CN112839672A - 用于减少脂蛋白a形成以及治疗主动脉瓣硬化和主动脉狭窄的组合物和方法 - Google Patents

用于减少脂蛋白a形成以及治疗主动脉瓣硬化和主动脉狭窄的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

提供了减少脂蛋白(a)的形成的组合物和方法，从而降低主动脉狭窄或主动脉瓣硬化的风险。提供了能够结合载脂蛋白B100或载脂蛋白a的抗体或其抗原结合片段，其有效地阻止脂蛋白(a)的结合和组装，从而降低主动脉瓣狭窄或硬化的风险。

Description

用于减少脂蛋白A形成以及治疗主动脉瓣硬化和主动脉狭窄 的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请包括根据35 U.S.C.§119(e)对2018年7月2日提交的美国临时专利申请第62/693,218号和2018年7月12日提交的美国临时专利申请第62/697,353号的优先权要求，所述美国临时专利申请的整个内容在此通过引用并入。
序列表参考
作为名为“SequenceListing-070017-000029WO00_ST25”的文本文件(于2019年6月17日创建且大小为12,288字节)于2019年7月1日提交的序列表在此通过引入并入。
技术领域
本发明涉及用于减少脂蛋白(a)形成的干预和治疗。
背景技术
本文中的所有出版物均通过引用并入，其程度如同每个单独的出版物或专利申请具体地和单独地被指示为通过引用并入。以下描述包括在理解本发明中可能有用的信息。并不是承认本文提供的任何信息是现有技术或与目前受权利要求书保护的发明有关，也不是承认具体地或隐含地引用的任何出版物是现有技术。
冠状动脉疾病(CAD)是目前发达国家和发展中国家最常见的死亡和发病原因之一。大约20％的全球人群具有升高的Lp(a)，使其成为心血管疾病最普遍的独立遗传风险标志物之一。升高的Lp(a)导致心血管疾病风险以及主动脉瓣硬化(AVS)的加速恶化。主动脉瓣(AV)硬化(AVS)是AV疾病的一种形式，其影响美国估计1/4的65岁以上的人。老龄化人口和无创成像的更广泛使用正在增加AVS的发病率。AVS通常定义为无瓣叶漂移损害或显著跨瓣压力梯度的主动脉瓣叶钙化。其特征在于以钙沉积开始的逐渐进展，最终可能转变为主动脉狭窄(AS)，伴有左心室流出阻塞。
Lp(a)是一种血浆脂蛋白，其含有富含胆固醇的低密度脂蛋白(LDL)样颗粒，所述颗粒具有经由二硫键连接的一分子的载脂蛋白B100(ApoB100)和载脂蛋白(a)(apo(a))，如图1中所描绘。Lp(a)和LDL的结构之间的显著差异是糖蛋白apo(a)的存在，它赋予Lp(a)特征性性质并且在结构上类似于纤溶酶原(纤溶酶即纤维蛋白溶解酶的前体)。这使得Lp(a)结合纤维蛋白以及内皮细胞和单核细胞的膜蛋白质。Lp(a)的主要合成部位是肝细胞，肝细胞也合成ApoB100。在分泌后，Apo(a)然后与血浆LDL组装，通过LDL中的ApoB100与apo(a)中的环状结构域(kringle)IV之间二硫键的形成来形成Lp(a)。单独的载脂蛋白(a)基因型占血液中浓度的90％，因为它决定了apo(a)部分的合成速率以及大小。
由于Lp(a)类似于LDL和纤溶酶原两者，不受理论的约束，因此假设它可充当动脉粥样硬化和血栓形成之间的连接物。Lp(a)在纤维蛋白和细胞膜表面上的积聚以及纤溶酶生成的抑制有利于纤维蛋白和胆固醇在血管损伤部位的沉积。在从血浆转移至动脉内膜中后，Lp(a)比LDL保留得多得多，因为它通过apo(a)以及载脂蛋白B组分结合细胞外基质，从而导致动脉粥样硬化斑块。
Lp(a)是用于动脉粥样硬化和心血管疾病的独立遗传风险标志物，因为它与诸如胆固醇、LDL、HDL、甘油三酯或C反应蛋白(CRP)的其他心脏风险因素无关。影响血液中Lp(a)水平的因素很少。其血液水平经由载脂蛋白(a)基因(LPA)的变异以遗传方式确定。已基于载脂蛋白(a)的大小观察到Lp(a)的34种不同异形体，并且血浆Lp(a)的大于90％的个体间变异归因于载脂蛋白(a)基因，而70％与载脂蛋白(a)异形体的大小有关。Lp(a)水平在两岁时达到。给定个体中Lp(a)水平随时间的高度一致性指示Lp(a)与生活方式改变或任何已确定的心脏风险因素均无显著相关性。
升高的Lp(a)对心血管疾病(CVD)风险的管理提出了挑战。已发现，至少20％的全球人群的Lp(a)水平超过50mg/dL，这是CVD的重大风险因素。实际上，最近在500,000多名被转诊用于血浆脂质和其他CVD生物标志物分析的患者的大型数据库中报告，24％的水平>50mg/Dl。在915名具有特别高的CVD风险的患者的三级医疗中心数据库中，29.2％的水平>50mg/dL。利用当前的治疗方法，降低Lp(a)是非常有挑战性的，这对升高的Lp(a)的临床管理和对CVD中Lp(a)的机制病因学的理解构成了障碍。
升高的Lp(a)和氧化磷脂-apoB水平与较快的主动脉狭窄进展和对主动脉瓣置换的需要相关。几项临床研究已揭示，Lp(a)和其相关的氧化磷脂是钙化性主动脉瓣狭窄(CAVS)的因果性遗传风险因素。
因此，本发明的目的是提供用于降低Lp(a)的水平和/或治疗主动脉狭窄、主动脉瓣硬化或两者以及管理主动脉狭窄、主动脉瓣硬化或两者的风险的组合物和方法。
发明内容
结合组合物和方法对下面的实施方案和其方面进行描述和说明，其旨在为示例性和说明性的，而不限定范围。
提供了通过减少或抑制脂蛋白(a)(Lp(a))的形成来在有需要的受试者中治疗主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化、降低主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的严重性、减缓主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的进展或降低主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的可能性的方法。在一个实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的组合物，所述组合物含有能够结合载脂蛋白B100(ApoB100)或ApoB100的片段(例如，P45；SEQ ID NO:1)，从而减少ApoB100(作为LDL的组分)与apo(a)的缔合，并因此将Lp(a)的形成降低例如约10％、20％、30％、40％或50％。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在施用有效量的药物组合物之前选择具有升高水平的Lp(a)的受试者。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在施用之后和/或在施用之前测量受试者中Lp(a)的水平。在其他实施方案中，所述受试者被确定为在施用之后具有降低量的脂蛋白(a)(Lp(a))，确定为在施用之前具有升高量的Lp(a)，或两者都有。在一些方面，施用抗体或抗体片段之后Lp(a)的降低量或水平是相对于施用之前相同受试者的量，或相对于未患有主动脉瓣硬化或主动脉狭窄或已成功治疗了主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的受试者的量。在其他方面，Lp(a)的升高量或水平是相对于未患有主动脉瓣硬化或主动脉狭窄或已成功治疗了主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的受试者的量或水平。
还提供了用于降低受试者中脂蛋白(a)(Lp(a))的水平的方法，其包括向所述受试者施用能够结合ApoB100的P45片段的抗体或抗体片段。另外的实施方案提供了用于降低Lp(a)水平的方法中的受试者在施用之前被诊断为心血管疾病、或主动脉硬化和/或狭窄或显示出心血管疾病、或主动脉硬化和/或狭窄的症状。其他实施方案提供了用于降低Lp(a)水平的方法进一步包括在施用之前选择具有升高水平的Lp(a)的受试者。所述方法的另外方面包括在施用之后和/或施用之前测量受试者中Lp(a)的水平；或者确定受试者在施用之后具有降低量的脂蛋白(a)(Lp(a))。
另外的实施方案提供了任何所公开方法中的抗体或抗体片段包含一个、两个或三个选自由分别为SEQ ID No 2、3和4的HCDR 1(HCDR1)、HCDR 2(HCDR2)和HCDR 3(HCDR3)序列组成的组的重链互补决定区(HCDR)，以及一个、两个或三个选自由分别为SEQ ID No:5、6和7的LCDR 1(LCDR1)、LCDR 2(LCDR2)和LCDR 3(LCDR3)序列组成的组的轻链互补决定区(LCDR)。
在一个实施方案中，用于在有需要的受试者中治疗主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化、降低主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的严重性、减缓主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的进展或降低主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的可能性的方法包括施用有效量的奥替库单抗(orticumab)(也被称为BI-204；MLDL 1278A；RG 7418，抗oxLDL)，从而减少或抑制Lp(a)的形成。
还提供了用于鉴别减少载脂蛋白(a)与低密度脂蛋白(LDL)之间的结合并抑制脂蛋白(a)(Lp(a))形成的分子或化合物的方法，其包括使目标分子或化合物与LDL和载脂蛋白(a)的混合物接触；确定与不含所述目标分子或化合物的混合物相比，所述目标分子或化合物与所述混合物之间的所述接触是否导致载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合减少、Lp(a)的量减少或两者都有，其中载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合的减少或Lp(a)的所述量的减少指示所述目标分子或化合物减少载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合，并且抑制Lp(a)的所述形成或减少Lp(a)的所述量。
本发明的其他特征和优点将从以下详细描述并结合附图中变得显而易见，这些附图以举例的方式示出本发明实施方案的各种特征。
附图说明
示例性实施方案示于附图中。本文所公开的实施方案和附图旨在被认为是说明性的而不是限制性的。
图1是Manocha A等人，Ind J Clin Biochem.31:13(2016)中所述的脂蛋白(a)[Lp(a)]的结构的示意图。
图2A是描绘了在1μM奥替库单抗(BI-204、“BI204”)或100mMε氨基己酸(EACA)(赖氨酸类似物)存在或不存在下，50nM荧光素标记的LDL与17kDa载脂蛋白(a)的滴定曲线的线图。
图2B描绘了显示与100mMε-氨基己酸(EACA)或无抗体(表示为“对照”)相比，在1000nM奥替库单抗存在下17K apo(a)的滴定的线图。将荧光标记的LDL(Flu-LDL；50nM)在1000nM奥替库单抗或100mM EACA存在下与17K r-apo(a)(0、10、50、100、200、500或1000nM)组合。
图2C描绘了显示与最高达1000nM的抗apo(a)多克隆抗体或100mM EACA比较，在1000nM奥替库单抗存在下17K apo(a)的滴定的线图。将在抗体不存在下(此时apo(a)对Flu-LDL荧光的猝灭最低)观察到的荧光用作在抗体和EACA存在下确定荧光的校正因子。图中的线描绘了拟合成直角双曲线的数据的非线性回归。
图3描绘了在固定浓度的Flu-LDL和apo(a)存在下奥替库单抗的滴定。将荧光标记的LDL(Flu-LDL；50nM)与17K r-apo(a)(500nM)在0、0.064、0.32、1.6、8、40、200和1000nM浓度的奥替库单抗(“BI”)存在下组合；将相同浓度的多克隆抗apoB-100(ApoB)抗体用作阳性对照；将0、0.0064、0.032、0.16、0.8、4、20和100mM的ε-氨基己酸(EACA)也用作阳性对照。Flu-LDL的绝对荧光值由上面的短划线表示，并且17-K r-apo(a)的猝灭效应由下面的点线表示。图中的线描绘了拟合成直角双曲线的数据的非线性回归。
