CN112694507B

CN112694507B - 四氢蒽醌糖苷类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用

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Publication number: CN112694507B
Application number: CN202011641448.3A
Authority: CN
Inventors: 黎孟枫; 龙玉华; 袁洁; 郑迎春; 范炜隆; 黄昀; 于暕辰
Original assignee: South China Normal University; Sun Yat Sen University
Current assignee: South China Normal University; Sun Yat Sen University
Priority date: 2020-12-31
Filing date: 2020-12-31
Publication date: 2022-03-29
Anticipated expiration: 2040-12-31
Also published as: CN112694507A

Abstract

本发明提供了四氢蒽醌糖苷类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用，本发明提供了一种新型四氢蒽醌糖苷类化合物，对肺癌、乳腺癌、结肠癌和肝癌细胞的生长和增殖具有很好的抑制作用，可诱导肿瘤细胞发生形态学变化，促进肿瘤细胞凋亡相关蛋白的表达以诱导肿瘤细胞发生凋亡，表现出优良的抗肿瘤特性，为研究开发抗肿瘤药物提供了新的选择和途径。

Description

四氢蒽醌糖苷类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体地，涉及四氢蒽醌糖苷类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是全球的主要公共健康问题，可影响到每个人的生活。癌症导致全球人口死亡率、致残率及影响每个人生活质量方面。世界卫生组织(WHO)下属的国际癌症研究机构(IARC)在《CA：A Cancer Journal for Clinicians》杂志发布了2020年全球癌症负担状况最新估计报告。世界癌症形势同样严峻：随着人口的老龄化和快速增长，全球的癌症发病数和死亡数也正在快速增长。癌症将成为21世纪死亡的首要原因，并且将是世界各国提高预期寿命的最重要障碍。目前对于肿瘤治疗的主要手段有化学疗法，放射疗法，免疫治疗。其中，尽管化疗药对大多数肿瘤治疗有一定疗效，但仍存在效率低，选择性差，毒副反应大及肿瘤耐药等局限性，因此，寻求高效，低毒，特异抗肿瘤药物仍是抗肿瘤药物治疗的努力目标。随着细胞分子生物学的发展，癌症从细胞水平上可以看作是调控细胞周期或细胞凋亡的关键分子发生紊乱，使得癌细胞处于无限制增殖状态。因此，开发新的细胞凋亡诱导剂成为一种新的抗肿瘤治疗策略。

蒽醌及其衍生物是一类广泛存在于自然界的天然有机化合物，天然蒽醌以9，10－蒽醌最为常见，其C-9、C-10为最高氧化状态，较为稳定。中药中存在的蒽醌类成分多为蒽醌的羟基、羧甲基、甲氧基和羧基衍生物，游离或核苷存在。先前报道蒽醌类具有止血、抗菌、泻下、利尿的作用，因此，蒽醌类化合物已是药物先导化合物的重要来源。四氢蒽醌类化合物是一类比较少见的天然结构，以微生物次生代谢产物居多，少量来源于植物，具有细胞毒活性，抗菌活性，抗疟原虫等生物活性。专利CN102134188B提供了一种从中药材黄根中分离得到的一种四氢蒽醌类化合物Prisconnatacin，可用于开发治疗肝癌、肺癌、乳腺癌以及白血病的药物。但目前并无四氢蒽醌糖苷类化合物在抗肿瘤方面的研究。

发明内容

本发明旨在提供四氢蒽醌糖苷类化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用，本发明提供了一种四氢蒽醌糖苷类化合物，本发明研究表明该四氢蒽醌糖苷类化合物在体内外对多种肿瘤细胞均具有抑制作用，可作为***等其他实体肿瘤的先导化合物，为开发新型候选抗肿瘤药物奠定基础。

本发明的首要目的是提供一种四氢蒽醌糖苷类化合物。

本发明的另一目的是提供所述四氢蒽醌糖苷类化合物、或其药学上可接受的盐、或立体异构体、或其前药在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的再一目的是提供所述四氢蒽醌糖苷类化合物、或其药学上可接受的盐、或立体异构体、或其前药在制备肿瘤细胞凋亡诱导剂中的应用。

本发明的再一目的是提供一种抗肿瘤的药物。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种四氢蒽醌糖苷类化合物，其化学结构式如下所示：

其中，R选自如下基团：

本发明在体外抗肿瘤细胞生长模型中，通过噻唑蓝(MTT)比色法检测到不同浓度的上述四氢蒽醌糖苷类化合物对肿瘤细胞具有浓度依赖性和时间依赖性，表现出作为抗肿瘤药物的优良特性。

此外，通过对上述四氢蒽醌糖苷类化合物抗肿瘤分子机制的研究，表明蒽醌糖苷系列化合物通过影响凋亡蛋白PARP蛋白的表达量，诱导细胞发生凋亡来实现抗肿瘤活性，更增加了其成为候选抗肿瘤化合物的可能，为进一步临床试验奠定了理论基础。

因此，以下应用都应在本发明的保护范围中：

上述四氢蒽醌糖苷类化合物、或其药学上可接受的盐、或立体异构体、或其前药在制备抗肿瘤药物中的应用；以及上述四氢蒽醌糖苷类化合物、或其药学上可接受的盐、或立体异构体、或其前药在制备肿瘤细胞凋亡诱导剂中的应用。

