CN112753889B

CN112753889B - 益母草防霉剂、制备方法及在鱼饲料中应用

Info

Publication number: CN112753889B
Application number: CN202011641061.8A
Authority: CN
Inventors: 李华涛; 吴敏; 廖江龙; 李绮绮
Original assignee: Neijiang Normal University
Current assignee: Neijiang Normal University
Priority date: 2020-12-31
Filing date: 2020-12-31
Publication date: 2023-05-09
Anticipated expiration: 2040-12-31
Also published as: CN112753889A

Abstract

本发明公开了益母草防霉剂、制备方法及在鱼饲料中的应用，属于饲料及其添加剂技术领域。本发明解决的技术问题是现有饲料用防霉添加剂一般为化学合成物，有腐蚀性和刺激性，对鱼的适口性差。本发明益母草防霉剂用于饲料的防霉，由益母草提取物组成，包括乙酸乙酯提取物或乙醇提取物中的至少一种。使用益母草提取物作为饲料用防霉添加剂，可规避化学合成物添加剂的缺点，发挥了益母草的综合利用潜力。

Description

益母草防霉剂、制备方法及在鱼饲料中应用

技术领域

本发明属于鱼饲料及其添加剂技术领域，具体涉及益母草防霉剂、制备方法及在鱼饲料中的应用。

背景技术

自然界中霉菌分布广泛，种类繁多，而绝大多数霉菌都能引起饲料的发霉变质，使饲料的营养价值大大降低，适口性变差，严重霉变的饲料还会导致动物生长缓慢，肝脏受损，乃至中毒死亡。饲料中水分含量越高，其发生霉变的几率就越大；尤其是水产饲料其存放地一般为环境湿热的鱼塘边，发生霉变的可能性更大。饲料中添加防霉剂能抑制霉菌的生长，延长饲料的保藏期。在饲料生产中所用的防霉剂一般是有机酸类，如丙酸、丙酸钠、丙酸钙、乙酸、山梨酸、山梨酸钠、苯甲酸钠、富马酸等，有单一型和复合型之分。这些物质一般为化学合成物，有腐蚀性和刺激性，对鱼的适口性差，甚至含有害物质，且有在水产品中残留的风险，其安全性一直受到质疑。开发新型的天然饲料防霉剂具有重要意义。

益母草(Leonurus artemisia(Laur.)S.Y.Hu F)是唇形科益母草属一年或二年生草本植物。全国大部分地区均有分布，生于山野荒地、田埂、草地等。益母草干燥地上部分为常用中药。现代药学研究结果显示，益母草富含生物碱、二萜、黄酮、多酚和多糖等物质，具有镇静、镇痛、抑菌、抗炎、抗缺氧、抗氧化、抗应激、抗疲劳、补血、活血化瘀、促凝血和提高蛋鸡产量的作用。但目前有关益母草提取物作为鱼饲料防霉剂的报道较少。在我国益母草资源丰富，但利用十分有限。因此开展益母草在水产饲料中的应用研究，开发益母草新用途，改善传统的益母草利用结构，开发益母草的综合利用潜力，提高益母草经济和社会效益，具有十分重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有饲料用防霉添加剂一般为化学合成物，有腐蚀性和刺激性，对鱼的适口性差。

为解决上述技术问题，本发明公开了益母草防霉剂，用于饲料的防霉，由益母草提取物组成。

其中，益母草提取物包括益母草的乙酸乙酯提取物或益母草的乙醇提取物中的至少一种。

其中，益母草的乙酸乙酯提取物中总多酚类物质含量≥40.0g/kg。

优选的，益母草的乙酸乙酯提取物中总多酚类物质含量为40.34-43.75g/kg。

其中，益母草的乙醇提取物中总多酚类物质含量≥55.0g/kg。

优选的，益母草的水提取物中总多酚类物质含量为58.63-61.52g/kg。

采用Folin–Ciocalteau试剂法测定益母草乙酸乙酯提取物和益母草水提取物中的总多酚类物质含量。

本发明进一步公开了上述益母草防霉剂的制备方法，包括如下步骤：将益母草与乙酸乙酯混合、搅拌，所得混合液经过滤获得滤液和提取残渣，滤液经减压蒸馏去除溶剂得到益母草的乙酸乙酯提取物；将益母草或乙酸乙酯提取残渣与乙醇混合、搅拌，所得混合液经过滤获得滤液和残渣，将滤液减压蒸馏除溶剂，获得益母草的乙醇提取物。

