CN112834650B - 一种强骨生血口服液的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种强骨生血口服液的质量检测方法，与现有技术相比，包括以下步骤：制备第一对照品溶液；制备第一供试品溶液；制定强骨生血口服液第一指纹图谱；制定强骨生血口服液标准指纹图谱；制备第二对照品溶液；制备第二供试品溶液；制定强骨生血口服液第二指纹图谱；将所述强骨生血口服液第二指纹图谱与所述标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5％以内的为检测合格所述第二供试品溶液。本申请提供的强骨生血口服液的质量检测方法，能对强骨生血口服液的有效组分进行全面检测，利于对强骨生血口服液成品质量的有效控制，从而确保强骨生血口服液的临床疗效。

Description

一种强骨生血口服液的质量检测方法

技术领域

本申请涉及质量检测方法领域，更具体地说，尤其涉及一种强骨生血口服液的质量检测方法。

背景技术

强骨生血口服液由骨液、党参、黄芪、灵芝、大枣、黑木耳等药材组成，强骨生血口服液具有益髓壮骨、补气生血之功用，强骨生血口服液重用骨液为君，大有补肾益髓之功，使髓足则骨坚精盛、精盛则能转化为血，且骨液富含钙质等营养成分，因而对老人、小儿及妇女孕、乳期缺钙、贫血者，既可补其不足，又可防其亏损，并能治疗因之所致之腰酸、膝软、脚弱无力、齿摇发落以及发育迟缓等症，臣以党参、黄芪补脾胃之气，裕生化之源，使后天有本，则气血可自生，既可治疗精神短少，疲乏无力，亦可促进贫血之症的恢复。而参、芪与骨液相配，脾肾两补，使骨髓与气血之间相互转补营血，其与参、芪合，则有气血双补之妙。气无形，血有形，有形之血当以气生，故臣以灵芝、大枣加强补气作用以生血。黑木耳甘平无毒，润而不腻，协调诸药乃为使。故全放各药相协，性味平和，补而不燥，共奏益髓壮骨、补气生血之功，实为一首治疗缺钙、贫血而髓亏骨弱、气血不足之症的良方。强骨生血口服液临床适应症为：主治老人、小儿、以及妇女胎前产后之贫血、缺钙，症见精神不振、体弱乏力、面色无华、腰膝酸软、肌肉痉挛、体型消瘦、发摇齿落，以及小儿囟门久不闭合、齿迟、立迟、行迟等。

目前强骨生血口服液现有的质量标准仅测定单一指标成分 的含量，未对其他有效组分进行监测，存在一定局限性，不能全面反映强骨生血口服液的质量水平。针对强骨生血口服液的质量检测方法公开很少，如中国专利201210012628.4(公开号CN201210012628.4)、 202030219270.8(公开号CN202030219270.8)、202030219275.0(公开号CN202030219275.0)均未涉及其质量检测方法；《中国计划生育学杂志》2019年第27卷第8期《强骨生血口服液联合利塞磷酸钠片治疗绝经后妇女骨质疏松症的临床效果观察》、《中草药》2017 年第48卷第23期《强骨生血口服液对去卵巢致骨质疏松大鼠的治疗作用及其机制》、《中国新药杂志》2017年第26卷第22期《强骨生血口服液对小鼠化疗后骨髓抑制的保护作用及机制研究》、《广东药学》2004年第14卷第1期《强骨生血口服液》也均未涉及到强骨生血口服液的质量检测技术。

现有技术中，尚无较全面的质量控制方法反映现有中药材、中间体及成品的质量状况，也无法对生产过程及产品质量有效控制，不能较好地保证其临床疗效。

因此，怎样提供一种强骨生血口服液的质量检测方法，能对强骨生血口服液的有效组分进行全面检测，已成为本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本申请提供了一种强骨生血口服液的质量检测方法，能对强骨生血口服液的有效组分进行全面检测。

