CN112870342A - 一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法。本发明从优势流行菌株中筛选出免疫原性良好的副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株作为疫苗制备菌株,分别划线接种于TSA固体培养基,TSB培养基上培养,再放大到改进后的发酵罐上培养,收获培养物,经甲醛溶液灭活后,离心浓缩,再加入佐剂混合乳化制成副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,该疫苗用于预防由4、5、12型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病,具有安全性好、免疫效力高且免疫期长等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法。
背景技术
副猪嗜血杆菌病是1906年德国科学家格拉泽发现的,故又称格拉泽氏病。副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道的常在菌,在特定条件下如环境改变、其他细菌病毒感染的条件下能够侵入机体的多种组织***中引起全身症状,临床上以“六炎四水”为病变特征,即胸膜炎、腹膜炎、关节炎、心包炎、肺炎、脑膜炎,胸腔、腹腔、关节、颅腔积液;临床表现为精神沉郁高热,食欲不振厌食消瘦,关节肿胀跛行,咳嗽呼吸困难,粘膜发绀等症状。该病呈世界性分布,已成为全球范围内危害养猪业的最主要细菌性传染病之一,并已证实在中国绝大多数猪场存在和流行。本病只感染猪,主要是断奶前后仔猪和保育猪,患猪或带菌猪通过空气、接触、消化道传播感染,可影响2周龄~4月龄猪,常见于5-8周龄猪,发病率一般为10%~15%,严重时死亡率可达50%以上。
目前国际认可的副嗜血杆菌有15个血清型,其中我国主要以4型和5型最为流行,其次流行血清型主要为12型、13型和14型。
目前我国副猪嗜血杆菌病商品化灭活疫苗是以血清型4型和5型制备的二价苗为主。虽然二价疫苗的应用对该病起到了一定的预防作用,但多种血清型感染已经使现有疫苗很难达到预期的免疫效果。
另一方面,现有疫苗制备方法中,存在以下问题:(1)在菌液发酵罐培养过程中,溶氧量需控制在50%~60%,在培养量为70%时,在生长高峰期耗氧量增大,容易导致溶氧量不足;(2)副猪嗜血杆菌抗原基本上是采用先浓缩再灭活的方式,浓缩过程容易散毒、菌液失活,且在生产过程中菌失活后容易裂解产生内毒素。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种发酵罐以及副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,该疫苗用于预防由4、5、12型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病,具有安全性好、免疫效力高且免疫期长的优点。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案为:
本发明首先提供一种发酵罐,包括罐体,罐体的顶部设有罐口,罐体的顶部连接有进料管,罐体的底部连接有出料管,罐体的侧壁上设有加热夹套,加热夹套上设有进水口和出水口,所述的罐体顶部还设有补料口和进气口,罐体的下部设有取样口,所述罐体内设有搅拌轴和至少一个搅拌桨,所述搅拌轴一端与设置在罐体顶部的驱动电机连接,搅拌轴另一端与搅拌桨连接;所述发酵罐还包括环形通气装置和空气管道,所述空气管道通过从罐体顶部伸入罐体内的下部,空气管道的底部与环形通气装置一端连接,环形通气装置的环形面与罐体底部平行设置。
所述环形通气装置由不锈钢管成型。环形通气装置上间隔设有多个不同朝向的通气孔。
所述空气管道上设有流量控制器。所述搅拌桨的数量为四个,四个搅拌桨沿搅拌轴长度方向间隔设置。
所述罐体的下部还设有温度电极口、溶氧电极口和pH电极口。所述进料管、补料口和出料管上设有过滤网。
采用本发明发酵罐的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
S1:生产用种子的制备
分别将副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株冻干菌种溶解,划线接种于TSA培养基,置37℃培养24~48小时,分别选取单个典型菌落划线接种于TSA培养基,37℃培养24~48小时;
用TSB培养基洗下固体培养基上的一级种子,接种于TSB液体培养基中,37℃振荡培养8~10小时,取样纯粹检验合格后,作为二级种子液;
S2:制苗用菌液的制备
S2-1:菌液培养
采用本发明发酵罐分别对4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的二级种子进行培养:按发酵罐容积的70~80%加入TSB培养基,同时加入0.01%~0.02%消泡剂,通入高压蒸汽进行灭菌,待温度降至37~38℃时,分别加入10%新生牛血清、10~20μg/mL NAD和2%~4%二级种子液进行发酵培养,培养温度为37℃、搅拌转速为100~150r/min,溶氧值控制在50%-60%,菌液培养8~10小时后,取样进行活菌计数和纯粹检验;