其中，益母草与乙酸乙酯或乙醇按重量与体积1：6-8的比例混合，即固体重量与液体体积的比值。

进一步的，本发明还公开了益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，在鱼饲料的制备过程加入益母草乙酸乙酯提取物。

具体的，益母草乙酸乙酯提取物的添加量占饲料总重的0.3-1.8％。

优选的，益母草乙酸乙酯提取物的添加量占饲料总重的1.2-1.8％。

最优选的，益母草乙酸乙酯提取物的添加量占饲料总重的1.59％。

进一步的，本发明还公开了益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，在鱼饲料的制备过程加入益母草乙醇提取物。

具体的，益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的0.3-1.8％。

优选的，益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的1.2-1.8％。

最优选的，益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的1.56％。

进一步的，本发明还公开了益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，在鱼饲料的制备过程同时加入益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物。

具体的，益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的0.3-1.8％。

优选的，益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的1.2-1.8％。

最优选的，益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的1.44％。

作为优选的，加入两种提取物时，益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物等重量比例使用。

本发明具有如下的优点和有益效果：

本发明首次使用益母草提取物作为饲料用防霉添加剂，可规避化学合成物添加剂的缺点，发挥了益母草的综合利用潜力；

本发明利用益母草提取物作为饲料防霉剂，具有价格低、用量少、来源广、无残留、无毒性、加工简便、不影响鱼虾对营养成分的吸收等特点；

本发明根据饲料的发霉情况，确定了益母草中具有防霉功能的活性成分的极性特点，所用益母草乙酸乙酯提取物为中极性，所用益母草乙醇提取物为高极性，因此类似于此极性的其他提取物也适用于此方法；

本发明根据益母草提取物对饲料霉变的影响，筛选出了合适的浓度范围、确定了最佳添加浓度；

本发明提供了简便的将益母草提取物添加入饲料中的媒介和方法。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解和说明，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：

图1为添加含有不同种类不同浓度益母草提取物的颗粒饲料发霉率的多项式回归示意图。

具体实施方式

由于现有饲料用防霉添加剂一般为化学合成物，有腐蚀性和刺激性，对鱼的适口性差，对此，本发明以天然植物益母草为研究对象，公开了益母草防霉剂，该防霉剂由益母草提取物组成，用于饲料的防霉，可以替代化学合成物添加剂，同时对益母草进行了充分利用。

进一步，发明人在试验中发现，并不是任意的益母草提取物能够对饲料的防霉性能有所帮助，通过前期大量的筛选实验，发现当使用益母草的乙酸乙酯提取物或益母草的乙醇提取物中的至少一种，能够显著提升饲料的防霉性能。

具体的，益母草的乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均可以提高饲料的防霉性，并且，益母草的乙酸乙酯提取物和乙醇提取物一起使用时，饲料的防霉性能显著提升。

具体的，本发明益母草防霉剂的制备以及在饲料中的应用可按如下步骤进行：

(1)将干益母草粉碎过18目筛，获得益母草粉末；

(2)按干益母草粉末与乙酸乙酯1：6-8的比例混合，旋转搅拌超过6小时，将混合液过滤获得滤液和提取残渣，将滤液减压蒸馏去除溶剂获得乙酸乙酯提取物；将益母草与乙醇混合、搅拌，所得混合液经过滤获得滤液和残渣，滤液经减压蒸馏除去溶剂，获得益母草的乙醇提取物。优选的，按益母草乙酸乙酯提取残渣与乙醇1：6-8的比例混合，旋转搅拌超过6小时，将混合液过滤，获得滤液和残渣，将滤液减压蒸馏去除溶剂，获得益母草乙醇提取物。