本申请提供的技术方案如下：

本申请提供一种强骨生血口服液的质量检测方法，包括以下步骤：制备第一对照品溶液：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第一对照品溶液；制备第一供试品溶液：量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL 刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第一供试品溶液；制定强骨生血口服液第一指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第一指纹图谱，所述高效液相色谱分析的具体条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；流动相为有机相A 与水相B组成的梯度洗脱液，有机相A为甲醇或乙腈，水相B为体积百分比浓度为0.1～0.4％的甲酸溶液；检测波长为254nm、270nm、 285nm三个波长，检测波长的切换时间为0min、8min、25min；柱温为20～40℃；流速0.8mL/min～1.2mL/min；分析时间为50～65min；采用梯度洗脱：

制定强骨生血口服液标准指纹图谱：根据所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定强骨生血口服液标准指纹图谱；制备第二对照品溶液；制备第二供试品溶液；制定强骨生血口服液第二指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第二对照品溶液和所述第二供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第二指纹图谱；将强骨生血口服液第二指纹图谱与标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液。

优选的，步骤“制定强骨生血口服液第一指纹图谱”中，吸取的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液各为10μl。

优选的，所述C18反相色谱柱的柱长为250mm。

优选的，所述甲酸溶液体积百分比浓度为0.2％。

优选的，所述柱温为30～40℃。

优选的，所述流速为1.0mL/min。

优选的，所述分析时间为55min。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，所述的强骨生血口服液包括如下重量份的组分：骨液600～700、党参40～50、黄芪70～80、灵芝10～20、大枣30～40、黑木耳10～20。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，步骤“制定强骨生血口服液标准指纹图谱”具体为：根据15批次所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定所述强骨生血口服液标准指纹图谱。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，所述的标准指纹图谱在254nm、270nm、285nm下切换波长，进行检测，具有12个共有峰，共有峰峰面积之和占总峰面积90％以上，归属于骨液的指纹图谱具有 3个共有峰，归属于党参的指纹图谱具有2个共有峰，归属于黄芪的指纹图谱具有2个共有峰，归属于灵芝的指纹图谱具有2个共有峰，归属于大枣的指纹图谱具有2个共有峰，归属于黑木耳的指纹图谱具有1个共有峰。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，所述的标准指纹图谱在 254nm、270nm、285nm下切换波长，检测到的12个共有峰的保留时间分别为：(1)5.373～5.406、(2)5.721～5.741、(3)6.826～ 6.855、(4)8.011～8.045、(5)9.140～9.174、(6)10.372～10.397、 (7)11.220～11.259、(8)14.127～14.159、(9)16.213～16.244、 (10)18.475～18.519、(11)19.767～19.812、(12)44.546～44.617。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，所述强骨生血口服液第一指纹图谱与所述强骨生血口服液标准指纹图谱的相似度为0.944～ 0.998。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，所述第一指纹图谱的共有峰具有11个特征峰，各特征峰的保留时间和相对标准偏差为：

1号峰：保留时间5.721±0.020，相对标准偏差为0.35％；

2号峰：保留时间6.826±0.029，相对标准偏差为0.42％；

3号峰：保留时间8.011±0.034，相对标准偏差为0.43％；

4号峰：保留时间9.140±0.034，相对标准偏差为0.37％；

5号峰：保留时间10.372±0.025，相对标准偏差为0.24％；

6号峰：保留时间11.220±0.039，相对标准偏差为0.35％；

7号峰：保留时间14.127±0.032，相对标准偏差为0.23％；

8号峰：保留时间16.213±0.031，相对标准偏差为0.19％；

9号峰：保留时间18.475±0.044，相对标准偏差为0.24％；

10号峰：保留时间19.767±0.045，相对标准偏差为0.23％；

11号峰：保留时间44.546±0.071，相对标准偏差为0.16％。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，步骤“制备第二对照品溶液”与步骤“制备第一对照品溶液”相同。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，步骤“制备第二供试品溶液”与步骤“制备第一供试品溶液”相同。

进一步地，在本发明一种优选的方式中，步骤“制定强骨生血口服液第二指纹图谱”的高效液相色谱分析的具体条件与步骤“制定强骨生血口服液第一指纹图谱”的高效液相色谱分析的具体条件相同。

