CN112771025B - 作为rock抑制剂的氘代化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)所示的化合物或药学可接受的盐，包含所述化合物的组合物，及其在制备用于抑制ROCK的药物中的用途。

Description

作为ROCK抑制剂的氘代化合物
本申请要求美国临时申请62/647,581和62/711,375的优先权，其全部内容通过引用整体并入本申请。
发明领域
本发明涉及可抑制Rho相关激酶(ROCK)活性的化合物或药学可接受的盐，以及作为药物用于治疗青光眼的应用。
发明背景
青光眼作为一种视神经病变是造成全球超6500万人不可逆失明的主要病因，预计到2020年将影响近8000万人，其特征为视网膜神经节细胞的进行性死亡致使视神经损伤，并最终导致视野丧失。当前普遍认为眼内压(IOP)升高是青光眼发生和发展的主要危险因素，而唯一的治疗措施是降低IOP。在健康人群中，房水(AH)主要通过小梁网(TM)的正常流出将IOP维持在正常范围内。在青光眼患者中，IOP的升高是由TM功能受损所致，如TM紧张度和僵硬度的增加以及细胞外基质沉积改变和Schlemm's管内壁渗透性的改变。
鉴于此，当前迫切需要新型青光眼治疗药物来有效靶向小梁通路。Rho相关激酶(ROCK)抑制剂代表了一类新的治疗青光眼的靶向治疗药物，如近期FDA批准的新型滴眼剂Rhopressa(netarsudil眼溶液)。ROCK包括ROCK1和ROCK2两种亚型，均为小GTP结合蛋白Rho下游作用底物，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。ROCK在包括TM在内的各组织中广泛表达，介导肌动蛋白应力纤维和粘着斑的装配，并多向调节重要的细胞功能，包括细胞收缩、运动性、形态、极性、***和基因表达。TM和Schlemm's管细胞中Rho/ROCK信号通路的激活致使肌球蛋白收缩、增强细胞外基质的产生、增加细胞僵硬度，导致AH外流量减少和IOP升高。相反，选择性ROCK抑制剂可降低细胞的收缩和僵硬度，降低纤维化相关蛋白的表达水平，使TM松弛、AH外流增加以及IOP降低。
因此，具有ROCK抑制活性的化合物将成为青光眼患者的成功治疗方案。虽然ROCK的抑制剂在文献中已有报道，但对新型ROCK、抑制剂的需求仍迫切，其在疗效、稳定性、选择性、安全性、药效学特征和药代动力学特征至少有一方面具有优势。基于此，本发明提出了一类新型ROCK抑制剂。
发明内容
发明涉及一类新型化合物、其药学可接受的盐及其药学组合物，以及作为药物的应用。
在一个方面，本发明提供式(I)所示的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中，
R1选自CH3、CH2D、CHD2和CD3；
R2选自CH3、CH2D、CHD2和CD3；
Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y9、Y10、Y11、Y12、Y14、Y15和Y16独立选自氢和氘；
每个Y8独立选自氢和氘，前提是Y8是相同的；
每个Y13独立选自氢和氘，前提是Y13是相同的；
前提是，式(I)所示的化合物至少含有一个氘原子。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包括式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
另一方面，本发明提供用于调节ROCK的方法，该方法包括对有需要的***或个体给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物，从而调节ROCK。
本发明还提供了治疗、改善或预防对抑制ROCK响应的病症的方法，包括给予有需要的***或个体有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物，并且任选地与第二治疗剂联合使用，治疗上述病症。
或者，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由ROCK介导的病症的药物中的用途。在特定实施例中，所述化合物可单独或与第二治疗剂联合使用治疗ROCK介导病症。
或者，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗ROCK介导病症。
特定的，其中所述病症包括但不仅限于，眼科疾病如青光眼、眼高压症或神经退行性眼病。
此外，本发明提供了治疗眼内压升高的方法，该方法包括给予有需要的***或个体有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物，并且任选地与第二治疗剂联合使用，治疗上述病症。
或者，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗眼内压升高病症的药物中的用途。在特定实施例中，所述化合物可单独或与第二治疗剂联合使用治疗眼部疾病。
特定的，眼病包括但不限于，青光眼、眼高压症或神经退行性眼病。
在使用本发明所述化合物的上述方法中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可给予包含细胞或组织的***，或包括哺乳动物个体，如人或动物个体在内的个体。
术语
除非另有定义，本专利使用的所有技术和科学术语与该领域专业人员通常理解的含义相同。除非另有说明，本专利参考的所有专利、专利申请、公开披露的资料等全文纳入参考文献。如本专利中同一术语有多个定义，以本节中的定义为准。
需要理解的是，前文的一般描述和后文的详细描述仅仅是示范性的和解释性的，对任何权利要求都无限制性。在本专利申请中，使用的单数包含复数，除非另有说明。需要注意的是，说明书和所附权利要求书中，单数形式指代如“一”、“一个”、“这个”，包含复数指代，除非文中另有说明。还需注意的是，“或”代表“和/或”，除非另有说明。此外，“包含”、“包括”等类似术语不是限制性的。
化学术语标准定义可参照参考书籍，包括Carey和Sundberg"ADVANCED ORGANICCHEMISTRY第4版."A(2000)和B(2001)卷，Plenum Press，纽约。除非另有说明，本专利使用的质谱、核磁共振、高效液相色谱、红外和紫外光谱和药理学常规技术是现有技术。除非有特别定义，本专利中的分析化学、有机合成化学、药物和制药化学中所涉及的命名、实验方法和技术均是已知的。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和给药，以及治疗患者。反应和纯化技术可参考制造商说明书，或参考已知常用技术，或参照本专利中描述方法实施。上述的技术和操作可运用已知常规的和本说明书中所引用文献的方法实施。在说明书中，基团和取代基可由该领域专业人员选择，以形成稳定结构和化合物。
当用化学式指代取代基时，化学式中的取代基从左至右书写与从右至左书写相同。例如，CH2O与OCH2相同。
这里所用的“任选地取代”包括未被取代或被取代。“取代”是指氢原子被一个取代基取代。需要注意的是，特定原子上的取代基是被其价态限制的。在定义部分，“Ci-j”是指包括起点和终点的范围，其中i和j都是整数，表示碳原子的数目。例如，C1-4，C1-10，C3-10等。
“氘”或“D”是指氢的同位素，其核包含一个质子和一个中子。当一个特定的位置被指定为氘时，那么应认为氘在这个位置的丰度大于其自然丰度。
“被氘取代”是指一个或多个氢原子被相应数量的氘原子替换。
“烷基”不论单独使用或与其他术语合用，是指具有特定碳原子数的分支和直链饱和脂肪族烃基团。除另有注明外，“烷基”是指C1-C6烷基。例如，“C1-6烷基”中的“C1-C6”指的是有1、2、3、4、5或6个碳原子的直线或分枝排列的基团。例如，“C1-8烷基”包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、庚基和辛基。
“环烷基”不论单独使用或与其他术语合用，是指单环或桥烃环体系。单环环烷基包含3-10个碳原子，无杂原子，无双键。单环***的实例包括丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。单环环烷基包含一个或两个亚烷基桥，每个亚烷基桥包含1、2或3个碳原子，它们连接环系上两个不相邻的碳原子。桥烃环体系的代表性例子包含，但不仅限于，双环[3.1.1]庚烷，双环[2.2.1]庚烷，双环[2.2.2]辛烷，双环[3.2.2]壬烷，双环[3.3.1]壬烷，双环[4.2.1]壬烷，三环[3.3.1.03,7]壬烷，和三环[3.3.1.13,7]癸烷(金刚烷)。单环和桥烃环可通过环系中任意合适的原子与母环相连。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“烷氧基”，其单独使用或与其他术语合用，是指与单个氧原子以单键相连的烷基。烷氧基与另一分子通过氧原子相连。烷氧基可以表示为-O-烷基。“C1-10烷氧基”是指含有1-10个碳原子的烷氧基，可为直链或分支结构。烷氧基包括但不仅限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。
“环烷氧基”，其单独使用或与其他术语合用，是指与单个氧原子以单键相连的环烷基。环烷氧基与另一分子通过氧原子相连。环烷氧基可以表示为-O-环烷基。“C3-10环烷氧基”是指含有3-10个碳原子的环烷氧基。环烷氧基包括但不仅限于，环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“药学上可接受的盐”是指与药学上可接受的无毒的碱或酸，包括无机或有机碱和无机或有机酸制成的盐。无机碱的盐可以选自，例如：铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、二价锰、钾、钠、锌盐。进一步，药学上可接受的无机碱的盐可选自铵，钙，镁，钾，钠盐。在固体盐中可能存在一个或多个晶体结构，也有可能存在水合物的形式。药学上可接受的有机无毒碱的盐可选自，例如：伯胺，仲胺和叔胺盐，取代胺包括自然存在的取代胺，环胺，碱性离子交换树脂，如精氨酸，甜菜碱，咖啡碱，胆碱，N,N-二苄基乙二胺，二乙胺，2-二乙氨基乙醇，2-二甲氨基乙醇,乙醇胺，乙二胺，N-乙基吗啉，N-乙基哌啶，葡萄糖胺，氨基葡萄糖，组氨酸，海巴明胺，异丙胺，赖氨酸，甲葡糖胺，吗啉，哌嗪，哌啶，多胺树脂，普鲁卡因，嘌呤，可可碱，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨丁三醇。
当本专利所指化合物是碱时，需要与至少一种药学上可接受的无毒酸制备其盐，这些酸选自无机和有机酸。例如，选自醋酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙烷磺酸，富马酸，葡萄糖酸，谷氨酸，氢溴酸，盐酸，羟乙磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，扁桃酸，甲烷磺酸，粘酸，硝酸，扑酸，泛酸，磷酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，对甲苯磺酸。在一些实施例中，可选择这些酸，例如：柠檬酸，氢溴酸，盐酸，马来酸，磷酸，硫酸，富马酸，酒石酸。