S2-2:活菌计数
4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液活菌数均应大于等于6×109CFU/mL;
S2-3:灭活浓缩
在4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液中分别计量加入终浓度为0.2~0.4%甲醛溶液,37℃搅拌灭活24~30小时,灭活结束后取样进行灭活检验,其余菌液置2~8℃保存;
分别将4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活完成的菌液,导入柱式离心机离心,收获菌泥,将菌泥重悬于适量灭菌的生理盐水中,置于2~8℃保存,根据活菌计数结果,均稀释至1.8×1010CFU/mL,分别得到4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原;
S3半成品检验
S3-1纯粹检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验;
S3-2灭活检验
灭活结束后,取2支10mL TSB液体培养基,各接种灭活菌液0.2毫升,37℃培养7天;其中,当培养液培养至24小时,分别取0.5ml培养液再移植接种于1支10mL TSB液体培养基,37℃培养24-48小时。观察结果,所有TSB培养基不变浑浊,则视为灭活检验合格。
S3-3毒素检验
各取4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活菌液0.2ml,经静脉注射18~22g Balb/c小鼠5只,逐日观察3日,小鼠全部健活则视为毒素检验合格;
4)疫苗制备
将检验合格的4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原等比例混合后,在搅拌器中缓慢搅拌混匀,再缓慢加入GEL佐剂(9:1的比例),搅拌5min~10min,直至完全混合均匀,再加入终浓度0.01%的硫柳汞钠溶液,乳化后即得到副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,置于4℃保存;
此外,本发明乳化佐剂不限,可为油佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂、ISA201VG佐剂等,制备的疫苗可为油包水型疫苗、水包油型疫苗或水包油包水型疫苗;
5)分装
经无菌检验合格后,定量分装,加盖密封,并粘贴标签,置2~8℃保存。
本发明从优势流行菌株中筛选出免疫原性良好的副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株作为疫苗制备菌株,分别划线接种于TSA固体培养基,TSB培养基上培养,再放大到改进后的发酵罐上培养,收获培养物,经甲醛溶液灭活后,离心浓缩,再加入GEL佐剂混合乳化制成三价疫苗,用于预防由4、5、12型副猪嗜血杆菌引起的猪副嗜血杆菌病,此疫苗具有安全性好、免疫效力高且免疫期长等优点。
本发明具有以下优点:
1、目前我国最为流行的副猪嗜血杆菌血清型是4型、5型、12型,但我国副猪嗜血杆菌病商品化疫苗是以血清型4型和5型制备的二价苗为主,本发明提供血清4型、5型、12型有较高的保护力,能够对仔猪产生较高的抗体,持续期长,能够抵抗同型野毒株的攻击,具有很好的免疫效力。
2、采用本发明的菌液发酵罐培养时,在发酵罐底部连接有通气装置,可以快速达到溶氧值。发酵罐设置深层通气装置,不仅降低了污染风险,提高了菌液活菌数,还缩短了培养时间,还可以适当增加培养量。
3、本发明采用先灭活后离心的方法,避免了在离心过程中菌液失活;培养后的三种菌液分别灭活,灭活后的菌液再进行离心,不仅减少散毒风险,还能去除灭活后抗原的甲醛。
4、本发明采用的是GEL佐剂,水包油剂型,更易注射,更易吸收,能够对仔猪产生较高的抗体,免疫保护力好。
附图说明
以下结合附图和具体实施方式对本发明做进一步详细说明;
图1为本发明发酵罐的结构示意图。
具体实施方式
如图1所示,本发明的发酵罐,包括罐体1,罐体1的顶部设有罐口2,罐体1的顶部连接有进料管3,罐体1的底部连接有出料管4,罐体1的侧壁上设有加热夹套5,加热夹套5上设有进水口6和出水口7,所述的罐体1顶部还设有补料口8和进气口20,罐体1的下部设有取样口10,所述罐体1内设有搅拌轴11和至少一个搅拌桨12,所述搅拌轴11一端与设置在罐体1顶部的驱动电机13连接,搅拌轴11另一端与搅拌桨12连接;所述发酵罐还包括环形通气装置14和空气管道15,所述空气管道15从罐体顶部伸入罐体1内的下部,空气管道15的底部与环形通气装置14一端连接,环形通气装置14的环形面与罐体1底部平行设置。
所述环形通气装置由不锈钢管成型,环形通气装置上间隔设有多个不同朝向的通气孔16。
所述空气管道上设有流量控制器17。