本发明所提供的技术方案，与现有技术相比，本发明涉及的强骨生血口服液的质量检测方法，包括以下步骤：制备第一对照品溶液：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第一对照品溶液；制备第一供试品溶液：量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第一供试品溶液；制定强骨生血口服液第一指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第一指纹图谱，所述高效液相色谱分析的具体条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；流动相为有机相A与水相B组成的梯度洗脱液，有机相A为甲醇或乙腈，水相B为体积百分比浓度为0.1～0.4％的甲酸溶液；检测波长为254nm、270nm、285nm三个波长，检测波长的切换时间为0min、8min、25min；柱温为20～40℃；流速0.8mL/min～ 1.2mL/min；分析时间为50～65min；采用梯度洗脱：

制定强骨生血口服液标准指纹图谱：根据所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定强骨生血口服液标准指纹图谱；制备第二对照品溶液；制备第二供试品溶液；制定强骨生血口服液第二指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第二对照品溶液和所述第二供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第二指纹图谱；将强骨生血口服液第二指纹图谱与标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液，如此，通过建立强骨生血口服液标准指纹图谱对强骨生血口服液的各组分进行一个全面的监测，并能有效将强骨生血口服液各味药材与强骨生血口服液成品进行一个峰归属及质量关联，更能有效对中药材-中间体(在强骨生血口服液成品制备过程中的取样)-成品的质量进行一个动态监测和溯源，本发明所提供的技术方案能克服现有强骨生血口服液质量检测方法中检测成分单一、不能全面反映强骨生血口服液质量水平的问题。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例提供的强骨生血口服液的质量检测方法的强骨生血口服液标准指纹图谱；

图2为本发明实施例提供的强骨生血口服液的质量检测方法的第一对照品溶液色谱图；

图3为本发明实施例提供的强骨生血口服液的质量检测方法的强骨生血口服液全波长扫描图谱；

图4为本发明实施例提供的强骨生血口服液的质量检测方法的 15批强骨生血口服液第一指纹图谱。

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合申请实施例中的附图对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

需要说明的是，当元件被称为“固定于”或“设置于”另一个元件上，它可以直接在另一个元件上或者间接设置在另一个元件上；当一个元件被称为是“连接于”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或间接连接至另一个元件上。

需要理解的是，术语“长度”、“宽度”、“上”、下”、“前”、“后”、“第一”、“第二”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本申请和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本申请的限制。

此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本申请的描述中，“多个”、“若干个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

须知，本说明书附图所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配说明所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本申请可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本申请所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本申请所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。

请如图1-图4所示，本申请提供一种强骨生血口服液的质量检测方法，包括以下步骤：制备第一对照品溶液：用体积百分比浓度为 50％～100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～ 0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第一对照品溶液；制备第一供试品溶液：量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第一供试品溶液；制定强骨生血口服液第一指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第一指纹图谱，所述高效液相色谱分析的具体条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；流动相为有机相A与水相B组成的梯度洗脱液，有机相A为甲醇或乙腈，水相B为体积百分比浓度为0.1～0.4％的甲酸溶液；检测波长为254nm、270nm、285nm三个波长，检测波长的切换时间为0min、 8min、25min；柱温为20～40℃；流速0.8mL/min～1.2mL/min；分析时间为50～65min；采用梯度洗脱：

制定强骨生血口服液标准指纹图谱：根据所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定强骨生血口服液标准指纹图谱；制备第二对照品溶液；制备第二供试品溶液；制定强骨生血口服液第二指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第二对照品溶液和所述第二供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第二指纹图谱；将强骨生血口服液第二指纹图谱与标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液。

本发明提供的强骨生血口服液的质量检测方法，与现有技术相比，本发明涉及的强骨生血口服液的质量检测方法，包括以下步骤：制备第一对照品溶液：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第一对照品溶液；制备第一供试品溶液：量取强骨生血口服液 5mL，置50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL 刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第一供试品溶液；制定强骨生血口服液第一指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第一指纹图谱，所述高效液相色谱分析的具体条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；流动相为有机相A 与水相B组成的梯度洗脱液，有机相A为甲醇或乙腈，水相B为体积百分比浓度为0.1～0.4％的甲酸溶液；检测波长为254nm、270nm、 285nm三个波长，检测波长的切换时间为0min、8min、25min；柱温为20～40℃；流速0.8mL/min～1.2mL/min；分析时间为50～65min；采用梯度洗脱：