化合物或其药学上可接受的盐的“给与”或“给药”是指为需要治疗的个体提供本发明中的化合物或其药学可接受的盐。
“有效量”是指化合物或其药学上可接受的盐能够引起组织、***、动物或人类出现可被研究人员、兽医、临床医生或其他临床人员观察到的生物学或医学反应的剂量。
“组合物”包括：包含特定量的特定成分的产品，以及任何直接或间接这些特定量的特定成分的组合而成的产品。药学组合物，包含：包含有效成分和作为载体的惰性成分的产品，以及任何两个或两个以上的成分直接或间接，通过组合、复合或聚集而制成的产品，或通过一个或更多的成分分解产生的产品，或通过一个或更多的成分发生其他类型反应或相互作用产生的产品。
“药学可接受”是指与制剂中的其它组分相容，并且对服用者无不可接受的毒害。
“个体”是指患有疾病、病症之类的个体，包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物包括，但不仅限于，哺乳类的任何成员：人类，非人类的灵长类动物如黑猩猩，和其他猿类和猴子；农场动物如牛、马、绵阳、山羊、猪；家畜如兔、狗和猫；实验动物包括啮齿类如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳类动物包括，但不仅限于，鸟类、鱼类等。本发明的一个实施例中，哺乳动物为人类。
“治疗”包括缓解、减轻或改善疾病或症状，预防其他症状，改善或预防症状的潜在代谢因素，抑制疾病或症状，例如，阻止疾病或症状发展，减轻疾病或症状，促进疾病或症状缓解，或使疾病或症状的病征停止，和延伸至包括预防。“治疗”还包括实现治疗性获益和/或预防性获益。治疗性获益是指根除或改善所治疗的病症。此外，治疗性获益通过根除或改善一个或多个与潜在疾病相关的生理病征达到，尽管患者可能仍患有潜在疾病，但可观察到患者疾病的改善。预防性获益是指，患者为预防某种疾病风险而服用组合物，或患者出现一个或多个疾病生理病症时服用，尽管尚未诊断此疾病。
“保护基”(Pg)是指一类用于与化合物上其它官能团反应而阻隔或保护特定官能团的取代基。例如，“氨基保护基”是指联接在氨基上阻隔或保护化合物上氨基官能团的取代基。适合的氨基保护基团包括但不限于乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、卞氧羰基基(CBZ)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)。同样，“羟基保护基”是指一类羟基取代基可有效阻挡或保护羟基功能。适当的保护基包括但不限于乙酰基和硅烷基。“羧基保护基”是指一类羧基取代基能有效阻挡或保护羧基的功能。常用羧基保护基包括但不限于-CH2CH2SO2Ph、氰乙基、2-(三甲硅基)乙基、2-(三甲硅基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(对硝基苯硫基)乙基、2-(二苯基膦)-乙基和硝基乙基等。对于保护基的一般描述和使用说明，见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
“NH保护基”包含，但不仅限于，三氯乙氧基甲酰基、三溴乙氧基甲酰基、苄氧羰基、对硝基苄甲酰基、邻溴苄氧羰基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基、苯乙酰基、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、叔戊氧羰基、叔丁氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、3,4-二甲氧基苄氧羰基、4-(苯偶氮基)苄氧羰基、2-糠基氧羰基、二苯基甲氧羰基、1,1-二甲基丙氧基羰基、异丙氧羰基、邻苯二甲酰、琥珀酰、丙氨酰、亮氨酰、1-金刚烷氧羰基、8-喹啉基氧羰基、苄基、二苯甲基、三苯甲基、2-硝基苯基硫醇、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、N,N-二甲基氨基亚甲基、苯亚甲基、2-羟基苯亚甲基、2-羟基-5-氯苯亚甲基、2-羟基-l-萘基亚甲基、3-羟基-4-吡啶基亚甲基、亚环己基、2-乙氧基羰基亚环己基、2-乙氧基羰基亚环戊基、2-乙酰基亚环己基、3,3-二甲基-5-氧亚环己基、二苯基磷酰基、5-甲基-2-氧基-2H-l,3-二氧基-4-基-甲基、三甲基硅烷基、三乙基硅烷基和三苯基硅烷基。
“C(O)OH”保护基包含，但不仅限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、1,1-二甲基丙基、正丁基、苯基、萘基、苄基、二苯甲基、三苯甲基、对硝基苄基、对甲氧基苄基、双(对甲氧苯基)甲基、乙酰甲基、苯甲酰甲基、对硝基苯甲酰甲基、对溴苯甲酰甲基、对甲磺酰苯甲酰甲基、2-四氢吡喃基、2-四氢呋喃基、2,2,2-三氯乙基、2-(三甲基硅烷基)乙基、乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、特戊酰氧基甲基、苯二甲酰亚胺甲基、琥珀酰亚胺甲基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基、2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基、苄基氧基甲基、甲基硫基甲基、2-甲基硫基乙基、苯基硫基甲基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、三甲基硅烷基、三乙基硅烷基、三异丙基硅烷基、二乙基异丙基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、二苯基甲基硅烷基和叔丁基甲氧基苯基硅烷基。
“OH或SH”保护基包含，但不仅限于，苄氧羰基、4-硝基苄氧羰基、4-溴苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、3,4-二甲氧基苄氧羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧羰基、1,1-二甲基丙氧基羰基、异丙氧羰基、二苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2,2,2-三溴乙氧基羰基、2-(三甲基硅烷)乙氧基羰基、2-(苯磺酰基)乙氧基羰基、2-(三苯基磷鎓基)乙氧基羰基、2-糠基氧基羰基、1-金刚烷氧基羰基、乙烯基氧基羰基、烯丙基氧基羰基、4-乙氧基-1-萘基氧基羰基、8-喹啉基氧基羰基、乙酰基、甲酸基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、特戊酰基、苯甲酰基、甲基、叔丁基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基(苯基甲基)、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、二苯基甲基、三苯基甲基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、甲氧基甲基、甲基硫基甲基、苄基氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2,2,2-三氯-乙氧基甲基、2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基、1-乙氧基乙基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基硅烷基、三乙基硅烷基、三异丙基硅烷基、二乙基异丙基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、二苯基甲基硅烷基和叔丁基甲氧基苯基硅烷基。
本发明化合物中可能存在几何异构体。本发明化合物可能存在E或Z构型的碳-碳双键或碳-氮双键，其中“E”代表按Cahn-Ingold-Prelog优先规则，较优的取代基在碳-碳双键或碳-氮双键的异侧，而“Z”代表较优的取代基在碳-碳双键或碳-氮双键的同侧。本发明化合物也可能以“E”和“Z”异构体的混合物形式存在。环烷基或杂环基周围的取代基可以定为顺式或反式构型。此外，本发明包括由金刚烷环系周围取代基排列不同形成的不同异构体及其混合物。金刚烷环系中的一个单环周围的两个取代基被定为Z或E相对构型。例如，见C.D.Jones,M.Kaselj,R.N.Salvatore,W.J.le Noble J.Org.Chem.1998,63,2758-2760。
本发明化合物可能含有R或S构型的不对称取代的碳原子，“R”和“S”的定义见IUPAC 1974Recommendations for Section E,Fundamental Stereochemistry,PureAppl.Chem.(1976)45,13-10。含有不对称取代碳原子的化合物，若R和S构型的量相同，则为外消旋体。若其中一种构型比另一构型的量更多，则手性碳原子的构型以量多的构型表示，优选对映体过量约85-90％，更优选约95-99％，进一步99％以上。因此，本发明包含外消旋混合物、相对和绝对立体异构体、和相对和绝对立体异构体的混合物。
同位素富集或标记化合物
本发明化合物可以同位素标记或富集的形式存在，包含一个或多个与自然界最普遍原子质量和质量数不同的原子。同位素可以为放射性或非放射性同位素。原子如氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素包括，但不仅限于，2H、3H、13C、14C、15N、18O、32P、35S、18F、36Cl和125I。含有这些原子的其他同位素和/或其他原子也在本发明范围内。
在另一实施例中，同位素标记化合物含有氘(2H)、氚(3H)或14C同位素。因此，当一个取代基被描述为氢时，它也包含同位素等价物，如氘和氚，特别是氘(D)。本发明的同位素标记化合物可使用该领域专业人员熟知的方法获得。这些同位素标记化合物可通过参照本发明实施例和反应图示，将非标记试剂替换为同位素标记试剂而得到。在某些例子中，可用同位素标记试剂处理化合物，将原子替换为同位素原子，例如，将氢替换为氘可通过氘代酸如D2SO4/D2O的作用交换。除此之外，相关合成步骤和中间体可参见，例如Lizondo,J et al,Drugs Fut,21(11),1116(1996)；Brickner,S J et al.,J Med Chem,39(3),673(1996)；Mallesham,B et al,Org Lett,5(7),963(2003)；PCT公开号WO1997010223、WO2005099353、WO1995007271和WO2006008754；美国专利号7538189、7534814、7531685、7528131、7521421、7514068和7511013；和美国专利申请公开号20090137457、20090131485、20090131363、20090118238、20090111840、20090105338、20090105307、20090105147、20090093422、20090088416和20090082471，具体方法见参考文献。
