氧培养条件下能够正常生长，其活菌数可达1.7×10⁹CFU/mL以上，在10.0mM的H₂O₂浓度下仍能存活，该耐氧动物双歧杆菌AR668‑R1在有氧培养条件下的活菌数和H₂O₂耐受性显著高于现有菌株，具有很好的耐氧性和过氧化氢耐受性，在食品工业上具有广泛的应用前景。

Description

一株耐氧动物双歧杆菌

技术领域

本发明属于食品科学技术领域，具体涉及一株耐氧动物双歧杆菌AR668-R1菌株。

背景技术

作为人及动物肠道中最重要的一类益生菌，双歧杆菌(Bifidobacterium)在维持肠道微生态平衡中起着至关重要的作用。双歧杆菌在肠道菌群调节、增强机体免疫力、缓解乳糖不耐症和预防感染性腹泻等方面发挥重要作用，广泛应用在食品、保健品和药品等领域。我国***办公厅批准在食品中应用的双歧杆菌包括动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、短双歧杆菌和长双歧杆菌，而可用于婴幼儿食品的双歧杆菌仅有动物双歧杆菌。

双歧杆菌在奶粉、酸奶、冰淇淋、复合蔬菜汁、啤酒和保健饮品等食品中广泛应用。为更好发挥双歧杆菌益生作用，菌体在经过胃肠道时需保持较高活菌数并黏附定殖，但实际生产加工、贮藏、包装过程中面临氧气胁迫，常导致双歧杆菌活菌数和活力不足，限制其在功能食品中的应用。因此，筛选出耐氧双歧杆菌，为解决双歧杆菌氧敏感问题及其工业应用奠定基础。而目前已有的专利报道菌株的耐氧性和过氧化氢耐受性均不强，如专利CN201110089493.7和202010739487。

发明内容

本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一株耐氧动物双歧杆菌。

本发明提供了一株耐氧动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)AR668-R1菌株，具有这样的特征，包括：耐氧动物双歧杆菌AR668-R1菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20457。

发明的作用与效果

根据本发明所涉及的一株耐氧动物双歧杆菌AR668-R1菌株，在摇瓶有氧培养条件下，AR668-R1能够正常生长，其活菌数可达1.7×10⁹CFU/mL以上，在10.0mM的H₂O₂浓度下仍能存活，该耐氧动物双歧杆菌AR668-R1在有氧培养条件下的活菌数和H₂O₂耐受性显著高于现有菌株，具有很好的耐氧性和过氧化氢耐受性，在食品工业上具有广泛的应用前景。

附图说明

图1是本发明的实施例中的耐氧动物双歧杆菌的驯化流程；

图2是本发明的实施例中厌氧和有氧条件下动物双歧杆菌AR668与耐氧动物双歧杆菌AR668-R1的生长对比；

图3是本发明的实施例中在厌氧和有氧条件下培养24h后双歧杆菌发酵液菌落数。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本发明作具体阐述。

<实施例>

本实施例的一株耐氧动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)AR668-R1菌株已于2020年07月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.20457。

该耐氧动物双歧杆菌AR668-R1菌株由动物双歧杆菌AR668耐氧驯化后得到，具体过程如下：

使用材料：动物双歧杆菌AR668，来源于婴幼儿粪便，通过分离得到；双歧杆菌BS培养基，青岛海博生物技术有限公司。

使用仪器与设备：摇床振荡培养箱，厌氧培养箱，紫外分光光度计，灭菌锅。

图1是本发明的实施例中的耐氧动物双歧杆菌的驯化流程。

如图1所示，驯化流程如下：将动物双歧杆菌AR668单克隆置于液体BS培养基中活化后，依次在含有4mM、5mM、6mM和8mM过氧化氢的BS液体培养基中传代三次，再将种子液以5％添加在100mLBS液体培养基中，在37℃下厌氧培养24h，以5％接种在由封口膜封口的250mL的锥形瓶中进行转速为100rpm的振荡培养24h，装液量为100mL，在厌氧-有氧循环10次后，进入第二轮驯化，摇床转速提高到150rpm，交替培养循环10次。进入第三轮驯化，摇床转速为200rpm，交替培养循环10次后，获得耐氧动物双歧杆菌AR668-R1。