优选地，所述抗肿瘤为抑制肿瘤细胞生长、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡。

优选地，所述肿瘤为肺癌、乳腺癌、结肠癌或肝癌中的一种或几种。

优选地，所述四氢蒽醌糖苷类化合物药学上可接受的盐为其无机碱盐或金属络合物。

所述无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钡、氢氧化钙、氢氧化铵或氢氧化锂。

所述金属络合物是指四氢蒽醌糖苷化合物与铁离子、铂离子、钙离子、钡离子、钠离子、钾离子等金属离子的络合物。

优选地，所述四氢蒽醌糖苷类化合物前药是指可在体内转变成所述四氢蒽醌糖苷类化合物或其盐的物质。

本发明还请求保护一种包含上述四氢蒽醌糖苷类化合物、或其药学上可接受的盐、或立体异构体、或其前药的抗肿瘤药物。

优选地，所述药物还包括药用载体和/或稀释剂，制成不同的剂型。

所述药用载体指药物中的非活性成分，例如但不限于：碳酸钙、磷酸钙、各种糖(乳糖、甘露醇等)、淀粉，环糊精、硬脂酸镁、纤维素、碳酸镁、丙烯酸聚合物或甲基丙烯酸聚合物、凝胶(gelatin)、水、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、蓖麻油或氢化蓖麻油或乙氧基氢化蓖麻油、芝麻油、玉米油、花生油等。

所述稀释剂为淀粉(如玉米淀粉、小麦淀粉、马铃薯淀粉等)、乳糖、糊精、蔗糖、预胶化淀粉、微晶纤维素、无机盐类(如碳酸氢钙、硫酸钙、残酸钙等)或甘露醇等。

优选地，所述药物的剂型为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、糖浆剂、混悬剂、注射剂、粉针剂、水针剂、气雾剂、软膏剂、滴眼剂或栓剂。

所述化合物的使用剂量将根据具体剂型、应用模式和具体部位、患者及所要治疗的肿瘤疾病而变化、还需考虑其他因素如年龄、体重、性别、饮食、给药时间、***速率、患者症状、药物结合力、反应敏感性及疾病严重程度，可以在最大允许剂量内连续给药或者定期给药。

此外，本发明的四氢蒽醌糖苷类化合物可与其他药物联合用药治疗。

本发明四氢蒽醌糖苷类化合物或其组合药物的给药可以通过任何适当的方法进行。优选地，所述药物的给药方式为经胃肠道给药、注射给药、呼吸道给药、皮肤给药、粘膜给药或腔道给药。

作为一种优选地给药方式，如注射给药中的静脉输注，输注时间最多为48小时。

作为一种可选择的方案，本发明的化合物1-5通过图3所示合成路线合成得到，具体方法如下：

化合物1的合成：称取化合物C(0.1mmol)，D-***糖亚胺酯a(0.33mmol，3eq)，加入干燥的二氯甲烷(2mL)作溶剂，加入干燥过的分子筛

MS 0.4g，常温搅拌1h后加入4mgAuCl₃(0.1eq)，继续搅拌1h。反应完后，过滤，浓缩，硅胶过柱[V(二氯甲烷)：V(丙酮)＝40：1]得红色固体产物1。

化合物2的合成：称取化合物1(0.1mmol)于反应瓶中，加入3mL 10％甲醇/甲醇钠，常温下搅拌15min，TLC跟踪至反应完全后加入树脂

50WX8搅拌直到溶液重新变为红色，终止反应，过滤，浓缩，硅胶过柱[V(二氯甲烷):V(乙酸乙酯):V(甲醇)＝20:20:1]，得化合物2。

化合物3的合成：称取化合物2(0.056mmol)与圆底烧瓶中，依次加入1mL丙酮和0.5mL的2，2-二甲氧基丙烷，滴入0.05mL的浓硫酸，常温下搅拌2h，萃取，浓缩，硅胶过柱[V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1：5]，得化合物3。

化合物4的合成：称取化合物3(0.055mmol)，L-甘露糖亚胺酯(0.165mmol，3eq)，加入2mL干燥的二氯甲烷作溶剂，加入干燥过的分子筛

MS 0.4g，常温搅拌1h后加入4mgAuCl₃(0.1eq)，继续搅拌1h。反应完后，过滤，浓缩，硅胶过柱[V(乙酸乙酯)：V(石油醚)＝1：2]，得红色固体化合物4。

化合物5的合成：称取化合物4(0.025mmol)于5mL圆底烧瓶中，加入1mL的甲醇作为溶剂，常温搅拌下滴加1mL的0.1M的HCl，反应6h至反应完全，用CH₂Cl₂萃取，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩，硅胶过柱分离[V(二氯甲烷):V(甲醇)＝40:1]，得红色固体化合物5。

化合物6的合成方法同化合物1，只需将D-***糖亚胺酯变更为D-2-脱氧核糖亚胺酯；化合物7的合成方法同化合物2；化合物8的合成方法同化合物3；化合物9的合成方法同化合物1，只需将D-***糖变更为D-甘露糖亚胺酯。