图4A和图4B描绘了用恒定的Flu-LDL和apo(a)对较低浓度的抗体的滴定。将荧光标记的LDL(Flu-LDL；30nM)与17K r-apo(a)(300nM)在0.4096、1.024、2.56、6.4、16、40和100nM浓度的奥替库单抗(“BI”)存在下组合(图4A)。将相同浓度的多克隆抗apoB-100(ApoB)抗体用作阳性对照；并且将0.4096、1.024、2.56、6.4、16、40、100mM的ε-氨基己酸(EACA)也用作阳性对照(图4B)。Flu-LDL的绝对荧光值由上面的短划线表示，并且17K r-apo(a)的猝灭效应由下面的点线表示。
图5描绘了抗体对Flu-LDL的干扰。将荧光标记的LDL(Flu-LDL；100nM)在0.1、1、10、100和1000nM或500nM浓度的17K或17KΔ7,8下单独与奥替库单抗(“BI”)组合。Flu-LDL的绝对荧光值以点线(紧邻标记“单独的Flu-LDL”)显示，并且17-K r-apo(a)和17KΔ7,8的猝灭效应分别以最低短划线(紧邻标记“有17K”)和中间短划线(紧邻标记“有17KΔ7,8”)显示。
图6描绘了随时间的Lp(a)共价组装的蛋白质印迹。将17K r-apo(a)(5nM)与100nMLDL在无血清的HEK293细胞条件化培养基中在37℃下孵育0、2、4、6和8小时。通过蛋白质印迹分析评估共价Lp(a)形成的程度。结果表示三次独立实验。
图7描绘了具有抗体抑制的Lp(a)共价组装的蛋白质印迹。在所示浓度的抗apo(a)、抗apoB Ab或奥替库单抗存在下，将17K r-apo(a)(5nM)与100nM LDL在无血清的HEK293细胞条件化培养基中在37℃下孵育4小时。通过蛋白质印迹分析评估共价Lp(a)形成的程度。
图8描绘了其他浓度的具有抗体抑制的Lp(a)共价组装的蛋白质印迹。在所示浓度的奥替库单抗存在下，将17K r-apo(a)(5nM)与100nM LDL在无血清的HEK293细胞条件化培养基中在37℃下孵育4小时。将抗apo(a)抗体用作对照。通过蛋白质印迹分析评估共价Lp(a)形成的程度。结果表示三次独立实验。
图9描绘了8小时时的Lp(a)共价组装的蛋白质印迹。在所示浓度的奥替库单抗存在下，将17K r-apo(a)(5nM)与100nM LDL在无血清的HEK293细胞条件化培养基中在37℃下孵育0或8小时。通过蛋白质印迹分析评估共价Lp(a)形成的程度。结果表示三次独立实验。在图10中对每个蛋白质印迹的条带强度进行了定量。
图10描绘了在不同浓度的奥替库单抗存在下的共价Lp(a)组装的定量。使用ImageLab软件(Bio-Rad)定量蛋白质印迹(孵育8小时)的条带强度，以计算％r-Lp(a)。使用Prism 7.0生成图和分析。所显示的数据是三次独立实验的平均值±SD。*指示p<0.05，相对于无抗体(双因素ANOVA与图基事后检验(Tukey post hoc test))。
具体实施方式
本文中所引用的全部参考文献均通过引用整体并入，如同全文列出一般。除非另外限定，否则本文所用的技术和科学术语都具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。Singleton等人，Dictionary of Microbiology and MolecularBiology第3版,修订,J.Wiley&Sons(New York,NY 2006)；March,Advanced OrganicChemistry Reactions,Mechanisms and Structure第7版,J.Wiley&Sons(New York,NY2013)；以及Sambrook和Russel,Molecular Cloning:A Laboratory Manual第4版,ColdSpring Harbor Laboratory Press(Cold Spring Harbor,NY 2012)向本领域技术人员提供对用于本申请中的许多术语的一般指导。关于如何制备抗体的参考文献，参见D.Lane,Antibodies:A Laboratory Manual第2版(Cold Spring Harbor Press,Cold SpringHarbor NY,2013)；Kohler和Milstein,(1976)Eur.J.Immunol.6:511；Queen等人，美国专利第5,585,089号；和Riechmann等人，Nature 332:323(1988)；美国专利第4,946,778号；Bird,Science 242:423-42(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)；Ward等人，Nature 334:544-54(1989)；Tomlinson I.和Holliger P.(2000)Methods Enzymol,326,461-479；Holliger P.(2005)Nat.Biotechnol.Sep；23(9):1126-36)。
本领域技术人员将认识到许多与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料，它们可用于本发明的实践中。实际上，本发明决不限于所描述的方法和材料。出于本发明的目的，下面定义以下术语。
如本文所用的术语“抗体”或“多个抗体”在广义上意指并且包括免疫球蛋白分子，包括多克隆抗体、单克隆抗体(包括鼠单克隆抗体、人单克隆抗体、人适应的单克隆抗体、人源化单克隆抗体和嵌合单克隆抗体)、抗体片段、双特异性或多特异性抗体、二聚体、四聚体或多聚体抗体和单链抗体。
取决于重链恒定结构域氨基酸序列，可将免疫球蛋白分配为五个主要类别，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgA和IgG被进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。任何脊椎动物物种的抗体轻链均可基于其恒定结构域的氨基酸序列被分配为两种明显不同类型(即卡帕(kappa)(κ)和拉姆达(lambda)(λ))中的一种。
术语“抗体片段”是指免疫球蛋白分子中保留重链和/或轻链抗原结合位点的部分，诸如重链互补决定区(HCDR)1、2和3，轻链互补决定区(LCDR)1、2和3，重链可变区(VH)，或轻链可变区(VL)。抗体片段包括Fab片段，即由VL、VH、CL和CHI结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，即包含由铰链区的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段；Fd片段，其由VH和CHI结构域组成；Fv片段，其由抗体的单臂的VL和VH结构域组成；结构域抗体(dAb)片段(Ward等人(1989)Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成。可将VH和VL结构域工程化并经由合成接头连接在一起，以形成各种类型的单链抗体设计，其中VH/VL结构域在分子内或分子间(在VH和VL结构域通过单独的单链抗体构建体表达的情况下)配对，以形成单价抗原结合位点，诸如单链Fv(scFv)或双抗体；其描述于例如PCT国际公布第WO1998/44001号、第WO1988/01649号、第WO1994/13804号和第WO1992/01047号中。使用本领域技术人员已知的熟知技术获得这些抗体片段，并且以与全长抗体相同的方式筛选片段的实用性。
抗体可变区由被三个“抗原结合位点”中断的“框架”区组成。抗原结合位点是使用诸如以下的各种术语来定义：互补决定区(CDR)，即VH中的三种(HCDR1、HCDR2、HCDR3)和VL中的三种(LCDR1、LCDR2、LCDR3)，其基于序列变异性(Wu和Kabat J Exp Med 132:211-50,1970；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)，或“超变区”、“HVR”或“HV”，即VH中的三种(H1、H2、H3)和VL中的三种(L1、L2、L3)，其是指抗体可变结构域在结构上超变的区域，如由Chothia和Lesk(Chothia和Lesk Mol Biol196:901-17,1987)所定义。其他术语包括“IMGT-CDR”(Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27:55-77,2003)和“决定特异性的残基用法”(SDRU)(Almagro,Mol Recognit 17:132-43,2004)。International ImMunoGeneTics(IMGT)数据库提供了抗原结合位点的标准化编号和定义。CDR、HV和IMGT描绘之间的对应性描述于Lefran等人，Dev Comparat Immunol 27:55-77,2003中。
“框架”或“框架序列”是可变区的除被定义为抗原结合位点的那些以外的剩余序列。由于抗原结合位点可由如上文所述的各种术语来定义，因此框架的精确氨基酸序列取决于抗原结合位点如何被定义。
“人源化抗体”是指其中抗原结合位点源自非人物种并且可变区框架源自人免疫球蛋白序列的抗体。人源化抗体可包括框架区中的取代，使得框架可不是表达的人免疫球蛋白或种系基因序列的精确拷贝。
“人适应的”抗体或“人框架适应的(HFA)”抗体是指根据美国专利公布第US2009/0118127号中所述的方法适应的人源化抗体。通过基于CDR1和CDR2环以及轻链CDR3环的一部分的最大CDR和FR相似性、长度相容性和序列相似性选择受体人框架，将人适应的抗体人源化。
“人抗体”是指具有重链可变区和轻链可变区的抗体，其中框架和抗原结合位点两者都来源于源自人来源的序列。如果抗体含有恒定区，则恒定区也源自人来源的序列。
人抗体包含“源自”人来源的序列的重或轻链可变区，其中所述抗体的可变区从使用人种系免疫球蛋白或重排的免疫球蛋白基因的***获得。此类***包括在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库，和转基因非人动物，诸如携带如本文所述的人免疫球蛋白基因座的小鼠。“人抗体”与人种系或重排的免疫球蛋白序列相比时，可能含有氨基酸差异，这归因于例如天然存在的体细胞突变或在框架或抗原结合位点中有意引入取代。通常，人抗体与由人种系或重排的免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一。在一些情况下，“人抗体”可含有源自人框架序列分析的共有框架序列，例如如Knappik等人，J Mol Biol 296:57-86,2000中所述；或掺入展示在噬菌体上的人免疫球蛋白基因文库中的合成HCDR3，例如如Shi等人，J Mol Biol 397:385-96,2010和国际专利公开第WO2009/085462号中所述。抗原结合位点源自非人物种的抗体不包括在人抗体的定义中。
如本文所用的术语“重组抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有抗体，诸如从针对人免疫球蛋白基因进行转基因或转染色体的动物(诸如小鼠)或从其制备的杂交瘤(下文进一步描述)分离的抗体，从经转化以表达抗体的宿主细胞分离的抗体，从重组、组合的抗体文库分离的抗体，以及通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生成或分离的抗体，或使用Fab臂交换体外生成的抗体，诸如双特异性抗体。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指单分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示对特定表位的单一结合特异性和亲和力，或在双特异性单克隆抗体的情况下，对两个不同表位的双重结合特异性。
如本文所用的术语“表位”是指抗体特异性结合的抗原的一部分。表位通常由部分(诸如氨基酸)的化学活性(诸如极性、非极性或疏水性)表面基团或多糖侧链组成并且可具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。表位可由形成构象空间单位的连续和/或不连续的氨基酸构成。对于不连续表位，来自抗原的线性序列的不同部分的氨基酸通过蛋白质分子的折叠在3维空间中紧密接近。
如本文所用的“变体”是指与参考多肽或参考多核苷酸相差一个或多个修饰(例如，取代、***或缺失)的多肽或多核苷酸。
