CN112789032A - 包含内含药物的脂质体组合物及铂制剂的组合医药 - Google Patents
包含内含药物的脂质体组合物及铂制剂的组合医药 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112789032A CN112789032A CN201980064960.5A CN201980064960A CN112789032A CN 112789032 A CN112789032 A CN 112789032A CN 201980064960 A CN201980064960 A CN 201980064960A CN 112789032 A CN112789032 A CN 112789032A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liposome
- aqueous phase
- drug
- topotecan
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1273—Polymersomes; Liposomes with polymerisable or polymerised bilayer-forming substances
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/28—Compounds containing heavy metals
- A61K31/282—Platinum compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明的课题在于提供一种将脂质体内含药物的脂质体组合物及铂制剂组合而获得的医药。根据本发明,提供如下医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,所述(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
Description
技术领域
本发明涉及将内含药物的脂质体组合物及铂制剂组合而同时或逐次给药的医药。
背景技术
在化学疗法中,对利用脂质体组合物使药物聚集在癌等疾病部位并经长期间使其曝露的疗法进行了很多探讨。
在专利文献1及非专利文献1中记载有在包含鞘磷脂和胆固醇的脂质体中内含拓扑替康(topotecan)而得到的脂质体。在专利文献2中记载有在包含二氢鞘磷脂和胆固醇的脂质体中内含拓扑替康而得到的脂质体。
在专利文献3中记载有一种制剂,其为适合于提高喜树碱的稳定性的脂质体喜树碱制剂,其包含(a)被囊封于脂质体中的喜树碱、(b)位于脂质体的外部且pH为小于4.5或为4.5的第1溶液及(c)位于脂质体内部的第2溶液。并且,记载有脂质体包含二氢鞘磷脂及胆固醇的内容。
在专利文献4中记载有一种***,其为将两亲性药剂有效地填充于脂质体中的***,其包含如下工序:在铵化合物或铵盐的存在下调整脂质体悬浮液,并将上述悬浮液用缓冲剂或盐溶液进行稀释,对内部水相与外部水相之间赋予从内侧朝向外侧的铵梯度和脂质体的内侧的pH比外侧的pH位于酸性侧的pH梯度。
在专利文献5中记载有一种脂质体,该脂质体在硫酸铵的存在下使拓扑替康内含于包含纯化氢化大豆磷脂或鞘磷脂、胆固醇及亲水性聚合物衍生物脂质的脂质体而得到。
在非专利文献2中记载有如下内容:作为伊立替康(irinotecan)(拓扑异构酶I抑制剂、CPT-11)的活性代谢物的SN-38与奥沙利铂的组合与单独的奥沙利铂相比将肿瘤生长抑制了2倍以上。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:美国专利第7,060,828B2号公报
专利文献2:美国专利第7,811,602B2号公报
专利文献3:日本特表2008-519045号公报
专利文献4:日本特开平2-196713号公报
专利文献5:美国专利第6,355,268B2号公报
非专利文献
非专利文献1:AACR-EORTC International Conference,San Francisco,California,October 22-26,2007,#C113 A Pharmacokinetics Study of a NovelSphingomyelin/Cholesterol Liposomal Topotecan and Non-Liposomal Topotecan inRats,William C.Zamboni et al.
非专利文献2:Clin Cancer Res.1999May;5(5):1189-96.Cellularpharmacology of the combination of the DNA topoisomerase I inhibitor SN-38andthe diaminocyclohexane platinum derivative oxaliplatin.Nadia Zeghari-Squalliet al.
发明内容
发明要解决的技术课题
在上述专利文献1、2及3以及非专利文献1中记载有如下内容:通过将拓扑替康或喜树碱内含于包含鞘磷脂或二氢鞘磷脂的脂质体中来抑制拓扑替康在血中的流出,通过提高AUC(Area Under the blood concentration-time Curve:血中浓度-时间曲线下的面积)来实现药效的提高。但是,由于未进行构成脂质体的脂质组成及使拓扑替康沉淀的盐的组成的最优化,因此AUC的提高并不充分,要求进一步的改善。
本发明的课题为,在同时使用内含药物的脂质体组合物与铂制剂时,将以不同机制发挥作用的两种以上的抗癌剂进行组合而提供治疗效果高、副作用少的两种以上的抗癌剂的组合。
用于解决技术课题的手段
本发明人等反复进行了深入探讨的结果,
发现了将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药的医药解决上述课题,并完成了本发明,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
本发明提供以下。
[1]一种医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
[2]如[1]所述的医药,其中药物为拓扑替康或其盐、阿霉素(doxorubicin)或其盐、伊立替康或其盐、舒尼替尼(sunitinib)或其盐。
[3]如[1]或[2]所述的医药,其中内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.6以上且1.8以下。
[4]如[1]至[3]中任一项所述的医药,其中经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺为经聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺。
[5]如[1]至[4]中任一项所述的医药,其中脂质体膜的构成成分中的经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺的比率为2~10摩尔%。
[6]如[1]至[5]中任一项所述的脂质体组合物,其中脂质体膜的构成成分中的胆固醇类的比率为35~43摩尔%。
[7]如[1]至[6]中任一项所述的医药,其粒径为150nm以下。
[8]如[1]至[7]中任一项所述的医药,其中外水相的pH为5.5~8.5。
[9]如[1]至[8]中任一项所述的医药,其中二氢鞘磷脂包含碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的二氢鞘磷脂,内含药剂为拓扑替康或其盐。
[10]如[1]至[9]中任一项所述的医药,其中药物从铵浓度为1mmol/L以下的血浆中的脂质体中的释放速度在37℃下为20%/24小时以下,药物从铵浓度为4~6mmol/L的血浆中的脂质体中的释放速度在37℃下为60%/24小时以上。
[11]如[1]至[10]中任一项所述的医药,其中铂制剂包含选自卡铂、顺铂、奥沙利铂及奈达铂中的至少一种。
[12]如[1]至[11]中任一项所述的医药,其中给药为治疗上显示出相乘作用的给药剂量及给药期间。
[13]如[1]至[12]中任一项所述的医药,其中给药的对象对拓扑替康具有耐性。
[14]一种治疗方法,其为对象的疾病(优选为癌)的治疗方法,其中在对象在治疗上显示出相乘作用的有效给药剂量及给药期间内,将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
[15]一种医药,其将用于治疗对象的疾病(优选为癌)的(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
[16]一种医药的使用,其将用于制造医药的(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
[17]一种医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含铵盐,二氢鞘磷脂具有碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的二氢鞘磷脂。
[18]一种医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物。
发明效果
本发明的医药通过将脂质体组合物及铂制剂组合而同时或逐次给药,具有对癌的治疗或预防中的至少一种效果。
并且,本发明的医药即使为低给药剂量也具有肿瘤增殖抑制效果,因此对于包括患者的对象而言,能够进行不仅安全性高而且身体的负担少且便利性也高这样的理想的治疗。
附图说明
图1表示使用A2780皮下移植荷癌小鼠模型的药效试验中的存活曲线。
图2表示使用A2780皮下移植荷癌小鼠模型的药效试验中的存活曲线。
具体实施方式
以下,对本发明进行详细说明。
本说明书中,只要没有特别指定,则%表示质量百分比。本说明书中,关于组合物中的各成分的量,当在组合物中存在多种对应于各成分的物质时,只要没有特别指定,则指存在于组合物中的对应的多种物质的合计量。
本说明书中,只要没有特别指定,则各术语具有如下含义。
“~”表示将其前后所记载的数值分别作为最小值及最大值而包含的范围。
对象包含人及人以外的哺乳动物。作为人以外的哺乳动物,例如可以举出猴子、狗、猫、牛、马、小鼠、大鼠等。
