CN112979647A - 含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物及制备和应用 - Google Patents

含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物及制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物及制备和应用。本发明化合物在体外对流感病毒具有较好的抑制效果，在抗流感病毒聚合酶和抗流感病毒复制中IC50和EC50达到了纳摩尔级水平，本发明化合物毒性较小，大部分化合物对MDCK细胞和A549细胞的CC50在30μM以上，化合物的选择性好。本发明的化合物针对的是流感病毒RNA聚合酶的PB2亚基，可制备治疗抗流感药物，可解决现有临床抗流感药物的耐药问题，具有较大的应用价值。所述衍生物结构通式(I)如下：

Description

含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物及制备和应用
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及一种含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物、制备方法、中间体、及其应用。
背景技术
流感病毒可分为甲、乙、丙和丁四种类型，能使人类致病的主要有甲型流感病毒和乙型流感病毒。每年约有300,000至500,000例因感染季节性流感而死亡。由于在每个流感季节或大流行之前，没有有效的方法可以准确预测流感病毒株，使得疫苗接种预防流感具有较大的局限性。因此，小分子抗流感药物在流感的预防、治疗上显得非常重要。目前已上市的抗病毒药物主要包括以神经氨酸酶抑制剂为靶点的奥司他韦、扎那米韦和佩拉米韦；以M2离子通道为靶点的金刚烷和金刚烷胺；以流感聚合酶PA亚基为靶点的巴洛沙韦等。虽然这些药物能够在一定程度上缓解流感给人类带来的冲击，但是越来越多耐药流感病毒株的出现使得新型流感抑制剂的研发迫在眉睫。
流感病毒聚合酶复合体由PA、PB1和PB2亚单位组成，在流感病毒复制和转录过程中非常重要。在真核细胞中转录过程中，新生mRNA加帽是必不可少的过程，但由于流感病毒不具备合成帽子结构的机制，于是病毒借助帽子抢夺机制(cap-snatching)，从宿主mRNA中窃取了其帽子用于自身mRNA的合成。在病毒转录过程中，首先流感病毒聚合酶中PB2亚基结合宿主细胞pre-mRNA的5’帽端，然后通过PA内切酶将pre-mRNA的5’帽端切割下来用于病毒复制所需的引物。带帽RNA引物的3’末端与vRNA模版的3’末端均位于PB1定义的活性空腔中，以病毒基因组作为模版开始转录。相比于NAIs阻断病毒释放的途径，以流感病毒聚合酶为靶点的研究策略阻断了病毒的复制转录的起始相当于从源头阻断了病毒的传播，提供了一种更有效的抗病毒作用机制。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物，结构式I如下：
Figure BDA0002974418840000011
其中：
R1选自H、F或Cl、CF3；
R2、R3各自独立地为氢、甲基、叔丁基、苯基、环丙基、或者任选的R2和R3与它们连接的碳原子一起形成4-6元碳环或者碳杂环；
R4选自氢、或任选R2、R3和R4与它们连接的碳原子一起形成5-10元碳单环、并环、螺环或桥环。
本发明所述的含氮杂氨基酸侧链的氮杂吲哚衍生物为如下任一化合物：
N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸(Aza-01)，
N-环戊基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-03)，
N-环己基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-04)，
N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)甘氨酸(Aza-07)，
N-环丁基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-09)，
N-环戊基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-14)，
N-环己基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-15)，N-苄基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-16)，
N-(1-环丙基乙基)-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-19)，
(S)-2-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Aza-06)，
1-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸(Aza-08)，
(S)-2-(((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Aza-10)，
1-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸(Aza-11)，
(2S，3aS，7aS)-1-(((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)八氢-1H-吲哚-2-羧酸(Aza-12)，
((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-L-脯氨酸(Aza-13)，
(S)-5-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷6-羧酸(Aza-17)，
(2R,4R)-4-氟-1-(5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-2-羧酸(Aza-18)。
本发明的另一个目的是提供所述的化合物I的制备方法，通过以下步骤实现：
当R4为H时，化合物I的合成以Boc-肼1为起始原料，和取代的酮在甲苯50℃下反应生成亚胺化合物2，化合物2在氰基硼氢化钠，醋酸和四氢呋喃条件下还原生成取代的Boc肼化合物3。化合物3在碳酸钾，甲苯回流条件于溴乙酸乙酯反应，生成取代后化合物4，化合物4在三氟醋酸条件下脱去Boc得到化合物5，化合物5与2，4-二氯-5-氟嘧啶发生取代反应得化合物6。化合物6与氮杂吲哚硼酸酯(合成根据文献J.Med.Chem.2014,57,6668-6678)与发生Suzuki反应生成化合物7,化合物7在氢氧化锂的作用下脱去两个保护基得到化合物I(R4为H)，反应式：
Figure BDA0002974418840000031
反应试剂和条件：a)甲苯，50度，1小时，90-95％；b)氰基硼氢化钠，醋酸，四氢呋喃，室温，过夜，30-80％；c)碳酸钾，甲苯，回流，24小时，100％；d)三氟乙酸，二氯甲烷，室温，2小时，100％；e)N,N-二异丙基乙胺，四氢呋喃，室温，20-86％；f)1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯，碳酸铯，1，4-二氧六环-水，110度，4小时，40-60％；g)氢氧化锂，四氢呋喃-水，50度，4小时，50-60％。其中取代基的定义与通式同。
当任选R2、R3和R4与它们连接的碳原子一起形成5-10元碳单环、并环、螺环或桥环时,化合物I的合成以化合物8为起始原料，经过与亚硝酸钠和浓硫酸反应生成亚硝基化合物9，化合物9通过浓硫酸的脱水作用与甲醇酯化生成化合物10，化合物10通过锌粉还原生成化合物11，化合物11与2，4-二氯-5-氟嘧啶发生取代反应得化合物12。氮杂吲哚硼酸酯(合成根据文献J.Med.Chem.2014,57,6668-6678)与化合物12发生Suzuki反应生成化合物13,化合物13在氢氧化锂的作用下脱去两个保护基得到化合物I(任选R2、R3和R4与它们连接的碳原子一起形成5-10元碳单环、并环、螺环或桥环)，反应式：
Figure BDA0002974418840000032