本发明同位素标记化合物可作为STAT3抑制剂药效结合试验的标准。含同位素的化合物可用于药学研究，评价非同位素标记母体化合物的作用机制和代谢途径，研究化合物的体内代谢归转(Blake et al.J.Pharm.Sci.64,3,367-391(1975))。这类代谢研究对于设计安全有效的治疗药物十分重要，可判断是患者使用的体内活性化合物或是母体化合物的代谢产物具有毒性或致癌性(Foster et al.,Advances in Drug Research Vol.14,pp.2-36,Academic press,London,1985；Kato et al,J.LabelledCompounds.Radiopharmaceuticals,36(10):927-932(1995)；Kushner et al.,Can.J.Physiol.Pharmacology,77,79-88(1999))。
此外，含非反射性活性同位素的药物，例如氘代药物，称为“重药(heavy drugs)”，可用于治疗与STAT3活性相关的疾病和病症。化合物中某种同位素比例超过其自然丰度被称为富集。富集的量包括但不仅限于，例如，从约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、16、21、25、29、33、37、42、46、50、54、58、63、67、71、75、79、84、88、92、96至约100mol％。在哺乳动物中，将至多约15％一般原子替换为重同位素是有效的，并可持续数日至数周，包括啮齿类和犬，且不良反应较少(Czajka D M和Finkel A J,Ann.N.Y.Acad.Sci.1960 84:770；ThomsonJ F,Ann.New York Acad.Sci1960 84:736；Czakja D M et al.,Am.J.Physiol.1961 201:357)。将人体内高达15-23％的体液替换为氘代并未引起毒性(Blagojevic N et al.in"Dosimetry&Treatment Planning for Neutron Capture Therapy",Zamenhof R,SolaresG and Harling O Eds.1994.Advanced Medical Publishing,Madison Wis.pp.125-134；Diabetes Metab.23:251(1997))。
药物稳定的同位素标记可以改变其物理化学性质，例如pKa和液体溶解性。如果同位素取代影响了配体-受体相互作用相关的区域，那么这些作用和改变可能影响药物分子的药效反应。稳定同位素标记分子的某些物理性质与未标记分子不同，而化学和生物学性质相同，但有一个重要区别：由于重同位素的质量增加，任何包含重同位素和另一原子的化学键比轻同位素更强。相应的，代谢或酶转化位点存在同位素会减缓该反应，从而与非同位素标记的化合物相比，可能改变其药代动力学特征或药效。
在一个实施方案中，本发明提供的化合物选自：
和其药学上可接受的盐。
在实施方案(1)中，本发明提供式(I)所示的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中，
R1选自CH3、CH2D、CHD2和CD3；
R2选自CH3、CH2D、CHD2和CD3；
Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y9、Y10、Y11、Y12、Y14、Y15和Y16独立选自氢和氘；
每个Y8独立选自氢和氘，前提是Y8是相同的；
每个Y13独立选自氢和氘，前提是Y13是相同的；
前提是，式(I)所示的化合物至少含有一个氘原子。
在另一个实施方案(2)中，本发明提供实施方案(1)的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y1是氘。
在另一个实施方案(3)中，本发明提供实施方案(1)-(2)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y2是氘。
在另一个实施方案(4)中，本发明提供实施方案(1)-(3)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y3是氘。
在另一个实施方案(5)中，本发明提供实施方案(1)-(4)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中Y7是氘。
在另一个实施方案(6)中，本发明提供实施方案(1)-(5)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中两个Y8都是氘。
在另一个实施方案(7)中，本发明提供实施方案(1)-(6)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中两个Y13都是氘。
在另一个实施方案(8)中，本发明提供实施方案(1)-(7)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自CH3和CD3。
在另一个实施方案(9)中，本发明提供实施方案(1)-(8)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自CH3和CD3。
在另一个实施方案(10)中，本发明提供的化合物选自：
和其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案(11)中，本发明提供实施方案(10)的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
和其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案(12)中，本发明提供实施方案(11)的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
和其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案(13)中，本发明提供实施方案(1)-(12)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中其药学上可接受的盐是盐酸盐。
在另一个实施方案(14)中，本发明提供实施方案(13)的化合物或其药学上可接受的盐，其中其药学上可接受的盐是二盐酸盐。
在另一个实施方案(15)中，本发明提供实施方案(14)的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
/>
在另一个实施方案(16)中，本发明提供药物组合物，其包含实施方案(1)到(15)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体。
在另一个实施方案(17)中，本发明提供了治疗、改善或预防对抑制ROCK响应的病况的方法，包括给予有此需要的个体有效量的实施方案(1)到(15)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，或至少一种其药物组合物，任选地与第二治疗剂联合使用。
在另一个实施方案(18)中，本发明提供了实施方案(1)-(16)中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗眼内压升高的药物中的用途。
在另一方面，本发明提供了包含本文公开的化合物或其药学上可接受的盐的试剂盒；以及包括以下一项或多项信息的说明书：成分应用于何种疾病状态、成分的储存信息、剂量信息以及如何使用成分的说明。在一个特殊变体中，试剂盒包含多剂量形式的化合物。
在另一方面，本发明提供了包含本文公开的化合物或其药学上可接受的盐的制品；以及包装材料。在一种变化中，包装材料包括容器。在一个特殊变化中，所述容器包括标签，其标明一项或多项以下内容：化合物应用于何种疾病状态、储存信息、剂量信息和/或如何使用化合物的说明。在另一种变体中，制品包括多剂量形式的化合物。
在另一方面，本发明提供了一种治疗方法，包含向个体给予本文公开的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供了一种通过使本文公开的化合物或其药学上可接受的盐与ROCK接触从而抑制ROCK的方法。
在另一方面，本发明提供了一种抑制ROCK的方法，包括使本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，出现在个体体内，以抑制体内ROCK活性。
在另一方面，本发明提供了一种抑制ROCK的方法，包括对个体给药第一化合物，此化合物在体内转化为第二化合物，其中第二化合物抑制体内ROCK活性，且第二化合物是以上实施方案中任一项的化合物和变体。
在另一方面，本发明提供了一种治疗疾病状态的方法，其中ROCK活性造成了该疾病状态的病理和/或症状，该方法包括使对该疾病状态治疗有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，出现在个体体内。
在另一方面，本发明提供了一种治疗疾病状态的方法，ROCK活性造成了该疾病状态的病理和/或症状，该方法包含对个体给药第一化合物，此化合物在体内转化为第二化合物，其中第二化合物抑制体内ROCK活性。值得注意的是，本发明所述化合物可以是转化前或转化后的化合物。
上述每个方法的变化中，疾病状态选自：眼病，例如青光眼，高眼压或神经退行性眼病。
在另一方面，本发明提供了一种治疗疾病状态的方法，ROCK基因突变造成了该疾病状态的病理和/或症状，例如青光眼，高眼压或神经退行性眼病。
在另一方面，本发明涉及以上实施方案中任一项的化合物和变体作为药物的用途。在另一方面，本发明涉及以上实施方案中任一项的化合物和变体用于制备抑制ROCK药物的用途。
在另一方面，本发明涉及以上实施方案中任一项的化合物和变体用于制备治疗ROCK活性造成的病理和/或症状的疾病状态的药物的用途。
给药和药物组合物
一般地，本发明所述化合物将以治疗有效量经由任何本领域已知的普通及可接受的方式，单独或与一种或多种治疗剂合用给药。治疗有效量可以广泛变化，取决于受试者的疾病严重性、年龄和相对健康状况，所用化合物的药效以及其他本领域已知的因素。例如，对于肿瘤性疾病和免疫***疾病的治疗，所需剂量将根据给药模式，待治疗的具体病症和所需效果而异。
一般地，每日剂量为0.001至100mg/kg体重时可达到满意的结果，具体来说，从约0.03至2.5mg/kg体重。较大型哺乳动物的日剂量，如人类，可从约0.5mg至约2000mg，或更具体来说，从0.5mg至1000mg，以方便的形式给药，例如，以分剂量最多每日四次或以缓释形式。合适的口服给药的单位剂量形式包含约1至50mg活性成分。