处置可以为可实现所期望的治疗效果、例如状态进展的抑制或延迟的任意的处置及疗法即可,包含进展速度的降低、进展速度的停止、状态的好转、状态的治癒或减缓(不论局部减缓或完全减缓均可)、状态中的1个或多个症状和/或征兆的预防、延迟、减轻或停止、或者对象的存活在未进行处置下比预测的寿命得到延长。
处置还包含预防。例如,通过对癌容易发作或复发或者有发作或复发的风险的对象进行处置,能够预防或能够延迟对象中的癌的发作或复发。
处置能够包含包括癌的完全减缓在内的癌生长的抑制和/或癌转移的抑制。癌的生长是指癌变为更发达的形态。作为用于测量癌生长的抑制的指标,可以举出癌细胞存活的减少、肿瘤体积或形态的减小(例如,使用计算机断层摄影(CT)、超声波检查或其他图像诊断方法来确定)、肿瘤生长的延迟、肿瘤脉管结构的破坏、延迟型过敏症皮肤试验成绩的改善、细胞溶解性T-淋巴球活性的增加及肿瘤特异性抗原水平的降低等。
本发明中,将肿瘤、恶性肿瘤、癌、恶性新生物、癌瘤、肉瘤等统称并表现为“肿瘤”或“癌”。并且,“肿瘤”或“癌”包含癌的治疗后复发的“肿瘤”或“癌”。“肿瘤”包含恶性或良性的所有新生物细胞生长及增殖、以及癌前性及癌性细胞及组织。
“有效量”是为了达成所期望的治疗性或预防性结果而所需要的给药剂量,包含给药的时间、量。本发明的医药的“有效量”可根据对象(或个体)的疾病状态、年龄、性别及体重以及在对象(或个体)中引起所期望的反应的医药的能力等而有所变动。
“同时给药”是指以约10分钟、约5分钟或约1分钟以内中的任一个等约15分钟以内的时间间隔给药组合疗法中的第1疗法和第2疗法。当同时给药第1疗法和第2疗法时,既能够将第1疗法及第2疗法含于相同的组合物(例如,包含第1疗法及第2疗法这两者的组合物)中,也能够含于不同的组合物中(例如,将第1疗法含于1个组合物中且将第2疗法含于另一组合物中)。
“逐次给药”这一术语是指以约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟或比其长的时间(1天、2天、3天、1周、2周、3周等)中的任一个等超过约15分钟的时间间隔给药组合疗法中的第1疗法及第2疗法。本发明中,逐次给药既能够首先给药第1疗法,也包含首先给药第2疗法的情形。并且,本发明中,逐次给药还包含在实施第1疗法之后(规定的时间之后(例如,1周后))实施第2疗法的情形。将第1疗法和第2疗法含于不同的组合物中,能够将这些含于相同的包装(package)或试剂盒(kit)中,也能够含于不同的包装或试剂盒中。
“血中滞留性”是指在给药了脂质体组合物的对象中被囊封于脂质体中的状态的药物存在于血液中的性质。
“脂质体的平均粒径”只要没有特别指定,则指使用动态光散射法测量的平均粒径(优选为累积(cumulant)平均粒径)。作为使用动态光散射的市售的测量装置,可以举出浓厚系粒径分析仪FPAR-1000(Otsuka Electronics Co.,Ltd.制造)、NANOTRAC UPA(NikkisoCo.,Ltd.制造)及Nanosizer(Malvern公司制造)等。也能够利用各制造商的测量装置固有的转换式来计算脂质体的体积平均粒径或数量平均粒径。在测量100nm附近的粒子时,以静态光散射法等无法准确地掌握粒子的分布,优选为基于动态光散射法的测量。
(本发明的医药)
以下,对本发明进行详细说明。
本发明的医药的第一形态为如下医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
本发明的医药的第二形态为如下医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含铵盐,二氢鞘磷脂具有碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的二氢鞘磷脂。
本发明的医药的第三形态为如下医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,该(A)脂质体组合物包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物。
以下的与本发明有关的说明适用于本发明的医药的第一至第三形态。并且,本发明包含通过基于以下的与本发明有关的说明的本发明的一形态的变形和/或组合而产生的方式。
((A)脂质体组合物)
脂质体是由使用脂质的脂质双层膜形成的闭锁小胞体,在该闭锁小胞的空间内具有水相(内水相)。内水相中包含水等。脂质体通常以分散于闭锁小胞体外的水溶液(外水相)的状态存在。本发明中,脂质体组合物是指包含脂质体及脂质体外所包含的水溶液、成分等的组合物。脂质体可以为单一层状物(single lamellar)(也被称为单层层状物(single layer lamellar)或单层状物(unilamellar),为双层膜为一层的结构。),也可以为多层层状物(multilayer lamellar)(也被称为多层状物(multilamellar),为洋葱状形状的多个双层膜的结构,各个层由水样层隔开。),但本发明中,从医药用途中的安全性及稳定性的观点而言,优选为单一层状物的脂质体。“内含”是指对于脂质体而言,药物呈包含于内水相中的形态。
脂质体的平均粒径为10nm~1000nm,优选为20nm~500nm,更优选为30~300nm,进一步优选为30nm~200nm,更进一步优选为150nm以下,例如30nm~150nm,尤其优选为70~150nm。脂质体优选为呈球状或接近其的形态。
当期待EPR效果(Enhanced permeability and retention effect(渗透性增强和滞留效果))时,关于脂质体的大小(平均粒径),实质上直径优选为50~200nm,实质上直径更优选为50~150nm,实质上直径进一步优选为50~100nm。“实质上”这一术语是指脂质体的个数的至少75%在指定的直径的范围内。所述至少75%更优选为至少80%,进一步优选为至少90%。
构成脂质体的脂质双层的成分(膜成分)包含脂质。作为脂质,能够任意地使用溶解于水溶性有机溶剂及酯系有机溶剂的混合溶剂中的脂质。作为脂质,具体而言,可以举出磷脂、磷脂以外的脂质、胆固醇类及这些的衍生物等。这些成分可以由单一种或多种成分构成。本发明中的脂质体包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分。
作为成为形成脂质双层膜的基材的脂质,可以举出具有两条酰基链的磷脂,例如磷脂酰胆碱(卵磷脂)、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸肌醇、鞘磷脂、心磷脂等天然或合成的磷脂、或者对这些进行氢化而成的物质(例如,氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC))等。
本发明中,作为成为形成脂质双层膜的基材的脂质,使用具有两条酰基链的磷脂、二氢鞘磷脂。通过使用二氢鞘磷脂,能够提高血中的脂质体的滞留性。
通过将二氢鞘磷脂用作脂质体膜的基材,能够提高该脂质体膜的阻隔性并防止内含的药物的漏出。推测这是因为,二氢鞘磷脂所具有的酰胺键具有强的氢键能,通过彼此强烈地相互作用,能够形成牢固且高阻隔性的膜。并且,还与本发明中同时使用的胆固醇的羟基强烈地相互作用,进而能够制造高阻隔性的膜。这成为以具有酯键的HSPC或卵磷脂等通用的脂质无法达成的功能。
并且,相对于具有酰胺键但在酰基链上具有不饱和键的鞘磷脂,全部饱和的二氢鞘磷脂,其熔点高且所形成的膜的运动性低,因此推测相对于鞘磷脂,二氢鞘磷脂也能够制造高阻隔性的膜。二氢鞘磷脂一般在分子内具有2个长链烷基,可以举出具有2个碳原子数16的长链烷基的二氢鞘磷脂,具有碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的二氢鞘磷脂,具有碳原子数16和碳原子数20~24的长链烷基的二氢鞘磷脂。
作为二氢鞘磷脂,在防止药物从脂质体中漏出的观点上,优选为使用具有碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的下述化合物。这是因为,碳原子数越多,熔点变得越高,能够制造高阻隔性的脂质体膜。
[化学式1]
作为二氢鞘磷脂,例如可以使用将源自天然物的鞘磷脂利用一般的方法还元而得到的二氢鞘磷脂,也可以使用通过合成而得到的二氢鞘磷脂。源自鸡蛋等天然物的二氢鞘磷脂中,一般具有2个碳原子数16的长链烷基的二氢鞘磷脂占据大部分,因此在可以得到高纯度的具有碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的二氢鞘磷脂的观点上,优选为使用通过化学合成而得到的二氢鞘磷脂。
脂质体膜的构成成分(构成脂质体的所有脂质)中的二氢鞘磷脂的比率优选为30~80摩尔%,更优选为40~70摩尔%,进一步优选为50~60摩尔%。
作为经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺中的亲水性高分子,例如可以举出聚乙二醇类、聚甘油类、聚丙二醇类、聚乙烯醇、苯乙烯-马来酸酐交替共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、合成聚氨基酸等。上述亲水性高分子分别能够单独使用或者组合使用2种以上。
在这些之中,从组合物的血中滞留性的观点而言,优选为聚乙二醇类、聚甘油类及聚丙二醇类,更优选为聚乙二醇(PEG)、聚甘油(PG)、聚丙二醇(PPG)及这些的衍生物。
从通用性及血中滞留性的观点而言,进一步优选为聚乙二醇(PEG)及其衍生物。作为聚乙二醇(PEG)的衍生物,可以举出甲氧基聚乙二醇等,但并不受特别限定。
聚乙二醇类的分子量并不受特别限定,为500~10,000道耳顿,优选为1,000~7,000道耳顿,更优选为2,000~5,000道耳顿。
二酰基磷脂酰乙醇胺中的酰基的碳原子数优选为16以上,例如优选为碳原子数16以上且30以下,更优选为碳原子数16以上且24以下,进一步优选为碳原子数20。
作为经聚乙二醇类修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺,例如可以举出1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰乙醇胺-PEG2000(Nippon Oil&Fats GmbH制造)、1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰乙醇胺-PEG5000(Nippon Oil&Fats GmbH制造)及二硬脂酰甘油-PEG2000(Nippon Oil&FatsGmbH制造)等1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇。
