CN112924581A - 一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，属于养殖水体中污染物检测技术领域。本发明提供的检测方法采用HLB柱对水体中的金刚乙胺和美金刚进行富集净化，克服了水体中金刚乙胺和美金刚浓度低难监测的问题；同时选择金刚乙胺‑D4作为金刚乙胺和美金刚的内标，内标法回收率在80～110％之间，具有较高的准确性。实施例的数据表明，本发明提供的检测方法对金刚乙胺和美金刚的定量限为2ng/L，对金刚乙胺和美金刚的检出限为1ng/L。
Description
技术领域
本发明涉及养殖水体中污染物检测技术领域，尤其涉及一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法。
背景技术
随着科学技术的发展和陆地资源逐渐枯竭，沿海国家纷纷把目光投向海洋，加快了对海洋的开发和利用，海洋已成为人类食物蛋白质的重要供应场所，海水也可以淡化后再利用。同时现代养殖业日益趋向于规模化、集约化，使用抗生素、维生素、激素、金属微量元素等，对海洋环境构成了极大的威胁，简便高效的药物残留测定方法，是有效地控制药物残留发生的基础。
金刚乙胺是美金刚胺类似物，用于预防和治疗A型流感病毒感染，临床疗效优于美金刚胺，且不良反应小于美金刚胺，而美金刚胺是金刚乙胺的同分异构体，这2种美金刚胺类化合物均对动物禽流感等病毒性疾病有预防效果。经研究发现，若长期大量使用这些药物会给人类身体健康造成巨大的危害，但是，金刚乙胺和美金刚的滥用使得其在环境中的残留量越来越多。我国虽明令禁止美金刚胺等抗病毒药作为兽用药，但由于其价格低廉、效果良好，养殖户为避免病毒感染引发畜禽死亡而造成经济损失，就将美金刚胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍、阿昔洛韦、咪喹莫特、美金刚等抗病毒类药物掺入饲料中。将人类药物移植兽用，会造成动物中毒、药物残留、病毒抑制或变异等不良反应，同时随着养殖废水以及医药领域残留通过各种途径进入水体。含有金刚乙胺和美金刚的废水流入养殖环境，造成养殖环境的污染，最终通过在藻类、贝类、鱼类等生物体内积累，随食物链迁移而影响到人类身体健康。
当前关于金刚乙胺和美金刚的检测方法的研究较少，仅有的几种也是针对动物源性食品和饲料中药物残留量的检测，而关于养殖水体中的金刚乙胺和美金刚的检测技术更是鲜有报道。
因此，开展养殖水体中金刚乙胺和美金刚液相色谱串联质谱方法研究，建立准确性好、灵敏度高、快捷简便的检测方法尤为重要。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，本发明提供的检测方法能够准确测定养殖水体中残留的金刚乙胺和美金刚的含量。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，包括以下步骤：
将待测养殖水体和内标物混合，将所得混合液过滤，得到待测养殖水精滤液；将所述待测养殖水精滤液上HLB柱，得到吸附柱；采用甲醇洗脱吸附柱，将洗脱液作为待测液；所述内标物为金刚乙胺-D4；
采用液质联用法对所述待测液进行检测，得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值；
基于金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线，得到养殖水体中金刚乙胺和美金刚的浓度；
所述液质联用法的参数包括液相色谱参数和质谱参数；
所述液相色谱参数包括：
色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，粒径1.9μm；
流动相A：甲醇；
流动相B：体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；
流速：0.25mL/min；
梯度洗脱程序为：
0min：5％A+95％B；
0.5min：5％A+95％B；
3min：95％A+5％B；
5min：95％A+5％B；
6min：5％A+95％B；
7min：5％A+95％B；
所述质谱参数包括：
离子源：电喷雾电离；
检测方法：多反应监测模式；
毛细管电压：3500V；
离子源温度：350℃；
壳气：40；
辅助气：12；
离子传输管温度：350℃；
化合物离子参数：
金刚乙胺：母离子180.213；子离子81.22，107.17，163.1；s-lens：80；碰撞能量：22ev，24ev，17ev；
美金刚：母离子180.152；子离子91.17，107.24，163.1；s-lens，76；碰撞能量：38ev，25ev，14ev；
金刚乙胺-D4：母离子184.183；子离子：167.1；s-lens：88；碰撞能量：16ev。
优选地，所述混合液中金刚乙胺-D4的浓度为10～50μg/L。
优选地，所述过滤用滤膜为纤维滤膜；所述纤维滤膜的孔径为0.45μm。
优选地，所述HLB柱使用前，依次用甲醇和水进行活化和平衡。
优选地，所述待测养殖水精滤液上HLB柱的流速为10～20滴/min。
优选地，所述甲醇的体积与HLB柱的容积的比值为1：1～1：2。
优选地，所述洗脱液在进行检测前，依次进行氮气吹干和定容；所述定容用试剂为体积浓度为0.1％的甲酸的乙腈乙酸铵溶液，乙腈乙酸铵溶液中乙腈和乙酸铵的体积比为95：5。
