CN112646892B - 一组乳腺癌早期诊断的piRNA生物标志物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一组乳腺癌诊断的piRNA生物标志物及其应用，属于分子生物学及肿瘤学领域，所述piRNA生物标志物为piR651、piR17458和piR20485；其中，piR651的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，piR17458的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；piR20485的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本发明发现piR651、piR17458和piR20485三者联合可作为乳腺癌诊断标志物，并应用于乳腺癌筛查，尤其应用于早期乳腺癌筛查，以弥补现在乳腺癌诊断标志物以及早期乳腺癌诊断标志物特异性不好、灵敏度不够的不足。

Description

一组乳腺癌早期诊断的piRNA生物标志物及其应用
技术领域
本发明涉及分子生物学及肿瘤学领域，特别是涉及一组乳腺癌早期诊断的piRNA生物标志物及其应用。
背景技术
乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤，也是致死率最高的肿瘤之一。乳腺癌致死原因并非由于原位癌本身生长，而是远处转移。乳腺癌一旦发生转移，其五年生存期只有23％。在我国发现的乳腺癌病人中70-80％为肿瘤中晚期病人。乳腺癌已成为亟待解决的公共卫生问题，也是临床研究的热点。研究显示，早期诊断和手术切除治疗乳腺癌能够有效地改善病人的生活质量、生存期和预后。目前乳腺癌的诊断包括血清标志物、病理诊断、影像学和临床症状，但是这些指标往往在疾病发展到一定阶段才出现，影响疾病的诊断。此外，目前的乳腺癌血清标志物也存在特异性不好、灵敏度不够的缺点。因此，寻找特异性好、灵敏度高的血清标志物对早期诊断乳腺癌尤为重要。
piRNA是一种与Piwi蛋白相互作用的非编码的小RNA，其通过piRNA-Piwi复合体沉默生殖细胞中基因表达，近年研究发现piRNAs越来越多地参与恶性肿瘤的发生和预后。许多文献报道piRNAs也存在于血清中，与疾病的进展密切相关，甚至可作为疾病的诊断标志物。然而，循环piRNAs在乳腺癌患者中的表达水平及其在乳腺癌中诊断价值尚不清楚。
发明内容
本发明的目的是提供一组乳腺癌诊断的piRNA生物标志物及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。本发明发现血清中piR651、piR17458和piR20485三者联合可作为乳腺癌诊断标志物，并应用于乳腺癌筛查，尤其应用于早期乳腺癌筛查，以弥补现在乳腺癌诊断标志物以及早期乳腺癌诊断标志物特异性不好、灵敏度不够的不足。
为实现上述目的，本发明提供一组乳腺癌诊断的piRNA生物标志物，所述piRNA生物标志物为piR651、piR17458和piR20485；其中，piR651的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，piR17458的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；piR20485的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
进一步的，所述piRNA生物标志物在乳腺癌患者血清中的表达水平同时下调。
进一步的，所述乳腺癌诊断为早期乳腺癌诊断。
本发明还提供一种根据任一项所述的一组乳腺癌诊断的piRNA生物标志物在制备乳腺癌诊断产品中的应用。
进一步的，所述乳腺癌诊断产品通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交阵列杂交、基因芯片、northern杂交方法、核酶保护分析技术、RAKE法、二代测序方法或单分子测序方法来检测所述piRNA生物标志物的水平以诊断乳腺癌。
进一步的，所述乳腺癌诊断产品为试剂盒、PCR检测试剂或芯片。
本发明公开了以下技术效果：本发明首先发现了血清piR651、piR17458和piR20485三者联合作为乳腺癌诊断标志物及早期乳腺癌诊断标志物的新应用。具体地说，我们首次鉴定了乳腺癌患者血清中存在piR651、piR17458和piR20485，且三者水平明显低于正常健康人。此外，我们利用ROC曲线分析结果显示血清中piR651、piR17458和piR20485三者联合可作为乳腺癌诊断标志物，并应用于乳腺癌筛查，尤其应用于早期乳腺癌筛查，以弥补现在乳腺癌诊断标志物以及早期乳腺癌诊断标志物特异性不好、灵敏度不够的不足。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为乳腺癌患者血清中piR651、piR17458和piR20485的水平；
图2为血清中piR651、piR17458和piR20485的ROC曲线分析结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购，所用实验方法为本领域常规方法。
实施例1 qRT-PCR检测乳腺癌患者血清中piR651、piR17458和piR20485水平
乳腺癌患者和健康人血清来源于广州医科大学附属第三医院。血清于高速冷冻离心机10000rpm，10min，去除细胞碎片。采用QIAGEN公司miRNeasy Serum/Plasma Kit提取RNA，逆转录采用miScript II RT Kit，然后用miScript SYBR Green PCR试剂盒进行实时荧光PCR实验。
PCR反应体系：2X SYBR Green PCR混合物10μl、通用引物2μl、RNase游离水4μl、cDNA模板2μl和相应的特异性piRNA引物2μl。具体引物序列见表1。
PCR反应程序：95℃15min；94℃15s，55℃30s，70℃30s，共40个扩增周期。
表1 qRT-PCR引物
Figure BSA0000229931740000041
以小RNA U6为参照进行piRNA表达分析，结果如图1所示，与健康人比较，乳腺癌患者血清中piR651、piR17458和piR20485水平明显低于健康人。
实施例2ROC曲线分析血清中piR651、piR17458和piR20485三者联合在乳腺癌诊断中应用价值
采用SPSS17.0软件分析piR651、piR17458和piR20485三者联合在乳腺癌诊断中应用价值。结果如图2所示，ROC曲线分析结果显示piR651、piR17458和piR20485三者联合在乳腺癌诊断中AUC面积为0.8113，表明血清piR651、piR17458和piR20485三者联合对乳腺癌诊断有较好临床价值；同时ROC曲线分析表明piR651、piR17458和piR20485三者联合对乳腺癌诊断的敏感性和特异性分别为67.7％和84.8％；95％置信区间为0.3-0.7，具有特异性好，灵敏度高特点。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院）
<120> 一组乳腺癌早期诊断的piRNA生物标志物及其应用
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agagaggggc ccgugccuug gaaagcguc 29
<210> 2
<211> 31
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggggauguag cucaguggua gagcgcaugc u 31
<210> 3
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
uucacugaug agagcauugu ucugagc 27
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
agcgttggtg gtatagtggt 20
<210> 5
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ttcactgatg agagcattgt tctgagc 27
<210> 6
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ggggatgtag ctcagtggta gagcgcatgc t 31
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
tgcgggtgct cgcttcggca gc 22
<210> 8
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
cttatggagc ctgggactct gacc 24