在脂质体膜的构成成分(构成脂质体的所有脂质)中,经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺的比率优选为1~15摩尔%,更优选为2~10摩尔%。
作为胆固醇类,能够举出将以环五氢菲(cyclopentahydrophenanthrene)为基本骨架,其一部分或所有的碳经氢化的胆固醇及其衍生物。例如,优选为胆固醇。若将脂质体的平均粒径微细化至100nm以下,则有时脂质膜的曲率能够得到提高。在脂质体中排列的膜的应变也变大。为了填平由脂质所引起的膜的应变(膜稳定化效果),添加胆固醇等为有效。
关于在脂质体中添加胆固醇,可期待添加通过填平脂质体的膜的间隙等来降低脂质体的膜的流动性。
脂质体膜的构成成分(构成脂质体的脂质)中的胆固醇的比率优选为20摩尔%~50摩尔%,更优选为30摩尔%~45摩尔%,进一步优选为35~43摩尔%。
在脂质体中,除了添加上述成分以外,为了改善血中滞留性而还可以添加亲水性高分子等、作为膜结构的稳定剂的脂肪酸或二乙酰磷酸酯等、作为抗氧化剂的α-生育酚等。本发明中,优选为不包含在医药用途中以静脉注射用途的使用未被认可的分散助剂等添加剂例如表面活性剂等。
(药物)
脂质体组合物包含内含药物的脂质体(以下,也称为本发明的脂质体组合物)。本发明的脂质体组合物根据需要包含医药学上允许的添加剂、溶剂等。
药物的种类并不受特别限定,能够使用以下例示的抗癌剂。
具体而言,可以举出如下:阿霉素、道诺霉素及表柔比星(epirubicin)等蒽环(anthracycline)系抗癌剂;
顺铂(cisplatin)及奥沙利铂(oxaliplatin)等顺铂系抗癌剂;
紫杉醇(paclitaxel)及多西他赛(docetaxel)等紫衫烷(taxane)系抗癌剂;
长春新碱(vincristine)及长春碱(vinblastine)等长春花生物碱(vincaalkaloid)系抗癌剂;
博莱霉素(bleomycin)等博来霉素系抗癌剂;
西罗莫司(sirolimus)等西罗莫司系抗癌剂;
拓扑替康(也称为nogitecan)、伊立替康、卡尼特素(karenitecin)(注册商标)(也称为BNP1350)、依喜替康(exatecan)、勒托替康(lurtotecan)、吉马替康(gimatecan)(也称为ST1481)及贝洛替康(belotecan)(也称为CKD602)等喜树碱系抗癌剂;
长春新碱等长春花生物碱系抗癌剂;以及
伊马替尼(imatinib)(Gleevec(注册商标))、依维莫司(everolimus)(Afinitor(注册商标))、埃罗替尼(erlotinib)(Tarceva(注册商标))、吉非替尼(gefitinib)(Iressa(注册商标))、舒尼替尼(sunitinib)(Sutent(注册商标))、索拉非尼(sorafenib)(Nexavar(注册商标))、达沙替尼(dasatinib)(Sprycel(注册商标))、他米巴罗汀(tamibarotene)(Amnola ke(注册商标))、维A酸(tretinoin)(Vesanoid(注册商标))、硼替佐米(bortezomib)(Velcade(注册商标))及拉帕替尼(lapatinib)(Tykerb(注册商标))等分子标的药。
在上述之中,优选为拓扑替康(也包含nogitecan)、阿霉素、伊立替康或舒尼替尼,更优选为拓扑替康。
作为拓扑替康,能够优选地使用
通用名:拓扑替康盐酸盐(Nogitecan Hydrochloride);
化学名:(+)-(4S)-10-[(dimethylamino)methyl]-4-ethyl-4,9-dihydroxy-1H-pyrano[3’,4’:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dionemonohydrochloride((+)-(4S)-10-[(二甲基胺基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3’,4’:6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮单盐酸盐),例如可以举出商品名Hycamtin(注册商标)。
药物也可以以盐的形态使用。
作为药物的盐,能够举出通常已知的氨基等碱性基、羟基及羧基等酸性基中的盐。
作为碱性基中的盐,例如可以举出与盐酸、氢溴酸、磷酸、硼酸、硝酸及硫酸等无机酸的盐;与甲酸、乙酸、乳酸、柠檬酸、草酸、反丁烯二酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、天冬胺酸、三氯乙酸及三氟乙酸等有机羧酸的盐;以及与甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、均三甲苯磺酸及萘磺酸等磺酸的盐。
作为酸性基中的盐,例如可以举出与钠及钾等碱金属的盐;与钙及镁等碱土金属的盐;铵盐;以及与三甲胺、三乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二乙基胺、二环己基胺、普鲁卡因、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙基胺、1-二苯羟甲胺及N,N’-二苄基乙二胺等含氮有机碱的盐等。
脂质体组合物中的药物的含量并不受特别限定,相对于脂质体组合物,优选为0.025~20mg/ml,更优选为0.25~10mg/ml。
在从脂质体中的释放速度、脂质体内部的浸透压或由沉淀的药物所引起的脂质体形状的观点上,相对于形成脂质体膜的脂质的内含于脂质体的药物量以摩尔比优选为0.1~1.5,更优选为0.2~0.3。
当相对于脂质的药物量的摩尔比过低时,相对于单位药物量的脂质体膜的面积变大,由此药物从脂质体中的释放速度变快,提高血中滞留性的功能受损。另一方面,当相对于脂质的药物量的摩尔比过高时,脂质体内部的浸透压因药物的溶解量增加而上升,从而脂质体被破坏,或者,当药物在脂质体内部沉淀时,沉淀的固形物生长为较大而脂质体形状变形。
(内水相中的硫酸铵)
本发明中的脂质体的内水相包含硫酸铵。并且,在作为本发明的第一形态的脂质体组合物中,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上,优选为0.4以上。内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比更优选为0.4以上且1.8以下,进一步优选为0.6以上且1.8以下。通过如上述那样设定内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比,能够抑制在血中药物从脂质体中漏出。
若内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比过低,则基于药物的硫酸盐的固形物的形成变得不完整,在脂质体内脂质体膜的透过性变高的溶解状态的药物的浓度升高,药物变得容易从脂质体中漏出,损害提高血中滞留性的效果。并且,若内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比过高,则脂质体内部的浸透压变高,导致脂质体结构的破坏,因此药物变得容易从脂质体中漏出,损害提高血中滞留性的效果。
并且,本发明中,脂质体的内水相中所包含的硫酸离子相对于脂质体组合物整体的硫酸离子的比率(硫酸离子的内水相率)优选为至少80%,更优选为90%以上,同时,脂质体的内水相中所包含的药物相对于脂质体组合物整体的药物的比率(药物的内水相率)优选为至少80%,更优选为90%以上。
脂质体中的药物浓度例如能够通过液相色谱/紫外可见吸光度检测法进行测量。并且,脂质体的内水相的硫酸离子浓度例如能够通过离子色谱进行测量。
(外水相的pH)
本发明的脂质体组合物能够包含内含药物的脂质体及分散上述脂质体的水性溶剂(外水相)。外水相的pH优选为中性,具体而言,优选为pH5.5~8.5左右。
若极度抑制药物的漏出,则还会抑制患部、尤其肿瘤部中的药物的漏出,存在无法得到所期待那样的药效的情况。
本发明的脂质体组合物兼备抑制在血中的药剂漏出,将充分量的药物递送至肿瘤部,进而在肿瘤部快速释放药物的惊人的机制。
在肿瘤部,具有相较于血中等其他内脏器官铵浓度高的性质(例如,Nanomedicine:Nanotechnology,Biology,and medicien,11(2015)1841-1850),本发明的脂质体组合物在如肿瘤那样谷氨酰胺代谢增强而铵浓度高的(5mmol/L)环境中,有时药物的释放变得非常大。
本发明的脂质体组合物中,药物从铵浓度为1mmol/L以下的血浆中的脂质体中的释放速度在37℃下为20%/24小时以下,药物从铵浓度为4~6mmol/L的血浆中的脂质体中的释放速度为60%以上,更优选为药物从铵浓度为1mmol/L以下的血浆中的脂质体中的释放速度在37℃下为15%/24小时以下,药物从铵浓度为4~6mmol/L的血浆中的脂质体中的释放速度为70%以上。
(脂质体组合物的制造方法)
本发明的脂质体组合物的制造方法并无特别限定,但是作为一例,能够通过如下工序制造:
(a)油相的制备;
(b)水相的制备;
(c)基于乳化的脂质体粒子形成;
(d)基于挤压机的粒度分级;
(e)基于透析的脂质体外水相液的置换;
(f)基于摇装(remote loading)使药物内含于脂质体粒子中;及
(g)基于透析的外水相药物的去除。
(d)基于挤压机的粒度分级可以进行,也可以不进行。
<(a)油相的制备>
在(a)油相的制备中,混合构成脂质体的各成分(经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类)和有机溶剂,并对混合物进行加温而溶解上述成分,由此能够制造油相。
在油相中所使用的有机溶剂并不受特别限定,例如能够使用与水任意地混合的水溶性有机溶剂。
作为水溶性有机溶剂,例如可以举出甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇及第三丁醇等醇类、甘油、乙二醇及丙二醇等二醇类、聚乙二醇等聚亚烷基二醇类等。在这些之中,优选为醇类。作为醇类,优选为选自乙醇、甲醇、2-丙醇及第三丁醇中的至少一种,更优选为选自乙醇、2-丙醇及第三丁醇中的至少一种,进一步优选为乙醇。
构成脂质体的各成分的浓度并不受特别限定,能够适当地进行调整。
<(b)水相的制备>
作为水相,能够使用水(蒸馏水、注射用水等)、生理盐水、各种缓冲液或糖类(蔗糖等)的水溶液及这些的混合物(水性溶剂)。本发明中,当通过后述的摇装使药物内含于脂质体粒子中时,作为水相,优选为使用硫酸铵水溶液。