如本文所用的“施用(Administering)”和/或“施用(administer)”是指用于向患者递送药物组合物的任何途径。递送途径可包括非侵入性经口(通过口)、局部(皮肤)、经粘膜(鼻、颊/舌下、***、眼和直肠)和吸入途径，以及胃肠外途径和本领域已知的其他方法。胃肠外是指通常与包括眼眶内、输注、动脉内、颈动脉内、囊内、心脏内、真皮内、肌内、腹膜内、肺内、脊柱内、胸骨内、鞘内、子宫内、静脉内、蛛网膜下、被膜下、皮下、经粘膜或经气管的注射相关的递送途径。经由胃肠外途径，组合物可以是用于输注或注射的溶液或悬浮液形式，或作为冻干粉末。
“有益结果”可包括但决不限于减轻或缓解疾病状况的严重性、防止疾病状况恶化、治愈疾病状况、预防疾病状况发展、降低患者发展疾病状况的机会和/或延长患者的寿命或预期寿命。在一些实施方案中，所述疾病状况是类风湿性关节炎，或类风湿性关节炎和加速性动脉粥样硬化的组合。
如本文所用的术语“有效量”是指减少疾病或病症的至少一种或多种症状的药物组合物的量，所述药物组合物包含一种或多种如本文所公开的抗体或肽或其突变体、变体、类似物或衍生物，并且涉及提供期望作用的药理学组合物的足够量。如本文所用的短语“治疗有效量”意指以适用于任何医学治疗的合理的效益/风险比治疗病症的组合物的足够量。在一个实施方案中，所述药物(治疗)组合物包含针对ApoB100的抗体，由针对ApoB100的抗体组成或基本上由针对ApoB100的抗体组成。在各种实施方案中，本文所述的药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。在一些实施方案中，治疗性药物组合物用于例如在有需要的受试者中治疗心血管疾病(诸如动脉粥样硬化或血栓形成)和/或相关症状，抑制心血管疾病(诸如动脉粥样硬化或血栓形成)和/或相关症状，减轻心血管疾病(诸如动脉粥样硬化或血栓形成)和/或相关症状的严重性，和/或缩短心血管疾病(诸如动脉粥样硬化或血栓形成)和/或相关症状的持续时间。
与对照或非治疗的受试者或施用本文所述的组合物之前的受试者的状态相比，症状的治疗或预防上的显著降低是例如测量参数的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约100％或更高。测量的或可测量的参数包括疾病的临床上可检测的标志物，例如，升高或压低的生物标志物水平，以及与类风湿性关节炎和/或加速性动脉粥样硬化的症状或标志物的临床接受的标度有关的参数。然而，应理解将由主治医师在可靠的医学判断范围内决定如本文所公开的组合物和制剂的总的每日用法。所需的精切量将取决于诸如所治疗疾病的类型、受试者的性别、年龄和重量的因素而变化。
“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”意指期望诊断、预后或疗法的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括但不限于人、家畜、农场动物、动物园动物、运动动物、宠物动物，诸如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛、奶牛；灵长类动物，诸如猿、猴、猩猩和黑猩猩；犬科动物，诸如狗和狼；猫科动物，诸如猫、狮子和虎；马科动物，诸如马、驴和斑马；食用动物，诸如牛、猪和绵羊；有蹄动物，诸如鹿和长颈鹿；啮齿类动物，诸如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠；等等。在某些实施方案中，哺乳动物为人受试者。
术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment,)”、“治疗(treating)”或“改善”当用于指疾病、病症或医学疾患时，是指治疗性治疗和防范性或预防性措施，其中目的是预防、逆转、缓解、改善、抑制、减轻、减慢或停止症状或疾患的进展或严重性。术语“治疗”包括降低或缓解疾患的至少一种不利作用或症状。如果一种或多种症状或临床标志物减少，则治疗通常是“有效的”。或者，如果疾病状态的进展减少或停止，则治疗是“有效的”。也就是说，“治疗”不仅包括症状或标志物的改善，而且还包括停止或至少减慢在不存在治疗的情况下会预计到的症状的进展或恶化。此外，“治疗”可意指追求或获得有益的结果，或降低个体发展疾患的机会，即使治疗最终不成功。需要治疗的那些包括已经患有疾患的那些，以及易患疾患的那些或将预防疾患的那些。
术语“统计学显著”或“显著”是指存在差异的统计学证据。它被定义为当零假设实际为真时作出拒绝零假设的判定的概率。经常使用p值作出判定。
“选择性地结合”或“特异性地结合”是指本文所述的抗体或其抗体片段以如下KD结合靶标(诸如存在于细胞表面上的分子)的能力：10-5M(10000nM)或更小，例如，10-6M、10- 7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小。特异性结合可受例如多肽试剂的亲和力和亲合力以及多肽剂的浓度影响。本领域普通技术人员可使用任何适合的方法，诸如在适合的细胞结合测定中滴定多肽剂，来确定本文所述的多肽剂选择性地结合靶标的适当条件。
如本文所用，“心血管疾病”是指心脏和血管的病症，并且包括动脉、静脉、微动脉、微静脉和毛细血管的病症。心血管疾病的非限制性实例包括充血性心脏衰竭、心律失常、心包炎、急性心肌梗死、梗死心肌、冠状动脉疾病、冠心病、缺血性心脏病、心肌病变、中风、高血压性心脏病、心脏衰竭、肺心病、缺血性综合征、冠状微血管病、节律障碍、风湿性心脏病、主动脉瘤、心房颤动、先天性心脏病、心内膜炎、炎性心脏病、心内膜炎、炎性心脏肥大、心肌炎、瓣膜性心脏病、脑血管病和外周动脉病或其任一组合。在一些实施方案中，待通过所公开的方法治疗的心血管疾病包括主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化。
“主动脉硬化”是指主动脉壁或主动脉瓣的钙沉积和增厚。“主动脉瓣硬化”是指主动脉瓣的钙沉积和增厚，通常不存在心室流出的阻塞。临床上，在诸如主动脉区域的软射血收缩期杂音、第二心音的正常***和正常体积的颈总动脉脉搏的症状存在下可怀疑为主动脉瓣硬化，但最好通过超声心动图来检测。
“主动脉狭窄”指通过变窄的瓣膜口的血流速度增加，这是左心室流出道阻塞的常见原因。主动脉瓣狭窄的常见原因是钙化性瓣膜疾病，其次是先天性二叶主动脉瓣。另一常见原因是风湿性心脏病。通常基于常规心脏检查时的收缩期杂音怀疑主动脉狭窄。以下发现的存在可指示严重主动脉狭窄的可能性：具有辐射至颈动脉的长射血收缩期杂音；延迟性颈动脉上行运动(upstroke)；第二心音的单***或逆***。经胸超声心动图(TTE)常用于诊断主动脉狭窄。
如本文所用的术语“与……组合”意指两种或更多种治疗剂可以混合物形式一起、作为单一剂同时或作为单一剂以任何顺序依序施用于受试者。
方法和***
各种实施方案提供了用于在受试者中治疗主动脉硬化(例如，主动脉瓣硬化)或主动脉狭窄、降低主动脉硬化(例如，主动脉瓣硬化)或主动脉狭窄的严重性、减缓主动脉硬化(例如，主动脉瓣硬化)或主动脉狭窄的进展或降低主动脉硬化(例如，主动脉瓣硬化)或主动脉狭窄的可能性的方法，所述方法通过向所述受试者施用包含结合载脂蛋白B100(apoB100)的至少一个片段的抗体或抗体片段的药物组合物并降低所述受试者中的Lp(a)水平来进行。
各种实施方案提供了用于降低受试者中脂蛋白(a)(Lp(a))水平的方法，任选地，所述受试者被诊断患有心血管疾病或显示出心血管疾病的症状，所述方法包括向所述受试者施用含有结合载脂蛋白B100(apoB100)的至少一个片段的抗体或抗体片段的药物组合物。这些实施方案的另外方面提供了受试者被诊断为患有主动脉硬化和/或主动脉狭窄或显示出主动脉硬化和/或主动脉狭窄的症状。所述方法的其他方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。另外的方面包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在，则继续施用抗体或抗体片段。
各种实施方案提供了本文所公开的方法中的抗体或抗体片段结合apoB100的天然和/或氧化表位P45。各种实施方案提供了本文所公开的方法中的抗体或抗体片段仅结合apoB100的天然和/或氧化表位P45。apoB100的P45具有IEIGLEGKGFEPTLEALFGK(SEQ IDNo.:1)的多肽序列。氧化表位或氧化脂蛋白包含但不限于表位或脂蛋白上在赖氨酸和组氨酸上携带丙二醛(MDA)基团的修饰、通过由铜氧化而诱导的修饰(例如，CuOxLDL)、携带羟基壬烯醛的修饰或携带醛的半抗原的修饰。另一实施方案提供了本文所公开的方法中的抗体或抗体片段进一步结合apoB100的一个或多个片段。
ApoB100含有可被鉴别为P1-P302的肽片段，所述肽片段在相邻肽之间具有重叠的氨基酸，如美国专利申请公布第US/2017/0340702号以及美国专利第7,468,183号和第7,704,499号中所述，所述文献通过引用整体并入本文。
各种实施方案提供了在受试者中治疗主动脉硬化和/或主动脉狭窄、降低主动脉硬化和/或主动脉狭窄的严重性或可能性的方法包括但不限于施用奥替库单抗或具有与奥替库单抗相同的重链和/或轻链或与奥替库单抗相同的互补决定区的奥替库单抗变体。
各种实施方案提供了降低受试者的Lp(a)水平的方法包括但不限于施用奥替库单抗或具有与奥替库单抗相同的重链和/或轻链或与奥替库单抗相同的互补决定区的奥替库单抗变体。所述实施方案的另外方面包括所述受试者在施用之前被诊断出或表现出主动脉硬化或主动脉狭窄的症状，并且所述症状在施用之后改善，所述方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。
奥替库单抗是人单克隆抗体，其含有分别如SEQ ID No:2、3和4中所示的重链互补决定区(HCDR)1(HCDR1)、2(HCDR2)和3(HCDR3)；以及分别如SEQ ID No:5、6和7中所示的轻链互补决定区(LCDR)1(LCDR1)、2(LCDR2)和3(LCDR3)。奥替库单抗含有SEQ ID No:8的可变重链区(heavy region)(VH)氨基酸序列、SEQ ID No:9的可变轻链区(light region)(VL)氨基酸序列。奥替库单抗含有SEQ ID No:10的重链氨基酸序列、SEQ ID No:11的轻链氨基酸序列。奥替库单抗的氨基酸序列也描述于WO2009/083225和美国专利申请公布第US20110014203号中，所述文献通过引用整体并入本文。
HCDR1，即SEQ ID No.:2，是：FSNAWMSWVRQAPG。
HCDR2，即SEQ ID No.:3，是：SSISVGGHRTYYADSVKGR。
HCDR3，即SEQ ID No.:4，是：ARIRVGPSGGAFDY。
LCDR1，即SEQ ID No.:5，是：CSGSNTNIGKNYVS。
LCDR2，即SEQ ID No.:6，是：ANSNRPS。
LCDR3，即SEQ ID No.:7，是：CASWDASLNGWV。
可变重链区(VH)，即SEQ ID No.:8，如下所示：
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS NAWMSWVRQA PGKGLEWVSS ISVGGHRTYYADSVKGRSTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARIR VGPSGGAFDY WGQGTLVTVS。
可变轻链区(VL)，即SEQ ID No.:9，如下所示：
QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSNTNIG KNYVSWYQQL PGTAPKLLIY ANSNRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLR SEDEADYYCA SWDASLNGWV FGGGTKLTVL。
重链，即SEQ ID No.:10，如下所示：
EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS NAWMSWVRQA PGKGLEWVSS ISVGGHRTYYADSVKGRSTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARIR VGPSGGAFDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKKVE PKSCDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSRD ELTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K。