制定强骨生血口服液标准指纹图谱：根据所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定强骨生血口服液标准指纹图谱；制备第二对照品溶液；制备第二供试品溶液；制定强骨生血口服液第二指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第二对照品溶液和所述第二供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第二指纹图谱；将强骨生血口服液第二指纹图谱与标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液，如此，通过建立强骨生血口服液标准指纹图谱对强骨生血口服液的各组分进行一个全面的监测，并能有效将强骨生血口服液各味药材与强骨生血口服液成品进行一个峰归属及质量关联，更能有效对中药材-中间体(在强骨生血口服液成品制备过程中的取样)-成品的质量进行一个动态监测和溯源，本发明所提供的技术方案能克服现有强骨生血口服液质量检测方法中检测成分单一、不能全面反映强骨生血口服液质量水平的问题。

需要补充说明的是，在本发明实施例中，高效液相色谱分析采用检测波长为254nm、270nm、285nm的三个波长，是通过全波长扫描确定强骨生血口服液各组分的最大吸收波长，然后依据特有组分的波谱吸收来确定不同区间的检测波长，如此，能够更加准确的对强骨生血口服液中各组分进行质量监测，采用区间分段波长的检测方法可达到增加质量覆盖面的目的，能有效提高检测质量和检测灵敏度，能较全面、客观、科学地评价强骨生血口服液的质量，而且可将其作为强骨生血口服液真伪鉴别的重要依据。

具体地，在本发明实施例中，所述的强骨生血口服液包括如下重量份的组分：骨液600～700、党参40～50、黄芪70～80、灵芝10～ 20、大枣30～40、黑木耳10～20。

具体地，在本发明实施例中，步骤“制定强骨生血口服液标准指纹图谱”具体为：根据15批次所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定所述强骨生血口服液标准指纹图谱。

具体地，在本发明实施例中，所述的标准指纹图谱在254nm、 270nm、285nm下切换波长，进行检测，具有12个共有峰，共有峰峰面积之和占总峰面积90％以上，归属于骨液的指纹图谱具有3个共有峰，归属于党参的指纹图谱具有2个共有峰，归属于黄芪的指纹图谱具有2个共有峰，归属于灵芝的指纹图谱具有2个共有峰，归属于大枣的指纹图谱具有2个共有峰，归属于黑木耳的指纹图谱具有1个共有峰，建立的标准指纹图谱有12个共有峰，信息量较大，能较完整的保留供试液中的化学成分。

具体地，在本发明实施例中，所述的标准指纹图谱在254nm、 270nm、285nm下切换波长，检测到的12个共有峰的保留时间分别为：(1)5.373～5.406、(2)5.721～5.741、(3)6.826～6.855、 (4)8.011～8.045、(5)9.140～9.174、(6)10.372～10.397、(7) 11.220～11.259、(8)14.127～14.159、(9)16.213～16.244、(10) 18.475～18.519、(11)19.767～19.812、(12)44.546～44.617。

需要补充说明的是，在本发明实施例中，所述共有峰的保留时间是通过以批号为2006021的强骨生血口服液为参照图谱S1计算得出。

具体地，在本发明实施例中，所述强骨生血口服液第一指纹图谱与所述强骨生血口服液标准指纹图谱的相似度为0.944～0.998。

需要补充说明的是，在本发明实施例中，通过中药指纹图谱相似度评价软件，根据15批次由所述强骨生血口服液第一指纹图谱的共有峰确定的第一特征图谱，制定标准特征图谱，所述标准特征图谱具有11个特征峰，以批号为2006021的强骨生血口服液为参照图谱S1，各特征峰的保留时间和相对标准偏差为：

