CN112957403A - 一种治疗酒精性肝损伤的药菌组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗酒精性肝损伤的药菌组合物及其制备方法与应用,本发明通过枸杞特异性促进Akkermansia Muciniphila菌在肠道内的增殖,同时,Akkermansia Muciniphila菌可以将枸杞中的多糖等物质分解成小分子活性物质,这更有利于人体的肠道的吸收以及活性的发挥。枸杞中的枸杞多糖、甜菜碱、维生素及多种微量元素等功能成分,清除机体内的氧自由基,恢复机体氧化与抗氧化***的平衡,并辅助以乳酸菌发酵果汁增强和调节人体免疫力,抗氧化,抗炎,并改善组合物的口感。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,尤其涉及一种治疗酒精性肝损伤的药菌组合物及其制备方法与应用。
背景技术
大量饮酒造成酒精性肝病是一个全球性问题,是导致死亡和残疾的第七大风险因素。当饮酒后,肝代谢酶***将乙醇转化为乙醛,乙醛又被脱氢酶氧化生成乙酸,最后代谢为二氧化碳和水排至体外。当大量饮酒后,产生的大量乙醛可刺激产生肾上腺素、去甲肾上腺素等,表现为面红、头昏、头痛、心率加快等情况。重度乙醇中毒者表现为昏睡、血压低、呼吸减慢、心率加快,甚至导致死亡。酒精性肝损伤主要是由大量饮酒对肝脏造成氧化性损伤。主要机制是酒精的大量摄入会使机体产生大量的活性氧自由基,导致机体内氧化水平升高,抗氧化水平降低,从而对肝脏造成损伤。
目前,对严重酒精性肝病患者唯一治疗选择是肝移植,接受肝移植的酒精性肝病患者的生存期在移植后1年稳步提高到80-85%。然而,肝移植不应提供给中度肝功能受损的酒精性肝病患者,所以目前轻中度酒精性肝病依旧采取药物治疗。药物治疗对人体的副作用大,而且长期的服药会给肝,肾器官增加一定的负担。
枸杞子是传统药食同源中药材,富含枸杞多糖、甜菜碱、维生素及多种微量元素等功能成分。枸杞多糖具有清除自由基、保肝、提高免疫、抗肿瘤、抗疲劳等保护和改善作用。枸杞多糖可以清除酒精性肝损伤患者体内的氧自由基,进而对酒精性肝损伤起到治疗作用。枸杞中含有的甜菜碱也是一种具有强抗氧化能力的物质,可以清除体内的氧自由基,改善硫氨基酸代谢对抗氧化应激,调节能量代谢等。因此,甜菜碱对抗击肝脏类疾病,对于酒精性肝硬化,肝脏小叶增生和脂肪性肝脏都有一定的治疗作用。此外,甜菜碱与抗坏血酸配伍时,具有一定的提高免疫力,抗肿瘤的效果。维生素是一类具有强抗氧化能力的物质,具有清除机体内的氧自由基,恢复机体氧化与抗氧化***的平衡的作用。同时枸杞中含有的其他微量的功能成分在集体中也发挥着改善或者提高机体机能的作用。但是单使用枸杞,药效缓慢,不能起到治疗效果。
除了药食同源的中药材之外,益生菌在各种疾病中也发挥着重要的作用。Akkermansia Muciniphila是2004年Derrien在人类粪便中发现的一种新的粘蛋白降解菌,属于疣菌门。Akkermansia Muciniphila是人类肠道中普遍存在,约占比3-5%。Akkermansia Muciniphila已被证实可用于肥胖,二型糖尿病等疾病的治疗。AkkermansiaMuciniphila菌在肠道中为肠粘膜提供营养,抵御LPS,维持肠道黏膜的完整性等功能。但是很多人肠道内没有Akkermansia Muciniphila菌或是丰度很低,且AkkermansiaMuciniphila菌在肠道内存活率较低,单独作为补充益生菌的效果并不是很理想。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明发现枸杞能够特异性促进AkkermansiaMuciniphila菌在肠道内的增殖,据此提供了一种结合了中药和益生菌的组合物,可以作为治疗酒精性肝损伤的食品或者药物,这也具有重要的社会前景和经济效益。
本发明的第一个目的是提供一种治疗酒精性肝损伤的药菌组合物,按体积百分比计,包括如下组分:70-90%枸杞浆料和10-30%乳酸菌发酵果汁,其中,每30mL枸杞浆料中含有5×109-10个Akkermansia Muciniphila菌。
进一步地,所述的乳酸菌发酵果汁为蓝莓、菠萝、石榴、苹果、桑椹、枇杷、草莓、柑橘、猕猴桃中的至少二种水果果汁发酵而成。