反应试剂和条件：a)亚硝酸钠，3M硫酸，水，冰浴-室温，3小时，80-90％；b)浓硫酸，甲醇，室温，过夜，80-95％；c)氯化铵，锌粉，四氢呋喃-水，冰浴-室温，10-20分钟，50-60％；d)N，N-二异丙基乙胺，四氢呋喃，室温，4小时，50-55％；e))1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯，碳酸铯，1，4-二氧六环-水，110度，4小时，40-60％；g)氢氧化锂，四氢呋喃-水，50度，4小时，50-60％。其中取代基的定义与通式同。
本发明所涉及的原料或中间体，可直接购买，或按照实施例提及的文献方法制备。
本发明的再一个目的是提供了一类含氮杂氨基酸侧链的氮杂吲哚衍生物在制备抗流感药物中的应用。本发明的化合物针对的是流感病毒RNA聚合酶的PB2亚基。
本发明的有益效果在于：首先本系列化合物在体外对流感病毒具有较好的抑制效果，在抗流感病毒聚合酶和抗流感病毒复制中IC50和EC50达到了纳摩尔级水平。其次，本系列化合物毒性较小，大部分化合物对MDCK细胞和A549细胞的CC50在30μM以上，化合物的选择性好。再次，本系列的化合物针对的是流感病毒RNA聚合酶的PB2亚基，目前尚未上市药物。针对该靶点开发的抗病毒药物，有可能解决现有临床抗流感药物的耐药问题，具有较大的应用价值。
附图说明
图1.化合物Aza-12的ITC测试结果。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸(Aza-01)；
步骤：
原料1：3-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
Figure BDA0002974418840000041
将3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(10mmol)溶于DMF，于冰浴下分批加入NaH(15mmol)，反应30min后，加入对甲苯磺酰氯。TLC监测，待原料消失，往体系中加入水中止反应，有大量固体析出，室温继续搅拌30min使固体析出完全。抽滤得肉粉色固体，产率为93％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.33(dd,J＝5.0,1.5Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,2H),7.67-7.64(m,2H),7.15(s,1H),7.13-7.10(m,2H),2.23(s,3H)。
原料2：2-(2,2-二甲基亚丙基)肼-1-羧酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0002974418840000042
叔丁氧羰基肼(10mmol)溶解在10mL甲苯中，室温下加入特戊醛(10mmol)并升温至50℃反应1小时。反应过程中有固体析出。TLC板监测反应，待反应结束后直接抽滤，少量二氯甲烷洗涤，得到白色固体，产率为95％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.65(s,1H),7.05(s,1H),1.46(s,9H),1.09(s,9H)。
原料3：2-新戊基肼-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0002974418840000051
(E)-2-(2,2-二甲基亚丙基)肼-1-羧酸叔丁酯(1mmol)混悬于四氢呋喃(5mL)中，室温下加入醋酸(0.2mL)，然后分批加入氰基硼***(2.5mmol)。体系室温下反应过夜。待反应结束后，将乙酸乙酯(15mL)和饱和碳酸氢钠(15mL)加入反应混合物中。收集有机层后，水层用固体碳酸氢钠中和，并用乙酸乙酯萃取两次。合并有机部分，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。然后将残余物溶于甲醇(3mL)中，并加入1N NaOH(3mL)。在室温搅拌2h后，蒸发甲醇，水层用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机部分用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化，得到淡黄色液体，产率为52％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46(s,1H),4.48(s,1H),3.04-3.01(m,1H),2.95-2.90(m,1H),1.50(s,9H),1.04(s,9H)。
原料4：2-(2-乙氧基-2-氧乙基)-2-新戊基肼-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0002974418840000052
向2-新戊基肼-1-羧酸叔丁酯(1mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入碳酸钾(2mmol)和溴乙酸乙酯(1.5mmol)。将反应加热至回流24小时。将反应混合物冷却至环境温度，抽滤除去固体，滤液在1N盐酸和***之间分配。将水层用***萃取两次，并弃去有机层。用2.5N氢氧化钠将水层的pH调节至9，并用***萃取3次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干滤液无需进一步纯化，直接投下一步。
原料5：N-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯的制备
Figure BDA0002974418840000053
将2-(2-乙氧基-2-氧乙基)-2-新戊基肼-1-羧酸叔丁酯(1mmol)溶于二氯甲烷(3mL),冰浴下加入三氟醋酸(3mL)于室温搅拌2h。待反应完全后将体系旋干，再溶于5mL四氢呋喃中待用。在室温下将2,4,-二氯-5-氟嘧啶(1mmol)溶解在THF(10mL)中并搅拌，向该搅拌溶液中加入上述待用液，然后加入二异丙基乙胺(2.0equiv.)，室温反应2h。将反应混合物真空浓缩以除去大部份THF，并将残余物溶于二氯甲烷中，用饱和NaHCO3溶液洗涤。将有机物干燥并浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(PET/EA＝15:1)，得到棕色固体，产率为60％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝3.0Hz,1H),7.33(s,1H),4.20(q,J＝7.0Hz,2H),3.75(s,2H),2.80(s,2H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H),0.91(s,9H)。
原料6：N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯的制备
Figure BDA0002974418840000061
3-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1mmol)与联硼酸频哪醇酯(1.5mmol)和醋酸钾(3mmol)，PdCl2(dppf)(0.11mmol)置于三颈瓶中，氮气置换三次，完毕加入10mL无水二氧六环，升温至90℃反应约3h。TLC监控反应待原料消失，自然冷却，不后处理直接再往体系中加入碳酸铯(1.5equiv.),PdCl2(dppf)(0.1equiv.)和N-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯(1.1equiv.),然后加入0.5mL水，110℃搅拌4h。反应完毕，体系用硅藻土过滤除去大部分金属，旋调大部分溶剂，再用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸，粗产物经硅胶色谱纯化(PET/EA＝5:1)，得到棕色固体，两步产率为54％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.01(d,J＝7.5Hz,1H),8.53(s,1H),8.45(dd,J＝5.0,2.0Hz,1H),8.13–8.09(m,3H),7.27(s,1H),7.26–7.22(m,2H),7.17(d,J＝1.5Hz,1H),4.22(q,J＝7.5Hz,2H),3.83(s,2H),2.87(s,2H),2.36(s,3H),1.29(d,J＝7.5Hz,3H),0.95(s,9H)。
