CN112851668A - Atr抑制剂及其在医药上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及式(I)所示的一种新型化合物，其具有ATR调节活性。本发明还涉及这些化合物的制备方法以及包含其的药物组合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种新型化合物，其具有ATR调节活性。本发明还涉及这些化合物的制备方法以及包含其的药物组合物。
背景技术
肿瘤细胞中高效的DNA损伤监测和修复***是产生癌症化疗耐药性的重要原因之一。DNA损伤应答机制(DNA damage response，DDR)具有复杂的信号调控通路，可以与细胞周期检查点相互作用的同时激活合适的DNA修复机制。DDR检查点激酶能够在复制或有丝***之前为细胞提供DNA损伤修复时间以维持基因组完整性；如果DNA损伤不能修复，则可能引发细胞凋亡反应。
共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白(ataxia-telangiectasia–mutated and rad3-related protein kinase，ATR)是一种DDR通路的主要调控因子，能够被单链DNA激活。单链DNA通常由DNA双链断裂(DSB)产生，或者产生于化疗或癌基因激活导致的复制压力。ATR具有2644个氨基酸残基，N端为ATR相互作用蛋白结合结构域，具有激活ATR的功能；C端为下游蛋白磷酸化激酶结构域，可磷酸化靶蛋白如FANCI、WRN、CHK1等。
本发明将提供一种新型结构的ATR抑制剂，能够调节ATR蛋白活性，具有良好的抗肿瘤活性。
发明内容
本发明提供一种通式(I)所示的化合物，或其互变异构体、药用盐、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物：
其中，
X选自O、S或NR2；
R1选自
其中
未被取代或被C1-3烷基取代；
R3选自
R2、R4、R5或R6独立地选自氢、卤素、羟基、CN、氨基或C1-6烷基；
且当R1为
时，R3不为
一些实施方式中，式(I)中的R1取代基选自
一些实施方式中，式(I)中的X为-NR2，R2选自氢或C1-3烷基。
一些实施方式中，式(I)中的R4选自氢或C1-3烷基。
一些实施方式中，式(I)中的R5或R6独立地选自氢或C1-3烷基。
一些实施方式中，式(I)中的R6为甲基、
或
本发明进一步提供了一种化合物，其互变异构体或药用盐，其中，所述化合物选自：
1)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
2)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
3)3-(1H-咪唑-5-基)-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或3-(1H-咪唑-5-基)-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
4)7-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
5)7-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
6)7-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
7)5-(3-甲基吗啉)-7-(3-甲基噻吩-2-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或5-((R)-3-甲基吗啉)-7-(3-甲基噻吩-2-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
8)3-(5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)吡啶-2-胺或3-(5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)吡啶-2-胺；
9)7-(2-氟吡啶-3-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(2-氟吡啶-3-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
10)5-(3-甲基吗啉)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或5-((R)-3-甲基吗啉)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
11)7-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
12)7-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
13)(1-(5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-基)甲醇或(1-(5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-基)甲醇；
15)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异噻唑并[4,5-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异噻唑并[4,5-b]吡啶；或
16)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异恶唑并[4,5-b]吡啶或(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异恶唑并[4,5-b]吡啶；或
17)1-甲基-4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇或(R)-1-甲基-4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇；或
18)1-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)环己烷-1-醇或(R)-1-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)环己烷-1-醇；或
19)4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇或(R)-4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇；或
20)3-甲基-4-(1-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉或(R)-3-甲基-4-(1-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉；或