本发明提供了一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，将待测养殖水体和内标物混合，将所得混合液过滤，得到待测养殖水精滤液；将所述待测养殖水精滤液上HLB柱，得到吸附柱；采用甲醇洗脱吸附柱，将洗脱液作为待测液；所述内标物为金刚乙胺-D4；采用液质联用法对所述待测液进行检测，得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值；基于金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线，得到养殖水体中金刚乙胺和美金刚的浓度；所述液质联用法的参数包括液相色谱参数和质谱参数；所述液相色谱参数包括：色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，粒径1.9μm；流动相A：甲醇；流动相B：体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；流速：0.25mL/min；梯度洗脱程序为：0min：5％A+95％B；0.5min：5％A+95％B；3min：95％A+5％B；5min：95％A+5％B；6min：5％A+95％B；7min：5％A+95％B；所述质谱参数包括：离子源：电喷雾电离；检测方法：多反应监测模式；毛细管电压：3500V；离子源温度：350℃；壳气：40；辅助气：12；离子传输管温度：350℃；化合物离子参数：金刚乙胺：母离子180.213；子离子81.22，107.17，163.1；s-lens：80；碰撞能量：22ev，24ev，17ev；美金刚：母离子180.152；子离子91.17，107.24，163.1；s-lens，76；碰撞能量：38ev，25ev，14ev；金刚乙胺-D4：母离子184.183；子离子：167.1；s-lens：88；碰撞能量：16ev。
本发明提供的检测方法采用HLB柱对养殖水体中的金刚乙胺和美金刚进行富集净化，克服了水体中金刚乙胺和美金刚浓度低难检测的问题；同时选择金刚乙胺-D4作为金刚乙胺和美金刚的内标，内标法回收率在80～110％之间，具有较高的准确性。实施例的数据表明，本发明提供的检测方法对金刚乙胺和美金刚的定量限为2ng/L，对金刚乙胺和美金刚的检出限为1ng/L。
附图说明
图1为金刚乙胺和美金刚浓度分别为10ng/L、金刚乙胺-D4浓度为20ng/L的标准混合液的选择离子流图；
图2为空白海水的选择离子流图；
图3为空白海水加标金刚乙胺和美金刚浓度为10ng/L、金刚乙胺-D4浓度为20ng/L的选择离子流图；
图4为空白淡水选择离子流图；
图5为空白淡水加标金刚乙胺和美金刚浓度为10ng/L、金刚乙胺-D4浓度为20ng/L的选择离子流图谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，包括以下步骤：
将待测养殖水体和内标物混合，将所得混合液过滤，得到待测养殖水精滤液；将所述待测养殖水精滤液上HLB柱，得到吸附柱；采用甲醇洗脱吸附柱，将洗脱液作为待测液；所述内标物为金刚乙胺-D4；
采用液质联用法对所述待测液进行检测，得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值；
基于金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线，得到养殖水体中金刚乙胺和美金刚的浓度。
本发明将待测养殖水体和内标物混合，将所得混合液过滤，得到待测养殖水精滤液。在本发明中，所述内标物为金刚乙胺-D4；所述混合液中金刚乙胺-D4的浓度优选为10～50μg/L，具体优选为20μg/L。在本发明中，所述过滤用滤膜优选为纤维滤膜；所述纤维滤膜的孔径优选为0.45μm。在本发明中，所述过滤能够除去待测养殖水体中的大块杂质。
得到待测养殖水精滤液后，本发明将所述待测养殖水精滤液上HLB柱，得到吸附柱。在本发明中，所述HLB柱使用前，优选进行预处理，所述预处理优选包括：依次用甲醇和水进行活化和平衡；本发明对所述活化和平衡的参数和方式不做具体限定，采用本领域技术人员熟知的活化和平衡参数即可。在本发明中，所述HLB柱的容积优选为3mL或6mL；所述待测养殖水精滤液上HLB柱的流速优选为10～20滴/min，具体优选为10滴/min。在本发明中，所述HLB柱能够将金刚乙胺和美金刚吸附在柱子上，实现金刚乙胺和美金刚的富集。
得到吸附柱后，本发明采用甲醇洗脱吸附柱，将洗脱液作为待测液。在本发明中，所述甲醇的体积与HLB柱的容积的比值优选为1：1～1：2。在本发明中，所述洗脱液在进行检测前，优选依次进行氮气吹干和定容；所述氮气吹干的温度优选为45℃；所述定容用试剂优选为体积浓度为0.1％的甲酸的乙腈乙酸铵溶液，乙腈乙酸铵溶液中乙腈和乙酸铵的体积比优选为95：5。
在本发明中，控制洗脱液甲醇的量与HLB柱容积的比值为1：1～1：2，能够将吸附柱上吸附的美金刚和金刚乙胺洗脱下来，实现金刚乙胺和美金刚的富集和纯化；同时，也能避免洗脱下过多的杂质，进而避免过多杂质的存在对金刚乙胺和美金刚的影响，提高检测灵敏度。
得到待测液后，本发明采用液质联用法对所述待测液进行检测，得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值。在本发明中，所述液质联用法的参数包括液相色谱参数和质谱参数；所述液相色谱参数包括：