Claims (3)

1.一组乳腺癌诊断的piRNA生物标志物在制备乳腺癌诊断产品中的应用，其特征在于：所述piRNA生物标志物为piR651、piR17458和piR20485；
其中，piR651的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，piR17458的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；piR20485的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
所述piRNA生物标志物在乳腺癌患者血清中的表达水平同时下调；所述乳腺癌诊断为早期乳腺癌诊断。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述乳腺癌诊断产品通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交阵列杂交、基因芯片、northern杂交方法、核酶保护分析技术、RAKE法、二代测序方法或单分子测序方法来检测所述piRNA生物标志物的水平以诊断乳腺癌。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述乳腺癌诊断产品为试剂盒、PCR检测试剂或芯片。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2011157294A1 (en) * 2010-06-16 2011-12-22 Universita' Degli Studi Di Padova Compositions for use in treating or preventing cancer, breast cancer, lung cancer, ovarian cancer, metastasis, heart failure, cardiac remodelling, dilated cardiomyopathy, autoimmune diseases, or diseases or disorders related thereto
CN104099333A (zh) * 2014-06-05 2014-10-15 中山大学 用于乳腺癌的piRNA
CN109072240A (zh) * 2016-02-26 2018-12-21 耶鲁大学 使用piRNA诊断和治疗癌症的组合物和方法

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Title
Altered expression of piRNAs and their relation with clinicopathologic features of breast cancer;G. Huang • H等;《CLINICAL & TRANSLATIONAL ONCOLOGY》;20121115;第15卷(第7期);摘要，表2 *
piRNA, the new non-coding RNA, is aberrantly expressed in human cancer cells;Cheng, Jia等;《CLINICA CHIMICA ACTA》;20110515;第412卷(第17-18期);摘要，第1623页左栏第3段，图2 *

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