CN112979833A - 一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用。本发明从血红栓菌子实体中提取分离得到冷水提多糖TsL1、热水提多糖TsL2两种血红栓菌多糖及其混合物血红栓菌总多糖TsLCP，并以血红栓菌总多糖为活性成分制备药物，应用在***中。血红栓菌总多糖TsLCP对人三阴性乳腺癌细胞株无细胞毒活性，可显著抑制人脐静脉内皮细胞管腔形成和鸡胚绒毛***血管生成，表现出良好的肿瘤微血管抑制活性。血红栓菌总多糖高效低毒的抗肿瘤作用在其作为活性先导化合物的抗肿瘤药物开发中具有明显优势，拓展了血红栓菌的药用新功能，具有良好的应用前景。

Description

一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，尤其涉及一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用。

背景技术

肿瘤转移是恶性肿瘤的重要生物学特征，大多数癌症患者并非死于原发性癌而是死于转移性癌，侵袭性与转移能力是癌细胞区别于正常细胞的最基本的特征，也是导致患者肿瘤复发、疾病恶化而最终死亡的病理基础。研究发现，许多具有高度转移能力的肿瘤细胞可以过度表达一种糖苷酶—乙酰肝素酶，乙酰肝素酶通过特异性降解细胞外基质中的硫酸乙酰肝素，一方面破坏细胞外基质的完整性，促进肿瘤细胞的侵袭；另一方面可释放绑定在细胞和细胞外基质中的bFGF、VEGF等生长因子，促进肿瘤微血管生成、肿瘤侵袭与转移。因此，靶向乙酰肝素酶抑制肿瘤微血管生成可能是靶向***的有效途径之一。

血红栓菌(Trametes sanguinea)是一种药用真菌，属于多孔菌科栓菌属，生长于多种阔叶树的倒木、树桩和腐朽木上，分布于吉林、河北、山西、陕西等地；子实体侧生无柄，木栓质，菌盖扁半球形至扁平，单生至叠瓦状叠生，橙色至红色，有微细绒毛至无毛，稍有皱纹；以干燥子实体入药，味微辛、涩，性温，具有祛风除湿，清热解毒，行气，止血，止痒等功效。有研究表明，血红栓菌提取物有抑制癌细胞作用，对S-180小鼠肉瘤180的抑制率为90％。

糖是生命体内重要的信息物质，在细胞识别，癌症的发生和转移，机体的免疫等生物过程中都起着关键作用。现代药理学研究表明，多糖是真菌中的重要活性成分，其具有安全、无毒、生物活性学活性的优良特性；多糖与肝素具有结构相似性，可竞争性地与肝素酶结合从而抑制肝素酶活性，产生抗肿瘤新生血管生成、肿瘤侵袭与转移的作用。基于乙酰肝素酶在肿瘤转移中的重要地位和作用特点，研制多糖类靶向乙酰肝素酶抗肿瘤药物具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用。本发明中的血红栓菌总多糖TsLCP具有显著的肿瘤微血管抑制作用，且对两株人源三阴性乳腺癌细胞株均无细胞毒作用；其高效、低毒的成药性优势显示了其作为靶向开发抗肿瘤药物的独特优势。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种血红栓菌总多糖，为血红栓菌多糖TsL1和TsL2按任意比例的混合物；血红栓菌多糖TsL1和TsL2通过以下步骤制备得到：

(1)将血红栓菌子实体脱脂、晾干后粉碎得血红栓菌粉末。

(2)将血红栓菌粉末以纯净水常温搅拌提取至少4h，过滤得到冷水提取液和冷水提药渣，冷水提取液依次经浓缩、醇沉、透析、离心、冻干后得血红栓菌多糖TsL1；其中1g血红栓菌粉末至少需要20ml纯净水。

(3)将冷水提药渣加入纯净水100℃水浴提取至少1h，过滤得到的热水提取液经浓缩、醇沉、透析、离心、冻干后得血红栓菌多糖TsL2；其中1g冷水提药渣至少需要20ml纯净水。