色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，粒径1.9μm；
流动相A：甲醇；
流动相B：体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；
流速：0.25mL/min；
梯度洗脱程序为：
0min：5％A+95％B；
0.5min：5％A+95％B；
3min：95％A+5％B；
5min：95％A+5％B；
6min：5％A+95％B；
7min：5％A+95％B；
所述质谱参数包括：
离子源：电喷雾电离；
检测方法：多反应监测模式；
毛细管电压：3500V；
离子源温度：350℃；
壳气：40；
辅助气：12；
离子传输管温度：350℃；
化合物离子参数：
金刚乙胺：母离子180.213；子离子81.22，107.17，163.1；s-lens：80；碰撞能量：22ev，24ev，17ev；
美金刚：母离子180.152；子离子91.17，107.24，163.1；s-lens，76；碰撞能量：38ev，25ev，14ev；
金刚乙胺-D4：母离子184.183；子离子：167.1；s-lens：88；碰撞能量：16ev。
得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值后，本发明基于金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线，得到养殖水体中金刚乙胺和美金刚的浓度。
本发明对所述金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线的获取方式不做具体限定，采用本领域技术人员熟知的标准曲线获取方法即可。
下面结合实施例对本发明提供养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
以下实施例中，所用液相色谱条件和质谱条件包括：
所述液相色谱参数包括：
色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，粒径1.9μm；
流动相A：甲醇；
流动相B：体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；
流速：0.25mL/min；
梯度洗脱程序为：
0min：5％A+95％B；
0.5min：5％A+95％B；
3min：95％A+5％B；
5min：95％A+5％B；
6min：5％A+95％B；
7min：5％A+95％B；
所述质谱参数包括：
离子源：电喷雾电离；
检测方法：多反应监测模式；
毛细管电压：3500V；
离子源温度：350℃；
壳气：40；
辅助气：12；
离子传输管温度：350℃；
化合物离子参数：
金刚乙胺：母离子180.213；子离子81.22，107.17，163.1；s-lens：80；碰撞能量：22ev，24ev，17ev；
美金刚：母离子180.152；子离子91.17，107.24，163.1；s-lens，76；碰撞能量：38ev，25ev，14ev；
金刚乙胺-D4：母离子184.183；子离子：167.1；s-lens：88；碰撞能量：16ev。
实施例1
定量限的确定
按照金刚乙胺和美金刚10倍信噪比，确定金刚乙胺和美金刚的定量限(LOQ)，结果为：金刚乙胺在养殖水体中定量限为2ng/L，美金刚在养殖水体中定量限为2ng/L。
实施例2
标准曲线的获取：
配制金刚乙胺和美金刚浓度分别为10μg/L、20μg/L、40μg/L、50μg/L和100μg/L的系列标准混合液，系列标准混合液中还分别加入浓度为20μg/L的金刚乙胺-D4；采用上述液相色谱和质谱参数对系列标准混合液进行检测，得到相应的峰面积比值；以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准工作液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
所得金刚乙胺浓度和峰面积比值的标准曲线为：y＝0.139706+0.237969*x，其中，x为金刚乙胺浓度；y为金刚乙胺和内标物金刚乙胺-D4的峰面积比值；R2＝0.9995；
所得美金刚浓度和峰面积比值的标准曲线为：y＝0.0466214+0.221748*x，其中，x为美金刚浓度，y为美金刚和内标物所得的峰面积比值；R2＝0.9977。
实施例3
方法的检出限
按照金刚乙胺和美金刚3倍信噪比，确定金刚乙胺和美金刚的检出限，结果为：金刚乙胺的检出限为1ng/L；美金刚的检出限为1ng/L。
实施例4
采用MAX固相萃取柱(混合阴离子交换柱)、MCX固相萃取柱(混合阳离子交换柱)和HLB固相萃取柱，用海水或淡水稀释标准储备液，取5mL金刚乙胺和美金刚标准混合液(标准混合液中金刚乙胺和美金刚的浓度均为10mg/L)，用海水或淡水定容至500mL，得到浓度为100μg/L的金刚乙胺和美金刚标准溶液，过经活化的MAX固相萃取柱、MCX固相萃取柱和HLB固相萃取柱，上机测定。