Aza-01：N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸的制备(Aza-01)；
Figure BDA0002974418840000062
向N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯(1mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(2.5mL)。将该混合物加热至50℃,反应3.5小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释。在减压下除去THF，然后用正己烷冲洗残余物两次。加入***并分离各层(***层被丢弃)。用1N HCl调节pH值至5.5，将所得固体过滤并用水洗涤,烘干得米黄色固体，收率为54％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.12(s,1H),9.29(s,1H),9.00(d,J＝7.0Hz,1H),8.25(dd,J＝4.5,1.5Hz,1H),8.15(d,J＝4.0Hz,1H),8.07(s,1H),7.15–7.10(m,1H),3.32(s,2H),2.80(s,2H),0.92(s,9H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ174.1,158.6(d,J＝6.25Hz),151.4(d,J＝7.50Hz),149.1,143.2,142.7(d,J＝252.50Hz),130.5,128.1(d,J＝15.00Hz),125.6,118.3,116.5,113.9,70.2,62.6,32.4,27.7.HRMS(ESI):m/z calcdfor(C18H21FN6O2+H)+:373.1783；found:373.1780.
按照实施例1相同方法，采用不同原料，制备以下化合物。
实施例2N-环戊基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-03)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-环戊基-N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸乙酯。白色固体，收率为49％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),9.66(s,1H),8.9(d,J＝7.5Hz,1H),8.25(dd,J＝5.0,2.0Hz,1H),8.16(d,J＝4.0Hz,1H),8.10(s,1H),7.17-7.14(m,1H),3.70-3.65(m,1H),3.37(s,2H),1.67-1.65(m,6H),1.50-1.48(m,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ173.9,158.5(d,J＝6.25Hz),152.1(d,J＝7.50Hz),149.1,143.1,142.1(d,J＝261.25Hz),130.4,128.2(d,J＝3.75Hz),125.6,118.3,116.6,113.6,65.7,58.3,30.8,23.8.HRMS(ESI):m/z calcd for(C18H19FN6O2+H)+:371.1626；found:371.1623。
实施例3N-环己基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-04)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-环己基-N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸乙酯。白色固体，收率为51％。
m.p.:>205.5-206.9℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.09(s,1H),8.69(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),8.27(dd,J＝4.5,1.5Hz,1H),8.17-8.16(m,2H),7.20-7.17(m,1H),4.79(s,2H),4.35–4.27(m,1H),1.86-1.82(m,2H),1.80-1.73(m,4H),1.68-1.66(m,1H),1.44–1.37(m,2H),1.17-1.17(m,1H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ157.5(d,J＝5.00Hz),152.4(d,J＝1.25Hz),149.1,143.3(d,J＝253.75Hz),143.1,129.6,128.7,125.5,118.0,116.6,113.5,57.4,49.4,32.1,28.9,25.3.HRMS(ESI):m/z calcd for(C19H21FN6O2+H)+:385.1783；found:385.1779。
实施例4N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)甘氨酸(Aza-07)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基甘氨酸乙酯。棕色固体，收率为33％。
m.p.:221.2-223.9℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.18(s,1H),9.55(s,1H),8.68-8.66(m,1H),8.35-8.27(m,2H),8.19(s,1H),7.23(s,1H),3.97(s,2H),3.53-3.35(m,4H),1.85-1.64(m,4H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ157.7(d,J＝6.25Hz),155.7,151.3,149.2,143.3,142.3(d,J＝225.00Hz),129.4,129.0,117.9,116.8,113.2,79.8,66.4,54.5,29.3.28.1.27.8.HRMS(ESI):m/z calcd for(C18H19FN6O2+H)+:387.1575；found:387.1569。
实施例5N-环丁基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-09)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-环丁基-N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸乙酯。白色固体，收率为47％。
m.p.:>211.3-212.1℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.41(s,1H),9.31(s,1H),9.01-8.99(m,1H),8.45-8.37(m,1H),8.33-8.28(m,1H),7.49(d,J＝6.5Hz,1H),7.31-7.22(m,1H),7.11(d,J＝6.5Hz,1H),3.66(s,2H),2.31-2.24(m,1H),2.05-1.95(m,4H),1.65-1.57(m,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.1,155.7(d,J＝2.50Hz),153.3(d,J＝12.50Hz),148.9,143.8,141.1(d,J＝257.50Hz),130.7,129.6,128.1,125.5,118.2,117.4,59.4,54.7,26.2,13.8.HRMS(ESI):m/z calcd for(C17H17FN6O2+H)+:357.1470；found:357.1468.