进一步地，所述血红栓菌多糖TsL1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成，摩尔比为 1.03:1.57:2.54:1.00；其结构中主要含有10种连接方式，分别为T-Fucp-(1→、T-Manp-(1→、 T-Galp-(1→、→4)-Manp-(1→、→4)-Glcp-(1→、→6)-Manp-(1→、→6)-Galp-(1→、→3,4)-Glcp-(1→、→4,6)-Glcp-(1→和→3,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为 2.1:1.7:1.4:1.0:3.6:2.0:8.6:1.3:2.2:1.2。所述血红栓菌多糖TsL2由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比1.87:1.00:94.20:4.22；其结构中主要含有4种连接方式，分别为 T-Glcp-(1→、→3)-Glcp-(1→、→4)-Glcp-(1→和→4,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为1.0:2.1:7.6:1.4。

进一步地，所述步骤(2)和(3)中，浓缩后的体积小于等于原体积的1/10。

进一步地，所述步骤(2)和(3)中，透析操作采用截留分子量小于等于3000的透析袋。

一种血红栓菌总多糖的应用，血红栓菌总多糖具有肿瘤微血管抑制作用。

一种血红栓菌总多糖的应用，治疗有效量的血红栓菌总多糖与药学上可接受的载体结合，用于制备预防或者/和治疗，或者/和协同***的药物。

进一步地，所述药物为汤剂、丸剂、散剂、膏剂、冲剂、口服液剂、胶囊剂或片剂等。

进一步地，所述肿瘤为三阴性乳腺癌。

本发明的有益效果是：与现有的药物相比，本发明所述血红栓菌总多糖在肿瘤治疗应用的优势在于，制备简单，结构新颖，无细胞毒活性，有显著的肿瘤微血管抑制作用。血红栓菌总多糖制备过程所使用溶剂价廉易得，且无毒；制备所得血红栓菌总多糖结构新颖，无细胞毒活性，且具有显著的肿瘤微血管抑制作用，是理想的抗肿瘤药物开发的先导化合物，具有良好的应用前景。

附图说明

为更清楚的说明本发明例，下面将对实施例中所需要的附图做简要地介绍：

图1为所述血红栓菌总多糖TsLCP对两株人源三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的生长抑制曲线图；

图2为血红栓菌总多糖TsLCP的人脐静脉内皮细胞管腔形成实验示意图；

图3为血红栓菌总多糖TsLCP的鸡胚绒毛***血管生成实验示意图。

具体实施方式

结合以下具体情况和实施例进一步说明本发明，但不应将实施例理解为对本发明的限制。

本发明一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用，从中药血红栓菌子实体中提取分离出冷水提多糖TsL1、热水提多糖TsL2两种血红栓菌多糖，以其为活性组分制备具有肿瘤微血管抑制作用的组合物血红栓菌总多糖，并应用在抗肿瘤药物中。本发明中的血红栓菌多糖含有含量较为丰富且罕见的岩藻糖以及少量的葡萄糖醛酸，此类结构的血红栓菌多糖暂未见文献报道；血红栓菌总多糖TsLCP具有显著的肿瘤微血管抑制作用，且对两株人源三阴性乳腺癌细胞株均无细胞毒作用，说明其肿瘤微血管抑制作用并非由细胞毒作用产生，因多糖与肝素具有结构相似性，结合现有多糖文献报道，推测其可竞争性地与肝素酶结合从而抑制肝素酶活性，进而产生抗肿瘤新生血管生成作用。本发明所述血红栓菌多糖和血红栓菌总多糖在生物医药领域具有多种潜在的应用前景，其高效、低毒的成药性优势显示了其作为靶向开发抗肿瘤药物的独特优势，可作为新型多糖类靶向乙酰肝素酶抗肿瘤药物开发的先导化合物，用于多种疾病的预防及治疗。