作为本发明的一种实施方式,搅拌桨12的数量为四个,四个搅拌桨12沿搅拌轴11长度方向间隔设置。
所述罐体1的下部还设有温度电极口18、溶氧电极口19和pH电极口9。
所述进料管3和出料管4上设有过滤网(图中未示出)。
本发明的发酵罐具有以下优点:1、罐体的补料口、取样口均为三通装置,一端进液,一端进气,端口处均有阀门,可独立灭菌,做到用后及时灭菌,降低污染风险。2、罐体搅拌桨设置多层搅拌叶,能做到搅拌更加均匀。3、在进料管、补料口和出料管增加不锈钢致密过滤网,过滤网镶嵌在管道内,可拆除清洗,以达到过滤杂质的目的。4、环形通气装置与洁净空气管道连接,悬空环绕在罐体内壁周围,环形通气装置上间隔设有多个不同朝向的通气孔,可以达到增加洁净空气的目的。5、罐体取样口旁边设置有温度电极口、溶氧电极口、pH电极口,温度通过水箱水注入夹套循环来控制,溶氧通过洁净空气流量控制器来控制。
表1发酵罐改进造前后的活菌量
采用上述发酵罐的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
S1:生产用种子的制备
分别将副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株冻干菌种溶解,划线接种于TSA培养基,置37℃培养24~48小时,分别选取单个典型菌落划线接种于TSA培养基,37℃培养24~48小时;
用TSB培养基洗下固体培养基上的一级种子,接种于TSB液体培养基中,37℃振荡培养8~10小时,取样纯粹检验合格后,作为二级种子液;
S2:制苗用菌液的制备
S2-1:菌液培养
采用发酵罐分别对4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的二级种子进行培养:按发酵罐容积的70~80%加入TSB培养基,同时加入0.01%~0.02%消泡剂,通入高压蒸汽进行灭菌,待温度降至37~38℃时,分别加入10%新生牛血清、10~20μg/mL NAD和2%~4%二级种子液进行发酵培养,培养温度为37℃、搅拌转速为100~150r/min,溶氧值控制在50%-60%,菌液培养8~10小时后,取样进行活菌计数和纯粹检验;
S2-2:活菌计数
4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液活菌数均应大于等于6×109CFU/mL;
S2-3:灭活浓缩
在4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液中分别计量加入终浓度为0.2~0.4%甲醛溶液,37℃搅拌灭活24~30小时,灭活结束后取样进行灭活检验,其余菌液置2~8℃保存;
分别将4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活完成的菌液,导入柱式离心机离心,收获菌泥,将菌泥重悬于适量灭菌的生理盐水中,置于2~8℃保存,根据活菌计数结果,均稀释至1.8×1010CFU/mL,分别得到4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原;
S3半成品检验
S3-1纯粹检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验;
S3-2灭活检验
灭活结束后,取2支10mL TSB液体培养基,各接种灭活菌液0.2毫升,37℃培养7天;其中,当培养液培养至24小时,分别取0.5ml培养液再移植接种于1支10mL TSB液体培养基,37℃培养24-48小时。观察结果,所有TSB培养基应不变浑浊。
S3-3毒素检验
各取4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活菌液0.2ml,经静脉注射18~22g Balb/c小鼠5只,逐日观察3日,小鼠全部健活则视为毒素检验合格;
4)疫苗制备
将检验合格的4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原等比例混合后,在搅拌器中缓慢搅拌混匀,再缓慢加入GEL佐剂(9:1的比例),搅拌5min~10min,直至完全混合均匀,再加入终浓度0.01%的硫柳汞钠溶液,乳化后即得到副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,置于4℃保存;
此外,本发明乳化佐剂不限,可为油佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂、ISA201VG佐剂等,制备的疫苗可为油包水型疫苗、水包油型疫苗或水包油包水型疫苗;
5)分装
经无菌检验合格后,定量分装,加盖密封,并粘贴标签,置2~8℃保存。
本发明采用先灭活再离心的方法制备疫苗,菌液损失小,不仅较少了离心过程菌液失活,还降低了散毒风险,还能去除代谢产物、甲醛、血清蛋白等,减小副反应。具体见表2:
表2安全性试验
本发明方法制备的疫苗,抗体效价更高,攻毒保护率更高。具体见表3
表3疫苗效力检验与毒力检验
实施例1
采用本发明发酵罐的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