化合物10的合成方法为：称取化合物9(0.1mmol)于反应瓶中，加入3mL 10％甲醇/甲醇钠，常温下搅拌15min，TLC跟踪点板，反应完全后加入

50WX8 hydrogen form搅拌直到溶液重新变为红色，终止反应，过滤，浓缩，改性硅胶过柱[V(二氯甲烷):V(乙酸乙酯):V(甲醇)＝20:20:1]，得中间产物D。称取D(0.056mmol)与圆底烧瓶中，依次加入1mL丙酮和0.5mL的2，2-二甲氧基丙烷，滴入0.05mL的浓硫酸，常温下搅拌2h，萃取，浓缩，[V(乙酸乙酯):V(石油醚)＝1：5]过柱，得化合物10。

化合物11的合成方法同化合物1，只需将D-***糖亚胺酯变更为D-葡萄糖亚胺酯；化合物12的合成方法同化合物2，只需将D-***糖亚胺酯变为D-木糖亚胺酯；化合物13的合成方法同化合物2，只需将D-***糖亚胺酯变为D-鼠李糖亚胺酯；化合物14的合成方法同化合物3，只需将反应底物变更为化合物13。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供的四氢蒽醌糖苷类化合物对肺癌、乳腺癌、结肠癌和肝癌细胞的生长和增殖具有很好的抑制作用，可诱导肿瘤细胞发生形态学变化，促进肿瘤细胞凋亡相关蛋白的表达以诱导肿瘤细胞发生凋亡，表现出优良的抗肿瘤特性，为研究开发抗肿瘤药物提供了新的选择和途径。

附图说明

图1为蒽醌类化合物的母核结构。

图2为蒽醌糖苷类化合物1-14的结构式。

图3为蒽醌糖苷类化合物1-5的合成路线。

图4为蒽醌糖苷类化合物1不同浓度及不同时间点处理A549细胞后细胞形态的变化。

图5为蒽醌糖苷类化合物2不同浓度及不同时间点处理A549细胞后细胞形态的变化。

图6为蒽醌糖苷类化合物3不同浓度及不同时间点处理A549细胞后细胞形态的变化。

图7为蒽醌糖苷类化合物13不同浓度及不同时间点处理A549细胞后细胞形态的变化。

图8为蒽醌糖苷类化合物1对A549细胞增殖的影响。

图9为蒽醌糖苷类化合物1处理A549细胞后，EdU阳性细胞统计结果。

图10为蒽醌糖苷类化合物1处理后凋亡相关蛋白的表达情况。

图11为不同荷瘤小鼠组实验终点剥离的肿瘤。

图12为不同荷瘤小鼠组的肿瘤剥离后称重结果(*P<0.05，**P<0.01)。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。

以下实施例所用的肿瘤细胞来源：

人肺癌细胞A549购买于中国科学院细胞库，上海。

人肺癌细胞NCI-H460购买于美国模式培养物集存库(American type culturecollection，ATCC)。

人乳腺癌细胞BT549购买于中国科学院细胞库，上海。

人结肠癌细胞HCT116购买于来自中国科学院细胞库，上海。

人肝癌细胞HepG2购买于来自中国科学院细胞库，上海。

人黑素瘤细胞MDA-MB-435购买于中国科学院细胞库，上海。

化合物C的制备请参考现有技术：Mar.Drugs 2012,10,932-952；doi:10.3390/md10040932。

实施例1四氢蒽醌糖苷类化合物的合成和鉴定

本发明以图1所示蒽醌类化合物的母核结构，通过化学合成的方式获得以下化合物1-14，化合物1-14的结构如图2所示。

1、化合物的合成

化合物1-5的合成路线如图3所示。

化合物11的合成方法同化合物1，只需将D-***糖亚胺酯变更为D-葡萄糖亚胺酯；化合物12的合成方法同化合物2，只需将前一步反应中的D-***糖亚胺酯变更为D-木糖亚胺酯；化合物13的合成方法同化合物2，只需将前一步反应中的D-***糖亚胺酯变更为D-鼠李糖亚胺酯；化合物14的合成方法同化合物3，只需将反应底物变更为化合物13。

2、化合物的鉴别

(1)鉴定方法

四氢蒽醌糖苷类化合物的结构通过HR-ESI-MS和NMR得以确定。

(2)鉴定结果

化合物1：红色晶体，m.p.115-120℃，¹H NMR(500MHz，CDCl3)δ13.09(s，1H)，12.49(s，1H)，6.21(s，1H)，5.65(d，J＝3.1Hz，1H)，5.25(s，1H)，5.08(m，1H)，4.95(m，1H)，4.52(d，J＝3.1Hz，1H)，4.42–4.10(m，2H)，3.94(m，3H)，3.68(m，1H)，3.49(d，J＝16.1Hz，1H)，2.32(d，J＝16.1Hz，1H)，2.15(s，3H)，1.97(s，3H)，1.79(s，3H)，1.62(s，3H)，1.33(s，3H)，0.88(s，3H)。¹³C NMR(126MHz，CDCl₃)δ187.66(s)，182.14(s)，170.30(s)，169.96(s)，169.17(s)，160.86(s)，156.82(s)，156.14(s)，138.57(s)，135.81(s)，111.24(s)，110.24(s)，108.82(d，J＝17.8Hz)，108.75(s)，99.57(s)，81.27(s)，80.24(s)，70.12(s)，69.08(s)，68.15(s)，67.81(s)，64.10(s)，56.85(s)，32.69(s)，29.42(s)，27.47(s)，26.67(s)，20.94(s)，20.53(d，J＝15.9Hz)，20.47(s).MS(ESI，M-H：633.04)。综上，其化学结构式确定为：