本发明的多糖包括从血红栓菌中提取分离的冷水提多糖TsL1、热水提多糖TsL2和包含有这2种多糖的混合物—血红栓菌总多糖TsLCP。血红栓菌多糖TsL1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖按摩尔比为1.03:1.57:2.54:1.00组成，其结构中主要含有10种连接方式，分别为T-Fucp-(1→、T-Manp-(1→、T-Galp-(1→、→4)-Manp-(1→、→4)-Glcp-(1→、→6)-Manp-(1→、→6)-Galp-(1→、→3,4)-Glcp-(1→、→4,6)-Glcp-(1→和→3,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为 2.1:1.7:1.4:1.0:3.6:2.0:8.6:1.3:2.2:1.2；血红栓菌多糖TsL2由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖按摩尔比1.87:1.00:94.20:4.22组成，其结构中主要含有4种连接方式，分别为T-Glcp-(1→、→3)-Glcp-(1→、→4)-Glcp-(1→和→4,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为1.0:2.1:7.6:1.4；血红栓菌总多糖TsLCP为多糖TsL1和TsL2的混合物。

本发明提供的冷水提多糖TsL1和热水提多糖TsL2是从栓菌属血红栓菌(Trametessanquinea)子实体中提取获得，血红栓菌总多糖TsLCP为以上两种多糖的混合物。制备方法如下：

S1.将血红栓菌子实体脱脂、晾干后粉碎得血红栓菌粉末；

S2.将血红栓菌粉末以20倍纯净水常温磁力搅拌提取4h，冷水提取液经浓缩、醇沉、透析、离心、冻干后得冷水提多糖TsL1；

S3.将冷水提药渣加入20倍纯净水100℃水浴提取1h，热水提取液经浓缩、醇沉、透析、离心、冻干后得热水提多糖TsL2；

上述步骤S2和S3中，所述浓缩操作均为将原体积浓缩为原体积的1/10。

上述步骤S2和S3中，所述透析操作中所用的透析袋为截留分子量为3000的透析袋。

本发明的多糖和药物组合物可用于制备抗肿瘤药物。血红栓菌总多糖TsLCP对肿瘤细胞的增殖抑制实验表明，血红栓菌总多糖对MDA-MB-231、MDA-MB-468两种人源三阴性乳腺癌细胞株均无细胞毒作用，给药48h后，在多糖浓度为0-50μg/mL浓度范围内，两株人源三阴性乳腺癌细胞株细胞存活率均超过90％，说明其肿瘤微血管抑制活性不是通过细胞毒作用，其高效低毒的抗肿瘤作用在其作为活性先导化合物的抗肿瘤药物开发中具有显著优势。上述细胞株可采用市售产品。

上述制备的血红栓菌总多糖，具有高效低毒的肿瘤微血管抑制作用，可与一种或多种药学上可接受的载体结合，用于制备预防或者/和治疗，或者/和协同***的药物。

上述药学上可接受的载体是指药学领域的药物载体。如：稀释剂、赋形剂如水、生理盐水、葡萄糖、甘露醇、甘油、乙醇机器混合物等；填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、海藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如吐温-80；润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其他辅料如香味剂、甜味剂等。所述药物可以为：汤剂、丸剂、散剂、膏剂、冲剂、口服液剂、胶囊剂、片剂、注射剂等形式。

实施例1血红栓菌多糖制备

制备血红栓菌冷水提多糖TsL1

取血红栓菌子实体2kg，加约5～6倍量95％乙醇回流脱脂3次，1h/次，沸腾后，保持微沸状态，避免过高温度。将脱脂后血红栓菌晾干后粉碎，取粉末150g，加纯净水3000mL，磁力搅拌4h，离心所得上清液浓缩至原体积1/10后，搅拌并缓缓加入至5倍体积95％乙醇中，4℃冰箱中静置过夜。6000r/min离心10min得沉淀部分，分别加入3倍于沉淀体积的无水乙醇、***和丙酮充分搅拌洗涤沉淀并离心，所得沉淀于50℃烘箱中烘干。烘干后样品置于截留分子量为3000的透析袋中流水透析至体积不在变化，6000r/min离心10min，取上清液浓缩后冷冻干燥，得冷水提多糖TsL1，得率为2.06％。