(3)在将乙酸乙酯提取物添加入鱼饲料的过程中，先将益母草乙酸乙酯提取物溶于配方中的油中，再将溶有乙酸乙酯提取物的油混入其他饲料原料中，制成鱼颗粒饲料；在将乙醇提取物添加入鱼饲料的过程中，先将益母草乙醇提取物溶于水中，再将其混入其他饲料原料中，制成鱼颗粒饲料。

当根据实际需求提高饲料的防霉性能时，在制备饲料的过程中添加益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物中的一种均可。

单独加入乙酸乙酯提取物，优选的，添加量占饲料总重的0.3-1.8％；进一步优选的，乙酸乙酯提取物添加量占饲料总重的1.2-1.8％；最优选的，乙酸乙酯提取物添加量占饲料总重的1.59％。

单独加入乙醇提取物，优选的，添加量占饲料总重的0.3-1.8％；进一步优选的，乙醇提取物添加量占饲料总重的1.2-1.8％；最优选的，乙醇提取物添加量占饲料总重的1.56％。

进一步的，本发明发现，当益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物一起使用时，饲料的防霉性能显著提升。

优选的，益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物添加量占饲料总重的0.3-1.8％。

进一步优选的，益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物添加量占饲料总重的1.2-1.8％。

最优选的，益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物添加量占饲料总重的1.44％。

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

4种不同益母草提取物制备实施例

将干益母草1000g粉碎过18目筛，获得益母草粉末；

取益母草粉末400g，按与石油醚1：6的比例混合，900转/分钟旋转搅拌5小时，将混合液过滤，获得滤液和残渣，重复提取3次，将滤液减压蒸馏至恒重去除石油醚，获得益母草石油醚提取物；

取益母草粉末400g，按与乙酸乙酯1：6的比例混合，900转/分钟旋转搅拌5小时，将混合液过滤，获得滤液和残渣，重复提取3次，将滤液减压蒸馏至恒重去除乙酸乙酯，获得益母草乙酸乙酯提取物；

按益母草乙酸乙酯提取残渣与乙醇1：6的比例混合，900转/分钟旋转搅拌5小时，将混合液过滤，获得滤液和残渣，重复提取3次，将滤液减压蒸馏至恒重去除乙醇，获得益母草乙醇提取物；

按益母草乙醇提取残渣与水1：6的比例混合，900转/分钟旋转搅拌5小时，将混合液离心或过滤，获得澄清上清液或滤液和残渣，重复提取3次，将上清液或滤液减压蒸馏至恒重去除水，获得益母草水提取物。

添加不同益母草提取物的鱼饲料制备实施例

根据饲料配方，分别将上述制备的4种益母草提取物按0(空白)和1.0％的浓度(占饲料总重的1.0％)添加到饲料原料中，制成直径2mm的颗粒饲料，饲料配方如表1所示，具体制备方法如下：

先将石油醚提取物与鱼油和玉米油混合均匀，再与配方中其他原料混合均匀，然后加入占饲料总质量50％的饮用水、搅拌混合均匀，用小型颗粒饲料机制成直径2mm的颗粒饲料、60℃鼓风烘箱内干燥24h；

先将乙酸乙酯提取物与鱼油和玉米油混合均匀，再与配方中其他原料混合均匀，然后加入占饲料总质量50％的饮用水、搅拌混合均匀，用小型颗粒饲料机制成直径2mm的颗粒饲料、60℃鼓风烘箱内干燥24h；

先将乙醇提取物溶于占饲料总质量50％的饮用水中，再与配方中其他原料混合均匀，用小型颗粒饲料机制成直径2mm的颗粒饲料、60℃鼓风烘箱内干燥24h；

先将水提取物溶于占饲料总质量50％的饮用水中，再与配方中其他原料混合均匀，用小型颗粒饲料机制成直径2mm的颗粒饲料、60℃鼓风烘箱内干燥24h。

表1饲料配方

¹每千克维生素添加剂包含：视黄醇(500,000IU/g)0.80g、维生素D₃(500,000IU/g)0.48g、DL-α-生育酚(50％)20.00g、维生素K₃(23％)0.43g、维生素B₁(90％)0.11g、核黄素(80％)0.63g、吡哆醇(81％)0.92g、氰钴胺(1％)0.10g、D-泛酸钙(90％)2.73g、烟酸(99％)2.82g、D-生物素(2％)5.00g、肌醇(99％)52.33g和叶酸(96％)0.52g。