1号峰：保留时间5.721±0.020，相对标准偏差为0.35％；

2号峰：保留时间6.826±0.029，相对标准偏差为0.42％；

3号峰：保留时间8.011±0.034，相对标准偏差为0.43％；

4号峰：保留时间9.140±0.034，相对标准偏差为0.37％；

5号峰：保留时间10.372±0.025，相对标准偏差为0.24％；

6号峰：保留时间11.220±0.039，相对标准偏差为0.35％；

7号峰：保留时间14.127±0.032，相对标准偏差为0.23％；

8号峰：保留时间16.213±0.031，相对标准偏差为0.19％；

9号峰：保留时间18.475±0.044，相对标准偏差为0.24％；

10号峰：保留时间19.767±0.045，相对标准偏差为0.23％；

11号峰：保留时间44.546±0.071，相对标准偏差为0.16％。

更为具体地阐述，所述标准指纹图谱中各峰的优选保留时间分别为：(1)5.340～5.406、(2)5.701～5.741、(3)6.797～6.855、 (4)7.977～8.045、(5)9.106～9.174、(6)10.347～10.397、(7) 11.181～11.259、(8)14.095～14.159、(9)16.182～16.244、(10)18.431～18.519、(11)19.722～19.812、(12)44.475～44.617。

具体地，在本发明实施例中，步骤“制备第二对照品溶液”与步骤“制备第一对照品溶液”相同。

更为具体地阐述，“制备第二对照品溶液”具体为：用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含 0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第二对照品溶液。

具体地，在本发明实施例中，步骤“制备第二供试品溶液”与步骤“制备第一供试品溶液”相同。

更为具体地阐述，“制备第二供试品溶液”具体为：量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第二供试品溶液。

具体地，在本发明实施例中，步骤“制定强骨生血口服液第二指纹图谱”的高效液相色谱分析的具体条件与步骤“制定强骨生血口服液第一指纹图谱”的高效液相色谱分析的具体条件相同。

需要补充说明的是，在本发明实施例中，通过中药指纹图谱相似度评价软件，根据15批次由所述强骨生血口服液第二指纹图谱的共有峰确定第二特征图谱，将所述第二特征图谱与所述标准指纹图谱比较，保留时间在±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液。

本发明提供的强骨生血口服液的质量检测方法，其具体操作步骤或工作原理如下：

用体积百分比浓度为50％～100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第一对照品溶液，量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第一供试品溶液，分别精密吸取等量的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第一指纹图谱，根据所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定强骨生血口服液标准指纹图谱，用体积百分比浓度为50％～ 100％甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第二对照品溶液，量取强骨生血口服液5mL，置 50mL容量瓶中，加0％～50％甲醇或0％～50％乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第二供试品溶液，分别精密吸取等量的所述第二对照品溶液和所述第二供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第二指纹图谱，将强骨生血口服液第二指纹图谱与标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液，通过中药指纹图谱相似度评价软件，根据15批次由所述强骨生血口服液第二指纹图谱的共有峰确定第二特征图谱，将所述第二特征图谱与所述标准指纹图谱比较，保留时间在±5％以内的为检测合格的所述第二供试品溶液，本发明提供的高效液相色谱指纹图谱检测方法精密度较高、稳定性较好，分析时间较短，具有一定的专属性，测得指纹图谱中各特征峰分离度较好，且强骨生血口服液指纹图谱和强骨生血口服液中间体指纹图谱具有较好的相关性，强骨生血口服液中间体及其成品指纹图谱的应用可加强其生产过程中的质量可控性，强骨生血口服液指纹图谱的应用能较全面反映其生产工艺是否均一稳定，有利于保证强骨生血口服液的质量稳定性和临床疗效，本发明提供的方法可有效保障从中药材原料到终端制剂的全过程质量控制。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (5)

1.一种强骨生血口服液的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

制备第一对照品溶液：用体积百分比浓度为50%～100%甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第一对照品溶液；

制备第一供试品溶液：量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0%～50%甲醇或0%～50%乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第一供试品溶液；