实施例6N-环戊基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-14)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-环戊基-N-((5-氟-2-(5-氟-1-甲苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸酯。棕色固体，收率为61％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.34(s,1H),9.00(s,1H),8.76-8.71(m,1H),8.25-8.24(m,1H),8.18(d,J＝4.5Hz,1H),8.16(d,J＝2.5Hz,1H),1.76–1.57(m,8H),1.53-1.43(m,3H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ173.7,158.2(d,J＝6.25Hz),157.2,155.3,152.7,146.1,142.3(d,J＝253.75Hz),132.0(d,J＝28.75Hz),130.8,119.1(d,J＝7.50Hz),116.6(d,J＝22.50Hz),113.9(d,J＝3.75Hz),66.7,58.0,31.1,24.2.HRMS(ESI):m/z calcd for(C18H18F2N6O2+H)+:389.1532；found:389.1537。
实施例7N-环己基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-15)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-环己基-N-((5-氟-2-(5-氟-1-甲苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸酯。棕色固体，收率为54％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,1H),9.59(s,1H),8.77(s,1H),8.25-8.22(m,1H),8.14(s,1H),7.51-7.45(m,1H),7.15-7.08(m,1H),3.09(s,2H),2.28(s,1H),1.94–1.86(m,2H),1.78-1.72(m,2H),1.54-1.48(m,1H),1.32-1.12(m,5H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ174.4,156.7(d,J＝3.75Hz),154.8,152.1(d,J＝11.25Hz),145.9,145.7,142.3(d,J＝251.25Hz),137.8,131.5(d,J＝31.25Hz),130.3,118.7(d,J＝7.50Hz),115.9(d,J＝26.25Hz),113.8(d,J＝5.00Hz),61.9,56.3,30.4,29.1,25.8,24.1,20.9.HRMS(ESI):m/z calcd for(C19H20F2N6O2+H)+:403.1689；found:403.1691。
实施例8N-苄基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-16)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-苄基-N-((5-氟-2-(5-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸酯。白色固体，收率为31％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.37(s,1H),9.93(s,1H),8.78-8.69(m,1H),8.29-8.26(m,1H),8.20(s,1H),8.15(d,J＝4.0Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.28-7.26(m,2H),7.23-7.18(m,1H),4.19(s,2H),3.30(s,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for(C20H16F2N6O2+H)+:411.1376；found:411.1382。
实施例9N-(1-环丙基乙基)-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-19)
参照实施例1的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成N-(1-环丙基乙基)-N-((5-氟-2-(5-氟-1-对硫基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸乙酯。白色固体，收率为68％。
m.p.:214.8-215.6℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.40(s,1H),12.31(s,1H),8.81-8.76(m,1H),8.72(s,1H),8.32(s,1H),8.28(d,J＝4.0Hz,1H),8.24-8.21(m,1H),3.92(s,2H),3.46-3.38(m,1H),1.96-1.95(m,1H),1.22(d,J＝6.5Hz,3H),0.94-0.86(m,1H),0.53-0.44(m,2H),0.17-0.14(m,1H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ171.9,157.5(d,J＝5.00Hz),156.7,154.8,152.2,145.9,142.1(d,J＝253.75Hz),131.6(d,J＝28.75Hz),130.1,118.5(d,J＝7.50Hz),115.7(d,J＝22.50Hz),113.7(d,J＝2.50Hz),64.8,55.5,21.1,17.6,5.9,1.9.HRMS(ESI):m/z calcd for(C18H18F2N6O2+H)+:389.1532；found:389.1528。
实施例10(S)-2-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Aza-06)
原料1:3-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶：
Figure BDA0002974418840000101
将3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(10mmol)溶于DMF，于冰浴下分批加入NaH(15mmol)，反应30min后，加入对甲苯磺酰氯。TLC监测，待原料消失，往体系中加入水中止反应，有大量固体析出，室温继续搅拌30min使固体析出完全。抽滤得肉粉色固体，产率为93％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.33(dd,J＝5.0,1.5Hz,1H),7.93(d,J＝8.5Hz,2H),7.67–7.64(m,2H),7.15(s,1H),7.13–7.10(m,2H),2.23(s,3H)。
原料2:(S)-2-亚硝基1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸的制备：
Figure BDA0002974418840000102
将(S)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(10mmol)溶于水中，加入亚硝酸钠(10.0equiv.),冰浴下滴加20mL 3M硫酸，有黄色气体出现。待反应完全，有白色固体析出，抽滤所得白色固体即为产物，收率为70％。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.23(s,1H),7.31–7.20(m,4H),5.99(dd,J＝5.5,3.0Hz,1H),4.94(d,J＝19.5Hz,1H),4.55(d,J＝19.5Hz,1H),3.41(dd,J＝8.0,5.5Hz,2H)。
原料3：(S)-2-亚硝基1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0002974418840000103
将2-亚硝基1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(1mmol)溶于甲醇中，加入浓硫酸搅拌过夜。反应结束后将体系旋干后将残留物溶于二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤多次，萃取合并有机层，并用Na2SO4干燥后旋干有机层，得到无色液体，收率为87％。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.30–7.23(m,4H),6.15(t,J＝4.0Hz,1H),4.97(d,J＝19.0Hz,1H),4.56(d,J＝19.0Hz,1H),3.56(s,3H),3.43(d,J＝4.0Hz,2H)。
原料4：(S)-2-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0002974418840000104
将2-亚硝基1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯(1mmol)溶于THF，冰浴下加入氯化铵(15mmol)和锌粉(10mmol)的THF/H2O体系，室温反应，TLC点板监测。反应完毕后，抽滤除去残留锌粉，滤液用二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗，Na2SO4干燥，有机相低温旋干，无需进一步纯化，直接投下一步。方法同N-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯，只是将2-(2-乙氧基-2-氧乙基)-2-新戊基肼-1-羧酸叔丁酯替换成2-氨基-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯，其反应条件及物料摩尔量均不变，黄色固体，产率为68％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.01(d,J＝6.0Hz,1H),7.27–7.18(m,4H),5.47(s,1H),5.07(d,J＝16.0Hz,1H),4.88(d,J＝16.0Hz,1H),3.63(s,3H),3.36(dd,J＝15.5,3.5Hz,1H),3.27(dd,J＝16.0,5.5Hz,1H)。
原料5：(S)-甲基2-((5-氟-2-(1-甲苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0002974418840000111
3-溴-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1mmol)与联硼酸频哪醇酯(1.5mmol)和醋酸钾(3mmol)，PdCl2(dppf)(0.11mmol)置于三颈瓶中，氮气置换三次，完毕加入10mL无水二氧六环，升温至90℃反应约3h。TLC监控反应待原料消失，自然冷却，不后处理直接再往体系中加入碳酸铯(1.5equiv.),PdCl2(dppf)(0.1equiv.)和(S)-2-((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯(1.1equiv.),然后加入0.5mL水，110℃搅拌4h。反应完毕，体系用硅藻土过滤除去大部分金属，旋调大部分溶剂，再用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸，粗产物经硅胶色谱纯化(PET/EA＝5:1)，得到棕色固体，两步产率为57％。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.88(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),8.37-8.34(m,3H),8.20(dd,J＝4.5,1.5Hz,1H),8.04(d,J＝8.5Hz,2H),7.96–7.92(m,1H),7.47(t,J＝3.0Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,2H),7.05-7.03(m,1H),6.43(dd,J＝3.5,2.0Hz,1H),4.40-4.37(m,1H),4.27–4.13(m,2H),3.55(s,3H),3.25(s,2H),2.32(s,3H)。
Aza-06：(S)-2-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸的制备(Aza-06)；
Figure BDA0002974418840000112
向(S)-甲基2-((5-氟-2-(1-甲苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯(1mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(2.5mL)。将该混合物加热至50℃,反应3.5小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释。在减压下除去THF，然后用正己烷冲洗残余物两次。加入***并分离各层(***层被丢弃)。用1NHCl调节pH值至5.5，将所得固体过滤并用水洗涤,烘干得棕色色固体，收率为67％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),10.04(s,1H),8.76(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),8.20(d,J＝4.0Hz,1H),8.18-8.17(m,1H),8.05(s,1H),7.48-7.46(m,1H),7.16-7.13(m,1H),7.12-7.08(m,2H),7.03-7.01(m,1H),6.87-6.85(m,1H),4.34(d,J＝14.0Hz,1H),4.17(d,J＝14.0Hz,1H),3.61(d,J＝5.0Hz,1H),3.45(d,J＝16.0Hz,1H),3.16(dd,J＝16.0,6.0Hz,1H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ174.2,158.6(d,J＝7.00Hz),150.5(d,J＝8.50Hz),149.0,143.0,142.6(d,J＝252.75Hz),134.4,133.7,130.3,128.5,128.0(d,J＝11.25Hz),126.2,125.8,125.5,125.0,118.3,116.4,113.8,61.9,52.4,32.1.HRMS(ESI):m/z calcd for(C21H17FN6O2+H)+:405.1470；found:405.1477。
实施例11 1-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸(Aza-08)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成1-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸甲酯。黄色固体，收率为35％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),9.77(s,1H),8.96(d,J＝6.5Hz,1H),8.26-8.25(m,1H),8.16-8.14(m,2H),7.48(d,J＝7.5Hz,1H),7.18–7.11(m,1H),3.37-3.36(m,1H),3.19-3.10(m,1H),2.94-2.85(m,1H),2.30-2.28(m,1H),2.25-2.17(m,1H),1.71-1.66(m,2H),1.46-1.24(m,2H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ176.2,159.0(d,J＝3.75Hz),151.0(d,J＝5.0Hz),149.5,143.6,142.8(J＝250.00Hz),130.9,128.6(d,J＝16.25Hz),126.0,118.8,117.0,114.0,65.4,52.0,29.3,26.1,21.3.HRMS(ESI):m/z calcdfor(C17H17FN6O2+H)+:357.1470；found:357.1473。
实施例12(S)-2-(((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Aza-10)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成(S)-2-((5-氟-2-(5-氟-1-对硫基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸甲酯。黄色固体，收率为65％。
m.p.:>228.7-230.5℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.24(s,1H),10.14(s,1H),8.57-8.55(m,1H),8.20(d,J＝4.0Hz,1H),8.16-8.15(m,2H),7.16-7.05(m,4H),7.01(d,J＝7.5Hz,1H),4.35(d,J＝14.0Hz,1H),4.14(d,J＝14.0Hz,1H),3.62-3.61(m,1H),3.46-3.43(m,1H),3.20-3.15(m,1H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ174.4,158.2(d,J＝6.25Hz),156.5,154.6,150.6(d,J＝5.00Hz),145.8,142.6(d,J＝252.50Hz),134.3,133.5,131.3(d,J＝28.75Hz),130.2,128.4,126.2,125.8,125.1,118.6(d,J＝7.50Hz),115.7(d,J＝21.25Hz),113.8(d,J＝2.50Hz),56.0,32.2,18.6.HRMS(ESI):m/z calcd for(C21H16F2N6O2+H)+:423.1376.；found:423.1369。
实施例13 1-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸(Aza-11)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成1-((5-氟-2-(5-氟-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸甲酯。黄色固体，收率为45％。
m.p.:>187.3-189.1℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.22(s,1H),8.90-8.88(m,1H),8.64-8.62(m,1H),8.29-8.24(m,1H),8.19-8.17(m,2H),3.24-3.16(m,1H),2.85-2.73(m,1H),1.98-1.92(m,1H),1.87-1.61(m,5H),1.44-1.31(m,1H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ173.4,157.8(d,J＝6.25Hz),156.7,154.8,151.0(d,J＝11.25Hz),145.9,142.2(d,J＝253.75Hz),131.4(d,J＝28.75Hz),129.9,118.75(d,J＝7.50Hz),116.2(d,J＝25.00Hz),113.83(d,J＝2.50Hz),66.0,53.5,29.3,25.3,22.2.HRMS(ESI):m/z calcd for(C17H16F2N6O2+H)+:375.1376；found:375.1383。
实施例14(2S，3aS，7aS)-1-(((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)八氢-1H-吲哚-2-羧酸(Aza-12)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成(2S,3aS,7aS)-1-((5-氟-2-(5-氟-1-对甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)八氢-1H-吲哚-2-羧酸甲酯。黄色固体，收率为62％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.94(s,1H),12.29(s,1H),9.03(s,1H),8.71-8.69(m,1H),8.28(s,2H),8.14-8.12(m,1H),3.77-3.73(m,1H),2.10-2.02(m,1H),1.74-1.69(m,2H),1.66-1.56(m,3H),1.51-1.32(m,3H),1.26-1.13(m,3H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ175.2,157.4(d,J＝6.25Hz),156.7,154.8,152.5(d,J＝10.00Hz),145.8,141.9(d,J＝252.50Hz),131.7(d,J＝28.75Hz),129.9,118.3(d,J＝7.50Hz),115.9(d,J＝21.25Hz),113.4(d,J＝3.75Hz),66.0,54.9,35.3,33.7,28.2,25.1,24.7,19.9.HRMS(ESI):m/z calcd for(C20H20F2N6O2+H)+:415.1689；found:415.1689。
实施例15((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-L-脯氨酸(Aza-13)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成((5-氟-2-(5-氟-1-甲苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-脯氨酸甲酯。棕色固体，收率为32％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),8.63(dd,J＝10.0,2.5Hz,1H),8.25-8.24(m,1H),8.19(s,1H),8.10(d,J＝3.5Hz,1H),7.33-7.28(m,1H),6.68(s,1H),3.52(t,J＝6.0Hz,1H),3.27-3.24(m,1H),2.99-2.95(m,1H),2.08-2.04(m,2H),1.84-1.79(m,2H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ176.6,156.6(d,J＝6.25Hz),154.7,151.0,145.9,142.5(d,J＝252.5Hz),131.3(d,J＝28.75Hz),129.1(d,J＝263.75Hz),125.5,118.6(d,J＝7.50Hz),115.7(d,J＝22.50Hz),113.8(d,J＝2.50Hz),64.8,51.7,27.2,22.5.HRMS(ESI):m/z calcd for(C16H14F2N6O2+H)+:361.1219；found:361.1223。
实施例16(S)-5-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷6-羧酸(Aza-17)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成(S)-5-((5-氟-2-(5-氟-1-对硫基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-羧酸甲酯。棕色固体，收率为73％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.63-8.58(m,1H),8.28-8.26(m,1H),8.23(d,J＝3.5Hz,1H),8.17(s,1H),4.03-4.01(m,1H),3.29(d,J＝8.5Hz,1H),3.03(d,J＝8.5Hz,1H),2.42-2.33(m,1H),1.87-1.84(m,1H),0.62-0.50(m,4H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ174.5,157.7(d,J＝5.00Hz),156.7,154.8,151.6(d,J＝8.75Hz),145.9,142.2(d,J＝252.50Hz),131.6(d,J＝28.75Hz),130.3,118.4(d,J＝7.50Hz),115.7(d,J＝22.50Hz),113.4(d,J＝5.00Hz),67.1,62.0,36.6,19.1,13.3.HRMS(ESI):m/z calcd for(C18H16F2N6O2+H)+:387.1376；found:387.1368。
实施例17(2R,4R)-4-氟-1-(5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-2-羧酸(Aza-18)；
参照实施例10的方法，只是将N-((5-氟-2-(1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸乙酯替换成(2R,4R)-4-氟-1-(5-氟-2-(5-氟-1-对甲苯磺酰-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯。黄色固体，收率为54％。
m.p.:>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.50(s,1H),8.43-8.37(m,1H),8.25-8.21(m,1H),8.20-8.18(m,1H),8.07-8.02(m,1H),5.40-5.29(m,1H),4.64-4.53(m,1H),4.04-3.99(m,2H),3.16(s,2H).13C NMR(125MHz,DMSO)δ173.8,157.8(d,J＝7.50Hz),156.0(d,J＝240.00Hz),150.8(d,J＝20.00Hz),146.4,142.5(d,J＝321.25Hz),140.2(d,J＝23.75Hz),131.5(d,J＝28.75Hz),131.2(d,J＝6.25Hz),118.6(d,J＝7.50Hz),115.3(d,J＝17.50Hz),114.1(d,J＝7.5Hz),90.9(d,J＝178.75Hz),61.4(d,J＝2.50Hz),55.61,55.38(d,J＝28.75Hz),21.7(d,J＝30.00Hz).HRMS(ESI):m/z calcd for(C16H12F3N5O2+H)+:364.1016；found:364.1008。
实施例18化合物对MDCK细胞和A549细胞的毒性
采用CCK8检测化合物对细胞的毒性作用。将MDCK细胞或者A549细胞接种于96孔板中，细胞贴壁后加入化合物处理，设置化合物浓度梯度为50、30、10、3、1、0.3和0.1μM,镜下观察化合物引起的细胞病变效应，加入CCK8检测。
细胞活性(％)＝(样品孔-空白对照)/(细胞对照-空白对照)*100％
最后用软件拟合得出细胞半数抑制浓度CC50。
实施例19抗流感病毒聚合酶活性测定
本实施例用于测定本发明化合物对于导入流感病毒聚合酶组成成分PB1,PB2,PA和NP四个节段的质粒的HEK-293T细胞中流感聚合酶表达活性的影响，化合物对病毒聚合酶的活性抑制用流感病毒聚合酶活性抑制率表达。试验方案如下：将培养好的293T细胞接种于96孔培养板上；之后将细胞用配好浓度的化合物处理，2小时后加入转染体系，放置于37℃，5％CO2的环境中进行培养，24小时后，将细胞裂解检测荧光强度。Dual LuciferaseReporter Assay的方法，测定受试化合物在10μM浓度下对流感聚合酶活性的影响，数据见表1。化合物对病毒聚合酶活性抑制率，A表示抑制率≥80％，B表示65％≤抑制率>80％,C表示35％≤抑制率>65％,D表示抑制率<35％。
表1.流感病毒聚合酶抑制活性
编号 流感病毒聚合酶活性抑制率(％)
Aza-1 C
Aza-3 C
Aza-4 B
Aza-5 D
Aza-6 D
Aza-7 D
Aza-8 C
Aza-9 D
Aza-10 D
Aza-11 A
Aza-12 A
Aza-13 C
Aza-14 B
Aza-15 D
Aza-16 D
Aza-17 A
Aza-18 D
Aza-19 B
Aza-20 D
同时选取部分化合物测试6个梯度浓度(10μM，3μM，1μM，0.3μM，0.1μM，0.03μM)下对聚合酶活性的抑制作用。化合物抑制半数聚合酶活性的程度用半数抑制浓度IC50来表示。
表2为测试化合物对流感病毒聚合酶抑制活性和细胞毒性，其中E表示IC50小于0.3μM，F表示IC50大于0.3μM。G表示>30μM。
表2流感病毒聚合酶抑制活性和细胞毒性
Figure BDA0002974418840000151
Figure BDA0002974418840000161
实施例20抗流感病毒复制测定
本实施例用于测定本发明化合物对于感染甲型流感病毒A/WSN/33(H1N1)的MDCK细胞中病毒复制情况的抑制效果，化合物对病毒复制的抑制活性用半数有效浓度EC50来表示。MDCK细胞和流感病毒A/WSN/33(H1N1)来源于浙江大学医学院。试验方案如下：将MDCK接种于96孔培养板上；之后将细胞放置于37℃，5％CO2的环境中进行培养，24小时后，向培养的细胞培养基中加入一系列浓度梯度的药物孵育2小时，一般选择6个浓度(10μM，3μM，1μM，0.3μM，0.1μM，0.0.03μM)，然后加入MOI＝0.1的野生型病毒株(A/WSN/33)，之后于24后小时收取病毒上清液样本测定病毒的TCID50值。化合物抑制半数病毒复制的有效药物浓度为EC50。
表3为测试化合物对流感病毒A/WSN/33(H1N1)的抑制活性，其中H表示EC50小于1.0μM；I表示EC50大于1.0μM。
表3.抑制流感病毒复制活性
编号 MDCK EC<sub>50</sub>(μM)
Aza-11 H
Aza-12 H
Aza-17 I
由表1～3结果显示，本发明的化合物对流感病毒聚合酶和流感病毒H1N1的复制具有抑制活性,其中化合物Aza-11和Aza-12活性最优,在纳摩尔级水平。
实施例21等差量热滴定仪ITC测定化合物与PB2318-483的相互作用本实施例用于测定化合物与PB2318-483蛋白的结合能力。试验方案：配制不同浓度的PB2318-483蛋白溶液和小分子溶液。蛋白溶液的终浓度为30μM～60μM。在根据蛋白和小分子浓度为1:10的比例配制小分子溶液。取蛋白溶液和小分子溶液，13000rpm离心2min，将蛋白溶液缓慢的加入ITC样品池内，将小分子溶液加入滴定针内，开始滴定。实验结果：图1为化合物Aza-12的ITC测试结果，得到与PB2318-483蛋白的Kd值为202nM。

Claims (5)

1.一种含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物，其特征在于，结构通式(I)如下所示：
Figure FDA0002974418830000011
其中：
R1选自H、F或Cl、CF3；
R2、R3各自独立地为氢、甲基、叔丁基、苯基、环丙基、或者任选的R2和R3与它们连接的碳原子一起形成4-6元碳环或者碳杂环；
R4选自氢、或任选R2、R3和R4与它们连接的碳原子一起形成5-10元碳单环、并环、螺环或桥环。