化合物2：红色固体，m.p.138-140℃，¹H NMR(500MHz，CDCl3)δ13.06(s，1H)，12.45(s，1H)，6.12(s，1H)，5.53(d，J＝2.8Hz，1H)，4.54(d，J＝2.8Hz，1H)，4.27(d，J＝6.9Hz，1H)，4.02(d，J＝12.7Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.86(s，1H)，3.68(q，J＝7.0Hz，1H)，3.48-3.59(m，3H)，3.43(d，J＝16.2Hz，1H)，2.52(d，J＝16.2Hz，1H)，1.60(s，3H)，1.31(s，3H)，0.86(s，3H)。¹³C NMR(126MHz，CDCl₃)δ187.21(s)，181.37(s)，160.78(s)，157.50(s)，156.73(s)，138.99(s)，136.04(s)，111.10(s)，110.02(s)，108.75(s)，108.66(s)，102.44(s)，81.39(s)，80.37(s)，73.14(s)，71.57(s)，69.21(s)，68.33(s)，66.24(s)，56.85(s)，32.77(s)，29.34(s)，27.54(s)，26.90(s)。综上，其化学结构式确定为：

化合物3：红色固体；熔点126-128℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.10(s，1H)，12.51(s，1H)，6.16(s，1H)，5.59(d，J＝2.9Hz，1H)，4.54(d，J＝2.9Hz，1H)，4.33(d，J＝7.6Hz，1H)，4.23(t，J＝3.0Hz，1H)，4.22(dd，J＝13.1，2.9Hz，1H)，4.00(dd，J＝7.2，5.9Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.88(dd，J＝12.9，3.1Hz，1H)，3.54(t，J＝7.6Hz，1H)，3.50(d，J＝16.3Hz，1H)，2.50(d，J＝16.2Hz，1H)，1.64(s，3H)，1.53(s，3H)，1.35(s，3H)，1.34(s，3H)，0.90(s，3H)。¹³C NMR(150MHz，CDCl3)δ187.41(s)，181.70(s)，160.95(s)，157.63(s)，156.73(s)，138.82(s)，136.23(s)，111.31(s)，110.37(s)，110.22(s)，108.95(s)，108.89(s)，101.46(s)，81.64(s)，80.41(s)，78.30(s)，73.73(s)，73.14(s)，68.71(s)，63.52(s)，56.95(s)，33.09(s)，

29.64(s)，28.11(s)，27.69(s)，27.00(s)，26.06(s).HRESIMS m/z 547.18270[M-H]^-(calcd.for C₂₇H₃₁O₁₂，547.18210)。综上，其化学结构式确定为：

化合物4：红色固体；熔点135-137℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.09(s，1H)，12.49(s，1H)，6.18(s，1H)，5.56(d，J＝2.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝10.2，3.5Hz，1H)，4.94(t，J＝10.0Hz，1H)，4.80(d，J＝2.0Hz，1H)，4.70(s，1H)，4.48(d，J＝2.8Hz，1H)，4.39(d，J＝8.1Hz，1H)，4.27–4.18(m，2H)，4.12(dq，J＝12.3，6.1Hz，1H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.84(dd，J＝13.4，2.6Hz，1H)，3.58(t，J＝7.8Hz，1H)，3.46(d，J＝16.4Hz，1H)，2.26(d，J＝16.3Hz，1H)，2.01(s，3H)，1.99(s，3H)，1.86(s，3H)，1.56(s，3H)，1.51(s，3H)，1.35(s，3H)，1.31(s，3H)，1.14(d，J＝6.2Hz，3H)，0.87(s，3H)。¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ187.41(s)，181.78(s)，170.02(s)，169.92(s)，169.14(s)，160.81(s)，157.32(s)，156.19(s)，138.04(s)，135.59(s)，111.51(s)，110.13(s)，109.93(s)，109.14(s)，108.64(s)，101.78(s)，97.12(s)，81.63(s)，80.14(s)，77.34(s)，76.43(s)，73.49(s)，70.98(s)，68.99(s)，68.89(s)，68.27(s)，66.21(s)，63.39(s)，56.76(s)，32.71(s)，29.53(s)，28.04(s)，27.54(s)，26.87(s)，26.09(s)，20.80(s)，20.68(s)，20.56(s)，17.22(s).HRESIMS m/z 821.28644[M+H]⁺(calcd.for C₃₉H₄₉O₁₉，821.28626)。综上，其化学结构式确定为：