本实施例中，在相同培养条件下对动物双歧杆菌AR668与耐氧动物双歧杆菌AR668-R1进行成长对比，具体过程如下：

将AR668和AR668-R1过夜活化，用BS液体培养基调整到相同的OD₆₀₀。按5％的接种量接种在100mL的BS液体培养基中，分别同时进行密封静置培养和100rpm、150rpm、200rpm摇床振荡培养24h，每隔2h在600nm下测定1次吸光值，每次3个平行。

图2是本发明的实施例中厌氧和有氧条件下动物双歧杆菌AR668与耐氧动物双歧杆菌AR668-R1的生长对比，图3是本发明的实施例中在厌氧和有氧条件下培养24h后双歧杆菌发酵液菌落数。

如图2所示，图2中(a)、(b)、(c)、(d)分别为在厌氧条件、100rpm、150rpm、200rpm摇床振荡的有氧培养条件下的生长对比，AR668-R1在静置和100rpm、150rpm、200rpm摇床振荡的有氧培养条件下，其最大生长OD₆₀₀分别为1.44、1.41、1.32和1.22，由此可见驯化后的AR668-R1在摇床有氧条件下能够正常生长，最大菌浓随着摇床转速的提高而稍微下降，如图3所示，在三种有氧条件下其活菌数都可达1.7×10⁹CFU/mL以上，最高活菌数达到2×10⁹CFU/mL。相比之下，出发菌株AR668在厌氧条件下OD₆₀₀最高仅能达到1.08，其活菌数为1.3×10⁹CFU/mL，在不同转速摇床振荡的有氧条件下，其生长也受到极大的抑制，达到稳定期后的生长OD₆₀₀也都低于0.2，其活菌数都低于2×10⁸CFU/mL，并且改变摇床转速也观察不到AR668生长的明显变化规律。因此，相比AR668而言，经过间歇式驯化得到的菌株AR668-R1的耐氧性能得到极大提高，本实施例的耐氧动物双歧杆菌AR668-R1生长在有氧和厌氧条件下均明显好于出发菌株。

本实施例中，还对动物双歧杆菌AR668与耐氧动物双歧杆菌AR668-R1的过氧化氢耐受性进行对比，具体过程如下：

将AR668和AR668-R1过夜活化，双歧杆菌过夜培养并调节菌液OD₆₀₀＝0.6±0.05，以不含有H₂O₂的BS液体培养基为空白对照。在最终浓度为3.5、4.5、6.0、8.5、10.0、12.0mMH₂O₂情况下，以1％比例接菌孵育3h，菌液稀释，平板涂布，平板计数双歧杆菌存活率，每组重复3次。经过H₂O₂孵育后的AR668和AR668-R1通过平板涂布法，测定其H₂O₂最高致死浓度，测定结果如表1，

表1双歧杆菌驯化前后过氧化氢耐受度的变化

如表1所示，AR668在6.0mM的H₂O₂浓度下就全部死亡，但AR668-R1存活率没有明显下降，而AR668-R1在10.0mM的H₂O₂浓度下仍有存活，AR668-R1的H₂O₂耐受最高致死浓度为12.0mM，比AR668提高了近两倍，表明AR668-R1的过氧化氢耐受性明显增强。

综上所述，本实施例筛选出的耐氧动物双歧杆菌AR668-R1，在摇瓶有氧培养条件下能够正常生长，且其活菌数可达1.7×10⁹CFU/mL以上，并且在10.0mM的H₂O₂浓度下仍能存活，具有极好的耐氧特性和过氧化氢耐受性。

实施例的作用与效果

根据本实施例所涉及的一株耐氧动物双歧杆菌AR668-R1菌株，在摇瓶有氧培养条件下，AR668-R1能够正常生长，其活菌数可达1.7×10⁹CFU/mL以上，在10.0mM的H₂O₂浓度下仍能存活，该耐氧动物双歧杆菌AR668-R1在有氧培养条件下的活菌数和H₂O₂耐受性显著高于现有菌株，具有很好的耐氧性和过氧化氢耐受性，在食品工业上具有广泛的应用前景。

上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一株耐氧动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)AR668-R1菌株，其特征在于：所述耐氧动物双歧杆菌AR668-R1菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20457。

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