MCX固相萃取柱、MAX固相萃取柱对两种目标化合物的回收率均低于40％。HLB固相萃取柱对两种目标化合物净化效果和回收率均满足需求。采用了甲醇作为HLB固相萃取柱的洗脱液，并对洗脱液的体积进行了研究，结果表明，10mL甲醇可使目标化合物完全洗脱。
实施例5
检测方法的回收率和精密度
向空白海水及空白淡水样品中添加标准溶液，制成3组不同浓度的标准添加样品，每个浓度样品平行测定7个，计算方法回收率和精密度。结果如表1和表2所示。
表1空白海水中添加金刚乙胺和美金刚的平均回收率情况(n＝7)
从表1可以看出：空白海水中添加金刚乙胺和美金刚的量为2.00～50.0ng/L时，平均回收率在90.3～97.6％之间，批内相对标准偏差均小于8％，批间相对偏差小于6％。
表2空白淡水中添加金刚乙胺和美金刚的平均回收率情况(n＝7)
从表2可以看出：空白淡水中添加金刚乙胺和美金刚的量为2.00～50.0ng/L时，回收率在84.9％～93.2％之间，批内相对标准偏差均小于8％，批间相对偏差小于6％。
图1为金刚乙胺和美金刚浓度为10ng/L、金刚乙胺-D4浓度为20ng/L的标准混合液的选择离子流图，其中a图为美金刚180.152＞91.17的谱图，b图为美金刚180.152＞107.24的谱图，c图为美金刚180.152＞163.1的谱图，d图为金刚乙胺180.213＞81.22的谱图，e图为金刚乙胺180.213＞107.17的谱图，f图为金刚乙胺180.213＞163.1的谱图，g图为金刚乙胺-D4的离子流图。
图2为空白海水的选择离子流图，其中a图为美金刚180.152＞91.17的谱图，b图为美金刚180.152＞107.24的谱图，c图为美金刚180.152＞163.1的谱图，d图为金刚乙胺180.213＞81.22的谱图，e图为金刚乙胺180.213＞107.17的谱图，f图为金刚乙胺180.213＞163.1的谱图，g图为金刚乙胺-D4的离子流图。
图3为空白海水加标金刚乙胺和美金刚浓度为10ng/L、金刚乙胺-D4浓度为20ng/L的选择离子流图，其中a图为美金刚180.152＞91.17的谱图，b图为美金刚180.152＞107.24的谱图，c图为美金刚180.152＞163.1的谱图，d图为金刚乙胺180.213＞81.22的谱图，e图为金刚乙胺180.213＞107.17的谱图，f图为金刚乙胺180.213＞163.1的谱图，g图为金刚乙胺-D4的离子流图。
图4为空白淡水选择离子流图，其中a图为美金刚180.152＞91.17的谱图，b图为美金刚180.152＞107.24的谱图，c图为美金刚180.152＞163.1的谱图，d图为金刚乙胺180.213＞81.22的谱图，e图为金刚乙胺180.213＞107.17的谱图，f图为金刚乙胺180.213＞163.1的谱图，g图为金刚乙胺-D4的离子流图。
图5为空白淡水加标金刚乙胺和美金刚浓度为10ng/L、金刚乙胺-D4浓度为20ng/L的选择离子流图谱图，其中a图为美金刚180.152＞91.17的谱图，b图为美金刚180.152＞107.24的谱图，c图为美金刚180.152＞163.1的谱图，d图为金刚乙胺180.213＞81.22的谱图，e图为金刚乙胺180.213＞107.17的谱图，f图为金刚乙胺180.213＞163.1的谱图，g图为金刚乙胺-D4的离子流图。
从图1～图5可以看出：金刚乙胺、美金刚及内标金刚乙胺-D4峰形尖锐对称，信噪比高，满足准确定量的要求，说明本方法适用于养殖水体中金刚乙胺和美金刚的测定。
实施例6
取莱州湾海域的海水样品和养殖场附近的淡水样品各10份，按本方法进行处理后上机检测，金刚乙胺和美金刚均未检出。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种养殖水体中金刚乙胺和美金刚的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
将待测养殖水体和内标物混合，将所得混合液过滤，得到待测养殖水精滤液；将所述待测养殖水精滤液上HLB柱，得到吸附柱；采用甲醇洗脱吸附柱，将洗脱液作为待测液；所述内标物为金刚乙胺-D4；
采用液质联用法对所述待测液进行检测，得到养殖水体中金刚乙胺/金刚乙胺-D4峰面积比值和美金刚/金刚乙胺-D4峰面积比值；
基于金刚乙胺浓度-峰面积比值标准曲线、美金刚浓度-峰面积比值标准曲线，得到养殖水体中金刚乙胺和美金刚的浓度；
所述液质联用法的参数包括液相色谱参数和质谱参数；
所述液相色谱参数包括：
色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，粒径1.9μm；
流动相A：甲醇；
流动相B：体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；
流速：0.25mL/min；
梯度洗脱程序为：
0min：5％A+95％B；
0.5min：5％A+95％B；
3min：95％A+5％B；
5min：95％A+5％B；
6min：5％A+95％B；
7min：5％A+95％B；
所述质谱参数包括：
离子源：电喷雾电离；
检测方法：多反应监测模式；
毛细管电压：3500V；
离子源温度：350℃；
壳气：40；
辅助气：12；
离子传输管温度：350℃；
化合物离子参数：
金刚乙胺：母离子180.213；子离子81.22，107.17，163.1；s-lens：80；碰撞能量：22ev，24ev，17ev；