本发明所述化合物可以以药物组合物形式给药，通过任何常规途径给药；例如经肠，例如口服，例如以片剂或胶囊形式，肠胃外，例如以可注射溶液或混悬液形式；或局部给药，例如以滴眼剂，凝胶剂，软膏剂或乳膏剂，或者以鼻或栓剂形式。
含有本发明所述的以游离碱或药学可接受盐型的化合物与至少一种药学可接受的载体或稀释剂的药物组合物，可以常规方式通过混合、制粒、包衣、溶解或冷冻干燥流程来制造。例如，药物组合物包含一个本发明所述化合物与至少一个药学可接受载体或稀释剂组合，可以以常规方式通过与药学可接受载体或稀释剂混合制成。用于口服的单位剂量形式包含，例如，从约0.1mg至约500mg活性物质。
在一个实施例中，药物组合物为活性成分的溶液，包括悬浮液或分散体，如等张水溶液。在仅包含活性成分或与如甘露醇的载体混合的冻干组合物的情况下，分散体或悬浮液可在使用前制备。药物组合物可以被灭菌和/或含有佐剂，如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。合适的防腐剂包括但不仅限于抗氧化剂如抗坏血酸，杀微生物剂，如山梨酸或苯甲酸。溶液或悬浮液还可以包含增稠剂，包括但不仅限于羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、明胶，或增溶剂，例如吐温80(聚氧乙烯(20)失水山梨醇单油酸酯)。
在油中的悬浮液可能包含作为油性成分的植物油，合成或半合成的油，常用于注射目的。实施例包括含有作为酸组分的具有8至22个碳原子，或在一些实施方案中，从12至22个碳原子的长链脂肪酸的液态脂肪酸酯。合适的液态脂肪酸酯包括月桂酸，十三烷酸，肉豆蔻酸，十五烷酸，棕榈酸，十七烷酸，硬脂酸，花生酸，山萮酸或相应的不饱和酸，例如油酸，反油酸，芥酸，巴西烯酸和亚油酸，如果需要，可以含有抗氧化剂，例如维生素E，3-胡萝卜素或3,5-二-叔丁基-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分可以具有六个碳原子，并且可以是单价或多价的，例如单-，二-或三价的醇。合适的醇组分包括但不限于甲醇，乙醇，丙醇，丁醇或戊醇或者其异构体，乙二醇和甘油。
其它合适的脂肪酸酯包括但不限于油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，棕榈酸异丙酯，M2375，(聚氧乙烯甘油)，/>M1944CS(通过醇解杏仁油制备的不饱和聚乙二醇化甘油酯，含有甘油酯和聚乙二醇酯)，LABRASOLTM(通过醇解TCM制备的饱和聚乙二醇化甘油酯，包含甘油酯和聚乙二醇酯；均可从法国GaKefosse公司获得)，和/或812(德国Hüls AG公司的链长为C8至C12的饱和脂肪酸甘油三酯)，以及植物油如棉子油，杏仁油，橄榄油，蓖麻油，芝麻油，豆油或花生油。
用于口服给药的药物组合物可以通过，例如，通过将活性成分与一种或多种固体载体混合，如果需要，颗粒化所得的混合物，并通过加入另外的赋形剂加工所述混合物或颗粒，以形式片剂或片芯。
合适的载体包括但不限于填充剂，例如糖，例如乳糖，蔗糖，甘露醇或山梨醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸氢钙，和粘合剂，例如淀粉，例如玉米，小麦，大米或马铃薯淀粉，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或，如果需要的话，崩解剂，如上述淀粉，羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，藻酸或其盐，如藻酸钠。另外的赋形剂包括流动调节剂和润滑剂，例如硅酸，滑石粉，硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇，或其衍生物。
可以为片剂芯提供合适的，可选肠溶的包衣，通过使用特别是，浓缩的糖溶液，其可包括***树胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，或者溶于合适有机溶剂或溶剂混合物的涂层溶液，或者，对于肠溶衣，合适的纤维素制剂的溶液，如邻苯二甲酸乙酸纤维素或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯溶液。染料或颜料可以加入片剂或片剂包衣中，例如用于标识目的或指示不同剂量的活性成分。
用于口服给药的药物组合物还可以包括硬胶囊，包括明胶或含有明胶和增塑剂，如甘油或山梨醇的软密封胶囊。硬胶囊剂可含有活性成分的颗粒的形式，例如与填充剂如玉米淀粉，粘合剂和/或助流剂如滑石粉或硬脂酸镁，和任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性成分可以溶解或悬浮于合适的液体赋形剂如脂肪油，石蜡油或液体聚乙二醇或者乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中，也可向其中加入稳定剂和洗涤剂，例如聚氧乙烯山梨糖醇的脂肪酸酯型，也可加入。
适用于直肠给药的药物组合物，例如栓剂，其包含活性成分和栓剂基质的组合。合适的栓剂基质是，例如，天然或合成的甘油三酯，石蜡烃，聚乙二醇或高级烷醇。
适于胃肠外给药的药物组合物可包含水溶性形式的活性成分，例如水溶性盐或包含增加粘度的物质的含水注射悬浮液，例如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇的水溶液和/或葡聚糖，和，如果需要，稳定剂。将活性成分，任选地与赋形剂，也可以是在一个冷冻干燥的形式，并且可在非肠道给药前通过加入合适的溶剂制成的溶液。使用的解决方案，例如，用于胃肠外给药，也可以用作输注溶液。注射制剂的制备通常在无菌条件下，填充进，例如，安瓿或小瓶，和密封的容器中。
本发明还提供了药物组合，例如一种药盒，其包含a)本发明所公开的化合物，可以为游离形式或药学可接受的盐形式，和b)至少一种助剂。该药盒可以包含其使用说明书。
联合疗法
本专利所述化合物或药学可接受的盐可单独使用，或与其他治疗剂联合使用。
例如，使用佐剂(adjuvant)可增强本发明中的化合物的治疗效果(例如，单独使用辅佐药物的治疗性获益极小，但与另一种药物合用时，可增强个体的治疗性获益)，或者，例如，本发明的化合物与另一个同样具有疗效的治疗剂合用可增强个体的治疗获益。例如，治疗痛风时，使用本发明的化合物时，合并使用另一种治疗痛风的药物，有可能会增强临床获益。或者，例如，如果使用本发明化合物的不良反应是恶心，那么可合用抗恶心的药物。或者，还可以联合的疗法包括，但不仅限于物理疗法、心理疗法、放射疗法、疾病区域的压迫疗法、休息、膳食改善等。无论何种疾病、病症或病况，两种疗法使个体的治疗受益应具有加成效应或协同效应。
在本专利化合物与其他治疗剂合用情况下，本专利化合物的药物组合物给药途径可与其他药物相同，或由于物理和化学性质不同，给药途径可以不相同。例如，本专利化合物口服给药可产生并维持良好血药水平，而另一种治疗剂可能需要静脉给药。因此本专利化合物与另一治疗剂可同时、先后或分别给药。
实施例
式(I)化合物或其药学可接受的盐的合成方法有多种，在本实例中列举出的是具有代表性的方法。然而，需要指出的是，式(I)的化合物或其药学可接受的盐也可能通过其它合成方案的合成得到。
式(I)的某个化合物中，原子与其它原子之间的连接可能导致存在特殊的立体异构体(如手性中心)。合成式(I)的化合物或其药学可接受的盐可能产生不同异构体(对映异构体，非对映异构体)的混合物。除非特别说明是某个特定的立体构型，所列举的化合物均包括了其可能存在的不同立体异构体。
式(I)的化合物也可以制成药学可接受的酸加成盐，例如，通过将本发明化合物的游离碱的形式与药学可接受的无机或有机酸反应。或者将一个式(I)的化合物以游离酸的形式与药学可接受的无机或有机碱反应，将其制成药学可接受的碱加成盐。适宜于制备式(I)化合物的药学可接受盐的无机和有机的酸和碱已在本申请书的定义部分做了说明。此外，式(I)化合物盐的形式也可以通过使用起始原料或中间体的盐进行制备。
式(I)化合物的游离酸或游离碱可以通过其相应的碱加成盐或者酸加成盐制备得到。式(I)化合物的酸加成盐形式可转化成相应的游离碱，例如通过用合适的碱(如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理。式(I)化合物的碱加成盐形式可转化为相应的游离酸，例如通过用合适的酸(如盐酸等)处理。
一个式(I)的化合物或其一个药学可接受的盐的N-氧化物可通过本领域已知的方法制得。例如，N-氧化物可以通过将式(I)化合物的非氧化形式在0～80℃的条件下与氧化剂(如三氟过氧乙酸、过氧马来酸(permaleic acid)、过氧苯甲酸、过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸等)在惰性有机溶剂(如二氯甲烷等卤化烃)中反应得到。备择地，式(I)化合物的N-氧化物也可通过起始原料的N-氧化物制备得到。
非氧化形式的式(I)化合物可通过将其N-氧化物与还原剂(如硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷和三溴化磷等)在0～80℃的条件下在相应的惰性有机溶剂(如乙腈、乙醇和二氧六环水溶液等)中反应制得。
式(I)化合物的保护衍生物可以通过本领域人员熟知的方法制备得到。关于保护基团的加入和去除的详细技术描述参见：T.W.Greene,Protecting Groups in OrganicSynthesis,3rd edition,John Wiley&Sons,Inc.1999。
这些方法、路线与实施例中所使用的标志和常识，均与现行的科学文献相一致，例如，美国化学协会杂志或生物化学杂志。除非另有说明，标准的单字母或三字母的缩写通常指L型氨基酸残基。除非另有说明，所有使用的起始原料均从市场供应商购买得到，使用时并未进一步纯化。例如，在实例及整个说明书中会用到以下缩写：g(克)、mg(毫克)、L(升)、mL(毫升)、μL(微升)、psi(磅每平方英寸)、M(摩尔)、mM(毫摩尔)、i.v.(静脉注射)、Hz(赫兹)、MHz(兆赫)、mol(摩尔)、mmol(毫摩尔)、RT(环境温度)、min(分钟)、h(小时)、mp(熔点)、TLC(薄层色谱法)、Rt(保留时间)、RP(反相)、MeOH(甲醇)、i-PrOH(异丙醇)、TEA(三乙胺)、TFA(三氟乙酸)、TFAA(三氟乙酸酐)、THF(四氢呋喃)、DMSO(二甲基亚砜)、EtOAc(乙酸乙酯)、DME(1,2-二甲氧基乙烷)、DCM(二氯甲烷)、DCE(二氯乙烷)、DMF(N,N-二甲基甲酰胺)、DMPU(N,N'-二甲基丙烯基脲)、CDI(1,1-羰基二咪唑)、IBCF(氯甲酸异丁酯)、HOAc(乙酸)、HOSu(N-羟基琥珀酰亚胺)、HOBT(1-羟基苯并三氮唑)、Et2O(***)、EDCI(1-(3-二甲基氨基丙基)3-乙基碳二亚胺盐酸盐)、BOC(叔丁氧羰基)、FMOC(9-芴基甲氧羰基)、DCC(二环己基碳二亚胺)、CBZ(苄氧羰基)、Ac(乙酰基)、atm(大气压)、TMSE(2-(三甲硅基)乙基)、TMS(三甲硅基)、TIPS(三异丙基硅基)、TBS(叔丁基二甲硅基)、DMAP(4-二甲基氨基吡啶)、Me(甲基)、OMe(甲氧基)、Et(乙基)、tBu(叔丁基)、HPLC(高效液相色谱法)、BOP(双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯)、TBAF(四正丁基氟化铵)、mCPBA(间氯过氧苯甲酸)。