21)3-甲基-4-(1-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉或(R)-3-甲基-4-(1-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉。
本发明还提供了一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含治疗有效量的至少一种式(I)所示的化合物和至少一种药学上可接受的辅料。
本发明进一步提供了一种药物组合物，其特征在于，所述的治疗有效量的至少一种式(I)所示的化合物和药学上可接受的辅料的质量百分比为0.0001:1-10。
本发明提供了结构式(I)所示化合物或药物组合物在制备药物中的应用。
本发明进一步提供了所述应用的优选技术方案：
作为优选，所述应用为制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。
作为优选，所述应用为制备用于治疗由ATR介导的疾病的药物的应用。作为优选，所述疾病是癌症。
作为优选，所述癌症选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、骨癌、膀胱癌、子***、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、细支气管肺泡癌、卵巢癌、食管癌、结肠直肠癌、肝癌、头颈部肿瘤、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、***癌、甲状腺癌、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌、胆管癌、或白血病。
本发明还提供了一种治疗和/或预防由ATR介导的疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物或含其的药物组合物。
除非另有说明，所述结构通式中使用的一般化学术语具有通常的含义。
例如，除非另有说明，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
在本发明中，除非另有说明，“烷基”包括直链或支链的一价饱和烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。类似的，“基1-8烷基”中的“1-8”是指包含有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链或支链形式排列的基团。
“烷氧基”是指前述的直链或支链烷基的氧醚形式，即-O-烷基。
在本发明中，“一”、“一个”、“该”、“至少一个”和“一个或多个”可互换使用。因此，例如，包含“一种”药学上可接受的赋形剂的组合物可以被解释为表示该组合物包括“一种或多种”药学上可接受的赋形剂。
术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括碳环的原子的单环或稠环芳香基团。优选芳基为6到10元的单环或双环的芳香环基团。优选为苯基、萘基。最优选为苯基。
术语“杂环基”，在本发明中，除非另有说明，是指由碳原子和1-3个选自N、O或S的杂原子组成的未取代或取代的3-8元稳定单环***，其中氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，并且氮杂原子可以选择性地被季铵化。该杂环基可以被连接到任何的杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。这些杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代哌啶基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜基和四氢恶二唑基。
术语“杂芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的稳定的5元或6元单环芳族环***或未取代或取代的9元或10元苯并稠合杂芳族环***或双环杂芳族环***，其由碳原子和1-4个选自N、O或S的杂原子组成，并且其中所述氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，所述氮杂原子可以选择性地被季铵化。杂芳基可以连接在任何杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、***基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并***基腺嘌呤、喹啉基或异喹啉基。
术语“环烷基”是指具有3-10个碳原子的环状饱和烷基链，例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
术语“取代的”是指基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限于卤素(F、Cl、Br或I)、C1-8烷基、C3-12环烷基、-OR1、-SR1、＝O、＝S、-C(O)R1、-C(S)R1、＝NR1、-C(O)OR1、-C(S)OR1、-NR1R2、-C(O)NR1R2、氰基、硝基、-S(O)2R1、-O-S(O2)OR1、-O-S(O)2R1、-OP(O)(OR1)(OR2)；其中R1和R2独立地选自-H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基。在一些实施例中，取代基独立地选自包含-F、-Cl、-Br、-I、-OH、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、-SCH3、-SC2H5、甲醛基、-C(OCH3)、氰基、硝基、-CF3、-OCF3、氨基、二甲基氨基、甲硫基、磺酰基和乙酰基的基团。
取代烷基的实例包括但不限于2,3-二羟基丙基、2-氨基乙基、2-羟乙基、五氯乙基、三氟甲基、甲氧基甲基、五氟乙基、苯基甲基、二恶茂基甲基和哌嗪基甲基。
取代烷氧基的实例包括但不限于2-羟基乙氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2-甲氧基乙氧基、2-氨基乙氧基、2,3-二羟基丙氧基、环丙基甲氧基、氨基甲氧基、三氟甲氧基、2-二乙基氨基乙氧基、2-乙氧基羰基乙氧基、3-羟基丙氧基。
术语“药学上可接受的盐”是指从药学上可接受的无毒的碱或酸制备的盐。
当式(I)所示化合物存在互变异构体时，除非特别声明，本发明包括任何可能的互变异构体和其药学上可接受的盐，及它们的混合物。
当式(I)所示化合物用较重的同位素(例如氘)替代可能提供某些治疗优势，这是由于更大的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或减少剂量要求。
当式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐存在溶剂化物或多晶型时，本发明包括任何可能的溶剂化物和多晶型。形成溶剂化物的溶剂类型没有特别的限定，只要该溶剂是药学上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等类似的溶剂都可以采用。