S1:生产用种子的制备
分别将副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株冻干菌种溶解,划线接种于TSA培养基,置37℃培养24小时,分别选取单个典型菌落划线接种于TSA培养基,37℃培养24小时;
用TSB培养基洗下固体培养基上的一级种子,接种于TSB液体培养基中,37℃振荡培养8小时,取样纯粹检验合格后,作为二级种子液;
S2:制苗用菌液的制备
S2-1:菌液培养
采用发酵罐分别对4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的二级种子进行培养:按发酵罐容积的70%加入TSB培养基,同时加入0.01%%消泡剂,通入高压蒸汽进行灭菌,待温度降至37℃时,分别加入10%新生牛血清、10μg/mL NAD和2%二级种子液进行发酵培养,培养温度为37℃、搅拌转速为100r/min,溶氧值控制在50%-,菌液培养8小时后,取样进行活菌计数和纯粹检验;
S2-2:活菌计数
4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液活菌数均应大于等于6×109CFU/mL;
S2-3:灭活浓缩
在4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液中分别计量加入终浓度为0.2%甲醛溶液,37℃搅拌灭活24小时,灭活结束后取样进行灭活检验,其余菌液置2℃保存;
分别将4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活完成的菌液,导入柱式离心机离心,收获菌泥,将菌泥重悬于适量灭菌的生理盐水中,置于2℃保存,根据活菌计数结果,均稀释至1.8×1010CFU/mL,分别得到4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原;
S3半成品检验
S3-1纯粹检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验;
S3-2灭活检验
灭活结束后,取2支10mL TSB液体培养基,各接种灭活菌液0.2毫升,37℃培养7天;其中,当培养液培养至24小时,分别取0.5ml培养液再移植接种于1支10mL TSB液体培养基,37℃培养24小时。观察结果,所有TSB培养基应不变浑浊。
S3-3毒素检验
各取4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活菌液0.2ml,经静脉注射18g Balb/c小鼠5只,逐日观察3日,小鼠全部健活则视为毒素检验合格;
4)疫苗制备
将检验合格的4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原等比例混合后,在搅拌器中缓慢搅拌混匀,再缓慢加入GEL佐剂(9:1的比例),搅拌5min,直至完全混合均匀,再加入终浓度0.01%的硫柳汞钠溶液,乳化后即得到副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,置于4℃保存;
此外,本发明乳化佐剂不限,可为油佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂、ISA201VG佐剂等,制备的疫苗可为油包水型疫苗、水包油型疫苗或水包油包水型疫苗;
5)分装
经无菌检验合格后,定量分装,加盖密封,并粘贴标签,置2℃保存。
实施例2
采用上述发酵罐的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
S1:生产用种子的制备
分别将副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株冻干菌种溶解,划线接种于TSA培养基,置37℃培养48小时,分别选取单个典型菌落划线接种于TSA培养基,37℃培养248小时;
用TSB培养基洗下固体培养基上的一级种子,接种于TSB液体培养基中,37℃振荡培养10小时,取样纯粹检验合格后,作为二级种子液;
S2:制苗用菌液的制备
S2-1:菌液培养
采用发酵罐分别对4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的二级种子进行培养:按发酵罐容积的80%加入TSB培养基,同时加入0.02%消泡剂,通入高压蒸汽进行灭菌,待温度降至38℃时,分别加入10%新生牛血清、20μg/mL NAD和4%二级种子液进行发酵培养,培养温度为37℃、搅拌转速为150r/min,溶氧值控制-60%,菌液培养8~10小时后,取样进行活菌计数和纯粹检验;
S2-2:活菌计数
4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液活菌数均应大于等于6×109CFU/mL;
S2-3:灭活浓缩
在4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液中分别计量加入终浓度为0.4%甲醛溶液,37℃搅拌灭活30小时,灭活结束后取样进行灭活检验,其余菌液置2~8℃保存;
