CN112867923A - 免疫层析试验片 - Google Patents

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Abstract

本发明要解决的问题是提供一种免疫层析试验片，其能够通过不同于现有技术的方法避免免疫层析试验片中所谓的空白显色，并且能够进行更准确的测定。本发明提供了一种免疫层析试验片，其至少包括：样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。

Description

免疫层析试验片
技术领域
本发明涉及用于免疫层析的试验片和使用该试验片的免疫层析检测方法。
背景技术
随着在患者附近的治疗的POCT(护理点测试)使用的普及，使用硝酸纤维素膜等的试验片的侧流式免疫层析检测方法已经广泛用作使用抗原-抗体反应的简单免疫测定法。
基于免疫层析的试验片(以下称为免疫层析试验片)通常由位于多孔膜上的样品施加区域、展开区域和检测区域组成。通过在与试样(样品)接触时溶解，将靶向特定分析物的标记抗体保持在展开区域中，从而能够沿着展开区域向下移动并到达检测区域。负责分析物检测的抗体被固定在展开区域的特定位置上，以构成检测区域。当将试样滴到试样施加区域上并且试样中包含分析物时，分析物会特异性地与标记抗体结合形成复合物。该复合物在下游方向的展开区域中展开，并与检测区域中的固定抗体结合。以此方式，在检测区域中形成了标记抗体、分析物和固定化抗体的夹心型复合物，因此，可以通过检测源自标记物的信号来定性或定量地分析分析物。
常规的免疫层析检测方法存在免疫层析试验片的背景结合和空白显色的问题。背景结合是指膜的检测区域以外的部位是有色的，这被认为是由于标记抗体与膜的疏水性结合所致。空白显色是指当测量不存在检测物质的空白样品时检测区域显色，并且由于这是非特异性反应，因此也称为非特异性显色。空白显色被认为是有问题的，因为在视觉测定的情况下会引起假阳性，从而给出错误的测定结果，并且在通过光学装置进行测定的情况下会引起检测灵敏度(即特定信号的可检测性)的劣化。
为了减少空白显色，专利文献1公开了一种免疫层析装置，其中用具有一个或多个巯基，分子量为2000至20000的聚亚烷基二醇保护标记物质以在干燥和保持中稳定标记物质，然后将其与精氨酸和酪蛋白一起干燥并保持在标记物质保持部中。还描述了在标记物质溶液中包含果糖作为保护性稳定物质或促进溶解的物质(第0032段)。
专利文献2描述了当标记物质以液体形式或干燥状态保持时，糖类被一起包括在试剂盒中。虽然尚不明确允许糖共存的目的，但如专利文献1所述，推测是为了使诸如乳胶颗粒之类的标记物质稳定化而进行的。
另外，已经采用了添加蛋白质或表面活性剂以抑制空白显色的方法；但是，即使抑制了空白显色，同时也降低了分析物的检测灵敏度，这些措施仍然是不够的。另外，如果如专利文献1那样用官能团等对标记物质进行修饰，则可能产生新的问题，例如杂质的污染。
引文清单
专利文献
专利文献1：日本公开专利公报第2013-195403号
专利文献2：日本公开专利公报第2002-082117号
发明内容
技术问题
综上所述，在没有污染杂质的情况下减少空白显色的同时保持对分析物的足够的检测灵敏度仍然存在问题。本发明要解决的问题是提供一种免疫层析试验片，其通过与现有技术不同的方法抑制免疫层析试验片中所谓的空白显色，避免假阳性以防止错误测定，并能够实现更高的检测灵敏度。
解决问题的方法
本发明人试图改变免疫层析试验片的各种元素以解决该问题。首先，根据现有技术，本发明人试图改进缀合物。具体地说，在生产缀合物时的pH调节、封闭剂的类型以及将封闭剂添加到缀合物垫上的研究中进行了各种尝试。其中，在某些情况下空白显色减少。但是，分析物的检测灵敏度同时下降，无法获得期望的性能。然后研究了将抗体固定在不溶膜上的条件。研究了用封闭剂处理不溶性膜，固定化抗体的量以及与抗体共存的糖的类型和浓度的结果，本发明人惊奇地发现，通过将与特定的还原性糖共存的抗体固定在包括多孔膜的免疫层析试验片中，可以显著降低空白显色同时保持检测灵敏度，从而完成了本发明。具体地，本发明具有以下构成。
(1)一种免疫层析试验片，至少包括：样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中，所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
(2)根据(1)所述的免疫层析试验片，包括：
作为样品施加区域的样品垫，以及
缀合物垫，其包含用胶体金标记的抗分析物抗体。
(3)根据(1)或(2)所述的免疫层析试验片，其中施加到所述样品施加区域的试样是血浆或全血。
(4)根据(1)至(3)中任一项所述的免疫层析试验片，其中所述还原性单糖是葡萄糖或果糖，并且其中所述还原性二糖是麦芽糖。
(5)一种免疫层析检测试剂盒，包括：根据(1)至(4)中任一项所述的免疫层析试验片。
(6)一种免疫层析检测方法，包括使用以下试验片：
一种免疫层析试验片，至少包括样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中
所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