美金刚：母离子180.152；子离子91.17，107.24，163.1；s-lens，76；碰撞能量：38ev，25ev，14ev；
金刚乙胺-D4：母离子184.183；子离子：167.1；s-lens：88；碰撞能量：16ev。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合液中金刚乙胺-D4的浓度为10～50μg/L。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述过滤用滤膜为纤维滤膜；所述纤维滤膜的孔径为0.45μm。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HLB柱使用前，依次用甲醇和水进行活化和平衡。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测养殖水精滤液上HLB柱的流速为10～20滴/min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述甲醇的体积与HLB柱的容积的比值为1：1～1：2。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述洗脱液在进行检测前，依次进行氮气吹干和定容；所述定容用试剂为体积浓度为0.1％的甲酸的乙腈乙酸铵溶液，乙腈乙酸铵溶液中乙腈和乙酸铵的体积比为95：5。
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|---|---|
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110110871A1 (en) * | 2009-11-09 | 2011-05-12 | Conopco, Inc., D/B/A Unilever | Substituted 3-(phenoxymethyl) benzyl amines and personal care compositions |
| CN105628826A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-01 | 山东省海洋资源与环境研究院 | 一种用于检测海水及海洋沉积物中金刚烷胺残留量的高效液相色谱-串联质谱方法 |
| CN110426462A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-11-08 | 佛山科学技术学院 | 一种检测动物源性食品中金刚烷胺、金刚乙胺和美金刚残留的方法 |
-
2021
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110110871A1 (en) * | 2009-11-09 | 2011-05-12 | Conopco, Inc., D/B/A Unilever | Substituted 3-(phenoxymethyl) benzyl amines and personal care compositions |
| CN105628826A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-01 | 山东省海洋资源与环境研究院 | 一种用于检测海水及海洋沉积物中金刚烷胺残留量的高效液相色谱-串联质谱方法 |
| CN110426462A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-11-08 | 佛山科学技术学院 | 一种检测动物源性食品中金刚烷胺、金刚乙胺和美金刚残留的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| XU YJ 等: "Analysis of amantadine in Laminaria Japonica and seawater of Daqin Island by ultra high performance liquid chromatography with positive electrospray ionization tandem mass spectrometry", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| 中国食品药品检定研究院: "《中国药品检验标准操作规范》", 31 August 2019, 中国医药科技出版社 * |
| 吴银良 等: "同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中金刚烷胺类药物残留量", 《分析测试学报》 * |
| 周剑 等: "两种样品处理方法对LC-MS/MS测定鸡肉中金刚烷胺基质效应比较", 《分析科学学报》 * |
| 李诗言 等: "高效液相色谱-串联质谱法快速测定乌鳢肌肉中金刚烷胺、金刚乙胺和美金刚残留", 《中国渔业质量与标准》 * |
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210608 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |