CN112661644B - 一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途 - Google Patents
一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途。该化合物以对叶大戟(Euphorbia sororia A.Schrenk)成熟果实为原料,采用溶剂提取,多溶剂萃取,通过硅胶柱层析法、反相C18硅胶柱层析法、葡聚糖LH‑20凝胶柱层析法进行分离,得到八个新的假白榄烷型二萜化合物。通过活性测试,该化合物表现出不同程度的多药耐药逆转活性,与抗肿瘤药物联用可不同程度地逆转耐药细胞对抗肿瘤药物的耐药性,可用作多药耐药逆转药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及八个新的假白榄烷型二萜化合物及其在制备多药耐药逆转药物或与抗肿瘤药物组合用药中的用途。
背景技术
对叶大戟(Euphorbia sororia A.Schrenk)是大戟科(Euphorbiaceae)大戟属(Euphorbia)一年生草本植物,原产于中亚,现我国主要分布于新疆和田等地,其果实为维吾尔药的常用药材。该植物在苏孜阿甫片、复方苏孜阿甫蜜膏、加瓦日西库木尼、依力提提蜜膏、苏孜阿甫软膏、苏扎甫散、赛拉尼散等十几种成熟的民族医复方药中作为主要成分应用于临床。从该植物中分离得到的化合物主要有倍半萜、二萜、三萜、甾醇、脂肪酸、黄酮、酚类和糖类等类型,其中研究报道最多的是二萜类成分,目前从对叶大戟中分离得到的假白榄烷(Jatrophane)型二萜化合物共有33个,其中的大多数化合物具有一定的肿瘤多药耐药逆转活性。
假白榄烷型二萜化合物的结构特点是其骨架由一个五元环和一个十二元环稠合而成,即5/12环系。该类化合物结构复杂,多数高度之酯化,具有取代基种类多,如乙酰氧基(-OAc)、丙酰氧基(-OPr)、异丁酰氧基(-OiBu)、苯甲酰氧基(-OBz)及吡啶酰氧-3-基(-ONic)等,且取代基数量多(通常在3-8个)、分子量大的特点。本次研究中的八个新的假白榄烷型二萜化合物的骨架上C-2、C-3、C-5、C-7、C-8、C-9、C-14、C-15位的取代基完全不同,包括羟基、乙酰氧基、丙酰氧基、苯甲酰氧基、异丁酰氧基等,由于这些取代基在骨架上的位置不同,数目不同,构型不同,使得化合物空间位阻发生了变化,使得这些化合物结构完全不同,故对肿瘤多药耐药逆转生物活性有较大影响。通过考察新化合物与传统抗肿瘤药物联用,利用竞争性结合耐药细胞膜上的转运蛋白,充当其底物,达到逆转耐药细胞耐药性的目的,使得传统抗肿瘤药物能够在细胞内发挥杀伤肿瘤细胞的作用,以此评价新化合物多药耐药逆转活性。
发明内容
本发明目的在于,提供一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途。该化合物以对叶大戟(Euphorbia sororia A.Schrenk)成熟果实为原料,采用溶剂提取,多溶剂萃取,通过硅胶柱层析法、反相C18硅胶柱层析法、葡聚糖LH-20凝胶柱层析法进行分离,得到八个新的假白榄烷型二萜化合物。通过活性测试,该化合物表现出不同程度的多药耐药逆转活性,与抗肿瘤药物联用可不同程度地逆转耐药细胞对抗肿瘤药物的耐药性,可用作多药耐药逆转药物。
本发明所述的一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物,该化合物的结构式为:
其中:式(Ⅰ)化合物为(2S,3S,4R,5R,7R,13S,15R)-3,5,8,15-四乙酰氧基-6(17),11E-二烯-9,14-二酮;
式(Ⅱ)化合物为(2S,3S,4R,5R,7S,8R,13S,15R)-8-羟基-7-异丁酰氧基-3,5,15-三乙酰氧基-6(17),11E-二烯-9,14-二酮;
式(Ⅲ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,8,9-三乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,5,15-三羟基-7-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅳ)化合物为(2R*,3R*,4R*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,7,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,15-二羟基-5-(2’-甲基-丁酰氧基)-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅴ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8R*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,3,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-7,15-二羟基-5-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅵ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,3,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-15-羟基-5,7-二丙酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅶ)化合物为(2R*,3R*,4R*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,7,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,15-二羟基-5-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅷ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5S*,6S*,7R*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,8,9,14-四乙酰氧基-3-苯甲酰氧基-6,15-二羟基-7-异丁酰氧基-5,6-已内酯-22-酮-假白榄烷-11E-烯。
所述一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物的制备方法,按下列步骤进行:
a.以对叶大戟的果实为原料,自然晾干,破碎后用5-10倍量体积浓度为50-99%的乙醇水溶液、无水乙醇、丙酮、体积浓度为50-99%的甲醇水溶液或无水甲醇在室温下进行渗漉、冷浸或加热回流提取,浓缩,得到对叶大戟果实的提取物;
b.将步骤a所得到的提取物用乙腈分散,加入石油醚、正己烷或环己烷萃取,或将提取物用石油醚、正己烷或环己烷分散,再加入乙腈萃取2-5次,将乙腈萃取液浓缩,得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比100:1-0:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析分析,合并相同流分,得到7个组分(Fr.1-Fr.7);将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4F;将组分Fr.4D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集60%-65%甲醇-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为50%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E8,将Fr.4E6段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用无水甲醇洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为60%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4F1-Fr.4F5,将Fr.4F3段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集70%-75%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物;
或将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比100:1-0:1的正己烷-丙酮进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析分析,合并相同流分,得到6个组分Fr.1-Fr.6;将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的三氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4F;将组分Fr.4D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的乙腈-水溶液梯度洗脱,收集55%-60%乙腈-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E8,将Fr.4E6段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用二氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为60%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4F1-Fr.4F5,将Fr.4F3段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集70%-75%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物;
或将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析分析,合并相同流分,得到7个组分Fr.1-Fr.7;将组分Fr.3进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.3A-Fr.3F;将组分Fr.3D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集60%-65%甲醇-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为60%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.3E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的正己烷-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3E1-Fr.3E7,将Fr.3E4段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用二氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.3F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3F1-Fr.3F6,将Fr.3F4段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的乙腈-水溶液梯度洗脱,收集60%-70%乙腈-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为75%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
所述一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物的制备方法,按下列步骤进行:
a.以对叶大戟的果实为原料,自然晾干,破碎后用5-10倍量体积浓度为50-99%的乙醇水溶液、无水乙醇、丙酮、体积浓度为50-99%的甲醇水溶液或无水甲醇在室温下进行渗漉、冷浸或加热回流提取,浓缩,得到对叶大戟果实的提取物;
b.将步骤a所得到的提取物用乙腈分散,加入石油醚、正己烷或环己烷萃取,或将提取物用石油醚、正己烷或环己烷分散,再加入乙腈萃取2-5次,将乙腈萃取液浓缩,得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用反相C18硅胶柱分离,用体积比50%-90%的甲醇-水进行梯度洗脱,合并相同流分,得到5个组分Fr.1-Fr.5;将组分Fr.3进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.3A-Fr.3G;将组分Fr.3D经正相硅胶柱层析分离,以体积比为50:1-0:1的三氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.3D1-Fr.3D6;将Fr.3D4采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.3E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的石油醚-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3E1-Fr.3E7,将Fr.3E3段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用三氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.3F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3F1-Fr.3F6,将Fr.3F4段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集65%-70%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C185μm 10×250mm分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物;
或将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用反相C18硅胶柱分离,用体积比50%-90%的乙腈-水进行梯度洗脱,合并相同流分,得到6个组分Fr.1-Fr.6;将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4G;将组分Fr.4C经正相硅胶柱层析分离,以体积比为50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4C1-Fr.4C6;将Fr.4C3采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为60%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、和式(Ⅱ);将Fr.4C4采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅲ)化合物;将Fr.4D进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的石油醚-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4D1-Fr.4D5,将Fr.4D3段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用纯甲醇洗脱,得到的流分再经制备反相柱C185μm 10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-二氯甲烷-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E6,将Fr.4E3段经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为70%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
所述的对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物中的式Ⅱ-式Ⅷ化合物在制备多药耐药逆转活性的药物中的用途。
本发明所述的一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途,通过所述方法获得的8个新型假白榄烷型二萜化合物进行了体外细胞毒活性测定及多药耐药逆转活性测定,结果表明:所述式(Ⅰ)-式(Ⅷ)化合物对人乳腺癌细胞株MCF-7及人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR有较弱的细胞毒活性,并且式(Ⅱ)-式(Ⅷ)化合物具有不同程度的多药耐药逆转活性。
本发明所述的一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途,可通过从植物中提取分离得到,也可以经本领域技术人员熟知的化学修饰方法合成获得。
本发明所述的一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物及制备方法和用途,采用高分辨质谱、一维和二维核磁共振谱等现代波谱手段确定其结构,结构鉴定过程如下:
式(Ⅰ)化合物为白色块状晶体,[α]D 20+43.9(c 0.1,MeOH);ECD(MeOH)216(Δε-62.81),305(Δε+12.47)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 557.2365[M+Na]+(计算值为C28H38O10Na 557.2357),确定其分子式为C28H38O10;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2S,3S,4R,5R,7R,13S,15R)-3,5,8,15-四乙酰氧基-6(17),11E-二烯-9,14-二酮。其1H和13C NMR数据归属见表1[400MHz(1H),100MHz(13C),溶剂:CDCl3];
式(Ⅱ)化合物为白色针状晶体,[α]D 20+18.7(c 0.1,MeOH);ECD(MeOH)218(Δε-41.29),305(Δε+10.26)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 601.2628[M+Na]+(计算值为C30H42O11Na 601.2619),确定其分子式为C30H42O11;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2S,3S,4R,5R,7S,8R,13S,15R)-8-羟基-7-异丁酰氧基-3,5,15-三乙酰氧基-6(17),11E-二烯-9,14-二酮,其1H和13C NMR数据归属见表1 400MHz(1H),100MHz(13C),溶剂:CDCl3;
式(Ⅲ)化合物为白色无定型粉末,[α]D 20+0.5(c 0.1,MeOH);UV(MeOH)λmax(logε)231(4.03);ECD(MeOH)234(Δε+27.92),284(Δε-2.52)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 725.3152[M+Na]+(计算值为C37H50O13Na 725.3149),确定其分子式为C37H50O13;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,8,9-三乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,5,15-三羟基-7-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯,其1H和13C NMR数据归属见表1 400MHz(1H),100MHz(13C),溶剂:CDCl3;
式(Ⅳ)化合物为白色无定型粉末,[α]D 20+24.3(c 0.1,MeOH);UV(MeOH)λmax(logε)231(4.00);ECD(MeOH)215(Δε-2.97),239(Δε+24.16)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 781.3414[M+Na]+(计算值为C40H54O14Na 781.3411),确定其分子式为C40H54O14;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2R*,3R*,4R*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,7,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,15-二羟基-5-(2’-甲基-丁酰氧基)-假白榄烷-6(17),11E-二烯,其1H和13C NMR数据归属见表1 600MHz(1H),150MHz(13C),溶剂:CDCl3;
表1.式(Ⅰ)-式(Ⅳ)化合物的1H和13C NMR数据[δ(ppm),J(Hz)]
式(Ⅴ)化合物为白色无定型粉末,[α]D 20-1.3(c 0.1,MeOH);UV(MeOH)λmax(logε)231(4.37);ECD(MeOH)233(Δε+24.04),298(Δε+2.20)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 767.3258[M+Na]+(计算值为C39H52O14Na 767.3255),确定其分子式为C39H52O14;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8R*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,3,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-7,15-二羟基-5-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯,其1H和13C NMR数据归属见表2 600MHz(1H),150MHz(13C),溶剂:CDCl3;
式(Ⅵ)化合物为白色无定型粉末,[α]D 20+29.3(c 0.1,MeOH);UV(MeOH)λmax(logε)231(3.98);ECD(MeOH)216(Δε-2.12),237(Δε+9.74)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 809.3364[M+Na]+(计算值为C41H54O15Na 809.3360),确定其分子式为C41H54O15;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,3,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-15-羟基-5,7-二丙酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯,其1H和13C NMR数据归属见表2 400MHz(1H),100MHz(13C),溶剂:CDCl3;
式(Ⅶ)化合物为白色无定型粉末,[α]D 20+24.1(c 0.1,MeOH);UV(MeOH)λmax(logε)230(4.19);ECD(MeOH)217(Δε-0.50),237(Δε+9.86)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 767.3257[M+Na]+(计算值为C39H52O14Na 767.3255),确定其分子式为C39H52O14;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2R*,3R*,4R*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,7,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,15-二羟基-5-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯,其1H和13C NMR数据归属见表2 600MHz(1H),150MHz(13C),溶剂:CDCl3;
式(Ⅷ)化合物为白色无定型粉末,[α]D 20-4.4(c 0.1,MeOH);UV(MeOH)λmax(logε)232(4.26);ECD(MeOH)223(Δε-8.33),248(Δε+19.30)nm;HRESI(+)MS给出准分子离子峰m/z 825.3312[M+Na]+(计算值为C41H54O16Na 825.3310),确定其分子式为C41H54O16;根据其一维及二维核磁共振数据确定了结构,命名为(2R*,3R*,4S*,5S*,6S*,7R*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,8,9,14-四乙酰氧基-3-苯甲酰氧基-6,15-二羟基-7-异丁酰氧基-5,6-已内酯-22-酮-假白榄烷-11E-烯,其1H和13C NMR数据归属见表2 600MHz(1H),150MHz(13C),溶剂:CDCl3;
表2.式(Ⅴ)-式(Ⅷ)化合物的1H和13C NMR数据[δ(ppm),J(Hz)]
具体实施方式
实施例1
a.取干燥的对叶大戟果实10kg,破碎后用50L的浓度为60%乙醇-水溶液,在室温下渗漉提取,减压蒸干溶剂得到对叶大戟果实粗提物;
b.将步骤a得到的粗提物用乙腈分散,加入正己烷进行萃取3次,合并乙腈层并减压蒸干得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比100:1-0:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析(TLC)分析,合并相同流分,得到7个组分(Fr.1-Fr.7);将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4F;将组分Fr.4D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集60%-65%甲醇-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为50%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E8,将Fr.4E6段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用无水甲醇洗脱,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为60%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4F1-Fr.4F5,将Fr.4F3段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集70%-75%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
实施例2
a.取干燥的对叶大戟果实10kg,破碎后用70L的无水乙醇,在室温下冷浸提取,减压蒸干溶剂得到对叶大戟果实粗提物;
b.将步骤a得到的粗提物用乙腈分散,加入环己烷进行萃取4次,合并乙腈层并减压蒸干得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比100:1-0:1的正己烷-丙酮进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析(TLC)分析,合并相同流分,得到6个组分(Fr.1-Fr.6);将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的三氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4F;将组分Fr.4D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的乙腈-水溶液梯度洗脱,收集55%-60%乙腈-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E8,将Fr.4E6段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用二氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为60%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4F1-Fr.4F5,将Fr.4F3段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集70%-75%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm10×250mm)分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
实施例3
a.取干燥的对叶大戟果实10kg,破碎后用80L的丙酮,在室温下冷浸提取,减压蒸干溶剂得到对叶大戟果实粗提物;
b.将步骤a得到的粗提物用乙腈分散,加入环己烷进行萃取4次,合并乙腈层并减压蒸干得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析(TLC)分析,合并相同流分,得到7个组分(Fr.1-Fr.7);将组分Fr.3进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.3A-Fr.3F;将组分Fr.3D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集60%-65%甲醇-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为60%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.3E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的正己烷-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3E1-Fr.3E7,将Fr.3E4段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用二氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.3F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3F1-Fr.3F6,将Fr.3F4段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的乙腈-水溶液梯度洗脱,收集60%-70%乙腈-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为75%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
实施例4
a.取干燥的对叶大戟果实10kg,破碎后用60L的浓度为90%甲醇-水溶液,在温度75℃下回流提取,减压蒸干溶剂得到对叶大戟果实粗提物;
b.将步骤a得到的粗提物用乙腈分散,加入石油醚进行萃取5次,合并乙腈层并减压蒸干得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用反相C18硅胶柱分离,用体积比50%-90%的甲醇-水进行梯度洗脱,合并相同流分,得到5个组分(Fr.1-Fr.5);将组分Fr.3进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.3A-Fr.3G;将组分Fr.3D经正相硅胶柱层析分离,以体积比为50:1-0:1的三氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.3D1-Fr.3D6;将Fr.3D4采用制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为65%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.3E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的石油醚-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3E1-Fr.3E7,将Fr.3E3段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用三氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.3F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3F1-Fr.3F6,将Fr.3F4段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集65%-70%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
实施例5
a.取干燥的对叶大戟果实10kg,破碎后用70L的无水甲醇溶剂,在室温下渗漉提取,减压蒸干溶剂得到对叶大戟果实粗提物;
b.将步骤a得到的粗提物用乙腈分散,加入环己烷进行萃取4次,合并乙腈层并减压蒸干得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用反相C18硅胶柱分离,用体积比50%-90%的乙腈-水进行梯度洗脱,合并相同流分,得到6个组分(Fr.1-Fr.6);将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4G;将组分Fr.4C经正相硅胶柱层析分离,以体积比为50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4C1-Fr.4C6;将Fr.4C3采用制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为60%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、和式(Ⅱ);将Fr.4C4采用制备反相柱(C18 5μm10×250mm)分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅲ)化合物;将Fr.4D进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的石油醚-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4D1-Fr.4D5,将Fr.4D3段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用纯甲醇洗脱,得到的流分再经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-二氯甲烷-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E6,将Fr.4E3段经制备反相柱(C18 5μm 10×250mm)分离,以浓度为70%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
实施例6
本发明所述的对叶大戟果实中分离的8个新型假白榄烷型二萜化合物在制备多药耐药逆转药物或与抗肿瘤药物组合制备抗肿瘤药物中的用途,以人乳腺癌细胞株(MCF7)及其阿霉素耐药株(MCF7/ADR)为例;
式(Ⅰ)-式(Ⅲ)化合物的细胞毒性测试:
材料与试剂:RPMI 1640培养基购自HyClone公司;双抗和胎牛血清购自Hyclone公司;胰蛋白酶购自Gibco公司;噻唑蓝(MTT)购自Biosharp公司;二甲基亚砜(DMSO)购自Amresco公司;罗丹明123购于Sigma公司;盐酸维拉帕米购自Sigma公司;盐酸阿霉素购自上海生工有限公司;人乳腺癌细胞株(MCF7)及人乳腺癌阿霉素耐药细胞株(MCF7/ADR)购自中国科学院上海细胞库;
细胞培养:人乳腺癌细胞株MCF7及其阿霉素耐药细胞株MCF7/ADR在RPMI 1640完全培养基(RPMI 1640培养基+10%FBS+1%双抗)中培养,所有细胞均置于CO2培养箱,温度37℃,浓度5%CO2,维持传代培养,耐药株细胞(MCF7/ADR)在阿霉素终浓度为500ng/mL的完全培养基中耐药培养一周,再在1000ng/mL的完全培养基中耐药培养一周后,于无抗肿瘤药的完全培养基中培养两周后用于实验;
实验方法:MTT法,以5000个/孔的密度将处于对数生长期的MCF7或MCF7/ADR细胞接种于96孔微量培养板内,在温度37℃培养箱孵育24h后加入供试单体化合物,每孔100μL,设6个浓度梯度,设6个复孔;另设无细胞调零组,溶剂二甲基亚砜(DMSO)对照组及阳性药物对照组;肿瘤细胞在温度37℃,浓度5%CO2条件下培养48h后弃去上清液,加入噻唑蓝(MTT)液(5mg/mL,用生理盐水配制,以1:9的比例与完全培养基混匀,每孔100μL),在温度37℃,浓度5%CO2条件下继续培养4h;弃去上清液,每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO),待甲臜溶解后,用酶标仪检测各孔570nm的吸光度值(A);按下列公式计算供试单体化合物对肿瘤细胞生长的抑制率(半数抑制量IC50值采用GraphPad Prism软件计算)和化合物毒活性:存活率(%)=A给药组/A空白组×100%;
实验结果:对叶大戟果实中分得假白榄烷型二萜内酯的式(Ⅰ)-式(Ⅷ)化合物的存活率,见表3:
表3式(Ⅰ)-式(Ⅲ)化合物环境下人乳腺癌细胞株MCF7和人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF7/ADR的存活率
由表3可知,式(Ⅰ)-式(Ⅷ)化合物对人乳腺癌细胞株MCF7和人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF7/ADR均未表现出细胞毒性(细胞存活率>70%)。
实施例7
式(Ⅰ)-式(Ⅷ)化合物逆转肿瘤多药耐药活性测试:
本实验选择对叶大戟果实中8个新型假白榄烷型二萜化合物与抗肿瘤药阿霉素(DOX)联用,检测联用前后对耐药细胞的生长抑制,进行多药耐药逆转活性测试;
实验方法:将处于对数生长期的MCF7/ADR细胞以5000个/孔的密度接种于96孔微量培养板(每孔100μL),在温度37℃培养箱中孵育24h后加入阿霉素和供试单体化合物或阳性对照药维拉帕米,每孔100μL,设7个浓度梯度,设6个复孔,并设空白对照组和溶剂二甲基亚砜(DMSO)对照组;肿瘤细胞在温度37℃、浓度5%CO2条件下培养48h后弃去上清液,加入噻唑蓝(MTT)液(5mg/mL,用生理盐水配制,以1:9的比例与完全培养基混匀,每孔100μL),在温度37℃,浓度5%CO2条件下继续培养4h后弃去上清液,每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO),待甲臜溶解后,用酶标仪检测各孔570nm的吸光度值(A),按下列公式计算供试单体化合物对肿瘤细胞生长的抑制率:抑制率(%)=(A对照组-A给药组)/A对照组×100%;逆转倍数(RF)=IC50(阿霉素)/IC50(阿霉素+化合物);
实验结果:式(Ⅰ)-式(Ⅷ)化合物与阿霉素联用对MCF7/ADR细胞的半数生长抑制率及其逆转倍数见表4:
表4式(Ⅰ)-式(Ⅷ)化合物与阿霉素联用对人乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF7/ADR的半数生长抑制率及逆转倍数RF值
由表4可知,阿霉素分别与式(Ⅱ)-式(Ⅷ)化合物联用后与阿霉素单独作用相比,IC50值显著降低;在相同浓度(10μM)下,式(Ⅲ)和式(Ⅳ)化合物具有较强的多药耐药逆转活性,其逆转倍数均高于阳性对照药维拉帕米,除此之外,式(Ⅱ)、式(Ⅴ)、式(Ⅵ)、式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物与抗肿瘤药物阿霉素联用时,也具有一定多药耐药逆转活性,用作多药耐药逆转药物以辅助肿瘤化疗。
Claims (4)
1.一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物,其特征在于该化合物的结构式为:
其中:式(Ⅰ)化合物为(2S,3S,4R,5R,7R,13S,15R)-3,5,8,15-四乙酰氧基-6(17),11E-二烯-9,14-二酮;
式(Ⅱ)化合物为(2S,3S,4R,5R,7S,8R,13S,15R)-8-羟基-7-异丁酰氧基-3,5,15-三乙酰氧基-6(17),11E-二烯-9,14-二酮;
式(Ⅲ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,8,9-三乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,5,15-三羟基-7-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅳ)化合物为(2R*,3R*,4R*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,7,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,15-二羟基-5-(2’-甲基-丁酰氧基)-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅴ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8R*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,3,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-7,15-二羟基-5-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅵ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,3,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-15-羟基-5,7-二丙酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅶ)化合物为(2R*,3R*,4R*,5R*,7S*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,7,8,9-四乙酰氧基-14-苯甲酰氧基-3,15-二羟基-5-异丁酰氧基-假白榄烷-6(17),11E-二烯;
式(Ⅷ)化合物为(2R*,3R*,4S*,5S*,6S*,7R*,8S*,9S*,13S*,14S*,15R*)-2,8,9,14-四乙酰氧基-3-苯甲酰氧基-6,15-二羟基-7-异丁酰氧基-5,6-已内酯-22-酮-假白榄烷-11E-烯。
2.根据权利要求1所述的一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物的制备方法,其特征在于按下列步骤进行:
a.以对叶大戟的果实为原料,自然晾干,破碎后用5-10倍量体积浓度为50-99%的乙醇水溶液、无水乙醇、丙酮、体积浓度为50-99%的甲醇水溶液或无水甲醇在室温下进行渗漉、冷浸或加热回流提取,浓缩,得到对叶大戟果实的提取物;
b.将步骤a所得到的提取物用乙腈分散,加入石油醚、正己烷或环己烷萃取,或将提取物用石油醚、正己烷或环己烷分散,再加入乙腈萃取2-5次,将乙腈萃取液浓缩,得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比100:1-0:1的正己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析分析,合并相同流分,得到7个组分Fr.1-Fr.7;将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4F;将组分Fr.4D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集60%-65%甲醇-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为50%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E8,将Fr.4E6段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用无水甲醇洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为60%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4F1-Fr.4F5,将Fr.4F3段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集70%-75%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物;
或将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比100:1-0:1的正己烷-丙酮进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析分析,合并相同流分,得到6个组分Fr.1-Fr.6;将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的三氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4F;将组分Fr.4D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的乙腈-水溶液梯度洗脱,收集55%-60%乙腈-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E8,将Fr.4E6段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用二氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为60%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4F1-Fr.4F5,将Fr.4F3段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集70%-75%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物;