作为缓冲液,并不限定于有机系、无机系,可以优选地使用在接近体液的氢离子浓度附近具有缓冲作用的缓冲液,可以举出磷酸缓冲液、托立斯缓冲液(tris buffer)、柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液及古德氏缓冲液(Good's buffers)等。脂质体的内水相可以为在制造脂质体时分散脂质体的水溶液,也可以为新添加的水、生理盐水、各种缓冲液或糖类的水溶液及这些的混合物。用作外水相或内水相的水优选为不包含杂质(尘土、化学物质等)。
生理盐水是指被调整为与人体等渗的无机盐溶液,可以进一步具有缓冲功能。作为生理盐水,可以举出含有0.9w/v%(质量/体积百分比)的氯化钠的盐水、PBS及托立斯缓冲生理盐水等。
本发明中,水相包含外水相及内水相这两者。
本发明中的外水相是指分散脂质体的水溶液。例如在注射剂的情况下,经小玻璃瓶(vial)或预填充式注射器(prefilled syringe)包装而保管的脂质体的分散液中占据脂质体的外侧的溶液成为外水相。并且,关于在利用所附带的分散用液或其他溶解液给药时的使用时分散的液体,也同样地,脂质体的分散液中占据脂质体的外侧的溶液成为外水相。
本发明中的内水相是指将脂质体的脂质双层膜隔开的闭锁小胞内的水相。
<(c)基于乳化的脂质体粒子形成>
在乳化工序中,能够混合油相和水相并搅拌包含脂质的水溶液来进行乳化。通过混合并搅拌脂质溶解于有机溶剂中的油相及水相来进行乳化,可制备油相及水相以O/W型(水包油型)乳化的乳化液。混合后,通过蒸发来去除源自油相的有机溶剂的一部分或全部,从而形成脂质体。或者,油相中的有机溶剂的一部分或全部在搅拌/乳化的过程中蒸发而形成脂质体。
作为搅拌的方法,为了粒子微细化而使用超声波或机械剪切力。并且,为了粒径的均匀化,能够进行通过一定孔径的过滤器的挤压机处理或微细流体均质机(microfluidizer)处理。若使用挤压机等,则能够将次生形成的多囊脂质体(multivesicular liposome)分解而制成单囊脂质体。
乳化工序只要为乳化的工序,则并不受限定,但优选为施加高剪切而在包含有机溶剂的乳化工序中进行微粒化的工序。高剪切以乳化机的搅拌叶片的圆周速度来定义,优选为5m/s~32m/s,尤其优选为20m/s~30m/s。根据需要,能够通过使在乳化工序中所使用的有机溶剂蒸发(进行去溶剂)来形成脂质体。
制造脂质体时的乳化工序的液温能够适当地进行调整,优选为将混合油相和水相时的液温设为所使用的脂质的相转移温度以上,例如当使用相转移温度为35~40℃的脂质时,优选为设为35℃~70℃。
在乳化工序中,可以使有机溶剂和水从包含脂质体的水溶液中蒸发。在此所说的蒸发可以为将源自油相的有机溶剂和源自水相的水的一部分或全部进行蒸发而强制地去除,也可以为源自油相的有机溶剂和源自水相的水的一部分或全部在搅拌/乳化的过程中自然蒸发。
蒸发的方法并不受特别限定,例如只要进行通过加热有机溶剂和水而使其蒸发的工序、在乳化后静置或持续进行缓慢的搅拌的工序及进行真空脱气的工序中的至少一个即可。
<(d)基于挤压机的粒度分级>
所得到的脂质体能够使用透析法、过滤法或挤压处理等而使粒径变得均匀。
挤压处理是指通过使脂质体通过具有细孔的过滤器而实施物理剪切力来进行微粒化的工序。在使脂质体通过时,通过将脂质体分散液及过滤器保温为构成脂质体的膜的相转移温度以上的温度,能够迅速地进行微粒化。
另外,基于挤压机的粒度分级可以进行,也可以不进行。
<(e)基于透析的脂质体外水相液的置换>
本发明中,当通过摇装而使药物内含于脂质体粒子时,可以通过透析来置换脂质体外水相液。作为透析液,能够使用0.05~5质量%的NaCl水溶液,但并不受特别限定。通过使用上述透析液对脂质体液进行透析,去除存在于外水相中的硫酸铵,能够得到由透析液置换了外水相的脂质体。
<(f)基于摇装法使药物内含于脂质体粒子中>
本发明中,优选为通过摇装法使药物内含于脂质体粒子中。
本发明中,摇装法是指制造未内含药物的空脂质体,通过向脂质体外液中加入药物而向脂质体中导入药物的方法。关于摇装的方法并不受特别限定,优选为使用铵盐的方法,更优选为使用硫酸铵的方法。
在摇装法中,加入到外液中的药物能动地转移到脂质体中而被导入脂质体中。作为其推动力(driving force),使用溶解度梯度、离子梯度、pH梯度等。例如,有使用隔着脂质体膜而形成的离子梯度将药物导入到脂质体内部的方法。例如,有利用Na+/K+浓度梯度,通过摇装法向预先形成的脂质体中添加药物的技术。
在离子梯度之中,一般使用质子浓度梯度,例如可以举出具有脂质体膜的内侧(内水相)pH低于外侧(外水相)pH的pH梯度的方式。具体而言,pH梯度能够通过铵离子梯度的浓度梯度等来形成。
<(g)基于透析的外水相药物的去除>
为了去除未包含于脂质体中的药物,内含有药物的脂质体液可以进行透析。例如,通过将规定浓度的蔗糖/组氨酸缓冲液用作透析液而对内含有药物的脂质体液进行透析,去除存在于外水相中的药物,能够得到由透析液置换了外水相的脂质体组合物。
<无菌过滤>
上述中所得到的脂质体组合物优选为进行无菌过滤。作为过滤的方法,能够使用中空丝膜、逆渗透膜或薄膜过滤器(membrance filter)等从包含脂质体的水溶液中去除不需要的物质。本发明中,优选为利用具有能够灭菌的孔径的过滤器(优选为0.2μm的过滤灭菌过滤器)进行过滤。
为了防止由脂质体的变形所引起的对平均粒径的影响,无菌过滤工序及后述的无菌填充工序优选为在构成脂质体的脂质的相转移温度以下进行。例如,当脂质的相转移温度在50℃附近时,优选为于0~40℃左右进行工序,更具体而言,优选为在5~30℃左右进行制造。
<无菌填充>
无菌过滤之后所得到的脂质体组合物优选为作为医疗用途而进行无菌填充。无菌填充的方法能够适用公知的方法。通过向容器中进行无菌填充,能够制备作为医疗用而优选的脂质体组合物。
(脂质体组合物)
本发明的脂质体组合物中,关于给药途径,可以包含医药上可接受的等渗剂、稳定化剂、抗氧化剂及pH调节剂中的至少一种。即,本发明的脂质体组合物能够作为医药组合物来提供。
作为等渗剂并不受特别限定,例如可以举出如氯化钠、氯化钾、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾之类的无机盐类、如甘油、甘露醇、山梨糖醇之类的多元醇类、如葡萄糖、果糖、半乳糖或蔗糖之类的糖类。
作为稳定化剂并不受特别限定,例如可以举出如甘油、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖或蔗糖之类的糖类。
作为抗氧化剂并不受特别限定,例如可以举出抗坏血酸、尿酸、生育酚同系物(例如,维生素E、生育酚α、β、γ、δ这4个异构体)半胱氨酸、EDTA(亚乙二胺四乙酸)等。稳定化剂及抗氧化剂分别能够单独使用或者组合使用2种以上。
作为pH调节剂,可以举出氢氧化钠、柠檬酸、乙酸、三乙醇胺、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等。
本发明的脂质体组合物可以含有医药上可接受的有机溶剂、胶原蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、海藻酸钠、水溶性葡聚糖、羧甲基淀粉钠、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、黄原胶、***胶、酪蛋白、明胶、琼脂、二甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白(HSA)、甘露醇、山梨糖醇、半乳糖、磷酸缓冲生理盐水(PBS)、氯化钠、糖类、活体内分解性聚合物、无血清培养基、作为医药添加物而可接受的添加物。
填充本发明的脂质体组合物的容器并不受特别限定,优选为氧透过性低的材质。例如,可以举出塑胶容器、玻璃容器、由将铝箔、铝蒸镀膜、氧化铝蒸镀膜、氧化硅蒸镀膜、聚乙烯醇、乙烯-乙烯醇共聚物、聚对苯二甲酸乙二酯、聚萘二甲酸乙二酯、聚偏二氯乙烯等作为阻气层而具有的层叠膜所形成的袋子等,根据需要,也能够通过采用使用着色玻璃、铝箔或铝蒸镀膜等的袋子等来遮光。
在填充脂质体组合物的容器中,为了防止由存在于容器内的空间部的氧所引起的氧化,优选为用氮等非活性气体来置换容器空间部及药液中的气体。例如,可以举出对注射液进行氮鼓泡(bubbling)并在氮氛围下向容器中进行填充。
作为本发明的脂质体组合物的给药途径,优选为非口服给药。例如,能够举出点滴等静脉内注射(静注)、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、眼内注射及髓腔内注射。作为给药方法,可以举出基于注射器或点滴的给药。
本发明的脂质体组合物的给药剂量及给药次数只要根据药物的种类、患者的状态等适当地设定即可,作为有效成分的药物质量,每天一般能够设定在0.01mg/kg~100mg/kg的范围。作为有效成分的药物质量,每次能够设定在2mg~10mg的范围。但是,并不限定于这些给药剂量。
((B)铂制剂)
在本发明中,使用铂制剂作为与内含药物的本发明的脂质体组合物组合而同时或逐次给药的医药。铂制剂是指将具有抗癌作用且包含铂(Pt)的化合物作为有效成分含有的制剂。铂制剂除了包含作为有效成分的铂(Pt)的化合物以外,还能够包含医药学上允许的添加剂、溶剂等。
作为本发明中优选的铂制剂,可列举卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、奈达铂(nedaplatin)、米铂(miriplatin)。在本发明中,铂制剂能够使用一种或多种。铂制剂能够通过购买市售品来获得。作为在本发明中优选的铂制剂的例子,可列举卡铂、顺铂、奥沙利铂及奈达铂。
此外,对铂制剂进行说明。可推测顺铂(CAS:15663-27-1)在睾丸肿瘤、膀胱癌、***癌、头颈部癌、非小细胞肺癌、食道癌、***、神经胚细胞瘤、胃癌、小细胞肺癌、骨肉瘤、肝癌、胆管癌等癌症种类中发挥效果。并且,可推测卡铂(CAS:41575-94-4)在头颈部癌、肺小细胞癌、睾丸肿瘤、卵巢癌、***、恶性淋巴瘤、小细胞肺癌、乳腺癌等癌症种类中发挥效果。
本发明中的铂制剂的给药剂量及给药次数根据药物的种类、患者的状态等适当地设定即可。例如,作为铂制剂的有效成分的药物质量,每1天通常能够设定在0.01mg/kg~100mg/kg的范围。作为有效成分的药物质量,每次能够设定在2mg~10mg的范围。并且,当使用市售品的铂制剂时,根据药品说明书中所记载的给药剂量及给药次数适当地设定即可。但是,并不限定于这些给药剂量。