化合物5：红色固体；熔点140-142℃；¹H NMR(600MHz，CDCl3)δ13.10(s，1H)，12.50(s，1H)，6.19(s，1H)，5.59(d，J＝2.9Hz，1H)，5.07(dd，J＝10.2，3.4Hz，1H)，4.95(t，J＝10.0Hz，1H)，4.76(dd，J＝3.4，1.8Hz，1H)，4.72(d，J＝1.5Hz，1H)，4.52(d，J＝2.9Hz，1H)，4.46(d，J＝7.4Hz，1H)，4.08–4.13(m，1H)，4.09(dd，J＝12.9，2.2Hz，1H)，3.94(s，4H)，3.64–3.57(m，2H)，3.56–3.51(m，1H)，3.49(d，J＝16.4Hz，1H)，2.37(d，J＝16.3Hz，1H)，2.04(s，3H)，1.99(s，3H)，1.88(s，3H)，1.61(s，3H)，1.33(s，3H)，1.16(d，J＝6.3Hz，3H)，0.89(s，3H)。¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ187.47(s)，181.88(s)，169.89(s)，169.28(s)，160.81(s)，157.32(s)，156.16(s)，138.09(s)，135.64(s)，111.59(s)，110.15(s)，109.22(s)，108.71(s)，101.78(s)，98.21(s)，81.66(s)，80.25(s)，78.71(s)，72.12(s)，70.81(s)，69.35(s)，68.71(s)，68.49(s)，68.46(s)，67.06(s)，65.76(s)，56.75(s)，32.79(s)，29.55(s)，27.56(s)，26.90(s)，20.76(s)，20.64(s)，20.60(s)，17.29(s).HRESIMS m/z781.25541[M+H]⁺(calcd.for C₃₆H₄₅O₁₉，781.25496)。综上，其化学结构式确定为：

化合物6：红色固体；熔点93-96℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.13(s，1H)，12.59(s，1H)，6.18(s，1H)，5.45(d，J＝2.9Hz，1H)，5.32(s，1H)，5.11–4.92(m，2H)，4.44(d，J＝2.9Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.53(d，J＝16.2Hz，1H)，3.50–3.45(m，2H)，2.51(d，J＝16.1Hz，1H)，2.17–2.10(m，2H)，2.07(s，3H)，1.98(s，3H)，1.63(s，3H)，1.33(s，4H)，0.88(s，3H)。¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)δ186.94(s)，181.29(s)，170.38(s)，170.08(s)，160.76(s)，157.73(s)，156.73(s)，137.83(s)，137.32(s)，111.03(s)，110.18(s)，108.95(s)，108.65(s)，97.97(s)，80.82(s)，80.51(s)，68.10(s)，67.49(s)，65.42(s)，61.40(s)，56.79(s)，32.90(s)，30.89(s)，29.88(s)，27.52(s)，26.83(s)，20.99(s)，20.94(s).HRESIMS m/z575.17753[M-H]^-(calcd.for C₂₈H₃₁O₁₃，575.17701)。综上，其化学结构式确定为：

化合物7：红色固体；熔点138-140℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.13(s，1H)，12.62(s，1H)，6.19(s，1H)，5.44(d，J＝3.1Hz，1H)，5.25(s，1H)，4.45(d，J＝3.1Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.86–3.80(m，1H)，3.51(d，J＝16.1Hz，1H)，3.49–3.39(m，2H)，2.48(d，J＝16.1Hz，1H)，2.19(s，1H)，2.04(s，1H)，1.93–1.81(m，2H)，1.63(s，3H)，1.34(s，3H)，0.89(s，3H)。¹³CNMR(150MHz，CDCl₃)δ186.83(s)，181.17(s)，160.74(s)，157.89(s)，156.95(s)，137.79(s)，137.72(s)，110.98(s)，110.20(s)，108.93(s)，108.60(s)，98.21(s)，80.81(s)，80.48(s)，77.25(s)，77.04(s)，76.83(s)，68.12(s)，67.92(s)，64.74(s)，63.30(s)，56.80(s)，33.91(s)，32.90(s)，29.87(s)，27.51(s)，26.78(s).HRESIMS m/z491.15616[M-H]^-(calcd.for C₂₄H₂₇O₁₁，491.15588)。综上，其化学结构式确定为：

化合物8：红色固体；熔点131-132℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.15(s，1H)，12.67(s，1H)，6.21(s，1H)，5.51(d，J＝3.1Hz，1H)，5.21(dd，J＝6.3，4.4Hz，1H)，4.46(d，J＝3.1Hz，1H)，4.37(dt，J＝6.2，4.7Hz，1H)，4.19(tt，J＝11.8，5.7Hz，1H)，4.06–4.02(m，1H)，3.95(s，3H)，3.60–3.52(m，2H)，3.51(d，J＝16.0Hz，2H)，2.52(d，J＝16.0Hz，1H)，2.21–2.13(m，1H)，1.79–1.70(m，2H)，1.64(s，3H)，1.50(s，3H)，1.36(s，3H)，1.32(s，3H)，0.92(s，3H)。¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ186.39(s)，180.69(s)，160.66(s)，158.45(s)，157.51(s)，138.24(s)，137.91(s)，110.15(s)，110.13(s)，109.35(s)，108.80(s)，108.79(s)，96.78(s)，80.84(s)，80.49(s)，71.55(s)，69.95(s)，67.82(s)，61.77(s)，56.73(s)，32.85(s)，31.71(s)，29.79(s)，27.50(s)，27.34(s)，26.78(s)，25.50(s).HRESIMS m/z531.18730[M-H]^-(calcd.for C₂₇H₃₁O₁₁，521.18718)。综上，其化学结构式确定为：