醚或Et2O均是指***；盐水则是指饱和NaCl水溶液。除非另有说明，所有的温度均是指℃温度(摄氏度)，所有的反应都是在室温下的惰性氛围中反应。
1H NMR谱采用Varian Mercury Plus 400核磁共振光谱仪记录。化学位移为以ppm表示。耦合常数均以赫兹为单位(Hz)。以分割模式描述表观多样性，并定为s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)和br(宽峰)。
低分辨质谱(MS)和化合物纯度数据来自Shimadzu LC/MS单个四极杆***，该***配备有电喷雾离子检测器(ESI)，紫外探测器(220和254nm)及蒸发光散射检测器(ELSD)。薄层层析法使用的是0.25mm旭泊化成硅胶板(60F-254)，5％的磷钼酸乙醇溶液，茚三酮或p-甲氧基苯甲醛溶液并在紫外灯下观察。快速柱层析使用的是硅胶(200-300目，青岛海洋化工有限公司)。
合成方案
式I化合物或其药学上可接受的盐可由不同方法合成，一些示例性方法提供如下和实施例。其他合成方法可由本领域技术人员根据本发明披露的信息容易地提出。
在如下所述诸反应中可能有必要对活泼基团进行保护，以免这些活性基团参与其它不期望的反应：这些基团如羟基、氨基、亚胺基、含巯基或羧基，最终产物中含有这些基团。常用的保护基团可参考T.W.Greene and P.G.M.Wuts in"Protective Groups inOrganic Chemistry"John Wiley and Sons,1991。
本发明的所有化合物的合成方案由以下方案和实施例加以说明。所用起始原料源于市售商品或可根据已有工艺方法或者此处示例的方法制备。
以下合成方案所列的中间体或根据文献得到，或根据已有的类似的合成方法合成。
作为说明，方案1披露了本发明公开的式I化合物的一种合成方法。如方案所示，式I化合物可以分解成中间体II和III，其制备根据文献得到，或根据本领域技术人员所熟知的方法合成。在该路线中，中间体II依次通过保护IV的游离羧基，与V偶联和裂解保护基三步获得。最后，通过缩合反应将羧酸II与氨基芳烃如式III的氨基芳烃偶联，得到式I化合物。
作为式IV中间体制备方法的说明，式IVa的一种合成方法如方案2所示。以由商业提供的或者文献报道的IVa-A为起始物，通过插羰反应和TBS保护IVa-B的游离羟基制备IVa-C，酯IVa-C通过LiAlD4还原得到IVa-D，再与苯甲酸VI缩合生成IVa-E。最后中间体IVa可从IVa-E依次通过氧的保护基团的离去和氧化生成醇得到。
作为式IV中间体制备方法的进一步说明，式IVb的一种合成方法如方案3所示。以由商业提供的对苯二甲酸二甲酯IVb-A为起始物，LiAlD4还原IVb-A得到IVb-B，通过对羟基的选择性TBDPS保护和碘化，可以进一步转化为IVb-D。碘代物IVb-D与TMSCN进行亲核置换，得到中间体IVb-E。将IVb-E中的氰基转化为甲酯基，得到中间体IVb-G。最后式IVb可通过IVb-G与苯甲酸VI缩合，IVb-H水解制备。
作为式IV中间体制备方法的另一说明，式IVc的一种合成方法如方案4所示。以由商业提供的2,4-二甲基苯甲酸IVc-A为起始物。用t-BuOK和DMSO-d6与IVc-A反应制备中间体2,4-双(甲基-d3)苯甲酸IVc-B。通过缩合反应将2,4-双(甲基-d3)苯甲酸IVc-B与中间体IVc-C偶联得到式IVc-D化合物。最后，IVc-D水解得到式IVc化合物。
作为式III中间体制备方法的说明，式IIIa的一种合成方法如方案5所示。以由商业提供的1,4-二溴苯IIIa-A为起始物，用n-BuLi和DMF-d7与IIIa-A反应制得醛IIIa-B。中间体IIIa-E可通过NaBD4还原胺化2,2-二甲氧基乙烷-1-胺，然后保护IIIa-D的氨基得到。在三氯化铝等路易斯酸的作用下，IIIa-E发生环化反应得到异喹啉IIIa-F，再通过钯催化与二苯甲酮亚胺偶联进一步转化为IIIa-G。最后，IIIa-G脱保护得到式IIIa化合物。
作为式III中间体制备方法的进一步说明，式IIIb的一种合成方法如方案6所示。以由商业提供的2-氧乙酸IIIb-A为起始物，中间体IIIb-B可由三甲氧基甲烷和p-TsOH反应IIIb-A制备。IIIb-B的氨解得到式IIIb-C化合物，再通过LiAlD4还原酰胺进一步转化为式IIIb-D化合物。中间体IIIb-G可由中间体IIIb-D经4-溴苯甲醛和NaBH4还原胺化，然后保护IIIb-F的氨基。在AlCl3等路易斯酸的作用下IIIb-G发生环化反应得到异喹啉IIIb-H，通过钯催化与二苯甲酮亚胺偶联可进一步转化为IIIb-I。最后，IIIb-I去保护得到式IIIb化合物。
作为式V中间体制备方法的说明，式Va的一种合成方法如方案7所示。以由商业提供的或者文献报道的1H-苯并[d][1,2,3]***Va-A为起始物，用甲醛-d2与Va-A反应可制备中间体Va-B。然后用氨基甲酸叔丁酯和4-甲基苯磺酸将Va-B中的羟基转化为Boc保护的氨基，得到式Va化合物。
在某些情况下，为了促进反应或避免不必要的反应产物产生，上述合成方案可根据情况调整顺序。为了使本发明被更充分地理解，提供了以下实施例。这些实施例只是示例，不应将其理解成是对本发明的限制。
中间体A
异喹啉-1-d-6-胺(A)
(4-溴苯基)-氘甲烷酮(A1)
在-78℃下，向1,4-二溴代苯(2.50g，10.6mmol)的THF(5mL)溶液中逐滴加入n-BuLi(1.6M，7mL，11.7mmol)，并在-78℃下将所得混合物搅拌0.5h。然后在-78℃下向混合物中逐滴加入DMF-d7(1.08mL，12.7mmol)，混合物于-78℃～-30℃下搅拌1.5h。反应在-30℃下用饱和NH4Cl(2mL)溶液淬灭。用水稀释混合物并用EtOAc(3×50mL)萃取。盐水洗涤萃取物，Na2SO4干燥并浓缩得到标题化合物(4-溴苯基)-氘甲烷酮(A1)的粗品，不进一步纯化，直接用于下一步反应。
N-((4-溴苯基)甲基-d2)-2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(A2)
将(4-溴苯基)-氘甲烷酮(A1)(2.00g，10.8mmol)、p-TsOH.H2O(0.210g，1.08mmol)和2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(1.05g，10.0mmol)的混合物在138℃下搅拌3.5h。将该混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(8mL)中，依次用NaHCO3水溶液(2×100mL)和水(1×100mL)洗涤，甲苯(2×100mL)萃取水相。合并有机相，Na2SO4干燥并浓缩。将残留物溶解于EtOH(20mL)中，然后于室温下将NaBD4(220mg，5.50mmol)添加到混合物中，混合物于室温下搅拌2h。然后将HOAc(0.2mL)添加到混合物中。用水稀释并用EtOAc萃取。盐水洗涤萃取物，Na2SO4干燥并浓缩得到标题化合物N-((4-溴苯基)甲基-d2)-2,2-二甲氧基乙烷-1-胺的粗品(A2)。MS-ESI(m/z):276[M+1]+。
N-((4-溴苯基)甲基-d2)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-甲基苯磺酰胺(A3)
向N-((4-溴苯基)甲基-d2)-2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(A2)(2.5g,9.1mmol)的DCM(16mL)和吡啶(2mL)溶液中加入TsCl(3.10g,16.3mmol)。混合物在室温下搅拌2小时。用1NHCl(3×50mL)洗涤混合物，干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析柱纯化，PE/EtOAc(20:1～5:1)洗脱得到标题化合物N-((4-溴苯基)甲基-d2)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-甲基苯磺酰胺(A3)。MS-ESI(m/z):430[M+1]+。
6-溴异喹啉-1-d(A4)
向AlCl3(2.95g，22.0mmol)的DCM(10mL)混合物中逐滴加入N-((4-溴苯基)甲基-d2)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-甲基苯磺酰胺(A3)(1.9g，4.4mmol)的DCM(10mL)溶液。室温下搅拌4h后，将混合物倒入冰(50g)中，用DCM(3×100ml)萃取。有机相依次用1N NaOH(2×100mL)、NaHCO3水溶液(1×100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析柱纯化，PE/EtOAc(5:1)洗脱得到标题化合物6-溴异喹啉-1-d(A4)。MS-ESI(m/z):209[M+1]+。
异喹啉-1-d-6-胺(A)
在室温下，向6-溴代喹啉-1-d(A4)(455mg，2.19mmol)、二苯基甲基苯胺(441μl，2.62mmol)和叔丁醇钠(631mg，6.57mmol)在甲苯(10mL)中的混合物中加入BINAP(954mg，1.53mmol)和Pd2(dba)3(401mg，0.438mmol)。混合物于100℃下搅拌3h。浓缩混合物。残留物溶解在甲醇(20mL)中，然后于室温下向混合物中加入NH2OH.HCl(241mg，3.50mmol)和NaOAc(312mg，3.80mmol)，所得混合物在室温下搅拌1.5h。浓缩混合物，残留物用硅胶柱层析柱纯化，PE/EtOAc(1:1)洗脱得到标题化合物异喹啉-1-d-6-胺(A)。MS-ESI(m/z):146[M+1]+。
中间体B
异喹啉-3-d-6-胺(B-a)和异喹啉-3,4-d 2 -6-胺(B-b)
2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B1)
在室温下，向2,2-二甲氧基乙酰胺(0.10g，0.84mmol)的THF(3mL)溶液中加入LiAlD4(42mg，1.0mmol)，混合物于65℃下搅拌1.5h。在冰水浴下向混合物中添加NaSO4.10H2O。搅拌20分钟后，过滤混合物。滤饼用四氢呋喃洗涤，浓缩滤液，得到2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B1)粗品不进一步纯化，直接用于下一步反应。MS-ESI(m/z):108[M+1]+.