本发明的第二个目的是提供所述的药菌组合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)枸杞原浆的制备:采用超微粉碎法将干枸杞子进行粉碎,获得枸杞粉;再加入枸杞粉质量的30-40%的水进行混合打浆,灭菌后获得枸杞原浆,或枸杞鲜果清洗后直接打浆,灭菌获得枸杞原浆;
(2)制备Akkermansia Muciniphila菌:将Akkermansia Muciniphila菌进行发酵培养,获得活的Akkermansia Muciniphila菌;
(3)果浆制备:将水果原料清洗后取果肉进行打浆、酶解、胶体磨磨浆后,得到果浆;
(4)乳酸菌发酵果汁制备:将所述步骤(3)得到的果浆经过乳酸菌发酵,过滤,110℃高温瞬时灭菌,得到发酵果汁;
(5)复配:向步骤(1)得到的枸杞原浆中加入步骤(2)所得活的AkkermansiaMuciniphila菌,获得复配混合物;
(6)调配:向步骤(5)所得的复配混合物中加入步骤(4)所得的乳酸菌发酵果汁进行调配,得到所述的药菌组合物。
进一步地,所述的Akkermansia Muciniphila菌发酵培养是在35-38℃的厌氧条件下发酵35-45h。
进一步地,所述的超微粉碎的转速为330-350r/min,球料比为7-9,粉碎时间2-3h。
进一步地,所述的酶解是采用纤维素酶和果胶酶进行处理。
进一步地,所述的纤维素酶和果胶酶的添加量按照果肉总质量计,分别加入0.2%-0.3%的纤维素酶和0.25%-0.4%果胶酶。
进一步地,所述的酶解的温度为50-55℃,酶解时间2-2.5h。
进一步地,所述的水果原料为蓝莓、猕猴桃和苹果按照质量比6-8:5-7:3-5混合得到。
进一步地,所述的乳酸菌是为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum M10-1,菌种来源于文章:“Deciphering the D-/L-lactate-producing microbiota andmanipulating their accumulation during solid-state fermentation of cerealvinegar.Food Microbiology,2020,92,103559”。
进一步地,所述的果汁发酵条件为乳酸菌接种量为1-3%,发酵时间为36-48h。
借由上述方案,本发明至少具有以下优点:
本发明通过枸杞特异性促进Akkermansia Muciniphila菌在肠道内的增殖,同时,Akkermansia Muciniphila菌可以将枸杞中的多糖等物质分解成小分子活性物质,这更有利于人体的肠道的吸收以及活性的发挥。枸杞中的枸杞多糖、甜菜碱、维生素及多种微量元素等功能成分,清除机体内的氧自由基,恢复机体氧化与抗氧化***的平衡,并辅助以乳酸菌发酵果汁增强和调节人体免疫力,抗氧化,抗炎,并改善组合物的口感。
本发明的组合物能够显著降低酒精性肝损伤小鼠血清中AST、ALT及LPS的含量,减轻肝细胞损伤,并提高机体抗氧化能力,且可以显著降低TG和TC的含量,减少肝脂质的堆积,氧化指标ROS及促炎因子IL-1β水平也显著降低,说明本发明的组合物可以显著降低肝脏内氧化水平,缓解炎症,具有显著治疗酒精性肝损伤的效果,可以作为一种具有良好治疗酒精性肝损伤效果的药物。
上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,并可依照说明书的内容予以实施,以下以本发明的较佳实施例并配合详细说明如后。
具体实施方式
实施例中的优质宁夏枸杞子是传统药食同源中药材,富含枸杞多糖、甜菜碱、维生素及多种微量元素等功能成分。枸杞多糖具有清除自由基、保肝、调节肠道菌群、提高免疫、抗肿瘤、抗疲劳等保护和改善作用。枸杞多糖可以清除酒精性肝损伤患者体内的氧自由基,调节肠道菌群,进而对酒精性肝损伤起到治疗作用。枸杞中含有的甜菜碱也是一种具有强抗氧化能力的物质,可以清除体内的氧自由基,改善硫氨基酸代谢对抗氧化应激,调节能量代谢等。因此,甜菜碱对抗击肝脏类疾病,对于酒精性肝硬化,肝脏小叶增生和脂肪性肝脏都有一定的治疗作用。此外,甜菜碱与抗坏血酸配伍时,具有一定的提高免疫力,抗肿瘤的效果。维生素是一类具有强抗氧化能力的物质,具有清除机体内的氧自由基,恢复机体氧化与抗氧化***的平衡的作用。同时枸杞中含有的其他微量的功能成分在集体中也发挥着改善或者提高机体机能的作用。