化合物9：红色固体；熔点120-124℃；¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ13.06(s，1H)，12.49(s，1H)，6.17(s，1H)，5.59(d，J＝3.0Hz，1H)，5.30(t，J＝10.0Hz，1H)，5.24(dd，J＝10.1，3.1Hz，1H)，5.01(dd，J＝3.0，1.8Hz，1H)，4.81(s，1H)，4.46(d，J＝2.9Hz，1H)，4.40(dd，J＝12.2，5.5Hz，1H)，4.19(dd，J＝12.2，2.1Hz，1H)，4.15–4.07(m，1H)，3.93(s，3H)，3.56(d，J＝16.3Hz，1H)，2.51(d，J＝16.3Hz，1H)，2.15(s，3H)，2.08(s，3H)，2.07(s，3H)，1.96(s，3H)，1.69(s，3H)，1.36(s，3H)，0.90(s，3H)。¹³C NMR(125MHz，CDCl₃)δ187.59(s)，182.19(s)，170.78(s)，169.97(s)，169.91(s)，169.63(s)，160.81(s)，156.82(s)，156.20(s)，138.80(s)，134.46(s)，111.51(s)，110.22(s)，109.07(s)，108.97(s)，95.66(s)，81.71(s)，80.53(s)，69.45(s)，69.21(s)，68.97(s)，66.66(s)，65.86(s)，62.43(s)，56.81(s)，32.90(s)，29.79(s)，27.53(s)，26.86(s)，20.82(s)，20.79(s)，20.72(s)，20.63(s).HRESIMS m/z 705.20418[M-H]^-(calcd.for C₃₃H₃₇O₁₇，705.20362)。综上，其化学结构式确定为：

化合物10：红色固体；熔点136-139℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.24(s，1H)，12.53(s，1H)，6.19(s，1H)，5.60(d，J＝2.9Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.44(d，J＝2.9Hz，1H)，4.15–4.07(m，2H)，4.00(dd，J＝11.8，2.9Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.92(d，J＝5.7Hz，1H)，3.84(dd，J＝11.8，6.0Hz，1H)，3.76(ddd，J＝9.2，5.9，3.1Hz，1H)，3.70–3.65(m，1H)，3.55(d，J＝16.1Hz，1H)，2.46(d，J＝16.1Hz，1H)，2.04(s，1H)，1.63(s，3H)，1.47(s，3H)，1.35(s，3H)，1.30(s，3H)，0.88(s，3H)。¹³C NMR(150MHz，)δ188.14(s)，182.67(s)，161.45(s)，157.72(s)，157.30(s)，139.61(s)，135.84(s)，112.07(s)，110.87(s)，110.51(s)，109.71(s)，109.58(s)，95.55(s)，82.53(s)，81.21(s)，79.23(s)，76.41(s)，71.07(s)，70.76(s)，66.70(s)，63.26(s)，57.52(s)，33.63(s)，30.46(s)，28.68(s)，28.20(s)，27.50(s)，26.92(s).HRESIMS m/z 577.19313[M-H]^-(calcd.for C₂₈H₃₃O₁₃，577.19266)。综上，其化学结构式确定为：

化合物11：红色晶体；熔点117-120℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ13.17(s，1H)，12.59(s，1H)，6.18(s，1H)，5.37(d，J＝3.0Hz，1H)，5.17(t，J＝9.4Hz，1H)，4.95(t，J＝10.0Hz，1H)，4.90(dd，J＝9.4，8.1Hz，1H)，4.80(d，J＝8.0Hz，1H)，4.32(d，J＝3.0Hz，1H)，3.95–3.90(m，1H)，3.92(s，3H)，3.75(dd，J＝12.3，2.5Hz，1H)，3.61–3.53(m，1H)，3.47(d，J＝16.2Hz，1H)，2.49(d，J＝16.1Hz，1H)，2.07(s，3H)，1.97(s，3H)，1.97(s，3H)，1.92(s，3H)，1.56(s，3H)，1.32(s，3H)，0.87(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ186.55(s)，180.71(s)，170.35(s)，170.15(s)，169.33(s)，169.11(s)，160.75(s)，158.23(s)，157.23(s)，138.26(s)，136.90(s)，110.94(s)，109.97(s)，108.96(s)，108.36(s)，101.76(s)，81.49(s)，80.49(s)，72.63(s)，71.79(s)，71.16(s)，71.09(s)，68.17(s)，61.23(s)，56.75(s)，32.62(s)，29.37(s)，27.46(s)，26.82(s)，20.68(s)，20.56(s)，20.52(s)，20.48(s).HRESIMS m/z 705.20430[M-H]^-(calcd.for C₃₃H₃₇O₁₇，705.20362)。综上，其化学结构式确定为：