N-(4-溴苄基)-2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B2)
将2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B1)(100mg，0.920mmol)、p-TsOH.H2O(17.5mg，0.0920mmol)和4-溴苯甲醛(170mg，0.920mmol)在甲苯(50mL)中的混合物于135℃下搅拌4.5h。浓缩后，将残留物溶解在EtOH(30mL)中，在室温下将NaBH4(300mg，7.90mmol)加到混合物中并搅拌1h。再将HOAc(0.2mL)加入到混合物中。浓缩溶剂，残留物用水稀释，EtOAc萃取。盐水洗涤萃取物，用硫酸钠干燥，浓缩得到标题化合物的N-(4-溴苄基)-2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B2)粗品。MS-ESI(m/z):276[M+1]+。
异喹啉-3-d-6-胺(B-a)和异喹啉-3,4-d2-6-胺(B-b)
依照实施例A中的合成方法，将N-((4-溴苯基)甲基-d2)-2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(A2)替换为N-(4-溴苄基)-2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B2)制备得到标题化合物异喹啉-3-d-6-胺(B-a)(30％)和异喹啉-3,4-d2-6-胺(B-b)(70％)。MS-ESI(m/z)B-a:146[M+1]+和B-b:147[M+1]+。
中间体C
2,4-二(甲基-d3)苯甲酸(C)
2,4-双(甲基-d3)苯甲酸(C)
向2,4-二甲基苯甲酸(1.0g，6.1mmol)的DMSO-d6(10mL)溶液中加入t-BuOK(3.40g，30.5mmol)。混合物在氮气保护下于120℃搅拌3小时。冷却至室温后，用水稀释。pH调至2～3，EtOAc(3×)萃取。水和盐水洗涤萃取物，用硫酸钠干燥并浓缩得到固体。按上述方法对该固体进行2次处理，得到标题化合物2,4-双(甲基-d3)苯甲酸(C)。
中间体D
(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)甲烷-d2-醇(D)
乙基4-(2-羟基乙基)苯甲酸酯(D1)
在CO环境下，将2-(4-溴苯基)乙烷-1-醇(1.0g，5.0mmol)、TEA(0.83ml，6.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(365mg，0.500mmol)在EtOH(35ml)和DMSO(22ml)中的混合物于80℃下搅拌3.5h。将反应混合物冷却至室温，用饱和NH4Cl水溶液淬灭并用EtOAc萃取。盐水(30ml)洗涤萃取物，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析柱纯化，用PE/EtOAc(5:1～4:1)洗脱，得到标题化合物乙基4-(2-羟基乙基)苯甲酸酯(D1)。MS-ESI(m/z):195[M+1]+。
乙基4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯甲酸酯(D2)
向4-(2-羟乙基)苯甲酸乙酯(D1)(0.96g，4.9mmol)的DMF(20mL)溶液中加入咪唑(0.84g，12mmol)。将混合物冷却至0℃，然后添加TBSCl(0.894g，5.91mmol)。混合物在室温下搅拌30分钟，用水稀释并用EtOAc萃取。盐水(30ml)洗涤萃取物，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析柱纯化，PE/EtOAc(50:1)洗脱，得到标题化合物乙基4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯甲酸酯(D2).MS-ESI(m/z):309[M+1]+.
(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)甲烷-d2-醇(D)
依照实施例2,2-二甲氧基乙烷-1,1-d2-1-胺(B1)中的合成方法，将2,2-二甲氧基乙酰胺替换为乙基4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-苯甲酸酯(D2)制备得到标题化合物(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)甲烷-d2-醇(D)。MS-ESI(m/z):269[M+1]+。
中间体E
甲基2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸酯-d2(E)
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1,4-亚苯基二(甲烷-d2-醇)(E1)
在0℃下，向对苯二甲酸二甲酯(5.9g，30mmol)的THF(100mL)溶液中分批加入LiAlD4(3.5g，59mmol)。混合物在65℃下搅拌1h，冷却至0℃后，用Na2SO4.10H2O淬灭并过滤。浓缩滤液得到标题化合物1,4-亚苯基二(甲烷-d2-醇)(E1)。
(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基-d2)苯基)甲烷-d2-醇(E2)
将叔丁基氯二甲基硅烷(8.3g，30mmol)逐滴加入到1,4-苯基双(甲烷-d2-醇)(E1)(4.3g，30mmol)和1H-咪唑(2.2g，33mmol)的DMF(50mL)溶液中。在室温下搅拌18h后，将混合物倒入H2O中，用EtOAc(3×)萃取。用H2O、盐水洗涤萃取物，Na2SO4干燥并浓缩得到标题化合物(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基-d2)苯基)甲烷-d2-醇(E2).
叔丁基((4-(碘甲基-d2)苯基)甲氧基-d2)二甲基硅烷(E3)
在氮气保护下，将(4-(((叔丁基二甲基二甲基硅烷基)氧基)甲基-d2)苯基)甲烷-d2-醇(E2)(3.8g，10mmol)、1H咪唑(1.05g，15.0mmol)、碘(3.3g，13mmol)和三苯基膦烷(3.9g，15mmol)在DCM(60mL)的混合物于室温下搅拌5h。用DCM稀释该混合物，用Na2S2O3水溶液和盐水洗涤，硫酸钠干燥浓缩。残留物用硅胶柱层析柱纯化，PE/EtOAc(10:1)洗脱得到标题化合物叔丁基((4-(碘甲基-d2)苯基)甲氧基-d2)二甲基硅烷(E3)。
2-(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基-d2)苯基)乙腈-d2(E4)
向叔丁基((4-(碘甲基-d2)苯基)甲氧基-d2)二甲基硅烷(E4)(3.6g，7.3mmol)和K2CO3(1.8g，13mmol)在乙腈(40mL)中的混合物加入TMSCN(1.6mL，13mmol)。回流20小时后，将混合物冷却至室温并过滤。滤液浓缩。残留物用硅胶柱层析柱纯化，用PE/EtOAc(10:1)洗脱得到标题化合物2-(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基-d2)苯基)乙腈-d2(E5)。
2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸-2,2-d2酸(E6)
向NaH(5.00g，120mmol)的D2O(20ml)溶液中加入2-(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基-d2)苯基)乙腈-d2(E5)(2.5g，6.0mmol)的EtOD(20ml)溶液。将混合物在80℃搅拌15h，冷却至室温后，用D2O(30mL)稀释，调节pH至2～3，EtOAc(3×)萃取。用盐水洗涤萃取物，Na2SO4干燥。浓缩溶剂得到标题化合物2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸-2,2-d2酸(E6)。MS-ESI(m/z):169[M-1]-。
甲基2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸酯-d2(E)
向2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸-2,2-d2酸(E6)(1.35g，7.94mmol)的MeOH(13mL)溶液中逐滴加入Con.H2SO4(1.3mL)。混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倒入水中，用EtOAc(3×)萃取。用饱和NaHCO3(水溶液)和盐水洗涤萃取物，Na2SO4干燥，并浓缩得到标题化合物甲基2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸酯-d2(E)。MS-ESI(m/z):185[M+1]+。
中间体F
叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基-d2)甲酯(F)
(1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲烷-d2-醇(F1)
向1H-苯并[d][1,2,3]***(625mg，5.25mmol)的H2O(40mL)溶液中加入甲醛-d2(20％，D2O溶液)(840mg，5.25mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。通过过滤收集固体，干燥得到标题化合物(1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲烷-d2-醇(F1)。MS-ESI(m/z):152[M+1]+。
叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基-d2)甲酯(F)
(1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲烷-d2-醇(F1)(650mg，4.28mmol)、叔丁基氨基甲酸酯(500mg，4.28mmol)和4-甲基苯磺酸(26.7mg，0.155mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在分水器下回流1h。冷却至RT后，将混合物浓缩至1/4体积。然后，通过过滤收集固体，干燥得到标题化合物叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基-d2)甲酯(F)。MS-ESI(m/z):251[M+1]+。
实施例1
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基24-二甲基 苯甲酸酯(1)
(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基)苯 基)-丙酸(1a)
(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基)-苯基)丙酸(1a)合成方法如专利WO2017/086941所示。
(S)-4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2- 基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1b)
向(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)-氧基)甲基)苯基)丙酸(1a)(56mg，0.13mmol)、异喹啉-1-d-6-胺(A)(25mg，0.17mmol)和2,4-二甲基苯胺(18mg，0.17mmol)的DMF(1mL)混合物中加入1,1,1-三氯-2-甲基丙烷-2-酰基氯化碳酯(41mg0.17 mmol)并在室温下搅拌3h。将混合物倒入水中(20mL)，用EtOAc(3×50mL)萃取，盐水(15mL)洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物经PTLC纯化，DCM/MeOH(15:1)洗脱(S)-4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1b)。MS-ESI(m/z):555[M+1]+。
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲 基苯甲酸酯(1)
向(S)-4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-((异喹啉-6-基-1-d)-氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1b)(25mg，0.050mmol)的DCM(5mL)混合物中逐滴加入TFA(1mL)。混合物在室温下搅拌1h，将混合物倒入饱和的NaHCO3中，DCM(3×30ml)萃取。盐水洗涤有机层，硫酸钠干燥并浓缩。残留物经PTLC纯化，用DCM/NH3的MeOH溶液(20:1)中洗脱，得到(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1)。MS-ESI(m/z):455[M+1]+。
实施例2
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-3-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲 基苯甲酸酯(2-A)and(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-3,4-d2)氨基)-1-氧代丙基-2-基) 苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(2-B)
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-3-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲 基苯甲酸酯(2)
依照实施例(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基-苯甲酸酯(1)中的合成方法，将异喹啉-1-d-6-胺(A)替换为异喹啉-3-d-6-胺(B-a)和异喹啉-3,4-d2-6-胺(B-b)制备得到标题化合物(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-3-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(2-A)(30％)和(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-3,4-d2)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(2-B)(70％)。MS-ESI(m/z):2-A:455[M+1]+和2-B:456[M+1]+。
实施例3
(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d22,4-二 甲基苯甲酸酯(3)
(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)甲基-d22,4-二甲基苯甲酸酯 (3a)