轻链，即SEQ ID No.:11，如下所示：
QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSNTNIG KNYVSWYQQL PGTAPKLLIY ANSNRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLR SEDEADYYCA SWDASLNGWV FGGGTKLTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS。
提供了在受试者中治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性或可能性和/或降低Lp(a)的水平的方法，其包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有如SEQ ID No.:2-7中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3中的一者或多者；任选地包括在施用之前选择具有升高水平的Lp(a)或显示主动脉瓣硬化或主动脉狭窄症状的受试者。
含有“HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3中的一个或多个”的抗体涵盖所述抗体含有一个、任何两个、任何三个、任何四个、任何五个或所有六个CDR(即HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3)的实施方案。本发明的一个方面提供了一种抗体，所述抗体包含至少一个具有抗体奥替库单抗的相应互补决定区(CDR)的氨基酸序列的CDR；更优选地，所述抗体具有两个或三个或四个或五个具有抗体奥替库单抗的相应CDR的序列的CDR；如果所述抗体具有三个或四个具有抗体奥替库单抗的相应CDR的序列的CDR，则优选的是，所述抗体具有全部三个重链或全部三个轻链CDR，所述全部三个重链或全部三个轻链CDR具有抗体奥替库单抗的相应CDR的序列；因此，本发明的这一方面包括一种抗体，所述抗体包含具有抗体奥替木单抗的相应三个轻链CDR的序列的三个轻链CDR、或具有抗体奥替木单抗的相应三个重链CDR的序列的三个重链CDR；再更优选地，所述抗体包含三个轻链CDR和三个重链CDR，所述三个轻链CDR和三个重链CDR具有抗体奥替库单抗的相应CDR的序列；如果所述抗体不包含全部六个具有抗体奥替库单抗的相应CDR的序列的CDR，则优选的是，1、2、3、4或5个“不相同”的CDR中的一些或全部包含抗体奥替库单抗的相应CDR的序列的变体(“变体”包括如下含义：所述变体与相应的CDR的序列具有至少50％、更优选至少70％、再更优选至少80％或至少90％或至少95％的序列同一性；最优选地，所述变体与抗体奥替库单抗的相应CDR的序列具有96％或97％或98％或99％的序列同一性；通常，“变体”CDR序列与抗体奥替库单抗的相应CDR的序列具有5或4或3或2或仅1个氨基酸残基差异)；并且本发明的这一方面包括抗体奥替库单抗。例如，所述实施方案的一个方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:2中所示的HCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:3中所示的HCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:4中所示的HCDR3。再一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:5中所示的LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:6中所示的LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:7中所示的LCDR3。再一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:2中所示的HCDR1和如SEQ ID No.:3中所示的HCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:2中所示的HCDR1和如SEQ ID No.:4中所示的HCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ IDNo.:2中所示的HCDR1和如SEQ ID No.:5中所示的LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:2中所示的HCDR1和如SEQ ID No.:6中所示的LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:2中所示的HCDR1和如SEQ ID No.:7中所示的LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:3中所示的HCDR2和如SEQ ID No.:4中所示的HCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:3中所示的HCDR2和如SEQ IDNo.:5中所示的LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:3中所示的HCDR2和如SEQ ID No.:6中所示的LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:3中所示的HCDR2和如SEQ ID No.:7中所示的LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQID No.:4中所示的HCDR3和如SEQ ID No.:5中所示的LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:4中所示的HCDR3和如SEQ ID No.:6中所示的LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:4中所示的HCDR3和如SEQ ID No.:7中所示的LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:5中所示的LCDR1和如SEQ ID No.:6中所示的LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:5中所示的LCDR1和如SEQ IDNo.:7中所示的LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有如SEQ ID No.:6中所示的LCDR2和如SEQ ID No.:7中所示的LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2-4中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、3和5中所示的HCDR1、HCDR2和LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ IDNo.:2、3和6中所示的HCDR1、HCDR2和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQID No.:2、3和7中所示的HCDR1、HCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、4和5中所示的HCDR1、HCDR3和LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、4和6中所示的HCDR1、HCDR3和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、4和7中所示的HCDR1、HCDR3和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、5和6中所示的HCDR1、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、5和7中所示的HCDR1、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、6和7中所示的HCDR1、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、4和5中所示的HCDR2、HCDR3和LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、4和6中所示的HCDR2、HCDR3和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、4和7中所示的HCDR2、HCDR3和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、5和6中所示的HCDR2、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、5和7中所示的HCDR2、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、6和7中所示的HCDR2、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:4、5和6中所示的HCDR3、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:4、5和7中所示的HCDR3、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:4、6和7中所示的HCDR3、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:5-7中所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。再一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2-5中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQID No.:2-4和6中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2-4和7中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、3、5和6中所示的HCDR1、HCDR2、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、3、5和7中所示的HCDR1、HCDR2、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、3、6和7中所示的HCDR1、HCDR2、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、4、5和6中所示的HCDR1、HCDR3、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ IDNo.:2、4、5和7中所示的HCDR1、HCDR3、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、4、6和7中所示的HCDR1、HCDR3、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、5、6和7中所示的HCDR1、LCDR1、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3-6中所示的HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3-5和7中所示的HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、4、6和7中所示的HCDR2、HCDR3、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3、5、6和7中所示的HCDR2、LCDR1、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ IDNo.:4、5、6和7中所示的HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。再一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2-6中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR2。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2-5和7中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、3、4、6和7中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2、3、5-7中所示的HCDR1、HCDR2、LCDR1、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ IDNo.:2、4-7中所示的HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。另一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:3-7中所示的HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。再一方面提供了所施用的抗体含有分别如SEQ ID No.:2-7中所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