化合物12：红色固体；熔点128-130℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ13.16(s，1H)，12.57(s，1H)，6.17(s，1H)，5.42(d，J＝2.5Hz，1H)，4.57(d，J＝7.2Hz，1H)，4.50(d，J＝2.5Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.91(s，3H)，3.74–3.63(m，2H)，3.58–3.39(m，2H)，3.46(d，J＝16.0Hz，1H)，3.30(t，J＝7.7Hz，1H)，3.17–3.05(m，1H)，2.49(d，J＝16.0Hz，1H)，1.60(s，3H)，1.31(s，3H)，0.86(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ186.20(s)，180.34(s)，160.72(s)，158.61(s)，157.49(s)，138.53(s)，137.06(s)，111.06(s)，109.97(s)，108.92(s)，108.48(s)，103.37(s)，81.12(s)，80.59(s)，77.34(s)，77.02(s)，76.70(s)，76.13(s)，72.82(s)，70.11(s)，69.49(s)，65.30(s)，56.76(s)，32.58(s)，29.55(s)，27.53(s)，26.95(s).HRESIMS m/z 507.15148[M-H]^-(calcd.for C₂₄H₂₇O₁₂，507.1508)。综上，其化学结构式确定为：

化合物13：红色固体；熔点203-206℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ13.12(s，1H)，12.57(s，1H)，6.17(s，1H)，5.42(d，J＝2.8Hz，1H)，5.07(s，1H)，4.42(d，J＝2.8Hz，1H)，3.92(s，2H)，3.83(s，1H)，3.54-3.74(m，3H)，3.47(d，J＝16.2Hz，2H)，3.28(t，J＝9.3Hz，1H)，3.17–3.00(m，1H)，2.42(d，J＝16.2Hz，1H)，1.57(s，3H)，1.32(s，3H)，0.87(d，J＝4.1Hz，3H)，0.86(s，3H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ186.68(s)，181.01(s)，160.74(s)，157.81(s)，156.88(s)，137.87(s)，137.13(s)，110.93(s)，110.12(s)，108.97(s)，108.56(s)，100.01(s)，80.68(s)，80.38(s)，77.35(s)，77.03(s)，76.71(s)，72.51(s)，71.57(s)，70.82(s)，68.79(s)，68.19(s)，56.77(s)，32.83(s)，29.80(s)，27.48(s)，26.79(s)，16.97(s).HRESIMS m/z 521.16707[M-H]^-(calcd.for C₂₅H₂₉O₁₂，521.16645)。综上，其化学结构式确定为：

化合物14：红色固体；熔点171-173℃；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ13.16(s，1H)，12.63(s，1H)，6.21(s，1H)，5.56(d，J＝3.0Hz，1H)，5.36(s，1H)，4.51(d，J＝3.0Hz，1H)，4.09(d，J＝5.6Hz，1H)，3.96(s，3H)，3.95–3.93(m，1H)，3.74(q，J＝7.0Hz，1H)，3.55(d，J＝16.2Hz，1H)，3.30(ddd，J＝15.8，9.7，6.7Hz，2H)，2.51(d，J＝16.1Hz，1H)，1.66(s，3H)，1.52(s，3H)，1.38(s，3H)，1.37(s，3H)，0.94(d，J＝6.0Hz，3H)，0.92(s，3H)。¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ186.91(s)，181.40(s)，160.71(s)，157.69(s)，156.85(s)，137.50(s)，129.94(s)，110.91(s)，110.26(s)，109.67(s)，109.01(s)，108.61(s)，97.47(s)，80.67(s)，80.51(s)，78.29(s)，75.88(s)，74.46(s)，68.08(s)，66.28(s)，56.80(s)，32.85(s)，29.89(s)，29.34(s)，28.07(s)，27.52(s)，26.82(s)，16.59(s).HRESIMS m/z561.19816[M-H]^-(calcd.forC₂₈H₃₃O₁₂，561.19775)。综上，其化学结构式确定为：

实施例2四氢蒽醌糖苷类化合物对不同肿瘤细胞生长活力的影响

1检测方法：

使用胰酶消化肿瘤细胞后进行计数，按8000～10000个/孔细胞使用96孔板进行铺板，铺板后放置37℃、5％CO₂孵箱中进行培养，12h后更换含有不同浓度(0，1.563，3.125，6.25，12.5，25μM或0，5，10，20，40，80μM)的四氢蒽醌糖苷类化合物的培养基继续培养48h后，加入噻唑蓝(MTT)25μL，孵育4～6h后弃去上清，每孔加入160μL的二甲基亚砜(DMSO)，放置摇床进行震荡直至蓝紫色结晶全部溶解，使用490/570nm波长进行检测，分析数据，计算半抑制浓度IC₅₀(μM)。