2.根据权利要求1所述的含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物选自如下任一化合物：
N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-新戊基甘氨酸(Aza-01)，
N-环戊基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-03)，
N-环己基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-04)，
N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)甘氨酸(Aza-07)，
N-环丁基-N-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-09)，
N-环戊基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-14)，
N-环己基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-15)，
N-苄基-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-16)，
N-(1-环丙基乙基)-N-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甘氨酸(Aza-19)，
(S)-2-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Aza-06)，
1-((5-氟-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸(Aza-08)，
(S)-2-(((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Aza-10)，
1-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-2-羧酸(Aza-11)，
(2S，3aS，7aS)-1-(((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)八氢-1H-吲哚-2-羧酸(Aza-12)，
((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-L-脯氨酸(Aza-13)，
(S)-5-((5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷6-羧酸(Aza-17)，
(2R,4R)-4-氟-1-(5-氟-2-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-2-羧酸(Aza-18)。
3.权利要求1～2任意一项所述的含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
当R4为H时，化合物I的合成以Boc-肼1为起始原料，和取代的酮在甲苯50℃下反应生成亚胺化合物2，化合物2在氰基硼氢化钠，醋酸和四氢呋喃条件下还原生成取代的Boc肼化合物3，化合物3在碳酸钾，甲苯回流条件于溴乙酸乙酯反应，生成取代后化合物4，化合物4在三氟醋酸条件下脱去Boc得到化合物5，化合物5与2，4-二氯-5-氟嘧啶发生取代反应得化合物6，化合物6与氮杂吲哚硼酸酯发生Suzuki反应生成化合物7,化合物7在氢氧化锂的作用下脱去两个保护基得到化合物I；反应式：
Figure FDA0002974418830000021
反应试剂和条件：a)甲苯，50度，1小时，90-95％；b)氰基硼氢化钠，醋酸，四氢呋喃，室温，过夜，30-80％；c)碳酸钾，甲苯，回流，24小时，100％；d)三氟乙酸，二氯甲烷，室温，2小时，100％；e)N,N-二异丙基乙胺，四氢呋喃，室温，20-86％；f)1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯，碳酸铯，1，4-二氧六环-水，110度，4小时，40-60％；g)氢氧化锂，四氢呋喃-水，50度，4小时，50-60％；其中R1、R2、R3取代基的定义与通式同。
4.权利要求1～2任意一项所述的含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
当任选R2、R3和R4与它们连接的碳原子一起形成5-10元碳单环、并环、螺环或桥环时,化合物I的合成以化合物8为起始原料，经过与亚硝酸钠和浓硫酸反应生成亚硝基化合物9，化合物9通过浓硫酸的脱水作用与甲醇酯化生成化合物10，化合物10通过锌粉还原生成化合物11，化合物11与2，4-二氯-5-氟嘧啶发生取代反应得化合物12，氮杂吲哚硼酸酯与化合物12发生Suzuki反应生成化合物13，化合物13在氢氧化锂的作用下脱去两个保护基得到化合物I，反应式：
Figure FDA0002974418830000031
反应试剂和条件：a)亚硝酸钠，3M硫酸，水，冰浴-室温，3小时，80-90％；b)浓硫酸，甲醇，室温，过夜，80-95％；c)氯化铵，锌粉，四氢呋喃-水，冰浴-室温，10-20分钟，50-60％；d)N，N-二异丙基乙胺，四氢呋喃，室温，4小时，50-55％；e))1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯，碳酸铯，1，4-二氧六环-水，110度，4小时，40-60％；g)氢氧化锂，四氢呋喃-水，50度，4小时，50-60％；其中R1取代基的定义与通式同。
5.根据权利要求1～2任意一项所述的含氮杂氨基酸的氮杂吲哚衍生物在制备治疗抗流感药物中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102458408A (zh) * 2009-06-17 2012-05-16 沃泰克斯药物股份有限公司 流感病毒复制抑制剂
EP2389356B1 (fr) * 2009-01-26 2013-10-23 University Claude Bernard Lyon I Nouveaux composes de type azapeptide ou azapeptidomimetrique, inhibiteurs de bcrp et/ou p-gp
CN103764654A (zh) * 2011-08-01 2014-04-30 沃泰克斯药物股份有限公司 流感病毒复制抑制剂
CN107226810A (zh) * 2017-06-16 2017-10-03 郑州大学 吲哚衍生物及其制备方法和其抗流感病毒作用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2389356B1 (fr) * 2009-01-26 2013-10-23 University Claude Bernard Lyon I Nouveaux composes de type azapeptide ou azapeptidomimetrique, inhibiteurs de bcrp et/ou p-gp
CN102458408A (zh) * 2009-06-17 2012-05-16 沃泰克斯药物股份有限公司 流感病毒复制抑制剂
CN103764654A (zh) * 2011-08-01 2014-04-30 沃泰克斯药物股份有限公司 流感病毒复制抑制剂
CN107226810A (zh) * 2017-06-16 2017-10-03 郑州大学 吲哚衍生物及其制备方法和其抗流感病毒作用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KURKIN, A. V. 等: "Synthesis of Derivatives of 2-(Indol-1-yl)propionic Acids", 《HETEROCYCLIC COMPOUNDS》 *

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