提供了治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性的方法，其包括向受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有如SEQ ID No.:8中所示的可变重链区(variable heavy region,VH)和可变轻链区(variable light region,VL)，所述可变轻域含有分别如SEQ ID No.:5-7中所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。所述方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。另外的方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在，则继续施用抗体或抗体片段。
又一方面提供了治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性的方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:9的可变轻链区(VL)和可变重链区(VH)，所述可变重链区含有分别如SEQ ID No.:2-4中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。所述方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。另外的方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在，则继续施用抗体或抗体片段。
本发明的再一方面提供了在受试者中治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄、降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性和/或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的可能性的方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:8的可变重链区(VH)和SEQ ID No.:9的可变轻链区(VL)。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
提供了在受试者中治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄、降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性和/或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的可能性或降低Lp(a)的水平的方法，其包括向受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有如SEQ ID No.:8中所示的可变重链区(VH)和可变轻链区(VL)，所述可变轻域含有分别如SEQ ID No.:5-7中所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。这些方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
又一方面提供了在受试者中治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄、降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性和/或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的可能性的方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:9的可变轻链区(VL)和可变重链区(VH)，所述可变重链区含有分别如SEQ ID No.:2-4中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
本发明的再一方面提供了在受试者中治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄、降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性和/或降低患主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的可能性的方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:8的可变重链区(VH)和SEQ ID No.:9的可变轻链区(VL)。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
还提供了在受试者中治疗主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄或降低主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄的严重性或可能性和/或降低Lp(a)的水平的方法，其包括向受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:10的重链和轻链，所述轻链含有分别如SEQ ID No.:5-7中所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
所述实施方案的又一方面提供了所述方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:10的重链和轻链，所述轻链含有SEQ ID No.:9的可变轻链区(VL)。本发明的另一方面提供了所述方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:11的轻链和重链，所述重链含有分别如SEQ ID No.:2-4中所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
再一方面提供了所述方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ IDNo.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:11的轻链和重链，所述重链含有SEQ ID No.:8的可变重链区(VH)。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
或者，所述方法包括向所述受试者施用有效量的结合apoB100的SEQ ID No.:1中所示的片段的抗体或抗体片段，并且所述抗体含有SEQ ID No.:10的重链和SEQ ID No.:11的轻链。所述治疗方法的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。所述方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
患者选择
实施方案提供了通过抑制Lp(a)的形成来治疗心血管疾病(例如，主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化)的方法包括向被诊断患有所述疾病或显示出所述疾病的症状的受试者施用所述药物组合物。
所述治疗方法中任一种的另外方面包括鉴别或选择具有升高水平的Lp(a)和/或展现出主动脉瓣硬化和/或主动脉狭窄症状的受试者，然后向所述受试者施用有效量的所述抗体或抗体片段。
所述治疗或降低发生可能性的方法中任一种的另外方面进一步包括在施用之后定量Lp(a)的水平和/或主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的症状，以及如果Lp(a)水平或症状持续存在或出现，则继续施用抗体或抗体片段。
在一些方面，施用抗体或抗体片段之后Lp(a)的降低量或水平是相对于施用之前相同受试者的量，或相对于未患有主动脉瓣硬化或主动脉狭窄或已成功治疗了主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的受试者的量。
在其他方面，Lp(a)的升高量或水平是相对于未患有主动脉瓣硬化或主动脉狭窄或已成功治疗了主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的受试者的量或水平。
组合疗法
一些实施方案提供了本文所述的用于抑制或减少Lp(a)的形成和/或用于治疗主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的抗体或抗体片段与用于冠状动脉疾病(CAD)的现有治疗组合使用。例如，用于治疗患有主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的受试者的方法任选地除了外科手术(诸如血管成形术和支架放置、纤维蛋白溶解疗法、经皮冠状动脉介入(PCI)、冠状动脉旁路移植术(CABG)、颈动脉内膜切除术)之外，还包括施用有效量的抗ApoB100和有效量的以下中的一种或多种：他汀类药物(statins)、抗血小板剂、β阻滞剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂和钙通道阻滞剂。
包含所述抗体或抗体片段，任选地进一步包含一种、两种、三种或更多种用于抑制或减少Lp(a)的形成以及用于治疗主动脉瓣狭窄或主动脉瓣硬化的用于CAD的现有治疗的药物组合物可提供有常用的佐剂以增强所述抗体或抗体混合物的吸收。在各种实施方案中，可将根据本发明的组合物配制用于经由任何施用途径递送。“施用途径”可以是指本领域已知的任何施用途径，包括但不限于气雾剂、鼻、经口、经粘膜、透皮、胃肠外或肠内。“胃肠外”是指通常与包括眼眶内、输注、动脉内、囊内、心脏内、皮内、肌内、腹膜内、肺内、脊柱内、胸骨内、鞘内、子宫内、静脉内、蛛网膜下、被膜下、皮下、经粘膜或经气管的注射有关的施用途径。通过胃肠外途径，组合物可以是用于输注或注射的溶液或悬浮液形式，或作为冻干粉末。经由胃肠外途径，组合物可以是用于输注或用于注射的溶液或悬浮液的形式。经由肠内途径，药物组合物可以是允许受控释放的片剂、凝胶胶囊、糖衣片剂、糖浆、悬浮液、溶液、粉末、颗粒、乳液、微球或纳米球或脂囊泡或聚合物囊泡的形式。通常，通过注射施用组合物。
剂量