(7)根据(6)所述的免疫层析检测方法，其中试验片包括
作为样品施加区域的样品垫，以及
缀合物垫，其包含用胶体金标记的抗分析物抗体。
(8)根据(6)或(7)所述的免疫层析检测方法，其中施加到所述样品施加区域的试样是血浆或全血。
(9)根据(6)至(8)中任一项所述的免疫层析检测方法，其中所述还原性单糖是葡萄糖或果糖，并且其中所述还原性二糖是麦芽糖。
(10)一种免疫层析试验片的制造方法，至少包括以下步骤：
(a)将包含抗分析物抗体、选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖以及缓冲溶液的抗体施加液置于多孔膜；以及
(b)干燥所述多孔膜；
其中所述抗体施加液的pH为7.0至8.0。
(11)根据(10)所述的免疫层析试验片的制造方法，其中所述还原性单糖是葡萄糖或果糖，并且其中所述还原性二糖是麦芽糖。
(12)根据(10)或(11)所述的免疫层析试验片的制造方法，其中缓冲溶液中糖的浓度为2.5～5％。
(13)一种在免疫层析检测方法中抑制空白显色的方法，包括使用以下试验片：
一种免疫层析试验片，至少包括样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中
所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
发明的有益效果
根据本发明，在保持分析物的检测灵敏度的同时，可以减少由于空白反应引起的显色(空白显色)。因此，在视觉测定的情况下，可以避免假阳性以使测定更加准确，并且在通过光学装置进行测定的情况下，可以提高检测灵敏度。
附图说明
[图1]图1是显示当通过使用其中糖和抗体施加液的浓度被改变的不同免疫层析试验片进行空白反应和特异性反应时测试线的吸光度的图。
[图2]图2是显示图1的测试结果的S/N比的图。
[图3]图3是显示本发明的免疫层析试验片的透视图。
具体实施方式
(免疫层析试验片)
本发明的免疫层析试验片是至少具有样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域的免疫层析试验片，其中用于检测的抗体与特定的糖一起被固定在所述展开区域的一部分中以构成检测区域。
针对分析物的标记抗体(也称为缀合物)以稍后描述的存在形式(A至C)存在，从而抗体在与试样接触后可以穿过展开区域并到达检测区域。
体现这些元素的试验片的一个实例是一种试验片，其包括用作样品施加区域的样品垫，将针对分析物的标记抗体保持在可溶状态并用作展开区域的一部分的缀合物垫，以及多孔膜，所述多孔膜具有固定有用于检测的抗体的部分并用作展开区域和检测区域。具体而言，本发明的用于免疫层析的典型试验片具有以下构造：
(1)施加试样的样品垫；
(2)缀合物垫，其设置在样品垫的下游，并以可溶状态将被第一抗体敏化的缀合物保持在诸如胶体金之类的标记物质的表面上；和
(3)多孔膜，其设置在缀合物垫的下游并且具有检测区域，在该检测区域中，与缀合物和分析物的复合物结合的第二抗体与特定的糖保持在一起。
样品垫、缀合物垫和多孔膜可以各自构成单独的载体，或者它们中的两个可以构成一个载体，并且可以使用任何形式，只要样品垫、缀合物垫和多孔膜从上游到下游按此顺序设置即可。
除了上述构成要素之外，免疫层析试验片还可具有进一步设置并安装在其上的吸收垫和第三垫中的一个或多个。
通常将试验片布置在固相支撑物上，例如塑料粘合片(在下文中也称为衬片)上。
为了增加固定有抗体的多孔膜的机械强度并防止测定中的水分蒸发(干燥)，可以在试验片上层叠聚酯膜等。
使用本发明的免疫层析试验片的检测方法如下进行。
当将试样滴到样品施加区域上并且试样包含分析物时，分析物特异性地结合到标记的抗体上，从而形成复合物。该复合物在下游方向上的展开区域中展开，并与检测区域中的固定化抗体结合。在检测区域中，形成了标记的抗体、分析物和固定化的抗体的夹心型复合物，因此，可以通过检测该复合物来定性或定量地分析分析物。检测的实例包括通过视觉观察确定显色的方法和通过光学手段检测源自标记物的光学参数的方法。当使用光学手段时，可以手动或自动进行检测，并且还可以进行连续测量。
(多孔膜)
用于本发明的免疫层析试验片的多孔膜具有固定在其前表面上的用于检测的抗体，由于该膜是多孔的，因此其背面通常衬有不可渗透的膜等。
多孔膜(以下也简称为膜)可以由任何材料制成。其实例包括但不限于聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、玻璃、诸如纤维素和纤维素衍生物的多糖、或陶瓷。具体实例可包括购自Merck Millipore，Toyo Roshi Kaisha，GE Healthcare等的玻璃纤维滤纸和硝酸纤维素膜。通过适当地选择多孔膜的孔径和结构，可以控制流经膜的胶体金标记的抗体和分析物的免疫复合物的速率。由于可以通过控制膜中的流速来调节与固定在膜上的抗体结合的标记抗体的量，考虑与本发明的免疫层析试验片的其他组成材料的组合，期望优化膜的孔径和结构。
(在多孔膜上固定抗体)