术语“组合物”，在本发明中，是指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接地由指定量的各指定成分的组合生产的任何产品。因此，含有本发明的化合物作为活性成分的药物组合物以及制备本发明化合物的方法也是本发明的一部分。此外，化合物的一些结晶形式可以多晶型存在，并且此多晶型包括在本发明中。另外，一些化合物可以与水(即水合物)或常见的有机溶剂形成溶剂化物，并且此类溶剂化物也落入本发明的范围内。
制剂配方还可以包括，适当的，一种或多种附加的辅料组分，如稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂和防腐剂(包括抗氧化剂)等。进一步地，其他的辅药还可以包括调节药物与血液等渗压的促渗剂。包含式(I)所示化合物，或其药学上可接受的盐的药物组合物，可以制备成粉剂或浓缩液的形式。
一般情况下，治疗上述所示的状况或不适，药物的剂量水平约为每天0.01mg/kg体重到150mg/kg体重，或者每个病人每天0.5mg到7g。例如，炎症、癌症、牛皮癣、过敏/哮喘、免疫***的疾病和不适、中枢神经***(CNS)的疾病和不适，有效治疗的药物剂量水平为每天0.01mg/kg体重到50mg/kg体重，或者每个病人每天0.5mg到3.5g。
但是，可以理解，可能需要比上述那些更低或更高的剂量。任何特定病人的具体剂量水平和治疗方案将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、综合健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、***率、药物联用的情况和接受治疗的特定疾病的严重程度。
本发明的典型化合物包括，但不限于表1所示化合物：
表1
具体实施方式
为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。
除非另有说明，本发明所有的一部分和百分比均按重量计算，所有温度均指摄氏度。
实施例中使用了下列缩略语：
AcOH：乙酸；
DCM：二氯甲烷；
DCE：二氯乙烷；
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；
LCMS：液相色谱-质谱；
MeOH：甲醇；
min：分钟；
Pd/C：钯碳催化剂；
PE：石油醚；
Py.：吡啶；
PyBroP：三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐；
PMBNH2：对甲氧基苄胺；
PE:EtOAc：石油醚/乙酸乙酯；
POCl3：三氯氧磷；
PdCl2(PPh3)2：双(三苯基膦)氯化钯；
TEA：三乙胺；
TFA：三氟乙酸；
THF：四氢呋喃。
中间体(R)-3-氯-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐的制备
步骤1：中间体M2的制备
将化合物4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(5g)溶于MeOH(10mL)中，加入Pd/C(1.24g,10％purity,with 50％water)，抽换氢气3次后，保持氢气氛下室温反应24hrs。LCMS检测反应完全。将反应液直接过滤，DCM(100ml*3)，甲醇(100ml*3)依次洗涤，滤液旋干后得4.1g灰白色固体，即中间体M2。
LC-MS[M+H+]＝142。
步骤2：中间体M3的制备
氮气氛下，将(R)-3-甲基-4-乙酰基吗啉(12.78g)溶于无水DCE(10ml)中，室温下下加入三氯氧磷(16.43g)，保持室温搅拌反应0.5h后，加入4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(4.1g)，然后置于80℃下搅拌反应4hrs。LCMS检测反应完毕。反应体系先旋去大部分三氯氧磷，加入DCM(200mL)，水(200mL)，置于冰浴中，搅拌下加入缓慢加入碳酸钠调节pH至8-9，DCM(500mL*10)分液后，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物柱层析(DCM:MeOH＝20:1)纯化得黄色发泡状固体5.5g，即中间体M3。
LC-MS[M+H+]＝267。
步骤3：中间体M4的制备
氮气氛下，将化合物4-[(E)-1-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]亚乙基氨基]-1H-吡唑-5-羧酸甲酯(3.6g)溶解于无水DMF(10mL)中，置于冰浴中，分批加入NaH(1.08g，60％purity)，加入完全后恢复室温搅拌三十分钟，加入PMBCl(1.57g，90％purity)，继续室温搅拌反应1hrs。LCMS检测反应完毕，逐滴加入水淬灭过量的NaH，随后加入EA(500mL)稀释反应液，多次水(50mL*3)洗除去DMF，有机相无水Na2SO4干燥后减压浓缩，残余物柱层析(DCM:MeOH＝100:1-20:1)纯化得4.1g灰白色固体，即中间体M4。
LC-MS[M+H+]＝387。
步骤4：中间体M5的制备
氮气氛下，将化合物(R，E)-1-(4-甲氧基苄基)-4-((1-(3-甲基吗啉代)亚乙基)氨基)-1H-吡唑-5-羧酸甲酯(4.1g)溶解于无水DMF(25mL)，中，加入叔丁醇钾(2.98g)，50℃下反应1hrs。LCMS检测反应完毕，加1N稀盐酸调节pH至6-7，混合体系加DCM(200ml)稀释，多次水(25mL*3)洗除去DMF,有机相无水Na2SO4干燥，减压浓缩。得粗产物直接下一步。
LC-MS[M+H+]＝355。
步骤5：中间体M6的制备
将化合物乙基(R)-1-(4-甲氧基苄基)-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-醇(步骤4粗产物，未经分离)溶解于DCM(50ml)中，室温下加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(5.35g)，DIPEA(3.87g),室温搅拌反应2hrs，LCMS检测反应完毕，旋去大部分DCM，残余物柱层析(PE:EtOAc＝20:1-1:1)纯化得黄色固体2.6g，即中间体M6。
LC-MS[M+H+]＝487。
步骤6：中间体M7的制备
将(R)-1-(4-甲氧基苄基)-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸酯(2.6g)溶于TFA(15mL)中，80℃回流反应3hrs，LCMS检测反应完毕，旋去大部分TFA，反应剩余物加DCM(100mL)稀释，加饱和碳酸氢钠调节减压pH至8-9，分液后合并有机相，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得2.5g黄色固体，即中间体M7。
LC-MS[M+H+]＝377。
步骤7：中间体M8的制备