向2,4-二甲基苯甲酸(31.0mg，0.204mmol)的DCM(1mL)溶液中加入EDCI(65.0mg，0.335mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时，然后加入(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)甲烷-d2-醇(D)(50.0mg，0.186mmol)的DCM溶液和DMAP(5.0mg，0.0372mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。用水稀释混合物并用DCM(3×25ml)萃取。盐水(15ml)洗涤萃取物，Na2SO4干燥并浓缩。残留物经硅胶柱层析纯化，PE/EtOAc(50:1)洗脱得到标题化合物(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3a)。MS-ESI(m/z):401[M+1]+。
(4-(2-羟基乙基)苯基)甲基-d22,4-二甲基苯甲酸酯(3b)
向(4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3a)(4.100g，10.25mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入1N HCl(2mL)。混合物在室温下搅拌1h，用水稀释并用DCM(3×25ml)萃取。萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩得到标题化合物(4-(2-羟基乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3b)。MS-ESI(m/z):287[M+1]+。
(4-(2-氧代乙基)苯基)甲基-d22,4-二甲基苯甲酸酯(3c)
向(4-(2-羟基乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3b)(2.90g，10.3mmol)的DCM(100mL)溶液中加入DMP(5.20g，12.3mmol)。混合物在室温下搅拌30分钟。用饱和NaHCO3水溶液(100mL)使反应淬灭并用DCM萃取。盐水(20ml)洗涤有机相，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，PE/EtOAc(10:1)洗脱得到标题化合物(4-(2-氧代乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3c)。MS-ESI(m/z):285[M+1]+。
2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)乙酸(3d)
向2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)-甲基-d2)苯基)乙酸(3d)(50mg，0.18mmol)的DMF(1mL)溶液中加入过氧单磺酸钾(36mg，0.21mmol)。混合物在室温下搅拌4小时。将混合物倒入水中(20mL)。通过过滤收集沉淀固体，用水(30ml)洗涤并干燥，得到2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)-甲基-d2)苯基)乙酸(3d)粗品，无进一步纯化，直接用于下一步反应。MS-ESI(m/z):301[M+1]+。
(4-(2-氯-2-氧代乙基)苯基)甲基-d22,4-二甲基苯甲酸酯(3e)
向2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)-甲基-d2)苯基)乙酸(3d)(1.9g，6.2mmol)的DCM(40mL)溶液中加入草酰氯(0.79mL，7.4mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。浓缩得到(4-(2-氯-2-氧代乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3e)粗品，无进一步纯化，直接用于下一步反应。
(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲 基苯甲酸酯(3f)
在-70℃下，向(R)-4-苄基恶唑啉-2-酮(1.1g，6.2mmol)的THF(40mL)溶液中逐滴加入n-BuLi(1.6M，4.3mL，6.8mmol)，然后加入(4-(2-氯-2-氧代乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3e)(2.0g，6.2mmol)的THF溶液，混合物于-70℃下搅拌1h。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应并用EtOAc(2×50mL)萃取。萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，PE/EtOAc(10:1～5:1)洗脱得到标题化合物(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基-苯甲酸酯(3f)。MS-ESI(m/z):460[M+1]+。
(4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧 代丙基-2-基)苯基)甲基-d22,4-二甲基苯甲酸酯(3g)
在-70℃下，向(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苯基)-甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3f)(1.0g，2.2mmol)的THF(20mL)溶液中逐滴加入KHMDS(1.0M，2.6mL，2.61mmol)。混合物在-70℃下将搅拌30min，然后在-70℃下逐滴加入叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基)氨基甲酸酯(0.65g，2.6mmol)(WO2017/086941)的THF(3mL)溶液。混合物在0℃下搅拌1h。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应并用EtOAc(3×50mL)萃取。萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，PE/EtOAc(10:1～5:1)洗脱得到标题化合物(4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3g)。MS-ESI(m/z):589[M+1]+。
(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯 基)丙酸(3h)
在0℃下，向(4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3g)(1.1g，1.9mmol)的THF/H2O(22ml/7ml)溶液中依次加入H2O2(30％，0.85g，7.5mmol)和LiOH.H2O(78mg，1.9mmol)，混合物在0℃下搅拌10分钟。用10％的Na2SO3水溶液淬灭反应。EtOAc(3×50ml)萃取。萃取液盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，DCM/MeOH(100:1～20:1)洗脱得到标题化合物(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)丙酸(3h)。MS-ESI(m/z):430[M+1]+。
(S)-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯 基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3i)
向异喹啉-6-胺(23mg，0.16mmol)和(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)丙酸(3h)(43mg，0.10mmol)的DMF(1mL)溶液中加入EDCI(39mg，0.21mmol)、TEA(33mg，0.30mmol)和HOBT(27mg，0.21mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。用水稀释混合物并用EtOAc(3×5ml)萃取。萃取液用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，DCM/MeOH(15:1)洗脱得到标题化合物(S)-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3i)。MS-ESI(m/z):556[M+1]+。
(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d2 2,4- 二甲基苯甲酸酯(3)
依照实施例(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1)中的合成方法，将(S)-4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1b)替换为(S)-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3i)制备得到标题化合物(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)-苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3)。MS-ESI(m/z):456[M+1]+。
实施例4
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2, 4-二甲基苯甲酸酯二盐酸盐(4)
(R)-4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯 (4a)
标题化合物(R)-4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4a)合成方法如专利WO2017/086941所示。MS-ESI(m/z):458[M+1]+。
4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代 丙基-2-基-3,3-d2)
苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4b)
在-70℃下，向标题化合物(R)-4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4a)(1.0g，2.2mmol)的THF(20mL)溶液中逐滴加入KHMDS(1.0M，2.6mL，2.61mmol)。混合物在-70℃下将搅拌30min，然后在-70℃下滴加叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基-d2)甲酯(F)(0.65g，2.6mmol)的THF(3mL)溶液。混合物在0℃下搅拌1h。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应并用EtOAc(3×50mL)萃取。萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，PE/EtOAc(10:1～5:1)洗脱得到标题化合物4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4b)。MS-ESI(m/z):589[M+1]+。
(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基)苯基) 丙酸-3,3-d2酸(4c)
依照实施例(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基-d2)-苯基)丙酸(3h)中的合成方法，将(4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苯基)甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3g)替换为4-((S)-1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4b)制备得到标题化合物(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基-苯甲酰基)氧基)甲基)苯基)丙酸-3,3-d2酸(4c)。MS-ESI(m/z):430[M+1]+。
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2, 4-二甲基苯甲酸酯(4d)
依照实施例(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(1)中的合成方法，将(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基-苯甲酰基)氧基)甲基)苯基)丙酸(1a)替换为(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基)苯基)丙酸-3,3-d2酸(4c)制备得到标题化合物(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4d)。MS-ESI(m/z):457[M+1]+。
(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2, 4-二甲基苯甲酸酯二盐酸盐(4)
向(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯(4d)(22mg，0.048mmol)的DCM(1mL)和MeOH(0.1mL)溶液中加入HCl(30％EtOH溶液，0.108mmol)。搅拌10分钟后，浓缩混合物得到标题化合物(S)-4-(3-氨基-1-((异喹啉-6-基-1-d)氨基)-1-氧代丙基-2-基-3,3-d2)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯二盐酸盐(4)。MS-ESI(m/z):457[M+1]+。
实施例5
(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)-甲 基-d22,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯二盐酸盐(5)
/>
(4-(2-甲氧基-2-氧代乙基-1,1-d2)苯基)甲基-d22,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5a)
在室温下，将甲基2-(4-(羟基甲基-d2)苯基)乙酸酯-d2(E)(610mg，3.30mmol)、2,4-双(甲基-d3)苯甲酸(C)(517mg，3.30mmol)、EDCI(1.2g，6.0mmol)和DMAP(81mg，0.66mmol)在DCM(20mL)中的混合物搅拌过夜。用DCM稀释混合物，水和盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，PE/EtOAc(10:1)洗脱得到标题化合物(4-(2-甲氧基-2-氧代乙基-1,1-d2)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5a)。MS-ESI(m/z):323[M+1]+。
2-(4-(((2,4-二(甲基-d3)苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)乙酸-2,2-d2酸(5b)
向(4-(2-甲氧基-2-氧代乙基-1,1-d2)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5a)(752mg，2.33mmol)的D2O(15mL)和THF(10mL)溶液中加入LiOH.H2O(108mg，2.6mmol)。在室温下搅拌2h，将混合物酸化至pH＝2～3，用水稀释，EtOAc(3×)萃取。合并EtOAc层用H2O和盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩得到标题化合物2-(4-(((2,4-二(甲基-d3)苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)乙酸-2,2-d2酸(5b)。MS-ESI(m/z):307[M-1]-。