制备血红栓菌热水提多糖TsL2

取血红栓菌粉末冷水提药渣，加入纯净水3000mL，于100℃水浴磁力搅拌1h，冷却后抽滤，重复提取2次，合并滤液，浓缩至原体积1/10后，搅拌并缓缓加入至5倍体积95％乙醇中，4℃冰箱中静置过夜。6000r/min离心10min得沉淀部分，分别加入2倍于沉淀体积的无水乙醇、***和丙酮充分搅拌洗涤沉淀并离心，所得沉淀于50℃烘箱中烘干。烘干后样品置于截留分子量为3000的透析袋中流水透析至体积不在变化，6000r/min离心10min，取上清液浓缩后冷冻干燥，得热水提多糖TsL2，得率为8.05％。

实施例2血红栓菌多糖单糖组成分析

准确称取血红栓菌多糖TsL1和TsL2各2mg，以等摩尔配制的十糖标准品(甘露糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、***糖、岩藻糖)为标准品，PMP-HPLC法测定各多糖单糖组成，测定结果见表1。

表1：血红栓菌多糖单糖组成测定结果

由表1可知，2种血红栓菌多糖均含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖，多糖TsL1还含有约20％的岩藻糖，有研究显示真菌多糖中的岩藻糖在真菌多糖的抗肿瘤活性和免疫调节活性中发挥十分重要的作用；多糖TsL2还含有少量的葡萄糖醛酸。

实施例3血红栓菌多糖糖苷键连接方式测定

利用改良的Hakomori法对血红栓菌多糖TsL1和TsL2进行甲基化分析，根据美国佐治亚大学糖复合物研究中心(CCRC)的糖质谱库(CCSD)对气相-质谱峰进行分析，确定各多糖结构中糖苷键连接方式。结果如表2所示。

表2血红栓菌多糖的甲基化数据分析

由表3可知，多糖TsL1的连接方式最为复杂，含有10种连接方式，包括T-Fucp-(1→、 T-Manp-(1→、T-Galp-(1→、→4)-Manp-(1→、→4)-Glcp-(1→、→6)-Manp-(1→、→6)-Galp-(1→、→3,4)-Glcp(1→、→4,6)-Glcp-(1→和→3,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为2.1:1.7:1.4:1.0:3.6:2.0:8.6:1.3:2.2:1.2，其中以→6)-Galp-(1→为主，→3,4)-Glcp(1→、→4,6)-Glcp-(1→和→3,6)-Glcp-(1→的存在说明其具有多条支链，其结构中所含岩藻糖主要以 T-Fucp-(1→的形式存在；多糖TsL2结构相对简单，主要含有4种连接方式，分别为T-Glcp-(1→、→3)-Glcp-(1→、→4)-Glcp-(1→和→4,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为1.0:2.1:7.6:1.4；主要以→4)-Glcp-(1→为主，→4,6)-Glcp-(1→的存在说明其结构中含有少量支链。

实施例4血红栓菌总多糖TsLCP对人三阴性乳腺癌瘤株细胞毒活性研究

人源三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MDA-MB-468均购自中国科学院细胞库。取上述对数生长期的细胞消化计数后，按3×10³个细胞/100μL/孔接种于96孔细胞培养板中，培养24h待细胞贴壁后，用不同浓度(10，20，30，40，50μg/mL)的血红栓菌总多糖TsLCP 处理。药物与肿瘤细胞孵育48h后，加MTT，37℃继续孵育4h后，终止培养，用移液枪轻轻吸掉培养液，加入DMSO(150μL/孔)，振摇均匀后，用酶标仪在570nm处测定每个孔的光密度OD值，各平行孔的OD值取平均数，计算细胞活力，将各测试孔的OD值减去本底OD 值，计算药物对肿瘤细胞的抑制率。细胞活力＝给药孔平均光密度值/对照组平均光密度值×100％，抑制率＝(1-给药孔平均光密度值/对照组平均光密度值)×100％。根据细胞活力绘制化合物对两种人源三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468的生长抑制曲线，结果如图1所示。

图1的生长抑制曲线表明，给药48h后，在多糖浓度为0-50μg/mL浓度范围内，两株人源三阴性乳腺癌细胞株细胞存活率均超过90％，说明血红栓菌总多糖TsLCP对MDA-MB-231、 MDA-MB-468两种人源三阴性乳腺癌细胞株均无细胞毒活性。说明其肿瘤微血管抑制作用不是通过细胞毒作用，其高效低毒的抗肿瘤作用在其作为活性先导化合物的抗肿瘤药物开发中具有显著优势。