将(R)-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐(0.77g)溶解于DMF(10mL)中，加入NCS(0.34g)，50℃下反应1.5hrs。LCMS检测反应完毕。反应液加EtOAc(200mL)稀释，多次水(25mL*3)洗除去DMF，有机相无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物柱层析(PE:EtOAc＝10:1)纯化得黄色固体590mg，即中间体M8。
LC-MS[M+H+]＝347。
中间体(R)-4-(3-氯-1-甲基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吗啉的制备
步骤1：中间体S1的制备
氮气氛下，将(R)-3-甲基-4-乙酰基吗啉(1.85g)溶于无水DCE(10ml)中，室温下下加入三氯氧磷(3.56g)，保持室温搅拌反应0.5hrs后，加入4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.0g)，然后置于80℃下搅拌反应4hrs。LCMS检测反应完毕。反应体系先旋去大部分三氯氧磷，加入DCM(200mL)，水(50mL)，置于冰浴中，搅拌下加入缓慢加入碳酸钠调节pH至8-9，DCM(200mL*5)分液后，无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得粗产物2.4g，即中间体S1，直接下一步。
LC-MS[M+H+]＝281。
步骤2：中间体S2的制备
氮气氛下，将上一步化合物(R，E)-1-甲基-4-((1-(3-甲基吗啉代)亚乙基)氨基)-1H-吡唑-5-羧酸甲酯粗产品(步骤1粗产物，未经分离)溶解于无水DMF(25mL)，中，加入叔丁醇钾(1.68g)，50℃下反应1hrs。LCMS检测反应完毕，加1N稀盐酸调节pH至6-7，混合体系加DCM(300ml)稀释，多次水(25mL*3)洗除去DMF,有机相无水Na2SO4干燥，减压浓缩。得粗产物直接下一步。
LC-MS[M+H+]＝249。
步骤3：中间体S3的制备
将上一步化合物(R)-1-甲基-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-醇(步骤2粗产物，未经分离)溶解于DCM(25ml)中，室温下加入1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(3.22g)，DIPEA(2.33g),室温搅拌反应3hrs，TLC检测反应完毕，旋去大部分DCM，残余物柱层析(PE:EtOAc＝20:1-1:1)纯化得黄色固体0.36g，即中间体S3。
LC-MS[M+H+]＝381。
步骤4：中间体S4的制备
将(R)-1-甲基-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐(0.25g，657.30umol)溶解于DMF(8mL)中，加入NCS(175.5mg)，50℃下反应3hrs。LCMS检测反应完毕。反应液加EA(100mL)稀释，多次水(20mL*4)洗除去DMF，有机相无水Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物柱层析(PE:EtOAc＝10:1)纯化得黄色固体150mg，即中间体S4。
LC-MS[M+H+]＝415。
步骤5：中间体S5的制备
将(R)-3-氯-1-甲基-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐(90mg)，SPhos-Pd-G2(15.61mg)，磷酸钾(138.17mg)1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(47.40mg)称入5mLvial内，抽换氮气三次，氮气氛下加入预先经氮气鼓泡15分钟的Dioxane(3mL)，密闭后100℃搅拌反应3hrs。LCMS检测反应完毕，反应混合物直接过滤后干燥浓缩。残余物爬大板(PE:EtOAc＝1:1)纯化得黄色发泡状固体35mg。即中间体S5。
LC-MS[M+H+]＝347。
实施列1：化合物7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
步骤1：中间体M9的制备
将(R)-3-氯-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐(400mg)，SPhos-Pd-G2(72mg)，磷酸钾(0.64g)1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑(228mg)称入25mL内，抽换氮气三次，氮气氛下加入预先经氮气鼓泡15分钟的Dioxane/H2O(7mL：1mL)，密闭后100℃搅拌反应3hrs。LCMS检测反应完毕，反应混合物直接过滤后干燥浓缩。残余物柱层析(PE:EA＝1：1)纯化得黄色固体150mg。即中间体M9。
LC-MS[M+H+]＝333。
步骤2：中间体M10的制备
将中间体((R)-4-(3-氯-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吗啉(120mg)，1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(200.6mg)，SPhos-Pd-G2(25.95mg)，K3PO4(229.62mg)称入反应管内，抽换氮气三次后加入预先经氮气鼓泡脱氧后得Dioxane/水(2mL/0.4mL)，盖上盖子后，置于100℃油浴搅拌反应2hrs。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩，残余物爬大板(PE:EtOAc＝1:1)纯化得黄色发泡状固体110mg，即中间体M10。
LC-MS[M+H+]＝449。
步骤3：化合物1的制备
将(3R)-3-甲基-4-(7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-yl)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉(110mg)溶解于(MeOH)(2mL)中，加入2.5mL氯化氢水溶液(0.2M)。室温搅拌反应1hrs。LCMS检测反应完毕，反应混合物减压浓缩，残余物爬大板(DCM:MeOH＝20:1)纯化得黄色固体35.4mg，即化合物1。
LC-MS[M+H+]＝365。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.18(br s,1H),7.64(br s,2H),7.09(s,1H),7.07(s,1H),6.70(s,1H),4.53-4.45(m,1H),4.08(d,J＝10.0Hz,1H),4.00(d,J＝10.0Hz,1H),3.90(s,3H),3.80-3.67(m,2H),3.55(t,J＝15.0Hz,1H),3.19(d,J＝10.0Hz,1H),1.20(d,J＝5.0Hz,3H).