在本发明中,可知将内含药物的脂质体组合物及铂制剂组合而同时或逐次给药,由此与各单剂(内含药物的脂质体组合物或铂制剂)相比,具有强的抗肿瘤效果(例如,肿瘤增殖抑制效果等)。
本发明的脂质体组合物与铂制剂的同时使用的作用机构如下推测,但并不限定于以下。
本发明的脂质体组合物兼备抑制在血中的药剂漏出,将充分量的药物递送至肿瘤部,进而在肿瘤部快速释放药物的惊人的机制。由于基于这些脂质体化的特长,推测与内含药剂相比,能够在肿瘤组织中实现长时间且高浓度的药剂接触。
另一方面,在伊立替康(拓扑异构酶I抑制剂)与铂制剂的同时使用的作用机制中,DNA拓扑异构酶I参与基于铂制剂的作为DNA交联键之一的DNA interstrand cross-links(DNA-ISC)的修复(非专利文献2)。当同时使用拓扑异构酶I抑制剂时,推测难以去除DNA-ISC,诱发细胞凋亡的细胞增加,从而发挥相乘性增殖抑制效果。
因此,在同时使用本发明的脂质体组合物和铂制剂时,认为能够更长时间且强烈地抑制DNA-ISC的修复,其结果,可推测本发明的医药为抗肿瘤效果显著提高且安全上的忧虑也低的医药。
本发明的医药为将内含药物的脂质体组合物及铂制剂组合而同时或逐次给药的医药,优选为能够用作抗癌剂。
作为本发明的医药的适用对象的癌的种类并不受特别限定,例如可以举出肺癌(尤其是小细胞肺癌)、卵巢癌、小儿固体肿瘤、子***、乳癌、***癌、子宫体癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌、胰脏癌、颈部扁平上皮癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大肠癌、肾细胞癌、非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤、泌尿上皮癌、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、成人T细胞白血病、骨髓转移癌、肉瘤、软组织肿瘤、慢性骨髓单球性白血病、何杰金氏淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤等。
耐性是癌细胞对抗癌剂显示出抵抗性(耐性),其指从治疗一开始抗癌剂就没有效果的自然耐性和在持续治疗的期间最初有效果的抗癌剂显示不出效果或效果减弱的状态。具体而言,表示初期对抗癌剂有反应,但在其后的治疗中显示出反应性的降低,或者在细胞在使用抗癌剂的治疗的过程中继续增殖的观点上对抗癌剂显示不出适当的反应的性质。
本发明的医药能够对拓扑替康耐性癌发挥优异的效果。乳癌耐性蛋白(BCRP)为ATP-结合盒(ABC)输运蛋白家族的成员。该输运蛋白从癌细胞诱导抗癌剂的流出,使细胞内的抗癌剂的浓度减小,因此使这些耐性癌细胞中的药剂的理想的抗癌效果减小或消失。推测本发明的医药聚集在肿瘤组织中,通过滞留的EPR效果,对肿瘤细胞达成高浓度且长期间的由拓扑替康的接触,由此能够对拓扑替康耐性癌发挥优异的效果。
(肿瘤体积)
本发明中,为了测量肿瘤体积,能够对成为模型的动物(优选为小鼠或大鼠)移植肿瘤。肿瘤体积的增殖抑制依赖于所使用的药物、构成脂质体的脂质等的组合及有效量。肿瘤体积的增殖抑制是指能够抑制肿瘤生长、或者能够达成肿瘤静止及实质上或完全的肿瘤退缩中的至少一个。
当将本发明的脂质体组合物给药给哺乳动物等对象时,对于模型动物,分配为处置组及对照组(control group),在肿瘤细胞移植的例如肿瘤细胞生长为100~1000mm以使肿瘤细胞固定之后能够开始给药。
例如,当模型动物为小鼠时,作为本发明的脂质体组合物的评价,能够对各组的小鼠,整体上每天测量体重,直至达到最低体重。
能够用游标卡尺(vernier)等测量肿瘤,直至采样时的最终屠宰、肿瘤达到2000mm3或动物死亡。哺乳动物对象中的肿瘤体积能够使用任意的在该领域中认可的方法来进行测量。
例如,能够利用游标卡尺的测量,并使用式:(a×b2)×0.5(式中,“a”为最大直径,“b”为短径的长度)来评价肿瘤体积。并且,在人的情况下,能够通过如计算机断层摄影法(CT)扫描、磁共振造影(MRI)扫描之类的图像诊断等方法来测量肿瘤体积。
实施例
以下,举出实施例对本发明进行具体的说明,但本发明并不受这些的任何限定。可理解本发明能够由本领域技术人员进行各种变更或修饰。这种变更或修饰只要不脱离本发明的范围,则这些包含于本发明中。只要没有特别记载,实施例中所使用的各种试剂使用了市售品。
SM表示鞘磷脂(Sphingomyelin)(COATSOME NM-10,NOF CORPORATION制造)。
鸡蛋来源DHSM表示通过将源自鸡蛋的SM进行氢化而得到的二氢鞘磷脂(Dihydrosphingomyelin)(对COATSOME NM-10(NOF CORPORATION制造)进行氢化而成的合成品)。该鸡蛋来源DHSM具有2个碳原子数16的烷基链的鸡蛋来源DHSM为整体的70~80%且剩余部分包含烷基链长不同的DHSM的混合物。
总合成DHSM表示以包含98%以上的具有碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的下述化合物的方式通过化学合成而制作的二氢鞘磷脂(Dihydrosphingomyelin)。
[化学式2]
作为PEG磷脂(表中,标记为PEG),使用了SUNBRIGHT DSPE-020CN(NOFCORPORATION制造,以下设为DSPE-PEG)。
作为胆固醇(表中,标记为Chol),使用了Cholesterol HP(NIPPON FINE CHEMICALCO.,LTD.制造)。
<比较例1~10>
(a)油相的制备
关于比较例1,将SM、PEG磷脂、胆固醇分别称量了11.52g、4.32g、4.32g。关于比较例2~10,以成为表1中所记载的比率的方式改变了SM或鸡蛋来源DHSM、PEG磷脂、胆固醇的量。将该脂质与381mL的乙醇进行混合并在65℃下溶解而制成了油相。
(b1)水相1的制备
将硫酸铵25.2g溶解于水1118.5g而制备出水相1。
(b2)水相2的制备
将硫酸铵5.04g溶解于水223.7g而制备出水相2。
(c)基于乳化的脂质体粒子形成
将在(b1)中所制备出的水相1加温至65℃,并添加在(a)中所制备出的油相总量之后,利用精密乳化分散机以圆周速度26m/s混合了60分钟。接着,添加室温的水相2之后,一边在65℃下加温一边以圆周速度0.1m/s持续搅拌,由此使有机溶剂和水蒸发,在溶液浓缩至600mL的时刻停止加温和搅拌而停止了蒸发。
(e)基于透析的脂质体外水相液的置换
作为透析液,使用了3.15质量%的NaCl水溶液。使用该透析液,在室温下通过交叉流过滤(cross flow filtration)对在(c)中所得到的液体去除存在于外水相中的硫酸铵,得到了由透析液置换了外水相的脂质体。
(f)基于摇装使拓扑替康内含于脂质体粒子中向拓扑替康盐酸盐(Biocompounds公司制造)中加入注射用水而设为5mg/mL。另外,一边充分搅拌液体一边添加8mol/L的HCl溶液,将pH调整为约3并使拓扑替康溶解。向该拓扑替康溶液中以1/1的容积比加入脂质体之后,在60℃下加温了60分钟。
(g)基于透析的外水相拓扑替康的去除
作为透析液,制备出由9.4质量%蔗糖、10mmol/L组氨酸构成的蔗糖/组氨酸缓冲液。使用该透析液,在室温下使用交叉流过滤对在(f)中所得到的溶液去除存在于外水相中的拓扑替康,得到了由透析液置换了外水相的含有拓扑替康的脂质体。
<比较例11及12>
(a)油相的制备
关于比较例11,将鸡蛋来源DHSM及胆固醇分别称量了0.517g及0.233g。关于比较例12,以成为表1中所记载的比率的方式改变了SM及胆固醇的量。由于用DiI(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine Perchlorate(1,1’-双十八烷基-3,3,3’,3’-四甲基吲哚菁高氯酸盐))标记脂质体,因此称量相对于所有脂质成为0.2mol%的分量的DiI,并将其溶解于乙醇中。向该DiI乙醇溶液中加入乙醇,并以总量计设为1.5mL,混合所秤量的脂质和该有机溶剂,加温至65℃并溶解脂质而制成油相。
(b)水相的制备
将硫酸铵0.9g及蔗糖2.16g溶解于水13.5g而制备出水相。
(c)基于油相与水相混合的脂质体粒子形成
将在(b)中所制备出的水相加温至65℃,用磁力搅拌器进行搅拌(3000rpm)。用加热板将在(a)中所制备出的油相总量加温至65℃,用注射器抽吸油相总量并用加热板加温5分钟。向加温的水相中经30秒滴加油相。
(d)基于挤压机的粒度分级
通过在70℃的加温下使用挤压机(Mini Extruder,Avanti Polar Lipids公司制造)使在(c)中所得到的溶液依次通过过滤器而进行了粒度分级。
(e)基于透析的脂质体外水相液的置换
作为透析液,使用了0.09质量%的NaCl水溶液。使用该透析液对在(c)或(d)中所得到的液体在室温下进行透析,去除存在于外水相中的硫酸铵,得到了由透析液置换了外水相的脂质体。
(f)基于摇装使拓扑替康内含于脂质体粒子中
向拓扑替康盐酸盐(Biocompounds公司制造)中加入注射用水而设为5mg/mL。另外,一边充分搅拌液体一边添加8mol/L的HCl溶液,将pH调整为约3并使拓扑替康溶解。向该拓扑替康溶液中以1/1的容积比加入脂质体之后,在60℃下加温了120分钟。
(g)基于透析的外水相拓扑替康的去除
作为透析液,制备出由9.4质量%蔗糖及10mmol/L组氨酸构成的蔗糖/组氨酸缓冲液。使用该透析液对在(f)中所得到的溶液在室温下进行透析,去除存在于外水相中的拓扑替康,得到了由透析液置换了外水相的含有拓扑替康的脂质体。
<实施例1~8>
(a)油相的制备
关于实施例1,将鸡蛋来源DHSM、PEG磷脂(SUNBRIGHT DSPE-020CN、NOFCORPORATION制造,以下设为DSPE-PEG)及胆固醇分别称量了11.52g、4.32g及4.32g。关于实施例2~8,以成为表2中所记载的比率的方式改变了DHSM、DSPE-PEG及胆固醇的量。将该脂质与381mL的乙醇进行混合并在65℃下溶解而制成了油相。
(b1)水相1的制备
将硫酸铵25.2g溶解于水1118.5g而制备出水相1。
(b2)水相2的制备
将硫酸铵5.04g溶解于水223.7g而制备出水相2。
(c)基于乳化的脂质体粒子形成
将在(b1)中所制备出的水相1加温至65℃,并添加在(a)中所制备出的油相总量之后,利用精密乳化分散机以圆周速度26m/s混合了60分钟。接着,添加室温的水相2之后,一边在65℃下加温一边以圆周速度0.1m/s持续搅拌,由此使有机溶剂和水蒸发,在溶液浓缩至600mL的时刻停止加温和搅拌而停止了蒸发。