实施例5血红栓菌总多糖TsLCP的人脐静脉内皮细胞管腔形成实验

将基质胶置于4℃冰箱，使胶缓慢融化。同时准备预冷的枪头用于吸取基质胶，开始之前准备冰盒放置于紫外灯下灭菌，取一96孔板放置于冰上，用预冷的枪头吸取融化后的基质胶，以50μL/孔密度接种到96孔板中，实验全程在冰上操作。将96孔板水平放置在4℃冰箱10min左右，使胶平铺于板中。之后放置在37℃培养箱中使胶凝固。取对数生长期的iHUVEC细胞株，消化离心，调整细胞密度为2×10⁵cell/mL，取50μL细胞悬液竖直加入到含Matrigel 96孔板中，细胞密度为10000/孔，注意细胞悬液密度保持均匀，加入不同浓度(12.5， 25，50μg/mL)的血红栓菌总多糖TsLCP，对照组加入等体积培养基。6h后观察管腔形成情况，显微镜下拍照观察。

图2为血红栓菌总多糖TsLCP的管腔形成实验照片，由图可知，与空白组比较，药液组管腔形成的分支数目明显减少；多糖TsLCP12.5μg/mL，25μg/mL和50μg/mL组HUVEC管腔形成的分支数目均显著减少，且抑制作用随浓度增加而增强，提示血红栓菌总多糖TsLCP 具有显著抑制HUVEC管腔形成能力。

实施例6血红栓菌总多糖TsLCP的鸡胚绒毛***血管生成实验

种蛋消毒后，将种蛋孵育于恒温恒湿箱，温度37.5℃。种蛋的气室向上，每天转蛋4次。孵蛋第7天，75％酒精消毒气室蛋壳表面2cm×3cm区域，用刀片在蛋壳表面划刻出凹痕，用尖针在气室表面打开一1cm×1.5cm长方形小孔，暴露出卵壳膜；用1mL温热无菌的PBS 润洗卵壳膜，静置1分钟，再用眼科镊小心将卵壳膜揭去，即暴露出***。用微量移液器向无菌中速定性滤纸小片上分别加入生理盐水10μL，50μg/mL和200μg/mL的血红栓菌总多糖TsLCP各10μL，并调整鸡蛋位置，使药膜平衡于开口中央。用无菌透明胶带纸封口，加药后分别孵育48h。取下CAM将胚蛋剪开透明胶带纸，在健康胚蛋CAM上直接加入甲醇: 丙酮为(1:1)的固定液固定，用眼科剪沿气室边缘剪开CAM，用眼科镊取出CAM，平铺在载玻片上，晾干，制成CAM标本。置于解剖镜下观察并进行图像采集。

图3为血红栓菌总多糖TsLCP的鸡胚绒毛***血管生成图片。正常状态下CAM血管生长呈现叶脉状，以载体为中心向四周分级生长，主血管粗壮，分支血管清晰；多糖药液组较空白对照相比，CAM血管生成数量明显减少，在50μg/mL浓度时，无CAM大血管生成，在200μg/mL浓度时，已无CAM明显血管生成，提示血红栓菌总多糖TsLCP对新血管生成具有显著的抑制作用。

在正常生理过程中，新生血管会迅速成熟并趋于稳定；而在肿瘤生长过程中，肿瘤就如同一个“永远不会愈合的伤口”，通过不断地过度分泌促血管生长因子，诱导现有血管出芽，形成新的血管结构，为其生长提供氧气与营养，同时新生的肿瘤血管也成为肿瘤细胞转移的重要通道。通过抑制肿瘤内部血管新生有望打破该恶性循环过程，阻滞肿瘤生长，诱使肿瘤细胞凋亡或者坏死。自1971年Folkman教授首先提出通过抑制血管生成是抑制肿瘤生长的有效策略后，肿瘤微血管抑制已成为抗肿瘤药物研究的热点之一。本发明采用两种新生血管生成评价模型，对血红栓菌总多糖TsLCP的肿瘤微血管抑制作用进行了研究，结果显示：血红栓菌总多糖TsLCP在体外无细胞毒浓度下即显著抑制HUVEC的管腔形成，且能显著抑制鸡胚***血管新生，表现出极强的肿瘤微血管抑制活性，可用于多种血管新生相关疾病的治疗。