实施例2:化合物7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂(1-叔丁氧羰基吡咯-2-基)硼酸合成。
LC-MS[M+H]+＝364。
实施例3：化合物3-(1H-咪唑-5-基)-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂(1-四氢吡喃-2-基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)咪唑合成。
LC-MS[M+H]+＝365。
实施例4：化合物7-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂1,5-二甲基-1H-吡唑-4-硼酸频哪醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝379。
实施例5：化合物7-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂3-甲基吡唑-4-硼酸频那醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝379。
实施例6：化合物7-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂1-甲基-1-H-咪唑-5-硼酸频那醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝365。
实施例7：化合物5-((R)-3-甲基吗啉)-7-(3-甲基噻吩-2-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例13的合成方法，以中间体M8和市售试剂3-甲基噻吩-2-硼酸酯合成。
LC-MS[M+H]+＝381。
实施例8：化合物3-(5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)吡啶-2-胺的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂2-氨基吡啶-3-硼酸频哪醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝377。
实施例9：化合物7-(2-氟吡啶-3-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例1的合成方法，以中间体M8和市售试剂2-氟嘧啶-3-硼酸频那醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝380。
实施例10：化合物5-((R)-3-甲基吗啉)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
步骤1：中间体M11的制备
将(R)-3-氯-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐(150mg)，2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶(82mg)，碳酸钠(0.12g)Pd(dppf)Cl2DCM(30.6mg)称入20mL三口瓶内，抽换氮气三次，氮气氛下加入预先经氮气鼓泡15分钟的DME/H2O(2mL：0.5mL)，密闭后100℃油浴反应1.5hrs。LCMS检测反应完毕，反应混合物直接过滤后干燥浓缩,柱层析(DCM:MeOH＝20：1)纯化得黄色固体125mg。即中间体M11。
LC-MS[M+H+]＝344。
步骤2：化合物10的制备
将中间体((R)-4-(3-氯-7-(6-甲基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吗啉(100mg)，1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(88.9mg)，SPhos-Pd-G2(20.91mg)，K3PO4(184.99mg)称入10-20ml微波管内，加入氮气鼓泡脱氧后得Dioxane/水(3.5mL/0.5mL)，盖上盖子后，置于100℃微波反应20min。LCMS检测反应完毕。反应液用乙酸乙酯稀释，过滤除去不溶物，滤液用2N的稀盐酸调节pH＝3,此时THP保护基团脱除，产物溶于水相中，乙酸乙酯萃取(3x 20ml)除去产物以外的杂质，水相再用15％的氢氧化钠溶液调节pH＝8，乙酸乙酯萃取(3x 20ml)，有机相分离，干燥，减压浓缩，粗品用(PE:EtOAc：DCM＝4:1:1)打浆得黄色固体35.3mg，即化合物10。
LC-MS[M+H+]＝376。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.12(s,2H),8.96(d,J＝29.9Hz,1H),7.91(s,1H),7.72(s,1H),7.35–7.27(m,1H),7.04(s,1H),6.86(d,J＝25.6Hz,1H),4.42(d,J＝6.0Hz,1H),4.12(d,J＝11.8Hz,1H),3.99(d,J＝12.9Hz,1H),3.88(s,2H),3.71(t,J＝11.6Hz,1H),3.42(t,J＝11.8Hz,1H),2.58(d,J＝11.9Hz,3H),1.33(t,J＝12.8Hz,3H).
实施例11：化合物7-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例10的合成方法,以中间体M8和市售试剂1-乙基吡唑-5-硼酸频哪醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝379。
实施例12：化合物7-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
依据上述实施例10的合成方法,以中间体M8和市售试剂1-异丙基吡唑-5-硼酸频哪醇酯合成。
LC-MS[M+H]+＝393。
实施例13：化合物(1-(5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-基)甲醇的合成
步骤1：中间体M12的制备
将(R)-3-氯-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基三氟甲磺酸盐(150mg)，哌啶-4-基甲醇(129mg)，5mL微波管内，100℃油浴反应4hrs。LCMS检测反应完毕，反应液用乙酸乙酯稀释，水洗，有机相分离，干燥，浓缩得中间体M12，粗品直接用于下一步反应。
步骤2：化合物13的制备
参考合成实施例11步骤2合成方法，以(R)-(1-(3-氯-5-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-基)甲醇和市售试剂1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯合成化合物13。
LC-MS[M+H]+＝398。
实施例14：化合物1-甲基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成
步骤1：中间体S6的制备
将中间体(R)-4-(3-氯-1-甲基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)-3-甲基吗啉(35mg)，1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(56.0mg)，SPhos-Pd-G2(7.2mg)，K3PO4(63.66mg)称入反应管内，抽换氮气三次后加入预先经氮气鼓泡脱氧后得Dioxane(2mL)，盖上盖子后，置于100℃油浴搅拌反应4hrs。LCMS检测反应完毕。反应液减压浓缩，残余物直接下一步。