²每千克矿物质添加剂包含：FeSO₄·7H₂O(含Fe 20％)69.70g、CuSO₄·5H₂O(含Cu25％)1.20g、ZnSO₄·7H₂O(含Zn 23％)21.64g、MnSO₄·H₂O(含Mn 32％)4.09g、Na₂SeO₃·5H₂O(含Se 1％)2.50g和KI(含I 4％)2.90g。

添加不同益母草提取物的鱼饲料霉菌生长测试例

取20克上述烘干的颗粒饲料加入到培养皿内摊平，分别加入含有0.01％的黑曲霉和绿曲霉孢子的水溶液15毫升，25℃培养36h，检测结果见表2显示，表中“-”为没有发霉，“+”为轻度发霉，“++”为中度发霉，“+++”为严重发霉。此实验重复了3次，结果类似。结果表明添加了益母草乙酸乙酯提取物和乙醇提取物的颗粒饲料黑曲霉和绿曲霉的生长最差，防霉效果好。

表2不同益母草提取物的鱼饲料霉菌生长情况

不同种类不同浓度益母草提取物对颗粒饲料发霉率的影响

按以上相同的配方和方法，分别将益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和复合提取物(乙酸乙酯提取物/乙醇提取物＝1:1)分别按0.0、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8％的浓度添加到饲料中，分别制成相应的7种颗粒饲料。60℃风干后，每种饲料各取20克加入到培养皿内摊平，再分别加水20毫升，敞口使其自然染霉，25±2℃下培养。36h后观察结果和评估发霉区域占培养皿面积的百分比。检测结果见表3显示，多项式回归分析如图1显示，数据表示为3个重复的平均数±标准差，图中自上而下三个方程最小x值分别为1.56、1.59和1.44。

结果表明添加益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和复合提取物显著降低了饲料发霉的比例，同时添加乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对饲料颗粒发霉的抑制作用比其单独使用效果更好，益母草乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和复合提取物抑制饲料发霉的最佳添加浓度分别为1.59、1.56和1.44％(P<0.05)。

表3不同种类不同浓度益母草提取物对颗粒饲料发霉率的影响

以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，其特征在于：所述益母草防霉剂用于鱼饲料的防霉，其中霉菌为绿曲霉，所述益母草防霉剂包括益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物，所述益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物等重量比例使用；

所述鱼饲料的制备过程加入益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物，益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物添加量占饲料总重的0.3-1.8%；

益母草乙醇提取物的制备方法如下：将益母草与乙酸乙酯混合、搅拌，所得混合液经过滤获得滤液和益母草的乙酸乙酯提取残渣；将乙酸乙酯提取残渣与乙醇混合、搅拌，所得混合液经过滤获得滤液和残渣，将滤液减压蒸馏除溶剂，获得益母草乙醇提取物。

2.根据权利要求1所述的益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，其特征在于：益母草与乙酸乙酯按重量与体积1：6-8的比例混合；所述乙酸乙酯提取残渣与乙醇按重量与体积1：6-8的比例混合。

3.根据权利要求1所述的益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，其特征在于：益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的1.2-1.8%。

4.根据权利要求3所述的益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，其特征在于：益母草乙酸乙酯提取物和益母草乙醇提取物的添加量占饲料总重的1.44%。

5.根据权利要求1所述的益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，其特征在于：益母草乙酸乙酯提取物中总多酚类物质含量≥40.0g/kg；益母草乙醇提取物中总多酚类物质含量≥55.0 g/kg。

6.根据权利要求5所述的益母草防霉剂在制备鱼饲料中的应用，其特征在于：益母草乙酸乙酯提取物中总多酚类物质含量为40.34-43.75 g/kg；益母草乙醇提取物中总多酚类物质含量为58.63-61.52 g/kg。