2、检测结果

四氢蒽醌糖苷类化合物对不同肿瘤细胞的半抑制浓度IC₅₀测试结果如表1所示。

表1四氢蒽醌糖苷类化合物MTT结果

从表1的结果可以看出，蒽醌糖苷系列化合物对不同肿瘤细胞生长均具有明显的抑制作用。

实施例3蒽醌糖苷系列化合物对肿瘤细胞形态的影响

1、实验方法

使用胰酶消化肿瘤细胞后进行计数，按2.0×10⁶个细胞分别接种于P60培养皿中，放置37℃、5％CO₂孵箱中进行培养，12h后更换含有不同浓度(2.5μM、5μM、10μM)蒽醌类化合物1、2、3、13的培养基，继续培养肿瘤细胞，加药后观察细胞形态变化并对使用蒽醌类化合物不同浓度及时间点的细胞形态进行明场拍照。

2、实验结果

图4-7分别为用化合物1、2、3、13在不同浓度及不同时间点处理A549细胞后细胞形态的变化。可见，随着蒽醌类化合物浓度的增加肿瘤细胞死亡数量也逐渐增加，细胞密度进一步降低，在光学显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态学变化，细胞核皱缩，细胞变圆变亮。

实施例4蒽醌糖苷系列化合物对肿瘤细胞增殖的影响及对阳性细胞进行计数

1、实验方法

EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与

荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等。

将肿瘤细胞A549按2×10⁴个细胞接种至已铺有盖玻片的24孔板中，12h后用不同浓度的蒽醌类化合物1处理，24h后弃去培养基加4％多聚甲醛进行固定30分钟，弃去固定液，每孔加入50μL 2mg/ml甘氨酸，脱色摇床孵育5分钟，弃去甘氨酸，每孔加入100μL PBS，脱色摇床清洗5分钟，弃去PBS；每孔加入100μL渗透剂(0.5％TrxitonX-100的PBS)脱色摇床孵育10分钟，PBS清洗1次，5分钟；每孔加入100μL的1×Apollo染色反应液，避光，室温，脱色摇床孵育30分钟，弃去染色反应液；每孔加入100μL渗透剂(0.5％TrxitonX-100的PBS)脱色摇床清洗2～3次，每次10分钟，弃去渗透剂；PBS清洗1次，每次5分钟。

DNA染色：每孔加入1×Hoechst33342反应液，避光室温，脱色摇床孵育30分钟后弃去染色液；每孔加入100μL PBS清洗1～3次。清洗完后干片，使用抗淬灭荧光封片剂封片，避光保存。

2、实验结果

图8为蒽醌糖苷化合物1对A549细胞增殖的影响结果，图9为蒽醌糖苷化合物1处理A549细胞后，EdU阳性细胞统计结果。

从图中可以看出，随着化合物1处理浓度增加，A549细胞增殖明显被抑制，而且具有剂量依赖关系，随化合物1的剂量增加A549增殖抑制效果增强。

实施例5蒽醌糖苷系列化合物对凋亡相关蛋白表达的影响

1、实验方法

采用免疫印迹法(Western Blotting)检测凋亡相关蛋白的表达。使用胰酶消化肿瘤细胞A549后进行计数，按2.0×10⁶个细胞分别接种于P60培养皿中，放置37℃、5％CO₂孵箱中进行培养，12h后加入不同浓度的蒽醌类化合物1，24h后收集细胞及上清，PBS清洗2～3次，加入细胞裂解液处理细胞，使用BCA试剂盒测定蛋白含量。进行蛋白电泳，浓缩胶80V，分离胶100V。电泳至溴酚蓝到达胶底部即可转PVDF膜，300mA转移2小时。5％脱脂牛奶室温封闭1h后，1：500加入人PARP抗体4℃孵育过夜。第二天回收抗体，使用PBST洗涤3次，每次15分钟。辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育1h，压片夹压片30分钟，洗片机曝光洗片。

通过免疫印迹法进一步对蒽醌类化合物诱导肿瘤细胞凋亡相关蛋白PARP蛋白的前体和切割带进行检测。

2、实验结果

图10为蒽醌类化合物1处理A549细胞后凋亡相关蛋白的表达情况，通过免疫印迹法对蒽醌类化合物1诱导肿瘤细胞凋亡相关蛋白PARP蛋白的前体和切割带进行检测，发现随着化合物浓度的增高，切割带逐渐增加。

实施例6蒽醌糖苷系列化合物在小鼠体内抗肿瘤活性测试

1、实验方法

给免疫缺陷小鼠(BALB/c-nu/nu)进行皮下接种MDA-MB-435细胞，待肿瘤长至80～100mm³随机分组进行给药实验。每组6只小鼠，分为溶剂对照组、阳性对照组(顺铂，DDP，5mg/kg)，给药组(化合物1，分别按照30mg/kg和60mg/kg给药)，腹腔注射给药，每3天给药1次。实验周期一般为30天左右，待溶剂对照组的肿瘤长至3000～3500mm³左右即可终止实验。剥离小鼠肿瘤，称重、测量及拍照。

2、实验结果

图11为不同荷瘤小鼠组实验终点剥离的肿瘤，图12为不同荷瘤小鼠组的肿瘤剥离后称重结果。可以看出，高剂量给药组小鼠的肿瘤抑制率为44.89％(P<0.05)。通过小鼠体内抗肿瘤活性实验证明蒽醌糖苷化合物1在小鼠体内具有较好的抗肿瘤活性。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。