可以通过众所周知的方法将本发明的针对分析物的抗体固定在多孔膜上。例如，在流通(flow-through)型的情况下，将抗体调节至预定浓度，并且以特定的符号形状(例如点或+)将恒定量的其溶液施加至多孔膜。在这种情况下，为了确保免疫层析检测方法的可靠性，通常将能够与缀合物结合的蛋白质或化合物固定在不同于与分析物结合的抗体的位置，以形成“对照检测区域”。可以将用于对照的抗体固定在不同于与分析物结合的抗体的位置，以形成“对照检测区域”。
在侧流(1ateral-flow)型的情况下，将抗体调节至预定浓度，并使用装置等将其溶液以线状施加在多孔膜上，所述装置具有能够使喷嘴在水平方向上移动同时以恒定的速率从中排出溶液的机构。在这种情况下，抗体的浓度优选为0.1至5mg/mL，更优选为0.5至3mg/mL。在流通型的情况下，固定在多孔膜上的抗体的量可以通过调节滴到多孔膜上的施加量来优化，在侧流型的情况下，可以通过调节上述装置的喷嘴的排出速率来优化。特别地，在侧流型的情况下，优选0.5至2μL/cm。在本发明中，术语“流通膜测定”是指其中试样溶液等被展开以垂直通过多孔膜的方法，术语“侧流膜测定”是指其中样品溶液等被展开以在平行于多孔膜的方向上移动的方法。
在本发明中，关于针对分析物的抗体在多孔膜上的施加位置，在侧流的情况下，可以将位置布置成使得缀合物由于毛细作用从缀合物垫上展开，依次通过施加有相应抗体的线。优选地，通过施加针对分析物的抗体而形成的线位于上游，并且通过施加对照抗体形成的线优选位于其下游。在这种情况下，期望线以足够的距离间隔开，使得可以检测标记物的信号。即使在流通型的情况下，也可以布置针对目标的抗体的施加位置，从而可以检测标记物的信号
(特定的糖)
在本发明中，固定在多孔膜上的抗体的特征在于与特定的糖共存。特定的糖是还原性单糖或还原性二糖，还原性单糖的实例包括葡萄糖、果糖和半乳糖，还原性二糖的实例包括麦芽糖、乳糖和纤维二糖。其中，优选葡萄糖、麦芽糖和果糖，最优选果糖。据认为共存的还原性糖防止了由于抗体的氧化而引起的变性，并且防止了样品中的非特异性物质对膜的非特异性吸附，即空白反应。不优选还原性三糖或更高糖的原因是，由于溶解度低，难以处理，并且由于每分子量的还原端比率低，因此不能有效地防止由于氧化而引起的抗体变性。
固定在本发明的多孔膜上的糖的保持量可以根据期望的分析物的种类和所需的灵敏度适当设定，例如，每测试线长度的保持量的下限优选为0.01mg/cm或以上，更优选0.02mg/cm或以上，最优选0.025mg/cm。上限优选为0.1mg/cm或以下，更优选为0.07mg/cm或以下，最优选为0.05mg/cm或以下。
优选范围优选为0.01mg/cm至0.1mg/cm，更优选为0.02mg/cm至0.07mg/cm，并且最优选为0.025mg/cm至0.05mg/cm。
允许抗体和糖共存在多孔膜中的方法可以是任何方法，例如将抗体固定在多孔膜上然后保持糖的方法，或者相反地，预先将糖保持在多孔膜中然后固定抗体的方法，或将糖添加到抗体溶液中并在干燥和保持之前将包含糖的抗体溶液施加到多孔膜上的方法。
尽管尚不清楚通过在检测区域中以共存的方式保持本发明的特定糖和用于检测的抗体来减少空白反应的原因，但认为其作用是防止由于施加样品而溶解和展开的缀合物吸附在多孔膜上的检测区域中。还推测由于本发明的特定糖是单糖或二糖并且具有优异的溶解性和还原性，所以当缀合物展开并到达检测区域时，糖被迅速溶解以防止由于抗体的氧化而引起的变性，这使缀合物迅速流走而不会堵塞，从而抑制了空白显色。
在下文中将描述将包括本发明的特定糖的抗体溶液施加到多孔膜上的方法。
通常可以通过使用预定的缓冲溶液来制备施加到多孔膜上的抗体溶液。缓冲溶液的类型的实例包括常用的缓冲溶液，例如磷酸盐缓冲溶液，Tris缓冲溶液和Good′s缓冲溶液，其中，磷酸盐缓冲溶液是理想的。缓冲溶液的pH优选在6.0至9.5的范围内，更优选7.0至8.5，最优选7.5至8.0。除了本发明的特定糖以外，缓冲溶液还可以包括盐(例如NaCl)、保存剂、防腐剂(例如ProClin)等。盐包括为调节离子强度而包括的盐(例如NaCl)，以及在调节缓冲溶液的pH的步骤中添加的盐(例如氢氧化钠)。在将糖和抗体固定在多孔膜上之后，可以通过用变成溶液或蒸气形式的通常使用的封闭剂包被除抗体固定部位以外的区域来进一步进行封闭。
抗体溶液中糖的浓度下限优选为1.0％或以上，更优选为1.5％或以上，进一步优选为2.0％或以上，最优选为2.5％或以上。上限优选为10.0％或以下，更优选为7.0％或以下，进一步优选为6.0％或以下，最优选为5.0％以下。优选的范围优选为1.0至10.0％，更优选为1.5％至7.0％，进一步优选为2.0至6.0％，最优选为2.5至5.0％。
在本说明书中，将如上所述固定有抗体的多孔膜称为“抗体固定膜”。
(样品垫)
在本发明中使用的样品垫是用作接收样品的样品施加区域的部位，并且任何物质和形式都可以使用，只要处于模制成垫的状态的那些物质可以吸收液体样品并允许液体和分析物的成分通过即可。
可以对本发明的样品垫进行预处理以提高渗透性。
当测量全血时，可以添加红细胞凝集剂。在这种情况下，试剂可以包含在样品垫的至少一部分中，或者可以包含在整个样品垫中。
适用于样品垫的材料的具体实例包括但不限于玻璃纤维、丙烯酸纤维、亲水性聚乙烯材料、干纸、纸浆、织物等。优选地，使用玻璃纤维垫。样品垫还可以具有后述的缀合物垫的功能。在不偏离本发明的目的和不影响反应***的情况下，样品垫还可以按需要包含通常使用的封闭剂。