制定强骨生血口服液第一指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第一指纹图谱，所述高效液相色谱分析的具体条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；流动相为有机相A与水相B组成的梯度洗脱液，有机相A为甲醇或乙腈，水相B为体积百分比浓度为0.2%的甲酸溶液；检测波长为254nm、270nm、285nm三个波长，检测波长的切换时间为0min、8min、25min；柱温为20～40℃；流速0.8mL/min～1.2mL/min；分析时间为55min；采用梯度洗脱：

时间/min 流动相A/％ 流动相B/％ 0~8 5~7 95~93 8~25 7~12 93~88 25~55 12~70 88~30

吸取的所述第一对照品溶液和所述第一供试品溶液各为10μl；

制定强骨生血口服液标准指纹图谱：根据所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定强骨生血口服液标准指纹图谱；

制备第二对照品溶液：用体积百分比浓度为50%～100%甲醇将毛蕊异黄酮葡萄糖苷配制成每1mL含0.001～0.004mg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的第二对照品溶液；

制备第二供试品溶液：量取强骨生血口服液5mL，置50mL容量瓶中，加0%～50%甲醇或0%～50%乙醇至50mL刻度处，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，制得第二供试品溶液；

制定强骨生血口服液第二指纹图谱：分别精密吸取等量的所述第二对照品溶液和所述第二供试品溶液，注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经测定，得强骨生血口服液第二指纹图谱，制定强骨生血口服液第二指纹图谱的高效液相色谱分析的具体条件与制定强骨生血口服液第一指纹图谱的高效液相色谱分析的具体条件相同；

将强骨生血口服液第二指纹图谱与标准指纹图谱进行比较处理，保留时间±5%以内的为检测合格的所述第二供试品溶液;

所述的强骨生血口服液包括如下重量份的组分：骨液600～700、党参40～50、黄芪70～80、灵芝10～20、大枣30～40、黑木耳10～20。

2.根据权利要求1所述的强骨生血口服液的质量检测方法，其特征在于，步骤“制定强骨生血口服液标准指纹图谱”具体为：根据15批次所述强骨生血口服液第一指纹图谱制定所述强骨生血口服液标准指纹图谱。

3.根据权利要求2所述的强骨生血口服液的质量检测方法，其特征在于，所述的标准指纹图谱在254nm、270nm、285nm下切换波长，检测到的11个共有峰的保留时间分别为：

1号峰：保留时间5.721～5.741min；

2号峰：保留时间6.826～6.855 min；

3号峰：保留时间8.011～8.045 min；

4号峰：保留时间9.140～9.174 min；

5号峰：保留时间10.372～10.397 min；

6号峰：保留时间11.220～11.259 min；

7号峰：保留时间14.127～14.159 min；

8号峰：保留时间16.213～16.244 min；

9号峰：保留时间18.475～18.519 min；

10号峰：保留时间19.767～19.812 min；

11号峰：保留时间44.546～44.617 min。

4.根据权利要求3所述的强骨生血口服液的质量检测方法，其特征在于，所述强骨生血口服液第一指纹图谱与所述强骨生血口服液标准指纹图谱的相似度为0.944～0.998。

5.根据权利要求4所述的强骨生血口服液的质量检测方法，其特征在于，所述第一指纹图谱的共有峰具有11个特征峰，各特征峰的保留时间和相对标准偏差为：

1号峰：保留时间5.721±0.020 min，相对标准偏差为0.35%；

2号峰：保留时间6.826±0.029 min，相对标准偏差为0.42%；

3号峰：保留时间8.011±0.034 min，相对标准偏差为0.43%；

4号峰：保留时间9.140±0.034 min，相对标准偏差为0.37%；

5号峰：保留时间10.372±0.025 min，相对标准偏差为0.24%；

6号峰：保留时间11.220±0.039 min，相对标准偏差为0.35%；

7号峰：保留时间14.127±0.032 min，相对标准偏差为0.23%；

8号峰：保留时间16.213±0.031 min，相对标准偏差为0.19%；

9号峰：保留时间18.475±0.044 min，相对标准偏差为0.24%；

10号峰：保留时间19.767±0.045 min，相对标准偏差为0.23%；

11号峰：保留时间44.546±0.071 min，相对标准偏差为0.16%。

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