(e)基于透析的脂质体外水相液的置换
作为透析液,使用了3.15质量%的NaCl水溶液。使用该透析液,在室温下通过交叉流过滤(cross flow filtration)对在(c)中所得到的液体去除存在于外水相中的硫酸铵,得到了由透析液置换了外水相的脂质体。
(f)基于摇装使拓扑替康内含于脂质体粒子中
向拓扑替康盐酸盐(Biocompounds公司制造)中加入注射用水而设为5mg/mL。另外,一边充分搅拌液体一边添加8mol/L的HCl溶液,将pH调整为约3并使拓扑替康溶解。向该拓扑替康溶液中以1/1的容积比加入脂质体之后,在60℃下加温了60分钟。
(g)基于透析的外水相拓扑替康的去除
作为透析液,制备出由9.4质量%蔗糖、10mmol/L组氨酸构成的蔗糖/组氨酸缓冲液。使用该透析液,在室温下使用交叉流过滤对在(f)中所得到的溶液去除存在于外水相中的拓扑替康,得到了由透析液置换了外水相的含有拓扑替康的脂质体。
<实施例9及10>
(a)油相的制备
关于实施例9,将鸡蛋来源DHSM、DSPE-PEG、胆固醇分别称量了0.412g、0.153g及0.153g。关于实施例10,以成为表2中所记载的比率的方式改变了鸡蛋来源DHSM、DSPE-PEG及胆固醇的量。由于用DiI标记脂质体,因此称量相对于所有脂质成为0.2mol%的分量的DiI,并将其溶解于乙醇中。向该DiI乙醇溶液中加入乙醇,以总量计设为11.25mL,进而加入了乙酸乙酯3.75mL。混合所秤量的脂质和该有机溶剂,加温至60℃并溶解脂质而制成油相。
(b)水相的制备
将硫酸铵0.9g溶解于水40g而制备出水相。
(c)基于乳化的脂质体粒子形成
将在(b)中所制备出的水相加温至70℃,并添加在(a)中所制备出的油相总量之后(容积比:水相/油相=8/3),利用乳化机(Excel Auto homomixe ED-3,NISSEICorporation制造)以3000rpm(rotation per minute(每分钟转速):1/60s-1)混合了30分钟。接着,一边在65℃下加温一边以300rpm持续搅拌,由此使有机溶剂和水蒸发,在溶液浓缩至15g的时刻停止加温和搅拌而停止了蒸发。
(d)基于挤压机的粒度分级
通过在70℃的加温下使用挤压机(Mini Extruder,Avanti Polar Lipids公司制造)使在(c)中所得到的溶液依次通过过滤器而进行了粒度分级。
(e)基于透析的脂质体外水相液的置换
作为透析液,使用了0.09质量%的NaCl水溶液。使用该透析液对在(c)或(d)中所得到的液体在室温下进行透析,去除存在于外水相中的硫酸铵,得到了由透析液置换了外水相的脂质体。
(f)基于摇装使拓扑替康内含于脂质体粒子中
向拓扑替康盐酸盐(Biocompounds公司制造)中加入注射用水而设为5mg/mL。另外,一边充分搅拌液体一边添加8mol/L的HCl溶液,将pH调整为约3并使拓扑替康溶解。向该拓扑替康溶液中以1/1的容积比加入脂质体之后,在60℃下加温了120分钟。
(g)基于透析的外水相拓扑替康的去除
作为透析液,制备出由9.4质量%蔗糖、10mmol/L组氨酸构成的蔗糖/组氨酸缓冲液。使用该透析液对在(f)中所得到的溶液在室温下进行透析,去除存在于外水相中的拓扑替康,得到了由透析液置换了外水相的含有拓扑替康的脂质体。
[物性测量及评价]
<平均粒径>
本发明中,平均粒径是指通过动态光散射法测量的累积平均粒径。表中所记载的各实施例及比较例的平均粒径为通过附自动取样器的浓厚系粒径分析仪FPAR-1000AS(Otsuka Electronics Co.,Ltd.制造)并利用动态光散射法测量出的累积平均粒径。将测量结果示于表1及表2。
<拓扑替康浓度测量>
利用HPLC(高速液相色谱)装置Nexera-i LC-2040C(Shimadzu Corporation制造)测量样品,将定量了拓扑替康浓度的结果示于表1及表2。具体的测量方法如下。
在表1及2的脂质体中,除了比较例10以外,脂质体的内水相中所包含的药物相对于脂质体组合物整体的药物的比率为至少95%。比较例10为59%。
脂质体制剂中的拓扑替康量的测量
使用将所制备出的脂质体液溶解于甲醇中并进行过滤器过滤而得到的试样溶液及稀释拓扑替康盐酸盐而制备出的校准曲线标准溶液,通过液相色谱/紫外可见吸光度检测法进行了测量。
内水相拓扑替康浓度从总水相拓扑替康浓度减去外水相拓扑替康浓度而计算出。
各水相的拓扑替康浓度以如下方式进行了测量。
(总水相拓扑替康浓度)
称取脂质体分散液50μL,并加入甲醇950μL,用Vortex搅拌了1分钟。将该液体称取100μL,并加入Mili-Q水900μL,用Vortex搅拌1分钟,将其作为HPLC分析用样品。
(外水相拓扑替康浓度)
称取脂质体分散液50μL,加入9.4wt%蔗糖/10mM组氨酸水溶液450μL并进行稀释。向该溶液100μL中添加PBS 200μL并进行了倒置混合。对该分散液进行超离心分离(200,000g,20℃,60分钟),将上清液作为HPLC分析样品。超离心分离机使用了Hitachi,Ltd.制造的himac CP80WX。
a)校准曲线标准液的制备
量取拓扑替康盐酸盐约20mg,将其溶解于20mL的10质量%甲醇水溶液中。向该溶液中加入Mili-Q水而制备拓扑替康盐酸浓度0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0或100.0ppm的溶液,将其作为校准曲线标准液。
b)试样溶液的制备
(1)用MICROMAN(注册商标)称取试样(脂质体制剂溶液)约50μL,并向其中加入了用MICROMAN称取的约950μL的甲醇。此时,振荡约1分钟,以肉眼确认到溶液变为透明。
(2)用MICROMAN称取上述(1)的溶液100μL,并加入了用微量吸管称取的约900μL的Mili-Q水。将该溶液振荡约1分钟之后,进行约1分钟超声波处理,进而振荡了约10秒钟。
(3)将用DISMIC(注册商标)过滤器(孔径0.45μm)过滤上述(2)的溶液而得到的溶液作为试样溶液。
c)测量
通过液相色谱/紫外可见吸光度检测法在以下条件下进行了测量。
测量波长:382nm、管柱:资生堂CAPCELLPAK C18 ACR 3μm_3.0mm*75mm
管柱温度:40℃附近的一定温度
移动相A、B均为水/甲醇/三氟乙酸混合液,移动相的送液中通过改变移动相A及B的混合比来控制了浓度梯度。
在流量:每分钟1.0mL、注入量:10μL、自动取样器温度:25℃附近的一定温度下进行了测量。
<硫酸离子浓度测量>
利用离子色谱装置883Basic IC plus(Metrohm公司制造)测量样品,对硫酸离子浓度进行了定量。将测量了硫酸离子相对于拓扑替康的摩尔比的结果示于表1及表2。在表1及表2的脂质体中,脂质体的内水相中所包含的硫酸离子相对于脂质体组合物整体的硫酸离子的比率为至少90%。
内水相硫酸离子浓度从总水相硫酸离子浓度减去外水相硫酸离子浓度而计算出。各水相的硫酸离子浓度以如下方式进行了测量。
(总水相硫酸离子浓度)
称取脂质体分散液50μL,并加入甲醇950μL,实施15秒超声波处理而进行了混合。将该溶液称取90μL,并加入注射用水(HIKARI PHARMACEUTICAL CO.,LTD.制造)810μL,实施30秒超声波处理而进行了混合。向该溶液中添加乙酸乙酯900μL,并充分振荡而将脂质类提取到乙酸乙酯相中。称取适量的水相的溶液,将其用于离子色谱分析。
(外水相硫酸离子浓度)
称取脂质体分散液100μL,加入5%葡萄糖液(Otsuka Pharmaceutical Co.,Ltd.制造)900μL并进行了稀释。通过超滤对该溶液450μL进行处理,将滤液作为离子色谱分析样品。
离心条件为7400g、5℃、30分钟。离心分离机使用了Hitachi,Ltd.制造的himacCF15RXII。
<AUC的测量>
对给药了所制备出的含有拓扑替康的脂质体的小鼠(给药剂量以药物量计为1mg/kg),在给药后0.25、2、6、24小时进行了采血。血液以800×g离心10分钟,并回收了血浆。对所采取的血浆,使用液相色谱/质谱分析/质谱分析(LC/MS/MS)进行了拓扑替康浓度的定量。根据所得到的拓扑替康浓度变化,使用药物动态分析软件WinNonlin(注册商标)(Certara)计算出单次给药后的无限时间为止的血中浓度-时间曲线下面积(AUC)。AUC的单位为小时×ng/mL(表中,标记为hr*ng/mL)。另外,非专利文献1中所记载的脂质体的AUC被计算为68152小时×ng/mL。
[表1]
[表2]
由表1及表2的结果可知,在包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物中,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上的实施例1~10中,AUC的测量值成为200000以上,表示能够达成高的血中滞留性。
另一方面,在未使用二氢鞘磷脂的比较例1至8、内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比小于0.36的比较例9及10、未使用经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺的比较例11及12中,AUC的测量值小于200000,表示比实施例1至10差。
(拓扑替康内含脂质体组合物(以下,也称为本发明的拓扑替康内含脂质体组合物或Lipo)的组成)
拓扑替康盐酸盐20mg
HSPC(注1)95.8mg
MPEG-DSPE(注2)31.9mg
胆固醇31.9mg
硫酸铵20mg
L-组氨酸15.5mg
纯化白糖940mg
pH调节剂适量
(拓扑替康内含脂质体组合物的物性值)
确认到内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
铂制剂使用Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd.的卡铂。
10mM组氨酸/9.4%蔗糖溶液是在蔗糖9.4g/100mL的水溶液中组氨酸浓度成为10mM的溶液。
从Shonan Wako Junyaku公司获得了紫杉醇。
从ECACC细胞银行获得了A2780细胞。
(A2780皮下移植荷癌小鼠模型中的铂制剂同时使用产生的药效试验)