(缀合物)
在本发明的缀合物中，针对分析物的抗体或对照抗体(或抗原)被缀合在标记上。
本发明中使用的标记物可以是能够通过抗体的敏化(缀合)来构成缀合物并且能够在使标记物与样品接触以检测样品中的对象(抗原)的方法中用作标记物的任何标记，其实例包括胶体金颗粒、胶体铂颗粒、有色胶乳颗粒和磁性颗粒，其中胶体金和有色胶乳是理想的，并且胶体金是更理想的。可以调节其粒径，从而根据每种类型来获得期望的测量对象的检测灵敏度，例如，胶体金颗粒的平均粒径优选为20至100nm，更优选为30至100nm，特别优选为30至70nm。
在本发明的缀合物中，还可以用封闭剂封闭抗体未结合的胶体金等表面上的区域。
关于缀合物的存在形式，缀合物可以作为缀合物垫存在，即，以被包含在除样品垫、第三垫和多孔膜之外的专用垫(缀合物垫)中的状态(A型)存在，也可以作为样品垫的一部分中的缀合物区域存在(B型)。或者，缀合物可以作为与试验片分开的个体检测试剂存在，以便与试样混合(C型)。
下文将描述具有A型存在形式的缀合物的试验片的典型实例。
样品垫、缀合物垫、第三垫和多孔膜以在样品的流动方向上从上游到下游的这种顺序布置，并且布置成使得上层和下层至少部分地彼此重叠。这种布置实例的试验片如图3所示。
当将包含分析物的样品施加到这种试验片的样品垫上时，分析物通过样品垫流到下游侧的结合垫。在缀合物垫中，分析物和缀合物彼此接触并穿过垫，同时形成复合物。随后，复合物穿过与缀合物垫的下表面接触设置的第三垫，并在多孔膜中展开。
由于与分析物结合的抗体固定在多孔膜的一部分上，因此复合物被结合并固定在该膜上。固定的复合物可以在视觉上检测为源自标记物质的着色，也可以通过检测吸光度、反射光、荧光、磁性等的手段来检测。
然后将描述具有B型存在形式的缀合物的试验片。
与A型试验片的区别在于，样品垫和缀合物垫是一体的，即，样品施加区域和缀合物部分形成在样品垫的一部分中。
样品施加区域是施加包括分析物的样品的部分，缀合物区域是包括缀合物的部分，样品施加区域位于缀合物区域的上游侧。
然后将描述具有C型存在形式的缀合物的试验片。
与A型试验片的区别在于，试验片中不存在缀合物垫，并且缀合物作为单独的缀合物试剂存在。例如，可以包括具有结合在过滤器中的缀合物的过滤器芯片。通过使用这种过滤器芯片以利用过滤器过滤试样，保持在过滤器中的缀合物与分析物结合以形成复合物(聚集体)。除了没有缀合物垫，该复合物可以施加到与A型试验片相同的试验片上，以检测分析物。
(检测试剂)
在本发明中，“检测试剂”具体是至少包含缀合物的溶液。
检测试剂可以包括例如一种或多种类型的稳定剂、增溶剂等，以将缀合物维持在稳定状态，以便当与样品混合时促进固定在缀合物上的抗体与分析物的特异性反应，或快速有效地溶解和流化缀合物。稳定剂、增溶剂等的实例可包括牛血清白蛋白(BSA)、蔗糖、酪蛋白和氨基酸。
为了提高检测灵敏度，检测试剂也可以根据需要包括已知的敏化剂和螯合剂，例如EDTA和EGTA。
在本说明书中，术语“检测”或“测量”必须以最广义的方式来解释，包括分析物的存在性证明和/或定量，并且绝不能在任何意义上以受限的方式来解释。
(样品稀释剂)
如果根据试样中分析物的浓度需要稀释试样，则可以在本发明中使用稀释剂。可以使用具有任何组成的稀释剂，只要该稀释剂不显著抑制抗原-抗体反应，或者相反，不显著促进导致标记物的过度聚集并导致由于毛细作用引起的展开缺陷的反应，并且不能使根据抗原浓度的抗原-抗体反应的信号检测变得不可能。
(缀合物垫)
在本发明中，“缀合物垫”是通过干燥适用于后述的缀合物垫的材料而获得的垫，该材料中浸渍有与分析物特异性反应的检测试剂。缀合物垫具有当样品通过缀合物垫时允许检测试剂和分析物形成复合物的功能。缀合物垫本身可以被设置成与固定有抗体的多孔膜接触。或者，可以将缀合物垫设置成与样品垫接触，以接收作为毛细管流通过样品垫试样，然后作为毛细管流将试样通过第三垫转移至膜上，该第三垫与不同于样品垫的接触表面的表面接触。
适用于缀合物垫的材料的实例包括但不限于纸、纤维素混合物、硝酸纤维素、聚酯、丙烯腈共聚物、玻璃纤维和非织造纤维(例如人造丝)。优选地，使用玻璃纤维垫。
缀合物垫可包括用于确保免疫层析检测方法的可靠性的“对照试剂”，例如，用标记物标记且不与试样成分反应的抗体，和根据需要用标记物标记的诸如KLH(keyholelimpet hemocyanin)之类的高抗原蛋白。这些对照试剂是被认为不可能在样品中存在的组分(物质)，并且可以适当地选择。
(第三垫)
在本发明中，为了从样品和检测试剂中的反应性成分中去除分析物检测所不需要的成分，第三垫可以设置在样品垫与不溶性膜之间，从而反应所必需的成分可以在固定有抗体的多孔膜上顺利地展开。例如，期望去除作为检测所不需要的成分的血细胞和不溶性血细胞碎片。第三垫还可具有另外的作用，即预先去除由抗原-抗体反应产生的聚集物中，生长到阻止向抗体固定膜移动并通过该膜顺利展开的大小的聚集物。
第三垫可以由允许液体和待测成分以及检测试剂通过的任何材料并以任何形式制成。具体实例包括但不限于玻璃纤维、丙烯酸纤维、亲水性聚乙烯材料、干纸、纸浆、织物等。当用于分离血细胞时，第三垫可被称为血细胞分离膜。在本发明中，当将全血用作试样时，希望使用血细胞分离膜来确定地分离和去除仅靠样品垫不能完全去除的血细胞。