分别将4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活完成的菌液,导入柱式离心机离心,收获菌泥,将菌泥重悬于适量灭菌的生理盐水中,置于8℃保存,根据活菌计数结果,均稀释至1.8×1010CFU/mL,分别得到4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原;
S3半成品检验
S3-1纯粹检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验;
S3-2灭活检验
灭活结束后,取2支10mL TSB液体培养基,各接种灭活菌液0.2毫升,37℃培养7天;其中,当培养液培养至24小时,分别取0.5ml培养液再移植接种于1支10mL TSB液体培养基,37℃培-48小时。观察结果,所有TSB培养基应不变浑浊。
S3-3毒素检验
各取4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活菌液0.2ml,经静脉注射18~22g Balb/c小鼠5只,逐日观察3日,小鼠全部健活则视为毒素检验合格;
4)疫苗制备
将检验合格的4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原等比例混合后,在搅拌器中缓慢搅拌混匀,再缓慢加入GEL佐剂(9:1的比例),搅拌10min,直至完全混合均匀,再加入终浓度0.01%的硫柳汞钠溶液,乳化后即得到副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,置于4℃保存;
此外,本发明乳化佐剂不限,可为油佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂、ISA201VG佐剂等,制备的疫苗可为油包水型疫苗、水包油型疫苗或水包油包水型疫苗;
5)分装
经无菌检验合格后,定量分装,加盖密封,并粘贴标签,置8℃保存。
实施例3
采用上述发酵罐的副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,包括以下步骤:
S1:生产用种子的制备
分别将副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株冻干菌种溶解,划线接种于TSA培养基,置37℃培养36小时,分别选取单个典型菌落划线接种于TSA培养基,37℃培养36小时;
用TSB培养基洗下固体培养基上的一级种子,接种于TSB液体培养基中,37℃振荡培养9小时,取样纯粹检验合格后,作为二级种子液;
S2:制苗用菌液的制备
S2-1:菌液培养
采用发酵罐分别对4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的二级种子进行培养:按发酵罐容积的75%加入TSB培养基,同时加入0.015%消泡剂,通入高压蒸汽进行灭菌,待温度降至37℃时,分别加入10%新生牛血清、15μg/mL NAD和3%二级种子液进行发酵培养,培养温度为37℃、搅拌转速为125r/min,溶氧值控制在55%,菌液培养9小时后,取样进行活菌计数和纯粹检验;
S2-2:活菌计数
4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液活菌数均应大于等于6×109CFU/mL;
S2-3:灭活浓缩
在4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液中分别计量加入终浓度为0.3%甲醛溶液,37℃搅拌灭活28小时,灭活结束后取样进行灭活检验,其余菌液置6℃保存;
分别将4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活完成的菌液,导入柱式离心机离心,收获菌泥,将菌泥重悬于适量灭菌的生理盐水中,置于2~8℃保存,根据活菌计数结果,均稀释至1.8×1010CFU/mL,分别得到4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原;
S3半成品检验
S3-1纯粹检验
按现行《中国兽药典》附录进行检验;
S3-2灭活检验
灭活结束后,取2支10mL TSB液体培养基,各接种灭活菌液0.2毫升,37℃培养7天;其中,当培养液培养至24小时,分别取0.5ml培养液再移植接种于1支10mL TSB液体培养基,37℃培养36小时。观察结果,所有TSB培养基应不变浑浊。
S3-3毒素检验
各取4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活菌液0.2ml,经静脉注射20g Balb/c小鼠5只,逐日观察3日,小鼠全部健活则视为毒素检验合格;
4)疫苗制备