作为被测物质,使用了铂制剂(以下,也称为卡铂)、本发明的拓扑替康内含脂质体组合物及紫杉醇。对于卡铂的稀释,使用了Otsuka Pharmaceutical Factory,Inc生理食盐水(以下,也称为卡铂溶剂)。Lipo的稀释中使用了10mM组氨酸/9.4%蔗糖溶液(以下,也称为Lipo溶剂)。对于紫杉醇的稀释,使用了12.5%SIGMA Corporation的Cremophor/12.5%Shonan Wako Junyaku公司的乙醇/75%Otsuka Pharmaceutical Factory,Inc生理食盐水。
将作为人类卵巢癌细胞株的A2780细胞5×106个移植到雌性BALB/cAJcl-nu/nu小鼠的侧腹部皮下而形成了皮下肿瘤。从移植后7天起,进行基于卡铂单独、本发明的Lipo单独、卡铂与Lipo的同时使用、及卡铂与紫杉醇的同时使用的药剂处理,并对存活期间的影响进行了评价。当肿瘤达到2000mm3时及确认到显著的状态恶化时,进行安乐死处理,视为死亡。
卡铂溶剂和Lipo溶剂的组合群中,每周1次持续2周向腹腔内给药卡铂溶剂、经由尾静脉给药Lipo溶剂。卡铂单独群中,通过腹腔内给药每周1次给药了2周。关于Lipo单独群,通过尾静脉给药每周1次给药了2周。关于卡铂与Lipo的组合群,通过腹腔内给药将卡铂给药单次,通过尾静脉给药将Lipo给药单次。关于卡铂与紫杉醇的组合群,通过腹腔内给药将卡铂给药单次,通过尾静脉给药将紫杉醇给药单次。
作为群结构,设为:
群1为卡铂溶剂与本发明的拓扑替康内含脂质体组合物的溶剂的给药群、
群2为卡铂(80mg/kg)给药群、
群3为本发明的拓扑替康内含脂质体组合物(0.5mg/kg)的给药群、群4为卡铂(80mg/kg)与本发明的拓扑替康内含脂质体组合物(0.5mg/kg)的给药群
群5为卡铂(80mg/kg)与紫杉醇(20mg/kg)的给药群。
群1~3及群5为比较例,群4为实施例。将群构成及给药剂量示于表3。在表3中,Lipo表示本发明的拓扑替康内含脂质体组合物,腹表示腹腔内给药,尾表示尾静脉给药,一周1次x2表示一周1次给药2周,1次表示在试验期间给药1次。
将从药剂给药开始算起的中位数存活时间示于表4。并且,将各群的存活率的变化示于图1。
[表3]
[表4]
群 | 中位数存活时间(天) | 群个体数 | 由于状态恶化导致的死亡或安乐死措施个体数 |
1 | 7 | 8 | 0 |
2 | 10 | 8 | 1 |
3 | 17 | 8 | 0 |
4 | 24 | 8 | 0 |
5 | 9.5 | 8 | 5 |
群4与群1、群2、群3或群5相比,确认到显著的存活期间延长效果(P<0.05、分层对数秩(Log-rank)检定)。并且,在群5中,由于状态恶化导致的死亡或安乐死在8例中发生5例,而在群4中由于状态恶化导致的死亡或安乐死措施个体数为0。
由以上的结果可知,本发明的拓扑替康内含脂质体组合物通过与卡铂的同时使用,对本发明的拓扑替康内含脂质体组合物单独、卡铂单独或作为卵巢癌标准疗法的卡铂与紫杉醇同时使用显示显著的存活期间延长效果。并且,也能够确认到高的安全性。
(A2780皮下移植荷癌小鼠模型中的铂制剂同时使用产生的药效试验)
作为被测物质,使用了铂制剂(以下,也称为卡铂)、本发明的拓扑替康内含脂质体组合物及拓扑替康。对于卡铂及拓扑替康的稀释,使用了Otsuka PharmaceuticalFactory,Inc生理食盐水(以下,也称为卡铂溶剂)。Lipo的稀释中使用了OtsukaElectronics Co.,Ltd.的Otsuka糖液5%(以下,也称为Lipo溶剂)。
将作为人类卵巢癌细胞株的A2780细胞5×106个移植到雌性BALB/cAJcl-nu/nu小鼠的侧腹部皮下而形成了皮下肿瘤。从移植后7天起,进行基于卡铂单独、本发明的Lipo单独、拓扑替康单独、卡铂与Lipo的同时使用、及卡铂与拓扑替康的同时使用的药剂处理,并对存活期间的影响进行了评价。当肿瘤达到2000mm3时及确认到显著的状态恶化时,进行安乐死处理,视为死亡。
卡铂溶剂和Lipo溶剂的组合群中,每周1次持续2周向腹腔内给药卡铂溶剂、经由尾静脉给药Lipo溶剂。卡铂单独群中,通过腹腔内给药每周1次给药了2周。关于Lipo单独群,通过尾静脉给药每周1次给药了2周。关于卡铂与Lipo的组合群,通过腹腔内给药将卡铂一周1次给药2周,通过尾静脉给药将Lipo一周1次给药2周。关于卡铂与拓扑替康的组合群,通过腹腔内给药将卡铂给药单次,通过尾静脉给药将拓扑替康一天1次给药5天。
作为群结构,设为:
群1为卡铂溶剂与本发明的拓扑替康内含脂质体组合物的溶剂的给药群、
群2为卡铂(80mg/kg)给药群、
群3为本发明的拓扑替康内含脂质体组合物(0.5mg/kg)的给药群、
群4为拓扑替康(0.5mg/kg)给药群、
群5为卡铂(80mg/kg)与本发明的拓扑替康内含脂质体组合物(0.5mg/kg)的给药群、
群6为卡铂(80mg/kg)与拓扑替康(0.5mg/kg)的给药群。
群1~4及群6为比较例,群5为实施例。将群构成及给药剂量示于表5。在表5中,Lipo表示本发明的拓扑替康内含脂质体组合物,腹表示腹腔内给药,尾表示尾静脉给药,一周1次x2表示一周1次给药2周,1天1次x5表示1天1次给药5天,1次表示在试验期间给药1次。
将从药剂给药开始算起的中位数存活时间示于表6。并且,将各群的存活曲线示于图2。
[表5]
[表6]
群 | 中位数存活时间(天) | 群个体数 | 由于状态恶化导致的死亡或安乐死措施个体数 |
1 | 6.9 | 8 | 0 |
2 | 9.1 | 8 | 0 |
3 | 15.5 | 8 | 0 |
4 | 12.9 | 8 | 0 |
5 | 21.5 | 8 | 0 |
6 | 8.0 | 8 | 8 |
群5与群1、群2、群3、群4或群6相比,确认到显著的存活期间延长效果(P<0.05、分层对数秩检定)。并且,在群6中,由于状态恶化导致的死亡或安乐死在8例中发生8例,而在群5中由于状态恶化导致的死亡或安乐死措施个体数为0。
产业上的可利用性
本发明的医药作为用于对癌的预防或治疗的医药而有用。本发明的给药方法作为用于对癌的预防或治疗的医药的给药方法而有用。另外,本发明的治疗方法作为用于对癌的预防或治疗的治疗方法而有用。
Claims (13)
1.一种医药,其将(A)脂质体组合物及(B)铂制剂组合而同时或逐次给药,所述(A)脂质体组合物是包含经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺、二氢鞘磷脂及胆固醇类作为脂质体膜的构成成分的脂质体组合物,所述脂质体组合物内含药物,内水相包含硫酸铵,内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.36以上。
2.根据权利要求1所述的医药,其中,
药物为拓扑替康或其盐、阿霉素或其盐、伊立替康或其盐、舒尼替尼或其盐。
3.根据权利要求1或2所述的医药,其中,
内水相硫酸离子相对于总水相药物的摩尔比为0.6以上且1.8以下。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的医药,其中,
经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺为经聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的医药,其中,
脂质体膜的构成成分中的经亲水性高分子修饰的二酰基磷脂酰乙醇胺的比率为2~10摩尔%。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的脂质体组合物,其中,
脂质体膜的构成成分中的胆固醇类的比率为35~43摩尔%。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的医药,其粒径为150nm以下。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的医药,其中,
外水相的pH为5.5~8.5。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的医药,其中,
二氢鞘磷脂是包含碳原子数16和碳原子数18的长链烷基的二氢鞘磷脂,内含药剂为拓扑替康或其盐。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的医药,其中,
药物从铵浓度为1mmol/L以下的血浆中的脂质体中的释放速度在37℃下为20%/24小时以下,药物从铵浓度为4~6mmol/L的血浆中的脂质体中的释放速度在37℃下为60%/24小时以上。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的医药,其中,
所述铂制剂包含选自卡铂、顺铂、奥沙利铂及奈达铂中的至少一种。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的医药,其中,
所述给药为治疗上显示出相乘作用的给药剂量及给药期间。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的医药,其中,
所述给药的对象对拓扑替康具有耐性。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018186541 | 2018-10-01 | ||
JP2018-186541 | 2018-10-01 | ||
PCT/JP2019/038708 WO2020071349A1 (ja) | 2018-10-01 | 2019-10-01 | 薬物を内包するリポソーム組成物およびプラチナ製剤を含む組合せ医薬 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112789032A true CN112789032A (zh) | 2021-05-11 |
Family
ID=70054620
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201980064960.5A Pending CN112789032A (zh) | 2018-10-01 | 2019-10-01 | 包含内含药物的脂质体组合物及铂制剂的组合医药 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210213051A1 (zh) |
EP (1) | EP3861987A4 (zh) |
JP (1) | JP7057434B2 (zh) |
CN (1) | CN112789032A (zh) |