本发明制备的血红栓菌总多糖TsLCP，具有高效低毒的肿瘤微血管抑制作用，可与一种或多种药学上可接受的载体结合，用于制备预防或者/和治疗，或者/和协同***的药物。所述药物可以为：汤剂、丸剂、散剂、膏剂、冲剂、口服液剂、胶囊剂、片剂等形式。

综上所述，本发明的血红栓菌总多糖，制备简单，无细胞毒活性，具有高效的肿瘤微血管抑制作用，是理想的抗肿瘤药物开发的先导化合物，具有良好的应用前景。此外，本发明制备的血红栓菌总多糖，还可以与其它抗肿瘤药物协同使用。

当本发明血红栓菌总多糖类化合物被用做药物时，可将治疗有效剂量的血红栓菌总多糖施用于哺乳动物，其中该治疗有效剂量通常至少200μg/kg体重，较佳的给药剂量约为200μg/kg 体重～20mg/kg体重。具体剂量还应考虑给药方式、病人健康状况等因素。

本发明中所描述的具体实施例，仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

尽管本发明较多地使用了术语，但并不排除使用其它术语的可能性。使用这些术语仅仅是为了更方便地描述和解释本发明的本质；把它们解释成任何一种附加的限制都是与本发明精神相违背的。

Claims (8)

1.一种血红栓菌总多糖，其特征在于，为血红栓菌多糖TsL1和TsL2按任意比例的混合物；血红栓菌多糖TsL1和TsL2通过以下步骤制备得到：

(1)将血红栓菌子实体脱脂、晾干后粉碎得血红栓菌粉末。

(2)将血红栓菌粉末以纯净水常温搅拌提取至少4h，过滤得到冷水提取液和冷水提药渣，冷水提取液依次经浓缩、醇沉、透析、离心、冻干后得血红栓菌多糖TsL1；其中1g血红栓菌粉末至少需要20ml纯净水。

(3)将冷水提药渣加入纯净水100℃水浴提取至少1h，过滤得到的热水提取液经浓缩、醇沉、透析、离心、冻干后得血红栓菌多糖TsL2；其中1g冷水提药渣至少需要20ml纯净水。

2.根据权利要求1所述血红栓菌总多糖，其特征在于，所述血红栓菌多糖TsL1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成，摩尔比为1.03:1.57:2.54:1.00；其结构中主要含有10种连接方式，分别为T-Fucp-(1→、T-Manp-(1→、T-Galp-(1→、→4)-Manp-(1→、→4)-Glcp-(1→、→6)-Manp-(1→、→6)-Galp-(1→、→3,4)-Glcp-(1→、→4,6)-Glcp-(1→和→3,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为2.1:1.7:1.4:1.0:3.6:2.0:8.6:1.3:2.2:1.2。所述血红栓菌多糖TsL2由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比1.87:1.00:94.20:4.22；其结构中主要含有4种连接方式，分别为T-Glcp-(1→、→3)-Glcp-(1→、→4)-Glcp-(1→和→4,6)-Glcp-(1→，其摩尔比为1.0:2.1:7.6:1.4。

3.根据权利要求1所述血红栓菌总多糖，其特征在于，所述步骤(2)和(3)中，浓缩后的体积小于等于原体积的1/10。

4.根据权利要求1所述血红栓菌总多糖，其特征在于，所述步骤(2)和(3)中，透析操作采用截留分子量小于等于3000的透析袋。

5.一种权利要求1所述血红栓菌总多糖的应用，其特征在于，血红栓菌总多糖具有肿瘤微血管抑制作用。

6.一种权利要求1所述血红栓菌总多糖的应用，其特征在于，治疗有效量的血红栓菌总多糖与药学上可接受的载体结合，用于制备预防或者/和治疗，或者/和协同***的药物。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述药物为汤剂、丸剂、散剂、膏剂、冲剂、口服液剂、胶囊剂或片剂等。

8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述肿瘤为三阴性乳腺癌。

Images