本发明中枸杞联合了活的Akkermansia Muciniphila菌,特异性促进AkkermansiaMuciniphila菌在肠道内的增殖。Akkermansia Muciniphila菌具有降低了肝功能异常和炎症的相关血液标志物水平并减少了肝脂肪变性的作用。饮入大量酒精导致肝脏中肝功酶水平升高及肝脂肪变性。Akkermansia Muciniphila菌可降低肝功酶的水平改善脂肪变性,对治疗酒精对肝脏造成的损伤具有一定的效果。此外,枸杞联合Akkermansia Muciniphila菌可调节肠道菌群,增强肠道屏障功能,进一步减少炎症因子,如LPS的产生,间接对酒精性肝损伤起到保护作用。
实施例中新鲜果汁是蓝莓,猕猴桃,苹果的混合果汁。蓝莓,猕猴桃和苹果的营养组成丰富,除具有普通水果所含的糖、酸、氨基酸等物质外,还富含黄酮、多酚、尼克酸、超氧化物歧化酶等物质。乳酸菌对果浆进行发酵后,可产生有机酸,其可以与乙醇化学反应产生乙酸乙酯,乙酸乙酯通过人体呼吸道、消化道、皮肤粘膜***到体外,从而缓解酒精对肝脏的损伤。同时乳酸菌可将水果中的糖等物质分解成单糖等小分子物质,更有利于肠道的吸收以及发挥生物功能。此外,乳酸菌是一种益生菌,其内含物具有增强和调节人体免疫力,调节肠道菌群等功能,能够进一步促进Akkermansia Muciniphila菌的增殖。同时,发酵果汁也可以改善药菌组合物的口感。
实施例1:
(1)枸杞子原浆的制备:利用超微粉碎法将优质的枸杞子进行粉碎,粉碎时超微粉碎机转速为340r/min、球料比为7,粉碎时间2h,获得枸杞粉。再加入枸杞粉质量的40%的水进行混合打浆,在110℃高温瞬时灭菌,获得枸杞原浆;
(2)制备Akkermansia Muciniphila菌:根据HACCP质量体系,使用食品级培养基对细菌进行培养,在37℃的厌氧条件下发酵40h,获得Akkermansia Muciniphila菌备用;
(3)水果果浆的制备:将水果原料进行两次清洗或取果肉,蓝莓,猕猴桃和苹果按照质量比8:6:3混合进行打浆,向经打浆的果肉中添加果肉总质量0.2%的纤维素酶和0.25%果胶酶,酶解温度为50-55℃,酶解时间2-2.5h。胶体磨磨浆后,得到新鲜果浆;
(4)发酵果汁的制备:将所述步骤(3)得到的新鲜水果果浆经2%植物乳杆菌Lactobacillus plantarum M10-1发酵48h,过滤,110℃高温瞬时灭菌,得到发酵果汁;
(5)复配:将所述步骤(1)得到的枸杞原浆中加入步骤(2)所得AkkermansiaMuciniphila菌,获得复配混合物;
其中Akkermansia Muciniphila菌的添加量为5×109个/30mL枸杞原浆。
(6)调配:向所述步骤(5)所得复配混合物中加入步骤(4)所得发酵果汁进行调配,最终得到治疗酒精性肝损伤的药菌组合物;
其中发酵果汁添加量为复配混合物质量的25%。
实施例2:
(1)枸杞子原浆的制备:枸杞鲜果清洗后直接打浆,110℃高温瞬时灭菌获得枸杞原浆;
(2)制备Akkermansia Muciniphila菌:根据HACCP质量体系,使用食品级培养基对细菌进行培养,在37℃的厌氧条件下发酵40h,获得Akkermansia Muciniphila菌备用;
(3)水果原料预处理:将水果原料进行两次清洗后取果肉,蓝莓,猕猴桃和苹果按照质量比8:6:4混合进行打浆,向经打浆的果肉中添加果肉总质量0.2%的纤维素酶和0.25%果胶酶,酶解温度为50-55℃,酶解时间2-2.5h。胶体磨磨浆后,得到新鲜果浆,取所述新鲜果浆进行过滤,并在110℃高温瞬时灭菌,得到澄清果汁备用;
(4)发酵果汁的制备:将所述步骤(3)得到的新鲜水果果浆经3%植物乳杆菌Lactobacillus plantarum M10-1发酵48h,过滤,110℃高温瞬时灭菌,得到发酵果汁;
(5)复配:将所述步骤(1)得到的枸杞原浆中加入步骤(2)所得AkkermansiaMuciniphila菌,获得复配混合物;
其中Akkermansia Muciniphila菌的添加量为5×1010个/30mL枸杞原浆。