(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基-1,1-d2)苯基)甲基-d2 2, 4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5c)
依照实施例3f中的合成方法，将2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)-甲基-d2)苯基)乙酸(3d)替换为2-(4-(((2,4-二(甲基-d3)苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)乙酸-2,2-d2酸(5b)制备得到标题化合物(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基-1,1-d2)-苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5c)。MS-ESI(m/z):468[M+1]+。
(S)-(4-(1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧 代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5d)
依照实施例3g中的合成方法，将(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基)苯基)-甲基-d2 2,4-二甲基苯甲酸酯(3f)和叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基)甲酯替换为(R)-(4-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-氧代乙基-1,1-d2)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5c)和叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基-d2)甲酯(F)制备得到标题化合物(S)-(4-(1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5d)。MS-ESI(m/z):598[M+1]+。
(S)-2-(4-(((2,4-二(甲基-d3)苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)-3-((叔丁氧基羰 基)氨基)丙酸-2,3,3-d3酸(5e)
在0℃下，向(S)-(4-(1-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5d)(538mg，0.904mmol)的D2O(5mL)和THF(10mL)溶液中依次加入H2O2(0.0.41mL，3.61mmol)-3.61mmol)和LiOH.H2O(42mg,0.99mmol)。混合物在0℃下搅拌0.5h，然后用NaHSO3(10％水溶液)淬灭。将混合物酸化至pH＝2～3，EtOAc(3×50ml)萃取。萃取物用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化，DCM/MeOH(100:1～10:1)洗脱得到标题化合物(S)-2-(4-(((2,4-二(甲基-d3)苯甲酰基)氧基)-甲基-d2)苯基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸-2,3,3-d3酸(5e)。MS-ESI(m/z):439[M-1]-。
(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲 基-d22,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5f)
依照实施例3中的合成方法，将(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(4-(((2,4-二甲基苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)丙酸(3h)替换为(S)-2-(4-(((2,4-二(甲基-d3)苯甲酰基)氧基)甲基-d2)苯基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸-2,3,3-d3酸(5e)制备得到标题化合物(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d22,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5f)。MS-ESI(m/z):465[M+1]+。
(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲 基-d22,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯二盐酸盐(5)
向(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5f)(20mg，0.043mmol)的DCM(1mL)和MeOH(0.1mL)溶液中加入HCl(30％乙醇溶液，0.108mmol)。搅拌10分钟后，浓缩混合物得到标题化合物(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯二盐酸盐(5)。MS-ESI(m/z):465[M+1]+。
实施例6
(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2-d)苯基)甲基-d22, 4-二(甲基-d3)苯甲酸酯二盐酸盐(6)
依照实施例5中的合成方法，将叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基-d2)甲酯(F)替换为叔丁基((1H-苯并[d][1,2,3]***-1-基)甲基)甲酯制备得到标题化合物(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2-d)苯基)甲基-d2 2,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯二盐酸盐(6)。MS-ESI(m/z):463[M+1]+。
对照化合物1
(S)-4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲 酸酯二盐酸盐(对照化合物1)
(S)-4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯披露和制备基本上与WO2017/086941第21页概述的方法相同。依照实施例5中的合成方法，将(S)-(4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基-2,3,3-d3)苯基)甲基-d22,4-二(甲基-d3)苯甲酸酯(5f)替换为(S)-4-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙基-2-基)苄基2,4-二甲基苯甲酸酯制备得到对照化合物1。
表1中列出实施例7-24是基本上按照与实施例1-6相同的方法，使用的起始物料是商购或者根据文献方法制得。表1给出了实施例7-24的名称及结构。
表1
/>
/>
细胞增殖抑制试验
ROCK-I(h)体外抑制活性试验-方法A
ROCK-I(h)激酶活性测定采用Eurofins Pharma Discovery Services UKLimited提供的KinaseProfilerTM激酶筛选技术。ROCK-1(h)激酶、测试化合物与包含8mMMOPS pH 7.0(VWR cat#441644J)、0.2mM EDTA(Sigma cat#E5134)、30μM的KEAKEKRQEQIAKRRRLSSLRASTSKSGGSQK(Pepceuticals)、10mM乙酸镁(10mM Merck Millipore cat#105819)和[γ-33P-ATP](Perkin Elmer cat#NEG602K)的激酶反应缓冲液一起孵育。先将测试化合物用100％DMSO(Calbiochem cat#317275)溶解并加入到96孔板中，然后使用Mosquito X1(TTP Labtech)加入反应混合液，最后使用Matrix Wellmate.分液器加入Mg/ATP混合物起始反应。整个反应在室温下进行40分钟后，使用Matrix Wellmate.分液器向反应液中加入3％磷酸溶液(Fisher Scientific cat#O/0500/PB17)终止反应。随后吸取反应液滴到滤纸上，并用磷酸盐清洗，再用甲醇清洗，将滤纸晾干后用Trilux Wallac Microbeta检测仪(Perkin Elmer)进行闪烁计数。试验结果与用DMSO代替测试化合物的空白对照组相比较，如果适用，应用XLFit 5.3(ID Business Solutions)进行IC50曲线分析。通过非线性回归分析拟合S形剂量反应(可变斜率)曲线。
ROCK-II(h)激酶活性测定采用Eurofins Pharma Discovery Services UKLimited提供的KinaseProfilerTM激酶筛选技术。ROCK-II(h)激酶、测试化合物与包含50mMTris pH 7.5(VWR cat#103157P)、0.1mM EGTA(VWR cat#20308)、30μM的KEAKEKRQEQIAKRRRLSSLRASTSKSGGSQK(Pepceuticals)、10mM乙酸镁和[γ-33P-ATP](Perkin Elmer cat#NEG602K)的激酶反应缓冲液一起培养。先将测试化合物用100％DMSO(Calbiochem cat#317275)溶解并加入到96孔板中，然后使用Mosquito X1(TTP Labtech)加入反应混合液，最后使用Matrix Wellmate.分液器加入Mg/ATP混合物起始反应。整个反应在室温下进行40分钟后，使用Matrix Wellmate.分液器向反应液中加入3％磷酸溶液(Fisher Scientificcat#O/0500/PB17)终止反应。随后吸取反应液滴到滤纸上，并用磷酸盐清洗，再用甲醇清洗，将滤纸晾干后用Trilux Wallac Microbeta检测仪(Perkin Elmer)进行闪烁计数。试验结果与用DMSO代替测试化合物的空白对照组相比较，如果适用，应用XLFit 5.3(IDBusiness Solutions)进行IC50曲线分析。通过非线性回归分析拟合S形剂量反应(可变斜率)曲线。
按照方法A中所述的生物学步骤对如上所述制备的所选化合物进行试验。其结果如表2所示。
表2
实施例 ROCK-I(h)IC50(nM) ROCK-II(h)IC50(nM)
1 44 15
3 64 18
18 26 8
ROCK-I(h)体外抑制活性检测-方法B
ROCK-I(h)激酶活性测定采用CISBIO的KinEASE-STK激酶检测试剂盒。用Echo 550向反应板(784075，Greiner)每孔加入10nL稀释好的化合物，1000g离心1分钟，用封板膜封住反应板。用1×激酶缓冲液(1体积的5X酶缓冲液与4体积的蒸馏水；5mM MgCl2；1mM DTT)配置5X ROCK-I(Invitrogen，PV 3691)。取2μL的5X ROCK-I加入到384孔测试板(784075，Greiner)中后，各个孔加入4μL的1x激酶缓冲液，1000g离心30s，室温孵育10分钟。用1x激酶缓冲液中制备5x TK-substrate-biotin(5μM)和5x ATP溶液(100μM)。向反应板中加入2μLTK-substrate-biotin和2μL ATP溶液起始反应。1000g离心30s，用封板膜封住反应板，室温孵育20分钟。用HTRF检测缓冲液制备4x Sa-XL 665(250nM)和TK-antibody-Cryptate。向反应板中每孔加入5μL Sa-XL 665和5μL TK-antibody-Cryptate。1000g离心30s，室温孵育1h。用Envision 2104读板器(Perkin Elmer)分别读取615nm(Cryptate)和665nm(XL665)的荧光信号。计算每个孔的荧光比值(665/615nm)。采用GraphPad 6.0软件进行数据回归分析，根据化合物不同对数浓度和相对应的％抑制率计算IC50值。
按照方法B中所述的生物学步骤对如上所述制备的所选化合物进行试验。其结果如表3所示。
表3
ROCK体内抑制活性检测-方法C
奥布卡因(Santen Co.JP lot:B2031)；碳酸盐限制器(harvard apparatus)；TONOVET Plus眼压计(Finland icare)；青紫兰兔：2～8个月，体重2.23～4.41kg(邳州市东方养殖有限公司，生产许可证号：SCXK(苏)2014-0005，动物合格证号：201814493，201826314)。
将18只雄性兔子随机分为3组(每组6只动物)。溶媒对照组，Rhopressa@组(0.02％奈他地尔，相当于0.2mg/mL奈他地尔)或0.2mg/mL Example 11组右眼给药，每天1次，连续3天，左眼给与生理盐水作为内部对照。每天进行一次临床观察和眼科检查。首次给药前以及在第1天和第3天首次给药后0.5、2、4、6和24小时，用TONOVET Plus测量IOP。
使用下面公式计算IOP％的变化：
IOP％(△IOP％)的变化＝[IOP(time)-IOP(control)]/IOP(control)*100.
按照方法C中所述的生物学步骤对如上所述制备的选择化合物进行了试验。第3天第24小时的给药结果如表4。
表4
实施例 △IOP％ 实施例 △IOP％
1 -1.5 13 -8.48
3 -5.02 14 -5.81
4 -15.63 15 -4.25
5 1.19 16 -1.44
6 -16.08 18 -1.1
7 0.48 19 -3.3
8 -7.52 20 -4.89
9 -3.06 21 -5.06
10 -0.78 22 0.08
11 -9.57 23 -0.87
12 -5.23 参考化合物1 -4.35

Claims (8)

1.化合物，选自：
和其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
和其药学上可接受的盐。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自：
和其药学上可接受的盐。
4.权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中其药学上可接受的盐是盐酸盐。
5.权利要求4的化合物或其药学上可接受的盐，其中其药学上可接受的盐是二盐酸盐。
6.药物组合物，包含权利要求1-5中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的载体。
7.权利要求1-5中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求6的药物组合物在制备用于治疗、改善或预防青光眼、高眼压或神经退行性眼病的药物中的用途，其中所述化合物或其药学上可接受的盐或者药物组合物任选地与第二治疗剂组合。
8.权利要求1-5中的任一项的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求6的药物组合物在制备用于治疗眼内压升高的药物中的用途。
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