将检验合格的4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原等比例混合后,在搅拌器中缓慢搅拌混匀,再缓慢加入GEL佐剂(9:1的比例),搅拌8min,直至完全混合均匀,再加入终浓度0.01%的硫柳汞钠溶液,乳化后即得到副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,置于4℃保存;
此外,本发明乳化佐剂不限,可为油佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂、ISA201VG佐剂等,制备的疫苗可为油包水型疫苗、水包油型疫苗或水包油包水型疫苗;
5)分装
经无菌检验合格后,定量分装,加盖密封,并粘贴标签,置2~8℃保存。
Claims (10)
1. 一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1:生产用种子的制备
分别将副猪嗜血杆菌4型H25株、5型H45株、12型H31株冻干菌种溶解,划线接种于TSA培养基,置37℃培养24~48小时,分别选取单个典型菌落划线接种于TSA培养基,37℃培养24~48小时;
用TSB培养基洗下固体培养基上的一级种子,接种于TSB液体培养基中,37℃ 振荡培养8~10小时,取样纯粹检验合格后,作为二级种子液;
S 2:制苗用菌液的制备
S 2-1:菌液培养
采用发酵罐分别对4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的二级种子进行培养:按发酵罐容积的70~80%加入TSB培养基,同时加入0.01%~0.02%消泡剂,通入高压蒸汽进行灭菌,待温度降至37~38℃时,分别加入10%新生牛血清、10~20μg/mL NAD和2%~4%二级种子液进行发酵培养,培养温度为37℃、搅拌转速为100~150 r/min,溶氧值控制在50%-60%,菌液培养8~10小时后,取样进行活菌计数和纯粹检验;
S 2-2:活菌计数
4型H25株、5型H45株、12型H31株菌种的培养菌液活菌数均应大于等于6×109CFU/mL;
S 2-3:灭活浓缩
在4型H25株、5型H45株、12型H31株的培养菌液中分别计量加入终浓度为0.2~0.4%甲醛溶液,37℃搅拌灭活24~30小时,灭活结束后取样进行灭活检验,其余菌液置2~8℃保存;
分别将4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活完成的菌液,导入柱式离心机离心,收获菌泥,将菌泥重悬于适量灭菌的生理盐水中,置于2~8℃保存,根据活菌计数结果,均稀释至1.8×1010CFU/mL,分别得到4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原;
S 3:半成品检验
上述4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活菌液分别经过纯粹检验、灭活检验、毒素检验,检验结果均合格;
S 4:疫苗制备
将检验合格的4型H25株、5型H45株、12型H31株灭活抗原等比例混合后,在搅拌器中缓慢搅拌混匀,再缓慢加入GEL佐剂,搅拌5min~10min,直至完全混合均匀,再加入终浓度0.01%的硫柳汞钠溶液,乳化后即得到副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗,置于4℃保存。
2. 根据权利要求1所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:步骤S 2-1中,菌液培养条件为:培养温度为37℃,搅拌转速为100~150 r/min,溶氧值控制在50%-60%。
3. 根据权利要求1 所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:步骤S 4中,4型H25株、5型H45株、12型H31株抗原的总量与佐剂的质量比为9:1。
4. 根据权利要求1 所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:步骤S 4中,所述佐剂为GEL佐剂、油佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂、ISA201VG佐剂中的一种。
5. 根据权利要求1 所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:步骤S 2-1中,所述发酵罐包括罐体,罐体的顶部设有罐口,罐体的顶部连接有进料管,罐体的底部连接有出料管,罐体的侧壁上设有加热夹套,加热夹套上设有进水口和出水口,所述的罐体顶部还设有补料口和进气口,罐体的下部设有取样口,所述罐体内设有搅拌轴和至少一个搅拌桨,所述搅拌轴一端与设置在罐体顶部的驱动电机连接,搅拌轴另一端与搅拌桨连接;所述发酵罐还包括环形通气装置和空气管道,所述空气管道从罐体顶部伸入罐体内的下部,空气管道的底部与环形通气装置一端连接,环形通气装置的环形面与罐体底部平行设置。
6.根据权利要求5所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:所述环形通气装置由不锈钢管成型,所述环形通气装置上间隔设有多个不同朝向的通气孔。