或将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用正相硅胶柱分离,用体积比50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,各流分经硅胶薄层层析分析,合并相同流分,得到7个组分Fr.1-Fr.7;将组分Fr.3进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.3A-Fr.3F;将组分Fr.3D经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为50%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集60%-65%甲醇-水溶液的洗脱液,减压蒸干后采用制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为60%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.3E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的正己烷-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3E1-Fr.3E7,将Fr.3E4段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用二氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.3F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3F1-Fr.3F6,将Fr.3F4段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的乙腈-水溶液梯度洗脱,收集60%-70%乙腈-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为75%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
3.根据权利要求1所述的一种对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物的制备方法,其特征在于按下列步骤进行:
a.以对叶大戟的果实为原料,自然晾干,破碎后用5-10倍量体积浓度为50-99%的乙醇水溶液、无水乙醇、丙酮、体积浓度为50-99%的甲醇水溶液或无水甲醇在室温下进行渗漉、冷浸或加热回流提取,浓缩,得到对叶大戟果实的提取物;
b.将步骤a所得到的提取物用乙腈分散,加入石油醚、正己烷或环己烷萃取,或将提取物用石油醚、正己烷或环己烷分散,再加入乙腈萃取2-5次,将乙腈萃取液浓缩,得到乙腈萃取物浸膏;
c.将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用反相C18硅胶柱分离,用体积比50%-90%的甲醇-水进行梯度洗脱,合并相同流分,得到5个组分Fr.1-Fr.5;将组分Fr.3进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.3A-Fr.3G;将组分Fr.3D经正相硅胶柱层析分离,以体积比为50:1-0:1的三氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.3D1-Fr.3D6;将Fr.3D4采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、式(Ⅱ)和式(Ⅲ)化合物;将Fr.3E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的石油醚-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3E1-Fr.3E7,将Fr.3E3段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用三氯甲烷-甲醇1:1洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.3F进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-氯仿-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.3F1-Fr.3F6,将Fr.3F4段经反相C18硅胶柱层析分离,以浓度为60%-100%的甲醇-水溶液梯度洗脱,收集65%-70%甲醇-水溶液的洗脱液,得到的流分再经制备反相柱C185μm 10×250mm分离,以浓度为70%的乙腈-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物;
或将步骤b得到的乙腈萃取物浸膏用反相C18硅胶柱分离,用体积比50%-90%的乙腈-水进行梯度洗脱,合并相同流分,得到6个组分Fr.1-Fr.6;将组分Fr.4进行正相硅胶柱分离,以体积比为50:1-0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,得到组分Fr.4A-Fr.4G;将组分Fr.4C经正相硅胶柱层析分离,以体积比为50:1-0:1的二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱,得到组分Fr.4C1-Fr.4C6;将Fr.4C3采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为60%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅰ)、和式(Ⅱ);将Fr.4C4采用制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅲ)化合物;将Fr.4D进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:1-0:1的石油醚-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4D1-Fr.4D5,将Fr.4D3段先经葡聚糖LH-20凝胶柱分离,用纯甲醇洗脱,得到的流分再经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为65%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅳ)、式(Ⅴ)和式(Ⅵ)化合物;将Fr.4E进行正相硅胶柱分离,采用体积比100:9:1-0:0:1的正己烷-二氯甲烷-丙酮梯度洗脱,得到组分Fr.4E1-Fr.4E6,将Fr.4E3段经制备反相柱C18 5μm 10×250mm分离,以浓度为70%的甲醇-水溶液等度洗脱,得到式(Ⅶ)和式(Ⅷ)化合物。
4.根据权利要求1所述的对叶大戟果实中假白榄烷型二萜化合物中的式(Ⅱ)-式(Ⅷ)化合物在制备逆转肿瘤多药耐药逆转活性的药物中的用途。
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大戟科黄酮类化合物的研究进展;田瑛等;《国际药学研究杂志》;20090815(第04期);第34-38+48页 * |
黄苞大戟化学成分研究;杨大松等;《中国中药杂志》;20131201(第23期);第113-117页 * |
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