LC-MS[M+H+]＝463。
步骤2：化合物14的制备
将(3R)-3-甲基-4-(1-甲基-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉(上一步粗产品)溶解于(MeOH)(5mL)中，加入2.5mL氯化氢水溶液(2N)。室温搅拌反应1h。LCMS检测反应完毕，反应混合物减压浓缩，残余物爬大板(DCM:MeOH＝30:1)纯化得黄色固体22.0mg，即化合物14。
LC-MS[M+H+]＝379。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.02(br s,1H),7.68(br s,1H),7.64(s,1H),7.06(s,2H),6.06(s,1H),4.54-4.43(m,1H),4.07(d,J＝10.0Hz,1H),3.99(d,J＝10.0Hz,1H),3.75(d,J＝11.0Hz,1H),3.72(s,3H),3.69(d,J＝11.4Hz,1H),3.56(s,3H),3.58-3.51(m,1H),3.18(t,J＝12.0Hz,1H),1.18(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例17：化合物17的合成
步骤1：化合物S8的合成
氮气氛围下，将S7B(1.85g)溶于无水DCE(10mL)中，室温下加入三氯氧磷(3.56g)，保持室温反应0.5小时后加入S7A(1.0g),然后80℃下反应4h。LCMS检测反应完毕。冷却至室温，反应体系先旋去大部分三氯氧磷，加入DCM(200mL),水(50mL),冰浴下向反应液中滴加碳酸钠,调节pH至9，DCM萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品2.4g直接用于下一步，即中间体S8。
步骤2：化合物S9的合成
氮气氛围下，将化合物S8溶解于无水DMF(25mL)中，加入叔丁醇钾(1.68g),50℃反应1h。LCMS检测反应完全，加1N稀盐酸调节PH至6-7，混合体系加DCM(300mL)稀释，多次水洗除去DMF，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品1.3g直接用于下一步，即中间体S9。
步骤3：化合物S10的合成
将化合物S9(1.3g)和三溴氧磷(10g)加入到10mL反应瓶中，反应1h。100℃反应18h，LCMS检测反应完全，降至室温，将反应液加入到冷却的冰水(20mL)中，向反应液中滴加碳酸钠,调节pH至9，DCM萃取，柱层析分离产物(DCM/EA＝1:1),得黄色固体0.6g，即化合物S10。
步骤4：化合物17-1的合成
氮气氛围下，50mL三口瓶中加入化合物S10(400mg)，溶于无水THF(10mL)中，-78℃下滴加正丁基锂(1.21mL),保温反应0.5小时后加入环己酮(190mg)，反应0.5小时后停止反应。LCMS检测有产物生成，将反应液用饱和氯化铵溶液淬灭，用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品经过反相色谱柱层析分离得产物17-1(65mg)。
步骤5：化合物17-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物17-1(65mg)，溶于无水乙腈(3mL)中，室温下滴加NBS(35mg),保温反应5min,LCMS检测反应完全。用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产17-2(53mg)直接用于下一步。
步骤6：化合物17-3的合成
25mL三口瓶中加入化合物17-2(53mg),1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(72mg),磷酸钾(82mg)，SPhos-Pd-G2(9.2mg),100℃下反应3h,LCMS检测反应完全。用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产柱层析分离产物(DCM:EA＝3:1)得产品42mg，即化合物17-3。
步骤7：化合物17的合成
10mL单口瓶中加入化合物17-3(42mg)，溶于无水甲醇(1mL)，加入HCl/MeOH(0.2mL),搅拌1h,LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂，反相色谱柱层析分离产物得白色固体26.8mg，即化合物17(M+H+:397)1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.79(s,1H),7.07(s,1H),6.94(s,1H),4.50(s,3H),4.39–4.38(m 1H),4.12–4.09(m,1H),3.94–3.86(m,3H),3.72–3.71(m,1H),3.57–3.52(m,1H),2.15–1.69(m,9H),1.49–1.37(m,4H)。
实施例18：化合物18的合成
步骤1：化合物18-1的合成
氮气氛围下，50mL三口瓶中加入化合物S10(600mg)，溶于无水THF(10mL)中，-78℃下滴加正丁基锂(1.81mL),保温反应0.5小时后加入1-苄氧羰基-4-哌啶酮(674mg)，反应0.5小时后停止反应。LCMS检测有产物生成，将反应液用饱和氯化铵溶液淬灭，用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品经过柱层析(DCM:MeOH＝20:1)分离得产物18-1(130mg)。
步骤2：化合物18-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物18-1(130mg)，溶于无水乙腈(5mL)中，室温下滴加NBS(50mg),保温反应5min,LCMS检测反应完全。用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品经过柱层析(DCM:EA＝1:1)分离得产物18-2(120mg)。
步骤3：化合物18-3的合成
25mL三口瓶中加入化合物18-2(120mg),1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(95mg),磷酸钾(120mg)，SPhos-Pd-G2(12mg),100℃下反应3h,LCMS检测反应完全。用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品柱层析分离产物(DCM:EA＝1:1)得产品111mg。
步骤4：化合物18-4的合成
10mL单口瓶中加入化合物18-3(111mg)，溶于甲醇(5mL)，加入10％钯碳(10mg),搅拌1h,LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂得到粗产品86mg直接用于下一步。
步骤5：化合物18的合成
10mL单口瓶中加入化合物18-4(15mg)，溶于无水甲醇(1mL)，加入HCl/MeOH(0.1mL),搅拌1h,LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂，反相色谱柱层析分离产物得白色固体3.6mg，即化合物253201(M+H+:398)1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.53(s,1H),7.65(s,1H),7.08(s,1H),6.89(s,1H),4.45(s,3H),4.47–4.42(m,1H)4.06–3.96(m,2H),3.85–3.83(m,2H),3.69–3.59(m,3H),3.43–3.40(m,2H),3.35–3.32(m,1H),2.37–2.23(m,4H),1.28–1.25(m,3H)。