7.根据权利要求5所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:所述空气管道上设有流量控制器。
8.根据权利要求5所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:所述搅拌桨的数量为四个,四个搅拌桨沿搅拌轴长度方向间隔设置。
9.根据权利要求5所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:所述罐体的下部还设有温度电极口、溶氧电极口和pH电极口。
10.根据权利要求5所述的一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的制备方法,其特征在于:所述进料管、补料口和出料管上设有过滤网。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN102499982A (zh) * | 2011-12-21 | 2012-06-20 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法 |
CN102908615A (zh) * | 2011-08-01 | 2013-02-06 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 新型副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗及制备方法 |
CN106434480A (zh) * | 2016-11-02 | 2017-02-22 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种高密度发酵培养副猪嗜血杆菌的方法 |
CN108441446A (zh) * | 2018-03-27 | 2018-08-24 | 河南科技大学 | 一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗及其生产方法和应用 |
CN108949513A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-12-07 | 杭州宸祥环境工程有限公司 | 一种微生物发酵装置 |
-
2021
- 2021-01-25 CN CN202110098569.6A patent/CN112870342A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102908615A (zh) * | 2011-08-01 | 2013-02-06 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 新型副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗及制备方法 |
CN102499982A (zh) * | 2011-12-21 | 2012-06-20 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的生产方法 |
CN106434480A (zh) * | 2016-11-02 | 2017-02-22 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种高密度发酵培养副猪嗜血杆菌的方法 |
CN108441446A (zh) * | 2018-03-27 | 2018-08-24 | 河南科技大学 | 一种副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗及其生产方法和应用 |
CN108949513A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-12-07 | 杭州宸祥环境工程有限公司 | 一种微生物发酵装置 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
农业农村部: "中华人民共和国农业农村部公告第14号", Retrieved from the Internet <URL:moa.gov.cn/govpublic/SYJ/20180427_6141119.htm> * |
梁猛: "生物工程技术实验指导", 28 February 2018, 中国科学技术大学出版社, pages: 33 - 34 * |
王雅华 等: "兽用生物制品技术", 30 April 2009, 中国农业大学出版社, pages: 43 - 44 * |
邹小波: "食品加工机械与设备", 30 April 2020, 第369-372页, pages: 369 - 372 * |
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