(6)调配:向所述步骤(5)所得复配混合物中加入步骤(4)所得澄清果汁进行调配,最终得到治疗酒精性肝损伤的药菌组合物;
其中发酵果汁添加量为复配混合物质量的30%。
对比例1:
(1)枸杞子原浆的制备:枸杞鲜果清洗后直接打浆,110℃高温瞬时灭菌获得枸杞原浆;
(2)水果原料预处理:将水果原料进行两次清洗后取果肉,蓝莓,猕猴桃和苹果按照质量比8:6:4混合进行打浆,向经打浆的果肉中添加果肉总质量0.2%的纤维素酶和0.25%果胶酶,酶解温度为50-55℃,酶解时间2-2.5h。胶体磨磨浆后,得到新鲜果浆备用;
(3)发酵果汁的制备:将所述步骤(2)得到的新鲜水果果浆经3%植物乳杆菌Lactobacillus plantarum M10-1发酵48h,过滤,110℃高温瞬时灭菌,得到发酵果汁;
(4)调配:向所述步骤(1)所得枸杞原浆中加入步骤(3)所得发酵果汁进行调配,得到治疗酒精性肝损伤的组合物;
其中澄清果汁添加量为复配混合物质量的30%。
对比例2:
(1)制备Akkermansia Muciniphila菌:根据HACCP质量体系,使用食品级培养基对细菌进行培养,在37℃的厌氧条件下发酵40h,获得Akkermansia Muciniphila菌备用;
(2)水果原料预处理:将水果原料进行两次清洗或取果肉,蓝莓,猕猴桃和苹果按照质量比8:6:4混合进行打浆,向经打浆的果肉中添加果肉总质量0.2%的纤维素酶和0.25%果胶酶,酶解温度为50-55℃,酶解时间2-2.5h。胶体磨磨浆后,得到新鲜果浆,取所述新鲜果浆进行过滤,并在,得到澄清果汁备用;
(3)发酵果汁的制备:将所述步骤(2)得到的新鲜水果果浆经3%植物乳杆菌Lactobacillus plantarum M10-1发酵48h,过滤,110℃高温瞬时灭菌,得到发酵果汁;
(4)调配:将所述步骤(1)得到的Akkermansia Muciniphila菌中加入步骤(3)所得的发酵果汁,获得复配混合物;
其中5×1010的Akkermansia Muciniphila菌中添加40mL发酵果汁。
试验例1:
治疗酒精性肝损伤的药菌组合物的应用性能
C57BL/6小鼠,5~6周雄性,80只。
实施例1、实施例2、对比例1、对比例2的组合物(由本单位生产)、Lieber-DeCarli酒***体饲料、美他多辛片。
将小鼠随机分成7组,每组10只,分为正常组、模型组、给药组1、给药组2、给药组3、给药组4、给药组5和阳性对照组。分组及给药关系如表1所示。
表1分组及给药情况
正常组正常饮食饮水;模型组进行Lieber-DeCarli酒***体饲料饮食15天;实验组进行Lieber-DeCarli酒***体饲料饮食9天,第10天至第15天每天灌胃组合物或美他多辛片,剂量分别为6mL/kg和0.14g/kg。第16天,断颈法处死。收集小鼠的血清及肝脏组织,检测小鼠血清中的AST、ALT、LPS及肝脏中的TG、TC、ROS及IL-1β。
表2各组小鼠血清中相关指标的统计结果
表3各组小鼠肝脏中相关指标的统计结果
注:###与空白组比较P<0.001;***与模型组相比较,P<0.001;**与模型组相比较,P<0.01;*与模型组比较,P<0.05。
综上可知,本发明产品能够显著降低酒精性肝损伤小鼠血清中AST、ALT及LPS的含量,减轻肝细胞损伤,并提高机体抗氧化能力。进一步对肝脏中相关指标进行检测,结果显示本发明产品可以显著降低TG和TC的含量,减少肝脂质的堆积。氧化指标ROS及促炎因子IL-1β的结果中也可以看出本发明产品可显著降低ROS和IL-1β的水平,说明本发明产品可以显著降低肝脏内氧化水平,缓解炎症。以上结果说明本发明产品具有显著治疗酒精性肝损伤的效果,可以作为一种具有良好治疗酒精性肝损伤效果的药物。
以上仅是本发明的优选实施方式,并不用于限制本发明,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种治疗酒精性肝损伤的药菌组合物,其特征在于,按体积百分比计,包括如下组分:70-90%枸杞浆料和10-30%乳酸菌发酵果汁,其中,每30mL枸杞浆料中含有5×109-10个Akkermansia Muciniphila菌。
2.根据权利要求1所述的药菌组合物,其特征在于,所述的乳酸菌发酵果汁为蓝莓、菠萝、石榴、苹果、桑椹、枇杷、草莓、柑橘、猕猴桃中的至少二种水果果汁发酵而成。