在一个实施方案中，结合ApoB100的SEQ ID NO:1片段的抗体或抗体变体的有效量导致至少4μg/mL、优选至少12μg/mL的抗体血浆浓度。一些实施方案提供了用于抑制或降低Lp(a)的组合物是至少约8mg/kg患者(例如，对于平均83kg的人患者为664mg)的奥替库单抗。一些实施方案提供了用于抑制或降低Lp(a)的组合物是5mg/kg患者(例如，对于平均83kg的人患者为415mg)至8mg/kg的奥替库单抗。一些实施方案提供了按每月给药方案以上述剂量施用奥替库单抗。
其他实施方案提供了每周以不小于2mg/kg/周(对于平均83kg的人患者为166mg)；优选4mg/kg/周(对于平均83kg的人患者为332mg)施用抗ApoB100。在另一方面，每两周以>2.5mg/kg/两周(例如，对于平均83kg的人患者为208mg)施用抗ApoB100或抗apo(a)抗体的组合物。在再一方面，每月以约6mg/kg/月(例如，对于平均83kg的人患者为约498mg)施用抗ApoB100或抗apo(a)抗体的组合物。例如，每月给药可进行12个月或3个月。
一些实施方案提供了组合物的有效量至少包括大约800-900mg、900-1000mg、1000-1100mg、1100-1200mg、1200-1300mg、1300-1400mg、1400-1500mg或1500-1600mg的抗体初始剂量。在一些方面，本文所述的方法中的有效量包括大约1000-1500mg的奥替库单抗的初始剂量，之后是持续2、3、4或5周每周施用和/或甚至持续1、2或3个月每月施用的700-900mg的所述抗体的后续剂量。
另一示例性实施方案提供了结合ApoB100的SEQ ID NO:1片段的抗体或抗体片段的逐步递增剂量。在该实施方案中，针对ApoB100或apo(a)的抗体的单剂量施用的示例性(起始)剂量为0.005至0.01mg/kg(例如，静脉内)；并且待以单剂量施用来施用的其他示例性剂量水平为0.01至0.15、0.15至0.75、0.75至2.5、2.5至7.5和7.5至30mg/kg(例如，静脉内)。例如，在单剂量静脉内施用中，针对ApoB100或apo(a)的抗体的起始剂量为0.007mg/kg；并且在后续的单剂量静脉内施用中，其他示例性剂量可以是0.05、0.25、1.25、5.0或15.0mg/kg。在另一实施方案中，针对ApoB100或apo(a)的抗体的单剂量皮下施用为0.5至5mg/kg，并且多剂量皮下施用也为0.5至5mg/kg。例如，经皮下施用1.25mg/kg针对ApoB100或apo(a)的抗体。在各种实施方案中，在每次施用中在一天的指定小时范围内施用剂量，并且以1天的时间窗以每周间隔施用多剂量治疗(例如，4剂量、3剂量、5剂量或6剂量)中的每个剂量。在另一实例中，以300mg至450mg(例如，360mg)向人受试者施用针对ApoB100或apo(a)的抗体，任选地之后向人受试者施用300mg至450mg(例如，360mg)的另一剂量，其中第二剂量与第一剂量相隔至少70天(最长达91天)。可将针对ApoB100或apo(a)的抗体以100-170mg/mL(例如，150mg/mL)的浓度配制，并且不进一步稀释即用于皮下施用，或稀释至大体积用于静脉内输注。
另外的实施方案包括向受试者施用有效量的结合SEQ ID No.:1并且具有SEQ IDNo.:2-11中的一个或多个的序列的抗体或抗体片段，所述有效量在以下范围内：约10-50μg/时段、50-100μg/时段、100-150μg/时段、150-200μg/时段、100-200μg/时段、200-300μg/时段、300-400μg/时段、400-500μg/时段、500-600μg/时段、600-700μg/时段、700-800μg/时段、800-900μg/时段、900-1000μg/时段、1000-1100μg/时段、1100-1200μg/时段、1200-1300μg/时段、1300-1400μg/时段、1400-1500μg/时段、1500-1600μg/时段、1600-1700μg/时段、1700-1800μg/时段、1800-1900μg/时段、1900-2000μg/时段、2000-2100μg/时段、2100-2200μg/时段、2200-2300μg/时段、2300-2400μg/时段、2400-2500μg/时段、2500-2600μg/时段、2600-2700μg/时段、2700-2800μg/时段、2800-2900μg/时段或2900-3000μg/时段。时段是一天、一周、一个月或另一时间长度。一个方面是以每个时段上述剂量中的任一者的每周、每两周或每月频率施用抗体(例如，奥替库单抗)。
在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用氧化LDL的抑制剂(例如，奥替库单抗)持续1-5天、1-5周、1-5个月或1-5年。例如，以3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个剂量向受试者施用抗体，每个剂量相隔至少3天、5天、一周、两周、一个月、两个月或其组合。在其他实施方案中，在第一剂量后约2-3周或约3周施用第二剂量，并且在第一剂量后约5-6周或约6周施用第三剂量，等等。在另一实施方案中，在第一剂量后约2-3个月、约2个月、约3个月或约4个月施用第二剂量，并且在第一剂量后约4-6个月、约5-6个月、约5个月或约6个月施用第三剂量。
药物组合物或药物
在各种实施方案中，本发明提供了用于本文所述的方法的药物组合物。所述药物组合物包括抑制或减少Lp(a)的形成的组分，诸如针对ApoB100的抗体或抗体片段，以及药学上可接受的载体。
另外的实施方案提供了用于在受试者中治疗主动脉瓣硬化或主动脉狭窄、降低主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的严重性或可能性和/或降低Lp(a)的水平的组合物或药物，其中所述组合物或药物含有如上文所公开的结合ApoB100的SEQ ID No.:1的表位的抗oxLDL抗体，其量为每剂量(或小瓶)300mg至400mg、优选约330mg；任选地与药学上可接受的载体，各自(例如，用于向受试者每月皮下施用)持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月或更长。其他实施方案提供了组合物或药物含有如上文所公开的结合ApoB100的SEQ ID No.:1的表位的抗oxLDL抗体，其量为至少5、6、7或8mg奥替库单抗/kg患者，分为一个剂量(或小瓶)且任选地多个剂量(或小瓶)的至少2mg/kg/周、至少2.5mg/kg/两周或至少6mg/kg/月，持续3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月或更长。另外的实施方案提供了组合物或药物含有抗体(诸如奥替库单抗)，所述抗体的浓度为100-170mg/mL(例如，150mg/mL)，并且不进一步稀释即用于皮下施用，或稀释至大体积用于静脉内输注。
如本文所用的“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，其参与携带或转运目标化合物从一个组织、器官或身体的一部分到另一个组织、器官或身体的一部分。例如，载体可以是液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料或其组合。赋形剂的实例包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂、抗氧化剂、增塑剂、胶凝剂、稠化剂、硬化剂、凝固剂、悬浮剂、表面活性剂、湿润剂、载体、稳定剂和其组合。通常，载体的每种组分必须是“药学上可接受的”，因为它必须与制剂的其他成分相容。它还必须适合与它可能接触的任何组织或器官接触使用，这意味着它必须不带有毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或任何其他过度超过其治疗益处的并发症的风险。
根据本发明，药物组合物可以以治疗有效量递送。精确的治疗有效量是组合物的量，该量将在给定的受试者中在疗效上产生最有效的结果。该量将取决于多种因素而变化，包括但不限于治疗化合物的特性(包括活性、药代动力学、药物效应动力学和生物利用度)、受试者的生理状况(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、一般身体状况、对给定剂量的应答性和药物类型)、制剂中一或多种药学上可接受的载体的性质和施用途径。临床和药理学领域的技术人员将能够通过常规实验(例如,通过监测受试者对化合物施用的应答并相应地调整剂量)来确定治疗有效量。对于另外的指导，参见Remington:The Science and Practiceof Pharmacy(Gennaro编，第20版，Williams&Wilkins PA,USA)(2000)。
制备所述方法中的抗体
在一些实施方案中，上述方法涉及结合特定抗原表位的抗体，其中所述抗体含有一个或多个限定的序列。例如，使用现代重组文库技术来制备针对天然ApoB、氧化ApoB或MDA修饰的ApoB的治疗性抗体。虽然鼠杂交瘤细胞产生大量的相同抗体，但这些非人抗体被人体识别为外来的，因此，除了诱发过敏反应之外，它们的功效和血浆半衰期也降低。为了解决该问题，一种方法是制备嵌合抗体，其中将抗体的鼠可变结构域转移至人恒定区，产生主要是人的抗体。该方法的进一步改进是开发人源化抗体，其中将鼠抗体的接触抗原的区域(所谓的互补决定区(CDR))转移至人抗体框架，产生人源化抗体。另一种方法是使用重组技术产生完全的人抗体，该技术不依赖于使动物免疫来生成特异性抗体。而是，重组文库包含大量预制的抗体变体，并且文库可能具有至少一种对任何抗原特异的抗体。可使用噬菌体展示***，其中抗体片段作为与噬菌体包被蛋白的融合物在丝状噬菌体粒子的表面上表达、展示，而噬菌体展示***同时携带编码所展示分子的遗传信息。可通过结合所讨论的抗原来选择展示对特定抗原特异的抗体片段的噬菌体。然后可扩增分离的噬菌体，并且可任选地将编码所选抗体可变结构域的基因转换为其他抗体形式，例如全长免疫球蛋白，并且使用本领域熟知的适当载体和宿主细胞以高量表达。噬菌体粒子上展示的抗体特异性的形式可不同。最常用的形式是Fab和单链(scFv)，两者都含有抗体的可变抗原结合结构域。单链形式由经由柔性接头连接至可变轻结构域(VL)的可变重结构域(VH)构成。在用作分析试剂或治疗剂之前，将所展示的抗体特异性转换为可溶性形式，例如，Fab或scFv，并如此分析。在随后的步骤中，可将鉴别为具有期望特征的抗体片段可转换为其他形式，诸如全长抗体。
使用杂交瘤的抗体生产
通过免疫学领域技术人员熟知的标准程序来实现细胞融合物。融合配偶体细胞系以及用于融合和选择杂交瘤并筛选mAb的方法是本领域众所周知的。参见，例如，下文的Ausubel、下文的Harlow和下文的Colligan，所述参考文献的内容通过引用整体并入本文。
可通过将分泌抗体的杂交瘤或转染瘤细胞注射至小鼠腹膜腔中，并在适当的时间后收获含有高滴度mAb的腹水液，并且从其中分离mAb，大量生产抗ApoB100抗体或抗apo(a)抗体。对于用非鼠杂交瘤(例如，大鼠或人)进行mAb的此类体内产生，优选使杂交瘤细胞在辐照或无胸腺的裸小鼠中生长。或者，可通过体外培养杂交瘤或转染瘤细胞并从细胞培养基中分离分泌的mAb或在真核或原核细胞中重组产生抗体。
抗ApoB100的重组表达
可基于本文所提供的教导，使用已知技术，根据本发明提供结合ApoB100的重组鼠或嵌合鼠-人或人-人抗体。参见例如Ausubel等人编辑Current Protocols in MolecularBiology,Wiley Interscience,N.Y.(1987,1992,1993)；和Sambrook等人，MolecularCloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)。
编码抗ApoB100抗体或抗apo(a)抗体的DNA可以是编码重链恒定区(Hc)、重链可变区(Hc)、轻链可变区(Lv)和轻链恒定区(Lc)中的至少一个的基因组DNA或cDNA。使用染色体基因片段作为编码鼠V区抗原结合片段的DNA来源的方便的替代方案是使用用于构建嵌合免疫球蛋白基因的cDNA，例如，如由Liu等人(Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 84:3439(1987)和J.Immunology 139:3521(1987)所报道。cDNA的使用需要将适于宿主细胞的基因表达元件与基因组合，以实现期望蛋白质的合成。cDNA序列的使用优于基因组序列(其含有内含子)，因为cDNA序列可在缺乏适当RNA剪接***的细菌或其他宿主中表达。
筛选测定