WO (1) | WO2020071349A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116763734A (zh) | 2017-03-31 | 2023-09-19 | 富士胶片株式会社 | 脂质体组合物的制造方法 |
JPWO2022250015A1 (zh) * | 2021-05-24 | 2022-12-01 | ||
TW202313031A (zh) * | 2021-05-24 | 2023-04-01 | 日商富士軟片股份有限公司 | 抗腫瘤劑 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060008909A1 (en) * | 2004-05-17 | 2006-01-12 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal formulations comprising dihydrosphingomyelin and methods of use thereof |
US20080075762A1 (en) * | 2001-10-03 | 2008-03-27 | Paul Tardi | Compositions for delivery of drug combinations |
US20110159080A1 (en) * | 2008-06-03 | 2011-06-30 | Colin Lowery | Composition comprising liposome-entrapped doxorubicin and methods of administration |
CN102764234A (zh) * | 2012-08-03 | 2012-11-07 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 一种盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂及其制备方法 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2566559A (en) * | 1951-09-04 | Preparation of agetals | ||
US2582242A (en) * | 1947-11-29 | 1952-01-15 | Johnson & Johnson | Cast for orthopedic use |
IL91664A (en) | 1988-09-28 | 1993-05-13 | Yissum Res Dev Co | Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release |
US6090407A (en) * | 1997-09-23 | 2000-07-18 | Research Development Foundation | Small particle liposome aerosols for delivery of anti-cancer drugs |
DK1121102T3 (da) | 1998-09-16 | 2003-08-11 | Alza Corp | Liposomindesluttede topoisomeraseinhibitorer |
ATE309787T1 (de) | 2000-06-30 | 2005-12-15 | Inex Pharmaceuticals Corp | Verbesserte liposomale camptothecine und deren verwendungen |
CA2584279C (en) * | 2004-11-05 | 2015-01-27 | Index Pharmaceuticals Corporation | Compositions and methods for stabilizing liposomal drug formulations |
RU2577683C2 (ru) * | 2010-12-27 | 2016-03-20 | Терумо Кабусики Кайся | Липосомная композиция и способ ее получения |
US10369104B2 (en) * | 2014-04-01 | 2019-08-06 | Children's Hospital Los Angeles | Targeted polymerized nanoparticles for cancer treatment |
ES2869283T3 (es) * | 2015-11-02 | 2021-10-25 | Fujifilm Corp | Agente terapéutico antitumoral que contiene composición de liposoma de gemcitabina y kit |
SG11201903615WA (en) * | 2016-11-02 | 2019-05-30 | Ipsen Biopharm Ltd | Treating gastric cancer using combination therapies comprising liposomal irinotecan, oxaliplatin, 5-fluoruracil (and leucovorin) |
CN116763734A (zh) * | 2017-03-31 | 2023-09-19 | 富士胶片株式会社 | 脂质体组合物的制造方法 |
-
2019
- 2019-10-01 CN CN201980064960.5A patent/CN112789032A/zh active Pending
- 2019-10-01 EP EP19869479.6A patent/EP3861987A4/en active Pending
- 2019-10-01 JP JP2020550444A patent/JP7057434B2/ja active Active
- 2019-10-01 WO PCT/JP2019/038708 patent/WO2020071349A1/ja unknown
-
2021
- 2021-03-31 US US17/219,064 patent/US20210213051A1/en active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080075762A1 (en) * | 2001-10-03 | 2008-03-27 | Paul Tardi | Compositions for delivery of drug combinations |
US20060008909A1 (en) * | 2004-05-17 | 2006-01-12 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal formulations comprising dihydrosphingomyelin and methods of use thereof |
US20110159080A1 (en) * | 2008-06-03 | 2011-06-30 | Colin Lowery | Composition comprising liposome-entrapped doxorubicin and methods of administration |
CN102764234A (zh) * | 2012-08-03 | 2012-11-07 | 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 | 一种盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
许磊磊等: "硫酸铵梯度法制备盐酸拓扑替康脂质体及其在大鼠体内的药动学", 《中国医药工业杂志》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3861987A4 (en) | 2021-09-15 |
TW202034912A (zh) | 2020-10-01 |
JP7057434B2 (ja) | 2022-04-19 |
JPWO2020071349A1 (ja) | 2021-09-02 |
WO2020071349A1 (ja) | 2020-04-09 |
EP3861987A1 (en) | 2021-08-11 |
US20210213051A1 (en) | 2021-07-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11446247B2 (en) | Liposome composition and pharmaceutical composition | |
AU2017350499B2 (en) | Liposomal formulation for use in the treatment of cancer | |
US20210213051A1 (en) | Combined pharmaceutical formulation comprising drug-containing liposome composition and platinum preparation | |
CN111632030A (zh) | 包含吉西他滨或其盐的脂质体组合物的制造方法 | |
EP3346989A1 (en) | Stable liposomal formulations of rapamycin and rapamycin derivatives for treating cancer | |
US20210100791A1 (en) | Combined pharmaceutical formulation comprising drug-containing liposome composition and immune checkpoint inhibitor | |
TWI837189B (zh) | 包含內含藥物之脂質體組成物及鉑製劑之組合醫藥 | |
EP3395370A1 (en) | Liposome and liposome composition |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40045737 Country of ref document: HK |