(红细胞凝集剂)
在本发明中，当将全血用作试样时，除了使用第三垫以外，还期望一起使用红细胞凝集剂或红细胞结合成分。尽管对要一起使用的红细胞凝集剂或红细胞结合成分没有特别限制，其已知实例包括凝集素、多克隆抗体和单克隆抗体，并且也可以使用聚阳离子红细胞凝集剂。已知的聚阳离子红细胞凝集剂的实例包括聚凝胺(polybrene)、聚赖氨酸、聚丙烯酸胺和聚丙氨酸，其中聚凝胺是优选的。聚凝胺的化学名称为海美溴铵(hexadimethrinebromide)，是一种阳离子聚合物之一，分配的CAS号为28728-55-4。
红细胞凝集剂或红细胞结合成分可以以将试剂或成分添加到用于稀释试样的稀释剂中或直接添加到试样中的形式使用，或者可以包括在免疫层析试验片的样品施加区域(样品垫)中。在这种使用形式中，全血中的红细胞被凝集。
(吸收垫)
在本发明中，吸收垫是具有液体吸收能力的部分，用于通过吸收已经展开并通过多孔膜的试样来控制试样的展开。在侧流型中，吸收垫可以设置在试验片的最下游侧，而在流通型中，吸收垫可以设置在例如抗体固定膜的下部。对于吸收垫，例如可以使用滤纸；然而，本发明不限于此。
(检测装置)
考虑到试验片的尺寸，试样的添加方法和位置，抗体在抗体固定膜上的固定位置，信号检测方法等，可以将本发明的免疫层析试验片存储/安装并使用在合适的容器(外壳)中，以这种方式存储/安装的状态称为“装置”。
(其他)
在本说明书中，“多孔膜”可以表示为“固相”，并且物理或化学地将抗原或抗体支持在多孔膜上，或支撑状态可以表示为“固定”、“固定化的”、“固相化”、“敏化”或“吸附”。
(试样)
在本发明的检测方法中，包括分析物的“试样”是指诸如血液、尿液、痰、唾液、鼻腔分泌物、鼻腔拭子、咽喉拭子、其他体液和粪便的生物样品。生物样品可以直接用作试样，并且用稀释剂适当稀释或提取和/或过滤的样品也包括在本发明的试样中。血液试样的实例包括全血、红细胞、血浆、血清等。
血液试样还包括通过血液收集管收集的试样，在血液收集时向其中添加了抗凝剂(例如EDTA或肝素)。
(分析物)
本发明的分析物是存在于生物试样中的物质，例如血液(全血)、红细胞、血清、血浆、尿液、唾液或痰，并且其实例包括：与炎症有关的标志物，例如CRP(C反应性蛋白)、IgA、IgG和IgM；凝血或纤维蛋白溶解标志物，例如纤维蛋白降解产物(例如D-二聚体)、可溶性纤维蛋白、TAT(凝血酶-抗凝血酶复合物)和PIC(纤溶酶-纤溶酶抑制剂复合物)；与循环有关的标志物，例如氧化的LDL、BNP(脑利钠肽)、H-FABP(心脏脂肪酸结合蛋白)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)；代谢相关标志物，如脂联蛋白；肿瘤标志物，例如CEA(癌胚抗原)、AFP(甲胎蛋白)、CA19-9、CA125和PSA(***特异性抗原)；与传染病相关的标志物，例如HBV(乙型肝炎病毒)、HCV(丙型肝炎病毒)、沙眼衣原体和***；过敏原特异性IgE(免疫球蛋白E)、激素和药物。其中，更优选与将全血用作试样的强烈愿望相关的D-二聚体、CRP、BNP、H-FABP、cTnI等。
(本发明中使用的抗体)
本发明中使用的针对分析物的抗体不受制备方法的限制，只要该抗体与分析物特异性反应即可，并且可以是多克隆抗体或单克隆抗体。通常，可以根据Kohler和Milstein的方法(参见Nature，Vol.256，p.495(1975))，通过使用分析物作为免疫原免疫的动物的脾细胞与相同物种的骨髓瘤细胞之间的细胞融合来制备产生抗体的杂交瘤。
本发明的抗体可以是完整的抗体分子，也可以是具有抗原-抗体反应活性的抗体的功能性片段，并且可以是通过动物的免疫步骤获得的抗体，以及通过基因重组技术获得的抗体，或嵌合抗体。抗体的功能片段的实例包括F(ab′)2或Fab′，并且这些功能片段可通过用蛋白水解酶(例如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)处理如上所述获得的抗体来产生。
当在测定方法中使用的抗体为单克隆抗体时，标记物上固定的抗体(第一抗体)与多孔膜上固定的抗体(第二抗体)之间的关系中，当第一抗体的表位为单价时，所使用的第二抗体的表位与第一抗体的表位不同，当第一抗体的表位为多价时，所使用的第二抗体的表位可以与第一抗体的表位相同或不同。
(试剂盒)
利用本发明的免疫层析试验片的检测试剂盒可以是包括免疫层析试验片的试剂盒，该免疫层析试验片至少包括样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，免疫层析试验片的特征在于，检测区域包括抗体以及选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
检测试剂盒可以包括检测所需的另一种试剂(例如，包括缀合物的检测试剂)、试样稀释剂、试管、用于收集粪便的棉签、说明书、用于存储试验片的壳体等。
在下文中将描述本发明的具体实施例；然而，这些仅出于说明的目的，并且本发明不限于此。
实施例
[实施例1]
在检测区域中改变与抗分析物抗体共存的糖的浓度和类型以及抗体浓度，以比较每个空白反应和特异性反应。