各种实施方案提供了用于鉴别减少载脂蛋白(a)和低密度脂蛋白(LDL)之间的结合并抑制脂蛋白(a)(Lp(a))的形成的分子或化合物的方法。所述方法包括使目标分子或化合物与LDL和载脂蛋白(a)的混合物接触；确定与不含所述目标分子或化合物的混合物相比，所述目标分子或化合物与所述混合物之间的所述接触是否导致载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合减少、Lp(a)的量减少或两者都有，其中载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合的减少或Lp(a)的所述量的减少指示所述目标分子或化合物减少载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合，并且抑制Lp(a)的所述形成或减少Lp(a)的所述量。
在一些实施方案中，分子或化合物选自由以下组成的组：小分子、多肽、肽、抗体或其片段和核酸分子。在一些实施方案中，目标分子或化合物结合ApoB100。
在另外的实施方案中，目标分子或化合物降低了主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的可能性或进展。
用于鉴别目标化合物或分子的方法的示例性测定包括蛋白质印迹分析或质谱，以基于来自样品的这些生物分子的大小，与Lp(a)的组分(apo(a)和/或LDL)相比，分离和定量Lp(a)；结合测定，以定量Lp(a)的组分的量；荧光标记组分并定量荧光信号的猝灭或出现，作为组分结合时物理接近度的指示。示例性测定的进一步细节可参见以下实施例。
实施例
提供以下实施例来更好地说明所要求保护的本发明并且不应将其解释为限制本发明的范围。就所提到的具体材料来说，其仅用于说明的目的，而不旨在限制本发明。本领域技术人员可在不施展创造能力且不脱离本发明范围的情况下开发等同的手段或反应物。
实施例1：阻滞ApoB100与apo(a)之间关联、从而抑制Lp(a)的组装的抗体。
图2显示使用能够结合载脂蛋白B100分子上结合位点的抗体，阻止了载脂蛋白B100与载脂蛋白(a)的组装，从而阻止了Lp(a)的形成。ECAC是指ε-氨基己酸，它是氨基酸赖氨酸的衍生物和类似物，使其成为结合该特定残基的蛋白质的有效抑制剂。奥替库单抗(BI204)显示出类似于绵羊多克隆抗apo(a)抗体(表示为“抗apo(a)”)的对Lp(a)形成的抑制作用。
因此，申请人证实了奥替库单抗可阻止ApoB100的结合，从而阻止Lp(a)的形成，据信这在疾病的病理生理学机制和临床治疗中具有重大的诊断和治疗意义。
实施例2：通过用奥替库单抗阻滞Lp(a)形成来预防AVS进展。
2期临床研究，计划如下：N＝100名患者，其为年龄小于58岁的早期AVS受试者，具有升高的血清Lp(a)和轻度AVS(由超声心动图界定)。Lp(a)被测量为LDL-c的总量。终点是评估AVS进展的减慢，通过超声心动图测量。
实施例3：apo(a)与LDL之间的非共价和共价结合的抑制，由此抑制Lp(a)的组装。
分别通过荧光和蛋白质印迹分析评估apo(a)与LDL之间的非共价结合和共价结合的抑制。证实奥替库单抗在抑制非共价结合方面非常有效。然而，抗体对荧光的干扰使得对非共价结合的作用不确定。所有浓度(0.01、0.1、1和10μM)的奥替库单抗均抑制共价结合。
apo(a)与LDL之间的非共价相互作用：
使用顺序密度梯度超速离心从健康供体血浆中纯化LDL，并使用巯基导向探针5'-碘乙酰氨基荧光素加以标记。从稳定表达的HEK293细胞系收获的无血清条件化培养基中纯化重组apo(a)变体(r-apo(a)：17K和17KΔLBS7,8)。将赖氨酸类似物(ε-氨基己酸(EACA))、市售的绵羊多克隆抗apo(a)抗体和市售的山羊多克隆抗apoB-100抗体用作阳性对照。在96孔圆底白色板中在室温下进行滴定，并且将蛋白质在的20mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、0.01％Tween 20(HBST)中稀释。使用
Figure BDA0002956405310000361
M2e(Molecular Devices)进行荧光测量；激发波长和发射波长分别为495nm和530nm，在发射束中放置535nm截止滤波器。
apo(a)与LDL之间的共价相互作用：
在0、0.01、0.1、1.0和10μM的奥替库单抗存在下，将纯化的LDL(100nM)和17K apo(a)(5nM)与来自HEK293细胞的条件化无血清培养基(OptiMEM；Gibco)在37℃下孵育。每小时将反应充分混合，并在4或8hr后通过添加4×SDS-PAGE样品缓冲液终止反应。然后在95℃下将样品煮沸5min，并在6％聚丙烯酰胺凝胶上进行SDS-PAGE。在电泳后，将分离的蛋白质电印迹至PVDF膜上，封闭，并与对apo(a)特异的单克隆抗体(A5)孵育。在化学发光试剂存在下，使用HRP缀合的山羊抗小鼠IgG二级抗体产生信号，并使用ChemiDoc***(Bio-Rad)捕获图像。使用IMAGELAB软件，使用以下公式针对重组Lp(a)形成对蛋白质印迹的条带强度(BI)进行定量：％r-Lp(a)＝BI(Lp(a))/[BI(Lp(a))+BI(apo(a))]。三次独立实验的平均值±SD呈现于图10中。使用双因素ANOVA与图基事后检验，在GraphPad Prism 7.0中分析数据。
apo(a)与LDL之间的非共价相互作用：
使用荧光标记的LDL(Flu-LDL)在荧光分析中测量非共价结合的抑制。在该测定中，当apo(a)与LDL之间发生非共价结合时，荧光被猝灭。将Flu-LDL(50nM)在奥替库单抗(1000nM)存在下与0、10、50、100、200、500和1000nM的17K r-apo(a)组合。使用浓度为100mM的抑制非共价结合的赖氨酸类似物EACA。图2B显示奥替库单抗抑制结合，如曲线向右移动和增加的表观Kd所反映。在图2C中，抑制非共价结合的多克隆抗apo(a)抗体也被用作阳性对照；该图中的数据显示，奥替库单抗对非共价结合的抑制与抗apo(a)抗体相当。将在抗体不存在(图2B中的“对照”)下(此时apo(a)对Flu-LDL荧光的猝灭最低)观察到的荧光用作在抗体和EACA存在下确定荧光的校正因子。图中的线描绘了拟合成直角双曲线的数据的非线性回归。
然后，使用滴定浓度的奥替库单抗和相对于Flu-LDL 10倍摩尔过量的固定浓度的17K r-apo(a)评估apo(a)与LDL之间的非共价结合。将干扰非共价相互作用的市售多克隆抗apoB抗体用作阳性对照。在本实验中，奥替库单抗能够缓解17K apo(a)对Flu-LDL的猝灭(图3)。然而，奥替库单抗的抑制作用远低于多克隆抗apoB抗体或EACA的抑制作用。
为了更好地捕获浓度为0-200nM的响应，使用了较低浓度的奥替库单抗、Flu-LDL和17K r-apo(a)(图4A)。17K r-apo(a)和LDL的浓度保持固定，其中17K r-apo(a)相对于Flu-LDL 10倍摩尔过量。与EACA或多克隆抗ApoB抗体(表示为“ApoB”)(图4B)相比，奥替库单抗不能将荧光脱猝灭(抑制)，即使在降低总Flu-LDL和apo(a)的水平后也是如此。然而，即使在低至0.4nM的奥替库单抗浓度下，奥替库单抗的存在也会干扰荧光(图4A)。
使用单独的Flu-LDL或在奥替库单抗、17K r-apo(a)和17KΔ7,8 apo(a)存在下，进一步探索了响应于奥替库单抗对LDL荧光的干扰。与单独的Flu-LDL相比，奥替库单抗使Flu-LDL的荧光增加至更高水平(图5)。荧光的这种增加可影响我们对先前结果的解释。
apo(a)与LDL之间的共价相互作用
通过蛋白质印迹上Lp(a)蛋白质的出现随时间评估apo(a)与LDL之间的共价结合。使用无血清的HEK293细胞条件化培养基，在17K r-apo(a)与LDL孵育0-8小时后评估Lp(a)形成；将分离的Lp(a)、单独的17K apo(a)和单独的培养基用作对照。数据显示，Lp(a)形成开始于4小时，最大形成发生在8小时(图6)。
接着，通过蛋白质印迹分析评估奥替库单抗对抑制apo(a)与LDL之间共价结合的作用。在0.1、1、5和10μM的奥替库单抗存在下，将17K r-apo(a)(5nM)与LDL(100nM)在无血清的HEK293细胞条件化培养基中在37℃下孵育4小时。用10μM奥替库单抗观察到Lp(a)条带的消失(图7)。
用0.01μM、0.1μM、1μM或10μM的奥替库单抗重复蛋白质印迹分析，且仅包括抗apo(a)作为对照。与抗apo(a)抗体相比，只有奥替库单抗在减少共价Lp(a)方面表现相似(图8)。
为了确定Lp(a)形成的抑制是否发生在Lp(a)形成似乎最大的稍后时间点，在无血清的HEK293细胞条件化培养基中，在0.01、0.1、1和10μM的奥替库单抗存在下将5nM 17K r-apo(a)和100nM LDL孵育0和8小时后重复蛋白质印迹实验(图9)。然后对结果进行定量(图10)并分析。数据显示，在所用的最高浓度(10μM)和较低浓度(0.01、0.1和1μM)下，奥替库单抗显著抑制Lp(a)的形成。在10μM下，奥替库单抗对Lp(a)形成的抑制百分比为73.46％(对于每一者，p<0.0001)。分别地，在1μM下，奥替库单抗将Lp(a)形成抑制34.99％(对于每一者，p<0.0001)；在0.1μM下，奥替库单抗将Lp(a)形成抑制25.8％(p＝0.0027)；并且在0.01μM下，奥替库单抗将Lp(a)形成抑制21.37％(p＝0.0177)。
Lp(a)是心血管疾病的独立和因果风险因素以及唯一最普遍的遗传风险因素。Lp(a)组装通过apo(a)与apoB的相互作用在两步过程中发生。在第一步骤中，在apo(a)中的环状结构域IV-7和-8与apoB的N末端发生非共价相互作用；这有助于通过在环状结构域IV-9与apoB之间形成二硫键而进行共价组装的第二步骤。干扰非共价和共价Lp(a)组装(即产生)对于降低Lp(a)水平具有临床意义。
在本研究中，我们测试了奥替库单抗(针对人apoB-100表位残基661-680产生)在体外阻滞Lp(a)非共价和共价组装的能力。
在非共价测定中，我们评估了抗体恢复被17K apo(a)猝灭的Flu-LDL荧光的能力。首先，我们发现奥替库单抗(1000nM)在17K apo(a)滴定中干扰apo(a)与Flu-LDL的相互作用，显示出类似于抗apo(a)抗体的作用。接着，进行奥替库单抗滴定，以生成剂量-响应曲线。使用奥替库单抗时，在1000nM下观察到最大响应。在较低浓度(≤100nM)下，奥替库单抗对荧光的脱猝灭无作用。最后，作为质量控制步骤，将奥替库单抗与单独的Flu-LDL运行。本实验显示奥替库单抗的存在对Flu-LDL的干扰，如通过增强的荧光信号所证实。因此，荧光干扰使得在我们的***中针对非共价组装验证这些抗体更加复杂，尤其是当要测量IC50值时。
纯化的17-环状结构域apo(a)(5nM)与纯化的人LDL(100nM)之共价组装在体外发生，形成可使用SDS-PAGE和蛋白质印迹法拆分的Lp(a)。使用该测定，我们证明Lp(a)的形成随时间发生，在孵育4小时后出现第一个显著的条带。因此，在4小时时，使用0、0.01、0.1、1.0和10μM浓度的奥替库单抗评价了Lp(a)组装的抑制。奥替库单抗在抑制Lp(a)组装方面与抗apoB或抗apo(a)对照抗体一样有效。在8小时后，我们能够证实，奥替库单抗在测试的最低浓度(0.01μM)下减少了Lp(a)共价组装。因此，显示奥替库单抗抑制Lp(a)的共价组装。本分析显示，奥替库单抗可用作抑制剂以在体外阻滞Lp(a)的组装。
为了验证奥替库单抗对Lp(a)组装的生物功能，设想了基于细胞的***和体内***。可能的***包括表达内源性apoB100和异位apo(a)的人肝细胞瘤细胞培养模型，或表达人apo(a)和人apoB的人Lp(a)转基因小鼠(或从这些动物分离的原代肝细胞)。
目前没有经批准用于治疗AVS的药物。尽管目前正在研究反义基因疗法来敲除apo(a)，但存在关于使用反义基因疗法导致肿瘤形成的担忧。
以上在具体实施方式中描述了本发明的各种实施方案。虽然这些描述直接描述了上述实施方案，但应当理解，本领域技术人员可设想到对本文所示和所述的具体实施方案的修改和/或变化。落入本描述范围内的任何此类修改或变化也旨在被包括在其中。除非具体说明，发明人的意图是，为可应用领域的普通技术人员给出说明书和权利要求中的词和短语的普通和习惯含义。