实施例19：化合物19的合成
步骤1：化合物19-1的合成
10mL单口瓶中加入化合物18-4(50mg)，溶于甲醇(5mL)，加入多聚甲醛(9mg),搅拌1h,低温下加入氰基硼氢化钠(32mg)LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂得到粗产品经过柱层析(DCM/MeOH＝20/1)得到产品16mg。
步骤2：化合物19的合成
10mL单口瓶中加入化合物19-1(16mg)，溶于无水甲醇(1mL)，加入HCl/MeOH(0.1mL),搅拌1h,LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂，反相色谱柱层析分离产物得白色固体4.9mg，即化合物19(M+H+:412)1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.72(s,1H),7.09(s,1H),6.89(s,1H),4.45(s,3H),4.47–4.43(m,1H),4.07–3.96(m,2H),3.87–3.82(m,2H),3.70–3.55(m,5H),3.39–3.33(m,1H),2.99(s,3H),2.42–2.35(m,4H),1.28(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例20：化合物20的合成
步骤1：化合物20-1的合成
氮气氛围下,25mL三口瓶中加入化合物S10(600mg),N-苄氧羰基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-硼酸频哪醇酯(1.0mg),磷酸钾(1.3g)，SPhos-Pd-G2(140mg),100℃下反应3h,LCMS检测反应完全。用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品柱层析分离产物(DCM:MeOH＝98:2)得产品532mg。
步骤2：化合物20-2的合成
25mL单口瓶中加入化合物20-1(500mg)，溶于无水乙腈(10mL)中，室温下滴加NBS(170mg),保温反应5min,LCMS检测反应完全。用EA(20mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品经过柱层析(DCM:EA＝1:1)分离得产物20-2(465mg)
步骤3：化合物20-3的合成
25mL三口瓶中加入化合物20-2(465mg),1-(2-四氢吡喃基)-1H-吡唑-5-硼酸频哪酯(500mg),磷酸钾(800mg)，SPhos-Pd-G2(110mg),100℃下反应3h,LCMS检测反应完全。用EA(40mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品柱层析分离产物(DCM:EA＝1:1)得产品310mg。
步骤4：化合物20的合成
10mL单口瓶中加入化合物20-3(15mg)，溶于无水甲醇(1mL)，加入HCl/MeOH(0.1mL),搅拌1h,LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂，反相色谱柱层析分离产物得白色固体4.2mg，即化合物20(M+H+:380)1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.67(s,1H),7.08(s,1H),6.79(s,1H),5.96(s,1H),4.43(d,J＝6.5Hz,1H),4.05–3.97(m,5H),3.86–3.79(m,4H),3.67–3.62(m,1H),3.49–3.25(m,5H),2.73(s,2H),1.25(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例21：化合物21的合成
步骤1：化合物21-1的合成
10mL单口瓶中加入化合物20-3(100mg)，溶于甲醇(5mL)，加入多聚甲醛(12mg),搅拌1h,低温下加入氰基硼氢化钠(68mg)LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂得到粗产品经过柱层析(DCM/MeOH＝20/1)得到产品57mg。
步骤2：化合物21的合成
10mL单口瓶中加入化合物21-1(57mg)，溶于无水甲醇(1mL)，加入HCl/MeOH(0.1mL),搅拌1h,LCMS检测反应完全。低温旋干溶剂，反相色谱柱层析分离产物得白色固体26.4mg，即化合物21(M+H+:394)1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.94(s,1H),7.20(s,1H),7.14(s,1H),7.06(s,1H),6.11(s,1H),4.45(s,1H),4.21–3.10(m,5H),4.01–3.69(m,6H),3.59–3.53(m,2H),3.09–2.85(m,5H),1.40(d,J＝5.3Hz,3H)。
药理实验
实施例A：激酶试验
(1)化合物稀释
用DMSO将化合物稀释至所需浓度，取100物稀转移至96孔板中，并进行3倍梯度稀释，一共需要10个浓度，另外取100，另外取共需要度，取,加入两个空孔，分别作为化合物空白和酶空白的对照。稀释完成后，每孔取40两个转移至384孔板，然后每孔取60nL转移至384孔检测板中。
(2)激酶反应
将ATR激酶加入1酶激酶缓冲溶液，配置成2酶激酶溶液，然后取10溶液加入上述384孔检测板，室温孵育10min，然后加入10后加入室温肽溶液，28℃反应特定时间，加入40特定终止缓冲液使激酶反应停止。
(3)数据读取和处理
用Caliper读取并收集数据，并将数据转换为抑制百分数：
抑制百分数＝(最大值-转化值)/(最大值-最小值)×小值)。
“最大值”为DMSO对照；“最小值”表示低对照组。
采用分析软件GraphPad Prism进行曲线拟合并得到IC50值。
所有实施例化合物都对ATR具有良好的抑制，实施例部分化合物数据见表2。
表2
| 化合物序号 | 化合物抑制ATR的IC<sub>50</sub>(nM) |
| 化合物1 | 1.3 |
| 化合物2 | 1.4 |
| 化合物10 | 3.3 |
| 化合物11 | 1.6 |
| 化合物12 | 3.1 |
| 化合物14 | 2.6 |
实施例B：细胞增殖试验(HGC27)
将HGC27细胞按800个/孔、13527铺96孔板。37℃、5％CO2孵育过夜。配制化合物系列梯度浓度溶液(控制DMSO终浓度均为0.5％)，分别向各孔细胞中加入15μL待测化合物溶液(化合物终浓度为30000、10000、3333.3、1111.1、370.4、123.5、41.2、13.7、4.6、0nM)，37℃，5％CO2孵育96h。孵育结束后，向各孔中加入50育结束后，向各孔中加入度为度溶液(工作液，震荡混匀后室温孵育10min，再用多功能酶标仪读取Luminescence发光值，将发光值读数转换为抑制百分数：
抑制百分数＝(最大值-读数)/(最大值-最小值)*100。
“最大值”为DMSO对照；“最小值”表示无细胞对照组。
用Graphpad Prism软件进行曲线拟合并得到IC50值。
所有实施例化合物都对HGC27细胞具有良好的抑制，实施例部分化合物对HGC27细胞抑制的IC50数据参见表2。
表3
| 化合物序号 | 抑制率(nM) |
| 化合物1 | 84 |
| 化合物10 | 101 |
| 化合物11 | 75 |
| 化合物12 | 89 |