3.根据权利要求1所述的药菌组合物,其特征在于,所述的乳酸菌为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum M10-1。
4.一种权利要求1~3任一项所述的药菌组合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)枸杞原浆的制备:采用超微粉碎法将干枸杞子进行粉碎,获得枸杞粉;再加入枸杞粉质量的30-40%的水进行混合打浆,灭菌后获得枸杞原浆,或枸杞鲜果清洗后直接打浆,灭菌获得枸杞原浆;
(2)制备Akkermansia Muciniphila菌:将Akkermansia Muciniphila菌进行发酵培养,获得活的Akkermansia Muciniphila菌;
(3)果浆制备:将水果原料清洗后取果肉进行打浆、酶解、胶体磨磨浆后,得到果浆;
(4)乳酸菌发酵果汁制备:将所述步骤(3)得到的果浆经过乳酸菌发酵,过滤,110℃高温瞬时灭菌,得到发酵果汁;
(5)复配:向步骤(1)得到的枸杞原浆中加入步骤(2)所得活的AkkermansiaMuciniphila菌,获得复配混合物;
(6)调配:向步骤(5)所得的复配混合物中加入步骤(4)所得的乳酸菌发酵果汁进行调配,得到所述的药菌组合物。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的超微粉碎的转速为330-350r/min,球料比为7-9,粉碎时间2-3h。
6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的酶解是采用纤维素酶和果胶酶进行处理。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的纤维素酶和果胶酶的添加量按照果肉总质量计,分别加入0.2%-0.3%的纤维素酶和0.25%-0.4%果胶酶。
8.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的酶解的温度为50-55℃,酶解时间2-2.5h。
9.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的水果原料为蓝莓、猕猴桃和苹果按照质量比6-8:5-7:3-5混合得到。
10.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的乳酸菌发酵条件为乳酸菌接种量为1-3%,发酵时间为36-48h。
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CN202110316102.4A CN112957403A (zh) | 2021-03-24 | 2021-03-24 | 一种治疗酒精性肝损伤的药菌组合物及其制备方法与应用 |
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CN109880732A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-06-14 | 天津科技大学 | 一种解酒护肝果醋饮料及其制备方法 |
CN110679660A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-01-14 | 江南大学 | 一种护肝解酒的枸杞多糖酸奶及其制备方法 |
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2021
- 2021-03-24 CN CN202110316102.4A patent/CN112957403A/zh active Pending
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CN109880732A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-06-14 | 天津科技大学 | 一种解酒护肝果醋饮料及其制备方法 |
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