1.本发明的免疫层析检测装置的制作
1)胶体金标记的抗cTnI单克隆抗体(抗cTnI抗体缀合物)的制备
(i)胶体金溶液的制备
向加热至93℃的5000mL纯化水中，添加10mL的7％(w/v)柠檬酸三铵水溶液，并通过搅拌混合。随后，添加10mL的5％(w/v)四氯金(III)酸水溶液，并在搅拌下反应10分钟，然后将反应溶液煮沸。随后，将该溶液在冰水中冷却以制备平均粒径为60nm的胶体金溶液。
用纯化水将该平均粒径为60nm的胶体金溶液调整为在胶体金的最大吸收波长下具有1OD/mL的吸光度。
(ii)抗cTnI抗体缀合物的制备
向200mL 1OD/mL胶体金溶液(pH 8.0)中，加入用2mM Tris-盐酸缓冲溶液(pH7.0)稀释至20μg/mL的10mL抗cTnI单克隆抗体，并在室温下搅拌10分钟。向胶体金和抗体的混合液中，添加10mL的含有0.5％(w/v)的Neo Protein Saver(NPS，Toyobo，No.NPS-301)的纯化水，并在室温下搅拌5分钟。随后，将混合物在10℃下以11900×g离心45分钟。除去上清液后，将10mL的0.2％(w/v)的NPS水溶液添加至获得的沉淀物中以悬浮缀合物，从而获得抗cTnI抗体缀合物。
(iii)用于对照线的胶体金标记的KLH(KLH缀合物)的制备
向200mL的1OD/mL胶体金溶液中，加入10mL溶于2mmol/L磷酸盐缓冲液至620μg/mL的KLH(由Sigma制造)，在室温下搅拌10分钟。向胶体金和KLH的混合液中，添加10mL的10％牛血清白蛋白(BSA)水溶液，并在室温下搅拌5分钟。随后，将混合物在10℃下离心45分钟，在去除上清液之后，将1mL的缀合物稀释缓冲液添加至获得的沉淀物中以悬浮缀合物，从而获得KLH缀合物。
2)缀合物垫的制作
通过将3OD/mL的抗cTnI抗体缀合物，0.75OD/mL的KLH缀合物，0.5％LipidureBL-1301、0.25mg/ml Heteroblock，2.4％乳糖，2.0％NPS，20mM MOPS(pH值7.2)，基于总量的1/6量的缀合物稀释缓冲液(Scripps)混合来制备缀合物溶液，将具有特定体积的玻璃纤维垫(Merck Millipore)用相对于其体积的1.2倍的该溶液浸渍。通过在70℃的干燥炉中加热45分钟来干燥垫，以获得缀合物垫。
3)抗cTnI单克隆抗体固定膜的制作
对于测试线，制备了10mM磷酸盐缓冲溶液(包括0.09％NaN3)(pH8.0)，该溶液包括如图所示浓度(最终浓度)的糖和抗体。
对于对照线，制备了磷酸缓冲盐溶液，其包含终浓度为2mg/mL的兔抗KLH多克隆抗体(由Bethyl制备)和终浓度为2.5％的蔗糖。
在硝酸纤维素膜短边的一端内侧的位置，将抗cTnI单克隆抗体(Hi-Flow plusHF180，Merck Millipore)设置为1μL/cm，并使用免疫层析分配器“XYZ3050”(BIO DOT)以垂直于试验片长度方向(标本溶液的展开方向)的线形形式施加，以形成测试线。类似地，从测试线的位置以约4mm的间隔施加抗KLH多克隆抗体，以形成对照线。将该膜在烘箱中在70℃下干燥45分钟以获得抗体固定膜。
4)样品垫的制作
通过调节包括0.5％乳糖和2％聚凝胺的20mM MOPS(pH 7.2)获得样品垫预处理溶液。
将玻璃纤维垫(Lydall)切成合适的尺寸，用对于垫体积1.5倍量的样品垫预处理溶液浸渍，并在70℃的干燥炉中干燥45分钟，然后用作样品垫。
5)免疫层析试验片的制作
将抗体固定多孔膜固定在塑料粘合(a)上，布置施加部分使得展开上游侧的抗cTnI抗体(c)后面是抗KLH抗体(d)，然后将血细胞分离膜(第三垫)(e)安装在该膜上。随后，布置并安装在2)中制造的缀合物垫(f)；将4)中制造的样品垫(g)布置并安装成与缀合物垫重叠；将吸收垫(h)布置并安装在相对侧的一端。通过切成具有以这种方式相互重叠的组成元素的结构，制造了免疫层析试验片。在检测时，试验片可以以免疫层析测试检测装置的形式存储在特殊的塑料外壳(具有样品添加窗口部分和检测窗口部分，图3中未示出)中/安装在特殊的塑料外壳上。图3示出了免疫层析试验片的示意性构造图。
2.通过免疫层析法检测或测量
从如上所述创建的免疫层析测试装置的样品施加窗口中，将120μL包含1000pg/mL心肌肌钙蛋白I(cTnI)的血浆试样溶液施加至样品施加区域，并在15分钟后，使用免疫层析读取器“Rapid Pia”(注册商标，Sekisui Medical Co.，Ltd.)测量测试线的显色量(信号吸光度)。
对于不包含心脏肌钙蛋白I(cTnI)的血浆标本溶液，以相同的方式测量显色量(空白吸光度)。结果示于图1。S/N(信号吸光度/空白吸光度)比的计算结果示于图2。
3.结果
通过使还原性单糖和二糖(即果糖、麦芽糖和葡萄糖)与抗体共存，在保持分析物的测量灵敏度的同时，空白吸光度值显著降低。S/N比也有所提高。另一方面，通过使没有还原性的二糖海藻糖与抗体共存，没有观察到改善。
关于常规地使用的同样是没有还原性的二糖蔗糖，即使当浓度增加到3.8％或5.0％时，降低空白值的效果也很小。尽管可以通过将抗体浓度从3.0mg/mL降低至1.7、1.2或0.8mg/mL来降低空白值，但分析物的测量灵敏度也有所降低，并且未观察到S/N值的改善。