| 化合物14 | 24 |
| 化合物17 | 238.8 |
| 化合物20 | 182.3 |
| 化合物21 | 175.5 |
虽然本发明已通过其实施方式进行了全面的描述，但是值得注意的是，各种变化和修改对于本领域技术人员都是显而易见的。这样的变化和修改都应该包括在本发明所附权利要求的范围内。
Claims (9)
1.一种通式(I)所示的化合物，或其互变异构体、药用盐、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物：
其中，
X选自O、S或NR2；
R1选自
其中
未被取代或被C1-3烷基取代；
R3选自
R2、R4、R5或R6独立地选自氢、卤素、羟基、CN、氨基或C1-6烷基；
且当R1为
时，R3不为
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R1取代基选自
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，所述X为-NR2，R2选自氢或C1-3烷基。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，所述R4选自氢或C1-3烷基。
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，所述R5或R6独立地选自氢或C1-3烷基。
6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其特征在于，所述R6为甲基、
7.一种化合物，其互变异构体或药用盐，其中，所述化合物选自：
1)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
2)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡咯-2-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
3)3-(1H-咪唑-5-基)-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或3-(1H-咪唑-5-基)-7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
4)7-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
5)7-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
6)7-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
7)5-(3-甲基吗啉)-7-(3-甲基噻吩-2-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或5-((R)-3-甲基吗啉)-7-(3-甲基噻吩-2-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
8)3-(5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)吡啶-2-胺或3-(5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)吡啶-2-胺；
9)7-(2-氟吡啶-3-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(2-氟吡啶-3-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
10)5-(3-甲基吗啉)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或5-((R)-3-甲基吗啉)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
11)7-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-乙基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
12)7-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶或7-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶；
13)(1-(5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-基)甲醇或(1-(5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-基)甲醇；
15)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异噻唑并[4,5-b]吡啶或7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异噻唑并[4,5-b]吡啶；或
16)7-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异恶唑并[4,5-b]吡啶或(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-((R)-3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)异恶唑并[4,5-b]吡啶；或
17)1-甲基-4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇或(R)-1-甲基-4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇；或
18)1-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)环己烷-1-醇或(R)-1-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-7-基)环己烷-1-醇；或
19)4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇或(R)-4-(1-甲基-5-(3-甲基吗啉)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-7-基)哌啶-4-醇；或
20)3-甲基-4-(1-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉或(R)-3-甲基-4-(1-甲基-3-(1H-吡唑-5-基)-7-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉；或
21)3-甲基-4-(1-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉或(R)-3-甲基-4-(1-甲基-7-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-3-(1H-吡唑-5-基)-1H-吡唑[4,3-b]吡啶-5-基)吗啉。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有治疗有效量的权利要求1-7任一项所述的化合物和至少一种药学上可接受的辅料。
9.权利要求1-7任一项所述的化合物或权利要求8所述的药物组合物在制备药物中的应用。
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