已经呈现了申请人在提交本申请时已知的本发明的各种实施方案的前述描述，并且旨在用于说明和描述的目的。本描述并不旨在是穷举性的，也不旨在将本发明限制于所公开的精确形式，并且根据上述教导，许多修改和变化是可能的。所描述的实施方案用于解释本发明的原理及其实际应用，以使本领域技术人员利用本发明的不同实施方案和不同的修改以适于预期的特定用途。因此，旨在本发明不受限于所公开的用于实施本发明的特定实施方案。
尽管本发明的特定实施方案已示出和描述，但对本领域技术人员将是显而易见的是基于本文的教导，不脱离本发明及其更广泛的方面可进行变化和修改，因此，所附权利要求涵盖其范围内所有此类改变和修改如在本发明的真正精神和范围内。本领域技术人员将理解，一般来说，本文所用的术语通常旨在作为“开放式”术语(例如，术语“包括(including)”应被解释为“包括但不限于(including but not limited to)”，术语“具有”应被解释为“至少具有”，术语“包括(includes)”应被解释为“包括但不限于(includes butis not limited to)”等)。
如本文所用的术语“包含(comprising)”或“包含(comprises)”用于指对实施方案有用的组合物、方法和其各自的组分，但也包括未指明的要素，无论是否有用。本领域技术人员将理解，一般来说，本文所用的术语通常旨在作为“开放式”术语(例如，术语“包括(including)”应被解释为“包括但不限于(including but not limited to)”，术语“具有”应被解释为“至少具有”，术语“包括(includes)”应被解释为“包括但不限于(includes butis not limited to)”等)。尽管本文使用作为诸如包括(including)、含有或具有的术语的同义词的开放式术语“包含(comprising)”来描述和要求保护本发明，但本发明或其实施方案可替代地使用诸如“由……组成”或“基本上由……组成”的替代术语来描述。
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<150> 62/697,353
<151> 2018-07-12
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> apoB100的P45
<400> 1
Ile Glu Ile Gly Leu Glu Gly Lys Gly Phe Glu Pro Thr Leu Glu Ala
1 5 10 15
Leu Phe Gly Lys
20
<210> 2
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HCDR1
<400> 2
Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
1 5 10
<210> 3
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HCDR2
<400> 3
Ser Ser Ile Ser Val Gly Gly His Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly Arg
<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HCDR3
<400> 4
Ala Arg Ile Arg Val Gly Pro Ser Gly Gly Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> LCDR1
<400> 5
Cys Ser Gly Ser Asn Thr Asn Ile Gly Lys Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> LCDR2
<400> 6
Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 7
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> LCDR3
<400> 7
Cys Ala Ser Trp Asp Ala Ser Leu Asn Gly Trp Val
1 5 10
<210> 8
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 可变重链区
<400> 8
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Val Gly Gly His Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Arg Val Gly Pro Ser Gly Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115 120
<210> 9
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 可变轻链区
<400> 9
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Thr Asn Ile Gly Lys Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 10
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 10
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Val Gly Gly His Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Arg Val Gly Pro Ser Gly Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 11
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 11
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Thr Asn Ile Gly Lys Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215

Claims (20)

1.一种用于在有需要的受试者中治疗主动脉瓣硬化或主动脉狭窄、降低主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的严重性、减缓主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的进展或降低主动脉瓣硬化或主动脉狭窄的可能性的方法，其包括：
向所述受试者施用有效量的包含能够结合载脂蛋白B100(ApoB100)的片段的抗体或抗体片段的药物组合物，
其中ApoB100的所述片段包含SEQ ID No.:1或其活性位点的氨基酸序列，并且所述抗体或所述抗体片段包含一个、两个或三个选自由分别为SEQ ID No 2、3和4的HCDR 1(HCDR1)、HCDR 2(HCDR2)和HCDR 3(HCDR3)序列组成的组的重链互补决定区(HCDR)，以及一个、两个或三个选自由分别为SEQ ID No:5、6和7的LCDR 1(LCDR1)、LCDR 2(LCDR2)和LCDR3(LCDR3)序列组成的组的轻链互补决定区(LCDR)。
2.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在施用所述有效量的所述药物组合物之前选择具有升高水平的Lp(a)的受试者。
3.如权利要求1所述的方法，其进一步包括在所述施用之后测量所述受试者中Lp(a)的所述水平。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者被确定为在所述施用之后具有降低量的脂蛋白(a)(Lp(a))。
5.如权利要求1所述的方法，其中ApoB100的所述片段是醛衍生物。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID No.:8的可变重链区(VH)、SEQID No.:9的可变轻链区(VL)或两者。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID No.:10的重链、SEQ ID No.:11的轻链或两者。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体是奥替库单抗。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述受试者是人，所述抗体是奥替库单抗，并且将奥替库单抗以约330mg/月的剂量皮下施用约3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。
11.如权利要求5所述的方法，其中所述奥替库单抗是以至少5mg/kg的初始剂量施用，任选地之后是多个后续剂量，各自的量为至少2mg/kg/周、至少2.5mg/kg/两周或至少6mg/kg/月。
12.如权利要求1所述的方法，其中以1-10μg/kg、10-100μg/kg、100-500μg/kg、200-500μg/kg、300-500μg/kg、400-500μg/kg、1-5mg/kg、5-10mg/kg、10-15mg/kg、15-20mg/kg、20-25mg/kg、25-50mg/kg、50-75mg/kg施用所述抗体或抗体片段。
13.一种降低受试者中脂蛋白(a)(Lp(a))的水平的方法，其包括：
向所述受试者施用有效降低所述受试者中Lp(a)的所述水平的量的药物组合物，
其中所述药物组合物包含能够结合载脂蛋白B100(ApoB100)的片段的抗体或抗体片段，其中ApoB100的所述片段包含SEQ ID No.:1或其活性位点的氨基酸序列，并且所述抗体或所述抗体片段包含一个、两个或三个选自由分别为SEQ ID No 2、3和4的HCDR 1(HCDR1)、HCDR 2(HCDR2)和HCDR 3(HCDR3)序列组成的组的重链互补决定区(HCDR)，以及一个、两个或三个选自由分别为SEQ ID No:5、6和7的LCDR 1(LCDR1)、LCDR 2(LCDR2)和LCDR 3(LCDR3)序列组成的组的轻链互补决定区(LCDR)。
14.如权利要求13所述的方法，其进一步包括在所述施用之后测量所述受试者中Lp(a)的所述水平，并且与所述施用之前的所述水平相比，所述Lp(a)的所述水平降低至少20％、30％、40％或50％。
15.如权利要求13所述的方法，其中所述受试者被诊断患有心血管疾病或显示出心血管疾病的症状。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述心血管疾病包括钙化性主动脉瓣硬化或狭窄，并且与所述施用之前相比，所述受试者具有所述钙化性主动脉瓣硬化或狭窄的减少的症状或减少的进展。
17.如权利要求13所述的方法，其中所述抗体包含SEQ ID No.:8的可变重链区(VH)、SEQID No.:9的可变轻链区(VL)或两者。
18.如权利要求13所述的方法，其中所述抗体是奥替库单抗，并且所述奥替库单抗是以至少5mg/kg的初始剂量施用，任选地之后是多个后续剂量，各自的量为至少2mg/kg/周、至少2.5mg/kg/两周或至少6mg/kg/月。
19.如权利要求11所述的方法，其进一步包括在施用所述有效量的所述药物组合物之前选择具有升高水平的Lp(a)的受试者，所述药物组合物包含能够结合ApoB100的片段的抗体或抗体片段。
20.一种用于鉴别减少载脂蛋白(a)与低密度脂蛋白(LDL)之间的结合并抑制脂蛋白(a)(Lp(a))的形成的分子或化合物的方法，其包括：
使目标分子或化合物与LDL和载脂蛋白(a)的混合物接触；
确定与不含所述目标分子或化合物的混合物相比，所述目标分子或化合物与所述混合物之间的所述接触是否导致载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合减少、Lp(a)的量减少或两者都有，
其中载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合的减少或Lp(a)的所述量的减少指示所述目标分子或化合物减少载脂蛋白(a)与LDL之间的所述结合，并且抑制Lp(a)的所述形成或减少Lp(a)的所述量。
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