从以上发现，通过使还原性单糖和还原性二糖与检测抗体共存，可以在保持与分析物的特异性反应的恒定灵敏度的同时，将空白值保持在较低水平，并且可以改善S/N比。
工业适用性
根据本发明的免疫层析试验片，其至少具有样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中该检测区域的抗体与特定糖共存，在保持分析物的检测灵敏度的同时，可以减少空白反应导致的显色。因此，在免疫层析检测方法中，在目视测定的情况下，可以消除导致假阳性的原因以进行准确的测定，并且在通过光学装置进行测定的情况下，可以提高检测灵敏度。
参考标记列表
(a)塑料粘合片
(b)抗体固定膜
(c)抗cTnI抗体(测试线)
(d)抗KLH抗体(对照线)
(e)血细胞分离膜(第3垫)
(f)缀合物垫
(g)样品垫
(h)吸收垫

Claims (13)

1.一种免疫层析试验片，至少包括：样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中，所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
2.根据权利要求1所述的免疫层析试验片，包括：
作为样品施加区域的样品垫，以及
缀合物垫，其包含用胶体金标记的抗分析物抗体。
3.根据权利要求1或2所述的免疫层析试验片，其中施加到所述样品施加区域的试样是血浆或全血。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫层析试验片，其中所述还原性单糖是葡萄糖或果糖，并且其中所述还原性二糖是麦芽糖。
5.一种免疫层析检测试剂盒，包括：根据权利要求1至4中任一项所述的免疫层析试验片。
6.一种免疫层析检测方法，所述方法包括使用以下试验片：
一种免疫层析试验片，至少包括样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中
所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
7.根据权利要求6所述的免疫层析检测方法，其中所述试验片包括作为样品施加区域的样品垫，以及
缀合物垫，其包含用胶体金标记的抗分析物抗体。
8.根据权利要求6或7所述的免疫层析检测方法，其中施加到所述样品施加区域的试样是血浆或全血。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的免疫层析检测方法，其中所述还原性单糖是葡萄糖或果糖，并且其中所述还原性二糖是麦芽糖。
10.一种免疫层析试验片的制造方法，至少包括以下步骤：
(a)将包含抗分析物抗体、选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖以及缓冲溶液的抗体施加液置于多孔膜；以及
(b)干燥所述多孔膜；
其中所述抗体施加液的pH为7.0至8.0。
11.根据权利要求10所述的免疫层析试验片的制造方法，其中所述还原性单糖是葡萄糖或果糖，并且其中所述还原性二糖是麦芽糖。
12.根据权利要求10或11所述的免疫层析试验片的制造方法，其中缓冲溶液中糖的浓度为2.5％至5％。
13.一种在免疫层析检测方法中抑制空白显色的方法，所述方法包括使用以下试验片：
一种免疫层析试验片，至少包括样品施加区域、展开区域和固定有抗体的检测区域，其中
所述检测区域包括所述抗体和选自由还原性单糖和还原性二糖组成的组的一种或多种糖。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7498556B2 (ja) 2019-12-12 2024-06-12 デンカ株式会社 免疫測定方法及び免疫測定器具
CN112485433A (zh) * 2020-10-29 2021-03-12 海卫特(广州)医疗科技有限公司 血清淀粉样蛋白a免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法
JP7216949B1 (ja) * 2021-08-12 2023-02-02 積水メディカル株式会社 等電点９．５以上のタンパク質の免疫測定方法及びそれに用いる検体希釈液、並びにイムノクロマトグラフィーキット

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0302673A1 (en) * 1987-08-06 1989-02-08 Becton, Dickinson and Company System and process for a visible assay for analyte
US5484735A (en) * 1989-08-23 1996-01-16 Northwestern University Immunoassay of glycosylated proteins employing antibody directed to reductively glycosylated N-terminal amino acids
US5486452A (en) * 1981-04-29 1996-01-23 Ciba-Geigy Corporation Devices and kits for immunological analysis
JPH11153600A (ja) * 1997-11-21 1999-06-08 Fujirebio Inc 免疫測定用試験片及び該試験片を用いる測定法
CN106461651A (zh) * 2014-06-04 2017-02-22 田中贵金属工业株式会社 免疫学的测定试剂的前带现象的消除法
JP2018025426A (ja) * 2016-08-09 2018-02-15 積水メディカル株式会社 イムノクロマトグラフィー検出キット
CN108546602A (zh) * 2018-02-08 2018-09-18 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4371556B2 (ja) 2000-09-08 2009-11-25 積水化学工業株式会社 検査キット
CN102576019B (zh) * 2009-08-07 2015-06-17 亲和标记技术公司 免疫鉴定脑脊液的装置和方法
JP5992703B2 (ja) 2012-03-22 2016-09-14 田中貴金属工業株式会社 イムノクロマトグラフィー検出方法
WO2014051998A1 (en) * 2012-09-28 2014-04-03 Clontech Laboratories, Inc. Lateral flow assays for tagged analytes
JP6192374B2 (ja) * 2013-06-13 2017-09-06 旭化成株式会社 担体及び水溶性多糖類を含むイムノクロマト用展開液
WO2015183266A1 (en) * 2014-05-28 2015-12-03 Express Diagnostics Int'l., Inc. Ethyl glucuronide lateral flow test strips, immunoassays, devices and methods for detecting or measuring thereof
JP6738608B2 (ja) * 2016-01-22 2020-08-12 田中貴金属工業株式会社 クロマトグラフ媒体
GB2554454A (en) * 2016-09-29 2018-04-04 Sumitomo Chemical Co Lateral flow device

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5486452A (en) * 1981-04-29 1996-01-23 Ciba-Geigy Corporation Devices and kits for immunological analysis
EP0302673A1 (en) * 1987-08-06 1989-02-08 Becton, Dickinson and Company System and process for a visible assay for analyte
US5484735A (en) * 1989-08-23 1996-01-16 Northwestern University Immunoassay of glycosylated proteins employing antibody directed to reductively glycosylated N-terminal amino acids
JPH11153600A (ja) * 1997-11-21 1999-06-08 Fujirebio Inc 免疫測定用試験片及び該試験片を用いる測定法
CN106461651A (zh) * 2014-06-04 2017-02-22 田中贵金属工业株式会社 免疫学的测定试剂的前带现象的消除法
JP2018025426A (ja) * 2016-08-09 2018-02-15 積水メディカル株式会社 イムノクロマトグラフィー検出キット
CN108546602A (zh) * 2018-02-08 2018-09-18 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 化学发光免疫分析用清洗液及磁微粒化学发光免疫分析检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
郑健;叶青;朱平;富宁;: "海藻糖封闭液在ELISA体系中的应用", 中国实验诊断学, no. 05, 25 May 2007 (2007-05-25), pages 591 - 595 *

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Publication number Publication date
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